JP2003514546A

JP2003514546A - ヒト樹状細胞において特異的に発現される遺伝子

Info

Publication number: JP2003514546A
Application number: JP2001538952A
Authority: JP
Inventors: コンスタンスエイチ．ズロト，; ホッセヤンアデマ，; カールフフドル，; ジョセフエイチ．フィリップス，
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 1999-11-15
Filing date: 2000-11-15
Publication date: 2003-04-22
Also published as: WO2001036463A3; WO2001036463A2; EP1240183A2; AU1604701A; CA2391669A1; MXPA02004825A

Abstract

(57)【要約】哺乳動物由来のタンパク質をコードする精製された遺伝子、精製タンパク質を含む、それらに関連する試薬、特異的抗体、およびこれらの分子をコードする核酸が提供される。この試薬および診断キットを使用する方法もまた提供される。本発明は、膜タンパク質（例えば、免疫または他の細胞間のシグナルを媒介し得る表面分子である）である種々の哺乳動物タンパク質をコードするアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を提供する。ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１をコードする種々のｃＤＮＡを同定した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本願は、１９９９年１１月１５日に出願されたＵＳＳＮ０９／４３９，７３５
の優先権を主張する米国実用特許出願である。これは、本明細書中に参考として
援用される。

【０００２】（本発明の分野）本発明は、哺乳動物細胞（例えば、哺乳動物免疫系細胞）の生物学および生理
学を制御することにその機能があるタンパク質に関連する組成物に関する。特に
、これは精製した遺伝子、タンパク質、抗体、および造血細胞を含む種々の細胞
型の活性化、発生、分化および機能の調節に関連した有用な物質を提供する。

【０００３】（本発明の背景）組換えＤＮＡ技術は、一般的に、ドナー供給源からベクターへの遺伝的情報の
組込み技術に続くプロセシング（例えば、宿主への導入を介する）に対して言い
、これによって転移された遺伝子情報が、新しい環境でコピーおよび／または発
現される。一般に、遺伝的情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセン
ジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）由来の相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形体で存在する。
しばしば、キャリアは、宿主中で、以後の複製のためのｃＤＮＡ組込み能を有す
るプラスミドであり、そしていくつかの場合において、実際にｃＤＮＡの発現を
制御する能力およびこれにより宿主中でコードされた産物を直接合成する能力を
有する。

【０００４】免疫応答に対して特に重要な細胞系統としてリンパ球の以下の２つの分類が挙
げられる：免疫グロブリン（異物を認識し、そして異物に結合してその除去をも
たらす能力を有するタンパク質）を生成および分泌し得るＢ-細胞、およびリン
ホカインを分泌し、そしてＢ細胞および免疫ネットワークを構成する種々の他の
細胞（他のＴ細胞を含む）を誘導または抑制するＴ細胞の種々のサブセット。こ
れらのリンパ球は、多くの他の細胞型と相互作用する。

【０００５】樹状細胞（ＤＣ）は、免疫系の専門的な抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。これ
らは、ネイティブＴリンパ球を活性化する独特の能力（例えば、免疫応答の誘導
において重要な役割を果たす能力）を有する。複数の研究は、他のＡＰＣ（例え
ば、Ｂ細胞およびマクロファージ）を比較した場合に、ＤＣがネイティブＴ細胞
を初期刺激することに優れていることを示した。Ｓｔｅｉｎｍａｎ（１９９１）
、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２７１〜２９６；Ｈａｒｔ（１９９７
）、Ｂｌｏｏｄ９０：３２４５〜３２８７；およびＬｅｖｉｎら（１９９３）
、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：６７４２〜６７５０。最近の実験は、別個のＤ
Ｃサブセットが、インビボで生成した免疫応答型に対して顕著に異なる影響を有
するＤＣサブセットに認識され得ることを示唆する。例えば、Ｒｉｓｓｏａｎら
（１９９９）、Ｓｃｉｅｎｃｅ２８３、１１８３〜１１８６；Ｐｕｌｅｎｄｒ
ａｎら（１９９９）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６：
１０３６〜１０４１；Ｍａｌｄｏｎａｄｏ−Ｌｏｐｅｚら（１９９９）、Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：５８７〜５９２；およびＳｍｉｔｈおよびＦａｚｅｋａ
ｓｄｅＳｔ．Ｇｒｏｔｈ（１９９９）、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：５９
３〜５９８を参照のこと。

【０００６】ＤＣは、骨髄由来の細胞であり、成熟期にあるＤＣは、身体全体にわたって散
在しており、そして抗原捕捉に専門化した種々の細胞表面レセプターを介する抗
原取り込みに特に効率的である。Ｓａｌｌｕｓｔｏら（１９９５）、Ｊ．Ｅｘｐ
．Ｍｅｄ．１８２：３８９〜４００を参照のこと。炎症の際に、ＤＣは、リンパ
液または血液を介して二次リンパ器官に移動する。この移動プロセスは、ケモカ
インレセプターのアップレギュレーションとダウンレギュレーションにより調節
されるようである。Ｓｌｌｕｓｔｏら（１９９８）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．２８：２７６０〜２７６９；およびＳｏｚｚａｎｉら（１９９８）、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１６１：１０８３〜１０８６を参照のこと。

【０００７】Ｔ細胞領域に到着の際に、ＤＣは、成熟しそして完全に刺激され、ネイティブ
Ｔ細胞を誘引しそしてネイティブＴ細胞と相互作用するための十分な機能が備え
られる。これらのＤＣは、一次Ｔ細胞応答の誘導を支持する高レベルのＭＨＣ分
類Ｉ、ＭＨＣ分類ＩＩ、接着分子および同時刺激分子を発現する。続いて、ＤＣ
４＋Ｔヘルパー細胞との相互作用の後のＤＣ上でのＣＤ４０ライゲーションは、
成熟ＤＣの最大の活性化をもたらし、さらにネイティブな細胞毒性Ｔリンパ球を
刺激するこれらの能力を増強する。Ｃａｕｘら（１９９４）、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１８０：１２６３〜１２７２；Ｃｅｌｌａら（１９９６）、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．１８４：７４７〜７５２；Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら（１９９８）、Ｎ
ａｔｕｒｅ３９３：４８０〜４８３；Ｒｉｄｇｅら（１９９８）、Ｎａｔｕｒ
ｅ３９３：４７４〜４７８；およびＢｅｎｎｅｔｔら（１９９８）、Ｎａｔｕ
ｒｅ３９３：４７８〜４８０を参照のこと。

【０００８】Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびマクロファージに加えて、別の重要な細胞系統が肥
満細胞（これは、すべての哺乳動物種で積極的には同定されていなかった）であ
る。肥満細胞は、身体全体にわたる毛細血管の近くに配置された顆粒球を含む結
合組織細胞である。これらの細胞は、肺、皮膚、ならびに胃腸管および尿生殖路
において高濃度で見出される。肥満細胞は、アレルギー関連疾患、特に以下のア
ナフィラキシーにおいて中心的な役割を果たす：選択された抗原が、肥満細胞表
面上のレセプターに結合する免疫グロブリンの１つの分類に架橋する場合、肥満
細胞は、脱顆粒し、そしてメディエーター（例えば、アレルギー反応（例えば、
アナフィラキシー）を引き起こすヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、およびプ
ロスタグランジン）を放出する。

【０００９】広範で種々の免疫学的プロセスにおけるＤＣの役割は示されてきたが、ＤＣ分
化、移動および成熟を調節する分子メカニズムは、なお十分に理解されていない
。種々の免疫障害をよりよく理解しかつ処置するための調査は、免疫系細胞をイ
ンビトロで維持することが、一般的に不可能であることにより妨げられていた。
免疫学者は、これらの細胞を培養することが、多くのリンホカインを含む種々の
成長因子を含むＴ細胞および他の細胞の上清の使用により達せられ得ることを発
見した。

【００１０】前述から、新しい表面抗原の発見および開発が、免疫系細胞および／または造
血細胞を直接または間接的に含む広範な変性状態または異常状態のための新しい
治療に寄与することが明らかである。特に、公知のリンホカインの有益な活性を
増強または可能にするリンホカインの発見および開発は、非常に有益である。本
発明は、新しい組成物および関連した化合物、ならびにこれらの使用方法を提供
する。

【００１１】（発明の要旨）本発明は、樹状細胞特異的細胞膜貫通タンパク質（ＤＣ−ＳＴＡＭＰ）および
ＤＮＡＸ表面タンパク質と命名された哺乳動物（例えばげっ歯動物、イヌ科、ネ
コ科、霊長類）のタンパク質ならびにこれらの生物学的活性に関する。これは、
ポリペプチド自身をコードする核酸およびこれらの生成方法および使用方法を含
む。本発明の核酸は、本明細書中で開示された相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列に
対するこれらの相同性、および／または代表的にこれらの核酸によりコードされ
たポリペプチドに適用された機能的アッセイにより、部分的に特徴付けられる。
生理学または免疫応答に依存する表面タンパク質制御の調節方法または介入方法
が提供される。

【００１２】本発明は、樹状細胞または肥満細胞由来の新規な表面タンパク質の発見に部分
的に基づく。これは、特に霊長類（例えば、ヒト）配列を提供する。有意な配列
相同性を示す機能的等価物は、他の哺乳動物（例えば、ウシ、ウマ、ラット、マ
ウス）、および非哺乳動物（例えば、鳥類を含む温血動物）から入手可能である
。

【００１３】種々のタンパク質の実施形態において、本発明は以下を提供する：配列番号２
または５または７に対して少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性を示す
実質的に純粋なまたは組替えＤＣ−ＳＴＡＭＰポリペプチドまたはＤＳＰ−１ポ
リペプチド；配列番号２の天然のＤＣ−ＳＴＡＭＰ配列；配列番号５または７の
天然のＤＳＰ−１配列；およびＤＣ−ＳＴＡＭＰ配列またはＤＳＰ−１配列を含
む融合たんぱく質。特定の実施形態において、セグメントの同一性は、少なくと
も約１４、１７、または１９アミノ酸である。他の実施形態において、表１また
は表２からの配列を含む成熟配列を含むか；または天然のＤＣ−ＳＴＡＭＰまた
はＤＳＰ−１を区別する翻訳後改変パターンを示すか；またはこのポリペプチド
が：霊長類を含む哺乳動物から選択された温血動物に由来であり；配列番号２ま
たは５または７の少なくとも１つのポリペプチドセグメントを含み；複数のフラ
グメントを示し；ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１の天然の対立遺伝子変異体
であり；少なくとも約３０アミノ酸長を有し；霊長類ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤ
ＳＰ−１に特異的な少なくとも２つの非オーバーラップエピトープを示し；霊長
類ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１に対して少なくとも約２０アミノ酸長にわ
たる配列の同一性を示し；糖化され；天然の糖化を含む少なくとも３０ｋＤ分子
量を有し；合成ポリペプチドであり；固体基質に結合され；別の化学的部分に結
合され；天然の配列からの置換が１／５以下であり；または天然の配列からの欠
失または挿入変異体である。好ましい実施形態として以下の組成物が挙げられ得
：滅菌ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１ポリペプチド；またはＤＣ−ＳＴＡＭ
ＰまたはＤＳＰ−１ポリペプチドおよびキャリア、ここでキャリアは：水、生理
食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物であり；そして／または経口、
直腸、経鼻、局所、または非経口投与のために処方される。融合タンパク質の実
施形態において、タンパク質は：表１または表２からの成熟ポリペプチド配列；
ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ６、またはＩｇ配列を含む検出または精製タグ；おび／または
Ｆｌｔ３リガンドを含む別のサイトカイン配列またはケモカイン配列を有し得る
。

