MXPA01012721A - Vacuna de combinacion de proteinas de superficie neumococcicas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a combinaciones inmunogenicas sinergicas que contienen dos o mas proteinas de superficie neumococcicas, incluyendo PspA y/o PspC y/PsbA, ventajosamente PspA y PsaA. Tambien se proporcionan metodos de administracion intranasal de tales combinaciones inmunogenicas para reducir el acarreo nasofaringeo de neumococos y metodos de uso de tales combinaciones inmunogenicas en la prevencion y tratamiento de infecciones por S. pneumoniae.

Description

VACUNA DE COMBINACIÓN DE PROTEÍNAS DE SUPERFICIE NEUMOCÓCCICAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a regiones epitópicas de la proteína C de Superficie Neumocóccica, wPspC" y/o la Proteína A de Superficie neumocóccica MPspA" y/o Proteína A Adhesina de Superficie Neumocóccica, wPsaA" y a diferentes clases de PspC y/o PspA y/o PsaA; a moléculas de ácido nucleico aisladas y/o purificadas tales como ADN que codifica para un fragmento o proteína PspC y/o PspA y/o PsaA, tal como una región epitópica de PspC y/o PspA y/o PsaA; a vectores o plásmidos que contienen y/p expresan tales moléculas de ácido nucleico, e.g. in vitro o in vivo; y a composiciones inmunológicas, inmunogénicas o de vacuna que comprenden combinaciones de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA yo PsaA, y/o una porción de las mismas (tal como regiones epitópicas y/o polipéptidos y/o fragmentos de las mismas, de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA), e.g. PsaA (o un fragmento de la misma) y PspA (o un fragmento de la misma) y/o PspC (o un fragmento de la misma) y/o un vector o vectores que expresan tales combinaciones . La composición puede contener un inmunógeno o inmunogenos o un epítopo o epítopos de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, y/o un vector que expresa REF: 134897 tal inmunógeno (s) o epltopo(s). La presente invención además se refiere a métodos de vacunación; y a la administración, asi como a métodos para producir y formular estas composiciones. Las proteínas PspC y/o PspA y/o PsaA, o un fragmento y/o epitopo de las mismas y por lo tanto una composición inmunológica, inmunogénica o de vacuna que comprende PspC y/o PspA y/o PsaA, o un fragmento y/o epitopo de las mismas, o un vector que expresa tal inmunógeno (s) o epitopo (s), se puede administrar por las mismas vías y en aproximadamente las mismas cantidades que para PspA o PspC, las cuales han sido descritas. Así pues, la presente invención además proporciona métodos para administrar combinaciones de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, o un fragmento y/o epitopo de las mismas; a composiciones inmunológicas, inmunogénicas o de vacuna que comprenden cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, o un fragmento y/o epitopo de las mismas, , o un vector que expresa tal inmunógeno (s) o epitopo (s); así como a usos de PspC y/o PspA y/o PsaA, o un fragmento y/o epitopo de las mismas, o un vector que expresa tal inmunógeno (s) o epitopo (s), para formular tales composiciones . Otros aspectos de la presente invención se describen o son obvios a partir de (y dentro del ámbito de la invención) la siguiente descripción. ANTECEDENTES DE LA. INVENCIÓN S. pneumoniae es una causa importante de otitis media, meningitis, bacteremia y neumonía, y una de las principales causas de infecciones mortales en ancianos y personas que padecen trastornos médicos subyacentes, tales como enfermedad pulmonar, enfermedad hepática, alcoholismo, anemia drepanositica, fugas de liquido cefalorraquídeo, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y pacientes sometidos a terapia inmunosupresora . También es una causa principal de morbilidad en niños pequeños. Las infecciones neumocóccicas causan aproximadamente 40, 000 muertes anuales en EUA. Las infecciones neumocóccicas más graves incluyen la meningitis invasiva e infecciones bacterémicas, de las cuales hay 3,000 y 50,000 casos al año, respectivamente.

A pesar del uso de antibióticos y vacunas, la prevalencia de las infecciones neumocóccicas ha declinado poco en los últimos 25 años; el índice de casos fatales por bacteremia se reporta que es de 15 a 20% en la población general, de 30 a 40% en ancianos y de 36 % en afroamericanos del interior de los Estados Unidos . Algunas formas menos graves de la enfermedad neumocóccica son la neumonía, de la cual existen 500,000 casos al año en EUA y la otitis media en niños, de la cual se estiman 7,000,000 de casos al año en EUA causadas por neumococos. Las cepas de S. pneumoniae resistente a fármacos se han vuelto más comunes en los Estados Unidos y a nivel mundial. En algunas áreas, una cantidad tan grande como el 30% de los aislamientos de neumococos son resistentes a la penicilina. El incremento de neumococos resistentes a antimicrobianos, enfatiza adicionalmente la necesidad de prevenir las infecciones neumocóccicas . Los seres humanos adquieren los neumococos a través de aerosoles o por contacto directo. Los neumococos primero colonizan las vías respiratorias superiores y pueden permanecer en la mucosa nasal durante semanas o meses. Una cantidad tan grande como el 50% o más de los niños pequeños y los ancianos, se encuentran colonizados. En la mayoría de los casos, esta colonización no da como resultado una infección evidente (10-12) . Estudios de cepas en brotes han sugerido que incluso cepas altamente virulentas pueden colonizar sin causar enfermedad (13-16) . No obstante, en algunos individuos el organismo portado o acarreado en la nasofaringe puede dar origen a una sinusitis sintomática o infecciones del oído medio. Si los neumococos son aspirados hacia los pulmones, especialmente con partículas de alimento o moco, pueden causar neumonía. Las infecciones en estos sitios generalmente diseminan algunos neumococos hacia el torrente sanguíneo, en donde pueden causar sepsis, especialmente si continúan diseminándose en grandes números desde el foco de infección original. Los neumococos en la sangre pueden alcanzar el cerebro, en donde pueden alcanzar meningitis. Aunque la meningitis neumocóccica es menos común que las otras infecciones causadas por esta bacteria, es particularmente devastadora; aproximadamente el 10% de los pacientes muere y más del 50% del resto presentan secuelas neurológicas de por vida (17-18) . Los neumococos colonizan asintomáticamente las vías respiratorias superiores de individuos normales; la enfermedad a menudo es el resultado de la diseminación de microorganismos desde la nasofaringe hacia otros tejidos, durante eventos oportunistas. La incidencia de portadores en seres humanos varia con la edad y la circunstancias. El índice de portadores en niños típicamente es más alto que el de los adultos. Algunos estudios han demostrado que del 38 al 60% de los niños preescolares, del 29 al 35% de los niños en escuela elemental y del 9 al 25% de los niños en educación media, son portadores de neumococos. Entre los adultos, el índice de portadores cae hasta el 6% en aquellos que no tienen niños en su hogar y de 18 a 29% para aquellos que tienen niños en el hogar. No es sorprendente que el mayor índice de portadores en niños, en comparación con los adultos, iguale a la incidencia de enfermedades neumocóccicas en estas poblaciones.

