JP2003516344A - Ｈｌａクラスｉａ２腫瘍関連抗原ペプチドおよびワクチン組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ＣＥＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３、またはｐ５３のネイティブ配列と１００％同一性を有する６００個未満連続するアミノ酸を有する少なくとも１つのペプチドを含む、組成物を提供し、このペプチドが、さらに表６から選択される少なくとも１つのエピトープを含む、組成物を提供する。本発明はまた、ＣＥＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３、またはｐ５３のネイティブ配列と１００％同一性を有する６００個未満連続するアミノ酸を有する少なくとも１つのペプチドを含む、ワクチン組成物を提供し、このペプチドが、さらに表６から選択される少なくとも１つのエピトープを含む、ワクチン組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願の相互参照） 本願は、同時係属Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ ０９／０１６，３６１（１９９８年１月３
０日出願）（これは、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／０３６，６９６（１９９７年１月
３１日出願）の優先権を主張し、現在放棄している）の一部継続であり、これら
の各々は、本明細書中に参考として援用される。

【０００２】 （連邦政府が後援した研究および開発の下でなされた本発明に対する権利に関
する主張） 本発明は、一部、国立衛生研究所と共に認可の下で米国政府によって資金援助
された。米国政府は、本発明に特定の権利を有する。

【０００３】 （発明の分野） 本発明は、生物学の分野に関する。特定の実施形態において、本発明は、腫瘍
関連抗原を選択するために免疫応答をモニターまたは誘発するのに有用な組成物
に関する。

【０００４】 （１．発明の背景） 免疫治療分野は、癌の処置に関する新規な手段（改善された癌ワクチンの開発
を含む）を生み出している（Ｋｒｕｌ，Ｋ．Ｇ．，Ｄｅｃｉｓｉｏｎ Ｒｅｓｏ
ｕｒｃｅｓ，１０．１−１０．２５（１９９８））。ワクチンは、腫瘍細胞に対
する免疫応答を指向する機構を提供するが、腫瘍細胞が免疫学的プロセスを回避
する多数の機構が存在する（Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ（Ｖａｃｃｉｎｅ補遺）４：５２５−５３１（１９９８））。近年の
進歩は、ペプチドワクチンの効果が、免疫応答の刺激を増強する手段（例えば、
インターロイキン−２または自己樹状細胞（ＤＣ）の使用）と組み合わされた場
合、増加され得ることを示す（Ａｂｂａｓら、編、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３編、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒ
ｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，ｐｕｂ．（１９９７））。

【０００５】 第Ｉ相研究において、Ｍｕｒｐｈｙらは、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）中に存
在する配列に対応するヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ２−結合ペプチドが、前立
腺癌を有する患者において特定の細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球（ＣＴＬ）応答を刺
激したことを示した（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２９：３７
１−３８０（１９９６））。近年、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇらは、転移黒色腫を有す
る患者を処置するための癌ワクチンとして、黒色腫関連抗原（ｇｐｌ００）由来
の合成ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの安全性および作用機構を評価した（Ｒｏｓｅ
ｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．，４：３２１−３２７（１９９８））。
免疫学的アッセイに基づいて、９１％の患者は、この合成ペプチドで好首尾に免
疫された。さらに、ＩＬ−２処置と組合わせてこのペプチドワクチンを受けた患
者の４２％（１３／３１）は、他覚的な癌応答を示した。最後に、Ｎｅｓｔｌｅ
らは、ペプチドまたは腫瘍溶解物でパルスされたＤＣを用いた１６人の黒色腫患
者のワクチン接種を報告した（Ｎｅｓｔｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ ４：３
２８−３３２（１９９８））。ペプチドでパルスされたＤＣは、１〜２のペプチ
ドを含むワクチンで免疫された患者（１１／１２）において免疫応答を誘導した
。他覚的な応答は、この研究において評価された患者の５／１６（３人はペプチ
ドでパルスされ、２人は腫瘍溶解物でパルスされた）において明らかであった。
これらの第Ｉ相安全性研究は、公知の腫瘍関連抗原のＨＬＡ−Ａ２結合ペプチド
が予期された作用機構を示すという証拠を提供した。これらのワクチンは、概し
て安全であり、そして十分に寛容された。４つの癌抗原（ＣＥＡ、ＨＥＲ２／ｎ
ｅｕ、ＭＡＧＥ２、およびＭＡＧＥ３）に関連するワクチン分子が、開示される
（Ｋａｗａｓｈｉｍａら、Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，５９：１−１４
（１９９８））。

【０００６】 前臨床研究は、ワクチンパルスされたＤＣが抗原特異的ＣＴＬの刺激を介して
抗腫瘍効果を媒介することを示している（Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍら、Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｍｅｄ．，１：１１７９−１１８３（１９９５）；Ｃｅｌｌｕｚｚｉら、Ｊ
．Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８３：２８３−２８７（１９９６）；Ｚｉｔｖｏｇｅｌら
、Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８３：８７−９７（１９９６）；Ｍａｙｏｒｄｏｍｏ
ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ １：１２９７−１３０２（１９９５））。ＣＴＬは
、直接、腫瘍細胞を溶解し、そしてまた、腫瘍細胞に対する免疫反応性をさらに
増幅する多数のサイトカイン（例えば、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、腫瘍
壊死因子（ＴＮＦ）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−
ＣＳＦ））を分泌する。ＣＴＬは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に
結合した、８〜１１アミノ酸残基のペプチドエピトープを構成する複合体形態に
おける腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を認識する（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｂ．Ｄ．，Ｔｈ
ｅ ｈｕｍａｎ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍ
ｐｌｅｘ ＨＬＡ ｉｎ ｂａｓｉｃ ＆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ Ｓｉｔｅｓら、編、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉ
ｏｎ：Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，５２−６４頁、第４版）。ペプチドエピトープは、
タンパク質の細胞内プロセシングを通じて生成される。このプロセスされたペプ
チドは、新規合成されたＭＨＣ分子に結合し、そしてエピトープ−ＭＨＣ複合体
は、細胞表面上に発現される。これらのエピトープ−ＭＨＣ複合体は、ＣＴＬの
Ｔ細胞レセプターによって認識される。この認識事象は、ＣＴＬの活性化ならび
に標的腫瘍細胞の溶解のようなエフェクター機能の誘導誘導に必要とされる。

【０００７】 ＭＨＣ分子は、Ｔ細胞応答を調節する高度に多型のタンパク質である（Ｓｃｈ
ｗａｒｔｚ，Ｂ．Ｄ．，Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐ
ａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ＨＬＡ ｉｎ ｂａｓｉｃ ＆ ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｓｉｔｅｓら、編、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉ
ｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ：Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，５２−６４頁、第４版
）。ヒトにおいてＣＴＬエピトープを提示する種特異的ＭＨＣホモログは、ＨＬ
Ａと称される。ＨＬＡクラスＩ分子は、類似のペプチドレパートリーに結合する
その能力に基づいて、いくつかのファミリーまたは「スーパータイプ」に分けら
れ得る。ＨＬＡスーパータイプ（例えば、Ａ２、Ａ３、およびＢ７）に結合する
ワクチンは、広範な人種的に偏っていない集団適用範囲を提供する。表１１に見
出されるように、集団適用範囲は、種々の人種に関して８４〜９０％であり、サ
ンプルの人種の平均適用範囲は、８７％であった。

【０００８】 種々の手段が、癌ワクチンとして使用されたかまたは使用されている。表１は
、主要な癌ワクチン手段ならびに各々の種々の利点および不都合な点を概説する
。

【０００９】 現在、癌治療の領域に、未だ検討されていない多数の需要がある。これは、癌
治療のために使用される現存の治療剤と関連する副作用、および５０％未満の患
者が現在の治療剤によって治癒されるという事実によって明らかにされる。従っ
て、応答速度、応答の持続時間、全体的な生存、疾患なしでの生存またはクオリ
ティ・オブ・ライフのいずれかを増加する能力を有した生成物のための機会があ
る。

【００１０】 （ＩＩ．発明の要旨） 少なくとも１つのペプチドを含む組成物が、本明細書中に開示され、このペプ
チドは、以下： ＶＬＹＧＰＤＡＰＴＶ（配列番号１）、ＹＬＳＧＡＮＬＮＶ（配列番号２）、Ａ
ＴＶＧＩＭＩＧＶ（配列番号３）、ＬＬＰＥＮＮＶＬＳＰＶ（配列番号４）、Ｋ
ＬＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号５）、ＫＬＢＰＶＱＬＷＶ（配列番号６）、ＳＬＰ
ＰＰＧＴＲＶ（配列番号７）、ＳＭＰＰＰＧＴＲＶ（配列番号８）、ＫＬＦＧＳ
ＬＡＦＶ（配列番号９）、ＫＶＦＧＳＬＡＦＶ（配列番号１０）、ＶＭＡＧＶＧ
ＳＰＹＶ（配列番号１１）、ＡＬＣＲＷＧＬＬＬ（配列番号１２）、ＦＬＷＧＰ
ＲＡＬＶ（配列番号１３）、ＨＬＹＱＧＣＱＶＶ（配列番号１４）、ＩＬＨＮＧ
ＡＹＳＬ（配列番号１５）、ＩＭＩＧＶＬＶＧＶ（配列番号１６）、ＫＩＦＧＳ
ＬＡＦＬ（配列番号１７）、ＫＶＡＥＬＶＨＦＬ（配列番号１８）、ＬＬＴＦＷ
ＮＰＰＶ（配列番号１９）、ＬＶＦＧＩＥＬＭＥＶ（配列番号２０）、ＱＬＶＦ
ＧＩＥＬＭＥＶ（配列番号２１）、ＲＬＬＱＥＴＥＬＶ（配列番号２２）、ＶＶ
ＬＧＶＶＦＧＩ（配列番号２３）、ＹＬＱＬＶＦＧＩＥＶ（配列番号２４）、お
よびＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩ（配列番号２５）； からなる群より選択される配列からなる単離された調製エピトープを含む。

【００１１】 他の実施形態において、この組成物は、複数のペプチド、例えば、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のペプチドを含み、こ
こで、このペプチドの各々は、配列番号１〜２５からなる群より選択される配列
からなるエピトープを含む。

【００１２】 この組成物は、アミノ酸リンカーに連結したエピトープを含み得る。１つの実
施形態において、このエピトープは、ＣＴＬエピトープまたはＨＴＬエピトープ
と混合されるかまたはこれらに連結される。このＨＴＬエピトープは、ｐａｎ−
ＤＲ結合分子であり得る。

【００１３】 別の実施形態において、この組成物は、リポソームを含み得、ここで、このエ
ピトープは、リポソーム上またはリポソーム内である。このエピトープは、脂質
に連結され得、そしてヘテロポリマーまたはホモポリマーであり得る。

【００１４】 あるいは、このエピトープは、ＨＬＡ重鎖、β−ミクログロブリン、およびス
トレプトアビジン複合体に結合され得、これによって、テトラマーが形成される
。

【００１５】 この組成物はさらに、抗原提示細胞を含み得、ここで、このエピトープは、抗
原提示細胞上または抗原提示細胞内である。このエピトープは、抗原提示細胞上
のＨＬＡ分子に結合され得、これによって、Ａ２拘束細胞傷害性リンパ球（ＣＴ
Ｌ）が存在する場合、ＣＴＬのレセプターは、ＨＬＡ分子およびそのエピトープ
の複合体に結合する。抗原提示細胞は、樹状細胞であり得る。

【００１６】 本発明の別の局面は、１つ以上のペプチド、および以下： ＶＬＹＧＰＤＡＰＴＶ（配列番号１）、ＹＬＳＧＡＮＬＮＶ（配列番号２）、Ａ
ＴＶＧＩＭＩＧＶ（配列番号３）、ＬＬＰＥＮＮＶＬＳＰＶ（配列番号４）、Ｋ
ＬＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号５）、ＫＬＢＰＶＱＬＷＶ（配列番号６）、ＳＬＰ
ＰＰＧＴＲＶ（配列番号７）、ＳＭＰＰＰＧＴＲＶ（配列番号８）、ＫＬＦＧＳ
ＬＡＦＶ（配列番号９）、ＫＶＦＧＳＬＡＦＶ（配列番号１０）、ＶＭＡＧＶＧ
ＳＰＹＶ（配列番号１１）、ＡＬＣＲＷＧＬＬＬ（配列番号１２）、ＦＬＷＧＰ
ＲＡＬＶ（配列番号１３）、ＨＬＹＱＧＣＱＶＶ（配列番号１４）、ＩＬＨＮＧ
ＡＹＳＬ（配列番号１５）、ＩＭＩＧＶＬＶＧＶ（配列番号１６）、ＫＩＦＧＳ
ＬＡＦＬ（配列番号１７）、ＫＶＡＥＬＶＨＦＬ（配列番号１８）、ＬＬＴＦＷ
ＮＰＰＶ（配列番号１９）、ＬＶＦＧＩＥＬＭＥＶ（配列番号２０）、ＱＬＶＦ
ＧＩＥＬＭＥＶ（配列番号２１）、ＲＬＬＱＥＴＥＬＶ（配列番号２２）、ＶＶ
ＬＧＶＶＦＧＩ（配列番号２３）、ＹＬＱＬＶＦＧＩＥＶ（配列番号２４）、お
よびＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩ（配列番号２５）； からなる群より選択される少なくとも３つのエピトープをさらに含む組成物であ
り、ここで、この１つ以上のペプチドの各々は、ネイティブなペプチド配列と１
００％の同一性を有する５０未満連続したアミノ酸を含む。

【００１７】 １つの実施形態において、１つのペプチドは、少なくとも３個のエピトープを
含む。

【００１８】 この組成物は、上記の群から選択される少なくとも４、５、６、７、または８
個のエピトープを含み得る。１つ以上のペプチドのうちの少なくとも１つは、ヘ
テロポリマーまたはホモポリマーであり得る。さらに、この組成物は、さらなる
エピトープを含み得、このエピトープは、腫瘍関連抗原に由来し得る。さらなる
エピトープはまた、ＰａｎＤＲ結合分子であり得る。

【００１９】 本発明の別の局面は、ＣＥＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３、
またはｐ５３のネイティブなペプチド配列と１００％同一性を有する５０未満連
続したアミノ酸を含むペプチドの単位用量；および薬学的賦形剤を含む、ワクチ
ン組成物であり、このペプチドは、以下： ＶＬＹＧＰＤＡＰＴＶ（配列番号１）、ＹＬＳＧＡＮＬＮＶ（配列番号２）、Ａ
ＴＶＧＩＭＩＧＶ（配列番号３）、ＬＬＰＥＮＮＶＬＳＰＶ（配列番号４）、Ｋ
ＬＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号５）、ＫＬＢＰＶＱＬＷＶ（配列番号６）、ＳＬＰ
ＰＰＧＴＲＶ（配列番号７）、ＳＭＰＰＰＧＴＲＶ（配列番号８）、ＫＬＦＧＳ
ＬＡＦＶ（配列番号９）、ＫＶＦＧＳＬＡＦＶ（配列番号１０）、ＶＭＡＧＶＧ
ＳＰＹＶ（配列番号１１）、ＡＬＣＲＷＧＬＬＬ（配列番号１２）、ＦＬＷＧＰ
ＲＡＬＶ（配列番号１３）、ＨＬＹＱＧＣＱＶＶ（配列番号１４）、ＩＬＨＮＧ
ＡＹＳＬ（配列番号１５）、ＩＭＩＧＶＬＶＧＶ（配列番号１６）、ＫＩＦＧＳ
ＬＡＦＬ（配列番号１７）、ＫＶＡＥＬＶＨＦＬ（配列番号１８）、ＬＬＴＦＷ
ＮＰＰＶ（配列番号１９）、ＬＶＦＧＩＥＬＭＥＶ（配列番号２０）、ＱＬＶＦ
ＧＩＥＬＭＥＶ（配列番号２１）、ＲＬＬＱＥＴＥＬＶ（配列番号２２）、ＶＶ
ＬＧＶＶＦＧＩ（配列番号２３）、ＹＬＱＬＶＦＧＩＥＶ（配列番号２４）、お
よびＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩ（配列番号２５）； からなる群より選択されるエピトープを含む。

【００２０】 １つの実施形態において、エピトープは、ＹＬＳＧＡＮＬＮＶ（配列番号２）
、またはＫＬＢＰＶＱＬＷＶ（配列番号６）、またはＳＭＰＰＰＧＴＲＶ（配列
番号８）である。ワクチン組成物は、さらなるエピトープ（これは、ＰａｎＤＲ
結合分子であり得る）をさらに含み得、そしてリポソームを含み得、ここで、少
なくとも１つのエピトープは、エピトープの上またはエピトープ内である。いく
つかの実施形態において、薬学的賦形剤は、アジュバントを含む。

【００２１】 ワクチンは、抗原提示細胞をさらに含む。このエピトープは、抗原提示細胞上
のＨＬＡ分子に結合し得、それによって、Ａ２スーパータイプ拘束細胞傷害性Ｔ
リンパ球（ＣＴＬ）が存在される場合、ＣＴＬのレセプターは、ＨＬＡ分子およ
びエピトープの複合体に結合する。抗原提示細胞は、樹状細胞であり得る。

【００２２】 （ＩＶ．発明の詳細な説明） 本発明は、腫瘍関連抗原に対する免疫応答をモニターするために用いられ得る
、または、免疫系の細胞性部門（アーム）を刺激する癌ワクチンを作成するため
に１つ以上のペプチドが組み合わされる場合、複数のペプチドエピトープを提供
する。特定の実施形態において、ワクチンは、ＨＬＡ−Ａ２スーパータイプ（上
位タイプ）の対立遺伝子を保有する個体において腫瘍に対する免疫応答を媒介す
る（Ａ２および他の上位タイプのメンバーの列挙については表５を参照のこと）
；このようなワクチンは、一般にＡ２ワクチンと呼ばれる。

【００２３】 Ａ２ワクチンは、腫瘍細胞を認識しそして殺傷するように免疫系を刺激し、癌
について処置される患者の、生活の質（クオリティーオブライフ）の向上、およ
び／または疾患が存在しない率もしくは全体生存率の改善をもたらす。好ましい
実施形態において、Ａ２ワクチンは、少なくとも１つのＴＡＡ（これからワクチ
ンエピトープが選択された）を発現するいずれかの癌（例えば、乳癌、結腸癌、
または肺癌）を有する、ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ａ２上位タイプ陽性個体に
投与される。ワクチンの代替の実施形態は、さらなるＨＬＡ対立遺伝子を保有す
る患者で指示されるか、またはＡ２に対してはまったく指示されない。それによ
り、Ａ２ワクチンは、乳癌、結腸癌または肺癌について処置されている患者の標
準的なケアを改善する。

【００２４】 本発明のペプチドエピトープおよび対応する核酸組成物は、ＣＴＬ応答または
ＨＴＬ応答の生成を刺激することによって、ＴＡＡに対する免疫応答を刺激する
ために有用である。これらのペプチドエピトープは、ネイティブＴＡＡタンパク
質アミノ酸配列に直接的または間接的に由来し、ＨＬＡ分子に結合し得そしてＴ
ＡＡに対する免疫応答を刺激し得る。分析されるべきＴＡＡタンパク質の完全配
列は、Ｇｅｎｂａｎｋより入手され得る。以下に提供する開示から明らかなよう
に、ペプチドエピトープおよびそのアナログはまた、配列情報から容易に決定さ
れ得、配列情報は、その後、以前に未知であったＴＡＡの改変体について発見さ
れるかもしれない。

【００２５】 本発明のペプチドエピトープは、以下で議論されるように、多くの方法で同定
された。特定のアミノ酸残基を改変して、変化した免疫原性を示すペプチドアナ
ログを作製することによって、アナログペプチドを誘導し、そしてＨＬＡ分子の
結合活性が調節されることもまた、より詳細に議論する。さらに、本発明は、種
々の対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ分子と相互作用し得るエピトープベ
ースワクチンに、先行技術のワクチンよりも広い集団適用範囲を提供させ得る、
組成物および組成物の組み合わせを提供する。

【００２６】 （ＩＶ．Ａ．定義） 本発明は、以下の定義を参照してより良好に理解され得る。

【００２７】 本開示全体を通して、「結合データ」の結果を、しばしば用語「ＩＣ_５０」で
表す。ＩＣ_５０は、結合アッセイにおいて、参照ペプチドの結合の５０％阻害が
観察される、ペプチドの濃度である。アッセイを行う条件（すなわち、律速のＨ
ＬＡタンパク質濃度および標識ペプチド濃度）を考慮すると、これらの値は、Ｋ _Ｄ 値と近似する。結合を測定するためのアッセイは、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９
４／２０１２７およびＷＯ９４／０３２０５、ならびに他の刊行物、例えば、Ｓ
ｉｄｎｅｙら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ １８．３．１（１９９８）；Ｓｉｄｎｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５
４：２４７（１９９５）；およびＳｅｔｔｅら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１
：８１３（１９９４）に、詳細に記載される。ＩＣ_５０値が、アッセイ条件が変
化する場合に、そして使用する特定の試薬（例えば、ＨＬＡ調製物など）に依存
して、（しばしば、劇的に）変化し得ることに留意するべきである。例えば、過
剰濃度のＨＬＡ分子は、所定のリガンドの見かけ上測定されるＩＣ_５０を増加さ
せる。あるいは、結合は、参照ペプチドと関連して表される。特定のアッセイが
、より高感度またはより低感度になるにつれて、試験するペプチドのＩＣ_５０は
、幾分変化し得るが、参照ペプチドに対する結合は、有意には変化しない。例え
ば、参照ペプチドのＩＣ_５０が１０倍増加するような条件下で行うアッセイにお
いて、試験ペプチドのＩＣ_５０値もまた、約１０倍シフトする。従って、あいま
い性を回避するために、ペプチドが良好な結合因子であるか、中程度の結合因子
であるか、弱い結合因子であるかまたはネガティブな結合因子であるかの評価は
、一般に、標準ペプチドのＩＣ_５０と相対的な、そのＩＣ_５０に基づく。結合は
また、以下を使用するアッセイ系を含む、他のアッセイ系を使用して測定され得
る：生細胞（例えば、Ｃｅｐｐｅｌｌｉｎｉら、Ｎａｔｕｒｅ ３３９：３９２
（１９８９）；Ｃｈｒｉｓｔｎｉｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６７（１９９
１）；Ｂｕｓｃｈら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：４４３（１９９０）；Ｈｉ
ｌｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１８９（１９９１）；ｄｅｌ Ｇｕｅｒ
ｃｉｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：６８５（１９９５））、界面活性剤溶
解物を使用する無細胞系（例えば、Ｃｅｒｕｎｄｏｌｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．２１：２０６９（１９９１））、固定した精製ＭＨＣ（例えば、Ｈｉｌｌら、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２８９０（１９９４）；Ｍａｒｓｈａｌｌら、Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：４９４６（１９９４））、ＥＬＩＳＡ系（例えば、
Ｒｅａｙら、ＥＭＢＯ Ｊ．１１：２８２９（１９９２））、表面プラズモン共
鳴（例えば、Ｋｈｉｌｋｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１５４２５（
１９９３））；高フラックス可溶相アッセイ（ｈｉｇｈ ｆｌｕｘ ｓｏｌｕｂ
ｌｅｐｈａｓｅ ａｓｓａｙ）（Ｈａｍｍｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０
：２３５３（１９９４））、およびクラスＩ ＭＨＣの安定化またはアセンブリ
の測定（例えば、Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３４６：４７６（１９
９０）；Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒら、Ｃｅｌｌ ６２：５６３（１９９０）；Ｔｏ
ｗｎｓｅｎｄら、Ｃｅｌｌ ６２：２８５（１９９０）；Ｐａｒｋｅｒら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９；１８９６（１９９２））。

【００２８】 「コンピューター」または「コンピューターシステム」は、一般に、以下を備
える：プロセッサーおよび関連プログラム；少なくとも１つの情報記憶／検索装
置（例えば、ハードドライブ、ディスクドライブまたはテープドライブなど）；
少なくとも１つの入力装置（例えば、キーボード、マウス、タッチスクリーン、
またはマイクロホンなど）；およびディスプレイ構造（例えば、スクリーンまた
はプリンター）。さらに、コンピューターは、ネットワークと連絡する通信チャ
ネルを備え得る。このようなコンピューターは、多かれ少なかれ、上記に列挙し
たものを備え得る。

【００２９】 「交差反応結合」とは、１より多いＨＬＡ分子がペプチドに結合することを示
し；同義語は、縮重（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ）結合である。

【００３０】 「潜在（ｃｒｉｐｔｉｃ）エピトープ」は、単離されたペプチドでの免疫によ
って応答を誘導するが、そのエピトープを含むインタクトなタンパク質全体が抗
原として使用される場合に、その応答は、インビトロで交差反応性でない。

【００３１】 用語「誘導する」は、エピトープについて論じるために使用される場合、「調
製される」と同義語である。導入されたエピトープは、天然の供給源から単離さ
れ得るか、または当該分野において標準的なプロトコルに従って合成され得る。
合成エピトープは、人工アミノ酸「アミノ酸模倣物」（例えば、天然に存在する
Ｌアミノ酸のＤ異性体）または非天然のアミノ酸（例えば、シクロヘキシルアミ
ン））を含み得る。誘導／調整されたエピトープは、ネイティブエピトープのア
ナログであり得る。

【００３２】 「ドミナント（ｄｏｍｉｎａｎｔ）エピトープ」は、ネイティブ抗原全体での
免疫に際して免疫応答を誘導するエピトープである（例えば、Ｓｅｒｃａｒｚら
、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７２９−７６６，１９９３を参照
のこと）。このような応答は、単離されたペプチドエピトープとは、インビトロ
で交差反応性である。

【００３３】 「エピトープ」は、免疫グロブリン、Ｔ細胞レセプターまたはＨＬＡ分子によ
って認識される部位を共に形成する、分子の集団的特徴（例えば、一次ペプチド
構造、二次ペプチド構造および三次ペプチド構造および電荷のような）である。
あるいは、エピトープは、特定の免疫グロブリンによるか、またはＴ細胞の状況
下での認識に関連する１セットのアミノ酸残基として規定され得、これらは、Ｔ
細胞レセプタータンパク質および／または主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）
レセプターによる認識に必要である。エピトープは、天然に存在し、そして単離
、精製され得、さもなくば、ヒトによって調製／導入され得る。例えば、エピト
ープは、天然の供給源からの単離によって調製され得るか、または当該分野にお
いて標準的なプロトコルに従って合成され得る。合成エピトープは、人工アミノ
酸「アミノ酸模倣物」（例えば、天然に存在するＬアミノ酸のＤ異性体または非
天然のアミノ酸（例えば、シクロヘキシルアミン）を含み得る。この開示を通し
て、用語エピトープおよびペプチドは、しばしば、交換可能に使用される。

【００３４】 本発明のエピトープおよびさらなるアミノ酸を含むタンパク質またはペプチド
分子がなお、本発明の範囲内にあることが理解されるべきである。特定の実施形
態において、さもなければ本明細書で規定されるような構築物ではないとする、
本発明のペプチドの長さに関する制限が存在する。長さが制限される実施形態は
、本発明のエピトープを含むタンパク質／ペプチドがネイティブ配列と１００％
同一性を有する領域（すなわち、一連の連続するアミノ酸）を含む場合に、生じ
る。例えば、天然分子全体に対する読み取り枠由来のエピトープの定義を回避す
るために、ネイティブペプチド配列との１００％同一性を有する任意の領域の長
さが制限される。従って、本発明のエピトープおよびネイティブペプチド配列と
の１００％同一性を有する領域を含む（そして、さもなければ構築物ではない）
ペプチドについて、ネイティブ配列に対する１００％同一性を有するその領域は
、一般に、６００アミノ酸以下、しばしば、５００アミノ酸以下、しばしば、４
００アミノ酸以下、しばしば、２５０アミノ酸以下、しばしば、１００アミノ酸
以下、しばしば、８５アミノ酸以下、しばしば、７５アミノ酸以下、しばしば、
６５アミノ酸以下、そしてしばしば、５０アミノ酸以下の長さを有する。特定の
実施形態において、本発明の「エピトープ」は、５アミノ酸までの任意の変化量
で、ネイティブペプチド配列に対して１００％同一性を有する５１アミノ酸未満
の領域を有するペプチドに含まれる。

【００３５】 従って、６００アミノ酸より長い特定のペプチドまたはタンパク質配列は、そ
れらが、ネイティブペプチド配列との１００％同一性を有する６００アミノ酸よ
りも大きい任意の連続配列を含まない限り、本発明の範囲内である。ネイティブ
配列に対応する５以下連続する残基を有する任意のペプチドについては、本発明
の範囲内にあるための、そのペプチドの最大長さに対する制限は存在しない。本
発明のＣＴＬエピトープは、６００未満の任意の変化分の残基長から８アミノ酸
残基であることが、現在では好ましい。

【００３６】 「ヒトリンパ球抗原」または「ＨＬＡ」は、ヒトクラスＩまたはクラスＩＩの
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質（例えば、Ｓｔｉｔｅｓら、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｌａｎｇｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｓ Ａ
ｌｔｏｓ，ＣＡ（１９９４）を参照のこと）である。

【００３７】 本明細書中で使用される場合、「ＨＬＡスーパータイプまたはファミリー」と
は、共有するペプチド結合特異性に基づいてグループ化したＨＬＡ分子のセット
を記載する。特定のアミノ酸モチーフを保有するペプチドに対して幾分類似した
結合親和性を共有するＨＬＡクラスＩ分子は、このようなＨＬＡスーパータイプ
にグループ化される。用語ＨＬＡスーパーファミリー、ＨＬＡスーパータイプフ
ァミリー、ＨＬＡファミリーおよびＨＬＡ ｘｘ様分子（ここで、ｘｘは、特定
のＨＬＡ型を示す）は、同義である。