【００１４】キットの実施形態は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１ポリペプチドを有す
るこれら、および：ポリペプチドを含むコンパートメント；および／またはキッ
ト中の試薬の使用または処置のための説明書を含む。

【００１５】結合化合物の実施形態において、化合物は、抗体由来の抗原結合部位を有し得
、これらは、特に天然のＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１ポリペプチドに結合
する。ここで：ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１は、霊長類のタンパク質であ
り；結合化合物は、Ｆｖ、Ｆａｂ、またはＦａｂ２フラグメントであり；結合化
合物は、別の化学的部分に結合し；または抗体は：表１または表２からの成熟ポ
リペプチド部分のペプチド配列に対して惹起され；成熟ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたは
ＤＳＰ−１に対して惹起され；精製された霊長類ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ
−１に対して惹起され；免疫選択され；ポリクローナル抗体であり；変性したＤ
Ｃ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１に結合し；少なくとも３０μＭのＫｄを示し；
ビーズまたはプラスチック膜を含む固体基質に結合され、滅菌組成物中にあり；
または検出可能に標識化される（放射活性標識または蛍光標識を含む）。結合化
合物を含むキットとして以下を有するキットが挙げられる：結合化合物を含むコ
ンパートメント；および／またはキット中の物質の使用および処置のための説明
書。しばしば、キットは、定性分析または定量分析することが可能である。好ま
しい組成物は：滅菌結合化合物；または結合化合物およびキャリアを含む。ここ
で、キャリアは：水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物であ
り；そして／または経口、直腸、経鼻、局所、または非経口投与に対して処方さ
れる。

【００１６】核酸実施形態は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１ポリペプチドまたは融合
タンパク質をコードする単離された核酸または組替え核酸を含む。ここで：ＤＣ
−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１は霊長類由来であり；および／または核酸は：表
１または表２の抗原ペプチド配列をコードし；表１または表２の複数の抗原ペプ
チド配列をコードし；セグメントをコードする天然ｃＤＮＡに対する同一性を示
し；発現ベクターであり；さらに複製起点を含み；天然の供給源由来であり；検
出可能な標識を含み；合成ヌクレオチド配列を含み；６ｋｂ以下、好ましくは３
ｋｂ以下であり；ヒトを含む霊長類由来であり；天然のコード配列全長を含み；
ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１をコードする遺伝子のためのハイブリダイゼ
ーションプローブであり；またはＰＣＲプライマー、ＰＣＲ生成物、または変異
誘発プライマーである。本発明はまた、このような組替え核酸を含む細胞、組織
、または器官を提供し、そして好ましくはこの細胞は：原核生物細胞；真核生物
細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞
；またはヒト細胞である。

【００１７】キットの実施形態として、このような核酸を含むこれらおよび：核酸を含むコ
ンパートメント；ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１タンパク質またはポリペプ
チドをさらに含むコンパートメント；および／またはキット中の試薬の使用また
は処置のための説明書を含む。代表的には、このキットは定性分析または定量分
析をすることが可能である。

【００１８】特定の実施形態において、核酸は：３０℃および２Ｍ以下の塩、または４５℃
および／または５００ｍＭの塩、または５５℃および／または１５０ｍＭの塩の
洗浄条件下で配列番号１または４または６とハイブリダイズし；または霊長類Ｄ
Ｃ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１に対して少なくとも約３０、５５、または７５
ストレッチにわたって同一性を示す。

【００１９】本発明は、霊長類ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１のアゴニストまたはアン
タゴニストと接触する細胞を含む細胞または組織培養細胞の生理学または発生を
調節する方法を包括する。この方法は：接触がＦｌｔ３リガンドのアゴニストま
たはアンタゴニストとの組み合わせにあり；または接触が、ＤＣ−ＳＴＡＭＰま
たはＤＳＰ−１を特異的に結合する抗体結合部位を含む結合組成物を含むアンタ
ゴニストとの接触であるところにあり得る。

【００２０】（参照実施形態の詳細な説明）本明細書中に列挙されたすべての参考文献は、各々個々の刊行物または特許出
願が明確にそして個々に参考として援用されることが記載されるかのように参考
として本明細書中で援用される。

【００２１】概略Ｉ．概要ＩＩ．精製されたＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１Ａ．物理的性質Ｂ．生物学的性質ＩＩＩ．物理的変異体Ａ．配列変異体、フラグメントＢ．翻訳後変異体１．糖化２．その他ＩＶ．機能的変異体Ａ．アナログ、フラグメント１．アゴニスト２．アンタゴニストＢ．模倣物１．タンパク質２．化学物質Ｖ．抗体Ａ．ポリクローナルＢ．モノクローナルＣ．フラグメント、結合組成物ＶＩ．核酸Ａ．天然の単離物；方法Ｂ．合成遺伝子Ｃ．単離物に対する方法ＶＩＩ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１、模倣物の生成Ａ．組替え方法Ｂ．合成方法Ｃ．天然の精製ＶＩＩＩ．使用Ａ．診断Ｂ．治療ＩＸ．キットＡ．核酸試薬Ｂ．タンパク質試薬Ｃ．抗体試薬Ｘ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１のための単離レセプター（Ｉ．概要）本発明は、膜タンパク質（例えば、免疫または他の細胞間のシグナルを媒介し
得る表面分子である）である種々の哺乳動物タンパク質をコードするアミノ酸配
列およびＤＮＡ配列を提供する。例えば、Ｐａｕｌ（１９９７）、Ｆｕｎｄａｍ
ｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版）、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、Ｎ．
Ｙ．を参照のこと。タンパク質、およびフラグメント、またはアンタゴニストは
、レセプターまたは結合パートナーを発現する細胞の生理学的調節において有用
である．ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１は、造血細胞（例えば、リンパ球（
例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、樹
状細胞、造血前駆体、肥満細胞）などが挙げられる）に刺激効果または阻害効果
のいずれかを有するらしい。このタンパク質はまた、抗原（例えば、タンパク質
（直線状エピトープおよび立体配座エピトープの両方）上の種々のエピトープに
対する抗体を惹起するための免疫原）として有用である。

【００２２】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１をコードする種々のｃＤＮＡが、同定され
た。ＤＣ−ＳＴＡＭＰは、ヒト単球由来の樹状細胞から調製されたｃＤＮＡから
同定された。ＤＳＰ−１は、ヒトＨＥＬ細胞株由来のｃＤＮＡライブラリーから
同定された。

【００２３】Ｂリンパ球および単核食細胞とともに、樹状細胞（ＤＣ）は、専門化した抗原
提示細胞（ＡＰＣ）である。ＤＣは、ネイティブＴ細胞に対して抗原提示するこ
れらの能力において独特であり、従って、免疫応答の開始において中心的な役割
を果たす。ＤＣに特異的な遺伝子の特徴づけは、これらの強力な抗原提示能力の
根底にあるメカニズム解明のために役立ち得る。単球由来のＤＣから調製された
ｃＤＮＡライブラリー由来のクローンのランダム配列決定により単離された新規
な転写物の同定がここに示される。２．３ｋｂのメッセンジャーＲＮＡが、特に
ＤＣにより発現され、そして他の白血球または非造血細胞パネルには存在しない
。さらに、いくつかのヒト器官の組織において、発現が検出されなかった。転写
物は、約４７０個のアミノ酸のタンパク質をコードし、これは、７個の推定膜貫
通ドメインから構成される。この新規なタンパク質は、樹状細胞特異的膜貫通タ
ンパク質（ＤＣ−ＳＴＡＭＰ）と命名された。２９３の細胞におけるＤＣ−ＳＴ
ＡＭＰ−ＧＦＰタンパク質の発現は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰが細胞表面で発現される
ことを示す。別のタンパク質または多重層膜スパニングレセプターとの相同性は
見出されなかった。ＤＣ−ＳＴＡＭＰは、膜貫通タンパク質の新しい郡を表す新
規のＤＣ特異的多重層膜スパニングタンパク質であるらしい。

【００２４】分子レベルでＤＣを特徴付けるために、ｃＤＮＡライブラリーが、ヒト単球由
来の樹状細胞（ＤＣ）から調製され、そしてヌクレオチド配列分析により２５０
のｃＤＮＡクローンにわたって特徴付けられた。Ｍａｒｌａｎｄら（１９９７）
、Ｒｉｃｃｉａｒｄｉ−Ｃａｓｔｏｇｎｏｌｉ（編）、ＤｅｎｄｒｉｔｉｃＣ
ｅｌｌｓｉｎＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻、ＰｌｅｎｕｍＰｕｂｌ．Ｃｏｒｐ．を参照のこと。
これらのｃＤＮＡクローンの１つが、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースに存在しない
独特の配列を含み、そしてその部分的なオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ
）が推定の膜貫通（ＴＭ）領域をコードするらしいとしてより詳細に分析された
。この新規のメッセンジャーＲＮＡの発現パターンを決定するために、ノザンブ
ロッド分析が、非刺激のＤＣ由来のＲＮＡならびに新しく分離された白血球集団
およびいくつかのＴ細胞、Ｂ細胞および単球細胞株のパネル由来のＲＮＡを使用
して実施された。２．３ｋｂのメッセージは、ＤＣにおいて具体的に検出された
が、試験されたその他の細胞集団のいくつかにおいては検出されなかった。従っ
て、この新規なタンパク質は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ（ＤＣ特異的膜貫通タンパク質
）と命名された。このＲＮＡがＤＣ由来のポリＡ⁺ＲＮＡ画分に富んでいるとい
う知見は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰをコードするｍＲＮＡがポリアデニル化されること
を示す。

【００２５】ヒトＤＣ−ＳＴＡＭＰ遺伝子は、約４７０個のアミノ酸の膜タンパク質をコー
ドする。表１および配列番号１および配列番号２を参照のこと。ＤＣ−ＳＴＡＭ
Ｐは、複数の膜スパンニングタンパク質（例えば、７個の細胞膜貫通レセプター
）のメンバーの構造的モチーフの性質を示す。他の注目すべきモチーフまたは特
徴として、ａｓｎ１６８−ｔｈｒ１７０、ａｓｎ１８７−ｓｅｒ１８８、および
ａｓｎ３５７−ｓｅｒ３５９（推定された３つのＮに結合したグリコシル化部位
）；およびｔｈｒ２８６−ｌｙｓ２８８（ＰＫＣによるリン酸化可能部位）；お
よびｌｙｓ４２６−ｓｅｒ４２９およびａｒｇ４３８−ｓｅｒ４４１（ｃＡＭＰ
依存タンパク質キナーゼに対する可能部位）が挙げられる。