Una meta atractiva para la vacunación estreptocóccica es reducir a los portadores en las poblaciones vacunadas y subsecuentemente reducir la incidencia de la enfermedad neumocóccica. Se especula que una reducción en los índices de portadores de neumococos mediante la vacunación, podría reducir la incidencia de la enfermedad en individuos no vacunados, así como en individuos vacunados. Esta "inmunidad en multitud" inducida por la vacunación contra patógenos bacterianos de las vías respiratorias superiores, se ha observado mediante el uso de las vacunas conjugadas de Haemophilus influenzae tipo b (20, 21, 22, 23 y 24) . Si una vacuna pudiera prevenir la colonización por neumococos, tal vacuna se esperaría que previniera virtualmente todas las infecciones neumocóccicas en los pacientes inmunizados. Puesto que incluso pacientes inmunizados podrían adquirir neumococos de otros, una vacuna que redujera el estado de portador, debería reducir las infecciones en pacientes inmunocomprometidos, así como en pacientes no comprometidos . Generalmente se acepta que la inmunidad contra S. pneumoniae puede estar mediada por anticuerpos específicos contra la cápsula polisacárida del neumococo. Sin embargo, los neonatos y niños pequeños fallan en la preparación de una respuesta inmunitaria adecuada contra la mayoría de los inmunógenos polisacáridos capsulares y pueden padecer de infecciones repetidas involucrando al mismo serotipo capsular. Un enfoque para inmunizar infantes contra un número de bacterias encapsuladas, es conjugar los inmunógenos polisacáridos capsulares con proteínas, para hacerlos inmunogénicos . Este enfogue ha tenido éxito, por ejemplo, con Haemophilus influenzae B (véase la Patente Norteamericana US 4,496,538 de Gordon y la Patente Norteamericana US 4,673,574 de Anderson) . Sin embargo, existen más de noventa serotipos capsulares conocidos de S. pneumoniae, de los cuales 23 dan cuenta de aproximadamente el 95% de las enfermedades . Para que un conjugado de polisacárido neumocóccico-proteina tenga éxito, los tipos capsulares responsables de la mayoría de las infecciones neumocóccicas tendrían que volverse adecuadamente inmunogénicos. Este enfoque podría ser difícil, debido a que los 23 polisacáridos incluidos en la actualidad disponibles en vacunas, no todos son óptimamente inmunogénicos, incluso en adultos. La protección mediada por anticuerpos anti-polisacárido capsular, está restringida al tipo de polisacárido. Diferentes tipos de polisacárido facilitan de manera diferente la virulencia en seres humanos y otras especies. Se han desarrollado vacunas neumocóccicas combinando los 23 diferentes polisacáridos capsulares que son representativos de los tipos prevalentes de las enfermedades neumocóccicas en seres humanos. Estos 23 tipos de polisacáridos se han utilizado en una vacuna neumocóccica autorizada desde 1983 (19) . La vacuna polisacárida 23-valente autorizada ha reportado una eficacia de aproximadamente el 60% en la prevención de la bacteremia causada por los tipos de neumococos encontrados en la vacuna, en adultos sanos. Sin embargo la eficacia de la vacuna ha sido controversial y a veces la justificación para el uso recomendado de la vacuna es cuestionable. Se ha especulado que la eficacia de esta vacuna se ve afectada negativamente al tener que combinar 23 diferentes inmunógenos. El tener un gran número de inmunógenos combinados en una sola formulación, podría afectar de manera negativa la respuesta de anticuerpos contra tipos individuales en esta mezcla debido a la competencia inmunogénica. La eficacia también se ve afectada por el hecho de que los 23 serotipos abarcan todos los tipos serológicos asociados con infecciones humanas y estados de portador. Así mismo, no es efectiva en niños menores de 2 años de edad debido a su incapacidad de montar respuestas adecuadas contra la mayoría de los polisacáridos (21, 22) . Un enfoque alternativo para proteger niños y también ancianos, de las infecciones por neumococos, incluye el uso de inmunógenos proteicos capaces de inducir respuestas inmunitarias protectoras. Ejemplos de tales inmunógenos proteicos de neumococo son la Proteina C de Superficie Neumocóccica (PspC), Proteína A de Superficie Neumocóccica (PspA) y Proteína Adhesina A de Superficie Neumocóccica (PsaA) . Tales proteínas pueden servir como vacunas ellas mismas, o ventajosamente, tal como se describe en la presente, se pueden utilizar en combinación para producir una respuesta inmunitaria intensificada. La PspA -se ha identificado como factor de virulencia e inmunógeno protector. La PspA es una molécula de superficie celular que se encuentra en todos los aislamientos clínicos y la expresión de PspA es necesaria para la virulencia completa de los neumococos en ratones (34). La función biológica de la PspA todavía no está bien definida, aunque un informe preliminar sugiere que podría inhibir la activación del complemento (27) . El tipo de proteína PspA es independiente del tipo capsular. Parecería que una mutación genética o intercambio en el ambiente ha permitido el desarrollo de una gran mezcla de cepas que son altamente diversas con respecto a la cápsula, la PspA y posiblemente otras moléculas con estructuras variables. La variabilidad de la PspA de diferentes cepas también es evidente en sus pesos moleculares, los cuales varían de 67 a 99 kDa. Las diferencias observadas son estabilidad heredada y no como resultado de la degradación de la proteina. Un número de Patentes Norteamericanas ' y Solicitudes de Patente, incluyendo la. Solicitud de Patente Norteamericana No. de Serie 08/529,055 presentada el 15 de septiembre de 1995; Solicitud de Patente Norteamericana No. de serie 08/470,626 presentada el 6 de junio de 1995; Patente Norteamericana US 5,856,170; Patente Norteamericana US 5,753,463; Patente Norteamericana US 5,871,943; Patente Norteamericana US 5,965,400; Patente Norteamericana US 5,728,387; Patente Norteamericana US 5,728,387; Patente Norteamericana US 5,965,141; Patente Norteamericana US 5,980,909; y Patente Norteamericana US 5,476,929, se refieren a vacunas que comprenden PspA y fragmentos de la misma, a métodos para expresar ADN que codifica para PspA y fragmentos de la misma, ADN que codifica para PspA y fragmentos de la misma, a secuencias de aminoácidos de PspA y fragmentos de la misma, a composiciones que contienen PspA y fragmentos de la misma y a métodos para utilizar tales composiciones. Las enseñanzas de estas solicitudes son relevantes para la presente invención y estas solicitudes, junto con cualquiera otra de las referencias citadas en la presente, se incorporan en la presente como referencia. Aunque la PspA es una proteína de superficie altamente variable, se han identificado suficiente homologías para permitir el agrupamiento de aislamientos de neumococos en conjuntos discretos de familias o clases. Con base en esta información cuyas enseñanzas se encuentran en la Patente Norteamericana US 5,955,089, una combinación de 4 a 6 diferentes moléculas de PspA se puede utilizar para inducir una respuesta inmunológica contra cualquier cepa de neumococo dada. Estudios sobre la PspA condujeron al descubrimiento de una proteína similar a PspA y un gen similar a pspA, ahora denominados PspC y pspC. De hecho, las primeras publicaciones de patente denominaban a la PspC como "similar a PspA". En la Solicitud de Patente PCT/US99/08895, Publicación Internacional WO 99/53940, se proporcionan regiones epitópicas de la PspC, ADN que codifica para regiones epitópicas de la PspC y composiciones inmunológicas, inmunogénicas o de vacuna que comprenden cuando menos una PspC, reclamando prioridad a la Solicitud de Patente Norteamericana Provisional No. de Serie 60/082,728, presentada el 23 de abril de 1998 y la Solicitud de Patente Norteamericana No. de Serie 09/298,523 presentada el 23 de abril de 1999. Las enseñanzas de estas solicitudes son relevantes para la presente invención y estas solicitudes, junto con cualquiera y todas las referencias citadas en la presente, se incorporan como referencia.