【００３８】 本明細書中で使用される場合、ＨＬＡクラスＩ分子に関する「高親和性」とは
、５０ｎＭ以下のＩＣ_５０またはＫ_Ｄ値での結合として定義され；「中程度の親
和性」とは、約５０ｎＭと約５００ｎＭとの間のＩＣ_５０またはＫ_Ｄ値での結合
である。ＨＬＡクラスＩＩ分子への結合に関する「高親和性」とは、１００ｎＭ
以下のＩＣ_５０またはＫ_Ｄ値での結合として定義され；「中程度の親和性」とは
、約１００ｎＭと約１０００ｎＭとの間のＩＣ_５０またはＫ_Ｄ値での結合である
。

【００３９】 「ＩＣ_５０」は、参照ペプチドの結合の５０％の阻害が観察される結合アッセ
イにおけるペプチド濃度である。アッセイが実行される条件（すなわち、制限Ｈ
ＬＡタンパク質および標識ペプチド濃度）を考慮すると、これらの値は、Ｋ_Ｄ値
も近い。

【００４０】 ２以上のペプチド配列の状況下で、用語「同一」またはパーセント「同一性」
とは、配列比較アルゴリズムを使用してかまたは手動の整列化および目視検査に
よって測定されるように、比較ウインドウにわたる最大一致について比較および
整列化した場合に、同じであるかまたは特定のパーセンテージの同一アミノ酸残
基を有する、２以上の配列または部分配列をいう。

【００４１】 「免疫原性ペプチド」または「ペプチドエピトープ」とは、そのペプチドがＨ
ＬＡ分子を結合しそしてＣＴＬ応答および／またはＨＴＬ応答を誘導するような
、対立遺伝子特異的モチーフまたはスーパーモチーフを含むペプチドである。従
って、本発明の免疫原性ペプチドは、適切なＨＬＡ分子に結合し得、そしてその
後、そのペプチドに対する、細胞傷害性Ｔ細胞応答またはヘルパーＴリンパ球（
ＨＴＬ）応答を誘導し得る。

【００４２】 句「単離された」または「生物学的に純粋」とは、そのネイティブ状態におい
て見い出される場合に通常その物質に付随する成分を、実質的または本質的に含
まない物質をいう。従って、本発明に従う単離されたペプチドは、好ましくは、
そのインサイチュ環境下でそのペプチドに通常会合する物質を含まない。「単離
された」エピトープとは、エピトープが由来する抗原またはポリペプチドの全配
列を含まないエピトープをいう。典型的には、「単離された」エピトープは、そ
のエピトープにさらなるアミノ酸を付加（これは、ネイティブな配列に１００％
の同一性を有する配列を生じる）しなかった。ネイティブな配列は、エピトープ
が誘導される腫瘍関連抗原のような配列であり得る。

【００４３】 「主要組織適合遺伝子複合体」または「ＭＨＣ」は、生理的免疫応答を担う細
胞性相互作用の制御において役割を担う遺伝子のクラスターである。ヒトにおい
て、ＭＨＣ複合体はまた、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体として公知である。
ＭＨＣ複合体およびＨＬＡ複合体の詳細な説明については、Ｐａｕｌ、ＦＵＮＤ
ＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，第３版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３を参照のこと。

【００４４】 用語「モチーフ」は、規定された長さのアミノ酸における残基のパターンをい
う。一般に、クラスＩ ＨＬＡモチーフについて約８〜約１３アミノ酸およびク
ラスＩＩ ＨＬＡモチーフについて約６〜約２５アミノ酸のペプチドであり、こ
れは、特定のＨＬＡ分子によって認識される。ペプチドモチーフは、代表的には
、各々のヒトＨＬＡ対立遺伝子によってコードされる各々のＨＬＡタンパク質に
ついて異なる。これらのモチーフは、しばしば、一次アンカー残基および二次ア
ンカー残基のそれらのパターンにおいて異なる。

【００４５】 「ネイティブ」な配列とは、天然に見い出される配列をいう。

【００４６】 「陰性な（ｎｅｇａｔｉｖｅ）結合残基」または「有害な（ｄｅｔｅｒｉｏｕ
ｓ）残基」は、ペプチドエピトープにおける特定の位置（代表的には一次アンカ
ー位置ではない）に存在する場合に、ペプチドの対応するＨＬＡ分子に対するペ
プチドの結合親和性の減少を生じさせるアミノ酸である。

【００４７】 用語「ペプチド」は、本明細書中において「オリゴペプチド」と相互変換可能
に使用され、（代表的には、隣接するアミノ酸のα−アミノ基とカルボキシル基
との間のペプチド結合によって）互いに連結される一連の残基（代表的にはＬ−
アミノ酸）を示す。

【００４８】 「ＰａｎＤＲ結合エピトープ」または「ＰＡＤＲＥ^ＴＭ」分子（Ｅｐｉｍｍｕ
ｎｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）は、１より多いＨＬＡクラスＩＩ ＤＲ分子
を結合させる分子のファミリーのメンバーである。分子のＰＡＤＲＥ^ＴＭファミ
リーを規定するパターンは、ＨＬＡクラスＩＩ ＤＲスーパーモチーフといわれ
得る。ＰＡＤＲＥ分子は、ＨＬＡ−ＤＲ分子に結合し、そしてヒトヘルパーＴリ
ンパ球（ＨＴＬ）応答をインビトロおよびインビボで刺激する。ＰＡＤＲＥファ
ミリーのさらなる定義については、同時係属出願ＵＳＳＮ０９／３１０，４６２
（１９９９年５月１２日出願）；ＰＣＴ出願ＷＯ ９５／０７７０７、および米
国特許第５，７３６，１４２号（１９９８年４月７日公布）を参照のこと。

【００４９】 「薬学的に受容可能な」は、一般に、非毒性の、不活性な、および／または薬
理学的に適合性の組成物をいう。

【００５０】 「薬学的賦形剤」は、アジュバント、キャリア、ｐＨ調整剤、および緩衝剤の
ような物質、張度調整剤、湿潤剤、防腐剤などを含む。

【００５１】 「一次アンカー残基」は、免疫原性ペプチドとＨＬＡ分子との間の接触点を提
供することが理解されるペプチド配列に沿った特定位置におけるアミノ酸である
。規定された長さのペプチド内の１、２または３個の一次アンカー残基は、一般
に、免疫原性ペプチドについての「モチーフ」を規定する。これらの残基は、結
合溝（ｇｒｏｏｖｅ）自身の特定のポケットにおいて埋没するこれらの側鎖を有
する、ＨＬＡ分子のペプチド結合溝（ｇｒｏｏｖｅ）と密接に接触して適合する
ことが理解される。ＨＬＡクラスＩモチーフの１つの実施形態において、例えば
、一次アンカー残基は、本発明に従ってペプチドエピトープの位置２（アミノ末
端位から）およびカルボキシル末端位に配置される。ＨＬＡクラスＩおよびＨＬ
ＡクラスＩＩの各々のモチーフおよびスーパーモチーフについての一次アンカー
位置は、表２、表３および表４に示される。例えば、アナログペプチドは、これ
らのアンカー位置における特定の残基の存在または非存在を変更することによっ
て作製され得る。このようなアナログを使用して、特定のモチーフまたはスーパ
ーモチーフを含むペプチドの結合親和性を調節する。

【００５２】 ＴＣＲによる「乱雑な認識」は、種々のＨＬＡ分子の状況下において、種々の
ペプチドが同一のＴ細胞クローンによって認識されることである。ＨＬＡ分子に
よる乱雑な結合は、交差反応性結合と同義である。

【００５３】 「防御免疫応答」または「治療的免疫応答」は、病原体抗原（例えば、感染性
因子または腫瘍抗原由来の抗原）に対するＣＴＬ応答および／またはＨＴＬ応答
をいい、これは、疾患の症状、副作用または進行を何とかして予防するかまたは
少なくとも部分的に抑制する。免疫応答はまた、ヘルパーＴ細胞の刺激によって
促進された抗体応答を含み得る。

【００５４】 用語「残基」は、アミド結合またはアミド結合模倣物によってペプチドまたは
タンパク質に組み込まれるアミノ酸またはアミノ酸模倣物をいう。

【００５５】 「二次アンカー残基」は、ペプチドにおける一次アンカー位置以外の位置での
、ペプチド結合に影響し得るアミノ酸である。二次アンカー残基は、ＨＬＡ結合
ペプチドの間で、所定の位置でのアミノ酸の無秩序な分布によって期待されるよ
り有意に高い頻度で生じる。二次アンカー残基は、高い親和性もしくは中程度の
親和性で結合するペプチドの中でより高頻度で存在する残基、またはさもなくば
高い親和性もしくは中程度の親和性の結合と関連する残基として同定され得る。
二次アンカー残基は、「二次アンカー位置」で生じるといわれる。例えば、アナ
ログペプチドは、これらの二次アンカー位置における特定の残基の存在または非
存在を変更することによって作製され得る。このようなアナログを使用して、特
定のモチーフまたはスーパーモチーフを含むペプチドの結合親和性を良好に調節
する。用語法「固定されたペプチド」は、時々、アナログペプチドをいうために
使用される。

【００５６】 「サブドミナント（ｓｕｂｄｏｍｉｎａｎｔ）エピトープ」は、エピトープを
含む抗原全体での免疫に際して応答をほとんど引き起こさないかまたは全く引き
起こさないが、それに対して単離されたペプチドでの免疫によって応答が得られ
得るエピトープであり、そして（潜在エピトープの場合とは異なり）この応答は
、タンパク質全体を使用してインビトロまたはインビボでの応答をリコール（ｒ
ｅｃａｌｌ）する場合に、検出される。

【００５７】 「スーパーモチーフ」は、２つ以上のＨＬＡ対立遺伝子によってコードされる
ＨＬＡ分子によって共有されるペプチド結合特異性である。好ましくは、スーパ
ーモチーフ保有ペプチドは、２つ以上のＨＬＡ抗原によって高い親和性または中
程度の親和性（本明細書中に規定される）で認識される。

【００５８】 「合成ペプチド」は、天然に存在しないが、化学合成または組換えＤＮＡ技術
のような方法を使用してヒトが作製したペプチドをいう。

【００５９】 本明細書中で使用される場合、「ワクチン」は、本発明の１つ以上のペプチド
を含む組成物である（例えば、表６、表９および表１０を参照）。本発明に従う
ワクチンの実施形態（例えば、１つ以上のペプチド；ポリエピトープ性のペプチ
ドによって含まれる本発明の１以上のペプチド；または、このようなペプチドも
しくはポリペプチドをコードする核酸（例えば、ポリエピトープ性のペプチドを
コードするミニジーン（ｍｉｎｉｇｅｎｅ））のカクテルによって）が数多く存
在する。「１つ以上のペプチド」は、１〜１５０の単位整数全体のいずれか（例
えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、
２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、
３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、
９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３
５、１４０、１４５もしくは１５０またはそれより多く）の本発明のペプチドを
含み得る。これらのペプチドまたはポリペプチドは、必要ならば、例えば、脂質
化、標的化配列もしくは他の配列の付加によって改変され得る。本発明のＨＬＡ
クラスＩ結合ペプチドは、細胞傷害性Ｔリンパ球およびヘルパーＴリンパ球の両
方の活性化を促進するために、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドと混合され得るか
または連結され得る。ワクチンはまた、ペプチドでパルス（ｐｕｌｓｅ）された
抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）を含み得る。

【００６０】 ペプチドタンパク質化合物を記載するために使用される命名法は、慣用的な実
際に従い、ここで、アミノ基は各々のアミノ酸残基の左（Ｎ末端）そしてカルボ
キシル基は右（Ｃ末端）に示される。アミノ酸残基位置がペプチドエピトープに
おいて言及される場合、これらは、エピトープ、または一部分であり得るペプチ
ドもしくはタンパク質のアミノ末端に近接する位置である位置により、アミノか
らカルボキシルの方向において番号付けられる。本発明の選択された特定の実施
形態を示す形式において、特には示されないが、アミノ末端基およびカルボキシ
ル末端基は、他に特定されない場合、生理学的ｐＨ値でとる形態である。アミノ
酸構造の形式において、各残基は、一般に、標準的な３文字表記または１文字表
記によって示される。Ｌ−型のアミノ酸残基は、大文字の１文字または３文字記
号の最初の文字の大文字によって示され、そしてＤ−型を有するこれらのアミノ
酸についてのＤ−型は、小文字の１文字または小文字の３文字記号によって示さ
れる。しかし、３文字記号またはフルネームが、大文字なしで使用される場合、
それらは、Ｌアミノ酸を示し得る。グリシンは、非対称の炭素原子を有さず、そ
して単に「Ｇｌｙ」またはＧとしていわれる。本明細書中で示されるペプチドの
アミノ酸配列は、一般的に、標準的な１文字記号を使用して示される（Ａ，アラ
ニン；Ｃ，システイン；Ｄ，アスパラギン酸；Ｅ，グルタミン酸；Ｆ，フェニル
アラニン；Ｇ，グリシン；Ｈ，ヒスチジン；Ｉ，イソロイシン；Ｋ，リジン；Ｌ
，ロイシン；Ｍ，メチオニン；Ｎ，アスパラギン；Ｐ，プロリン；Ｑ，グルタミ
ン；Ｒ，アルギニン；Ｓ，セリン；Ｔ，トレオニン；Ｖ，バリン；Ｗ，トリプト
ファン；およびＹ，チロシン）。これらの記号に加えて、本明細書中で使用され
る１文字略語「Ｂ」は、α−アミノ酪酸を示す。

【００６１】

【表１】 （ＩＶ．Ｂ．ＣＴＬ応答およびＨＴＬ応答の刺激） Ｔ細胞が抗原を認識するメカニズムは、過去１０年間に記述されている。免疫
系についての理解に基づいて、本発明者等は、種々の人工に承認される形式で投
与される場合、広範な集団におけるＴＡＡに対する治療的または予防的な免疫応
答を誘発し得る有効なペプチドエピトープ組成物を本発明者等は開発してきた。
これらのペプチドはまた、診断的に（例えば、抗原に対する免疫応答を評価する
ために）使用され得る。さらに、スーパーモチーフ保有ペプチドの使用によって
、または、本明細書中で開示される原則に従うペプチドの組合せによって、応答
は、有意なパーセントの非遺伝的に偏った（ｎｏｎ−ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ
ｂｉａｓｅｄ）世界的な集団において達成され得る。特許得請求された組成物の
価値および有効性の理解のために、免疫学関連テクノロジーの簡単な概説が提供
される。

【００６２】 ＨＬＡ分子とペプチド抗原との複合体は、ＨＬＡ拘束Ｔ細胞により認識される
リガンドとして作用する（Ｂｕｕｓ，Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ ４７：１０７１，１９
８６；Ｂａｂｂｉｔｔ，Ｂ．Ｐ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３１７：３５９，１９８５
；Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ａ．ａｎｄ Ｂｏｄｍｅｒ，Ｈ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．７：６０１，１９８９；Ｇｅｒｍａｉｎ，Ｒ．Ｎ．，Ａｎｎｕ．
Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：４０３，１９９３）。単一アミノ酸置換抗原ア
ナログの研究、ならびに内因的結合した天然でプロセシングされたペプチドの配
列決定により、ＨＬＡ抗原分子に特異的に結合するために必要とされるモチーフ
に対応する重要な残基が同定されており、本明細書中に記載され、表２、表３お
よび表４に示されている。本出願の特定の目的は、Ａ２スーパーモチーフおよび
対立遺伝子特異的Ａ２．１モチーフである、これはそれらが提供する実質的な集
団に起因する。

【００６３】 さらにＨＬＡペプチド複合体のＸ線結晶解析は、ペプチドリガンドにより運ば
れたされる残基をしばしば対立遺伝子特異的様式で収容するＨＬＡ分子のペプチ
ド結合裂溝（ｃｌｅｆｔ）内のポケットを明示した。これらの残基は次に、それ
らが存在するペプチドのＨＬＡ結合能力を決定する（例えば、Ｍａｄｄｅｎ，Ｄ
．Ｒ．、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：５８７（１９９５）；Ｓｍ
ｉｔｈら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４：２０３，１９９６；Ｆｒｅｍｏｎｔら、Ｉｍ
ｍｕｎｉｔｙ ８：３０５（１９９８）；Ｓｔｅｒｎら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
２：２４５（１９９４）；Ｊｏｎｅｓ，Ｅ．Ｙ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．９：７５（１９９７）；Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３
６４：３３（１９９３）；Ｇｕｏ，Ｈ．Ｃ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：８０５３（１９９３）；Ｇｕｏ，Ｈ．Ｃ．ら、Ｎａｔ
ｕｒｅ ３６０：３６４（１９９２）；Ｓｉｌｖｅｒ，Ｍ．Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒ
ｅ ３６０：３６７（１９９２）；Ｍａｔｓｕｍｕｒａ，Ｍ．ら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２５７：９２７（１９９２）；Ｍａｄｄｅｎら、Ｃｅｌｌ ７０：１０３５
（１９９２）；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｄ．Ｈ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９１９
（１９９２）；Ｓａｐｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ｂｊｏｒｋｍａｎ，Ｐ．Ｊ．およびＷｉ
ｌｅｙ，Ｄ．Ｃ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：２７７（１９９１）を参照
のこと）。

【００６４】 したがって、クラスＩ対立遺伝子特異的ＨＬＡ結合モチーフおよびクラスＩＩ
対立遺伝子特異的ＨＬＡ結合モチーフの規定、あるいはクラスＩスーパーモチー
フまたはクラスＩＩスーパーモチーフの規定は、特定のＨＬＡ分子を結合する予
期される能力を有するタンパク質内の領域の同定を可能にする。

【００６５】 さらに、本明細書中に開示される結合親和性と免疫原性との相関は、候補ペプ
チドを評価する場合に考えられるべき重要な因子であるということを本発明者等
は見出した。したがって、抗原配列のモチーフ検索との組合せにより、およびＨ
ＬＡ−ペプチド結合アッセイにより、エピトープベースのワクチンのための候補
物が同定された。当業者に理解されるように、それらの結合親和性を決定後、さ
らなる確認作業が実施され得、これらのワクチン候補物の中で、例えば、しばし
ば集団適用範囲、抗原性および免疫原性などに関して好ましい特徴を有するエピ
トープを選択され得る。

【００６６】 免疫原性を評価するために種々の戦略が利用され得る。それらの例を以下に挙
げる： １）正常個体由来の初代Ｔ細胞培養物の評価（例えば、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈ，
Ｐ．Ａ．ら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６０３（１９９５）；Ｃｅｌｉｓ
，Ｅ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１０５（
１９９４）；Ｔｓａｉ，Ｖ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１７９６（１９
９７）；Ｋａｗａｓｈｉｍａ，Ｉ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５９：１
（１９９８）を参照のこと）。これらの手順は、数週間の期間にわたるインビト
ロでの抗原提示細胞の存在下での、正常被験者由来の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）
の試験ペプチドによる刺激を包含する。このペプチドに特異的なＴ細胞は、この
時間中に活性化され、例えばペプチド感作標的細胞および／または抗原を内因的
に産生する標的細胞を含む^５１Ｃｒ放出アッセイを用いて検出される。

【００６７】 ２）ＨＬＡトランスジェニックマウスの免疫（例えば、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈ，
Ｐ．Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：９７（１９９６）；Ｗｅｎｔｗｏｒｔ
ｈ，Ｐ．Ａ．ら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６５１（１９９６）；Ａｌｅｘ
ａｎｄｅｒ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：４７５３（１９９７）を参
照のこと）。この方法では、不完全フロイントアジュバント中のペプチドが、Ｈ
ＬＡトランスジェニックマウスに皮下投与される。免疫後数週間目に、脾臓細胞
が取り出され、試験ペプチドの存在下で約１週間、インビトロで培養される。例
えばペプチド感作標的細胞と内因的に生成された抗原を発現する標的細胞とを含
む、^５１Ｃｒ放出アッセイを用いて、ペプチド特異的Ｔ細胞が検出される。

【００６８】 ３）疾患に暴露された個体（例えば、効果的に処置され、そして疾患から回復
した免疫個体）および／または活発に病気の患者由来のリコール（ｒｅｃａｌｌ
）Ｔ細胞応答の立証（例えば、Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ，Ｂ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１８１：１０４７（１９９５）；Ｄｏｏｌａｎ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｉｍｍｕｎｉ
ｔｙ ７：９７（１９９７）；Ｂｅｒｔｏｎｉ，Ｒ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．１００：５０３（１９９７）；Ｔｈｒｅｌｋｅｌｄ，Ｓ．Ｃ．ら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：１６４８（１９９７）；Ｄｉｅｐｏｌｄｅｒ，Ｈ．Ｍ
．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：６０１１（１９９７）；Ｔｓａｎｇら、Ｊ．Ｎａ
ｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８７：９８２−９９０（１９９５）；Ｄｉｓｉ
ｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：３１５１−３１５８（１９９６）を参照の
こと）。この戦略の適用に際しては、リコール応答は、被験者由来のＰＢＬを、
試験ペプチドおよび抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で１〜２週間インビトロで
培養されて、「ナイーブ」Ｔ細胞と比較した場合、「記憶」Ｔ細胞の活性化を可
能にすることにより検出される。培養期間終了時に、ペプチド感作標的、Ｔ細胞
増殖またはリンホカイン放出を包含する^５１Ｃｒ放出を含めたＴ細胞活性に関す
るアッセイを用いて、Ｔ細胞活性が検出される。

【００６９】 本発明のペプチドエピトープおよび対応する核酸を以下でより詳細に説明する
。

【００７０】 （ＩＶ．Ｃ．ＨＬＡ分子に関するペプチドエピトープの結合親和性） 本明細書中で示されているように、ＨＬＡ多型の大きな程度は、ワクチン開発
に対するエピトープベースのアプローチに関して考慮されるべき重要な因子であ
る。この因子に対処するために、複数のＨＬＡ分子に高親和性または中親和性で
結合し得るペプチドの同定を包含するエピトープ選択が好ましくは利用され、最
も好ましくはこれらのエピトープは、高親和性または中親和性で２つ以上の対立
遺伝子特異的ＨＬＡ分子に結合する。

【００７１】 ワクチン組成物のための目的のＣＴＬ誘導性ペプチドとしては、クラスＩ Ｈ
ＬＡ分子についてのＩＣ_５０または結合親和性値、好ましくは５００ｎＭまたは
それより優れた値（すなわち、その値は５００ｎＭ以下である）を有するものが
挙げられる。ＨＴＬ誘導性ペプチドとしては、クラスＩＩ ＨＬＡ分子について
のＩＣ_５０または結合親和性、、好ましくは１０００ｎＭまたはそれより優れた
値（すなわち、その値は１０００ｎＭ以下である）を有するものが挙げられる。
例えばペプチド結合は、インビトロで精製ＨＬＡ分子に結合する候補ペプチドの
能力を試験することにより評価される。次に、高親和性または中親和性を示すペ
プチドが、さらなる分析のために考慮される。選択されたペプチドは、スーパー
タイプファミリーの他のメンバーに対して試験される。好ましい実施形態では、
交差反応結合を示すペプチドは次に、細胞スクリーニング分析またはワクチンに
て用いられる。

【００７２】 ＨＬＡクラスＩ分子に対する結合親和性と結合した抗原上の別々のペプチドエ
ピトープの免疫原性との関係は、本発明人等により当該分野で初めて決定された
。本明細書中でより詳細に開示されるように、より高度なＨＬＡ結合親和性は、
より大きな免疫原性と関わる。

【００７３】 より大きな免疫原性は、いくつかの異なる形態で操作され得る。免疫原性は、
免疫応答が少しでも惹起されるか否かに対応し、そして任意の特定の応答の有効
性および応答が惹起される集団の範囲に対応する。例えば、ペプチドは、その集
団の逆方向アレイにおいて免疫応答を惹起し得るが、激しい応答を引き起こす場
合はない。これらの原理に従って、９０％に近い高結合ペプチドは、応答を惹起
し、従って、中程度の親和性で結合するペプチドの約５０％と対比する場合、「
免疫原性」であることが見い出された。（例えば、Ｓｃｈａｅｆｆｅｒら、ＰＮ
ＡＳ（１９８８））さらに、より高い結合親和性を有するペプチドが免疫応答を
引き起こす可能性を増強するのみでなく、引き起こされた応答は、より弱い結合
ペプチドで観察される応答より激しい傾向がある。結果として、より少ないペプ
チドは、高親和性結合ペプチドがより低い親和性結合ペプチドより使用される場
合、類似の生物学的効果を引き起こすために必要とされる。従って、本発明の好
ましい実施形態において、高親和性結合エピトープが使用される。

【００７４】 結合親和性と免疫原性との相関は、本発明人等により、２つの異なる実験アプ
ローチで分析された（例えば、Ｓｅｔｔｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：５
５８６−５５９２，１９９４を参照のこと）。最初のアプローチでは、ＨＬＡ結
合親和性における１０，０００倍の範囲を超える潜在エピトープの免疫原性が、
ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１トランスジェニックマウスで分析された。第二のアプロー
チでは、全てＡ^＊０２０１結合モチーフを保有している約１００個の異なるＢ型
肝炎ウイルス（ＨＢＶ）由来潜在エピトープの抗原性が、急性肝炎患者由来のＰ
ＢＬを用いて評価された。これらのアプローチにしたがって、親和性閾値約５０
０ｎＭ（好ましくは５０ｎＭ以下）がＣＴＬ応答を惹起するペプチドエピトープ
の能力を決定するということを決定した。これらのデータはまた、天然でプロセ
シングされたペプチドについてのクラスＩ結合親和性測定値、ならびに合成Ｔ細
胞エピトープについてのクラスＩ結合親和性測定値に関しては、正しい。これら
のデータは、Ｔ細胞応答の形成の際の決定基選択の重要な役割も示す（例えば、
Ｓｃｈａｅｆｆｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６
：４６４９−４６５３（１９８９）を参照のこと）。

【００７５】 ＨＬＡクラスＩＩ（すなわち、ＨＬＡ ＤＲ分子）の状況での免疫原性に関連
した親和性閾値も記述されている（例えば、Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄら、Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ １６０：３３６３−３３７３（１９９８）および同時係属中の
米国特許出願第０９／００９，９５３号（１９９８年１月２１日出願）を参照の
こと）。ＨＬＡクラスＩＩ結合親和性の生物学的に有意の閾値を規定するために
、それらの拘束エレメント（すなわちモチーフを結合するＨＬＡ分子）に対する
３２ＤＲ拘束エピトープの結合親和性のデータベースが編集された。約半数の例
（３２個のうちの１５個のエピトープ）において、ＤＲ拘束は高結合親和性（す
なわち、１００ｎＭ以下の結合親和性値）に関連した。他の半数の例（３２個の
うち１６個）では、ＤＲ拘束は中親和性（１００〜１０００ｎＭ範囲の結合親和
性値）に関連した。３２例のうちの１例のみにおいて、ＤＲ拘束は１０００ｎＭ
以上のＩＣ_５０に関連した。したがって１０００ｎＭは、ＤＲ分子の状況での免
疫原性に関連した親和性閾値と規定され得る。

【００７６】 ＨＬＡ分子に対するペプチドの結合親和性は、以下の実施例３に記載されてい
るように決定され得る。

【００７７】 （ＩＶ．Ｄ．ペプチドエピトープ結合モチーフおよびスーパーモチーフ） 単一アミノ酸置換抗原アナログの研究、ならびに内因的に結合された天然でプ
ロセシングされたペプチドの配列決定により、ＨＬＡ分子との対立遺伝子特異的
結合に必要とされる重要残基が同定されている。ペプチド内のこれらの残基の存
在は、ＨＬＡ分子に対する結合の可能性と結合親和性ととの両方に相関する。

【００７８】 高親和性結合および中親和性結合と相関するモチーフおよび／またはスーパー
モチーフの同定は、ワクチン中の含入物のための免疫原性ペプチドエピトープの
同定する場合、重要である。Ｋａｓｔ等（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：３９０
４−３９１２（１９９４））は、モチーフ保有ペプチドが対立遺伝子特異的ＨＬ
ＡクラスＩ分子に結合するエピトープの９０％を占めることを示した。Ｋａｓｔ
の研究では、ヒトパピローマウイルス１６型のＥ６タンパク質およびＥ７タンパ
ク質の全体配列を網羅する、９アミノ酸長の、かつ、８個のアミノ酸を重複する
考え得る全てのペプチドが生成され、これは、２４０ペプチドを産生した。２４
０ペプチド全てが、異なる民族群間で高頻度で発現される５つの対立遺伝子特異
的ＨＬＡ分子との結合に関して評価された。このペプチドの偏りのない組が、Ｈ
ＬＡクラスＩモチーフの予測値の評価を可能にした。２４０ペプチドの組から、
２２ペプチドが、高親和性または中親和性で対立遺伝子特異的ＨＬＡ分子に結合
すると同定された。これら２２ペプチドのうち、２０ペプチド（すなわち９１％
）がモチーフ保有性であった。したがって、この研究は、ワクチン中に含めるた
めのペプチドエピトープの同定に関するモチーフの値を立証した。

【００７９】 従って、モチーフベースの同定技術の使用は、標的タンパク質配列における全
ての可能性のあるエピトープの約９０％を同定する。開示されたモチーフ分析な
しでは、診断または治療における使用について免疫原性ペプチドを実際に同定す
る能力は、大きく損なわれる。

【００８０】 本発明のワクチンはまた、ＭＨＣクラスＩＩＤＲ分子に結合するエピトープと
含み得る。モチーフのサイズと結合フレーム位置の両方のより大きな程度の異質
性は、ペプチドのＮおよびＣ末端に関連して、クラスＩＩペプチドリガンドをの
ために存在する。ＨＬＡクラスＩＩペプチドリガンドのこの増加した異質性は、
ＨＬＡクラスＩＩ分子（これは、そのクラスＩの対と異なって、両方の末端であ
まり物理的に押さえつけられない）の結合の溝（ｇｒｏｏｖｅ）の構造に起因す
る。主要な結合エネルギーに関連する残基を同定するためのＨＬＡクラスＩＩＤ
ＲＢ^＊０１０１エピトープ複合体の結晶学的分析は、ＤＲＢ^＊０１０１分子上で
相補的なポケットと複合化した残基を同定した。重要なアンカー残基は、最も深
い疎水性ポケットに係合し（例えば、Ｍａｄｄｅｎ，Ｄ．Ｒ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：５８７（１９９５））、そして位置１（Ｐ１）といわれ
る。Ｐ１は、クラスＩＩ結合ペプチドエピトープのＮ末端残基を示し得るが、よ
り典型的には、１以上の残基によってＮ末端側に隣接する。他の研究はまた、種
々のＤＲ分子への結合のために、Ｐ１と比較して、Ｃ末端側の６番目の位置での
ペプチド残基についての重要な役割を指摘した。例えば、米国特許第５，７３６
，１４２号、および同時係属出願（「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｎ ＤＲ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｅｐ
ｔｉｄｅｓ」と表題される）Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０９／３１０，４６２（１９９９
年５月１２日出願）を参照のこと。