【００２６】ヒトＤＳＰ−１は、２つの形体を示すようである。長い形体と命名された１つ
の形体は、約３１３のアミノ酸の膜タンパク質をコードし、そして短い形体と命
名された他方は、約２００のアミノ酸の膜タンパク質をコードする。短い形体は
、長い形体のヌクレオチド９４〜４３３の欠失、およびこのタンパク質の対応す
るアミノ酸から生じるようである。両形体は、長い形体の約ｌｅｕ１７２〜ｇｌ
ｙ１８８の残基に対応する膜貫通セグメントを有するＩ型膜タンパク質をコード
するようである。他の注意すべきモチーフまたは特徴として、長い形体の約ｌｅ
ｕ２２２〜ｌｅｕ２２７、ｖａｌ２４４〜ｖａｌ２５１、およびｌｅｕ２５８〜
ｖａｌ２６３の残基に対応する３つのＩＴＩＭモチーフが挙げられる。例えば、
Ｔｈｏｍａｓ（１９９５）、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：１９５３−ｘｘ；お
よびＬａｎｉｅｒ（１９９７）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ６：３７１を参照のこと。
分類的には、チロシンに基く阻害モチーフ免疫レセプターは、細胞内チロシンホ
スファターゼを補充し、そしてこのレセプターは、細胞に対する阻害シグナルを
提供する。このことは、ＤＳＰ−１抗原が、発現細胞（例えば、単球、Ｔ細胞、
ＮＫ細胞および／または肥満細胞）においてネガティブ調節シグナル経路に含ま
れることを示唆する。従って、結合パートナー、表面レセプターまたは適切なリ
ガンドは、おそらく単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、および／または肥満細胞の脱顆粒
、走化性、またはシグナリングを阻害するらしい。

【００２７】

【表１】

【００２８】

【表２】インビトロで多量のＤＣを生成するために現在利用可能な方法は、ＤＣの詳細
な分子分析を可能にする。例えば、Ｒｏｍａｎｉら（１９９４）、Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１８０：８３〜９３を参照のこと。単球由来のＤＣに由来したｃＤＮＡ
ライブラリーが分析され、いくつかの目的の遺伝子産物（新規のＤＣ特異的ケモ
カイン、ＤＣ−ＣＫ１を含む）の同定をもたらした。ＺｈｏｕおよびＴｅｄｄｅ
ｒ（１９９６）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：２５
８８〜２５９２を参照のこと。

【００２９】ＤＣ−ＳＴＡＭＰおよびいくつかの７つのＴＭ亜分類（ＣｌｕｓｔａｌＷ）と
の間で実施されるペアを成すタンパク質配列アラインメントは、２０％未満の同
一性を示し、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質が新規のタンパク質ファミリーを表す
ことを示唆した。しかし、Ｇタンパク質結合（または連結）レセプター（ＧＰＣ
Ｒ、またはＧＰＬＲ）のスーパーファミリーのメンバーに対するＤＣ−ＳＴＡＭ
Ｐの構造的相同性は、この分子の関連した機能を示唆する。分類として、これら
のレセプターは、７つの疎水性ドメインを含むアミノ酸配列により特徴付けられ
る内在性膜タンパク質である。例えば、ＲｕｆｆｏｌｏおよびＨｏｌｌｉｎｇｅ
ｒ（編、１９９５）、Ｇ−ＰｒｏｔｅｉｎＣｏｕｐｌｅｄＴｒａｎｓｍｅｍ
ｂｒａｎｅＳｉｇｎａｌｉｎｇＭｅｃｈａｎｉｓｍｓ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ
、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、ＦＬ；ＷａｔｓｏｎおよびＡｒｋｉｎｓｔａｌｌ（１
９９４）、ＴｈｅＧ−ＰｒｏｔｅｉｎＬｉｎｋｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒＦ
ａｃｔｓＢｏｏｋ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ
；Ｐｅｒｏｕｔｋａ（編、１９９４）、ＧＰｒｏｔｅｉｎ−Ｃｏｕｐｌｅｄ
ＲｅｃｅｐｔｏｒｓＣＲＣＰｒｅｓｓ、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、ＦＬ；Ｈｏ
ｕｓｌａｙおよびＭｉｌｌｉｇａｎ（１９９０）、Ｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎｓａｓ
ＭｅｄｉａｔｏｒｓｏｆＣｅｌｌｕｌａｒＳｉｇｎａｌｉｎｇＰｒｏ
ｃｅｓｓｅｓ、ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＮＹ；およびＤ
ｏｈｌｍａｎら（１９９１）、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６０：６５３
〜６８８を参照のこと。これらの疎水性ドメインは、タンパク質の膜貫通スパニ
ング領域を表すことが予測される。これらのＧＰＣＲは、広範な生物中に見出さ
れ、そして代表的には、細胞内部へのシグナル伝達（例えば、相互作用を介する
（例えば、ヘテロ三量体Ｇタンパク質との））に含まれる。これらは、広範で多
様な範囲の試薬（脂質アナログ、アミノ酸誘導体、小ペプチド、およびその他の
分子を含む）と反応する。

【００３０】ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質構造の予測されたモデルは、細胞外Ｎ末端、細胞
質Ｃ末端、３つの細胞質ループ、および３つの細胞外ループ（二次細胞外ループ
上のＮに連結したグリコシル化のための２つのコンセンサス配列および三次細胞
外ループ上のＮに連結したグリコシル化のための１つのコンセンサス配列を含む
）。

【００３１】ＤＣ−ＳＴＡＭＰのＣ末端におけるセリン残基は、リン酸化に対する推定標的
である。いくつかの７回ＴＭタンパク質について、Ｇタンパク質結合レセプター
キナーゼによるそのレセプターのＣ末端におけるセリン残基およびスレオニン残
基のリン酸化は、そのＧタンパク質由来の活性化レセプターの非結合を生じ、そ
れにより脱感作されることが示されている。Ｂｏｕｈｍら（１９９７）Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．３３２：１−１８を参照のこと。さらに、発現は実施され、そ
れによってＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質がこれらのセリン残基でリン酸化され得
るか否かを決定し得る。

【００３２】７回ＴＭタンパク質の他の特徴として、一次の２つの細胞外ループにおけるシ
ステイン残基の特性が挙げられる。このループは、ジスルフィド結合を形成し、
そしてタンパク質構造を安定化し得る。ＳａｖａｒｅｓｅおよびＦｒａｓｅｒ（
１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：１−１９を参照のこと。また、カ
ルボキシルテールにおけるシステイン残基は、パルミトイル化に対して強力な部
位であり、そして４次細胞内フープの形成に適する。Ｏ’Ｄｏｗｄら（１９８９
）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：７５６４−７５６９；およびＳｔｒａｎｄ
ｅｒら（１９９４）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６３：１０１−１３２を
参照のこと。ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質は、ＴＭ１およびＴＭ２においてシス
テインの代替の特性を含み、そしてそのＣ末端においてシステイン残基を有しな
い。７回ＴＭレセプターに対して配列相同性の全くない結合により、ＤＣ−ＳＴ
ＡＭＰタンパク質の記載された特徴は、この新規のタンパク質が、存在する７回
ＴＭサブクラスのいずれにも属さないことを示唆する。ＤＣ−ＳＴＡＭＰは、新
規の７回ＴＭタンパク質サブクラスを形成するか、または多膜全域（ｍｕｌｔｉ
−ｍｅｍｂｒａｎｅｓｐａｎｎｉｎｇ）タンパク質の新しいファミリーの第１
のメンバーであり得る。

【００３３】ＤＣ−ＳＴＡＭＰ末端の特徴は、その非常に基本的なアミノ酸組成である。細
胞質レセプターテールにおいて正に電荷される残基の膜近傍クラスターが、ＥＲ
Ｍ（エスリン（ｅｚｒｉｎ）、ラダキシン（ｒａｄａｘｉｎ）、モエシン（ｍｏ
ｅｓｉｎ））ファミリータンパク質に関連し得るいくつかの兆候がある。Ｂｒｅ
ｔｓｃｈｅｒ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１：１０９
−１１６を参照のこと。これらのＥＲＭタンパク質は、膜細胞骨格リンカーとし
て意味されるため、このことは、ＤＣ−ＳＴＡＭＰの細胞骨格への関連を示唆し
得る。ＤＣ−ＳＴＡＭＰの連結反応は、適切なＤＣ機能に対して本質的な接着ま
たは遊走能力に影響を及ぼし得る。これらは、試験され得る。

【００３４】ＩＩＩ型膜タンパク質の構造予測は、約ｖａｌ３５〜ａｌａ５１（ＴＭ１）；
ｓｅｒ５７〜ｓｅｒ７５（ＴＭ２）；ａｓｎ９６〜ｉｌｅ１１４（ＴＭ３）；ｔ
ｙｒ１４４〜ａｓｐ１６２（ＴＭ４）；ｌｅｕ２１４〜ｐｈｅ２３０（ＴＭ５）
；ｌｅｕ２９５〜ｖａｌ３１３（ＴＭ６）；およびｐｒｏ３７９〜ｍｅｔ３９８
（ＴＭ７）由来の疎水性膜貫通セグメントを示唆する。ＤＣ−ＳＴＡＭＰの水治
療法分析のためのいくつかのＴＭ予測プログラムの使用は、位置および膜貫通ド
メイン数に関して異なるモデルを生じた。このデータは、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタン
パク質が７回膜貫通ドメインを含むモデルを示唆する。始めに、強力な糖化部位
、推定リン酸化認識因子および細胞内Ｃ末端の位置は、このモデルを好む。次に
、一般的に膜貫通領域を攻撃する電荷アミノ酸の存在に基づいて、このモデルは
、外側でＤＮ−ＳＴＡＭＰおよび膜の管腔側のＣ末端を有するＩＩＩｂ型内在性
膜タンパク質を支持する。最後に、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質は、ＴＭ１とＴ
Ｍ２との間にプロリン残基を含む。プロリンは、らせんを崩壊することが公知で
あり、そしてＤＣ−ＳＴＡＭＰにおける５６位のプロリン残基は、ループの確立
およびタンパク質の膜への方向付けを助け得る。このことは、できる限りＴＭ１
（膜貫通領域１）およびＴＭ２（それぞれ１７アミノ酸長および１８アミノ酸長
）のさらなる短い疎水性伸展を補い得る。また、ＴＭ１およびＴＭ２は共に、１
対のシステイン残基を含む。このことが、外膜側の近傍でのジスルフィド結合に
よってさらにこの膜内ループを安定化し得る。

【００３５】しかし、ＴＭ２、ＴＭ３、およびＴＭ４は、さらに弱い領域であるため、代替
のモデルが、５個または４個のＴＭ領域を含むことを除外し得ない。この領域に
おいて、ＴＭ１およびＴＭ２は、単一の膜貫通ドメイン形成し、そしてＴＭ３ま
たはＴＭ４のいずれかが存在しない。２つの５ＴＭ全域タンパク質のみが、これ
までは記載されている（造血幹細胞によって発現される８６５アミノ酸ＡＣ１３
３オーファンレセプター（Ｍｉｒａｇｌｉａら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ９０：
５０１３−５０２１）、およびＣＤ４７分子（Ｌｉｎｄｂｅｒｇら（１９９３）
Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２３：４８５−４９６））。ＴＭ４スーパーファミ
リーは、細胞表面タンパク質の群化および安定化に関与すると考えられるタンパ
ク質をコードするほぼ２０遺伝子からなる。しかし、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク
質は、これらのＴＭ４タンパク質またはＴＭ５タンパク質のいずれかに対して重
要な相同性を示さないが、ＤＣ−ＳＴＡＭＰが新規なタンパク質ファミリーを表
すことを示す。