Otra proteína de superficie neumocóccica de interés, es la PsaA. Russell et al. describieron una proteina inmunogénica, común de especies de S. pneumoniae, designada como proteína fimbrial neumocóccica A (41) . Esta proteína inmunogénica de 37 kDa también se describe en la Patente Norteamericana US 5,422,427, cuyas enseñanzas se incorporan en la presente en su totalidad como referencia. La proteína de 37 kDa, la cual previamente fue referida como proteína fimbrial neumocóccica A, más recientemente fue designada como proteína adhesina A de superficie neumocóccica (PsaA) . Para los propósitos de la presente solicitud, las referencias hechas a la PsaA, a la proteína adhesina A de superficie neumocóccica, a la proteína fimbrial neumocóccica A o al inmunógeno de 37 kDa, se deben entender que se refieren a cierto inmunógeno proteico de S. pneumoniae caracterizado por Russell et al. (1990) y descrito en la Patente Norteamericana US 5,422,427. La PsaA es común a los 23 serotipos de la vacuna neumocóccica (41) . El gen que codifica para la PsaA ha sido clonado y secuenciado (46) . Más recientemente, el gen PsaA fue clonado a partir de la cepa 6B encapsulada y es la materia objeto de la Solicitud de Patente Norteamericana Pendiente No. de serie 08/222,179. Este gen es más representativo de cepas clínicamente relevantes. Una lipoproteina de PsaA recombinante adecuada para utilizarse en el desarrollo de vacunas basadas en PsaA, se describe en la Solicitud de Patente Norteamericana Pendiente No. de serie 09/017,782. Con el fin de establecer una infección, S. pneumoniae primero debe lograr entrar al huésped a través de superficies mucosas. El principal determinante de inmunidad especifica en las superficies mucosas, es la IgA secretoria (S-IgA), la cual está fisiológica y funcionalmente separada de los componentes del sistema inmunitario circulatorio. Las respuestas de S-IgA mucosal son generadas predominantemente por el sistema inmunitario mucosal común (SIMC). (61), en el cual los inmunógenos son recogidos por estructuras linfoepiteliales especializadas, colectivamente denominadas como tejido linfoide asociado a la mucosa (TLAM) . El término "sistema inmunitario mucosal común" se refiere al hecho de que la inmunización en cualquier sitio mucosal puede inducir una respuesta inmunitaria en todos los demás sitios mucosales. Asi pues, la inmunización en el intestino puede inducir una inmunidad mucosal en las vías respiratorias superiores, y viceversa. Además, es importante observar que la inmunización oral puede inducir una respuesta de IgG específica de inmunógeno en el compartimento sistémico, en adición a los anticuerpos IgA mucosales (62) . El reservorio de S. pneumoniae en el mundo es mantenido por los portadores nasofaríngeos en poblaciones de seres humanos. La adquisición de neumococos proviene invariablemente de portadores. La mayoría de las personas son portadoras de neumococos muchas veces durante sus vidas y en la basta mayoría de los casos, el estado de portador no causa ninguna enfermedad. En una minoría de los casos, los neumococos invaden desde la nasofaringe hacia tejido más profundo, causando neumonía, bacteremia, sepsis y meningitis. Aunque la frecuencia de invasión es baja por cada evento de portador, la alta prevalencia de portadores (entre el 5 y el 40% de los individuos) significa que la morbilidad y mortalidad atribuidas a S. pneumoniae son muy altas. En Estados Unidos, existen más de 40,000 muertes causadas por neumonía neumocóccica cada año. En estudios publicados, se ha demostrado que la inmunidad mucosal contra la PspA es capaz de reducir y a veces de eliminar el estado de portador de S. pneumoniae en la nasofaringe. Más recientemente, se ha demostrado que la inmunidad contra la PsaA también puede inducir protección contra el estado de portador. Sin embargo, ninguna proteína por sí sola es capaz de inducir reproduciblemente una protección completa contra el estado portador de neumococos. Así pues, existe la necesidad de composiciones inmunogénicas que sean capaces de reducir el estado de portador de neumococos.

Los inmunógenos de proteína nativa, tales como PspC, PspA y PsaA, o fragmentos inmunogénicos o epítopos de las mismas, estimulan una respuesta inmunitaria cuando se administran a un huésped. Las proteínas recombinantes son vacunas o composiciones inmunogénicas prometedoras debido a que pueden ser producidas con un alto rendimiento y pureza, y se pueden manipular para maximizar las actividades deseables y minimizar las indeseables. Sin embargo, debido a que pueden ser débilmente inmunogénicas, son importantes los métodos para intensificar la respuesta inmunitaria contra las proteínas recombinantes, en el desarrollo de vacunas o composiciones inmunogénicas. Tales inmunógenos, especialmente cuando se producen de manera recombinante, pueden inducir una respuesta más fuerte cuando se administran en conjunto con un adyuvante. Un adyuvante es una sustancia que intensifica la inmunogenicidad de un inmunógeno. Los adyuvantes pueden actuar reteniendo el inmunógeno localmente cerca del sitio de administración, para producir un efecto de depósito, facilitando una liberación lenta y sostenida del inmunógeno hacia las células del sistema inmunitario. Las adyuvantes también pueden atraer células del sistema inmunitario y pueden atraer células inmunitarias contra un depósito de inmunógeno y estimular a tales células para inducir una respuesta inmunitaria.

Los agentes inmunoestimulantes o adyuvantes se han utilizado por muchos años para mejorar la respuesta inmunitaria de un huésped contra, por ejemplo, vacunas. Los adyuvantes intrínsecos, tales como lipopolisacáridos, normalmente son componentes de bacterias muertas o atenuadas utilizadas como vacunas. Los adyuvantes extrínsecos son inmunomoduladores que típicamente no se enlazan de manera covalente a los inmunogenos y se formulan para intensificar la respuesta inmunitaria del huésped. El hidróxido de aluminio y el fosfato de aluminio (colectiva y comúnmente referidos como alumbre) se utilizan rutinariamente como adyuvantes en vacunas de seres humanos y veterinarias. Actualmente, el alumbre es el único adyuvante autorizado para uso en seres humanos, aunque se han probado cientos de adyuvantes experimentales, tales como la toxina B del cólera. Las estrategias de vacunación alternativas son deseables ya que proporcionan composiciones inmunológicas, inmunogénicas o de vacunas alternativas, así como vías alternativas de administración o vías alternativas para las respuestas. Sería ventajoso proporcionar una composición inmunológica o régimen de vacunación que indujera una protección contra diversas cepas de neumococos, sin tener que combinar un gran número de inmunogenos posiblemente competitivos dentro de la misma formulación. Y es ventajoso proporcionar inmunógenos adicionales y epitopos para utilizarse en las composiciones inmunológicas, inmunogénicas y/?