【００８１】 従って、多くのＨＬＡクラスＩ分子およびＨＬＡクラスＩＩ分子が、比較的少
数のスーパータイプに分類され得、各々のスーパータイプは、ほぼ重複するペプ
チド結合レパートリーならびに主ペプチド結合ポケットのコンセンサス構造によ
り特徴づけされる。したがって本発明のペプチドは、好ましくは、いくつかのＨ
ＬＡ特異的アミノ酸モチーフ（例えば表２〜４を参照のこと）のいずれか１つに
よってか、またはそのモチーフの存在がいくつかの対立遺伝子特異的ＨＬＡ分子
を結合する能力に対応する場合には、スーパーモチーフ（再び、例えば表２〜４
を参照のこと）により、同定される。

【００８２】 ＨＬＡクラスＩペプチドエピトープスーパーモチーフおよびＨＬＡクラスＩペ
プチドエピトープモチーフの一次アンカー残基は、表２に概説されている。表２
（ａ）に記述されたＨＬＡクラスＩモチーフは、本明細書中で特許請求される本
発明に最も特に関連があるものである。ＨＬＡクラスＩについての一次アンカー
位置および二次アンカー位置は、表３に概説されている。種々のＨＬＡクラスＩ
スーパータイプを含む対立遺伝子特異的ＨＬＡ分子は、表５に列挙されている。
いくつかの場合、アミノ酸残基のパターンは、モチーフとスーパーモチーフの両
方に存在する。特定のモチーフおよび任意の関連スーパーモチーフの関係は、個
々のモチーフの説明中に示されている。

【００８３】 従って、ペプチドモチーフおよびスーパーモチーフは、以下に記載され、そし
て表２〜４に要約され、本発明に従うペプチドエピトープの同定および使用のた
めのガイドを提供する。

【００８４】 （ＩＶ．Ｄ．１．ＨＬＡ−Ａ２スーパーモチーフ） 対立遺伝子特異的ＨＬＡ−Ａ２．１分子に対する一次アンカー特異性（例えば
、Ｆａｌｋら，Ｎａｔｕｒｅ ３５１：２９０−２９６（１９９１）；Ｈｕｎｔ
ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：１２６１−１２６３（１９９２）；Ｐａｒｋｅｒ
ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３５８０−３５８７（１９９２）；Ｒｕｐｐ
ｅｒｔら，Ｃｅｌｌ ７４：９２９−９３７（１９９３）参照）、ならびにＨＬ
Ａ−Ａ２およびＨＬＡ−Ａ２８分子間の交差反応結合は、記載されている（関連
データの総説については、例えば、Ｆｒｕｃｉら，Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ
．３８：１８７−１９２（１９９３）；Ｔａｎｉｇａｋｉら，Ｈｕｍａｎ Ｉｍ
ｍｎｏｌ．３９：１５５−１６２（１９９４）；ｄｅｌ Ｇｕｅｒｃｉｏら，Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：６８５−６９３（１９９５）；Ｋａｓｔら，Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１５２：３９０４−３９１２（１９９４）を参照のこと）。これ
らの一次アンカー残基は、ＨＬＡ−Ａ２スーパーモチーフを規定し；ペプチドリ
ガンド中に存在する場合、いくつかの異なるＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ａ２８
分子を結合する能力に対応する。このＨＬＡ−Ａ２スーパーモチーフは、このエ
ピトープの第２位の一次アンカー残基としてＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＴまたはＱお
よびこのエピトープのＣ末端位置の一次アンカー残基としてＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ
またはＴを有する、ペプチドリガンドを含む。

【００８５】 ＨＬＡ分子のこの対応するファミリー（すなわち、これらのペプチドを結合す
るＨＬＡ−Ａ２スーパータイプ）は、少なくとも：Ａ^＊０２０１、Ａ^＊０２０２
、Ａ^＊０２０３、Ａ^＊０２０４、Ａ^＊０２０５、Ａ^＊０２０６、Ａ^＊０２０７、
Ａ^＊０２０９、Ａ^＊０２１４、Ａ^＊６８０２およびＡ^＊６９０１からなる。この
Ａ２スーパーファミリーのメンバーであると予測される他の対立遺伝子特異的Ｈ
ＬＡ分子を、表５に示す。以下で詳細に説明するように、これらの個々の対立遺
伝子特異的ＨＬＡ分子の各々への結合は、一次アンカー位置および／または二次
アンカー位置での置換（好ましくは、このスーパーモチーフに特定化された各々
の残基を選択して）によって調節され得る。

【００８６】 （ＩＶ．Ｄ．２．ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１モチーフ） ＨＬＡ−Ａ２^＊０２０１モチーフは、９残基ペプチドの第２位での一次アンカ
ー残基としてのＬまたはＭおよび９残基ペプチドのＣ末端位置での一次アンカー
残基としてのＬまたはＶの、ペプチドリガンド中の存在によって特徴付けられる
ことが決定され（例えば、Ｆａｌｋら，Ｎａｔｕｒｅ ３５１：２９０−２９６
（１９９１）を参照のこと）、そしてさらに、９アミノ酸ペプチドの第２位でＩ
およびＣ末端位置でＩまたはＡを含むことが見出された（例えば、Ｈｕｎｔら，
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：１２６１−１２６３，Ｍａｒｃｈ ６（１９９２）；
Ｐａｒｋｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３５８０−３５８７（１９９２
）を参照のこと）。このＡ^＊０２０１対立遺伝子特異的モチーフはまた、このエ
ピトープの第２位に一次アンカー残基としてＶ、Ａ、ＴまたはＱおよびこのエピ
トープのＣ末端位置に一次アンカー残基としてＭまたはＴをさらに含むことが、
本発明者らによって規定された（例えば、Ｋａｓｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
５２：３９０４−３９１２，１９９４を参照のこと）。

【００８７】 従って、ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１モチーフは、このエピトープの第２位に一次ア
ンカー残基としてＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ａ、ＴまたはＱおよびこのエピトープのＣ末
端位置に一次アンカー残基としてＬ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、ＡまたはＴを有する、ペプチ
ドリガンドを含む。このスーパーモチーフ関係について、このＨＬＡ−Ａ^＊０２
０１モチーフの一次アンカー位置を特徴付ける、好ましい残基とあまり好ましな
い／許容されない残基は、Ａ２スーパーモチーフを説明する残基と同一である（
関連データの総説については、例えば、ｄｅｌ Ｇｕｅｒｃｉｏら，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１５４：６８５−６９３，１９９５；Ｒｕｐｐｅｒｔら，Ｃｅｌｌ
７４：９２９−９３７，１９９３；Ｓｉｄｎｅｙら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａ
ｙ １７：２６１−２６６，１９９６；ＳｅｔｔｅおよびＳｉｄｎｅｙ，Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：４７８−４８２，１９９８を参照
のこと）。このＡ^＊０２０１モチーフを特徴付ける二次アンカー残基が、さらに
規定されている（例えば、Ｒｕｐｐｅｒｔら，Ｃｅｌｌ ７４：９２９−９３７
，１９９３を参照のこと）。この二次アンカーは、表３に示されている。ＨＬＡ
−Ａ^＊０２０１分子に結合するペプチドは、一次および／または二次アンカー位
置での置換（好ましくは、このモチーフに特定化された各々の残基を選択して）
によって調節され得る。

【００８８】 （ＩＶ．Ｄ．３．ペプチドエピトープを含むクラスＩＩ ＨＴＬを示すモチー
フ） ＨＬＡクラスＩＩペプチドエピトープスーパーモチーフの一次残基ならびに二
次残基およびモチーフを表４に概説する。また、米国特許第５，７３６，１４２
号および同時係属出願（「Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓ
ｐｏｎｓｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｎ ＤＲ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ
」と表題される）Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０９／３１０，４６２（１９９９年５月１２
日出願）を参照のこと。

【００８９】 （ＩＶ．Ｅ．ワクチンの増強する集団範囲） 表２〜４に示されるように、現在、本出願の焦点であるＡ２スーパーモチーフ
およびＡ２．１対立遺伝子特異的モチーフに加えて、多くのさらなるスーパーモ
チーフおよびモチーフが存在する。他のモチーフまたはスーパーモチーフ由来の
１以上のエピトープの包含によって、主要な世界的民族性についての増強された
集団範囲（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｖｅｒａｇｅ）が得
られ得る。

【００９０】 （ＩＶ．Ｆ．免疫応答刺激ペプチドアナログ） 概して、ＣＴＬおよびＨＴＬ応答は、全ての考え得るエピトープに対して向け
られるというわけではない。むしろそれらは２〜３の「腫瘍抗原」決定基（ｉｍ
ｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）に拘束される（Ｚｉｎｋ
ｅｒｎａｇｅｌ，ら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５１５９，１９７９；Ｂ
ｅｎｎｉｋ，ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８：１９３５１９３９，１９８８；
Ｒａｗｌｅ，ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：３９７７−３９８４，１９９１
）。イムノドミナンス（ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｃｅ）（Ｂｅｎａｃｅｒｒ
ａｆ，ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １７５：２７３−２７９，１９７２）は、特定のＨ
ＬＡタンパク質を選択的に結合する（決定因子選択理論）（Ｖｉｔｉｅｌｌｏ，
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：１６３５，１９８３；Ｒｏｓｅｎｔｈａｌら
、Ｎａｔｕｒｅ ２６７：１５６〜１５８，１９９７）または既存のＴＣＲ（Ｔ
細胞受容体）特異性により選択的に認識される（レパートリー理論）（Ｋｌｅｉ
ｎ，Ｊ．，ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＯＦ ＳＥＬＦＮ
ＯＮＳＥＬＦ ＤＩＳＣＲＩＭＩＮＡＴＩＯＮ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓ
ｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２７０頁−３１０頁，１９８２）所定のエピトープ
の能力のいずれかにより説明され得ることが認識された。主としてプロセシング
事象に結び付けられる付加的因子も、厳密な免疫原性を越えて、多数の考え得る
決定因子のどれが主要抗原決定基として存在するかを指令する場合に重要な役割
を演じ得る、ということが立証されている（Ｓｅｒｃａｒｚ，ら、Ａｎｎｕ．Ｒ
ｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７２９−７６６，１９９３）。

【００９１】 ドミナンスおよびサブドミナンスの概念は、感染疾患と悪性腫瘍の両方の免疫
療法に関連する。例えば、慢性的なウイルス疾患の過程において、サブドミナン
トエピトープのレクルートメントは、特に、ドミナントＣＴＬまたはＨＴＬ特異
性が、ウイルスおよび他の生物の機能的寛容、抑制、変異によって活性化された
場合は、感染の首尾よいクリアランスのために重要であり得る（Ｆｒａｎｃｏら
、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：５２４−５３１、１９９５）。癌
および腫瘍抗原の場合、少なくともいくつかの最も高い親和性ペプチドを認識す
るＣＴＬは、機能的に不活性化され得る。より低い親和性ペプチドは、優先的に
、これらの時期に認識され、従って、治療的または予防的な抗癌ワクチンにおい
てより好ましくあり得る。

【００９２】 特に、公知の新規の非ウイルス性腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に由来する有意な数
のエピトープが、高い親和性（ＩＣ_５０が５０ｎＭ未満）というよりも中程度の
親和性（ＩＣ_５０が５０−５００ｎＭの範囲）でＨＬＡクラスＩと結合すること
が注目される。

【００９３】 例えば、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）またはＣＴＬにより認識される１５個の
公知のＴＡＡペプチドのうちの８個が、５０−５００ｎＭの範囲に縛られること
が見出された（これらのデータは、９０％の公知のウイルス抗原がＩＣ^５０が５
０ｎＭまたはそれ未満でＨＬＡクラスＩ分子により結合されるという概算と対照
的である（Ｓｅｔｔｌｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５３：５５８−５５９２
、１９９４））。癌においては、この現象は、おそらくＴ細胞の寛容化現象が理
由で、ＣＴＬが種々の最も高い結合性のペプチドを認識するのを排除または機能
的に阻害することに起因する。

【００９４】 学説に束縛されることを意図せずにいうと、優性エピトープに対するＴ細胞は
クローン的に欠失たことが理由で、下位優性のエピトープを選択することが、存
在するＴ細胞を補充されることを可能にし、次いで治療的または予防的応答を導
くことを可能にすると考えられる。しかし、下位優性エピトープへのＨＬＡ分子
の結合は、しばしば優性エピトープに対するよりも弱い。

【００９５】 したがって、１つ以上のＨＬＡ分子に対する特定の免疫原性エピトープの結合
親和性を改変し得、それによってペプチドにより惹起される免疫応答を改変し得
る（例えば、より強い応答を惹起するアナログペプチドを調整し得る）必要性が
存在する。本発明にしたがって結合親和性および生じる免疫応答の両方を改変す
るこの能力は、ペプチドエピトープベースのワクチンおよび治療剤の有用性を穏
やかに増強する。

【００９６】 上記のスクリーニング手順により、スーパーファミリーの全ての対立遺伝子間
の適切な交差反応性を有するペプチドが同定されているが、しかし交差反応性は
いつも可能な限り完全であるというわけではなく、特定の場合には、ペプチドの
交差反応性を増大するための手順が有用であり得る。さらにこのような手順は、
結合親和性またはペプチド安定性のようなペプチドの他の特性を改質するために
も用いられ得る。所定のモチーフまたはスーパーモチーフ内のＨＬＡ対立遺伝子
に対するペプチドの交差反応性を支配する一般原則が確立されれば、より広範な
（あるいはそうでなければ修飾された）ＨＬＡ結合能力を達成するために、特定
の目的のペプチドの構造の修飾（すなわちアナログ化）が実施され得る。より詳
細には、最も広範な交差反応性パターンを示すペプチドが、本明細書中の教示に
従って生成され得る。アナログ生成に関連した本発明の概念は、米国同時係属出
願の第０９／２２６，７７５号（１９９９年１月６日提出）に詳細に記載されて
いる。

【００９７】 簡単に言うと、アナログ化戦略は、ある種のＨＬＡ分子との結合と相関するモ
チーフまたはスーパーモチーフを利用する。アナログペプチドは、一次アンカー
、二次アンカーでのまたは一次および二次アンカーの位置のアミノ酸残基を置換
することにより作製され得る。一般にアナログ（類似体）は、モチーフまたはス
ーパーモチーフをすでに保有するペプチドに対して作製される。本明細書に記載
されるように、ＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩ結合ペプチドについてのスーパ
ーモチーフおよびモチーフの好ましい一次および二次アンカー残基は、それぞれ
表３および４に示される。本発明の多数のモチーフまたはスーパーモチーフに関
して、対立遺伝子特異的ＨＬＡ分子、またはそれぞれのモチーフまたはスーパー
モチーフと結合するＨＬＡスーパータイプのメンバーに結合することが有害であ
る残基が規定される（表３および４）。従って結合に有害であるこのような残基
の除去が、本発明に従って実施され得る。例えばＡ３スーパータイプの場合には
、このような有害残基を有する全てのペプチドが、分析に用いられるペプチドの
集団から除去される場合、交差反応性の発生率は、２２％から３７％に増大した
（例えば、Ｓｉｄｎｅｙ，Ｊ．ら、Ｈｕ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：７９，１９９
６参照）。

【００９８】 従って、所定のスーパーモチーフ内のペプチドの交差反応性を改善するための
一戦略は、単に、ペプチド内に存在する１つ以上の有害残基を欠失させ、小「中
性」残基、例えばＡｌａ（ペプチドのＴ細胞認識に影響を及ぼし得ない）と置換
することである。ペプチド内の有害残基の排除とともに、対立遺伝子特異的ＨＬ
Ａ分子とのまたはスーパーファミリー内の多数のＨＬＡ分子との高親和性結合に
関連した「好ましい」残基が挿入される場合に、交差反応性強化の可能性が、予
期される。

【００９９】 アナログペプチドが、ワクチンとして用いられる場合、インビボでネイティブ
なエピトープに対するＣＴＬ応答を実際に惹起する（またはクラスＩＩエピトー
プの場合は、野生型ペプチドと交差反応するヘルパーＴ細胞を惹起する）ことを
保証するために、アナログペプチドが、適切なＨＬＡ対立遺伝子を有する個体か
らインビトロでＴ細胞を誘導するために用いられ得る。その後、野生型ペプチド
感作標的細胞の溶解させる免疫化細胞の能力が評価される。あるいは、細胞の活
性の評価は、ＩＦＮの放出をモニターすることにより評価され得る。これらのそ
れぞれの細胞モニタリング戦略はＣＴＬによるＡＰＣの認識を評価する。それは
、内因的に産生された抗原がアナログペプチドによって誘導されるＴ細胞によっ
ても認識されるか否かを確定するために、適切な遺伝子で感染されたかまたはト
ランスフェクトされた細胞であるか、あるいは（一般的に、クラスＩＩエピトー
プのみに関して、ＨＬＡクラスＩＩの異なるペプチドプロセシング経路に起因す
る）全タンパク質抗原でパルスされたことのある細胞のいずれかである抗原提示
細胞として用いるのが望ましい。ペプチド／タンパク質でパルスされた有害細胞
を用いてＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩの両方に対する全タンパク質抗原を提
示し得る。

【０１００】 本発明の別の実施形態は、弱結合ペプチドのアナログを作製し、それにより適
正数の細胞結合剤を保証することである。５００〜５０００ｎＭの結合親和性を
示し、かつ許容可能であるが、一方または両方の位置に最適下限の一次アンカー
残基を保有するクラスＩ結合ペプチドは、それぞれのスーパータイプに従って好
ましいアンカー残基を置換することにより「固定」され得る。次に、アナログペ
プチドは結合および／または交差結合活性に関して試験され得る。

【０１０１】 本発明の別の実施形態は、すでに交差反応結合剤であり、そしてワクチン候補
である（しかし、スーパータイプの１つ以上の対立遺伝子と弱く結合する）ペプ
チドのアナログを作製することである。交差反応結合剤が、一次および二次アン
カーの位置に最適下限の残基（好ましくないかまたは有害な残基である）を有す
る場合、このペプチドは、有害な残基を取り除き、好ましい残基で置換すること
によりアナログ化され得る。次いでこのアナログペプチドは、交差結合能につい
て試験され得る。

【０１０２】 有効なペプチドアナログを生成するための別の実施形態は、例えば液体環境中
でのペプチド安定性または溶解性に悪影響を及ぼす残基の置換を包含する。この
置換は、ペプチドエピトープの任意の位置で起こり得る。例えばシステイン（Ｃ
）はαアミノ酪酸を選択して置換され得る。その化学的性質のために、システイ
ンはジスルフィド架橋を形成する傾向を有し、そして結合能力を低減するのに十
分なだけペプチドを構造的に変化させる。Ｃの代わりにα−アミノ酪酸を置換す
ると、この問題が改善されるだけでなく、ある場合には結合および交差結合能力
が実際に改良される（例えば、Ｓｅｔｔｅら、Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ Ｖｉｒａ
ｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，編集：Ｒ．ＡｈｍｅｄおよびＩ．Ｃｈｅｎ，Ｊｏｈ
ｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９９による概説を参照）
。システインとα−アミノ酪酸との置換は、ペプチドエピトープの任意の位置（
すなわち、アンカーの位置または非アンカーの位置）で起こり得る。

【０１０３】 さらに、少なくとも１つの好ましい二次アンカー残基を含むが、任意の有毒な
二次アンカーの存在は回避しているＡ^＊０２０１モチーフ保有ペプチドのセット
において、６９％のペプチドが、Ａ^＊０２０１と５００ｍＭ未満のＩＣ５０で結
合することが示された（Ｒｕｐｐｅｒｔら、Ｃｅｌｌ ７４：９２９、１９９３
）。Ｒｕｐｐｅｒｔにおいて、好ましい残基または有毒な残基の決定を用いて、
アルゴリズムを生じ得る（例えば、２２を参照のこと）。このようなアルゴリズ
ムは、望まれる場合カットオフスコアが調製されて、より大きいかまたはより小
さい推定結合特性を有するペプチドのセットが選択され得る点でフレキシブルで
ある。

【０１０４】 本明細書中に記載される手順にしたがって、ＨＬＡ−Ａ２対立遺伝子特異的分
子およびＨＬＡ−Ａ２スーパータイプに結合することが見出される腫瘍関連抗原
ペプチドエピトープおよびこれらのアナログが同定される。

【０１０５】 さらに、付加的なアミノ酸がペプチド末端に付加されて、ペプチド間の連結の
容易さ、キャリア支持体またはより大きなペプチドへのカップリング、ペプチド
オリゴペプチドの物理的または化学的特性の修飾などが提供され得る。チロシン
、システイン、リジン、グルタミン酸またはアスパラギン酸などのアミノ酸は、
このペプチドまたはオリゴペプチド（特にクラスＩペプチド）のＣ末端またはＮ
末端に導入され得る。ＣＴＬエピトープのカルボキシル末端での修飾は、いくつ
かの場合、ペプチドの結合特性を変化させ得る。さらに、ペプチドまたはオリゴ
ペプチド配列は、末端ＮＨ_２のアシル化（例えば、アルカノイル（Ｃ_１−Ｃ_２０ ）またはチオグリコリルアセチル化）、末端カルボキシルのアミド化（例えば、
アンモニア、メチルアミンなど）による修飾によって天然の配列と異なり得る。
いくつかの例では、これらの修飾は、支持体または他の分子への結合のための部
位を提供し得る。

【０１０６】 （ＩＶ．Ｇ．ペプチドエピトープの調製） 本発明によるペプチドは、組換えＤＮＡ技術または化学合成により合成的に、
あるいはネイティブの腫瘍または病原性生物体のような天然供給源から調製され
得る。ペプチドエピトープは、別々に、またはポリエピトープペプチドとして合
成し得る。ペプチドは好ましくは他の天然に存在する宿主細胞タンパク質および
それらのフラグメントを実質的に含まないが、いくつかの実施形態では、ペプチ
ドはネイティブのフラグメントまたは粒子と合成的に結合され得る。

【０１０７】 本発明によるペプチドは、種々の長さであり得、それらの中性（非荷電）形態
または塩である形態のいずれかであり得る。本発明によるペプチドは、グリコシ
ル化、側鎖の酸化またはリン酸化のような修飾を含み得、一般的に、修飾がペプ
チドの生物活性を破壊しないという条件で供される。

【０１０８】 本発明のペプチドは、多種多様の方法で調製され得る。好ましい比較的短いサ
イズに関しては、ペプチドは慣用的技法にしたがって溶液中でまたは固体支持体
上で合成され得る。種々の自動合成機が市販されており、公知のプロトコールに
したがって用いられ得る（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ ＆ Ｙｏｕｎｇ，ＳＯＬＩ
Ｄ ＰＨＡＳＥ ＰＥＰＴＩＤＥ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，２Ｄ，ＥＤ．，Ｐｉｅ
ｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，１９８４参照）。さらに個々のペプチドエ
ピトープは、化学的連結を用いて連結されて、なお本発明の範囲内であるより大
きなペプチドを生成し得る。

【０１０９】 あるいは、目的の免疫原性ペプチドをコードするヌクレオチド配列が、発現ベ
クターに挿入され、適切な宿主細胞中に形質転換されるかまたはトランスフェク
トされ、そして発現に適した条件下で培養される組換えＤＮＡ技術が用いられ得
る。これらの手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮ
Ｇ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ（１９８９）に一般的に記載されているように、一般に当該分野で公知であ
る。したがって、本発明の１つまたはそれ以上のペプチド配列を含む組換えポリ
ペプチドは、適切なＴ細胞エピトープを提示するために用いられ得る。

【０１１０】 本明細書中で意図される好ましい長さのペプチドエピトープに関する配列をコ
ードするヌクレオチドは、化学的技法により、例えばＭａｔｔｅｕｃｃｉら、Ｊ
．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０３：３１８５ （１９８１）のホスホトリエス
テル法により合成され得る。ペプチドアナログは、ネイティブのペプチド配列を
コードするものの代わりに、適切なかつ所望の核酸塩基（単数または複数）を単
に置換することにより作製され得る。典型的な核酸置換例は、本明細書中のモチ
ーフ／スーパーモチーフにより規定されるアミノ酸をコードするものである。次
にコード配列は、適切なリンカーを提供され、当該分野で一般的に利用可能な発
現ベクター、ならびに適切な宿主を形質転換するために用いられるベクターに連
結されて、所望の融合タンパク質を産生し得る。多数のこのようなベクターおよ
び適切な宿主系が目下利用可能である。融合タンパク質の発現に関しては、コー
ド配列は、作動可能に連結される開始および停止コドン、プロモーターおよびタ
ーミネーター領域、ならびに通常は複製系を提供されて、所望の細胞宿主中での
発現のための発現ベクターを提供する。例えば、細菌宿主と適合性のプロモータ
ー配列は、所望のコード配列の挿入に便利な制限部位を含有するプラスミド中に
提供される。その結果生じる発現ベクターは、適切な細菌宿主中に形質転換され
る。当然ながら、酵母、昆虫または哺乳類細胞宿主も、適切なベクターおよび制
御配列を用いて使用され得る。

【０１１１】 ペプチドエピトープが可能な限り小さいが、ネイティブタンパク質の免疫活性
のすべてを実質的に維持することが一般的に好ましい。可能な場合、本発明のＨ
ＬＡＡクラスＩ結合ペプチドエピトープが約８〜約１３アミノ酸残基の長さ、（
好ましくは９〜１０）に最適化されることは望ましくあり得る。この大きさの範
囲の１つ以上のエピトープがより長いペプチドにより包含され得ることが理解さ
れる（ペプチドの長さのさらなる議論については、定義の項目の用語「エピトー
プ」を参照のこと）。ＨＬＡクラスＩＩ結合エピトープは、好ましくは約６〜約
３０アミノ酸長（好ましくは約１３と約２０残基の間）に最適化される。好まし
くは、エピトープは、大きさの点で内因的にプロセスを受ける病原体由来ペプチ
ドまたは関連するＨＬＡ分子と結合する腫瘍細胞ペプチドと比例する。種々の長
さのペプチドの同定および調製は、本明細書中に記載の技術を用いて実行される
。

【０１１２】 本発明の代替の好ましい実施形態は、ポリエピトープペプチドとして、または
ポリエピトープペプチドをコードするミニジーンとして連結した本発明のペプチ
ドの投与が含まれる。

【０１１３】 別の好ましい実施形態は、高濃度のクラスＩおよび／またはクラスＩＩエピト
ープを含むネイティブペプチド領域を同定することによって獲得される。このよ
うな配列は、一般的にアミノ酸長あたり最大数のエピトープを含む配列に基いて
選択される。エピトープがフレームシフト様式で存在することが理解されている
。例えば、１０アミノ酸長ペプチドは２つの９アミノ酸長エピトープおよび１つ
の１０アミノ酸長エピトープを含み得；細胞内プロセシングの際に、それぞれの
エピトープは、このようなペプチドの投与でＨＬＡ分子に曝され、そして結合さ
れ得る。したがって、より長い（好ましくはマルチエピトープ性の）ペプチドが
、合成的に、組換え的に、またはネイティブ源からの切断を介して生成され得る
。

【０１１４】 （ＩＶ．Ｈ．Ｔ細胞応答を検出するためのアッセイ） いったんＨＬＡ結合ペプチドが同定されれば、それらはＴ細胞応答を引き出す
能力に関して試験され得る。モチーフ保有ペプチドの調製および評価は、ＰＣＴ
国際公開公報第９４／２０１２７号および同第第９４／０３２０５号に記載され
ている。要するに、特定の抗原からのエピトープを含むペプチドが合成され、関
連するＨＬＡタンパク質に結合するそれらの能力に関して試験される。これらの
アッセイは、精製ＨＬＡクラスＩ分子へのペプチドの結合を、放射性ヨウ素標識
参照ペプチドの結合に関して評価することを包含する。あるいは、免疫蛍光染色
および流動微小蛍光測定により、空のクラスＩ分子を発現する細胞（すなわち、
任意の結合ペプチドを欠く細胞表面ＨＬＡ分子）が、ペプチド結合に関して評価
され得る。ペプチド結合を評価するために用いられ得るその他のアッセイとして
は、ペプチド依存性クラスＩアセンブリーアッセイおよび／またはペプチド競合
によるＣＴＬ認識の抑制が挙げられる。典型的には５００ｎＭまたはそれ未満の
親和性で、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するペプチドは、感染または免疫化固体由
来のＣＴＬに対する標的として役立つそれらの能力に関して、ならびに病因と関
連した選択標的細胞と反応し得るＣＴＬ集団を生じ得る主要なインビトロでのま
たはインビボでのＣＴＬ応答を誘導するそれらの能力に関して、さらに評価され
る。

【０１１５】 アナログアッセイは、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドの評価のために用いられ
る。典型的には１０００ｎＭまたはそれ未満の親和性にて結合することが示され
ているＨＬＡクラスＩＩモチーフ保有ペプチドはさらに、ＨＴＬ応答を刺激する
能力に関して評価される。