【００３６】膜貫通セグメントは、典型的に２０〜２５アミノ酸長である。バクテリオロド
プシンに対するモデルおよびデータに基づいて、これらの領域は、α−ヘリック
スであり、そしてリガンド結合ポケットを形成するように適応されることが予測
される。例えば、Ｆｉｎｄｌｅｙら（１９９０）ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃ
ｏｌ．Ｓｃｉ．１１：４９２−４９９を参照のこと。他のデータは、このタンパ
ク質のアミノ末端が細胞外であり、そしてカルボキシ末端が細胞内であることを
示す。例えば、Ｌｏｄｉｓｈら（１９９５）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌＢ
ｉｏｌｏｇｙ第３版，ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ，ＮｅｗＹｏ
ｒｋ；ならびにＷａｔｓｏｎおよびＡｒｋｉｎｓｔａｌｌ（１９９４）Ｔｈｅ
Ｇ−ＰｒｏｔｅｉｎＬｉｎｋｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒＦａｃｔｓＢｏｏｋ
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡを参照のこと。リン
酸化カスケードは、これらのレセプターのシグナル伝達経路に影響を与え得る。

【００３７】７回ＴＭレセプターは、ケモカイン、ホルモンおよび光レセプターを含むヘテ
ロ三量体Ｇタンパク質（Ｓｔｒａｄｅｒら（１９９４）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．６３：１０１−１３２）を介してシグナル伝達する非常に不均質なタ
ンパク質のファミリーを含む。７回ＴＭタンパク質の非常に多数は、結合された
Ｇタンパク質である。第２の膜貫通領域におけるアスパラギン酸塩およびいわゆ
る「ＤＲＹまたはＥＲＹモチーフ」の存在は、共にＧタンパク質を介するシグナ
ル伝達に関与すると考えられる。ＳａｖａｒｅｇｅおよびＦｒａｓｅｒ（１９９
２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：１−１９；およびＢｏｕｒｎｅ（１９９
７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．９：１３４−１４２を参照のこと。
ＤＣ−ＳＴＡＭＰは、これらの配列をいずれも含まないが、このようなモチーフ
は、できる限りこのようには認識され得ない。同様に、７回ＴＭタンパク質（例
えば、赤血球上のダッフィ抗原レセプター（ＤＡＲＣ）およびＥＧＦ−７ＴＭレ
セプター）はまた、Ｇタンパク質結合に対する連続配列を欠失し、そしてこれら
のレセプターを介するシグナル伝達は、未だに離礁されていない。Ｈｏｒｕｋら
（１９９６）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．５９：２９−３８；ならびにＭｃＫ
ｎｉｇｈｔおよびＧｏｒｄｏｎ（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１７
：２８３−２８７を参照のこと。

【００３８】これらの７回膜貫通レセプターによって媒介される生物学的活性の全スペクト
ルは、十分に決定されていないものの、走化性誘起作用物質効果は、認識される
。ケモカインレセプターは、ＧＰＣＲファミリーの顕著なメンバーである。例え
ば、Ｓａｍｓｏｎら（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３５：３３６２−
３３６７；およびＲａｐｐｏｒｔら（１９９６）Ｊ．ＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉ
ｏｌｏｇｙ５９：１８−２３を参照のこと。ケモカイン分子の最も公知な生物
学的機能は、白血球の走化性誘引作用に関する。しかしながら、新規のケモカイ
ンおよびレセプターは、知見され、そして免疫学的応答を司る種々の細胞に対す
るそれらの生物学的効果は、引き続いている研究の主題である。

【００３９】ＤＣ−ＳＴＡＭＰアゴニスト、またはアンタゴニストもまた、機能的または受
容体アンタゴニストとして作用し得る。例えばそれはＤＣ相互作用または生理学
をブロックし、または反対の作用を媒介する。ＤＣは、Ｔ細胞媒介免疫治療およ
びアレルギー応答に影響を及ぼす。逆に、自己免疫疾患および移植拒絶反応状況
において活動しすぎる。従って、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ、またはそのアンタゴニスト
は、異常な医学的状態（免疫障害（例えば、免疫不全、慢性炎症、もしくは組織
拒絶反応）を含む）または他の生理学的状態の処置において有用であり得る。免
疫応答の初期における抗原提示の含意は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ関連試薬の使用によ
って影響される適切な状態である。組成物結合ＤＣ−ＳＴＡＭＰおよび他のＤＣ
作用試薬は、しばしば使用される。以下を参照のこと。

【００４０】ＤＳＰ−１形態は、マスト細胞において高く発現される。この細胞は、アレル
ギー応答、特にヒスタミンの放出において作用する。例えば、Ｋａｌｉｎｅｒお
よびＭｅｔｃａｌｆｅ（１９９２年編）ＴｈｅＭａｓｔＣｅｌｌｉｎＨ
ｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅを参照のこと。ＤＳＰ−１シグナル伝達の
活性化または非活性化に関連する試薬は、抗原を発現する細胞によって媒介され
る医学的状態において重要であり得る。長（Ｌ）形態および短（Ｓ）形態は共に
、Ｉ型膜タンパク質であり、そして多重ＩＴＩＭモチーフと共に細胞質ドメイン
を有し、阻害レセプターシグナル伝達の役割を示唆する。例えば、Ｋｕｎｇら（
１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５８７６−８７；Ｃａｒｌｙｌｅら（
１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５９１７−５９２３；Ｎａｋａｍｕｒ
ａら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：６７３−６８４；Ｏｌｃｅｓｅ
ら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４５３１−４５３４；およびＤａ
ｅｒｏｎら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ３：６３５−６４６を参照のこと。膜
貫通セグメントは、Ｌ型について残基１７２〜１８８（１６６〜１９８）および
Ｓ型の残基５９〜７５（５３〜８５）に対してほぼ対応する。しかし、膜貫通セ
グメントの実際の境界は、動態および他の因子で変わるかまたは依存し得る。

【００４１】これらの天然の抗原は、標的細胞において生物学的または生理学的反応を導く
様々な生化学的反応を媒介することができる。本明細書中で特徴付けられる好ま
しい実施形態は、霊長類（例えば、ヒト）由来であるが、他の種の対応物が天然
に存在する。他の哺乳動物種、例えば霊長類、イヌ、ネコ、およびげっ歯類、特
に家畜種におけるタンパク質のさらなる配列も、入手可能であるはずである。下
記を参照のこと。下記の説明は、例示の目的で、ヒトＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤ
ＳＰ−１に向けられるが、他の種由来の関連する実施形態に同様に適用可能であ
る。

【００４２】（ＩＩ．精製されたＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１）霊長類、例えばヒトＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１アミノ酸配列を、表１
または２に示す。そのタンパク質をコードする他の天然に存在する核酸を、提供
された配列を用いて標準的な手順、例えばＰＣＲ技術によって、またはハイブリ
ダイゼーションによって単離し得る。プライマー伸長またはＲＡＣＥ方法は、メ
ッセージまたはゲノムのいずれかの隣接配列まで伸長し得る。アミノ末端からカ
ルボキシ末端まで提供される、これらのアミノ酸配列は、そのタンパク質抗原を
他のタンパク質および例示する多くの変異体から区別するのを可能にする、タン
パク質の配列情報を提供するのに重要である。さらに、そのペプチド配列はその
ようなセグメントを認識する抗体を産生するペプチドの調製を可能にする、そし
てヌクレオチド配列はオリゴヌクレオチドプローブの調製を可能にする。これら
はどちらも、そのような配列をコードする遺伝子の検出または単離、例えばクロ
ーニングのストラテジーである。

【００４３】本明細書中で使用される場合、「ヒトＤＳ−ＳＴＡＭＰ」という用語は、タン
パク質の文脈で使用される場合、配列番号２に示したポリペプチドに対応するア
ミノ酸配列を有するタンパク質、またはその重要なフラグメントを含むべきであ
る。好ましい実施形態は、指定された長さの複数の区別できる、例えば重複しな
いセグメントを含む。代表的には、その数は少なくとも２、より通常は少なくと
も３、そして好ましくは５、７、またはそれ以上である。長さの最小値が提供さ
れるが、様々な大きさのより長い長さ、例えば１つの長さ７、および２つの長さ
１２が適当であり得る。用語ＤＳＰ−１ならびに配列番号４および６を用いて同
様である。

【００４４】結合成分、例えば抗体は、代表的には抗原に、例えば少なくとも約１００ｎＭ
、通常約３０ｎＭよりよい、好ましくは約１０ｎＭよりよい、そしてより好まし
くは約３ｎＭよりよい、高い親和性で結合する。対応するタンパク質が、ヒト以
外の哺乳動物種、例えば他の霊長類、有蹄動物、またはげっ歯類において見出さ
れる。非哺乳動物種、例えば鳥類または魚類も構造的または機能的に関連する遺
伝子およびタンパク質を有するはずである。

【００４５】本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、重要なフラグ
メントまたはセグメントを含み、そして少なくとも約８アミノ酸、一般的には少
なくとも約１２アミノ酸、代表的には少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは少
なくとも約２０アミノ酸、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも約３０
以上のアミノ酸、例えば３５、４０、４５、５０等の一連のアミノ酸残基を含む
。そのようなフラグメントは、実質的に全ての位置で始まる、および／または終
わる末端を有し得る。例えば、全ての実際的な組み合わせで、残基１、２、３等
で始まり、そして例えば１５０、１４９、１４８等で終わる。特に興味深いペプ
チドは、構造ドメイン境界、例えば膜貫通セグメントまたは同定されたモチーフ
に対応する末端を有する。表１および２を参照のこと。

【００４６】「結合組成物」という用語は、例えば抗体−抗原相互作用で、ＤＳ−ＳＴＡＭ
ＰまたはＤＳＰ−１に特異性をもって結合する分子を指す。特異性は多かれ少な
かれ包括的、例えば特定の実施形態に対して、または関連する実施形態、例えば
霊長類、げっ歯類等の群に対して特異的であり得る。それはまた、共有結合また
は非共有結合のいずれか、天然の生理的に関連するタンパク質−タンパク質相互
作用を含んで、ＤＳ−ＳＴＡＭＰと特異的に結合する化合物、例えばタンパク質
を含む。その分子はポリマー、または化学的試薬であり得る。機能的アナログは
、構造的修飾を有するタンパク質であり得、またはそれは適当な結合決定基と相
互作用する分子の形を有する分子であり得る。その化合物は、受容体結合相互作
用のアゴニストまたはアンタゴニストとして作用し得る。例えば、Ｇｏｏｄｍａ
ｎら（編）Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏ
ｌｏｇｉｃａｌＢａｓｅｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（最新版）Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓを参照のこと。

【００４７】例えばタンパク質の文脈において、実質的に純粋なとは、代表的には、タンパ
ク質がもとの供給源有機体由来の、他の混入タンパク質、核酸、または他の生物
製剤を含まないことを意味する。純度は標準的な方法、代表的には重量によって
アッセイされ得、そして普通少なくとも約４０％純粋、一般的には少なくとも約
５０％純粋、多くの場合少なくとも約６０％純粋、代表的には少なくとも約８０
％純粋、好ましくは少なくとも約９０％純粋、そして最も好ましい実施形態では
少なくとも約９５％純粋である。担体または賦形剤が多くの場合加えられる。