· de vacuna, e.g. para proporcionar composiciones alternativas que contengan o comprendan tales inmunógenos o epitopos, ya sea solos o en combinación con diferentes inmunógenos. Además, es ventajoso proporcionar un mejor entendimiento de los mecanismos patogénicos de los neumococos, ya que esto puede conducir al desarrollo de mejores vacunas, diagnóstico y tratamientos. OBJETIVOS Y SUMARIO DE LA INVENCIÓN Un objetivo de la presente invención puede incluir proporcionar uno o más de los siguientes: regiones epitópicas de la Proteina C de Superficie Neumocóccica "PspC" y/o Proteina A de Superficie Neumocóccica "PspA" y/o Proteina Adhesina A de Superficie Neumocóccica "PsaA" y diferentes clases de PspC y/o PspA y/o PsaA; moléculas de ácido nucleico aisladas y/o purificadas tales como ADN que codifica para un fragmento o porción de PspC y/o PspA y/o PsaA, tal como una región epitópica de PspC y/o PspA y PsaA; vectores o plásmidos que contienen y/o expresan tales moléculas de ácido nucleico, e.g. in vitro o in vivo; y composiciones inmunológicas, inmunogénicas o de vacuna que comprenden combinaciones de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, y/o una porción de las mismas (tal como una región o regiones epitópicas y/o polipéptidos y/o fragmentos de las mismas, de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA) e.g. PsaA (o un fragmento de la misma) y PspA (o un fragmento de la misma) y/o PspC (o un fragmento de la misma) y/o un vector o vectores que expresan tales combinaciones. La composición puede contener un inmunógeno o inmunogenos o un epitopo o epitopos de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, y/o un vector que expresa tal inmunógeno (s ) o epitopo (s). La presente invención además se refiere a métodos de vacunación y a la administración, asi como a métodos de producción y formulación de estas composiciones. Asi pues, la presente invención proporciona una composición que comprende: (i) PsaA o un epitopo de la misma, o un vector que expresa PsaA o un epitopo de la misma, y (ii) (a) PspA o un epitopo de la misma o un vector que expresa PspA o un epitopo de la misma, o (b) PspC o un epitopo de la misma o un vector que expresa PspC o un epitopo de la misma, o (c) PspA o un epitopo de la misma y PspC o un epitopo de la misma, o un vector que exprese PspA o un epitopo de la misma y PspC o un epitopo de la misma, o un primer vector que expresa PspA o un epitopo de la misma y un segundo vector que expresa PspC o un epitopo de la misma, o (iii) un vector que expresa PsaA o un epitopo de la misma y PspA o un epitopo de la misma y/o PspC o un epítopo de la misma. La composición puede incluir un vehículo y/o diluyentes. La composición además puede comprender un adyuvante. El adyuvante puede ser alumbre, e.g. fosfato de aluminio y/o hidróxido de aluminio, por ejemplo, en forma de gel, Sponin, Quil A y el adyuvante de agua en aceite de Freund con bacilos tuberculosos muertos (adyuvante completo de Freund) o sin bacilos (adyuvante incompleto de Freund) ; véase también la Solicitud Internacional de Patente PCT/US98/23472 con respecto a adyuvantes que se pueden utilizar en la práctica de la presente invención. Un objetivo de la presente invención es proporcionar métodos para administrar composiciones de la presente invención, e.g., combinaciones de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, o un fragmento y/o epítopo de las mismas; composiciones inmunológicas, inmunogénicas o de vacuna que comprenden cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y PsaA o un fragmento y/o epítopo (s) de las mismas, o un vector que exprese tal inmunógeno (s) o epítopo (s); así como usos de PspC y/o PspA y/o PsaA o un fragmento y/o epítopo de las mismas, o un vector que exprese tal inmunógeno (s) o epítopo (s), para formular tales composiciones . En una modalidad preferida de la presente invención, se formularon juntas PspA y PsaA con un adyuvante, tal como la subunidad B de la toxina B del cólera (TBC) o alumbre. La TBC y el alumbre funcionan como adyuvante. La combinación de PspA y/o PsaA y/o PspC, junto con un adyuvante tal como TBC y/o alumbre, de preferencia se administran por vía intranasal. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar métodos para utilizar combinaciones inmunogénicas de PspA y/o PsaA y/o PspC o epitopos de las mismas o vectores que expresen la(s) proteina(s), para reducir el estado de portador nasal de neumococos. Se considera que la reducción del estado de portador nasal dará como resultado una disminución de la transmisión de los neumococos a individuos que están en riesgo de infección neumocóccica. Los documentos citados en esta descripción, incluyendo las solicitudes anteriormente mencionadas, proporcionan ingredientes adicionales típicos para tales composiciones, de tal manera que no se requiere ninguna experimentación indebida por parte de un técnico en la materia para formular una composición a partir de la presente descripción. Tales composiciones de preferencia deben contener cantidades de PspA y/o PsaA y/o PspC neumocóccicas o epitopos de las mismas o vector (es) que expresen la(s) proteína (s) de manera suficiente para inducir una respuesta adecuada. La determinación de las - - cantidades óptimas de cada proteina para utilizarse en combinación, se puede determinar empíricamente, con un mínimo de experimentación. Los técnicos en la materia reconocerán, por ejemplo, que tal determinación se puede basar en cantidades de inmunógeno administradas a animales experimentales en los ejemplos que se presentan más adelante y en los documentos citados en la presente. Los términos "comprendiendo", "que comprende", "comprendido de" y similares, tienen el significado adscrito a estos términos bajo la Ley de los Estados Unidos y pueden significar "incluyendo", "incluye" y similares. A lo largo de la presente descripción, se hace referencia a varios documentos para describir de manera más completa el estado de la técnica a la cual pertenece la presente invención. Estos documentos, así como los documentos citados por esos documentos, cada uno de ellos se incorpora en la presente como referencia. Y, estos y otros objetivos y modalidades se describen o son obvios a partir de la siguiente Descripción Detallada y quedan dentro de los alcances de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención proporciona una composición inmunológica, inmunogénica o de vacuna que comprende combinaciones de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, y/o una porción de las mismas (tal como una región (es) epitópica(s) y/o polipéptido (s) y/o fragmento (s) de las mismas, de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA) e.g. PsaA (o un fragmento de la misma) y PspA (o un fragmento de la misma) y/o PspC (o un fragmento de la misma) y/o un vector o vectores que expresen tales combinaciones y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Asi pues, la presente invención proporciona una composición que comprende: (i) PsaA o un epitopo de la misma, o un vector que expresa PsaA o un epitopo de la misma, y (ii) (a) PspA o un epitopo de la misma o un vector que exprese PspA o un epitopo de la misma, o (b9 PspC o un epitopo de la misma o un vector que exprese PspC o un epitopo de la misma/ o (c) PspA o un epitopo de la misma y PspC o un epitopo de la misma, o un vector que exprese PspA o un epitopo de la misma y PspC o un epitopo de la misma, o un primer vector que exprese PspA o un epitopo de la misma y un segundo vector que exprese PspC o un epitopo de la misma, o (iii) un vector que expresa PsaA o un epitopo de la misma y PspA o un epitopo de la misma y/o PspC o un epitopo de la misma. La composición puede incluir un vehículo y/o diluyentes. La composición además puede comprender un adyuvante. Una composición inmunológica induce una respuesta inmunológica -local o sistémica. Esta respuesta podría, pero no necesariamente, ser protectora. Una composición inmunogénica que contiene la combinación de proteínas neumococoicas, de manera similar, induce una respuesta inmunológica local o sistémica, la cual puede, pero no necesita, ser protectora. Una composición de vacuna induce una respuesta local o sistémica protectora. De conformidad con ello, los términos "composición inmunológica" y "composición inmunogénica" incluyen "una composición de vacuna" (al igual que los dos términos anteriores, pueden ser composiciones protectoras) . Para los epítopos de interés, se hace referencia a los documentos citados en la presente y Kendrew, THE ENCYCLOPEDIA OF MOLECULAR BIOLOGY (Blackwell Science Ltd., 1995) y Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press> 1982. Un epítopo de interés es una región inmunológicamente relevante de un inmunógeno o un fragmento inmunológicamente activo de la misma, e.g., de un patógeno o toxina de interés veterinario o humano. Un técnico en la materia puede determinar un epítopo o región inmunodominante de un péptido o polipéptido y obtener el ADN codificador del mismo, a partir del conocimiento de las - - secuencias de aminoácidos y de ADN correspondientes del péptido o polipéptido, asi como de