【０１１６】 Ｔ細胞応答を検出するために利用される慣用的アッセイとしては、増殖アッセ
イ、リンホカイン分泌アッセイ、直接的細胞傷害性アッセイおよび限界希釈アッ
セイが挙げられる。例えばペプチドとともにインキュベートされた抗原提示細胞
は、応答体細胞集団中でＣＴＬ応答を誘導する能力に関してアッセイされ得る。
抗原提示細胞は、末梢血単核細胞または樹状細胞のような正常細胞であり得る。
あるいは内部でプロセスをうけるペプチドにクラスＩ分子を負荷する能力を欠き
、適切なヒトクラスＩ遺伝子でトランスフェクトされた変異体である非ヒト哺乳
類細胞株は、インビトロでの一次ＣＴＬ応答を誘導するペプチドの能力に関して
試験するために用いられ得る。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＣＴＬ前駆体の
供給源として用いられ得る。抗原提示細胞は、ペプチドとともにインキュベート
され、その後、ペプチド負荷抗原提示細胞が、最適化培養条件下にて応答体細胞
集団とともにインキュベートされる。陽性ＣＴＬ活性化は、放射性標識標的細胞
、特異的ペプチドパルスされた標的または内因的にプロセスされた抗原（これは
この特異的ペプチドの由来となる）を発現するのいずれかを溶解するＣＴＬ、標
的細胞の存在について培養物をアッセイすることにより決定され得る。あるいは
、エピトープ特異的ＣＴＬの存在は、ＩＦＮγインサイチュＥＬＩＳＡにより決
定され得る。

【０１１７】 さらに、フルオレセイン標識ＨＬＡテトラマー複合体で染色することにより抗
原特異的Ｔ細胞の直接定量を可能にする方法が案出された（Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．
Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１
０３３０，１９９３；Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２７４：９４，１９９６）。他の意見としては、細胞内リンホカインに対する染
色およびインターフェロン放出アッセイまたはＥＬＩＳＰＯＴアッセイが挙げら
れる。テトラマー染色、細胞内リンホカイン染色およびＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
は全て、より慣用的アッセイより感度が少なくとも１０倍高いと思われる（Ｌａ
ｌｖａｎｉ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：８５９，１９９
７；Ｄｕｎｂａｒ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．８：４１３，
１９９８；Ｍｕｒａｌｉ−Ｋｒｉｓｈｎａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔ
ｙ ８：１７７，１９９８）。

【０１１８】 ＨＴＬ活性化も、Ｔ細胞増殖またはリンホカイン分泌のような当業者に公知の
技法を用いて評価され得る（例えば、Ａｌｅｘａｎｄｅｒら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ
１：７５１−７６１，１９９４参照）。

【０１１９】 あるいは、ＨＬＡトランスジェニックマウスの免疫化を用いて、ペプチドエピ
トープの免疫原性を確定し得る。いくつかのトランスジェニックマウス株（例え
ば、ヒトＡ２．１、Ａ１１（ＨＬＡ−Ａ３エピトープを分析するために付加的に
用いられ得る）およびＢ７対立遺伝子を有するマウス）が特徴付けられている。
そして他のトランスジェニックマウス（例えばＨＬＡ−Ａ１およびＡ２４に関す
るトランスジェニックマウス）が開発されつつある。さらにＨＬＡ−ＤＲ１およ
びＨＬＡ−ＤＲ３マウスモデルも開発されている。他のＨＬＡ対立遺伝子を有す
るさらに別のトランスジェニックマウスモデルが、必要な場合には生成され得る
。

【０１２０】 このようなマウスは不完全フロイントアジュバント中に乳化されたペプチドで
免疫化され、その結果生じるＴ細胞が、目的のタンパク質をコードする遺伝子で
ペプチドパルスされたかまたはトランスフェクトされた標的細胞を認識するそれ
らの能力に関して試験される。ＣＴＬ応答は、上記の細胞傷害性アッセイを用い
て分析され得る。同様に、ＨＴＬ応答は、Ｔ細胞増殖またはリンホカインの分泌
のようなアッセイを用いて分析され得る。

【０１２１】 （ＩＶ．Ｉ．診免疫応答を評価するための断剤としてのペプチドエピトープの
使用） 本発明の一つの実施形態では、ＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩ結合ペプチド
が、免疫応答を評価するための試薬として用いられ得る。評価される免疫応答は
、任意の免疫原により誘導される。例えば、免疫原は、試薬として用いられるペ
プチドエピトープを認識する抗原特異的なＣＴＬまたはＨＴＬの産生を導く。し
たがって、本発明のペプチド試薬は、免疫原として用いられても用いられなくて
もよい。このような分析のために用いられるアッセイ系としては、テトラマーに
基くプロトコル、細胞内リンホカインの染色およびインターフェロン放出アッセ
イまたはＥＬＩＳＰＯＴアッセイが挙げられる。

【０１２２】 例えば、本発明のペプチドは、推定免疫原への曝露後に抗原特異的ＣＴＬの存
在に関して末梢血単核細胞を評価するためのテトラマー染色アッセイに用いられ
る。ＨＬＡ−テトラマー複合体は、抗原特異的ＣＴＬを直接可視化するために、
およびそれによって末梢血単核細胞サンプル中の抗原特異的ＣＴＬの頻度を確定
するために用いられる（例えば、Ｏｇｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７９：２１０３
−２１０６，１９９８、およびＡｌｔｍａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ １７４：９４
−９６，１９９６参照）。

【０１２３】 本発明のペプチドを含むテトラマー試薬は、以下のように生成される：ＨＬＡ
分子に結合するペプチドが、対応するＨＬＡ重鎖およびβ_２−ミクログロブリン
の存在下でリフォールディングされて、三分子複合体を生成する。複合体は、タ
ンパク質に予め操作されて組み込まれた部位でＨＬＡ重鎖のカルボキシル末端で
ビオチン化される。次にストレプトアビジンの添加により、テトラマー形成が誘
導される。蛍光的標識ストレプトアビジンを用いる場合、テトラマー複合体が用
いられ、抗原特異的細胞を染色する。次に標識された細胞は、例えばフローサイ
トメトリーにより容易に同定され得る。このような手順は、診断または予後用途
に用いられ；この手順により同定される細胞は、治療目的に用いられ得る。

【０１２４】 本発明のペプチド（例えば表６を参照のこと）は、免疫リコール応答を評価す
るための試薬としても用いられる（例えば、Ｂｅｒｔｏｎｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．
Ｉｎｖｅｓｔ．１００：５０３−５１３，１９９７およびＰｅｎｎａら，Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１５６５−１５７０，１９９１参照）。例えば、疾患に
関連する抗原（例えば、ＣＥＡ、ｐ５３、ＭＡＧＥ２／３、ＨＥＲ２ｎｅｕのよ
うな腫瘍関連抗原、もしくはＨＰＶまたはＨＳＶにのような新生物に関連する生
物）を発現する個体からの患者ＰＢＭＣサンプルは、特異的ペプチドを用いて抗
原特異的ＣＴＬまたはＨＴＬの存在に関して分析され得る。単核細胞を含有する
血液サンプルは、ＰＢＭＣを培養し、本発明のペプチドで細胞を刺激することに
より評価され得る。適切な培養時間後、増殖した細胞集団が、例えばＣＴＬ活性
に関してまたはＨＴＬ活性に関して分析され得る。

【０１２５】 したがって、ペプチドは、ワクチンの効力を評価するために用いられ得る。免
疫原でワクチン接種された患者から得られるＰＢＭＣは、本明細書中に記載の方
法を用いて分析され得る。患者はＨＬＡ型分類され、そしてその患者に存在する
ＨＬＡ分子によって結合されるペプチドエピトープが分析のために選択される。
ワクチンの免疫原性は、ワクチンに存在するエピトープに対するＣＴＬおよび／
またはＨＴＬの存在により示される。

【０１２６】 本発明のペプチドは、当該分野で周知の技法を用いて抗体を作製するためにも
用いられる（例えば、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮ
ＯＬＯＧＹ，Ｗｉｌｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ、およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｈａｒｌｏｗ，Ｈａｒｌｏｗ ａ
ｎｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９参照）。このような抗体は、疾患関連抗原の存在を決
定するための試薬として有用である。このような抗体としては、ＨＬＡ分子によ
り結合された場合ペプチドを認識するもの、すなわちペプチド−ＭＨＣ複合体に
結合する抗体が挙げられる。

【０１２７】 （ＩＶ．Ｊ．ワクチン組成物） 本発明の免疫学的有効量の１つまたはそれ以上のペプチドを含有するワクチン
は、本発明のさらなる実施形態である。このペプチドは種々の手段および処方物
により送達され得、すべて集合的に「ワクチン」組成物と呼ばれる。このような
ワクチン組成物および／または投与様式としては、例えば、カチオン性脂質処方
物中の裸のｃＤＮＡ；リポペプチド（例えば、Ｖｉｔｉｅｌｌｏ，Ａ．ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：３４１，１９９５）、例えばポリ（
ＤＬ−ラクチドコグリコド）（「ＰＬＧ」）微小球中に封入される裸のｃＤＮＡ
またはペプチド（例えば、Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
２８：２８７−２９４，１９９１；Ａｌｏｎｓｏら，Ｖａｃｃｉｎｅ １２：２
９９−３０６，１９９４；Ｊｏｎｅｓら，Ｖａｃｃｉｎｅ １３：６７５−６８
１，１９９５参照）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）中に含入されるペプチド
組成物（例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉら，Ｎａｔｕｒｅ ３４４：８７３−８７
５，１９９０；Ｈｕら，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３：２３５−
２４３，１９９８参照）、多抗原ペプチド系（ＭＡＰｓ）（例えば、Ｔａｍ，Ｊ
．Ｐ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８５：５４０９−５
４１３，１９８８；Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
１９６：１７−３２，１９９６参照）；ウイルス、細菌、または真菌送達ベクタ
ー（Ｐｅｒｋｕｓ，Ｍ．Ｅ．ら：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｄ
ｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｋａｕｆｍａｎｎ，Ｓ．Ｈ．Ｅ．，編，ｐ．３７９，１
９９６；Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ，Ｓ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ３２０：５３５，１
９８６；Ｈｕ，Ｓ．Ｌ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ３２０：５３７，１９８６；Ｋｉｅ
ｎｙ，Ｍ．Ｐ．ら，ＡＩＤＳ Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：７９０，１
９８６；Ｔｏｐ，Ｆ．Ｈ．ら，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１２４：１４８，１
９７１；Ｃｈａｎｄａ，Ｐ．Ｋ．ら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７５：５３５，１９
９０）、ウイルスまたは合成起源の粒子（例えば、Ｋｏｆｌｅｒ，Ｎ．ら，Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９２：２５，１９９６；Ｅｌｄｒｉｄｇｅ
，Ｊ．Ｈ．ら，Ｓｅｍ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３０：１６，１９９３；Ｆａｌｏ，Ｌ
．Ｄ．，Ｊｒ．ら，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．７：６４９，１９９５）、アジュバ
ント（Ｗａｒｒｅｎ，Ｈ．Ｓ．，Ｖｏｇｅｌ，Ｆ．Ｒ．，およびＣｈｅｄｉｄ，
Ｌ．Ａ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３６９，１９８６；Ｇｕｐ
ｔａ，Ｒ．Ｋ．ら，Ｖａｃｃｉｎｅ １１：２９３，１９９３）、リポソーム（
Ｒｅｄｄｙ，Ｒ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｍｏｌ．１４８：１５８５，１９９２；Ｒｏ
ｃｋ，Ｋ．Ｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １７：１３１，１９９６）、あ
るいは粒子吸収ｃＤＮＡ（Ｕｌｍｅｒ，Ｊ．Ｂ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：
１７４５，１９９３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｈ．Ｌ．，Ｈｕｎｔ，Ｌ．Ａ．，およ
びＷｅｂｓｔｅｒ，Ｒ．Ｇ．，Ｖａｃｃｉｎｅ １１：９５７，１９９３；Ｓｈ
ｉｖｅｒ，Ｊ．Ｗ．ら：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｖｅｌ
ｏｐｍｅｎｔ，Ｋａｕｆｍａｎｎ，Ｓ．Ｈ．Ｅ．，編，ｐ．４２３，１９９６；
Ｃｅａｓｅ，Ｋ．Ｂ．，およびＢｅｒｚｏｆｓｋｙ，Ｊ．Ａ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅ
ｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：９２３，１９９４、およびＥｌｄｒｉｄｇｅ，Ｊ．
Ｈ．ら，Ｓｅｍ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３０：１６，１９９３）などが挙げられ得る
。レセプター媒介性標的化としても公知の毒素標的化送達技術、例えばＡｖａｎ
ｔ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｎｅｅｄｈａｍ，Ｍａ
ｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）のもの、またはストレスタンパク質に付着したもの（
例えば、ＨＳＰ９６（Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
Ｃｏｒｐ．、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ））も用いられ得る。

【０１２８】 本発明のワクチンとしては、核酸媒介性様相が挙げられる。本発明の１つまた
はそれ以上のペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡも、患者に投与され得る
。このアプローチは、例えばＷｏｌｆｆら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５
（１９９０）ならびに米国特許第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６
６号、同第５，８０４，５６６号、同第５，７３９，１１８号、同第５，７３６
，５２４号、同第５，６７９，６４７号、国際公開第ＷＯ９８／０４７２０号に
記載される。ＤＮＡベースの送達技術の例としては、「裸のＤＮＡ」、促進され
る（ブピバカイン、ポリマー、ペプチド媒介性）送達、カチオン性性脂質複合体
、ならびに粒子媒介性（「遺伝子銃」）または圧力媒介性送達が挙げられる（例
えば、米国特許第５，９２２，６８７号参照）。したがって、本発明のペプチド
ウイルスは、ウイルスまたは細菌ベクターによって発現され得る。発現ベクター
の例としては、ワクシニアまたはファウルポックスのような弱毒ウイルス宿主が
挙げられる。例えば、ワクシニアウイルスは、本発明のペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を発現するためのベクターとして用いられる。急性的または慢性
的に感染された宿主もしくは非感染宿主中への導入時に、組換えワクシニアウイ
ルスは、免疫原性ペプチドを発現し、それにより免疫応答を引き出す。免疫化プ
ロトコールに有用なワクシニアベクターおよび方法は、例えば米国特許第４，７
２２，８４８号に記載されている。別のベクターは、ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ
Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ）である。ＢＣＧベクターは、Ｓｔｏｖｅｒら
，Ｎａｔｕｒｅ ３５１：４５６−４６０（１９９１）に記載されている。本発
明のペプチドの治療的投与または免疫化に有用な多種多様の他のベクター、例え
ばアデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクター、アルファウイル
スベクター、レトロウイルスベクター、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉベク
ター、解毒炭疽毒素ベクター等は、本明細書中の記載から、当業者には明らかで
ある。

【０１２９】 さらに、本発明によるワクチンは、１つ以上の本発明のペプチドの組成物を包
含し得る。したがって、ペプチドは個々のワクチン中に存在し得；あるいはペプ
チドは、同じペプチドの複数のコピーを含むホモポリマーまたは種々のペプチド
のヘテロポリマーとして存在し得る。ポリマーは、免疫学的反応の可能性の増大
という利点を有し、そして異なるペプチドエピトープがポリマーを製造するため
に用いられる場合、免疫応答のために標的化された抗原の異なる抗原決定因子と
反応する抗体および／またはＴ細胞を誘導するさらなる能力を有する。この組成
物は、抗原の天然に存在する領域であり得るか、あるいは例えば組換え的にまた
は化学合成により調製され得る。

【０１３０】 本発明のワクチンとともに用いられ得るキャリアは当該分野で周知であり、例
えばチログロブリン、ヒト血清アルブミンのようなアルブミン、破傷風毒素、ポ
リＬ−リシン、ポリＬ−グルタミン酸のようなポリアミノ酸、インフルエンザウ
イルスタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスコアタンパク質などが挙げられる。ワクチ
ンは、生理学的に耐容可能な（すなわち許容可能な）希釈剤（例えば水または生
理食塩水、好ましくはリン酸塩緩衝塩類溶液）を含有し得る。ワクチンはまた一
般的には、アジュバントを含む。不完全フロイントアジュバント、リン酸アルミ
ニウム、水酸化アルミニウムまたはミョウバンのようなアジュバントが、当該分
野で周知の物質の例である。さらに、本明細書中に開示するように、ＣＴＬ応答
は、例えばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリル−セリン（Ｐ _３ ＣＳＳ）のような脂質に本発明のペプチドを結合することによりプライミング
され得る。

【０１３１】 注射（例えば、ＳＣ、ＩＤ、ＩＭ）、エアロゾル、経口、経皮、経粘膜、胸膜
腔内、鞘内またはその他の適切な経路を介しての本発明によるペプチド組成物で
の免疫化時に、宿主の免疫系は、所望の抗原に特異的な抗体、ＣＴＬおよび／ま
たはＨＴＬを産生することにより、ワクチンに応答する。その結果として、宿主
はその後のＴＡＡへの被曝に対して少なくとも部分的に免疫を持つようになるか
、もしくはＴＡＡ保有細胞のさらなる発展に対して少なくとも部分的に耐性をも
つようになり、それによって、予防的または治療的な利益を引き出す。

【０１３２】 特定の実施形態では、Ｔ細胞応答を誘導する構成成分は、目的の標的抗原に対
する抗体応答を誘導する構成成分と組み合わされる。このような組成物の好まし
い実施形態は、本発明によるクラスＩおよびクラスＩＩエピトープを含む。ある
いは組成物は、本発明によるクラスＩおよび／またはクラスＩＩエピトープをＰ
ＡＤＲＥ^ＴＭ（Ｅｐｉｍｍｕｎｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）分子とともに含
む。

【０１３３】 本発明のワクチンは、抗原提示細胞（例えば樹状細胞）を本発明のペプチドを
提示するためのビヒクルとして含み得る。例えば、ワクチン組成物は、樹状細胞
動員および収集（それにより樹状細胞の充填がインビトロで起こる）後にインビ
トロで作製され得る。例えば樹状細胞は、例えば免疫応答を惹起するために本発
明により構築されるミニジーンによりトランスフェクトされる。ミニジーンにつ
いては、以下の項目でより詳細に議論される。ワクチン組成物は、樹状細胞の動
員および収集の後にインビトロで作製され、それによりインビトロでの樹状細胞
の充填が起きる。

【０１３４】 本発明のワクチン組成物はまた、インターフェロン−αのような抗菌剤、また
は例えばＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ等のような免疫アジュバントと組
合せても用いられ得る。

【０１３５】 好ましくは、ペプチドベースまたは核酸ベースの処方物のいずれかである、ワ
クチンに含有させるためのエピトープを選択する場合、以下の原理が利用される
。ＴＡＡ関連疾患を処置するためにワクチン中に利用され得る典型的なエピトー
プは、表６に記載される。選択を行なうためには、以下の原理の各々が釣り合っ
ているのが好ましい。複数のエピトープがワクチンに用いられる場合、このエピ
トープは、エピトープが得られるネイティブ抗原の配列において連続であり得る
が、その必要はない。

【０１３６】 １．）投与時に、ＴＡＡ発現腫瘍の防止または除去と相関することが観察され
た免疫応答を模倣するエピトープが選択される。一般的にＨＬＡクラスＩに関し
ては、これは少なくとも１つのＴＡＡ由来の３〜４個のエピトープを含む。

【０１３７】 ２．）免疫原性と相関することが確立された必要な結合親和性を有するエピト
ープが選択される。ＨＬＡクラスＩに関して、ＩＣ_５０は５００ｎＭまたはそれ
未満、クラスＩＩに関して、ＩＣ_５０は１０００ｎＭまたはそれ未満である。Ｈ
ＬＡクラスＩに関して、現在のところ２００ｎＭまたはそれ未満のをＩＣ_５０有
するペプチドを選択することが好ましい。というのも、免疫応答の誘導に対して
だけでなく、インビトロでの細胞死滅に対してもより関連すると考えられている
からである。

【０１３８】 ３．）広範な集団適用範囲を与えるのに十分なスーパーモチーフ保有ペプチド
、または対立遺伝子特異的モチーフ保有ペプチドの十分なアレイが選択される。
特に、少なくとも８０％の集団適用範囲を有するのが好ましい。目的の分野で公
知の統計学的評価であるモンテカルロ分析が、集団適用範囲の広さを評価するた
めに用いられ得る。

【０１３９】 ４．）癌関連抗原からエピトープを選択する場合、患者は天然エピトープに対
する寛容を発生し得るため、選択にアナログペプチドを含むことが好ましい。感
染性疾患関連抗原に関するエピトープを選択する場合は、天然またはアナログエ
ピトープを選択するのが好ましい。

【０１４０】 ５．）特に関連があるのは、「入れ子構造（ｎｅｓｔｅｄ）エピトープ」と呼
ばれるエピトープである。入れ子構造エピトープは、所定のペプチド配列中に少
なくとも２つのエピトープが重複する場合に起こる。「優れた入れ子構造」を含
むペプチドは、ＨＬＡクラスＩおよびＨＬＡクラスＩＩエピトープの両方を含み
得る。入れ子構造エピトープを提供する場合、１配列当たり最大数のエピトープ
を提供することが好ましい。好ましくは、ペプチド中のアミノ末端エピトープの
アミノ末端およびカルボキシル末端エピトープのカルボキシル末端よりいくらか
長いペプチドを提供するのを避けることである。入れ子構造エピトープを含む配
列を提供する場合、病理学的またはその他の有害な生物学的特性を有さないこと
を保証するために、配列を評価することが一般的に重要である；これは特に、感
染性生物に対するワクチンに関連する。

【０１４１】 ６．）ポリエピトープタンパク質が作製されるか、またはミニジーンを作製す
る場合、目的のエピトープを包含する最小ペプチドを生成することが一目的であ
る。この原理は、入れ子構造ペプチドを含むペプチドを選択する場合に用いられ
るのと同様でない場合には、類似する。しかしながら人工ポリエピトープペプチ
ドを用いる場合、サイズ最小化の目的物は、ポリエピトープタンパク質中のエピ
トープ間に任意のスペーサー配列を組み込む必要性に対して釣り合いをとられる
。スペーサーアミノ酸残基は、例えば結合（ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ）エピトープ
（免疫系により認識され、標的抗原中に存在せず、エピトープの人工並置によっ
てのみ作製されるエピトープ）を回避するために、あるいはエピトープ間の切断
を促し、それによりエピトープ提示を高めるために導入され得る。結合エピトー
プは一般に、回避される。なぜなら、レシピエントが非天然ペプチドに対して免
疫応答を生じ得るからである。特に重要なのは、「ドミナント（ｄｏｍｉｎａｎ
ｔ）エピトープ」である結合エピトープである。ドミナント（ｄｏｍｉｎａｎｔ
）エピトープは、他のエピトープに対する免疫応答が縮小されるかまたは抑制さ
れるような熱狂的な応答を引き起こし得る。

【０１４２】 （ＩＶ．Ｊ．１．ミニジーンワクチン） 多数のエピトープの同時送達を可能にする多数の異なるアプローチが利用可能
である。複数のエピトープをコードする核酸は、本発明の有用な実施形態である
；個々のペプチドまたはポリエピトープペプチドがコードされ得る。ミニジーン
に含入するためのエピトープは、好ましくは前節に記載した指針にしたがって選
択される。ミニジーンに含まれ得るアミノ酸配列の例として、以下が挙げられる
；ＨＬＡクラスＩエピトープ、ＨＬＡクラスＩＩエピトープ、ユビキチン付加シ
グナル配列、および／または生じたペプチドを小胞体（ＥＲ）へ移動させるのを
容易にする小胞体シグナル配列のような標的配列。

【０１４３】 多エピトープミニジーンの使用は、以下に、ならびに例えば米国同時係属出願
第０９／３１１，７８４号に記載されている；Ｉｓｈｉｏｋａ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３９１５−３９２５，１９９９、Ａｎ，Ｌ．ａｎ
ｄ Ｗｈｉｔｔｏｎ，Ｊ．Ｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：２２９２，１９９７、
Ｔｈｏｍｓｏｎ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：８２２
，１９９６、Ｗｈｉｔｔｏｎ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：
３４８，１９９３、Ｈａｎｋｅ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ １６：４
２６，１９９８。例えば、ＨＢＶおよびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のポリ
メラーゼ、エンベロープ、およびコアタンパク質由来のＨＬＡ−Ａ^＊０２０１制
限およびＡ１１制限ＣＴＬエピトープ、ＰＡＤＲＥ^ＴＭ汎用ヘルパーＴ細胞（Ｈ
ＴＬ）および小胞体転座シグナル配列をコードする多エピトープＤＮＡプラスミ
ドが、操作され得る。ワクチンは、ｐ５３エピトープのほかに、他のＴＡＡ由来
のエピトープも含む。このプラスミド構築物を用いるＨＬＡトランスジェニック
マウスの免疫化は試験された９つのＣＴＬエピトープに対する強いＣＴＬ誘導応
答を引き起こした。このＣＴＬ応答は、ヒトにおいて公知の免疫原性のリポペプ
チドを用いて観察されたものと類似であり、そして油ベースのアジュバンド中の
ペプチドを用いる免疫化よりも有意に大きかった。さらに、インビトロでＤＮＡ
がコードするエピトープの免疫原性はまた、このＤＮＡプラスミドを用いてトラ
ンスフェクトした標的細胞に対する特定のＣＴＬ株のインビトロでの応答と関連
した。これらのデータは、ミニジーンが、１）ＣＴＬ応答を生じるために、２）
細胞がコードされるエピトープを発現することを認識するＣＴＬを生じるために
役立つことを示す。同様のアプローチがミニジーンがコードするＴＡＡエピトー
プを発生させるために用いられる。

【０１４４】 例えば、ヒト細胞中での発現のための選択エピトープをコードするＤＮＡ配列
（ミニジーン）を作製するために、エピトープのアミノ酸配列は逆翻訳されても
よい。ヒトコドン使用法表は、各アミノ酸に対するコドン選択をガイドするため
に用いられ得る。これらのエピトープコードＤＮＡ配列は、翻訳される場合、連
続ポリペプチド配列が作られるように、直接隣接され得る。しかし、発現および
／または免疫原性を最適化するために、ミニジーン設計にさらなる要素（例えば
、エピトープ間のスペーサーアミノ酸残基）が組み込まれ得る。ＣＴＬおよびＨ
ＴＬエピトープのＨＬＡ提示は、ＣＴＬまたはＨＴＬエピトープに隣接する合成
（例えばポリアラニン）または天然に存在するフランキング配列を含入すること
により改善され得る。エピトープ（単数または複数）を含むこれらのより大きい
ペプチドは、本発明の範囲内である。

【０１４５】 ミニジーン配列は、ミニジーンのプラスおよびマイナス鎖をコードするオリゴ
ヌクレオチドを集合することによりＤＮＡに変換され得る。周知の技法を用いて
適切な条件下で、重複オリゴヌクレオチド（３０〜１００塩基長）が合成され、
リン酸化され、精製され、アニーリングされ得る。オリゴヌクレオチドの末端は
、例えばＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結される。次に、エピトープポリペプチ
ドをコードするこの合成ミニジーンは所望の発現ベクター中にクローン化され得
る。

【０１４６】 当業者に周知の標準調節配列は、好ましくは標的細胞中での発現を保証するた
めにベクター中に含入される。以下のようないくつかのベクター要素が望ましい
：ミニジーン挿入のための下流クローニング部位を有するプロモーター、効率的
転写終結のためのポリアデニル化シグナル、大腸菌複製起点、および大腸菌選択
可能マーカー（例えばアンピシリンまたはカナマイシン耐性）。この目的のため
に、例えばヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）プロモーターのような多数の
プロモーターが用いられ得る。他の適切なプロモーター配列に関しては、例えば
米国特許第５，５８０，８５９号および第５，５８９，４６６号を参照されたい
。

【０１４７】 最適化されたペプチド発現および免疫原性は、ミニジーン構築物に対する特定
の修飾によって達成され得る。例えば、いくつかの場合、効率的遺伝子発現のた
めにイントロンが必要であり、１つ以上の合成または天然に存在するイントロン
が、ミニジーンの転写領域に組み込まれ得る。哺乳類細胞におけるｍＲＮＡ安定
化配列および複製用配列の含入もまた、ミニジーン発現増大のために考慮され得
る。

【０１４８】 いったん発現ベクターが選択されれば、ミニジーンはプロモーターの下流のポ
リリンカー領域にクローン化される。このプラスミドは、適切な大腸菌株中で形
質転換され、標準技法を用いてＤＮＡが調製される。ミニジーンの配向およびＤ
ＮＡ配列、ならびにベクター中に含入されるすべてのその他の要素が、制限マッ
ピングおよびＤＮＡ配列分析を用いて確認される。正しいプラスミドを保有する
細菌細胞は、細胞バンクとして貯蔵され得る。

【０１４９】 さらに、免疫刺激配列（ＩＳＳまたはＣｐＧ）は、ＤＮＡワクチンの免疫原性
にて役割を果たすようである。これらの配列は、免疫原性を強化するためにミニ
ジーンコード配列の外側の、ベクター中に含入され得る。

【０１５０】 いくつかの実施形態では、ミニジーンにコードされるエピトープおよび第二の
タンパク質（免疫原性改変するタンパク質）の両方の産生を可能にする２シスト
ロン発現ベクターが用いられ得る。エピトープを同時発現された場合に、免疫応
答を高め得るタンパク質またはポリペプチドの例としては、サイトカイン（例え
ば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ）、サイトカイン誘導性分子（例えば
ＬｅＩＦ）、同時刺激分子、ｐａｎ−ＤＲ結合タンパク質（ＰＡＤＲＥ^ＴＭ、Ｅ
ｐｉｍｍｕｎｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）が挙げられる。ＰＡＤＲＥ分子の
ようなヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ）エピトープは、細胞内標的化シグナルに連結さ
れ、発現ＣＴＬとは別個に発現される。これは、ＣＴＬエピトープの場合と異な
る細胞区画へのＨＴＬエピトープを向かわせるためになされる。必要な場合、こ
れはＨＬＡクラスＩＩ経路へのＨＴＬエピトープのより効率的侵入を促し、それ
によりＨＴＬ誘導を改良し得る。ＨＴＬまたはＣＴＬ誘導に対比して、免疫抑制
分子（例えばＴＧＦ−β）の同時発現による免疫応答の特異的低減は、特定の疾
患においては有益であり得る。

【０１５１】 治療的量のプラスミドＤＮＡは、例えばＥ．ｃｏｌｉにおける発酵、続く精製
により生産され得る。作業用細胞バンクからのアリコートを用いて、増殖培地に
接種し、周知の技法にしたがって振盪フラスコまたはバイオリアクター中で飽和
するまで増殖させる。プラスミドＤＮＡは、標準生物分離技法（例えばＱＩＡＧ
ＥＮ，Ｉｎｃ．（Ｖａｌｅｎｃｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により供給される
固相陰イオン交換樹脂）を用いて精製され得る。必要な場合、ゲル電気泳動また
はその他の方法を用いて、スーパーコイルＤＮＡが開環および線状形態から単離
され得る。