【００４８】ポリペプチドまたはフラグメントの可溶性は、環境およびポリペプチドに依存
する。温度、電解質環境、ポリペプチドのサイズおよび分子の特徴、および溶媒
の性質を含む多くのパラメーターがポリペプチドの可溶性に影響する。代表的に
は、ポリペプチドが使用される温度は約４℃から約６５℃の範囲である。通常使
用温度は約１８℃より高い。診断的目的のためには、温度は通常約室温であるか
またはより暖かいが、アッセイ中の成分の変性温度より低い。治療的目的のため
には、温度は通常体温、代表的にはヒトおよびマウスでは約３７℃であるが、特
定の状況下では、インサイチュまたはインビトロで温度を上昇または下降させ得
る。

【００４９】ポリペプチドのサイズおよび構造は、一般的に、実質的に安定状態であり、そ
して通常変性状態ではない。ポリペプチドは、例えば可溶性を与えるために、４
次構造において他のポリペプチドと、または脂質または界面活性剤と結合し得る
。溶媒および電解質は通常、生物学的活性の保存のために使用される型の、生
物学的に適合性の緩衝液であり、そして通常生理的水性溶媒に近似する。通常、
溶媒は、代表的には約５および１０の間、そして好ましくは約７．５の中性ｐＨ
を有する。いくつかの場合には、１つ以上の界面活性剤、代表的には弱い非変性
のもの、例えばＣＨＳ（コレステリルヘミスクシナート）またはＣＨＡＰＳ（３
−［３−コラミドプロピル］ジメチルアンモニオ）−１−プロパンスルホナート
）が、またはタンパク質の構造的または生理的性質の有意な崩壊を避けるために
十分低い濃度で加えられる。他の例では、有意な変性を起こすために強い界面活
性剤を使用し得る。

【００５０】（ＩＩＩ．物理的改変体）本発明はまた、ＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１抗原のアミノ酸配列と実質
的なアミノ酸配列同一性を有するタンパク質またはペプチドを含む。改変体は種
、多型、または対立遺伝子改変体を含む。

【００５１】アミノ酸配列相同性、または配列同一性は、残基のマッチを最適化することに
よって、もし必要なら必要に応じてギャップを導入することによって決定される
。Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４
５３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）ＴｉｍｅＷａｒｐｓ，ＳｔｒｉｎｇＥ
ｄｉｔｓ，ａｎｄＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ＴｈｅＴｈｅｏｒｙ
ａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＳｅｑｕｅｎｃｅＣｏｍａｐｒｉｓｏｎの
第１章、Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ、Ｒｅａｄｉｎｇ、ＭＡ；およびＩｎｔ
ｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ、ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ、ＣＡ；およびＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔ
ｅｒＧｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのソフトウェアパッケージも参照のこ
と。保存的置換をマッチと考えるならば、配列同一性は変化する。保存的置換は
、代表的には以下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイ
シン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；
セリン、スレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン
。保存は、生物学的特徴、機能的特徴、または構造的特徴に当てはまり得る。相
同的なアミノ酸配列は、代表的にはタンパク質配列の天然の多型または対立遺伝
子および種間のバリエーションを含むように意図される。代表的な相同的タンパ
ク質またはペプチドは、ＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１のアミノ酸配列と２
５〜１００％の同一性（もしギャップが導入され得るなら）から５０〜１００％
の同一性（もし保存的置換が含まれるなら）を有する。同一性の測定値は、少な
くとも約３５％、一般的に少なくとも４０％、多くの場合少なくとも約５０％、
代表的には少なくとも約６０％、通常少なくとも約７０％、好ましくは少なくと
も約８０％、そしてより好ましくは少なくとも約９０％である。

【００５２】単離されたＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１ＤＮＡは、ヌクレオチド置換
、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿入、そして短いヌクレオチド区間の反転に
よって容易に修飾し得る。これらの修飾は、これら抗原、その誘導体、または同
様の生理的、免疫原的、抗原的、または他の機能的活性を有するタンパク質をコ
ードする新規ＤＮＡ配列を産生する。これら修飾配列を、変異抗原を産生する、
または発現を増強するために使用し得る。増強された発現は、遺伝子増幅、増加
した転写、増加した翻訳、および他のメカニズムを含み得る。「変異ＤＳ−ＳＴ
ＡＭＰまたはＤＳＰ−１」は、他の点では上記で述べたＤＳ−ＳＴＡＭＰまたは
ＤＳＰ−１の配列同一性の定義にあてはまるが、欠失、置換、または挿入のいず
れかによって天然に通常見出されるＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１とは異な
るアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。これは一般的には、配列番号２、
４、８、または１０の配列を有するタンパク質と有意な同一性を有する、そして
それらの配列と様々な生物学的活性、例えば抗原性または免疫原性を共有する、
そして好ましい実施形態では天然全長開示配列のほとんどを含むタンパク質を含
む。全長配列が代表的には好ましいが、切断されたバージョンも有用であり、同
様に、天然の供給源から見出された遺伝子またはタンパク質が代表的には最も望
ましい。同様のコンセプトが異なるＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１タンパク
質、特に様々な温血動物、例えば哺乳動物および鳥類で見出されるものにあては
まる。これらの記載は一般的に、多くのＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１タン
パク質を含むことを意味し、具体的に議論される特定の霊長類実施形態に制限さ
れない。

【００５３】ＤＳ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１変異誘発はまた、アミノ酸を挿入または欠
失させることによって行われ得る。置換、欠失、挿入、またはあらゆる組み合わ
せが、最終構築物に到達するために産生される。挿入はアミノまたはカルボキシ
ル末端融合を含む。無作為変異誘発を標的コドンにおいて行い得、そして発現し
た変異体を次いで望ましい活性に関してスクリーニングし得る。例えば、Ｍ１３
プライマー変異誘発またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術による、公知の
配列を有するＤＮＡにおいて、前もって決定した部位で置換変異を起こす方法は
、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；Ａｕｓｕ
ｂｅｌら（１９８７および増刊）；およびＫｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈ
ｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２を参照のこと。好まし
い実施形態は、例えば１倍、２倍、３倍、５倍、７倍等の、好ましくは保存的置
換をヌクレオチドまたはアミノ酸レベルで含む。好ましくは、置換は保存された
システインから遠く、そして多くの場合ヘリックス構造ドメインから離れた領域
にある。そのような改変体は、特異的な抗体を産生するために有用であり得、そ
して多くの場合多くのまたは全ての生物学的性質を共有する。

【００５４】本発明はまた、組換えタンパク質、例えばこれらタンパク質由来のセグメント
を使用した異種由来融合タンパク質を提供する。異種由来融合タンパク質は、天
然には通常同じ方法で融合しないタンパク質またはセグメントの融合である。同
様のコンセプトが異種由来核酸配列にあてはまる。

【００５５】それに加えて、新規構築物を、他のタンパク質由来の、同様の機能的ドメイン
を組み合わせることから作成し得る。例えば、標的結合または他のセグメントを
、異なる新規融合ポリペプチドまたはフラグメントの間で「交換」し得る。例え
ば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４３：１３３０−
１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３
：１５９８５−１５９９２を参照のこと。

【００５６】ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されたホスホロアミダイト法は
、適当な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントは多くの場合
、相補鎖を合成することおよび適当な条件下で鎖を共にアニーリングすることに
よって、または適当なプライマー配列と共にＤＮＡポリメラーゼを用いて相補鎖
を加えること、例えばＰＣＲ技術のいずれかによって得られる。

【００５７】構造分析を、関連遺伝子ファミリー（例えば、ＧＰＣＲ）のメンバーとの比較
において、この遺伝子に適用し得る。特に、β−シートおよびα−ヘリックス残
基は、例えば、ＲＡＳＭＯＬｐｒｏｇｒａｍ（Ｂａｚａｎら（１９９６）Ｎａ
ｔｕｒｅ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６３：
１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）
ＴＩＢＳ２０：３７４−３７６；ならびにＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１
）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ４：２６３−２６９を参照のこと
）を使用して、決定し得る。置換のために好ましい残基としては、対構造（ｃｏ
ｕｎｔｅｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）またはリガンドと相互作用すると予期される、
表面に露出した膜外残基が挙げられる。機能を保存している可能性がある他の残
基は、特に、表面に露出した残基から離れた位置の保存的置換（例えば、膜内残
基）である。

【００５８】（ＩＶ．機能的改変体）ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１に対する生理的応答のブロックは、抗原へ
のリガンドまたは対構造の結合の競合的阻害から生じ得る。

【００５９】本発明のインビトロアッセイは、しばしば、単離されたタンパク質、これらの
タンパク質のレセプター結合セグメントを含む可溶性フラグメント、または固相
基板に付着したフラグメントを使用する。これらのアッセイはまた、結合セグメ
ントの変異および改変、またはリガンドの変異および改変のいずれかの作用の診
断的決定を可能にする。

【００６０】本発明はまた、競合的薬物スクリーニングアッセイの使用を意図する。例えば
、ここでは、抗原に対する中和抗体またはレセプター結合フラグメントが、試験
化合物と競合する。

【００６１】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１抗原の「誘導体」としては、天然に存在す
る形態由来のアミノ酸配列変異体、グリコシル化改変体、および他の化学的部分
との共有結合的結合体または凝集結合体が挙げられる。共有結合誘導体は、例え
ば、標準的手段によって、アミノ酸側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端に見出され
る基への官能基の連結によって調製され得る。例えば、Ｌｕｎｄｂｌａｄおよび
Ｎｏｙｅｓ（１９８８）ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅａｇｅｎｔｓｆｏｒＰｒｏ
ｔｅｉｎＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，第１〜２巻，ＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｉｎ
ｃ．，ＢｏｃａＲａｔｏｎ，ＦＬ；Ｈｕｇｌｉ（１９８９版）Ｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒ
ｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ；ならびにＷｏｎｇ（１９９１）Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙｏｆＰｒｏｔｅｉｎＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎａｎｄＣｒｏｓ
ｓＬｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣＰｒｅｓｓ，ＢｏｃａＲａｔｏｎ，ＦＬを参照
のこと。

【００６２】特に、例えば、ポリペプチドのグリコシル化パターンを、その合成およびプロ
セシングの間、またはさらなるプロセシング工程において改変することによって
作製されるグリコシル化改変が含まれる。例えば、Ｅｌｂｅｉｎ（１９８７）Ａ
ｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６．４９７−５３４を参照のこと。また、他
の主要ではない改変を有する同じ一次アミノ酸配列を有するペプチドのバージョ
ンが含まれ、これには、リン酸化アミノ酸残基、例えば、ホスホチロシン、ホス
ホセリン、またはホスホスレオニンが挙げられる。

【００６３】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１と、他の相同性タンパク質または非相同性
タンパク質との間の融合ポリペプチドもまた提供される。多くの７ＴＭレセプタ
ーまたは他の表面タンパク質は多量体（例えば、ホモ二量体性の実体）であり、
そして反復構築物は、種々の利点（タンパク質分解性切断に対する感受性の減少
を含む）を有し得る。代表的な例は、タンパク質のセグメントまたはドメイン（
例えば、レセプター結合セグメント）と、レポーターポリペプチド（例えば、ル
シフェラーゼ）の融合物であり、その結果、融合されたリガンドの存在または位
置は、容易に決定され得る。例えば、Ｄｕｌｌら，米国特許第４，８５９，６０
９号を参照のこと。他の遺伝子融合パートナーとしては、細菌β−ガラクトシダ
ーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、β−ラクタマーゼ、αアミラーゼ、アルコール
デヒドロゲナーゼ、酵母α接合因子、および検出または精製タグ（例えば、Ｈｉ
ｓ６配列のＦＬＡＧ配列）が挙げられる。例えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら（１９８
８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４１：８１２−８１６を参照のこと。