la naturaleza de aminoácidos particulares (e.g., tamaño, carga, etc.) y el diccionario de codones, sin llevar a cabo experimentación indebida. La secuencia de ADN preferiblemente codifica en las últimas regiones del péptido que genera una respuesta de anticuerpos o una respuesta de células T. Un método para determinar epitopos de células T y B, incluye el mapeo de epitopos. La proteina de interés se sintetiza en péptidos cortos traslapados (PEPSCAN) . Los péptidos individuales, entonces, se prueban con respecto a su capacidad de unirse a un anticuerpo inducido por la proteina nativa o para inducir la activación de células T o células B. Janis Kuby, Immunology, (1992) pp. 79-80. Otro método para determinar un epítopo de interés, es seleccionar las regiones de la proteina que son hidrofilicas . Los residuos hidrofilicos a menudo están en la superficie de la proteina y por lo tanto ofrecen las regiones de proteina que sean accesibles al anticuerpo. Janis Kuby, Immunology, (1992), p. 81. Todavía otro método para seleccionar un epítopo de interés que pueda generar una respuesta de células T, es identificar, a partir de la secuencia proteica potencial, porciones de unión al ancla HLA que sean secuencias peptídicas que se sepa que es probable que se unan a la molécula MHC. El péptido que es un epitopo putativo de interés, para que genere una respuesta de células T, debe ser presentado en un complejo MHC. El péptido de preferencia contiene porciones de ancla apropiadas para unirse a las moléculas MHC y se debe unir con una afinidad suficientemente alta para generar una respuesta inmunitaria. Algunos lineamientos para determinar si una proteina es un epitopo de interés que estimulará una respuesta de células T, incluyen: la longitud del péptido -el péptido debe tener cuando menos 8 ó 9 aminoácidos de longitud para encajar en el complejo clase I del MHC y cuando menos de 13 a 25 aminoácidos de largo para encajar en el complejo clase II del MHC. Esta longitud es un mínimo para que el péptido se una al complejo MHC. Para los péptidos se prefiere que sean más largos que estas longitudes, debido a que las células podrían cortar los péptidos expresados. El péptido debe contener una porción de ancla apropiada, la cual hará posible que se una a las diversas moléculas clase I ó clase II con una especificidad lo suficientemente alta para generar una respuesta inmunitaria (véase Bocchia, M. et al., Specidific Binding of Leukemia Ooncogene Fusión Protein Peptides to HLA Class I Molecules, Blood 85:2680-2684; Englehard, VH, Structure of peptides associated with class I and class II MHC molecules Ann. Rev. Immunol. 12:181 (1994)). Esto se puede realizar, sin experimentación indebida, al comparar la secuencia de la proteina de interés con estructuras publicadas de péptidos asociados con las moléculas MHC. Además, un técnico en la materia podrá comprobar un epitopo de interés al comparar la secuencia de la proteina con secuencias listadas en la base de datos de proteínas. Incluso además, otro método simplemente es generar o expresar porciones de una proteina de interés, generar anticuerpos monoclonales contra estas porciones de la proteína de interés y después averiguar si estos anticuerpos inhiben el crecimiento in vitro del patógeno del cual se derivó la proteína. Un técnico en la materia puede utilizar los demás lineamientos establecidos en la presente descripción y en la técnica, para generar o expresar porciones de una proteína de interés para analizar si los anticuerpos contra la misma inhiben el crecimiento in vitro. Por lo tanto, la presente invención también proporciona un método para inducir una respuesta inmunológica en un huésped mamífero, que comprende administrarle al huésped una composición inventiva - 21 - inmunogénica, inmunológica o de vacuna, e.g. una composición que comprende una combinación de proteínas neumocóccicas o inmunógenos PspC y/o PspA y/o PsaA, o un epitopo o fragmento de las mismas, y/o un vector o vectores que expresan tales combinaciones, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición además puede comprender un adyuvante y el método puede además incluir administrar un adyuvante. Sorpresivamente, la combinación de PspA y PsaA es sinérgica y da como resultado una mejor respuesta inmunológica y una reducción del estado de portador de neumococos, en comparación con una inmunización con cualquiera de los inmunógenos por sí solo. La determinación de la cantidad de cada proteína neumocóccica o inmunógeno, e.g. PspA y/o PsaA y/o PspC, y el adyuvante adicional opcional en las composiciones de la presente invención y la preparación de estas composiciones, pueden estar de conformidad con las técnicas estándar conocidas para los técnicos en el campo farmacéutico o veterinario. En particular, la cantidad de inmunógeno y adyuvante en las composiciones de la presente invención y las dosis administradas, se determinan por técnicas conocidas para los técnicos en el campo médico o veterinario, tomando en cuenta factores tales como el inmunógeno particular, el adyuvante (si lo hay) , la edad, sexo, peso corporal, especie y condiciones del animal o paciente particular y la vía de administración. Por ejemplo, las dosis de inmunógenos, PspA y/o PsaA y/o PspC particulares para huéspedes adecuados en los que se desea una respuesta inmunológica, se pueden comprobar fácilmente por los técnicos en la materia a partir de la presente descripción, al igual que la cantidad de cualquier adyuvante típicamente administrado con los mismos. Así pues, un técnico en la materia podrá determinar fácilmente la cantidad de inmunógeno y adyuvante opcional en composiciones y administrarlas según los métodos de la presente invención. Típicamente, un adyuvante comúnmente se utiliza en forma de una solución de 0.001 a 50% en peso en solución salina reguladora de fosfatos y el inmunógeno está presente en el orden de microgramos a miligramos, tal como aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 5% en peso, de preferencia de aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 1% en peso, más preferiblemente de aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 0.05% en peso (véanse e.g., los Ejemplos que se presentan a continuación o en las solicitudes citadas en los mismos) . Sin embargo, típicamente el inmunógeno está presente en una cantidad del orden de microgramos a miligramos, o de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 20% en peso, de preferencia de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10% en peso y más preferiblemente de - - aproximadamente 0.05 a aproximadamente 5% en peso. Por supuesto, para que cualquier composición sea administrada a un animal o un ser humano, incluyendo los componentes de la misma, y para cualquier método particular de administración, se prefiere determinar: la toxicidad, la cual se determina mediante la dosis letal (LD) y la LD50 en un modelo animal adecuado, e.g. un roedor tal como un ratón; y la dosis de la composición o composiciones, concentración de los componentes en ella y el tiempo de administración de la composición (es) , que induce una respuesta inmunológica adecuada, por ejemplo mediante la titulación de sueros y el análisis de los mismos con respecto a anticuerpos o inmunógenos, e.g. mediante un análisis de ELISA. Tales determinaciones no requieren una experimentación indebida por parte de los técnicos en la materia a partir de los conocimientos de la presente descripción y los documentados citados en la presente. Y el tiempo para la administración secuencial se puede determinar sin realizar una experimentación indebida. Ejemplos de composiciones de la presente invención incluyen preparaciones liquidas para orificios, e.g. para administración oral, nasal, anal, vaginal, perioral, intragástrica, mucosal (e.g. la mucosa perlingual, alveolar, gingival, olfatoria o respiratoria) etc., tal como suspensiones, jarabes o elixires; y preparaciones para administración parenteral, subcutánea, intradérmica, intramuscular o intravenosa (e.g., administración inyectable) , tal como suspensiones estériles o emulsiones. Tales composiciones pueden estar mezcladas con un vehículo, diluyente o excipiente adecuado, tal como agua estéril, solución salina fisiológica, glucosa o similares. Las composiciones también se pueden liofilizar. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes, agentes reguladores de pH, agentes gelificantes o mejoradores de viscosidad, conservadores, saborizantes, colorantes y similares, dependiendo de la vía de administración y de la preparación deseada. Los textos estándar, tales como "REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE", 17th edition, 1985, que se incorpora en la presente como referencia, se pueden consultar para producir preparaciones adecuadas sin realizar experimentación indebida. Las composiciones de la presente invención se proporcionan, convenientemente, en forma de preparaciones líquidas, e.g. soluciones acuosas isotónicas, suspensiones, emulsiones o composiciones viscosas, que se pueden regular hasta un pH seleccionado. Si se prefiere la absorción por el tracto digestivo, las composiciones de la presente invención pueden estar en forma "sólida", por ejemplo pildoras, tabletas, cápsulas, capsulillas y similares, incluyendo preparaciones "sólidas" que se liberan con el tiempo o que tienen un relleno líquido, e.g. gelatina rellena con líquido, mediante lo cual la gelatina se disuelve en el estómago para la distribución del fármaco en el intestino. Si se desea la administración nasal o respiratoria (mucosal) , las composiciones pueden estar en forma de rocío y ser distribuidas mediante un surtidor de rocío, un surtidor de bomba o un dispositivo de aerosol. Los aerosoles normalmente están bajo presión por medio de un hidrocarburo. Los surtidores de bomba de preferencia surten una dosis medida o una dosis que tenga un tamaño de partícula en especial. Las composiciones de la presente invención pueden contener sabores y/o colores farmacéuticamente aceptables para hacerlas más agradables, especialmente si se administran por vía oral. Las composiciones viscosas pueden estar en forma de geles, lociones, ungüentos, cremas y similares y típicamente contendrán una cantidad suficiente de un agente espesante para que la viscosidad sea de aproximadamente 2500 a 6500 cps, aunque composiciones más viscosas, incluso de hasta 10,000 cps se pueden emplear. Las composiciones viscosas tienen una viscosidad de preferencia de 2500 a 5000 cps, puesto que por arriba de ese rango pueden ser muy difíciles de administrar. Sin embargo, por arriba del rango, las composiciones se pueden aproximar a las formas sólidas o de gelatina, las cuales entonces se administran fácilmente como si fueran una pastilla tragada para ingestión oral. Las preparaciones liquidas normalmente son más fáciles de preparar que los geles, otras composiciones viscosas y las composiciones sólidas. Adicionalmente, las composiciones liquidas son un poco más convenientes de administrar, especialmente por inyección o por vía oral, en animales, niños, particularmente niños pequeños, y otros que pudieran tener dificultad para tragar una pildora, tableta, cápsula o similar, o en situaciones de dosis múltiples. Las composiciones viscosas, por otro lado, se pueden formular con el rango de viscosidad apropiado para proporcionar mayores periodos de contacto con la mucosa, tal como el revestimiento del estómago o la mucosa nasal . Obviamente, la selección de los vehículos adecuados y otros aditivos, dependerá de la vía exacta de administración y de la naturaleza de la forma farmacéutica particular, e.g. forma farmacéutica líquida (e.g., si la composición se va a formular en solución, en suspensión, en gel o en otra forma líquida), o en una forma farmacéutica sólida (e.g., si la composición se va a formular en forma de pildora, tableta, cápsula, capsulilla, forma de liberación prolongada o forma rellena de líquido) . Las soluciones, suspensiones y geles normalmente contienen una gran cantidad de agua (de preferencia agua - - purificada) además del inmunógeno, y opcionalmente un adyuvante. También puede haber presentes cantidades menores de otros ingredientes, tales como ajustadores de pH (e.g., una base tal como NaOH) , agentes emulsificantes o dispersantes, agentes amortiguadores de pH, conservadores, humectantes, gelificantes (e.g., metilcelulosa) , colorantes y/o saborizantes . Las composiciones pueden ser isotónicas, i.e., pueden tener la misma presión osmótica que la sangre y el liquido lacrimal. La isotonicidad deseada de las composiciones de la presente invención, se puede lograr utilizando cloruro de sodio o cualquier otro agente farmacéuticamente aceptable tal como dextrosa, ácido bórico, tartrato de sodio, propilenglicol u otros solutos orgánicos o inorgánicos. El cloruro de sodio se prefiere particularmente para amortiguadores de pH que contienen iones sodio. La viscosidad de las composiciones se puede mantener al nivel seleccionado, utilizando un agente espesante farmacéuticamente aceptable. La metilcelulosa se prefiere debido a que se encuentra fácil y económicamente disponible y es fácil de trabajar. Otros agentes adecuados espesantes incluyen, por ejemplo, la goma de xantano, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, carbómero y similares. La concentración preferida del espesante - - dependerá del agente seleccionado. El punto importante es utilizar una cantidad que logre la viscosidad seleccionada. Las composiciones viscosas normalmente se preparan en solución, mediante la adición de los agentes espesantes. Se puede emplear un conservador farmacéuticamente aceptable para incrementar la vida de anaquel de las composiciones. El alcohol bencílico puede ser adecuado, aunque se puede utilizar también una variedad de conservadores incluyendo, por ejemplo, parabenos, timerosal, clorobutanol o cloruro de benzalconio. Una concentración adecuada del conservador será de aproximadamente 0.02% a 2%, con base en el peso total, aunque puede haber una variación apreciable, dependiendo del agente seleccionado. Los técnicos en la materia reconocerán que los componentes de las composiciones se deben seleccionar para ser químicamente inertes con respecto a los inmunógenos neumococóccicos y el adyuvante adicional opcional. Esto no representará problema para los técnicos en el campo químico y farmacéutico, o se pueden evitar problemas refiriéndose a textos normales o mediante experimentos simples (que no involucran experimentación indebida), a partir de la presente descripción y los documentos citados en ella. Las composiciones inmunológicamente efectivas de la presente invención, se preparan mezclando los ingredientes siguiendo los procedimientos generalmente aceptados. Por ejemplo, los componentes seleccionados simplemente se pueden mezclar en una mezcladora o en otro dispositivo estándar para producir una mezcla concentrada, la cual entonces se puede ajustar a la concentración y viscosidad finales, mediante la adición de agua o un agente espesante, y posiblemente una solución reguladora para controlar el pH o algún soluto adicional para controlar la tonicidad. Generalmente, el pH puede ser de aproximadamente 3 a 7.5. Las composiciones se pueden administrar en formas farmacéuticas y mediante técnicas conocidas por los técnicos en el campo médico y veterinario, tomando en cuenta factores tales como la edad, sexo, peso y condiciones del paciente o animal particular, y la forma de composición utilizada para la administración (e.g., sólido vs liquido). Las dosis para seres humanos u otros mamíferos pueden ser determinadas sin realizar experimentación indebida por los técnicos en la materia, a partir de la siguiente descripción, de los documentos citados en ella, de los Ejemplos que se presentan a continuación (e.g., de los Ejemplos que involucran ratones y de las solicitudes citadas en los mismos, e.g., en la Sección "Solicitudes Relacionadas", especialmente puesto que la administración puede ser de manera y de dosis análogas a PspA o PspC) .