【０１５２】 精製プラスミドＤＮＡは、種々の処方物を用いた注射用に調製され得る。これ
らのうち最も簡単なのは、滅菌リン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中での凍結
乾燥されたＤＮＡの再構成である。「裸のＤＮＡ」として公知のこのアプローチ
は、現在は臨床試験における筋肉内（ＩＭ）投与用に用いられている。ミニジー
ンワクチンの免疫治療効果を最大にするためには、精製プラスミドＤＮＡを処方
するための代替的方法が用いられ得る。種々の方法が記載されており、新規の技
法が利用可能であり得る。カチオン性脂質、糖脂質およびフソゲン性（ｆｕｓｏ
ｇｅｎｉｃ）リポソームも処方物中に用いられ得る（例えば、国際公開９３／２
４６４０；Ｍａｎｎｉｎｏ ＆ Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅ，Ｂｉｏ Ｔｅ
ｃｈｎｉｑｕｅｓ ６（７）：６８２ （１９８８）、米国特許第５，２７９，
８３３号、国際公開９１／０６３０９およびＦｅｌｇｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒ
ｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３ （１９８７）参照
）。さらに、総称して保護的、相互作用的、非縮合化合物（ＰＩＮＣ）と呼ばれ
るペプチドおよび化合物もまた、精製プラスミドＤＮＡと複合体化されて、安定
性、筋肉内分散または特定の器官または細胞型への輸送のような変数（変量）に
影響を及ぼし得る。

【０１５３】 標的細胞感作は、ミニジーンコードＣＴＬエピトープの発現およびＨＬＡクラ
スＩ提示に関する機能性アッセイとして用いられ得る。例えばプラスミドＤＮＡ
は、標準ＣＴＬクロム放出アッセイのための標的として適した哺乳類細胞系中に
導入される。用いられるトランスフェクション方法は、最終処方物に依存するで
あろう。エレクトロポレーションは、「裸の」ＤＮＡのために用いられ、一方、
カチオン性脂質は、直接インビトロトランスフェクションを可能にする。グリー
ン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するプラスミドは、同時トランスフェクトさ
れて、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を用いたトランスフェクトされた細胞の
富化を可能にする。これらの細胞は次に、クロム−５１（^５１Ｃｒ）標識されて
、エピトープ特異的ＣＴＬ系に対する標的細胞として用いられる。^５１Ｃｒ放出
により検出される標的細胞の細胞溶解物は、ミニジーンコードＣＴＬエピトープ
の産生およびＨＬＡ提示の両方を示す。ＨＴＬエピトープの発現は、ＨＴＬ活性
を評価するためのアッセイを用いて同様の方法で評価され得る。

【０１５４】 インビボ免疫原性は、ミニジーンＤＮＡ処方物の機能性試験のための第２のア
プローチである。適切なヒトＨＬＡタンパク質を発現するトランスジェニックマ
ウスは、ＤＮＡ産物で免疫化される。投与の用量および経路は、処方物依存性で
ある（例えばＰＢＳ中のＤＮＡに関してはＩＭ、脂質複合化ＤＮＡに関しては腹
腔内（ＩＰ））。免疫化後１１〜２１日目に、脾臓細胞を収集し、試験される各
エピトープをコードするペプチドの存在下で１週間再刺激した。その後、ＣＴＬ
に関しては、標準のアッセイを実施して、ペプチドが充填された、^５１Ｃｒ標識
された標的細胞の細胞溶解物が存在するかどうかを決定する。再度、ミニジーン
におけるエピトープに対応するエピトープに曝された標的細胞の溶解物は、ＤＮ
Ａワクチンの機能およびＣＴＬの誘導を実証する。ＨＴＬエピトープの免疫原性
は、類似の様式でトランスジェニックマウスにおいて評価される。

【０１５５】 あるいは、核酸は、例えば米国特許第５，２０４，２５３号に記載されるよう
に弾道送達を用いて投与され得る。この技法を用いて、ＤＮＡ単独で構成される
粒子が投与される。弾道送達に関するさらなる代替的実施形態では、ＤＮＡは粒
子、例えば金粒子に付着される。

【０１５６】 （ＩＶ．Ｊ．２．ＣＴＬペプチドのヘルパーペプチドとの組合せ） 本発明のＣＴＬペプチドを含むワクチン組成物は、所望の属性、例えば血清半
減期の改良を提供するために、集団適用範囲を広げるために、あるいは免疫原性
を高めるために改変してもよい。

【０１５７】 例えば、ペプチドがＣＴＬ活性を誘導する能力は、少なくとも１つのＨＴＬエ
ピトープを含有する配列にＣＴＬペプチドを連結することにより高められ得る。
免疫原性を高めるためのＣＴＬエピトープを伴うＴヘルパーエピトープの使用は
、例えば米国同時係属出願第０８／８２０，３６０号、第０８／１９７，４８４
号および第０８／４６４，２３４号に説明されている。

【０１５８】 ＣＴＬペプチドは、Ｔヘルパーペプチドに直接連結され得るが、特に好ましく
は、ＣＴＬエピトープ／ＨＴＬエピトープ結合体はスペーサー分子により連結さ
れる。スペーサーは典型的には、生理学的条件下で実質的に荷電されない、比較
的小型の中性分子、例えばアミノ酸またはアミノ酸擬似体で構成される。スペー
サーは、典型的には、例えばＡｌａ、Ｇｌｙ、または非極性アミノ酸または中性
極性アミノ酸のその他の中性スペーサーから選択される。任意に存在するスペー
サーは同一残基で構成される必要はなく、したがってヘテロまたはホモオリゴマ
ーであってもよいと理解される。存在する場合、スペーサーは通常、少なくとも
１つまたは２つの残基、さらに通常は３〜１３の残基、より頻繁には３〜６の残
基であろう。ＣＴＬペプチドエピトープは、直接またはスペーサーを介して、Ｃ
ＴＬペプチドのアミノまたはカルボキシ末端でＴヘルパーペプチドエピトープに
連結され得る。ＣＴＬペプチドまたはＨＴＬペプチドのいずれかのアミノ末端は
、アシル化されてもよい。

【０１５９】 ある種の実施形態では、Ｔヘルパーペプチドは、大多数の集団中に存在するＴ
ヘルパー細胞により認識されるものである。これは多数の、ほとんどの、または
全てのＨＬＡクラスＩＩ分子に結合するアミノ酸配列を選定することにより成し
遂げられ得る。これらは「ゆるくＨＬＡ拘束された」または「混然とした」Ｔヘ
ルパー配列として既知である。混然としたアミノ酸配列の例としては、位置８３
０〜８４３（ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥ；配列番号２６）での破傷風毒素、
位置３７８〜３９８（ＤＩＥＫＫＬＡＫＭＥＫＡＳＳＶＦＮＶＶＮＳ；配列番号
２７）でのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（熱帯熱マラリア原虫
）スポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質、および位置１１６（ＧＡＶＤＳＩＬＧ
ＧＶＡＴＹＧＡＡ；配列番号２８）でのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（連鎖球菌
）１８ｋＤタンパク質のような抗原からの配列が挙げられる。その他の例として
は、ＤＲ１−４−７スーパーモチーフ、またはＤＲ３モチーフのいずれかを保有
するペプチドが挙げられる。

【０１６０】 あるいは、天然には見出されないアミノ酸配列を用いて、ゆるくＨＬＡ拘束さ
れた様式で、Ｔヘルパーリンパ球を刺激し得る合成ペプチドを調製することがで
きる。合成化合物は、ｐａｎ−ＤＲ結合エピトープ（例えばＰＡＤＲＥ（商標）
、Ｅｐｉｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と呼ばれる分子の
ファミリーに入る。ＰＡＤＲＥ^ＴＭペプチドは、多様のＨＬＡ−ＤＲ（ヒトＨＬ
ＡクラスＩＩ）分子を結合するよう設計される。例えば、次式：ａＫＸＶＡＡＺ
ＴＬＫＡＡａ（式中、「Ｘ」はシクロヘキシルアラニン、フェニルアラニンまた
はチロシンであり、「Ｚ」はトリプトファン、チロシン、ヒスチジンまたはアス
パラギンのいずれかであり、そして「ａ」はＤ−アラニンまたはＬ−アラニンで
ある（配列番号９））を有するｐａｎ−ＤＲ結合エピトープペプチドは、多数の
対立遺伝子特異的ＨＬＡ−ＤＲ分子に結合することが見出された。従って、それ
らのＨＬＡ型とは関係なく、ほとんどの個体からのＴヘルパーリンパ球の応答を
刺激することが判明した。特定のｐａｎ−ＤＲ結合エピトープは、全ての「Ｌ」
型天然アミノ酸を含み、これらの分子は、ペプチドとしてかまたはペプチドをコ
ードする核酸の形態で提供され得る。

【０１６１】 ＨＴＬペプチドエピトープも、それらの生物特性を改変するよう修飾され得る
。ＨＴＬペプチドエピトープは、ＣＴＬペプチドと同じ様式で改変され得る。例
えばそれらは、Ｄ−アミノ酸を含入するよう修飾され得るか、あるいは脂質、タ
ンパク質、炭水化物等のようなその他の分子と結合され得る。Ｄ−アミノ酸を含
むペプチドは、一般的にプロテアーゼに対する増加した耐性を有し、従って、延
長した血清半減期を有する。

【０１６２】 さらに、本発明のペプチドは、それらの生物学的活性を増加するために、脂質
、タンパク質または糖のような他の分子、または任意の他の合成化合物に対して
結合され得る。例えば、Ｔヘルパーペプチドは、アミノまたはカルボキシル末端
で、１つまたはそれ以上のパルミチン酸鎖と結合され得る。

【０１６３】 （ＩＶ．Ｊ．３．Ｔ細胞プライミング剤とのＣＴＬペプチドの組合せ） いくつかの実施形態では、細胞傷害性Ｔリンパ球をプライミングする少なくと
も１つの構成成分を本発明の薬学的組成物中に含むのが望ましい。脂質はウイル
ス抗原に対してインビボでＣＴＬ応答をプライミングし得る作用物質であると同
定されている。例えば、パルミチン酸残基は、リシン残基のεおよびα−アミノ
基に結合され、次に１つまたはそれ以上の連結残基、例えばＧｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ等を介して免疫原性ペプチドに連結される。次
に脂質化ペプチドは、ミセルまたは粒子中に直接投与され、リポソーム中に組み
込まれるか、あるいはアジュバント、例えば不完全フロイントアジュバント中で
乳化され得る。好ましい免疫原性組成物は、Ｌｙｓのε−およびα−アミノ基に
結合されるパルミチン酸を含み、これは、結合（例えばＳｅｒ−Ｓｅｒ）を介し
て免疫原性ペプチドのアミノ末端に結合される。

【０１６４】 ＣＴＬ応答の脂質プライミングの別の例として、大腸菌リポタンパク質、例え
ばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリル−セリン（Ｐ_３ＣＳＳ
）は、適切なペプチドと共有結合される場合、ウイルス特異的ＣＴＬをプライミ
ングするために用いられ得る（例えば、Ｄｅｒｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：
５６１，１９８９参照）。従って、本発明のペプチドは、例えば標的抗原に対す
るＣＴＬ応答を特異的にプライミングするために個体に投与されるリポペプチド
であるＰ_３ＣＳＳに結合され得る。さらに中性抗体の誘導も、Ｐ_３ＣＳＳ結合エ
ピトープでプライミングされ得る。２つのこのような組成物は、より効率的に体
液および細胞媒介性応答を引き出すために併合され得る。

【０１６５】 （ＩＶ．Ｊ．４．ＣＴＬおよび／またはＨＴＬペプチドでパルス化された樹状
細胞を含むワクチン組成物） 本発明のワクチン組成物の実施形態は、エピトープ保有ペプチドのカクテルを
患者血液からＰＢＭＣまたはそこからの単離ＤＣへエキソビボで投与することを
包含する。ＤＣの収集を促すための薬剤、例えばＰｒｏｇｅｎｉｐｏｉｅｔｉｎ
（商標）（Ｍｏｎｓａｎｔｏ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）またはＧＭ−ＣＳＦ／
ＩＬ−４が用いられ得る。ペプチドを用いて、ＤＣをパルス化後、かつ患者への
再注入前にＤＣを洗浄して非結合ペプチドを除去する。この実施形態では、ワク
チンは、それらの表面にＨＬＡ分子と複合体を形成するパルス化ペプチドエピト
ープを提示するペプチドパルス化ＤＣを含む。

【０１６６】 ＤＣを、ペプチドのカクテルを用いてエキソビボでパルス化することができ、
そのうちのいくつかが１つまたはそれ以上の目的の抗原、例えば、Ｈｅｒ２／ｎ
ｅｕ、ｐ５３、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３および／または癌胎児性抗原（ＣＥＡ）
のような腫瘍関連抗原を刺激する。集団的に、これらのＴＡＡは、乳癌、結腸癌
および肺癌と関連している。必要に応じて、ＰＡＤＲＥのようなヘルパーＴ細胞
（ＨＴＬ）ペプチドは、ＣＴＬ反応を容易にするために含まれ得る。従って、Ｈ
ＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ５３、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３、および癌胎児性抗原（ＣＥ
Ａ）由来のエピトープを含む本発明のワクチンを使用して、乳癌、結腸癌または
肺癌のような悪性腫瘍を有する患者における最小限または残りの疾患を処置する
；これらのＴＡＡのいずれかを保有する任意の悪性腫瘍がまた、ワクチンを使用
して処置され得る。ＴＡＡワクチンは、手術、放射線治療または化学療法のよう
な手順に従って使用され得、ここで、ワクチンは、レシピエント中に無疾患生存
および全体的な生存を増加する利点を提供する。

【０１６７】 従って、好ましい実施形態において、本発明のワクチンは、多数の異なった腫
瘍型を横断して多数の患者を処置する産物である。多数のエピトープを含むワク
チン、好ましくは、スーパーモチーフ保有エピトープは、このような利点を提供
する。

【０１６８】 （ＩＶ．Ｋ．治療または予防用途のためのワクチンの投与） 本発明のペプチド（その薬学的粗製物およびワクチン組成物を含む）は、疾患
を処置および／または予防するために、哺乳動物、特にヒトに投与するために有
用である。１つの実施形態において、本発明のワクチン組成物（ペプチドまたは
核酸）は、１つ以上のＴＡＡの発現に関する悪性腫瘍を有する患者か、またはＴ
ＡＡ関連疾患に罹患しているかまたはこれを発症する危険性のある個体に投与さ
れる。投与の際に免疫応答がＴＡＡに対して誘発され、それによって、患者自身
の免疫応答能力を増強する。治療学的適用において、ペプチドおよび／または核
酸組成物が、ＴＡＡ発現細胞に対して効果的な免疫応答を誘発するのに十分な量
で患者に投与され、それによって、症状および／または合併症を治療、停止また
は遅延させる。これを達成するのに適切な量を「治療学的有効用量」として定義
する。この使用のために有効な量は、例えば、投与される特定の組成物、投与様
式、処置される疾患の段階および重篤度、患者の体重および健康の一般的状態、
ならびに処方医の判断に依存する。

【０１６９】 本発明のワクチン組成物は、純粋に予防剤として使用され得る。一般的に、最
初の予防免疫のための用量は、低い値がペプチドの約１、５、５０、５００、ま
たは１０００μｇであり、そして、高い値が、ペプチドの約１０，０００；２０
，０００；３０，０００；または５０，０００μｇである単回用量で生じる。ヒ
トための用量値は、７０キログラムの患者あたり、ペプチドの約５００μｇ〜約
５０，０００μｇまで代表的に変化する。これは、最初のワクチン投与後約４週
間〜６か月の規定の間隔で投与される、ペプチドの約１．０μｇと５０，０００
μｇとの間の用量をブーストすることが後に続く。このワクチンの免疫原性を、
患者の血液のサンプルから得られたＣＴＬおよびＨＴＬの特異的活性を測定する
ことによってアッセイし得る。

【０１７０】 上記のように、本発明のＣＴＬおよび／またはＨＴＬエピトープを含むペプチ
ドは、ＨＬＡ分子により提示され、ペプチドにより構成されるエピトープに特異
的なＣＴＬまたはＨＴＬと接触されると、免疫応答を誘導する。ペプチドがＣＴ
ＬまたはＨＴＬと接触される方法は、本発明にとっては重要でない。例えばペプ
チドはインビトロまたはインビボでＣＴＬまたはＨＴＬと接触され得る。接触が
インビボで起こる場合、ペプチドは直接患者に投与されるか、あるいはその他の
形態／ビヒクル、例えば１つまたはそれ以上のペプチドをコードするＤＮＡベク
ター、ペプチド（単数または複数）をコードするウイルスベクター、リポソーム
、樹状細胞のような抗原提示細胞等が、本明細書中に記載されているように用い
られ得る。

【０１７１】 従って、ペプチドまたはポリペプチドの形態の本発明の薬学的組成物について
、ペプチドまたはポリペプチドが直接投与されるか、あるいは、ペプチド／ポリ
ペプチドは、ＡＰＣ上に間接的に提示されるか、またはそれらをコードするＤＮ
Ａとして投与され得る。さらに、それらをコードするペプチドまたはＤＮＡは、
個々に投与され得るか、または１つ以上のペプチド配列の融合体として投与され
得る。

【０１７２】 治療的使用に関しては、投与は一般に、ＴＡＡ関連疾患の初回診断時に開始す
べきである。この後、少なくとも症状が実質的に軽減されるまで、そしてその後
一定期間、用量をブーストさせる。慢性疾患状態においては、ブースト用量の後
のローディング用量が必要であり得る。

【０１７３】 初回治療的免疫化のための用量は一般に、低いほうの値がペプチド約１、５、
５０、５００または１，０００μｇであり、高い方の値がペプチド約１０，００
０、２０，０００、３０，０００、または５０，０００μｇである単位用量範囲
である。ヒトのための用量値は、代表的には体重７０ｋｇの患者につき約５００
μｇ〜約５０，０００μｇ範囲である。数週間〜数ヶ月間にわたるブーストレジ
メンにしたがって約１．０μｇ〜約５０，０００μｇのペプチドのブースト用量
が、患者の応答および条件に依存して投与され得る。患者の応答は、患者の血液
から得られたＣＴＬおよびＨＴＬの特異的な活性を測定することによって決定さ
れる。

【０１７４】 ある実施形態では、本発明のペプチドおよび組成物は、重篤な疾患状態で用い
られる。このような場合、ペプチドの最小量の外来物質および比較的に無毒性の
ペプチドの結果、これらの規定用量と比較して実質的に過剰量のこれらのペプチ
ド組成物を投与することができる。

【０１７５】 慢性疾患の処置について、上記の範囲における代表的な用量は、主に低いほう
の値がペプチド約１、５、５０、５００または１，０００μｇであり、高い方の
値がペプチド約１０，０００、２０，０００、３０，０００、または５０，００
０μｇであり、好ましくは、体重７０ｋｇの患者につき約５００μｇ〜約５０，
０００μｇ範囲である。例えば、４週間〜６ヶ月間にわたる確立された間隔で、
ブースト用量にしたがう初回用量が、おそらく、個体を効果的に免疫化するため
に延長した期間、必要とされ得る。慢性疾患の場合には、少なくとも臨床的症状
または研究室試験が、疾患が除去されたかもしくは実質的に除去されることを示
すまで、そしてその後の追跡調査期間の間、投与を続けるべきである。この用量
、投与経路、および投薬スケジュールは、当該分野で公知の方法論に従って調整
される。

【０１７６】 治療的処置のための薬学的組成物は、非経口的、局所的、経口的、鞘内または
限局投与を意図される。好ましくは薬学的組成物は、非経口的に、例えば静脈内
、皮下、皮内または筋肉内に投与される。

【０１７７】 従って、好ましい実施形態において、本発明は、受容可能なキャリア、好まし
くは水性キャリア中に溶解または懸濁される免疫原性ペプチドの溶液を含む非経
口投与用の組成物を提供する。種々の水性キャリア、例えば水、緩衝化水、０．
８％食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸等が用いられ得る。これらの組成
物は、慣用的周知の滅菌技法により滅菌され得るし、あるいは滅菌濾過され得る
。その結果生じる水溶液は、そのままで用いるために包装されるか、あるいは凍
結乾燥され、凍結乾燥調製物は投与前に滅菌溶液と併合される。組成物は、生理
学的条件に近似していることが要求される薬学的に受容可能な補助物質または薬
学的に受容可能な賦形剤、例えばｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、湿潤剤
、防腐剤等、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオ
レエート等を含有し得る。

【０１７８】 薬学的処方物中の本発明のペプチドの濃度は広範に、即ち約０．１％未満、通
常少なくとも約２重量％から、２０重量％〜５０重量％またはそれ以上の範囲で
変わり得、選定された特定の投与形態にしたがって、主として流体容積、粘度な
どにより選定される。

【０１７９】 ペプチド組成物のヒト単位用量形態は、代表的には、ヒト単位用量の受容可能
なキャリア、好ましくは水性キャリアを含む薬学的組成物中に含入され、そして
ヒトへのこのような組成物の投与のために用いられることが当業者に既知である
流体の容積中に投与される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）Ｍａ
ｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉ
ａ，１９８５参照）。

【０１８０】 本発明のペプチドは、特定の組織、例えばリンパ系組織に対してペプチドを標
的にするのに、あるいは感染細胞に対して選択的に標的にするのに、ならびにペ
プチド組成物の半減期を増大するのに役立つリポソームを介しても投与され得る
。リポソームは、エマルジョン、発泡体、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質
分散液、ラメラ層等を含む。これらの調製物中では、送達されるペプチドはリポ
ソームの一部として、単独で、またはリンパ系細胞、例えばＣＤ４５抗原に結合
するモノクローナル抗体間に広く存在している受容体に結合する分子と一緒に、
あるいはその他の治療用または免疫原性組成物と一緒に、組入れられ得る。した
がって、本発明の所望のペプチドを充填されるかまたはそれで修飾されるリポソ
ームはリンパ系細胞の部位に向けられて、そこでリポソームは次に、ペプチド組
成物を送達する。本発明にしたがって用いるためのリポソームは、標準小胞形成
脂質から形成され、これは一般に中性および負荷電リン脂質、ならびにステロー
ル、例えばコレステロールを含む。脂質の選定は一般に、例えばリポソームサイ
ズ、酸の不安定性および血流中のリポソームの安定性を考察することにより導き
出される。リポソームを調製するためには、例えば、Ｓｚｏｋａら、Ａｎｎ．Ｒ
ｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７ （１９８０）および米国特
許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号、第４，８３７，０２８号
および第５，０１９，３６９号に記載されているような種々の方法が利用可能で
ある。

【０１８１】 免疫系の細胞を標的化するために、リポソーム中に組入れられるリガンドとし
ては、例えば所望の免疫系細胞の細胞表面決定基に特異的な抗体またはそれらの
断片が挙げられる。ペプチドを含有するリポソーム懸濁液は、静脈内、限局的、
局所的等で、とりわけ、投与の様式、送達されるペプチドおよび処置される疾患
の病期によって変わる用量で、投与され得る。

【０１８２】 固体組成物に関しては、従来の無毒性固体キャリアが用いられ、その例として
は、例えば製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグ
ネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロ
ース、炭酸マグネシウム等が挙げられる。経口投与に関しては、薬学的に受容可
能な無毒性組成物が、通常で用いられる賦形剤、例えば上記キャリアのいずれか
、一般的に１０〜９５％の活性成分、即ち本発明の１つまたはそれ以上のペプチ
ドを、ならびにしばしば２５％〜７５％の濃度で組み込むことにより形成される
。

【０１８３】 エアロゾル投与に関しては、免疫原性ペプチドは好ましくは界面活性剤および
噴射剤と一緒に、微粉砕形態で供給され得る。ペプチドの代表的パーセンテージ
は、０．０１重量％〜２０重量％、好ましくは１重量％〜１０重量％である。界
面活性剤は、もちろん薬学的に受容可能であり、好ましくは噴射剤中に可溶であ
る。このような物質の代表例は、６〜２２個の炭素原子を含有する脂肪酸、例え
ばカプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、オレステリック酸（ｏｌｅｓｔｅｒｉｃ ａｃｉｄ）、オレ
イン酸の、脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物とのエステルまたは部分
エステルである。混合エステル、例えば混合または天然グリセリドが用いられ得
る。界面活性剤は、組成物の０．１重量％〜２０重量％、好ましくは０．２５重
量％〜５重量％を構成し得る。組成物の残余物は、普通は噴射剤であるが、噴霧
器は噴霧剤が必要でなく、従って他の割合が調整される場合に使用され得る。例
えば鼻腔内送達のためのレシチンのような、キャリアもまた含まれ得る。

【０１８４】 本発明の抗原性ペプチドは、エキソビボにおいてもＣＴＬおよび／またはＨＴ
Ｌ反応を誘発するために使用されてきた。得られたＣＴＬまたはＨＴＬを使用し
て、慢性的感染、または治療の他の慣例的な形態に反応しない患者、または本発
明に従う治療ペプチドもしくは核酸ワクチンに反応しない患者における腫瘍を処
置し得る。特定の抗原に対するエキソビボＣＴＬまたはＨＴＬ反応（感染性また
は腫瘍関連性）は、患者の組織培養においてインキュベートすること、または遺
伝的に親和性である抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞）の供給源およ
び適切な免疫原ペプチドと共にＣＴＬまたはＨＴＬ前駆細胞をインキュベートす
ることによって誘導される。適切なインキュベーション時間後（代表的には、約
７〜２８日）（このとき、前駆細胞は活性化されそしてエフェクター細胞へと膨
張する）、細胞は、患者中へと注入し戻され、ここで、それらは、それらの特異
的標的細胞（感染した細胞または腫瘍細胞）を破壊する（ＣＴＬ）かまたは破壊
を容易にする（ＨＴＬ）。

【０１８５】 （ＩＶ．Ｌ．ＨＬＡ発現：Ｔ細胞ベースの免疫療法に対する関連） （癌および感染性疾患における疾患進行） 動的相互作用が、癌および感染性疾患の設定の両方において宿主および疾患間
に存在することは十分認識されている。感染性疾患の設定では、病原体が疾患中
に進化するいうことは十分確定されている。ＨＩＶ感染において初期に優勢であ
る菌株は、ＡＩＤＳおよび後期疾患段階に関連するものとは異なる（ＮＳ対Ｓ菌
株）。感染の確立において有効である病原体形態は、複製および慢性に関して最
も有効であるものとは異なり得ることが長い間仮定されてきた。

【０１８６】 同様に、個体が新生物性疾患に屈する病理プロセスは複雑であることが広範に
認識されている。疾患の経過中、多数の変化が癌細胞中で起こる。腫瘍は、増殖
および分化の機能不全調節に部分的に関連するが、その増殖能力を最大にするこ
とにも関連し、薬剤治療および／または身体の免疫監視から逃れる変異を蓄積す
る。新生物性疾患は、疾患進行の関数としての癌細胞のいくつかの異なる生化学
的変化の蓄積を生じる。それは、特に後期転移期において、有意レベルの癌内お
よび癌間異質性も生じる。

【０１８７】 治療結果に影響を及ぼす細胞変化のよく知られた例としては、治療経過中の放
射線または化学療法耐性腫瘍の進展が挙げられる。これらの例は、攻撃的化学療
法の結果としての薬剤耐性ウイルス株の出現、例えば慢性ＨＢＶおよびＨＩＶ感
染の出現、ならびに結核およびマラリアを引き起こす薬剤耐性生物の現行の復活
と並行している。応答の有意の異質性は、癌療法に対するその他のアプローチ、
例えば抗血管新生剤、受動抗体免疫療法、および活性Ｔ細胞ベースの免疫療法に
も関連する。したがって、このような現象の点から見て、多疾患関連抗原からの
エピトープはワクチンおよび治療薬に用いられることができ、それにより、突然
変異を生じ治療を逃れる疾患細胞の能力を妨害する。

【０１８８】 （疾患と免疫系の間の相互作用） 宿主と疾患の間の動的相互作用に関与する主な因子のうちの１つが、病原体，
感染細胞または悪性疾患細胞に対して立ち上げられる免疫応答である。多数の症
状において、このような免疫応答は疾患を制御する。いくつかの動物モデル系お
よびヒトにおける自然感染の期待される研究は、病原体に対する免疫応答が病原
体を制御し、重症疾患への進行を防止し、および／または病原体を排除し得るこ
とを示唆する。共通の主題は、多特異的Ｔ細胞応答に関する要件であり、狭い範
囲に集中する応答は有効性が低いと思われる。これらの観察は、広範な免疫応答
を提供する本発明の方法および組成物の実施形態に関して当業者に指針を示す。

【０１８９】 癌の場合、免疫応答が新生物増殖に影響を及ぼし得ることを示す以下のような
いくつかの知見が認められる： 第一に、多数の異なる動物モデルにおける、ＭＨＣクラスＩにより拘束される
抗腫瘍Ｔ細胞が腫瘍を防止し、または治療することが可能であるという証拠。

【０１９０】 第二に、有望な結果が免疫療法試験から得られた。

【０１９１】 第三に、自然疾患の経過中に成された観察が腫瘍内のＴ細胞浸潤の型および組
成を陽性臨床結果と相関させた（Ｃｏｕｌｉｅ ＰＧら、Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ
ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｔ ｗｏｒｋ ｉｎ ａ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅ
ｎｔ Ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２１
３−２４２，１９９９）。