【００６４】融合ペプチドは、代表的に、組換え核酸方法または合成ポリペプチド方法のい
ずれかによって作製される。核酸操作および発現についての技術は、一般的に、
例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ
：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（第２版），第１〜３巻，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ；およびＡｕｓｕｂｅｌ
ら（１９９３版）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌ
ａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＧｒｅｅｎｅａｎｄＷｉｌｅｙ，ＮＹにおいて記載
されている。ポリペプチドの合成についての技術は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅ
ｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６
；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３２：３４１−３４７
；Ａｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰ
ｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；およびＧｒａｎｔ（１９９２）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ＡＵｓｅｒ’ｓＧｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，
ＮＹに記載されている。リフォールディング方法（例えば、膜との）が、合成タ
ンパク質に対して適用可能であり得る。

【００６５】本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化におけるバリエーション以外
のＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１タンパク質の誘導体の使用を意図する。こ
のような誘導体は、化学的部分またはタンパク質キャリアとの共有結合的結合ま
たは凝集結合に関し得る。共有結合的誘導体または凝集誘導体は、免疫原として
、イムノアッセイにおける試薬として、または結合パートナー（例えば、他の抗
原）のアフィニティ精製についてのような精製方法において有用である。ＤＣ−
ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１は、抗体または代替的な結合組成物のアッセイまた
は精製において使用するために、当該分野において周知の方法によって、固体支
持体（例えば、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ）に共有結合させることに
よって固定され得るか、またはグルタルアルデヒド架橋を伴ってかまたは伴わず
に、ポリオレフィン表面に吸着され得る。これらのタンパク質はまた、例えば、
診断アッセイにおいて使用するために、検出可能基で標識され得る。抗原の精製
は、固定された抗体または相補的な結合パートナー（例えば、レセプターの結合
部分）によってもたらされ得る。

【００６６】本発明の可溶性フラグメントを、結合について特異的な抗血清または抗体の産
生のために免疫原として使用し得る。精製抗原を、モノクローナル抗体または天
然の抗体の抗原結合フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）₂な
どを含む抗原結合フラグメントをスクリーニングするために使用し得る。精製Ｄ
Ｃ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１抗原をまた、抗原レベルの上昇の存在に応答し
て産生された抗体を検出するための試薬（これは、異常なまたは特定の生理的状
態または疾患状態に診断的であり得る）として使用し得る。本発明は、配列番号
１または４または６に示されたヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸
配列、またはそれを含むタンパク質のフラグメントに対して惹起された抗体を意
図する。特に、本発明は、特定のドメイン（例えば、細胞外セグメント）に対し
て結合親和性を有するか、または特定のドメイン（例えば、細胞外セグメント）
に対して惹起された抗体を意図する。

【００６７】本発明は、さらなる密接に関連した種改変体の単離を意図する。サザンブロッ
トおよびノーザンブロット分析が、類似の遺伝子実体が他の哺乳動物に存在する
ことを確証する。抗原は、種改変体、例えばげっ歯類、ウサギ目、肉食動物、偶
蹄目、奇蹄目、および霊長類に広く存在する可能性がある。

【００６８】本発明はまた、構造、発現、および機能において独自性および類似性の両方を
示す関連抗原の群を単離する手段を提供する。分子の多くの生理的作用を解明す
ることは、さらなる異なる種またはその多型性改変体の単離および特徴付けによ
って著しく加速される。特に、本発明は、異なる種において、さらなる相同的遺
伝子実体を同定するために有用なプローブを提供する。

【００６９】単離遺伝子は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰの発現もＤＳＰ−１の発現も欠く細胞（例え
ば、対応するタンパク質を欠き、かつ負のバックグラウンド活性を示す種の型ま
たは細胞のいずれか）の形質転換を可能にする。これは形質転換されていないコ
ントロール細胞との比較における抗原機能の分析を可能にする。

【００７０】これらの抗原を通して媒介される様々な生理的機能もたらす、重要な構造的エ
レメントの精査は、近代分子生物学の標準的技術を用いて、特に関連するクラス
のメンバーを比較して可能である。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９
）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４３：１３３９−１３３６に記載されたホモログスキャニ
ング変異誘発技術；ならびにＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６３：１５９８５−１５９９２で使用されたアプローチ、およびＬｅｃｈ
ｌｅｉｔｅｒら（１９９０）ＥＭＢＯＪ．９：４３８１−４３９０において使
用されたアプローチを参照のこと。

【００７１】細胞内機能は、おそらくレセプターシグナル伝達に関する。しかし、タンパク
質のインターナリゼーションが特定の状況下で起こり得、そして細胞内成分と、
リガンドまたはレセプターとの間の相互作用が起こり得る。相互作用している成
分との膜抗原の相互作用の特定のセグメントを、変異誘発または直接的な生化学
的手段、例えば架橋またはアフィニティ方法によって同定し得る。結晶学的また
は他の物理的方法による構造分析もまた適用可能である。シグナル伝達メカニズ
ムのさらなる研究は、アフィニティ方法または遺伝的手段、例えば変異体の補完
分析による、単離可能であり得る結合成分の研究を含む。

【００７２】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１の発現および制御に関するさらなる研究を
追及する。抗原と結合している制御エレメントは、示差的な生理的パターン、発
生的パターン、組織特異的パターン、または他の発現パターンを示す。上流また
は下流の遺伝子領域、例えば制御エレメントは興味深い。

【００７３】膜抗原の構造研究は、新たな抗原、特に分子に対してアゴニストまたはアンタ
ゴニスト特性を示すアナログの設計へと導く。これは、先に記載した望ましい活
性スペクトルを示す抗原を単離するためのスクリーニング方法と組み合わせられ
得る。

【００７４】（Ｖ．抗体）抗体は、その天然に存在する形態およびその組換え形態の両方における、種改
変体、多型性改変体、または対立遺伝子改変体を含む膜タンパク質およびそのフ
ラグメントの種々のエピトープに対して惹起され得る。さらに、抗体は、ネイテ
ィブまたは変性バージョンを含む、その活性化形態またはその不活性形態のいず
れかのタンパク質に対して惹起され得る。抗イディオタイプ抗体も意図される。

【００７５】抗原の予め決定されたフラグメントに対する抗体（結合フラグメントおよび単
鎖バージョンを含む）は、動物をフラグメントと免疫原性タンパク質との結合体
で免疫することによって産生され得る。モノクローナル抗体を、所望の抗体を分
泌する細胞から調製する。これらの抗体を、正常または欠損性タンパク質への結
合に関してスクリーニングし得るか、または例えば、レセプターによって媒介さ
れるアゴニストまたはアンタゴニスト活性に関してスクリーニングし得る。抗体
は、例えばレセプターへの結合を立体的（ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ）にブロックす
ることによって、アゴニスト性またはアンタゴニスト性であり得る。これらのモ
ノクローナル抗体は、通常少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なくとも約３０
０μＭ、典型的には少なくとも約１００μＭ、より典型的には少なくとも約３０
μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少なくとも約３
μＭまたはそれより小さなＫ_Dで結合する。

【００７６】配列番号２のアミノ酸配列からなる免疫原のような、規定された免疫原に対し
て産生された抗体に特異的に結合するか、またはそれと特異的に免疫反応性であ
るＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１タンパク質は、典型的にはイムノアッセイ
において決定される。イムノアッセイは、典型的には、例えば配列番号２のタン
パク質に対して惹起されたポリクローナル抗血清を使用する。この抗血清は、好
ましくは同じ種由来の他の関連タンパク質（例えば、ヒトまたはげっ歯類のＤＣ
−ＳＴＡＭＰ）に対して低い交差反応性を有するように選択され、そしていかな
るこのような交差反応性も、イムノアッセイに使用する前に免疫吸着によって除
去される。

【００７７】イムノアッセイで使用するための抗血清を産生するために、配列番号２のタン
パク質、またはこれらの組み合せを、本明細書中で記載したように単離する。例
えば、組換えタンパク質を哺乳動物細胞株において産生し得る。適切な宿主（例
えばＢａｌｂ／ｃのようなマウスの近交系）を、選択されたタンパク質で、典型
的にはフロイントアジュバントのような標準的なアジュバントおよび標準的なマ
ウス免疫プロトコールを用いて免疫する（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前出を
参照のこと）。あるいは、本明細書中で開示された配列由来であり、かつキャリ
アタンパク質に結合体化された合成ペプチドを、免疫原として使用し得る。ポリ
クローナル血清を回収し、そしてイムノアッセイ、例えば固体支持体に固定され
た免疫原を用いる固相イムノアッセイにおいて免疫原タンパク質に対して滴定す
る。１０⁴以上の力価を有するポリクローナル抗血清を選択し、そして他の関連
ファミリーメンバー（例えば、げっ歯類ＤＣ−ＳＴＡＭＰ）に対するその交差反
応性に関して、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（前出、５７０〜５７３頁）に記載
されているような競合的結合イムノアッセイを用いて試験する。好ましくは、例
えば、霊長類の具現物と組み合わせて、少なくとも１つの他の関連ファミリーメ
ンバーをこの決定に使用する。所望される標的ファミリーメンバーを、本明細書
中で記載されたように、標準的な分子生物学およびタンパク質化学技術を使用し
て、組換えタンパク質として産生し得、そして単離し得る。

【００７８】競合的結合形式のイムノアッセイを、交差反応性決定のために使用し得る。例
えば、配列番号２のタンパク質を、固体支持体に固定化し得る。アッセイに加え
られたタンパク質は、固定された抗原への抗血清の結合と競合する。固定された
タンパク質への抗血清の結合と競合する上記のタンパク質の能力を、配列番号２
のタンパク質と比較する。上記タンパク質についての交差反応性パーセントを、
標準的な計算を用いて計算する。上記に挙げたタンパク質の各々と１０％未満の
交差反応性を有する抗血清を、選択し、そしてプールする。次いで、交差反応す
る抗体を、プールした抗血清から上記で挙げたタンパク質を用いる免疫吸着によ
って取り出す。

【００７９】次いで、免疫吸着およびプールされた抗血清を、第二のタンパク質を免疫原タ
ンパク質（例えば、配列番号２のタンパク質）と比較するために、上記のような
競合的結合イムノアッセイにおいて使用する。この比較を行うために、２つのタ
ンパク質をそれぞれ、広範な濃度でアッセイし、そして固定されたタンパク質へ
の抗血清の結合の５０％を阻害するために必要とされる各タンパク質の量が決定
される。必要とされる第二のタンパク質の量が、必要とされる選択されたタンパ
ク質のタンパク質量の２倍未満である場合に、この第二のタンパク質は、免疫原
に対して産生された抗体に特異的に結合すると言う。

【００８０】本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕捉または非中和
抗体として、それらをレセプターへの結合を阻害することなく抗原に結合する能
力に関してスクリーニングし得る。中和抗体として、それらは競合的結合アッセ
イにおいて有用であり得る。それらはまた、ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−
１タンパク質またはそれらのレセプターを検出または定量するにおいて有用であ
る。例えば、Ｃｈａｎ（１９８７版）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：ＡＰｒａｃｔｉ
ｃａｌＧｕｉｄｅ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ；
ＰｒｉｃｅおよびＮｅｗｍａｎ（１９９１版）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄ
ＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅ
ｓｓ、Ｎ．Ｙ．；およびＮｇｏ（１９８８版）ＮｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃＩｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ、ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと。交差吸
着、枯渇、または他の手段が、規定された選択性（例えば、固有または共有され
た種特異性）の調製物を提供する。これらは、種々の群の抗原を同定する試験の
基礎となり得る。