Los regímenes adecuados para la administración inicial y las dosis de refuerzo o administraciones secuenciales también son variables, pueden incluir una administración inicial seguida por administraciones subsecuentes; sin embargo, esto puede ser comprobado por los técnicos en la materia a partir de la siguiente descripción, de los documentos citados en ella, incluyendo las solicitudes citadas en ella y los Ejemplos que se presentan a continuación. Las composiciones se pueden administrar por sí solas o se pueden coadministrar o pueden ser administradas secuencialmente con otras composiciones de la presente invención o con otras composiciones profilácticas o terapéuticas. Los técnicos en la materia ajustarán fácilmente las concentraciones conocidas de PspA o PspC para preparar una combinación de cuando menos dos de entre PspC y/o PspA y/o PsaA, o un epítopo o fragmento de los mismos. El inmunógeno PspC (PspC o un epítopo o fragmento del mismo) , así como el inmunógeno PspA (PspA o un epítopo o fragmento del mismo) , así como un inmunógeno PsaA (PsaA o un epítopo o inmunógeno del mismo) , se puede expresar de manera recombinante, e.g. en E. coli o en otro vector o plásmido, para expresión in vivo o expresión in vitro. Los métodos para preparar y/o administrar un vector o plásmido recombinante para la expresión de PspC y/o PspA y/o PsaA o - - un epítopo o fragmento de los mismos, ya sea in vivo o in vitro, puede ser cualquier método deseado, e.g. un método que sea igual o análogo a los métodos descritos en: Patentes Norteamericanas Nos. 4,603,112; 4,769,330; 5,174,993; 5,505,941; 5,338, 683; 5,494,807; 4,722,848; 5,942,335; 5,364,773; 5,762,938; 5,770,212; 5,942,235; 5,756,103; 5,766,599; 6,004,777; 5,990,091; 6,033, 904; 5,869,312; 5,382,425; Publicaciones Internacionales WO 94/16716, WO 96/39491, Paoletti, "Applications of pox virus vectors to vaccination: An update", PNAS USA 93:11349-11353, octubre de 1996, Moss, "Genetically engineered poxviruses for recombinant gene expression, vaccination, and safety", PNAS USA 93:11341-11348, octubre de 1996, Smith et ai., Patente Norteamericana No. .4,745, 051 (recombinant baculovirus ( , Richardson, C.D. (Editor), Methods in Molecular Biology 39, "BAculovirus Expression Protocols" (1995 Humana Press Inc.), Smith et ai., "Production of HUma Beta Interferon in Insect Cells Infected ith a Baculovirus Expression Vector, " Molecular an Cellular Biology, Dic. 1983, Vol. 3, No. 12, p. 2156-2165; Pennock et ai., "Strong and Regulated Expression of Escherichia coli B-Galactosidase in Infect Cells with a Baculovirus vector," Molecular and Cellular Biology Mar. 1984, Vol. 4, No. 3, p. 399-406; EPA 0 370 573, Solicitud Norteamericana No. de serie 920,197, presentada el 16 de - - octubre de 1986, Solicitud de Patente Europea EP No. 265785, Patente Norteamericana No. 4,769,331 (recombinant herpesvirus) , Roizman, "The functions of herpes simplex virus genes: A primer for genetic engineering of novel vectors, " PNAS USA 93:11307-11312, octubre 1996, Andreansky et al., "The application of genetically engineered herpes simplex viruses to the treatment of experimental brain tumors", PNAS USA 93:11313-11318, octubre 1996, Robertson et al. "Epstein-Barr virus vectors for gene delivery to B lymphocytes, " PNAS USA 93:11334-11340, octubre 1996, Frolov et al., "Alphavirus-based expression vectors: Strategies and applications," PNAS USA 93:11371-11377, octubre 1996, Kitson et al., J. Virol. 65, 3068-3075, 1991; Patentes Norteamericanas Nos. 5,591,439; 5,552,143 (recombinant adenovirus) , Grunhaus et al., 1992, "Adenovirus as cloning vectors", Seminars in Virology (Vol. 3) p. 237-52, 1993, Ballay et al. EMBO Journal, vol. 4, p. 3861-65, Graham, Tibtech 8, 85-87, abril, 1990, Prevec et al., J. Gen. Virol 70, 429-434, PCT W091/11525, Felgner et al. (1994), J. Biol. Chem. , 269, 2550-2561, Science, 259:1745-49, 1993 y McClements et al., "Immunization with DNA vaccines encoding glycoprotein D or glycoprotein B, alone or in combination, induces protective immunity in animal models of herpes simplex virus-2 disease," PNAS USA 93:11414-11420, octubre 1996, y Patentes Norteamericanas Nos. 5,591,639; 5,589,466 y 5,580,859 que se relacionan con los vectores de expresión de ADN, Ínter alia. Véase también la Publicación Internacional WO 98/33510; Ju et al., Diabetologia, 41:736-739, 1998 (lentiviral expression system) ; Sanford et al., Patente Norteamericana No. 4,945,050 (method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor) ; Fischbach et al. (Intracel) , Publicación Internacional WO 90/01543 (method for the genetic expression of heterologous proteins by cells transfected) ; Robinson et al., seminars in IMMUNOLOGY, vol. 9, pp. 271-283 (1997) (DNA vaccines) ; Szoka et al., Patente Norteamericana No. 4,394,448 (method of inserting DNA into living cells); y McCormick et al., Patente Norteamericana No. 5,677,178 (use of cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia) . El producto de expresión generado por vectores o recombinantes en la presente invención, opcionalmente también puede ser aislado y/o purificado de células infectadas o transfectadas; por ejemplo, para preparar composiciones para administración a pacientes. Sin embargo, en ciertos casos podría ser ventajoso no aislar y/o purificar un producto de expresión de una célula; por ejemplo, cuando la . célula o porciones de la misma intensifican el efecto del PsaA y/o PspA y/o PspC. Un vector o recombinante de la presente invención - - que expresa PspC o un epitopo o fragmento del mismo, y/o PspA o un epitopo o fragmento del mismo y/o PsaA o un epitopo o fragmento del mismo, se puede administrar en cualquier cantidad adecuada para lograr la expresión a un nivel de dosis adecuado, e.g. un nivel de dosis análogo a los niveles de dosis anteriormente mencionados (en donde el inmunógeno o epitopo de interés está presente directamente) . El vector o recombinante de la presente invención se puede administrar a un paciente o a células infectadas o transfectadas, en una cantidad de aproximadamente cuando menos 103 ufp; de preferencia de aproximadamente 104 a aproximadamente 1010 ufp, e.g. de aproximadamente 105 a aproximadamente 109 ufp, por ejemplo de aproximadamente 106 a aproximadamente 108 ufp. En composiciones plasmidicas, la dosis debe ser una cantidad suficiente de plásmido para inducir una respuesta análoga a las composiciones en donde el PspC o un epitopo o fragmento del mismo y/o PspA o un epitopo o fragmento del mismo y/o PsaA o un epitopo o fragmento del mismo, están directamente presentes; o para que tengan una expresión análoga a las dosis en tales composiciones; o que tengan una expresión análoga a la expresión obtenida por composiciones recombinantes in vivo. Por ejemplo, cantidades de ADN plasmidico en composiciones de plásmidos pueden ser de 1 iq a 100 mg, de preferencia de 0.1 a 10 mg, e.g. 500 - - microgramos, pero también se pueden utilizar niveles más bajos tales como 0.1 a 2 mg o de preferencia de 1 a 10 ]iq. Los documentos citados en la presente con referencia a vectores plasmídicos de ADN, pueden ser consultados por los técnicos en la materia para comprobar otras dosis adecuadas para las composiciones de vector plasmidico de ADN de la presente invención, sin realizar experimentación indebida. La presente invención adicionalmente se describe mediante los siguientes ejemplos ilustrativos y no limitantes. EJEMPLOS EJEMPLO 1 Este Ejemplo ilustra el uso de un modelo murino de portadores de neumococos . Se inocularon tres diferentes cepas de S. pneumoniae (L82016, BG9163 y BG8826) en volúmenes de 12 µL en las fosas nasales de ratones CBA, por un periodo de varios minutos utilizando administración lenta desde una micropipeta de 20 ]1L. Después de 7 dias, los ratones fueron sacrificados y se les extirpó la tráquea a la altura de la garganta. Se instilaron 50 ]ih de liquido y se realizó un lavado a través de las fosas nasales. El área lavada representa tejido de la faringe y nasal. Cada una de estas cepas fue capaz de establecer un estado portador en este tejido sin presentar ninguna sepsis o bacteremia concomitante. Los resultados se presentan en la - - Tabla 1 que se presenta a continuación. TABLA. 