【０１９２】 最後に、腫瘍は一般的に、突然変異を引き起こし、それによりそれらの免疫学
的認識を変える能力を有する。例えば、単一特異的ＣＴＬの存在は、抗原損失が
発生するまで、腫瘍増殖の制御にも相関した（Ｒｉｋｅｒ Ａら、Ｉｍｍｕｎｅ
ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｍ
ｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｅｌａｎｏｍａ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ａｕｇ；
１２６（２）：１１２−２０，１９９９；Ｍａｒｃｈａｎｄ Ｍら、Ｔｕｍｏｒ
ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉ
ｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ
ａｎ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｇｅｎｅ
ＭＡＧＥ−３ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｂｙ ＨＬＡ−Ａ１ Ｉｎｔ
．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８０（２）：２１９−３０，Ｊａｎ．１８，１９９９）。
同様に、β２ミクログロブリンの損失が、ＮＣＩで免疫療法を受けた後の黒色腫
患者から確立された５／１３株で検出された（Ｒｅｓｔｉｆｏ ＮＰら、Ｌｏｓ
ｓ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｂｅｔａ２−ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａｓ ｆｒｏｍ ｆｉｖｅ ｐａ
ｔｉｅｎｔｓ ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，
Ｖｏｌ．８８（２），１００−１０８，Ｊａｎ．１９９６）。ＨＬＡクラスＩは
種々の腫瘍型で高頻度に変更される、ということが長い間認識されてきた。これ
は、クラスＩ拘束ＣＴＬにより腫瘍に加えれる免疫圧力をこの現象が反映し得る
、という仮説をもたらした。ＨＬＡクラスＩ発現の変更の範囲および程度は、過
去の免疫圧力を反映するものであると思われ、予後値も有し得る（ｖａｎ Ｄｕ
ｉｎｅｎ ＳＧら、Ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＨＬＡ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｉｎ ｌｏ
ｃｏｒｅｇｉｏｎａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃ
ｏｕｒｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔ
ｈ ｍｅｌａｎｏｍａ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４８，１０１９−１
０２５，Ｆｅｂ．１９８８；Ｍｏｌｌｅｒ Ｐら、Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ
ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａ
ｓｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ
ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
５１，７２９−７３６，Ｊａｎ．１９９１）。合わせて考えると、これらの観
察は癌および感染性疾患の免疫療法の根拠を提供し、そして有効な戦略は、疾患
に関連した一連の複雑な病理学的変化を説明する必要があることを示唆する。

【０１９３】 （腫瘍におけるＨＬＡ発現の３つの主な型の変化ならびにそれらの機能的意味
） 腫瘍におけるＨＬＡクラスＩ抗原の発現のレベルおよびパターンは、多数の異
なる腫瘍型で研究されており、研究された腫瘍の全ての型において変化が報告さ
れている。ＨＬＡクラスＩ変化の基礎を成す分子メカニズムは、全く異質である
ことを立証した。それらは、ＴＡＰ／プロセシング経路の変化、β２−ミクログ
ロブリンおよび特異的ＨＬＡ重鎖の突然変異、クラスＩ発現を制御する調節エレ
メントの変化、ならびに全染色体区分の損失を包含する。この題目に関するいく
つかの総説がある（例えば、Ｇａｒｒｉｄｏ Ｆら、Ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔ
ｏｒｙ ｏｆ ＨＬＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｕｍｏｕｒ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １４（１０）：４９１
−４９９，１９９３；Ｋａｋｌａｍａｎｉｓ Ｌら、Ｌｏｓｓ ｏｆ ＨＬＡ
ｃｌａｓｓ−Ｉ ａｌｌｅｌｅｓ，ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎｓ ａｎｄ β２−
ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ Ｉ
ｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５１（３）：３７９−８５，Ｍａｙ ２８，１９９２
参照）。ＨＬＡクラスＩ変化には３つの主な型が存在する（完全損失、対立遺伝
子特異的損失および発現低減）。各変化の機能的意味は別個に考察される。

【０１９４】 （ＨＬＡ発現の完全損失） ＨＬＡ発現の完全損失は、種々の異なる分子メカニズムに起因し得る。それら
については以下の文献で概説されている（Ａｌｇａｒｒａ Ｉら、Ｔｈｅ ＨＬ
Ａ ｃｒｏｓｓｒｏａｄ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｈｕｍａ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６１，６５−７３，２０００；Ｂｒｏｗｎｉｎｇ
Ｍら、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｌｏｓｓ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ
ｓ Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ４７：３６４−３７１，１９９６；Ｆｅ
ｒｒｏｎｅ Ｓら、Ｌｏｓｓ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ ａｎｔｉｇｅｎ
ｓ ｂｙ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎ
ｉｓｍｓ，ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ａｎｄ ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１６（
１０）：４８７−４９４，１９９５；Ｇａｒｒｉｄｏ Ｆら、Ｎａｔｕｒａｌ
ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ＨＬＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｕｍ
ｏｕｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ １４（
１０）：４９１−４９９，１９９３；Ｔａｉｔ，ＢＤ，ＨＬＡ Ｃｌａｓｓ Ｉ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ：Ｉｍ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａ
ｐｙ Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６１，１５８−１６５，２０００）。機能に関
して、この型の変化はいくつかの重要な意味を有する。

【０１９５】 クラスＩ発現の完全非存在はそれらの腫瘍細胞のＣＴＬ認識を排除するが、一
方、ＨＬＡクラスＩの損失も、ＮＫ細胞からの溶解に対して腫瘍細胞を異常に感
受性にさせる（Ｏｈｎｍａｃｈｔ，ＧＡら、Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇ
ｅｎｓ ａｎｄ ｍｅｌａｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ
ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ Ｊ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙ
ｓ １８２：３３２−３３８，２０００；Ｌｉｕｎｇｇｒｅｎ ＨＧら、Ｈｏｓ
ｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｇ
ａｉｎｓｔ Ｈ−２ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｖａｒｉａｎｔ
ｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．，Ｄｅｃ １：１６２（６）：１７４５−５９，１９８５；Ｍａｉｏ Ｍら
、Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｎａｔｕ
ｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｕ
ｍａｎ ＦＯ−１ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｂ２ｍ ｇｅｎｅ Ｊ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８８（１）：２８２−９，Ｊｕｌｙ １９９１：Ｓｃｈｒ
ｉｅｒ ＰＩら、Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｙｃ ｏｎｃ
ｏｇｅｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６０：１８１−２４６，１
９９３）。

【０１９６】 ＨＬＡ発現の損失とＮＫ感受性の獲得との間の相補的相互作用は、Ｃｏｕｌｉ
ｅと共同研究者（Ｃｏｕｌｉｅ，ＰＧら、Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔ
ｙ ａｔ ｗｏｒｋ ｉｎ ａ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔ．Ｉｎ Ａ
ｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２１３−２４２，１
９９９）の、数年に亘る経過中の患者の免疫応答の進展を記載した古典的研究に
より例示されている。ＮＫ溶解に対する感受性増大のために、概して生得免疫の
、特にＮＫ活性の刺激をもたらすアプローチは特別の意義を有することが予測さ
れる。このようなアプローチの一例は、種々の造血性増殖因子、例えばＦｌｔ３
リガンドまたはＰｒｏＧＰによる大量の樹状細胞（ＤＣ）の誘導である。このア
プローチに関する根拠は、樹状細胞が、生得免疫および特にＮＫ活性に対する最
も強力な刺激剤の１つである大量のＩＬ−１２を産生するという周知の事実にあ
る。あるいはＩＬ−１２は直接投与されるか、またはそれをコードする核酸とし
て投与される。この点から見て、Ｆｌｔ３リガンド治療がクラスＩ陰性前立腺ネ
ズミ癌モデルの一過性腫瘍退行を生じるということに留意するのは興味深い（Ｃ
ｉａｖａｒｒａ ＲＰら、Ｆｌｔ３−Ｌｉｇａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｒａｎ
ｓｉｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｎ ｅｃｔｏｐｉｃ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａ
ｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃ
ａｎｃｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：２０８１−８４，２０００）。この
情況では、本発明の特異的抗腫瘍ワクチンはこれらの型の造血増殖因子と相乗作
用して、ＣＴＬおよびＮＫ細胞応答の両方を促進し、それにより突然変異を生じ
、それにより有効な治療を逃れる細胞の能力を明らかに減損する。したがって本
発明の実施形態は、本発明の組成物を、ＮＫ細胞の機能的活性または数を増大す
る方法または組成物と一緒に包含する。このような実施形態は、ＮＫ誘導性の様
式で引き続き、あるいはＮＫ誘導性の様式で同時期に、本発明の組成物を提供す
るプロトコールを包含し得る。

【０１９７】 第二に、ＨＬＡの完全損失はしばしば腫瘍細胞の画分においてのみ起こるが、
一方、腫瘍細胞の残り部分は正常発現を示し続ける。機能に関して、腫瘍は部分
的に依然としてＣＴＬ応答からの直接攻撃を受け、細胞のＨＬＡを欠く部分はＮ
Ｋ応答を受ける。ＣＴＬ応答のみが用いられる場合でも、腫瘍のＨＬＡ発現画分
の破壊は生存時間およびクオリティーオブライフに劇的影響を及ぼす。

【０１９８】 異種ＨＬＡ発現の場合には、正常ＨＬＡ発現ならびに欠陥細胞はともに、「傍
観者効果」に基づいた免疫破壊を受け易いと予測される、ということにも留意す
べきである。このような効果は、例えば抗体標的化スーパー抗原の作用のインビ
ボメカニズムを調べたＲｏｓｅｎｄａｈｌと共同研究者の研究において立証され
た（Ｒｏｓｅｎｄａｈｌ Ａら、Ｐｅｒｆｏｒｉｎ ａｎｄ ＩＦＮ−ｇａｍｍ
ａ ａｒｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅ
ｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄ ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅ
ｎｓ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（１１）：５３０９−１３，Ｊｕｎｅ １，
１９９８）。傍観者効果は、例えばＨＬＡ保有標的細胞に作用するＣＴＬから引
き出されるサイトカインにより媒介され、それによりサイトカインは付随して殺
害される他の罹患細胞の環境中に存在すると理解される。

【０１９９】 （対立遺伝子特異的損失） クラスＩ分子の変化の最も一般的な種類の１つは、ＨＬＡに対してヘテロ接合
性の個体中のある種の対立遺伝子の選択的損失である。対立遺伝子特異的変化は
、単一ＨＬＡ拘束エレメントにより拘束されるイムノドミナント（ｉｍｍｕｎｏ
ｄｏｍｉｎａｎｔ）応答により加えられる免疫圧力に対する腫瘍適合を反映し得
る。この種類の変化は、腫瘍にクラスＩ発現を保持させ、したがってＮＫ細胞認
識を逃れさせるが、なお依然として残りのＨＬＡ型に対応するエピトープを含む
本発明のＣＴＬベースのワクチンに感受性である。したがって対立遺伝子特異的
損失の考え得る潜在的なハードルを克服するための実際的な解決策は、多数の特
異的応答の誘導に頼っている。本発明のワクチン中の多数の疾患関連抗原の含入
は特定の疾患抗原の損失を生じる突然変異を防ぐのとちょうど同じように、多数
のＨＬＡ特異性および多数の疾患関連抗原を同時に標的化することは、対立遺伝
子特異的損失による疾患逃避を阻止する。

【０２００】 （発現の低減（対立遺伝子特異的または非特異的）） エフェクターＣＴＬの感受性は、長年立証されてきた（Ｂｒｏｗｅｒ，ＲＣら
、Ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅ
ｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ８＋ＣＴＬ Ｍｏｌ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，３１：１２８５−９３，１９９４；Ｃｈｒｉｕｓｔｎｉｃｋ，ＥＴ
ら、Ｌｏｗ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ−ｐｅｐｔｉｄｅ
ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｔｏ ｔｒｉｇｇｅｒ ａ Ｔ ｃ
ｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６７−７０，１９９１；Ｓ
ｙｋｕｌｅｖ，Ｙら、Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｐｅｐ
ｔｉｄｅ−ＭＨＣ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｎ ａ ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌ ｃａ
ｎ ｅｌｉｃｉｔ ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｉ
ｍｍｕｎｉｔｙ，４（６）：５６５−７１，Ｊｕｎｅ １９９６）。単一ペプチ
ド／ＭＨＣ複合体でさえ、腫瘍細胞溶解を生じ、抗腫瘍リンホカインを放出し得
る．ＨＬＡ発現低減および免疫認識からの考え得る腫瘍逃避の生物学的意義は、
完全にはわかっていない。それにもかかわらず、１つという少ないＭＨＣ／ペプ
チド複合体のＣＴＬ認識で、腫瘍細胞溶解を導くのに十分である、ということが
立証されている。

【０２０１】 さらに、ＨＬＡの発現は、エフェクターＣＴＬにより一般的に分泌されるγＩ
ＦＮにより上方制御され得る、ということが一般的に観察される。さらにＨＬＡ
クラスＩ発現は、αおよびβＩＦＮの両方によりインビボで誘導され得る（Ｈａ
ｌｌｏｒａｎら、Ｌｏｃａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎｄｕｃ
ｅ ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ＭＨＣ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ １４８：３８３７，１９９２；Ｐｅｓｔｋａ，Ｓら、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｃｔｉｏｎｓ Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．５６：７２７−７７，１９８７）。逆に、ＨＬＡクラスＩ発現のレベル低減も
細胞をＮＫ溶解に対してより感受性にさせる。

【０２０２】 γＩＦＮに関しては、Ｔｏｒｒｅｓ等（Ｔｏｒｒｅｓ，ＭＪら、Ｌｏｓｓ ｏ
ｆ ａｎ ＨＬＡ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｓ ｃａｎｃｅ
ｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｕｍｏｒ
ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ４
７：３７２−８１，１９９６）は、ハロタイプの全体的損失が起こらない限り、
ＨＬＡ発現が膵臓癌におけるγＩＦＮにより上方制御される、ということに注目
している。同様にＲｅｅｓとＭｉａｎは、対立遺伝子欠失および損失は、サイト
カイン（例えばＩＦＮ−γ）により少なくとも部分的に回復され得る、というこ
とに注目した（Ｒｅｅｓ，Ｒら、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＭＨＣ ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ ｉｎ ｔｕｍｏｕｒｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｄａｐｔｉｖｅ ａｎ
ｄ ｉｎｎａｔｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ４８：３７４−８１，１９９９）。
ＩＦＮ−γ治療は、研究された症例の大多数におけるクラスＩ分子の上方制御を
もたらす、ということも注目された（Ｂｒｏｗｎｉｎｇ Ｍら、Ｍｅｃｈａｎｉ
ｓｍｓ ｏｆ ｌｏｓｓ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ ｏｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，Ｔｉｓｓｕｅ Ａ
ｎｔｉｇｅｎｓ ４７：３６４−３７１，１９９６）。Ｋａｋｌａｍａｋｉｓ等
も、ＩＦＮ−γを用いるアジュバント免疫療法がＨＬＡクラスＩ陰性腫瘍の場合
に有益であり得る、ということを示唆した（Ｋａｋｌａｍａｎｉｓ Ｌ，Ｌｏｓ
ｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｉｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉ
ｎｇ １ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍａｊｏｒ ｈｉｓ
ｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓ Ｉ ｍｏｌｅ
ｃｕｌｅｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｖｅｒｓｕｓ ｐｒｉｍａｒｙ ｂ
ｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５５：５１９１
−９４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９９５）。局所炎症／免疫化によりＩＦＮ−γ産
生が誘導され、自己増幅されて（Ｈａｌｌｏｒａｎら、Ｌｏｃａｌ Ｔ ｃｅｌ
ｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎｄｕｃｅ ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ＭＨＣ ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：３８３７，１９９２）、炎症
部位から離れた部位でもＭＨＣ発現の大増加をもたらす、と強調することは重要
である。

【０２０３】 最後に、研究により、ＨＬＡ発現の低減が腫瘍細胞をＮＫ溶解に対してより感
受性にさせ得るということが立証された（Ｏｈｎｍａｃｈｔ，ＧＡら、Ｈｅｔｅ
ｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｅｕ
ｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ａｎｄ ｍｅｌａｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａ
ｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ Ｊ
Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓ １８２：３３２−３３８，２０００；Ｌｉｕｎｇ
ｇｒｅｎ ＨＧら、Ｈｏｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｓｅ
ｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｈ−２ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｌｙｍｐ
ｈｏｍａ ｖａｒｉａｎｔｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎ
ｉｓｍ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６２（６）：１７４５−５９，Ｄｅｃｅｍｂ
ｅｒ １，１９８５；Ｍａｉｏ Ｍら、Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｓｃｅ
ｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ−ｍｅｄ
ｉａｔｅｄ ｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＦＯ−１ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃ
ｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ Ｉ
ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｗ
ｉｔｈ β２ｍ ｇｅｎｅ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８８（１）：２８２
−９，Ｊｕｌｙ １９９１：Ｓｃｈｒｉｅｒ ＰＩら、Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉ
ｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｙｃ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎ
ｄ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．，６０：１８１−２４６，１９９３）。もしＨＬＡ発現の低減が、ＣＴ
Ｌ逃避を促すために腫瘍に対して利益を与えるが、腫瘍をＮＫ溶解に対して感受
性にさせるならば、ＮＫ活性に対する耐性を可能にするＨＬＡ発現の最小レベル
が選定される（Ｇａｒｒｉｄｏ Ｆら、Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｉ
ｍｍｕｎｏｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ ａｌｔｅｒｅｄ ＨＬＡ ｃｌａ
ｓｓ Ｉ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｕｒｓ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １８（２）：８９−９６，Ｆｅｂｒｕａｒｙ １９９７
）。したがって本発明の治療用組成物または方法は、ＨＬＡ発現を上方制御する
ための治療および／または高親和性Ｔ細胞による治療と一緒に、腫瘍をＣＴＬ破
壊に対して感受性にさせる。

【０２０４】 （ＨＬＡ発現における変化の頻度） クラスＩ発現における変化の頻度は、多数の研究の対象である（Ａｌｇａｒｒ
ａ Ｉら、Ｔｈｅ ＨＬＡ ｃｒｏｓｓｒｏａｄ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６１，６５−７３，２００
０）。ＲｅｅｓとＭｉａｎは、対立遺伝子損失は全体で３〜２０％の腫瘍に起こ
り、対立遺伝子欠失は１５〜５０％の腫瘍で起こると概算している。各細胞は２
つの別々の組のクラスＩ遺伝子を有し、その各遺伝子が１つのＨＬＡ−Ａおよび
１つのＨＬＡ−Ｂ遺伝子座を保有する、ということに留意すべきである。したが
って完全へテロ接合型個体は、２つの異なるＨＬＡ−Ａ分子と２つの異なるＨＬ
Ａ−Ｂ分子を保有する。したがって、任意の特異的対立遺伝子に関する損失の実
際の頻度は、全頻度の４分の１という少なさであり得る。概して、発現の勾配は
正常細胞、原発性腫瘍および腫瘍転移間に存在する、ということにも彼等は留意
した。Ｎａｔａｌｉと共同研究者（Ｎａｔａｌｉ ＰＧら、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ
Ｉ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ
ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８６：６７１９−６７２３，Ｓ
ｅｐｔｅｍｂｅｒ １９８９）からの研究では、固形腫瘍は、Ｗ６／３２抗体を
用いて、全体的ＨＬＡ発現に関して、およびＢＢ７．２抗体の使用により評価し
た場合のＡ２抗原の対立遺伝子特異的発現に関して検査された。腫瘍試料は、１
３の異なる腫瘍型に関して原発性癌または転移から得られ、２０％未満である場
合は陰性、３０〜８０％の範囲である場合には低減、そして８０％を超える場合
には正常と採点された。腫瘍は全て、原発性も転移も、Ｗ６／３２を用いてＨＬ
Ａ陽性であった。Ａ２発現に関しては、低減は１６．１％の症例で認められ、Ａ
２は３９．４％の症例で検出されないと採点された。Ｇａｒｒｉｄｏと共同研究
者（Ｇａｒｒｉｄｏ Ｆら、Ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ＨＬＡ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｕｍｏｕｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １４（１０）：４９１−９９，１９９３）は、
ＨＬＡ変化は良性から最も攻撃的までの進行中の特定の段階で起こると思われる
ことを強調した。Ｊｉｍｉｎｅｚ等（Ｊｉｍｉｎｅｚ Ｐら、Ｍｉｃｒｏｓａｔ
ｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ
ｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｏｔａ
ｌ ｌｏｓｓ ｏｆ ＨＬＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕ
ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ４８：６８４−９０，２０００）は、１１８の
異なる腫瘍を分析した（結腸直腸癌６８例、喉頭癌３４例および黒色腫１６例）
。ＨＬＡ発現の全体的損失に関して報告された頻度は、結腸癌１１％、黒色腫１
８％および喉頭癌１３％であった。したがってＨＬＡクラスＩ発現は、恐らくは
免疫圧力の反映として、または病理学的変化および罹患細胞の変化の蓄積の単な
る反映として、腫瘍型の有意の画分中で変更される。

【０２０５】 （ＨＬＡ損失情況での免疫療法） 大多数の腫瘍はＨＬＡクラスＩを発現し、後期段階で、かつ低分化腫瘍におい
て、より重篤な変化が見出される傾向がある。このパターンは、免疫療法の情況
において有望であり、特に以下のようであると考える：１）免疫組織化学的技法
の相対的低感度は、腫瘍におけるＨＬＡ発現を低く評価し得る；２）クラスＩ発
現は、局所的炎症およびリンホカイン放出の結果として腫瘍細胞中で誘導され得
る；および３）クラスＩ陰性細胞は、ＮＫ細胞による溶解に感受性である。

【０２０６】 したがって本発明の種々の実施形態は、特に腫瘍性疾患の情況において、ＨＬ
Ａ分子のある程度の損失が存在し得るという事実を考慮して選択され得る。例え
ば治療医は、ＨＬＡが発現されているか否かを確証するために患者の腫瘍をアッ
セイし得る。あるパーセンテージの腫瘍細胞がクラスＩＨＬＡを発現しないなら
ば、ＮＫ細胞応答を引き出す方法または組成物を含む本発明の実施形態が用いら
れ得る。本明細書中に記載されているように、このようなＮＫ誘導法または組成
物は、樹状細胞の動員を促進するＦＩｔ３リガンドまたはＰｒｏＧＰを含み得る
。理論的根拠は、樹状細胞が大量のＩＬ−１２を産生するということにある。Ｉ
Ｌ−１２はアミノ酸形態または核酸形態のいずれかで直接投与され得る。本発明
の組成物はＮＫ細胞誘導性組成物と同時に投与され得るし、あるいはこれらの組
成物は引き続いて投与され得る、ということに留意すべきである。

【０２０７】 対立遺伝子特異的ＨＬＡ損失の情況では、腫瘍はクラスＩ発現を保持し、した
がってＮＫ細胞認識を逃れ、さらに残りのＨＬＡ型に対応するエピトープを含む
本発明のＣＴＬベースのワクチンに依然として感受性であり得る。この概念はこ
こでは、特異的抗原の損失をもたらす突然変異に対して防護するために多数の疾
患抗原を含む本発明の実施形態に類似する。したがって、対立遺伝子特異的損失
、ならびに疾患関連抗原損失による腫瘍逃避を防止するために、多数の疾患関連
抗原からの多数のＨＬＡ特異性および多数のエピトープを同時に標的にし得る。
さらに本発明の実施形態は、代替的治療組成物および方法と併合され得る。この
ような代替的組成物および方法は、放射線、細胞傷害性薬剤および／または体液
性抗体応答を誘導する組成物／方法を包含するが、これらに限定されない。

【０２０８】 さらに、ＨＬＡの発現は、エフェクターＣＴＬにより一般的に分泌されるγＩ
ＦＮにより上方制御され得ること、およびＨＬＡクラスＩ発現は、αおよびβＩ
ＦＮの両方によりインビボで誘導され得ることが観察された。したがって本発明
の実施形態は、ＨＬＡの上方制御を促進するために、α、βおよび／またはγＩ
ＦＮも含み得る。

【０２０９】 （ＩＶ．Ｍ．副作用を誘導する療法からの猶予期間：「計画治療中断または薬
剤休日（ｄｒｕｇ ｈｏｌｉｄａｙ）」） 病原体に感染し、初期に病原体負荷を低減する治療レジメンで処置されたある
患者は、治療レジメンから外れた場合でも、即ち「薬剤休日」中も、病原体負荷
低減を維持し得た、ということを近年の証拠は示している（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ
，Ｅ．ら、Ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＨＩＶ−１ ａｆｔｅｒ ｅ
ａｒｌｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｎａ
ｔｕｒｅ ４０７：５２３−２６，Ｓｅｐｔ．２８，２０００）。当業者に理解
されるように、病原体および癌の両方に対する多数の治療レジメンは、多数の、
しばしば重篤な副作用を有する。薬剤休日中に、患者の免疫系は疾患を抑制して
いる。本発明の組成物を用いるための方法は、癌および病原性感染に対して薬剤
休日の情況で用いられる。

【０２１０】 感染の治療に関しては、療法が特に免疫抑制性であるわけでない場合、本発明
の組成物が標準療法と同時に投与される．この期間中は、患者の免疫系は、本発
明の組成物により含まれるエピトープに対する応答を誘導することに向けられる
。副作用を有する治療から外れた時点で、患者は、病原体負荷が増大し始める場
合に感染性病原体に対して応答するようプライミングされる。本発明の組成物は
、薬剤休日中も同様に提供され得る。

【０２１１】 癌患者に関しては、多数の療法が免疫抑制性である。したがって、寛解が達成
されるかまたは、患者が標準治療に対して難治性であると同定され、次に免疫抑
制療法から外れた場合、本発明の組成物が投与される。したがって患者の免疫系
が再構成するにつれ、貴重な免疫源が同時に癌に向けられる。本発明の組成物は
、所望により免疫抑制レジメンと同時にも投与され得る。

【０２１２】 （ＩＶ．Ｎ．キット） 本発明のペプチドおよび核酸組成物は、ワクチン投与のための指示書とともに
キットの形態で提供され得る。代表的に、キットは、容器中の所望のペプチド組
成物（好ましくは、単位用量形態にある）および投与のための指示書を含む。例
えば、キットは、ＡＰＣ（例えば、樹状細胞）（容器中の本発明のペプチドに供
されそして現在それを提示する）を含み、好ましくは投与のための指導書と共に
単回用量を形成する。代替的なキットは、投与のための指示書とともに、容器中
の本発明の所望の核酸を含むミニジーン構築物（好ましくは、単位用量形態にあ
る）を含む。ＩＬ−２またはＩＬ−１２のようなリンホカインもまた、キットに
含まれ得る。所望であり得る他のキット構成要素には、例えば、滅菌シリンジ、
ブースター投薬、および他の所望の賦形剤が挙げられる。

【０２１３】 本発明を、特定の実施例によってより詳細に記載する。以下の実施例は、例示
の目的のために提供され、そしていかなる様式においても本発明を制限すること
を意図しない。当業者は、本発明に従って代替の実施形態を得るために変化また
は改変され得る重要でない種々のパラメータを容易に認識する。

【０２１４】 （Ｖ．実施例） （実施例１：） （腫瘍関連抗原の選択） ＨＬＡ上位タイプ（スーパータイプ）であるＡ２、Ａ３およびＢ７に結合する
ワクチンは、広範で人種的に偏っていない集団範囲（８３〜８８％）を提供する
。Ａ２上位タイプは、この集団において広範に発現される（３９〜４９％）ので
、このファミリーの分子に結合するペプチドは、ペプチドベースのワクチンの使
用に関する合理的な開始点を提供する。Ａ２ワクチンは、ＨＬＡ−Ａ２分子を発
現する患者を標的するが、このアプローチは、さらなる対立遺伝子またはその上
位タイプグループに結合するペプチドを含むように容易に拡大され得る。

【０２１５】 タンパク質全体はしばしば、特異的エピトープに限定された免疫応答を誘導し
、これは効果的な抗腫瘍免疫応答を媒介するのには、効果的ではないかもしれな
い（Ｄｉｓｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５６：３１５１〜３１５８（
１９９６）；Ｍａｎｃａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４６：１９６４〜１
９７１（１９９１））。エピトープベースのワクチンは、ＴＡＡ中に埋め込まれ
たペプチドエピトープの同定を通じてこの限界を回避する。例示的なＴＡＡは、
表１２に示されている。

【０２１６】 ペプチドは、ＭＨＣ分子に対する結合能力について、ＭＨＣ結合モチーフに基
づいて、およびインビトロで、正常個体由来のリンパ球培養物を用いて、腫瘍反
応性ＣＴＬを活性化する能力について評価された。このアプローチは、いくつか
の利点を有する。第一に、ＣＴＬまたは腫瘍細胞のような患者由来の細胞の単離
は必要としない。第二に、正常な個体においてＣＴＬを刺激するエピトープの同
定により、サブドミナントエピトープおよびドミナントエピトープを含む、広範
なエピトープの同定が可能になる。

【０２１７】 ４つの腫瘍関連抗原である、ＣＥＡ、ｐ５３、ＭＡＧＥ２／３およびＨＥＲ２
／ｎｅｕが、種々の腫瘍型において発現されている（Ｋａｗａｓｈｉｍａら、Ｈ
ｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５９：１〜１４（１９９８）；Ｔｏｍｏｌｉ
ｎｓｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ
，Ｖｏｌ．３２（３）（１９９８年７月６日）。好ましい実施形態では、ワクチ
ンは、これらの４つのうちから、または任意の他のＴＡＡ由来のエピトープを（
１つ以上のペプチドとしてまたはそれらをコードする核酸として）含む。従って
、このワクチンは、いくつかの主要な癌型に対するＣＴＬ反応を誘導する。

【０２１８】 ＣＥＡは、多数の異なる腫瘍で、特に結腸癌で高レベルの発現で生成される１
８０ｋＤの細胞表面の、そして分泌型の糖タンパク質である。この抗原は、胎児
組織に関連した正常な生理学において存在する（例えば、Ｒｕｄｄｏｎ、Ｒ．Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３版、１２６頁（１９９５）；および同時係属
のＵＳＳＮ ０８／４５８，３０２（１９９９年１２月１０日出願）を参照のこ
と）。癌細胞における異常に高い発現により、ＣＥＡは免疫療法の重要な標的に
なる。

【０２１９】 ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）は、関連タンパク質のファミリーであり、その発現は
、通常、精巣および胎盤に限定されているが、また黒色腫および種々の他の癌腫
でも発現される。これらのタンパク質は、細胞傷害性Ｔ細胞によって認識される
ことが公知である（例えば、同時係属ＵＳＳＮ０９／４５８，２９８（１９９９
年１２月１０日出願）を参照のこと）。