【００８１】さらに、抗原結合フラグメントを含む本発明の抗体は、抗原に結合し、そして
例えば、生物学的応答を誘発し得るレセプターへの機能的結合を阻害する強力な
アンタゴニストであり得る。それらはまた、非中和抗体として有用であり得、そ
して抗体が抗原に結合する場合に、例えば、その抗原を表面に発現する細胞が殺
傷されるように、毒素または放射性核種と結合され得る。さらに、これらの抗体
を薬物または他の治療的薬剤に、直接的かまたはリンカーによって間接的かのい
ずれかで結合体化し得、そして薬剤標的化を行い得る。

【００８２】抗原フラグメントを、免疫原として使用される融合または共有結合ポリペプチ
ドとして、他の物質（特に、ポリペプチド）と結合し得る。抗原およびそのフラ
グメントを、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン
、破傷風トキソイドなどのような種々の免疫原と融合または共有結合し得る。ポ
リクローナル抗血清を調製する方法の説明に関しては、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ、ＨｏｅｂｅｒＭｅｄｉｃａｌＤｉｖｉｓｉｏｎ、ＨａｒｐｅｒおよびＲ
ｏｗ、１９６９；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ
ｏｆＳｅｒｏｌｏｇｉｃａｌＲｅａｃｔｉｏｎｓ、ＤｏｖｅｒＰｕｂｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）Ｍｅｔ
ｈｏｄｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ、第１巻、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ；ならびにＨ
ａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒ
ａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣＳＨＰｒｅｓｓ、ＮＹを参照のこと。

【００８３】いくつかの場合には、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒトなどのような種々の哺
乳動物宿主からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。そのようなモノ
クローナル抗体を調製する技術の説明は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（編）Ｂａｓ
ｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）、Ｌａｎｇ
ｅＭｅｄｉｃａｌＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ＬｏｓＡｌｔｏｓ、ＣＡ、
およびそこで引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣＳＨＰｒ
ｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ（第２版）、Ａｃａｄｅ
ｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ；および特にモノクローナル抗体を産生
する１つの方法を考察している、Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７のＫｏ
ｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）において見出され得る。

【００８４】他の適切な技術は、抗原性ポリペプチドへのリンパ球のインビトロの曝露、あ
るいはファージベクターまたは類似のベクターにおける抗体ライブラリーの選択
を含む。Ｈｕｓｅら（１９８９）「ＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆａＬａｒｇ
ｅＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆｔｈｅＩｍｍｕｎ
ｏｇｌｏｂｕｌｉｎＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅｉｎＰｈａｇｅＬａｍｂｄａ
」Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９
）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６を参照のこと。本発明のポリペプチド
および抗体（キメラ抗体およびヒト化抗体を含む）を、改変を伴ってかまたは伴
わずに使用し得る。しばしば、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナル
を提供する物質を共有結合かまたは非共有結合かのいずれかで結合することによ
って標識される。広範な種々の標識および結合技術が公知であり、そして科学文
献および特許文献の両方において広範囲に報告されている。適切な標識としては
、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、
磁気粒子などが挙げられる。そのような標識の使用を教示する特許としては、米
国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，
３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２
７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組換え
免疫グロブリンを産生し得る。Ｃａｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７
号；Ｍｏｏｒｅら、米国特許第４，６４２，３３４号；およびＱｕｅｅｎら（１
９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９
−１００３３を参照のこと。

【００８５】本発明の抗体をまた、タンパク質の単離におけるアフィニティークロマトグラ
フィーに使用し得る。抗体が固体支持体に結合されたカラムを調製し得る。例え
ば、Ｗｉｌｃｈｅｋら（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３−５
５を参照のこと。抗体を精製するためにこの逆が使用され得る。

【００８６】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１に対して惹起された抗体はまた、抗イディ
オタイプ抗体を惹起するために有用である。これらは、個々の抗原の発現に関連
する種々の免疫学的状態を検出または診断するにおいて有用である。

【００８７】（ＶＩ．核酸）記載されたペプチド配列および関連する試薬は、例えば、天然の供給源からＤ
Ｃ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１をコードするＤＮＡクローンを検出、単離、ま
たは同定するにおいて有用である。典型的には、これらは哺乳動物から遺伝子を
単離するにおいて有用であり、そして同様の手順を、他の種、例えば鳥類および
哺乳動物のような温血動物から遺伝子を単離するのに適用する。クロスハイブリ
ダイゼーションは、同一種（例えば、多型性改変体）または他の種からＤＣ−Ｓ
ＴＡＭＰを単離することを可能にする。適切な核酸クローンを首尾良く単離する
ために、多くの異なるアプローチが利用可能である。

【００８８】精製タンパク質または規定されたペプチドは、上記のように、標準的な方法に
よって抗体を産生するために有用である。合成ペプチドまたは精製タンパク質を
、免疫系に提示して、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を産生し得
る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌ
ｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏ
ｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓを参
照のこと。

【００８９】例えば、特異的結合組成物を、ＤＣ−ＳＴＡＭＰを発現する細胞株から作製さ
れた発現ライブラリーをスクリーニングするために使用し得る。細胞内発現のス
クリーニングを、種々の染色または免疫蛍光手順によって実施し得る。結合組成
物を、アフィニティ精製または表面融合タンパク質を発現する細胞を分類するた
めに使用し得る。

【００９０】ペプチドセグメントをまた、ライブラリーをスクリーニングするための適切な
オリゴヌクレオチドを予測するために使用し得る。遺伝暗号を、スクリーニング
のためのプローブとして有用な適切なオリゴヌクレオチドを選択するために使用
し得る。例えば、配列番号１または４または６を参照のこと。ポリメラーゼ連鎖
反応（ＰＣＲ）技術と組み合わせて、合成オリゴヌクレオチドは、ライブラリー
から正しいクローンを選択するにおいて有用である。相補配列もまた、プローブ
、プライマー、またはアンチセンス鎖として使用する。種々のフラグメントが、
例えば、アンカーベクターもしくはポリＡ相補的ＰＣＲ技術と組み合わせてか、
または他のペプチドの相補的ＤＮＡと組み合わせて、特に有用である。

【００９１】本発明は、抗原性または生物学的に活性な、対応するポリペプチド、特に記載
した配列の非翻訳５’部分をコードする部分を欠くものをコードする、単離ＤＮ
Ａまたは単離フラグメントの使用を意図する。それに加えて、本発明は生物学的
に活性なタンパク質またはポリペプチドをコードし、そして適切な条件下で、本
明細書中で記載されたＤＮＡ配列とハイブリダイズすることができる、単離ＤＮ
Ａまたは組換えＤＮＡを含む。上記の生物学的に活性なタンパク質またはポリペ
プチドは、インタクトな抗原、またはフラグメントであり得、そして例えば配列
番号２または５または７で開示されたアミノ酸配列を有し、特に成熟した分泌ポ
リペプチドを有する。さらに、本発明は、膜ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたは膜ＤＳＰ−
１と高い同一性を示すタンパク質をコードする、単離もしくは組換えのＤＮＡ、
またはそれらのフラグメントの使用を含む。単離ＤＮＡは、５’および３’隣接
部にそれぞれ調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリＡ付加シグナ
ルなどを有し得る。あるいは、発現は、コードセグメントを異種プロモーターに
作動可能に連結することによって（例えば、内因性遺伝子から上流にプロモータ
ーを挿入することによって）実施し得る。

【００９２】「単離」核酸は、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは混合ポリマー）であり
、それは自然にネイティブな配列に付随する他の成分（例えば、リボソーム、ポ
リメラーゼ、および／またはもとの種由来の隣接するゲノム配列）から実質的に
分離している。その用語は、その天然に存在する環境から取り出された核酸配列
を含み、そして組換え体またはクローン化ＤＮＡ単離物および化学的に合成され
たアナログまたは異種由来の系によって生物学的に合成されたアナログを含む。
実質的に純粋な分子は、分子の単離された形を含む。一般的に、核酸はベクター
中または約５０ｋｂより短い、通常約３０ｋｂより短い、典型的には約１０ｋｂ
より少ない、そして好ましくは約６ｋｂより短いフラグメントである。

【００９３】単離核酸は、一般的には分子の均一な組成物であるが、ある実施形態では、少
ない不均一性を含む。この不均一性は、典型的にはポリマー末端または望ましい
生物学的機能または活性に重要でない部分に見出される。

【００９４】「組換え」核酸は、その産生方法またはその構造のいずれかによって定義され
る。その産生方法、例えばある過程によって産生される産物に関して、その過程
は、ヌクレオチド配列におけるヒトの介入、典型的には選択または産生を含む、
組換え核酸技術の使用である。あるいは、それは、天然にはお互いに隣接しない
２つのフラグメントの融合を含む配列の産生によって産生される核酸であり得る
が、天然の産物、例えば天然に存在する変異体を除くことを意味する。従って、
任意の合成オリゴヌクレオチド過程を用いて誘導された配列を含む核酸と同様に
、例えば任意の天然に存在しないベクターを用いて細胞を形質転換することによ
って生成した産物が含まれる。このようなことは、同じかまたは保存的アミノ酸
をコードする縮退コドンでコドンを置換するためにしばしば行われるが、典型的
には配列認識部位を導入または除去することが行われる。

【００９５】あるいは、通常入手可能な天然の形で見出されない、所望の機能の組み合わせ
を含む単一の遺伝子（ｇｅｎｅｔｉｃｅｎｔｉｔｙ）を産生するために、所望
の機能の核酸セグメントを一緒に結合させるためにそれを行う。制限酵素認識部
位は、しばしばそのような人工的操作の標的であるが、他の部位特異的標的、例
えばプロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、コントロール配列、または他の
有用な特徴を設計に組み込み得る。同様のコンセプトが組換え（例えば、融合）
ポリペプチドについて意図される。遺伝コードの重複性によって、これら抗原の
フラグメントに類似したポリペプチドをコードする合成核酸、および様々な異な
る種または多型変異体由来の配列の融合が特に含まれる。

【００９６】核酸関連における有意な「フラグメント」は、少なくとも約１７ヌクレオチド
、一般的に少なくとも約２２ヌクレオチド、普通少なくとも約２９ヌクレオチド
、より多くの場合少なくとも約３５ヌクレオチド、典型的には少なくとも約４１
ヌクレオチド、通常少なくとも約４７ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５
５ヌクレオチド、そして特に好ましい実施形態では少なくとも約６０以上のヌク
レオチド（例えば、６７、７３、８１、８９、９５等）の連続セグメントである
。

【００９７】ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質またはＤＳＰ−１タンパク質をコードするＤＮＡ
は、関連するかまたは同様のタンパク質をコードする遺伝子、ｍＲＮＡ、および
ｃＤＮＡ種、および異なる種由来の相同的タンパク質をコードするＤＮＡを同定
するのに特に有用である。霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、鳥類、および魚類を
含む他の種においてホモログが存在する。様々なＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質ま
たはＤＳＰ−１タンパク質が相同的であり、そして本明細書中に含まれる。しか
し、抗原に対してより遠い進化上の関係を有するタンパク質でさえ、それらが十
分相同性であるならば、これらの配列を用いて適切な条件下で容易に単離し得る
。霊長類膜タンパク質が特に興味深い。