1: ^15 Nota: Los ratones fueron inoculados con los números indicados de UFC por vía intranasal (i.n.) y sacrificados 8 días después. Los datos se expresan como UFC en los 50 \iL de lavado nasal, en el homogeneizado de pulmón de 1 mL, o en 50 yL de sangre. La infección de ratones CBA/N por via ' 20 intraperitoneal (i.p.) con 107 células L82016, invariablemente es letal . Después del primer día de infección, se observaron algunos números bajos de neumococos en pulmón y sangre de un pequeño número de ratones. Posteriormente en 25 la infección, los neumococos sólo fueron recuperables en el - - lavado nasal. La colonización pareció ser estable durante cuando menos 3 semanas. Para identificar los neumococos de los lavados nasales, éstos fueron cultivados en placas con gentamicina. Este antibiótico se seleccionó porque mata a la mayoría de las bacterias encontradas en la nariz, pero no afecta el crecimiento de los neumococos. Colonias individuales de cada lavado nasal se picaron y se volvieron a inocular con un disco de optoquina para confirmar que eran neumococos. En algunos casos, las bacterias fueron tipificadas por cápsula para confirmar su identidad con el tipo de bacteria utilizado para inocular a los ratones. Los ratones control que no recibieron bacterias, no produjeron bacterias que crecieran en placas con 0.2% de gentamicina y fueran sensibles a la optoquina. El desafío con una cantidad tan baja como 2 x 107 bacterias, establecerá el estado de portador en todos los ratones. Dosis más bajas, hasta 103, produjeron un estado de portador comparable en la mayoría de los ratones, pero 1/4 a 1/3 partes de los ratones inoculados con tal dosis baja, fracasó en convertirse en portador de neumococos después de 1 semana. De conformidad con ello, una dosis adecuada para realizar estos estudios parece ser entre 107 y 106 UFC de L81905. La dosis apropiada para otras cepas se puede determinar fácilmente de manera empírica, utilizando el mismo método general que - - el anteriormente establecido. EJEMPLO 2 Capacidad de una combinación de PspA y PsaA para reducir el estado de portador nasofaríngeo de la cepa L82016 de S. pneumoniae (tipo capsular 6B) . Los genes PspA y PsaA fueron clonados de la cepa Rxl/D39 y las proteínas fueron expresadas en E. coli. Los ratones se inmunizaron con rPspA (pUAB055) , PsaA (lote 11.12.98), una combinación de ambos o ninguno. Ambas proteínas fueron administradas por separado o mezcladas en forma de dosis de 500 ng en volúmenes de 10 microlitros de solución de Ringer con lactato. Los ratones fueron inmunizados cada lunes y viernes durante tres semanas consecutivas . Cuatro microgramos de subunidad B de la toxina colérica obtenida en el comercio, que es un adyuvante mucosal [Wu, 1997 #1101], se administró con cada inmunización durante las primeras dos semanas. La subunidad B de la toxina colérica no fue administrada en la inmunización de la tercera semana. A los ratones control se les administró una inyección de solución de Ringer + TBC durante las primeras dos semanas y una inyección de Ringer sólo en la tercera semana. Catorce días posteriores a la infección, los ratones fueron desafiados por vía i.n. con 4,650,000 unidades formadoras de colonia de la cepa L82016. La cepa L82016 es una cepa de tipo capsular 6B de S. - - pneumoniae. Dos semanas posteriores a la infección de los ratones, se tomaron muestras de saliva y suero de cada ratón, para evaluar la inducción de anticuerpos. Los resultados se muestran en la Tabla 2 que se presenta a continuación. TABLA.2 Efecto de la inmunización intranasal con PspA y/o PsaA sobre la producción de anticuerpos y la resistencia al acarreo nasal de la cepa L82016 después de un desafio intranasal (i.n.) Parámetro Inmunógeno TBC RpspA RPsaA RPsaA+ solo + TBC + TBC RPspA+ TBC+ Número de ratones 5 4 4 4 Promedio de UFC/nariz 5.04 4.05 2.18 1.31* Promedio de anticuerpos en saliva en microgramos/mL Anti-PspA (microgramos/mL) <0.001 <0.008 <0.001 0.008 Anti-PspA (microgramos/mL) <0.16 <0.16 0.819 0.680 Promedio de anticuerpos en suero en microgramos/mL Anti-PspA (microgramos/mL) <0.0008 16.39 <0.0008 148.8 - - EJEMPLO 3 Capacidad de una combinación de proteínas de superficie neumocóccicas PspA y PsaA para proteger contra un desafío nasofaríngeo con la cepa C134 de S. pneumoniae. El experimento se realizó exactamente como en el Ejemplo 1 anterior, excepto que el desafío consistió de 1,000,000 unidades formadoras de colonia de cl34, que es una cepa de tipo capsular 23S de S. pneumoniae. Los resultados se muestran en la Tabla 3 que se presenta a continuación. TABLA 3 Efecto de la inmunización intranasal con PspA y/o PsaA sobre la producción de anticuerpos y la resistencia al acarreo nasal de la cepa E 134 después de un desafío intranasal (i.n.) Parámetro Inmunógeno TBC RpspA RPsaA RPsaA+ solo + TBC + TBC RPspA+ TBC+ Número de ratones 11 10 10 10 Log promedio de UFC/nariz 4.80 4.75 3.70 2.96* Error estándar - - EJEMPLO 4 EFECTOS DE LA INMUNIZACIÓN SOBRE EL ESTADO DE PORTADOR NASAL. El experimento se llevó a cabo esencialmente de la misma manera que el Ejemplo 2 anterior. Los resultados se muestran en la Tabla 4. TABLA 4 * P < 0.05 - - ** P < 0.01 EJEMPLO 5 El experimento se realizó de la misma manera que el Ejemplo 2, excepto que se utilizó alumbre como adyuvante y los inmunogenos se administraron por vía subcutánea. Los resultados se muestran en la Tabla 5. TABLA.5 *P < 0.01 Habiendo descrito en detalle las modalidades preferidas de la presente invención, debe entenderse que la invención definida por las reivindicaciones anexas no está limitada a los detalles particulares establecidos en la descripción anterior, ya que son evidentes variaciones de la misma sin apartarse del espíritu y los alcances de la presente invención. REFERENCIAS 1. Center of Disease Control. 19484. Pneumococcal polysaccharide vaccine usage, United Stes, MMWR 33: 273- 276, 281. - - 2. Mufson, M.A., G. Oley and D. Hughey, 1982. Pneumococcal disease in a medium-sized community in the United States. JAMA 248: 1486-1489. 3. Hook, E.W., C.A. Horton and D.R. Schaberg. 1983. 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Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecedente, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Una composición de combinación inmunológica, caracterizada porque comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, un ingrediente inmunológicamente activo, en donde el ingrediente inmunológicamente activo comprende: (i) la proteína de adhesión A de superficie neumocóccica (PsaA) o un epítopo de la misma o un vector que exprese PsaA o un epítopo de la misma, y (ü) (a) la proteína A de superficie neurraxrdcD (RspA) o un epítopo de la misma o un vector que exprese PspA o un epítopo de la misma, o (b) la proteína C de superficie neumocóccica (PspC) o un epítopo de la misma o un vector que exprese PspC o un epítopo de la misma, o (c) PspA o un epítopo de la misma y PspC o un epítopo de la misma, o un vector que exprese PspA o un epítopo de la misma y PspC o un epítopo de la misma, o un primer vector que exprese PspA o un epítopo de la misma y un segundo vector que exprese PspC o un epítopo de la misma, o el ingrediente inmunológicamente activo comprende: (iii) un vector que exprese PsaA o un epítopo de la misma y PspA o un epítopo de la misma y/o PspC o un epítopo de la misma. 2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque los inmunógenos de proteína de superficie neumocóccica se producen de manera recombinante . 3. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende PsaA y PspA. . La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque además comprende un adyuvante. 5. La composición inmunológica de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque el adyuvante es la subunidad B de la toxina colérica o alumbre. 6. Un método para inducir una respuesta inmunológica en un animal, caracterizado porque comprende el paso de administrarle al animal la composición inmunológica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la administración es intranasal . 8. Un método para inmunizar un huésped contra la infección neumocóccica, caracterizado porque comprende administrarle al huésped una cantidad inmunológicamente efectiva de PspA junto con una cantidad inmunológicamente efectiva de PsaA. 9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la administración es intranasal . 10. Una composición inmunogénica para administrarle por via intranasal a un huésped susceptible de ser portador de neumococos, para inducir una respuesta inmunológica protectora contra la colonización por S. pneumoniae en la nasofaringe, caracterizada porque comprende una cantidad inmunizante de una combinación de dos o más inmunógenos de proteina de superficie neumocóccica, en donde la combinación incluye PspA y PsaA, .o fragmentos inmunogénicos de las mismas. 11. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque los inmunógenos de proteina de superficie neumocóccica se producen de manera recombinante . 12. La composición de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque comprende un adyuvante . 13. La composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque el adyuvante es la toxina B colérica (TBC) o alumbre.