【０２２０】 ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ−２）は、ＥＧＦレセプターと類似である１８５
ｋＤの膜貫通タンパク質である。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、自己リン酸化可能なチロ
シンキナーゼである。ＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は、癌遺伝子トランスフォー
メーションと関連している。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、主に乳癌、卵巣癌および胃癌
において発現される（例えば、同時係属ＵＳＳＮ０９／４５８，２９９（１９９
９年１２月１０日出願）を参照のこと）。

【０２２１】 第４のＴＡＡ標的であるｐ５３は、通常腫瘍抑制遺伝子であるが、変異され得
る。変異体は、タンパク質安定性の増大を生じ、従って過剰発現する。このタン
パク質ｐ５３は、結腸、肺、前立腺および骨肉種、ならびに他の腫瘍において観
察されている（例えば、同時係属ＵＳＳＮ０９／４５８，２９７（１９９９年１
２月１０日出願）を参照のこと）。好ましくは、本発明のワクチンにおけるｐ５
３ペプチドは、全ての癌患者の間で共通である、変異していない配列に由来する
。

【０２２２】 ワクチン組成物に含まれ得る他のＴＡＡは、前立腺癌に関連する（例えば、同
時係属仮出願ＵＳＳＮ６０／１７１３２（１９９９年１２月２１日出願）を参照
のこと）。

【０２２３】 以下の表７は、乳房、結腸および肺における腫瘍抗原発現を描写している。４
つのＴＡＡを標的することにより、どのような腫瘍抗原も発現しない細胞への腫
瘍細胞の変異（腫瘍エスケープ）の確率は減少する。好ましくは、各ＴＡＡ由来
の２つ以上のエピトープの封入により、異なる民族性の個体がこのワクチンに反
応し、そして広範な集団範囲を提供する確率を増大するように作用する。

【０２２４】 ワクチン組成物に対するこの合理的なアプローチは、特定のＨＬＡ対立遺伝子
に対して集中され得るか、または種々のＨＬＡ分子もしくは上位タイプに拡大さ
れ、集団範囲をさらに拡大し得る。

【０２２５】 表８は、表７の各タイプの癌についてアメリカにおけるこれらの腫瘍について
の頻度、５年生存率、および１年あたりの死亡数の推定を示す。新しい症例に関
して、これらの腫瘍型のそれぞれの推定死亡数および５年生存率は、大きくまだ
応じられていない必要性を有する。全般に、これらの腫瘍の頻度は有意に大きい
。

【０２２６】 （実施例２） （モチーフ保有ペプチドの同定） ４つの標的された腫瘍抗原（ＣＥＡ、ｐ５３、ＭＡＧＥ ２／３およびＨＥＲ
２／ｎｅｕ）由来のタンパク質配列を分析し、ＨＬＡ−Ａ２上位タイプ結合モチ
ーフを含む８マー、９マー、１０マーおよび１１マーの配列を同定した。このモ
チーフ［ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ
）、アラニン（Ａ）、トレオニン（Ｔ）、またはグルタミン（Ｑ）（２位置）、
およびロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）
、アラニン（Ａ）、またはトレオニン（Ｔ）（Ｃ末端）；表２を参照のこと］は
、Ａ２上位タイプ内のＨＬＡ分子に結合するペプチドを決定するのに主な因子で
ある（例えば、ｄｅｌ Ｇｕｅｒｃｉｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：６８
５〜６９３（１９９５）；Ｓｅｔｔｅ，Ａ、およびＳｉｄｎｅｙ，Ｊ．，Ｃｕｒ
．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：４７８〜４８２（１９９８）；Ｓｉｄｎｅ
ｙら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１７：２６１〜１６６（１９９６）
を参照のこと）。ナノマーおよびデカマーの配列は、二次アンカー残基を評価す
るためのＡ２特異的アルゴリズムを用いてさらに特徴付けられた（Ｒｕｐｐｅｒ
ｔら、Ｃｅｌｌ ７４：９２９〜９３７（１９９３）；Ｇｕｌｕｋｏｔａら、Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６７：１２５８〜１２６７（１９９７））。

【０２２７】 （実施例３：） （分子結合アッセイ） ヒトクラスＩ ＨＬＡ分子への結合について、ＨＬＡ−Ａ２ペプチドモチーフ
を含有するネイティブ配列を直接試験した。なぜなら、モチーフ保有ペプチドの
サブセットは、生物学的に有意な親和性（表６にデータを示す）で結合するから
である。ＨＬＡ−Ａ２分子に対して５００ｎＭ以下の親和性閾値は、ペプチドエ
ピトープがＣＴＬ応答を惹起する能力を規定することが、以前に示されている（
Ｓｅｔｔｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：５５８６〜５５９２（１９９４）
）。精製したＨＬＡ分子を用いる競合阻害アッセイを用いてペプチド結合を定量
した。ＨＬＡ−Ａ２上位タイプの原型のメンバーであるＨＬＡ−Ａ^＊０２０１に
対する結合についてモチーフ保有ペプチドを最初に試験した。ＩＣ_５０≦５００
ｎＭで^＊０２０１に結合するペプチドを、それが、Ａ２上位タイプの他の優勢な
分子である：Ａ^＊０２０２、Ａ^＊０２０３、Ａ^＊０２０６、およびＡ^＊６８０２
に結合する能力について、引き続き試験した（ｄｅｌ Ｇｕｅｒｉｃｏら、Ｊ．
Ｉｍｍｎｏｌ、１５５４：６８５〜６９３（１９９５）；Ｓｅｔｔｅ，Ａおよび
Ｓｉｄｎｅｙ，Ｊ．Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０：４７８〜４８
２（１９９８）；Ｓｉｄｎｅｙら．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１７
：２６１〜２６６（１９９６））。少なくとも１つのさらなるＡ２上位タイプメ
ンバーに結合することが発見されたＡ^＊０２０１結合ペプチドを、さらなる試験
のために選択した。ＣＥＡおよびｐ５３のついてのネイティブ配列のアナログを
評価して、以下に記載のように、さらなるＣＴＬペプチドエピトープを同定した
。

【０２２８】 （実施例４：） （Ａ２エピトープ同定） ＨＬＡ−Ａ２は、種制限分子であるので、Ａ２ワクチンエピトープの結合およ
び機能的活性を、ヒト分子および細胞を用いてインビトロで測定した。高いまた
は中度のＨＬＡ−Ａ２結合親和性（ＩＣ_５０≦５００ｎＭ）を示すＣＴＬエピト
ープを同定した。これらのエピトープはまた、ＩＣ_５０≦５００ｎＭでＨＬＡ−
Ａ２上位タイプのファミリーの少なくとも１つのさらなるメンバーに結合する。
各エピトープは、特異的ヒトＣＴＬの誘導をインビトロで刺激した。このＣＴＬ
は、ペプチドパルスした標的細胞および関連ＴＡＡを発現する腫瘍細胞株を認識
して溶解した。ＰＡＤＲＥ分子は、必要に応じてワクチン中に含まれ、長期のＣ
ＴＬ応答の誘導を促進する（Ａｌｅｘａｎｄｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，印刷中）。

【０２２９】 ペプチドパルスした細胞およびＴＡＡ発現腫瘍細胞株の両方を認識し得る、ヒ
トＣＴＬのインビトロ誘導によって免疫学的応答が実証された。特定の場合には
、ネイティブのペプチドに対して改善された結合親和性または上位タイプ範囲の
いずれかに基づいて、そしてある場合には、システインの別のアミノ酸での置換
に基づいて、アナログペプチドを選択した。

【０２３０】 類似のアッセイが、他のＨＬＡ型について用いられ得る。

【０２３１】 （実施例５） （ペプチドアナログは、スーパータイプ交差反応性を増加させるか、または化
学的特徴を改善する） クラスＩ ＨＬＡペプチドを、所定の位置のアミノ酸を置換することによって
改変または「アナログ化（ａｎａｌｏｇｅｄ）」して、そのＨＬＡ結合親和性お
よび／またはスーパータイプ交差反応性を増加させ得る（例えば、表２、および
Ｚｉｔｖｏｇｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：８７−９７（１９９６）；
Ｓｅｔｔｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：５５８６−５５９２（１９９４）
を参照のこと）。このペプチドの２位およびＣ末端のアミノ酸は、ＨＬＡ−Ａ２
結合ポケットと相互作用する一次接触または「アンカー」残基である。本発明の
組成物に含ませるためのアナログを同定するために、アンカー残基を、２位およ
び／またはＣ末端にて、現在好ましいアンカー残基または少し好適性の低いアン
カー残基で置換することによって改変した。

【０２３２】 利用された別の改変型は、産物開発の間のジスルフィド架橋形成の潜在的な複
雑性を回避するために、内因性システイン（Ｃ）残基をα−アミノ酪酸（Ｂ）で
置換することを含んだ。

【０２３３】 例えば、アナログ化させるべきネイティブのペプチドを選択するために使用さ
れた２つの判断基準は以下の通りであった：１）最適以下のアンカー残基の存在
；および２）スーパータイプの少なくとも２個または３個の対立遺伝子に対する
、親ペプチドの少なくとも弱い結合（ＩＣ_５０＝５００〜５０００ｎＭ）。

【０２３４】 ペプチドはまた、二次アンカー残基の改変によってアナログ化され得る。例え
ば、好ましいアプローチでは、ペプチドは、受容可能かまたは好適なものに有利
なように、有害な残基を除去することによってアナログ化され得る；受容可能な
残基は、異なる受容可能な残基または好ましい残基と交換され得るか、あるいは
、好ましい残基は、別の好ましい残基と交換され得る。

【０２３５】 従って、ペプチド配列を、上記の１以上のストラテジーを使用して改変した。
このペプチドを、分子結合アッセイを使用して、ＨＬＡ−Ａ２スーパータイプ結
合について試験した。アナログペプチドについてのスーパータイプ結合データを
、表６に示す。

【０２３６】 （実施例６） （細胞性免疫原性スクリーニング） 本発明のペプチドをまた、ＴＡＡ由来ペプチドに対するＣＴＬ前駆体応答を刺
激するその潜在能（インビトロ一次ＣＴＬ誘導）および標的ＴＡＡペプチドエピ
トープを発現する腫瘍細胞のＣＴＬ認識（内因性標的の認識）について評価した
。これらの判断基準は、このペプチドが、機能的エピトープであることの証拠を
与えた。

【０２３７】 （インビトロ一次ＣＴＬ誘導） 末梢血単球細胞由来（または骨髄由来）のヒトＤＣ（ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ
−４を使用してインビトロで生成され、そして目的のペプチドでパルス（ｐｕｌ
ｓｅ）された）を、一次ＣＴＬ誘導培養物における抗原提示細胞（ＡＰＣ）とし
て使用した。ペプチドでパルスされたＤＣを、ＣＴＬ前駆体の供給源として供さ
れたＣＤ８ Ｔ細胞（磁気ビーズを使用して、正常なドナーリンパ球から陽性選
択された）と共にインキュベートした。ペプチドでの刺激から１週間後に、一次
培養物を、細胞傷害性を測定する標準的なクロム放出アッセイまたはサンドウィ
ッチＥＬＩＳＡに基づくインターフェロンγ（ＩＦＮγ）産生アッセイのいずれ
かを使用して、エピトープ特異的なＣＴＬ活性について試験した。表６の各ＣＴ
Ｌエピトープは、正常なドナーのＣＤ８ Ｔ細胞からのＣＴＬ誘導を刺激した。

【０２３８】 （内因性標的の認識） 本明細書中に記載のように、ペプチドでパルスした標的の認識に関する試験で
陽性のＴ細胞培養物を拡大し、そしてＴＡＡを内因的に発現するヒト腫瘍細胞を
認識するその能力について評価した。クロム放出アッセイおよびＩＦＮγ産生ア
ッセイを、これらの評価のために使用した（腫瘍細胞株を、標的として供した）
。ＴＡＡまたはＨＬＡ−Ａ２．１分子のいずれかの発現を欠く腫瘍細胞株を、非
特異的活性についての陰性コントロールとして供した。ペプチド特異的かつＨＬ
Ａ−Ａ２拘束様式で腫瘍細胞を認識するＣＴＬ培養物が生成された（表６）。

【０２３９】 ＣＴＬペプチドに特徴的なＨＬＡレセプター結合および免疫原性を、表６にま
とめる。

【０２４０】 （実施例７） （ＣＴＬ誘導の増強のためのヘルパーエピトープとしてのＰＡＤＲＥ分子） ＨＴＬ活性が、長期持続性のＣＴＬ応答の誘導のために重要であるという証拠
が益々増加しつつある（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６２
：３０８８−３０９５（１９９９）；Ｗａｌｔｅｒら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．
Ｍｅｄ．３３３：１０３８−１０４４（１９９５）；Ｈｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１７７：１６８１−１６９０（１９９３））。従って、ＨＬＡクラスＩＩ分
子に結合し、そしてＨＴＬを刺激する１以上のペプチドが、本発明に従って使用
され得る。従って、ワクチンの好ましい実施形態は、ヘルパーＴ細胞を刺激する
ように設計された様式で、大半のＤＲ分子を標的化する汎用（ｕｎｉｖｅｒｓａ
ｌ）Ｔヘルパー細胞エピトープ（ＨＴＬ）のＰＡＤＲＥ^ＴＭファミリー由来の分
子を含む。例えば、以下の式：ａＫＸＶＡＡＺＴＬＫＡＡａ（ここで、「Ｘ」は
、シクロヘキシルアラニン、フェニルアラニン、またはチロシンのいずれかであ
り；「Ｚ」は、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン、またはアスパラギンの
いずれかであり；そして「ａ」は、Ｄ−アラニンまたはＬ−アラニンのいずれか
である（配列番号２９））を有する、ｐａｎ−ＤＲ−結合エピトープペプチドは
、大半のＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子に結合し、そしてＨＬＡ型に関わらず大半の個
体由来のＴヘルパーリンパ球の応答を刺激することが見出された。

【０２４１】 特に好ましいＰＡＤＲＥ分子は、合成ペプチドａＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡａ（
ａ＝Ｄ−アラニン、Ｘ＝シクロヘキシルアラニン）であり、これは、ＨＬＡ−Ｄ
Ｒ結合能およびＴ細胞免疫応答の誘導を両方とも最大化するように特異的に操作
された非天然アミノ酸を含む。

【０２４２】 代替的に好ましいＰＡＤＲＥ分子は、以下のペプチドである：

【０２４３】

【化５】 （ａ＝Ｄ−アラニン、Ｘ＝シクロヘキシルアラニン）。

【０２４４】 現在好ましい実施形態では、ＰＡＤＲＥペプチドは、アミド化されている。例
えば、ＰＡＤＲＥ分子の特に好ましいアミド化実施形態は、慣習的に、ａＫＸＶ
ＡＡＷＴＬＫＡＡａ−ＮＨ_２として記載される。

【０２４５】 精製されたＨＬＡ−ＤＲ分子を用いる競合的阻害アッセイによって、ＰＡＤＲ
Ｅ^ＴＭ分子であるａＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡａ−ＮＨ_２は、高度または中程度の
親和性（１，０００ｎＭ以下のＩＣ_５０）で、最も蔓延したＨＬＡ−ＤＲ分子の
１６個のうちの１５個に結合することが示された（Ｋａｗａｓｈｉｍａら、Ｈｕ
ｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５９：１−１４（１９９８）；Ａｌｅｘａｎｄ
ｅｒら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：７５１−７６１（１９９４））。ＰＡＤＲＥと
破傷風トキソイド（ＴＴ）ペプチド８３０〜８４３とのＤＲ結合能力の比較によ
り、「汎用」エピトープが公開された（Ｐａｎｉｎａ−Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎら、
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９：２２３７−２２４２（１９８９））
。このＴＴ８３０〜８４３ペプチドは、試験された１６個のＤＲ分子のうちの７
個にのみ結合したが、ＰＡＤＲＥは、１６個のうちの１５個に結合した。ＰＡＤ
ＲＥを結合する１５個のＤＲ分子のうちの少なくとも１個は、全人類のうちの９
５％より多くにおいて存在すると予測されている。従って、このＰＡＤＲＥ分子
は、ヒト集団におけるＨＬＡ−ＤＲ分子の広範な多型性にも関わらず、実質的に
すべての患者においてＨＴＬ応答を誘導すると予測される。

【０２４６】 ＰＡＤＲＥは、ヒトＴ細胞に対する最適な免疫原性について特に操作された。
ＴＴ８３０〜８４３抗原およびＰＡＤＲＥ分子ａＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡａ−Ｎ
Ｈ_２を用いた、正常ヒトＴ細胞のインビトロでの一次免疫からの代表的なデータ
を、図１に示す。これらの正常ドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、イ
ンビトロにおいて、ペプチドで刺激した。３回目の刺激の後、ＰＡＤＲＥが、標
準的なＴ細胞増殖アッセイにおいて測定された場合に３名すべてのドナーについ
て、有意な一次Ｔ細胞応答を生じることが観察された。ＰＡＤＲＥペプチドを用
いると、１０，０００ｃｐｍの増殖レベルは、一般的に、１０〜１００ｎｇ／ｍ
ｌの抗原を用いて達成された。対照的に、ＴＴ８３０〜８４３抗原は、試験され
た３個体のうちの２個体のみに応答を生じさせた。ほぼ１０，０００ｃｐｍの範
囲の応答は、約１０，０００ｎｇ／ｍｌの抗原を用いて達成された。これに関し
て、ＰＡＤＲＥは、Ｔ細胞応答の活性化について、モル濃度に基づき、ＴＴ８３
０〜８４３抗原よりも約１００倍強力であることが注目された。

【０２４７】 Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｌｅｉｄｅｎ（Ｃ．Ｊ．Ｍ．Ｍｅｌｉｅｆ）で
実施された、第Ｉ／ＩＩ相研究者提供試験からの初期のデータは、ＰＡＤＲＥ分
子ａＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡａ（恐らく、アミド化されたａＫＸＶＡＡＷＴＬＫ
ＡＡａ−ＮＨ_２）が、ヒトにおいて高度に免疫原性であるという原則を支持して
いる（Ｒｅｓｓｉｎｇら、Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐ
ｏｎｓｅｓ ｔｏ ｈｅｌｐｅｒ ｐｅｐｔｉｄｅ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｏ ｖ
ｉｒａｌ ＣＴＬ ｅｐｉｔｏｐｅｓ，ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ
ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ ｐａｔ
ｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎ
ｏｍａ．提出（１９９９））。この試験では、ＰＡＤＲＥ分子を、種々のヒトパ
ピローマウイルス（ＨＰＶ）由来ＣＴＬエピトープと同時乳化（ｃｏ−ｅｍｕｌ
ｓｉｆｙ）し、そして再発または残存した子宮頸癌を有する患者に注射した。し
かし、研究した患者に伴う癌が後期であったことが理由で、これらの患者は、免
疫無防備状態であったことが予期された。患者の免疫無防備状態は、その低頻度
のインフルエンザウイルス特異的ＣＴＬ、ＣＤ３発現レベルの減少、および従来
の抗原を用いるインビトロ刺激の後の増殖リコール（ｒｅｃａｌｌ）応答の低発
生率によって示された。従って、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｌｅｉｄｅｎで
の試験では、何の効力も予測されず、この試験の目標は、本質的に、安全性を評
価するためであった。安全性は、実際に示された。有利な安全性プロフィールに
加えて、ＰＡＤＲＥ Ｔ細胞反応性が、１２名の患者中４名において（図２）、
これらの患者の免疫能力の減少はあるにしても、検出された。

【０２４８】 従って、ワクチンのＰＡＤＲＥ^ＴＭペプチド成分は、ＨＬＡ−ＤＲ分子の複数
の対立遺伝子形態に対して広範な特異性を有して結合する。さらに、ＰＡＤＲＥ ^ＴＭ ペプチド成分は、高い親和性（１０００ｎＭ以下のＩＣ_５０）で、すなわち
、ＨＬＡクラスＩＩ拘束Ｔ細胞についての免疫原性と相関した親和性のレベルで
結合する。ＰＡＤＲＥ^ＴＭペプチドのインビボ投与は、正常なヒトおよび患者の
集団において、ＨＴＬの増殖を刺激する。

【０２４９】 （実施例８） （ＰｒｏＧＰ由来ＤＣの機能的能力） 本発明に従うワクチンの１つの実施形態は、樹状細胞（ＤＣ）を介して送達さ
れる本発明のエピトープ保有ペプチドを含む。従って、ＤＣを、インビトロおよ
びインビボの両方の免疫機能アッセイにおいて評価した。これらのアッセイは、
ＣＴＬハイブリドーマおよびＣＴＬ細胞株の刺激、ならびにＣＴＬのインビボ活
性化を含む。

【０２５０】 （ＤＣ精製） ＰｒｏＧＰ動員ＤＣを、ＰｒｏＧＰ処理Ｃ５７Ｂ１／６マウスの末梢血（ＰＢ
）および脾臓から精製して、抗原を提示するその能力および細胞性免疫応答を誘
発するその能力を評価した。簡潔には、ＤＣを、ＣＤ１１ｃ特異的抗体でコーテ
ィングされた磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ Ｃ
Ａ）を使用する陽性選択ストラテジーを使用して、総ＷＢＣおよび脾臓から精製
した。比較のために、エキソビボで拡大したＤＣを、７〜８日間のＧＭ−ＣＳＦ
およびＩＬ−４の標準反応混液（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌ
ｉｓ，ＭＮ）による未処理Ｃ５７Ｂ１／６マウス由来の骨髄細胞を培養すること
によって生成した（Ｍａｙｏｒｄｏｍｏら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１：１２９
７−１３０２（１９９５））。近年の研究によって、このエキソビボで拡大され
たＤＣ集団が、有効な抗原提示細胞を含み、抗腫瘍免疫応答を刺激する能力を有
することが明らかにされた（Ｃｅｌｌｕｚｚｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．８３：
２８３−２８７（１９９６））。

【０２５１】 ＰｒｏＧＰ由来ＤＣ（１００μｇ／日、１０日間、ＳＣ）およびＧＭ−ＣＳＦ
／ＩＬ−４エキソビボ拡大ＤＣの純度を、フローサイトメトリーによって決定し
た。ＤＣ集団を、ＣＤ１１ｃおよびＭＨＣクラスＩＩ分子の両方を発現する細胞
として規定した。磁気ＣＤ１１ｃ微小ビーズからのＤＣの精製後、ＰｒｏＧＰ処
理マウスから単離された、二重陽性のＰＢ由来ＤＣのパーセンテージを、約４％
から４８〜５７％の範囲まで富化した（平均収量＝４．５×１０^６ＤＣ／動物）
。ＰｒｏＧＰ処理マウスから単離された精製脾臓ＤＣのパーセンテージを、１２
〜１７％の範囲から６７〜７７％の範囲まで富化した。ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４
エキソビボ拡大ＤＣの純度は、３１〜４１％の範囲であった（Ｗｏｎｇら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２１：３２０４０（１９９８））。

【０２５２】 （ＣＴＬハイブリドーマおよびＣＴＬ細胞株のインビトロ刺激：特異的ＣＴＬ
エピトープの提示） ＰｒｏＧＰ生成ＤＣがＣＴＬ細胞株を刺激する能力は、ウイルス由来エピトー
プおよび対応するエピトープ応答性ＣＴＬ細胞株を使用して、インビトロで示さ
れた。ヒトＨＬＡ−Ａ２．１を発現するトランスジェニックマウスを、ＰｒｏＧ
Ｐで処理した。これらのマウスから単離された脾臓ＤＣを、Ｂ型肝炎ウイルス由
来のペプチドエピトープ（ＨＢＶ ｐｏｌ ４５５）でパルスし、次いで、ＩＦ
Ｎγを産生することによって、ＨＢＶ ｐｏｌ ４５５エピトープ／ＨＬＡ−Ａ
２．１複合体に応答するＣＴＬ細胞株と共にインキュベートした。ＰｒｏＧＰ由
来脾臓ＤＣが、ＨＢＶ ｐｏｌ ４５５エピトープを提示する能力は、２つの陽
性コントロール集団：ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４拡大ＤＣ培養物または精製脾
臓Ｂ細胞の能力よりも高かった（図３）。他の抗原提示細胞に対するＰｒｏＧＰ
由来脾臓細胞についての応答曲線における左へのシフトは、これらのＰｒｏＧＰ
由来細胞が、応答細胞株による最大のＩＦＮγ放出を刺激するために、より少な
いエピトープを必要とすることを明らかにした。

【０２５３】 （実施例９） （ペプチドでパルスしたＰｒｏＧＰ由来ＤＣは、インビボＣＴＬ応答を促進す
る） エキソビボにおいてペプチドでパルスしたＤＣが、インビボにおいてＣＴＬ応
答を刺激する能力をまた、ＨＬＡ−Ａ２．１トランスジェニックマウスモデルを
使用して評価した。ＰｒｏＧＰ処理マウス由来のＤＣまたはＧＭ−ＣＳＦおよび
ＩＬ−４での拡大後の骨髄細胞に由来するコントロールＤＣを、エキソビボにお
いて、ＨＢＶ ｐｏｌ ４５５エピトープでパルスし、洗浄し、そしてこのよう
なマウスに注射（ＩＶ）した。免疫後７日目に、脾臓を取り出し、そしてＤＣお
よびＣＴＬを含む脾細胞を、ＨＢＶ ｐｏｌ ４５５ペプチドの存在下において
、インビトロで２回再刺激した。再刺激した脾臓細胞培養物の３つの独立した培
養物のＣＴＬ活性を、ＣＴＬが、ペプチド有りまたは無しでパルスされた、^５１ Ｃｒ標識化標的細胞を溶解する能力を測定することによって評価した。強力なＣ
ＴＬ応答が、エピトープでパルスされたＰｒｏＧＰ由来ＤＣおよびエピトープで
パルスされたＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４ ＤＣで免疫された動物において生成され
た（図４）。対照的に、偽性パルスされたＰｒｏＧＰ生成ＤＣ（ペプチドなし）
で免疫された動物は、ＣＴＬ誘導の証拠を示さなかった。これらのデータによっ
て、ＰｒｏＧＰ処理マウス由来のＤＣが、エキソビボでエピトープによってパル
スされ得、そしてインビボにおいて特異的ＣＴＬ応答を誘導するために使用され
得ることが確認されている。従って、これらのデータは、ＰｒｏＧＰ由来ＤＣが
、ヒトＭＨＣクラスＩ分子を表すモデルにおいて、ＣＴＬ応答を促進するという
原則を支持する。

【０２５４】 マウスにおけるインビボでの薬理学的研究は、パルスされた自己ＤＣの動物へ
の再注入に関して明らかな毒性を何ら示さなかった。

【０２５５】 （実施例１０） （合成ペプチドの製造：Ｂｕｌｋ Ａ２ワクチンペプチドの物理的／化学的特
性） １つの実施形態では、本発明の各ペプチドは、化学的合成によって調製され、
そして凍結乾燥によって固体として単離される。ペプチドは、優良製造規則（Ｇ
ｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ）に従って製造される
。

【０２５６】 本発明のバルクペプチドを、正体および放出を試験した後に、水性または非水
性の溶液として処方し、濾過滅菌し、そして無菌の脱発熱物質（ｄｅｐｙｒｏｇ
ｅｎａｔｅ）バイアルに無菌的に充填する。無菌のゴムストッパーを挿入し、そ
してオーバーシール（ｏｖｅｒｓｅａｌ）を、このバイアルに適用した。バイア
ルに封入された処方物は、１００％視覚的検査を受け、そして特定の放出試験を
受けた。放出されたバイアルを、投与のために送達する前に、標識し、そしてパ
ッケージした。

【０２５７】 表６は、供給番号、アミノ酸配列、結合データ、および各ペプチドによって誘
導されるＣＴＬの特性の同定をまとめる。

【０２５８】 （実施例１１） （樹状細胞の単離、パルス化、試験および投与） 現在、ワクチン接種について好ましい手順を、本明細書中に示す。簡単には、
患者を、ＰｒｏＧＰで処置して、循環にＤＣを拡張しそして動員する。最大ＤＣ
動員（当業者に公知の手順に従って決定される）の日に、患者は、白血球搬出を
うける（約１５Ｌプロセス、十分な単核細胞を収集するのに必要な場合、１度で
きる限り繰り返す）。単核細胞産物を、本発明のペプチドとミクロポアフィルタ
ーを介する（この混合プロセスは、滅菌されたペプチドを使用する場合、必要な
い）注射によって混合する。インキュベーションおよび洗浄して非結合ペプチド
残基を除去した後、細胞産物のワクチン実施形態を、低温保存の溶液中に再懸濁
し（最終１０％ＤＭＳＯ）、そして多ワクチン接種ブーストを含むこれらのプロ
トコールによって、アリコート内に分割する。パルス化された単核細胞産物を、
造血幹細胞に対する認められた手順に従って凍結し、そして、貯蔵する。

【０２５９】 ワクチン接種を、患者におけるＰｒｏＧＰの血液学的効果を消した後（すなわ
ち、ヘモグラムが、ベースラインに戻される）、解凍した細胞産物の注射または
静脈内灌流によって実施する。図５は、ペプチドを有するＤＣのエキソビボのパ
ルス化、ＤＣの洗浄、ＤＣ試験、および低温保存法のフローチャートを提供する
。このプロセスのより詳細な記載は、以下の実施例において提供する。

【０２６０】 （実施例１２） （ＰｒｏＧＰの投与および白血球搬出による単核細胞の収集） 患者を、皮下注射によってＰｒｏＧＰを用いて毎日処置する（用量およびスケ
ジュールは、標準的な医学手順に従って決定される）。白血球搬出の前の夕方、
患者を、大内径アフェレーシスカテーテルのための静脈内アクセスに適切なアフ
ェレーシス医師または看護士／技術者によって評価する。末梢静脈アクセスを、
アフェレーシスのための速い血流を維持するために不十分であると考える場合、
次いで、中心静脈カテーテル（鼡径部位、鎖骨下部位または頸静脈内部の部位）
を、適切な医学的／外科的人員によって挿入し得る。予測される最大ＤＣ動員の
日、白血球搬出（約３血液容積または１５Ｌ）を、例えば、Ｃｏｂｅ Ｓｐｅｃ
ｔｒａ またはＦｅｎｗａｌ ＣＳ３０００（流速３５ｍＬ／ｍｉｎ以上）で実
施し、単核細胞を得る。白血球搬出産物におけるＤＣの数を、単核細胞のフロー
サイトメーター計数によって評価する。この単核細胞は、アフェレーシス産物か
ら無菌的に回収された１ｍＬのサンプル中に免疫表現型ｌｉｎ−／ＨＬＡ−ＤＲ
＋／ＣＤ１１ｃおよびｌｉｎ−／ＨＬＡ−ＤＲ＋／ＣＤ１２３＋を有する。白血
球搬出産物における顆粒球およびリンパ球の数を、自動化サイトメトリー（ＣＢ
Ｃ／示差）によって計数した。ＣＢＣ／示差を、白血球搬出手順後速やかに実施
し、そして１０日間、１日おきに造血素処置およびアフェレーシスに造血の効果
の消散をモニターする。

【０２６１】 （実施例１３） （樹状細胞パルス化のための手順） 血漿を、遠心分離および上澄みの圧搾によって白血球搬出産物から除去する。
遠心分離ペレット由来の細胞を、１％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有す
る１００ｍｌまでのＯｐｔｉＭＥＭ培地中に１０^７ＤＣ／ｍｌの細胞密度で再懸
濁する。

【０２６２】 本発明のペプチド（好ましくは別個の滅菌Ａ２ペプチド処方物として）を、無
菌技術を使用してＤＣ培養バッグに注射口を介して直接投与する。混合（例えば
、圧迫と反転を繰り返すことによって）後、細胞懸濁液を、周囲の温度で４時間
インキュベートする。低温保存サンプル溶液を、２００ｍＬのＰｌａｓｍａｌｙ
ｔｅ（登録商標）中で５０ｍＬの医薬グレードのジメチルスルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）を溶解することによって調製する。パルス化期間後、細胞懸濁液を、遠心分
離および同じ容積のリン酸緩衝化生理食塩水溶液で再懸濁することよって洗浄す
る。洗浄手順を、規定された回数（例えば、研究がペプチドを除去したと確認す
るまで）繰り返す。各１ｍＬのサンプルを、確認試験および微生物学的試験のた
め除去する。次いで、細胞を、遠心分離および同じ容積の凍結保存溶液（最終１
０％ＤＭＳＯ）に再懸濁することによって凍結するために調製する。次いで、凍
結保存された細胞懸濁液を、６つのアリコートへ分割し、５０ｍＬ凍結バッグへ
移し、そして貯蔵のため１℃／ｍｉｎの制御された速度で液体窒素中でワクチン
接種手順を必要とするまで凍結する。

【０２６３】 （パルス化手順を評価するアッセイ） 抗原提示細胞（本発明のペプチドに対応する長期間刺激されたＴ細胞、または
Ｔ細胞ハイブリドーマ）を使用して、ヒト細胞を用いてワクチンのペプチド試薬
をインキュベートするための最適手順を決定する。パルス化研究を、以下の１つ
以上の細胞供給源を使用して行う：ＰｒｏＧＰ処置ＨＬＡ−Ａ２．１トランスジ
ェニックマウス由来の精製されたＤＣ；ＨＬＡ−Ａ２を発現するヒト腫瘍細胞株
；定常なヒトボランティア由来の末梢血単核細胞；ＰｒｏＧＰ処置患者由来の末
梢血単核細胞；および／またはＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４を有する末梢血単核
細胞のエキソビボ培養の前の正常なヒトＨＬＡ−Ａ２ボランティアから得られた
ＤＣ。

【０２６４】 評価条件は、例えば： Ａ．細胞性単離手順および細胞数 Ｂ．ワクチンペプチドの濃度 Ｃ．補助試薬を除去するための洗浄条件 Ｄ．パルス後操作（再懸濁、凍結） を含む。

【０２６５】 従って、これらの研究は、機能的なＨＬＡ−Ａ２／ペプチド複合体をヒト細胞
の表面上で生成するための手順の能力を示す。パルス化手順の確認を、第Ｉ相臨
床試験を実施した後ＨＬＡ−Ａ２．１特異的Ｔ細胞株を使用して達成する。

【０２６６】 （実施例１４） （ＤＣ産物からのペプチド除去の確認） ペプチド試薬を用いるパルス化に続いて、患者由来のＤＣを数回洗浄し、患者
へ細胞を戻す前に余分なペプチドを除去する。本発明のワクチンの本実施形態に
おいて、洗浄手順は、非結合ペプチドを除去する。従って、ペプチドに対する患
者の全身曝露はないかまたはごくわずかである。本発明の代替的ワクチンは、本
発明のペプチドの患者への直接投与、本発明のペプチドを１つ以上含む多エピト
ープのポリペプチドの投与、ペプチドをコードする核酸の形態でのペプチドの投
与（例えば、ミニジーン構築物の使用によって）を含む。

【０２６７】 （樹状細胞の洗浄緩衝液におけるワクチンペプチドのためのアッセイ） ＤＣをペプチドと共にインキュベートした後、細胞を複数の容積の洗浄緩衝液
で洗浄する。最後の洗浄のアリコートを非極性の固相抽出カートリッジ上に置き
、そして洗浄してサンプルの塩含有量を減少する。緩衝液中に含まれる任意のペ
プチドを、抽出カートリッジから溶出し、そして乾燥状態まで蒸発する。次いで
、サンプルを、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）移動相内で再構成し、
ポリマーベースの逆相ＨＰＬＣカラム上に注入し、そして逆相勾配溶出クロマト
グラフィーを使用して溶出する。残存ペプチドを、質量分析計セットアップを使
用して検出し、各ペプチドのプロトン化された分子イオンを、ＨＰＬＣカラムか
ら溶出する場合にモニターする。ペプチドを、分析物および検定曲線における標
準に対して得られている内部標準の面積応答比を比較することよって定量する。

【０２６８】 （実施例１５） （ＤＣ産物からのトリフルオロ酢酸除去の確認） 特定の実施形態において、ペプチド試薬を、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）を使用して処方し得る。残存ペプチドを除去するために開発した洗浄手順は
また、残存ＴＦＡを除去する。

【０２６９】 （実施例１６） （樹状細胞放出試験） （同一性） 白血球搬出産物におけるＤＣの数を、単核細胞のフローサイトメーター計数に
よって評価する。この単核細胞は、アフェレーシス産物から無菌的に回収された
１ｍＬのサンプル中に免疫表現型ｌｉｎ⁻／ＨＬＡ−ＤＲ^＋／ＣＤ１１ｃ^＋およ
びｌｉｎ⁻／ＨＬＡ−ＤＲ^＋／ＣＤ１２３^＋を有する。ｌｉｎ⁻細胞は、系統マ
ーカーＣＤ３、ＣＤ１４、ＤＣ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６に対する抗
体のカクテルを使用することによって単球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、および顆
粒球を除去する。

【０２７０】 （細胞生育能） 単核細胞の生育能を、パルス化および洗浄の後、低温保存での懸濁の前にトリ
パンブルー色素除去によって評価する。概して、細胞産物が、５０％より多くト
リパンブルー陽性細胞を含む場合、産物を患者に投与しない。

【０２７１】 （微生物学試験） 低温保存における細胞懸濁を、グラム染色および慣用的な臨床的な細菌培養／
感受性および真菌培養／感受性によって微生物交叉汚染について試験する。試験
が、細菌または真菌交叉汚染に対して陽性（重大な交叉汚染の絶対的な証拠）で
ある場合、産物を注入しない。例えば、グラム染色が陰性である場合、産物を、
培養／感受性の結果を待つ間に最初のワクチン接種について注入し得る。患者が
、注入された汚染菌に対して臨床的に寄与し得る適切な感染の兆候を示す場合、
培養結果に基づく抗体治療を、治療する医師の考えで始める。

【０２７２】 （実施例１７） （患者ワクチン接種） 好ましい実施形態において、凍結したパルス化樹状細胞のアリコートを液体窒
素フリーザーから除去し、注入部位への輸送の間液体窒素を含む絶縁容器内で凍
結したままにする。産物を、３７℃の水浴中において穏やかな攪拌で液浸によっ
て解凍する。解凍後すぐに、細胞懸濁液を、静脈内ラインを介して重力またはシ
リンジポンプによって注入する。あるいは、ワクチンを、注射によって（例えば
、皮下、皮内、または筋肉内）投与する。患者の生命兆候を、注入／注射前およ
び注入の間は５分間隔で、次いで注入／注射後１時間は１５分間隔でモニターす
る。

【０２７３】 当該分野の知識に従う注入プロトコールを、本発明のワクチン実施形態の変わ
りに実施する（例えば、直接ペプチド注入または核酸投与）。

【０２７４】 （実施例１８） （Ａ２ワクチン） 本発明に従うワクチンは、ＨＬＡ−Ａ２スーパーモチーフを保有する８つのペ
プチドエピトープを含む。ひとまとめにして、これらの８つのエピトープは、腫
瘍関連抗原（ＴＡＡ）ＨＥＲ／ｎｅｕ、ｐ５３、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３、およ
び癌胎児抗原（ＣＥＡ）由来であり、これらのＴＡＡに対するＣＴＬ応答を刺激
する（表９を参照のこと）。これらの８つのエピトープ（表６にまた示す）は、
ＨＬＡ−Ａ２スーパーモチーフを保有する。必要に応じて、第９のエピトープ（
ＣＴＬ応答を促進するＨＴＬエピトープ（例えば、ｐａｎ−ＤＲ結合ペプチド（
ＰＡＤＲＥ^ＴＭ、Ｅｐｉｍｍｕｎｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）））を含む。

【０２７５】 Ａ２ワクチンの８つのＨＬＡ−Ａ２ペプチド組成物は、複数のＨＬＡ−Ａ２ス
ーパーファミリー分子に高いまたは中程度の親和性（ＩＣ５０≦５００ｎＭ）で
結合する。ＨＬＡ−Ａ２特異的アナログおよびＡ２ワクチンのネイティブペプチ
ド組成物は、正常なヒトボランティアの末梢血由来のＣＴＬを刺激する。これら
のＣＴＬは、ＨＬＡ−Ａ２発現ＡＰＣ上でパルス化されているネイティブペプチ
ドおよびＨＬＡマッチ腫瘍細胞株によって提示される内因性ペプチドを認識する
。従って、Ａ２ワクチンは、腫瘍に対する免疫応答を媒介する免疫系の細胞性ア
ームの刺激に有効である。

【０２７６】 他のモチーフを保有するペプチド、またはこのようなペプチドをコードする核
酸を含有するワクチンをまた、本明細書中に示される原則に従って使用し、そし
てこのワクチンは本発明の範囲内であることが認識されるべきである。

【０２７７】 好ましい実施形態において、Ａ２ワクチンは、９つのペプチドを用いてエキソ
ビボでパルス化したＤＣを含む。ワクチンの本実施形態を、プロジェニポイエチ
ン（ｐｒｏｇｅｎｉｐｏｉｅｔｉｎ）（ＰｒｏＧＰ）動員ＤＣを用いて使用し得
る。

【０２７８】 （実施例１９） （Ａ２ワクチン） Ａ２ワクチンは、１２個のペプチドのカクテルを含み、その内１０個が、腫瘍
関連抗原（ＴＡＡ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ５３、ＭＡＧＥ２／３、および癌胎児
抗原（ＣＥＡ）に対するＣＴＬ応答を刺激する。残存している２つのペプチドは
、共にＣＴＬ応答を促進するＨＴＬエピトープであるペプチドのＰＡＤＲＥ^ＴＭ ファミリーのメンバーである。Ａ２ワクチンの本実施形態を、エマルジョンベー
スのアジュバント（例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（登録商標）ＩＳＡ５１または
ＩＳＡ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）またはＩｎｃｏｍｐ
ｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）との組み合わせにおいて使用
し、好ましくは注射によって投与する。当業者によって認識されるように、投与
の代替モデルもまた使用し得る。多くのアジュバントは、当該分野で公知であり
、そして本発明に従って使用する（例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ａｄｖａｎ
ｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．３２（３）（
１９９８年７月６日）を参照のこと）。

【０２７９】 本ワクチン実施形態の８つのＨＬＡ−Ａ２ ＣＴＬペプチド構築物は、複数の
ＨＬＡ−Ａ２スーパーファミリー分子に高いまたは中程度の親和性（ＩＣ_５０≦
５００ｎＭ）で結合する。本ワクチンのＨＬＡ−Ａ２特異的アナログおよびネイ
ティブペプチド構築物は、患者の血液由来のＣＴＬを刺激する。これらのＣＴＬ
は、ＨＬＡ−Ａ２発現ＡＰＣ上でパルス化されたネイティブペプチドおよびＨＬ
Ａマッチ腫瘍細胞株によって提示される内因性ペプチドを認識する。

【０２８０】 ＨＬＡクラスＩＩを刺激する２つのペプチドもまた、本発明に従って使用する
。例えば、ｐａｎ−ＤＲ結合エピトープペプチドは、以下の式を有する：ａＫＸ
ＶＡＡＺＴＬＫＡＡａ、ここで「Ｘ」はシクロヘキシルアラニン、フェニルアラ
ニン、またはチロシンのいずれかであり；「Ｚ」はトリプトファン、チロシン、
ヒスチジンまたはアスパラギンのいずれかであり；そして「ａ」はＤ−アラニン
またはＬ−アラニンのいずれかである（配列番号２９）。このｐａｎ−ＤＲ結合
エピトープペプチドは、最もＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子に結合すること、およびＨ
ＬＡ型にかかわらずほとんどの個体由来のＴヘルパーリンパ球応答を刺激するこ
とを見出している。２つの特定の好ましいＰＡＤＲＥ分子は、ペプチド（ａＫＦ
ＶＡＡＹＴＬＫＡＡａ−ＮＨ_２およびａＫＸＶＡＡＨＴＬＫＡＡａ−ＮＨ_２（ａ
＝Ｄ−アラニン、Ｘ＝シクロヘキシルアラニン））であり、後者は非天然アミノ
酸を含み、ＨＬＡ−ＤＲ結合能力およびＴ細胞免疫応答の誘導を共に最大化する
ように特異的に操作する。

【０２８１】 Ａ２ワクチンのＰＡＤＲＥ^ＴＭペプチド成分は、高い親和性および広汎な特異
性でＨＬＡ−ＤＲ分子の複数の対立遺伝子形態に結合する（ＩＣ_５０≦１０００
ｎＭ）。ＰＡＤＲＥペプチドのインビボ投与は、正常なヒトおよび患者集団にお
いてＨＴＬの増殖を刺激する。従って、本ワクチン実施形態は、腫瘍に対する免
疫応答を媒介する免疫系の細胞性アームの刺激に有効である。

【０２８２】 本明細書中に記載される実施例および実施形態は、例示目的のためだけと理解
され、そしてそれらを考えた種々の改変または変更は当業者にとって示唆される
ことは、本出願の精神および範囲および添付の請求の範囲内に含まれるべきであ
る。本明細書中で引用する全ての刊行物、特許、および特許出願は、その全体が
全ての目的のため参考として本明細書によって援用される。

【０２８３】

【表２】

【０２８４】

【表３】

【０２８５】

【表４】

【０２８６】

【表５】

【０２８７】

【表６】

【０２８８】

【表７】

【０２８９】

【表８】

【０２９０】

【表９】

【０２９１】

【表１０】

【０２９２】

【表１１】

【０２９３】

【表１２】

【０２９４】

【表１３】

【０２９５】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ＰＡＤＲＥが、ヒトＰＢＭＣ由来の抗原特異的Ｔ細胞応答を促進する
ことを示す。図１において、３人の健康なドナー（ドナー４３１、３９７、およ
び３４４）由来のＰＢＭＣを、インビトロで刺激した。簡単に言うと、Ｆｉｃｏ
ｌｌ−Ｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ）精製されたＰＢＭＣを、２４
ウェル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に４×１０^６細胞／ウェルでプレート
した。ペプチドを、終濃度１０μｇ／ｍｌで添加し、そして３７℃で４日間イン
キュベートした。組換えインターロイキン−２を、終濃度１０ｎｇ／ｍｌで添加
し、そして培養物に新鮮な培地およびサイトカインを３日毎に与えた。抗原を用
いたＴ細胞の２回のさらなる刺激を、約１４日目および約２８日目に実施した。
Ｔ細胞（３×１０^５細胞／ウェル）を、照射（７５００ｒａｄ）自己ＰＢＭＣ細
胞を用いて１０μｇ／ｍｌペプチドで再刺激した。Ｔ細胞増殖応答を、^３Ｈ−チ
ミジン取り込みアッセイを用いて決定した。

【図２】 図２は、ＰＡＤＲＥ特異的増殖応答が、ペプチドワクチン接種を介して誘導さ
れることを示す。図２において、ワクチン接種の２週間後、１２人の頸部癌患者
のうちの４人（００２、００５、００８、および０１４）のＰＢＭＣが、５μｇ
／ｍｌ ＰＡＤＲＥペプチドを用いてインビトロにおいて刺激した場合、増殖を
示した（４／１２＝３３％の応答患者、９５％ 間隔 １０〜６５％）（Ｔｘ＝
処理）。複数ウェルの増殖指数を、コントロールウェルからの平均ｃｐｍで除し
た実験ウェルからの平均ｃｐｍとして計算した。ＰＡＤＲＥ−特異的応答は、増
殖指数が５を超えた場合、陽性であるとみなした。複製物間の変動は、常に２５
％未満であった（Ｒｅｓｓｉｎｇら、Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｈｅｌｐｅｒ ｐｅｐｔｉｄｅ，ｂｕｔ ｎｏｔ
ｔｏ ｖｉｒａｌ ＣＴＬ ｅｐｉｔｏｐｅｓ，ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅ
ｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃ
ａｒｃｉｎｏｍａ．Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ（１９９９））。

【図３】 図３は、ＰｒｏＧＰ処理マウス由来の脾ＤＣがＣＴＬ株に対してＨＢＶ由来Ｃ
ＴＬエピトープを提示することを表す。図３において、ＰｒｏＧＰ処理ＨＬＡ−
Ａ２．１／Ｋ^ｂ−Ｈ−２^ｂｘｓトランスジェニックマウス（３３μｇ／動物、Ｑ
Ｄ、７日間のＳＣ）由来の脾ＤＣを、抗ＣＤ１１ｃ抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂ
ｉｏｔｅｃ）を用いて富化した。Ｂ細胞を、細胞をビオチン化抗ＣＤ１９抗体お
よびストレプトアビジン結合ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用い
て細胞を処理した後、磁気分離によって正常脾臓から単離した。ＤＣをまた、Ｇ
Ｍ−ＣＳＦ／ＩＬ−４を用いた培養によって骨髄細胞から生成した。ＤＣまたは
Ｂ細胞（１×１０^５細胞）を、１×１０^４ＣＴＬ株１１６８および種々の濃度の
ＨＢＶ Ｐｏｌ ４５５ペプチドを用いて、３μｇ／ｍｌのβ２−ミクログロビ
リン（Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含むＯｐｔｉ−ＭＥＭ
Ｉ培地中でインキュベートした。細胞を、抗ＩＦＮγ捕獲抗体で予めコートされ
た９６平底ウェルＥＬＩＳＡプレートに添加した。１８〜２０時間３７℃でのイ
ンキュベーション後、刺激された株１１６８によるＩＦＮγのインサイチュ生成
を、サンドイッチＥＬＩＳＡを用いて測定した。１つの実験からのデータを示す
。類似の結果が、さらなる実験において得られている。研究は、Ｅｐｉｍｍｕｎ
ｅ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡで実施した。

【図４】 図４は、ＰｒｏＧＰ処理マウス由来の脾ＤＣがインビボにおいてＣＴＬ応答を
誘導することを示す。図４において、ＰｒｏＧＰ処理ＨＬＡ−Ａ２．１トランス
ジェニックマウス（３３μｇ／動物、ＱＤ、７日間のＳＣ）由来の脾ＤＣを、３
μｇ／ｍｌ β２−ミクログロビリン（Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ）を含むＯｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ培地（Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）中、ＨＢＶ Ｐｏｌ ４５５ペプチドを用いてインビトロでパルスした（
ペプチド１０μｇ／ｍｌで１０^６細胞／ｍｌ）。３時間室温でペプチドをパルス
した後、ＤＣを洗浄し、そして１０^６個の細胞を、３匹のトランスジェニックマ
ウスのＩＶ群に注射した。エピトープパルスされたＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４拡大
ＤＣおよび「モック（ｍｏｃｋ）パルスされた」ＰｒｏＧＰ由来ＤＣをまた、比
較のために試験した。ＤＣを用いた一次免疫を受けた７日後、動物を、同じＤＣ
集団を用いてブーストした。一次免疫の１４日後、免疫動物由来の脾細胞を、Ｐ
ｏｌ ４５５ペプチドの存在下、インビトロで２回刺激した。再刺激後のＣＴＬ
活性を、標準^５２Ｃｒ放出アッセイを用いて測定し、このアッセイにおいて、^{５ １} Ｃｒ標識 ＨＬＡ−Ａ２．１トランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ標的細胞の
溶解を、ペプチドの存在（丸記号）または非存在（四角記号）で測定した。パネ
ルＡ〜Ｃに示されるデータの点は、３連のセットの培養物由来の複合物の溶解活
性を示す。パネルＡ、ＨＢＶ Ｐｏｌ ４５５ペプチドでパルスされたＰｒｏＧ
Ｐ（ＳＤ−９４２７）処理動物由来の脾ＤＣ。パネルＢ、ＨＢＶ Ｐｏｌ ４５
５ペプチドでパルスされたＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４拡大ＤＣ。パネルＣ、Ｐｒｏ
ＧＰ処理動物由来のモックパルスされたＤＣ。研究は、Ｅｐｉｍｍｕｎｅ Ｉｎ
ｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡで実施した。

【図５】 図５は、樹状細胞をパルスする手順および試験する手順の模式図を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 19/00 Ｃ０７Ｋ 19/00 (31)優先権主張番号 ０９／５８３，２００ (32)優先日 平成12年５月30日(2000．5．30) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 シドニー， ジョン アメリカ合衆国 カリフォルニア 92130， サン ディエゴ， コート デ ラ シ エナ 4218 (72)発明者 サウスウッド， スコット アメリカ合衆国 カリフォルニア 92071， サンティー， ストラスモア ドライブ 10679 (72)発明者 セリス， エステバン アメリカ合衆国 ミネソタ 55902， ロ チェスター， ライト ロード エス．ダ ブリュー． 3683 (72)発明者 ケオグ， エリッサ アメリカ合衆国 カリフォルニア 92121， サン ディエゴ， カミニト デル デ ィアマンテ 4343 (72)発明者 チェスナット， ロバート アメリカ合衆国 カリフォルニア 92007， カーディフ−バイ−ザ−シー， キング ス クロス ドライブ 1473 Ｆターム(参考） 4C076 AA19 CC06 CC27 4C085 AA03 AA38 BB01 CC32 EE06 FF24 4H045 AA10 AA30 BA15 BA16 BA41 CA40 DA86 EA31

Claims (41)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも１つのペプチドを含む組成物であって、該ペプチ
   ドが、以下： 【化１】 からなる群より選択される配列からなる単離され、調製されたエピトープを含む
   、組成物。
2. 【請求項２】 ２つのペプチドを含む、請求項１に記載の組成物であって、
   第２のペプチドが、請求項１に記載の群より選択される第２の配列からなる第２
   の単離され、調製されたエピトープを含む、組成物。
3. 【請求項３】 ３つのペプチドを含む、請求項２に記載の組成物であって、
   第３のペプチドが、請求項１に記載の群より選択される第３の配列からなる第３
   の単離され、調整されたエピトープを含む、組成物。
4. 【請求項４】 ８つのペプチドを含む、請求項１に記載の組成物であって、
   該８つのペプチドが、請求項１に記載の群より選択される８つの配列からなる８
   つの単離され、調整されたエピトープを含む、組成物。
5. 【請求項５】 請求項４に記載の組成物であって、ここで前記８つのエピト
   ープが、以下： 【化２】 である、組成物。
6. 【請求項６】 前記エピトープがアミノ酸リンカーに結合される、請求項１
   に記載の組成物。
7. 【請求項７】 前記エピトープがＣＴＬエピトープに混合されるか、または
   結合される、請求項１に記載の組成物。
8. 【請求項８】 前記エピトープがＨＴＬエピトープに混合されるか、または
   結合される、請求項１に記載の組成物。
9. 【請求項９】 ＨＴＬエピトープがｐａｎ−ＤＲ結合分子である、請求項４
   に記載の組成物。
10. 【請求項１０】 リポソームをさらに含み、前記エピトープが該リポソーム
    上または該リポソーム内にある、請求項１に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 前記エピトープが脂質に結合される、請求項１に記載の組
    成物。
12. 【請求項１２】 エピトープがヘテロポリマーである、請求項１に記載の組
    成物。
13. 【請求項１３】 前記エピトープがホモポリマーである、請求項１に記載の
    組成物。
14. 【請求項１４】 前記エピトープが、ＨＬＡ重鎖、β２−ミクログロブリン
    、およびストレプトアビジン複合体に結合され、それによりテトラマーが形成さ
    れている、請求項１に記載の組成物。
15. 【請求項１５】 抗原提示細胞をさらに含む、請求項１に記載の組成物であ
    って、ここで前記エピトープが、該抗原提示細胞上にあるかまたは該抗原提示細
    胞内にある、組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載の組成物であって、ここで前記エピトー
    プが、抗原提示細胞上のＨＬＡ分子に結合され、それにより、Ａ２拘束細胞傷害
    性リンパ球（ＣＴＬ）が存在する場合に、該ＣＴＬのレセプターが、該ＨＬＡ分
    子と該エピトープとの複合体に結合する、組成物。
17. 【請求項１７】 抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項１１に記載の組成
    物。
18. 【請求項１８】 １つ以上のペプチドを含み、かつ以下： 【化３】 からなる群より選択される少なくとも２つのエピトープをさらに含む、組成物で
    あって； ここで、該１つ以上のペプチドのそれそれが、ネイティブペプチド配列と１００
    ％の同一性を有する５０個未満の連続するアミノ酸を含む、組成物。
19. 【請求項１９】 １つのペプチドが前記少なくとも２つのエピトープを含む
    、請求項１８に記載の組成物。
20. 【請求項２０】 請求項１８に記載の群より選択される少なくとも３つのエ
    ピトープを含む、請求項１８に記載の組成物。
21. 【請求項２１】 請求項１８に記載の群より選択される少なくとも４つのエ
    ピトープを含む、請求項１８に記載の組成物。
22. 【請求項２２】 請求項１８に記載の群より選択される少なくとも５つのエ
    ピトープを含む、請求項１８に記載の組成物。
23. 【請求項２３】 請求項１８に記載の群より選択される少なくとも６つのエ
    ピトープを含む、請求項１８に記載の組成物。
24. 【請求項２４】 請求項１８に記載の群より選択される少なくとも７つのエ
    ピトープを含む、請求項１８に記載の組成物。
25. 【請求項２５】 請求項１８に記載の群より選択される少なくとも８つのエ
    ピトープを含む、請求項１８に記載の組成物。
26. 【請求項２６】 前記１つ以上のペプチドの少なくとも１つが、ヘテロポリ
    マーである、請求項１８に記載の組成物。
27. 【請求項２７】 前記１つ以上のペプチドの少なくとも１つが、ホモポリマ
    ーである、請求項１８に記載の組成物。
28. 【請求項２８】 さらなるエピトープをさらに含む、請求項１８に記載の組
    成物。
29. 【請求項２９】 前記さらなるエピトープが腫瘍関連抗原由来である、請求
    項２８に記載の組成物。
30. 【請求項３０】 前記さらなるエピトープがＰａｎＤＲ結合分子である、請
    求項２８に記載の組成物。
31. 【請求項３１】 ワクチン組成物であって、該ワクチン組成物が、ＣＥＡ、
    ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ２、ＭＡＧＥ３、またはｐ５３のネイティブペプチ
    ド配列と１００％の同一性を有する５０個未満の連続するアミノ酸を含むペプチ
    ドの単位用量、および薬学的賦形剤を含み、該ペプチドが、以下： 【化４】 からなる群より選択されるエピトープを含む、ワクチン組成物。
32. 【請求項３２】 前記エピトープがＹＬＳＧＡＮＬＮＶ（配列番号２）であ
    る、請求項３１に記載のワクチン組成物。
33. 【請求項３３】 前記エピトープがＫＬＢＰＶＱＬＷＶ（配列番号６）であ
    る、請求項３１に記載のワクチン組成物。
34. 【請求項３４】 前記エピトープがＳＭＰＰＰＧＴＲＶ（配列番号８）であ
    る、請求項３１に記載のワクチン組成物。
35. 【請求項３５】 さらなるエピトープをさらに含む、請求項３１に記載のワ
    クチン組成物。
36. 【請求項３６】 前記さらなるエピトープがＰａｎＤＲ結合分子である、請
    求項３５に記載のワクチン組成物。
37. 【請求項３７】 前記薬学的賦形剤がアジュバントを含む、請求項３１に記
    載のワクチン組成物。
38. 【請求項３８】 抗原提示細胞をさらに含む、請求項３１に記載のワクチン
    組成物。
39. 【請求項３９】 請求項３８に記載のワクチン組成物であって、ここでエピ
    トープが抗原提示細胞上のＨＬＡ分子に結合され、それにより、Ａ２スーパータ
    イプ拘束細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）が存在する場合に、該ＣＴＬのレセプタ
    ーが、該ＨＬＡ分子と該エピトープとの複合体に結合する、ワクチン組成物。
40. 【請求項４０】 前記抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項３８に記載の
    ワクチン組成物。
41. 【請求項４１】 リポソームをさらに含む、請求項３１に記載の組成物であ
    って、ここで、少なくとも１つの前記エピトープが、該リポソーム上にあるかま
    たは該リポソーム内にある、ワクチン組成物。