【００９８】例えばイントロンを含むゲノム配列に由来する組換えクローンは、例えばトラ
ンスジェニック細胞およびトランスジェニック生物を含むトランスジェニック研
究、および遺伝子治療に有用である。例えば、Ｒｏｉｔｔ（編）Ｅｎｃｙｃｌｏ
ｐｅｄｉａｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｓ
ａｎＤｉｅｇｏ、１５０２−１５０４頁のＧｏｏｄｎｏｗ（１９９２）「トラ
ンスジェニック動物」；Ｔｒａｖｉｓ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１
３９２−１３９４；Ｋｕｈｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４５：７０７−
７１０；Ｃａｐｅｃｃｈｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１２８８；Ｒ
ｏｂｅｒｔｓｏｎ（編、１９８７）Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓａｎｄ
ＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐ
ｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬＰｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９
９２）Ｊ．ＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ１０：１８０−１９９；およ
びＣｏｕｒｎｏｙｅｒおよびＣａｓｋｅｙ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１１：２９７−３２９を参照のこと。あるいは、発現は、例えば、内
因性遺伝子から上流にプロモーターを挿入することによって、コードセグメント
を異種由来のプロモーターに、作動可能に連結することによって実施され得る。
例えば、Ｔｒｅｃｏら、ＷＯ９６／２９４１１またはＵＳＳＮ０８／４０６，０
３０を参照のこと。

【００９９】核酸配列比較関係における実質的な相同性（例えば、同一性）は、比較したと
き、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適に整列した場合、そのセグ
メント、またはその相補鎖のいずれかが、少なくとも約５０％のヌクレオチド、
一般的に少なくとも約５８％、普通少なくとも約６５％、多くの場合少なくとも
約７１％、典型的には少なくとも約７７％、通常少なくとも約８５％、好ましく
は少なくとも約９５から９８％またはそれより多く、そして特定の実施形態では
約９９％またはそれ以上のヌクレオチドで同一であることを意味する。あるいは
、そのセグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖、またはその
相補鎖に、典型的には例えば配列番号１または４または６のＤＣ−ＳＴＡＭＰま
たはＤＳＰ−１の配列を用いて、ハイブリダイズする場合、実質的な相同性が存
在する。典型的には、少なくとも約３０ヌクレオチドの区間にわたり少なくとも
約５５％、好ましくは約２５ヌクレオチドの区間にわたり少なくとも約７５％、
そして最も好ましくは約２０ヌクレオチドにわたり少なくとも約９０％の同一性
が存在する時、選択的ハイブリダイゼーションが起こる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１
９８４）Ｎｕｃ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１２：２０３−２１３を参照のこと。記
載したように、同一性比較の長さは、より長い区間にわたり得、そしてある実施
形態では少なくとも約１７ヌクレオチド、通常少なくとも約２８ヌクレオチド、
典型的には少なくとも約４０ヌクレオチド、そして好ましくは少なくとも約７５
〜１００またはそれ以上のヌクレオチドの区間にわたる。

【０１００】ハイブリダイゼーション関連の相同性に関して、ストリンジェントな条件は、
塩、温度、有機溶媒、および他のパラメーター、典型的にはハイブリダイゼーシ
ョン反応において調節される条件の、ストリンジェントな組み合わせた条件であ
る。ストリンジェントな温度条件は、通常、約３０℃を超える、通常約３７℃を
超える、典型的には約５５℃、６０℃、または６５℃を超える、そして好ましく
は約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、普通約１０００
ｍＭより少なく、通常約４００ｍＭより少なく、典型的には約２５０ｍＭより少
なく、好ましくは、約１５０ｍＭより少なく、約１００ｍＭ、５０ｍＭ、または
２０ｍＭさえも含む。しかし、パラメーターの組み合わせが、任意の１つのパラ
メーターの計測値よりはるかに重要である。例えば、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖ
ｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１：３４９−３７０を参照の
こと。ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、バックグラウ
ンドに対して少なくとも２倍、好ましくは少なくとも３−５倍またはそれ以上の
バックグラウンドを与える。

【０１０１】配列比較に関して、典型的には１つの配列が、試験配列が比較される参照配列
として作用する。配列比較アルゴリズムを用いて、試験および参照配列がコンピ
ューターに入力される時、もし必要ならサブシークエンス座標が指定され、そし
て配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。配列比較アルゴリズ
ムは次いで、参照配列に関連する試験配列について配列同一性パーセントを、指
定されたプログラムパラメーターに基づいて計算する。

【０１０２】比較のために配列の最適なアラインメントを、例えばＳｍｉｔｈおよびＷａｔ
ｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の局所相同性
アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによっ
て、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４の類似性探索法によって、これらアル
ゴリズムのコンピューター化された実行によって（ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎ
ｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、Ｆ
ＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏ
ｕｐ、５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ博士、ＷＩ）、または視覚的な
観察によって（一般的にはＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）行い得る。

【０１０３】有用なアルゴリズムの１つの例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、累
進的な対のアラインメントを使用して、関連する配列の群から多重配列アライン
メントを作成し、関係および配列同一性パーセントを示す。それはまた、アライ
ンメントを作成するために使用された密集する関係を示すツリーまたは系統樹を
プロットする。ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７
）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０の累加アラインメント法の簡約
化を使用する。その使用される方法は、ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ（１９
８９）ＣＡＢＩＯＳ５：１５１−１５３により記載された方法と同様である。
そのプログラムは、それぞれ最長５，０００ヌクレオチドまたはアミノ酸の、３
００の配列までを整列し得る。多重アラインメント手順は、２つの整列した配列
の集団を産生する、２つの最も類似した配列の対のアラインメントから始まる。
この集団を次いで、次に最も関連した配列または整列配列の集団に対して整列さ
せる。２つの配列の集団を、２つの個々の配列の、対のアラインメントの単純な
拡張によって整列させる。最終的なアラインメントを、一連の連続した対のアラ
インメントによって達成する。そのプログラムは、配列比較の領域に関して特定
の配列およびそのアミノ酸またはヌクレオチド座標を指定することによって、お
よびプログラムパラメーターを指定することによって実行される。例えば、参照
配列を他の試験配列と比較して、以下のパラメーターを使用して配列同一性パー
セントの関係を決定し得る：デフォルトギャップ重量（ｄｅｆａｕｌｔｇａｐ
ｗｅｉｇｈｔ）（３．００）、デフォルトギャップ長重量（ｄｅｆａｕｌｔ
ｇａｐｌｅｎｇｔｈｗｅｉｇｈｔ）（０．１０）、および重量末端ギャップ
（ｗｅｉｇｈｔｅｄｅｎｄｇａｐｓ）。

【０１０４】配列同一性パーセントおよび配列類似性を決定するのに適切な、他のアルゴリ
ズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：
４０３−４１０に記載されているＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分
析を行うためのソフトウェアは、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｎｃ
ｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通して公に入手可能である。このアルゴリ
ズムは、まず問合せ（ｑｕｅｒｙ）配列中で長さＷの短いワードを同定すること
によって、ハイスコア配列対（ｈｉｇｈｓｃｏｒｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｐａｉｒｓ）（ＨＳＰｓ）を同定することを含む。これは、データベース配列に
おいて同じ長さのワードと整列した場合に、ある正の値の閾値スコアＴに一致す
るかまたは満たす。Ｔは隣接ワードスコア閾値（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄｗ
ｏｒｄｓｃｏｒｅｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、
前出）。これら最初の隣接ワードヒット（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄｗｏｒｄ
ｈｉｔｓ）は、それらを含むより長いＨＳＰｓを発見する探索を開始する種と
して作用する。ワードヒットを次いで、累積アラインメントスコアが増加し得る
限り、各配列にそって両方向に拡張する。各方向へのｗｏｒｄｈｉｔｓの拡張
は、以下の場合に停止される：累積アラインメントスコアがその最大達成値より
Ｘ量だけ減少する場合；１つ以上のネガティブスコア残基アラインメントの蓄積
に起因して、累積スコアがゼロまたはそれ以下になる場合；またはいずれかの配
列の末端に達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、およびＸ
は、アラインメントの感受性およびスピードを決定する。ＢＬＡＳＴプログラム
は、デフォルトとして１１のワード長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）（Ｗ）、５０の
ＢＬＯＳＵＭ６２スコア付けマトリックス（ｓｃｏｒｉｎｇｍａｔｒｉｘ）（
ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５を参照のこと）アラインメント（
Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両鎖の比較を使用する。

【０１０５】配列同一性パーセント計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた
、２つの配列間の、類似性の統計学的分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎおよび
Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ９０：５８７３−５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによっ
て提供される類似性の１つの測定値は、最少和可能性（ｓｍａｌｌｅｓｔｓｕ
ｍｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））である。これは、２つのヌクレオチ
ドまたはアミノ酸配列間のマッチが偶然に起こる可能性の指標を示す。例えば、
試験核酸の参照核酸に対する比較におけるｓｍａｌｌｅｓｔｓｕｍｐｒｏｂ
ａｂｉｌｉｔｙが約０．１より低い、より好ましくは約０．０１より低い、そし
て最も好ましくは約０．００１より低いならば、核酸は参照配列と類似している
と判断される。

【０１０６】ポリペプチドの２つの核酸配列が実質的に同一であることのさらなる指標は、
下記で記載するように、最初の核酸によってコードされるポリペプチドが、２番
目の核酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であること
である。従って、例えば２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、
ポリペプチドは、典型的には第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの
核酸配列が実質的に同一であることの他の指標は、下記で記載するように、２つ
の分子がストリンジェントな条件下でお互いにハイブリダイズすることである。

【０１０７】他の哺乳類種由来のＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１を、密接に関連する種
の種間ハイブリダイゼーションによってクローニングおよび単離し得る。相同性
は、遠く関連する種の間では比較的低くあり得、従って比較的密接に関連した種
のハイブリダイゼーションが賢明である。あるいは、あまり種特異性を示さない
抗体調製物の調製が、発現クローニングアプローチに有用であり得る。

【０１０８】（ＶＩＩ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１の作成；模倣物）ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−１またはそのフラグメントをコードするＤ
ＮＡを、化学的合成、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、または広範な種
々の細胞系統または組織サンプルから調製したゲノムライブラリーのスクリーニ
ングによって得ることができる。例えば、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９
８２）Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．２：１６１−１７０；Ｇｕｂｌｅｒおよび
Ｈｏｆｆｍａｎ（１９８３）Ｇｅｎｅ２５：２６３−２６９；およびＧｌｏｖ
ｅｒ（編、１９８４）ＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐ
ｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬＰｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。あるいは、本
明細書中で提供される配列は、有用なＰＣＲプライマーを提供するか、または、
ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−１をコードする適切な遺伝子の合成または他
の調製を可能にし、これらには、天然に存在する実施形態が挙げられる。

【０１０９】次に例えばポリクローナルまたはモノクローナル抗体を産生するために使用さ
れ得る全長ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−１またはフラグメントの合成のた
めに；結合研究のために；修飾分子の構築および発現のために；そして構造／機
能研究のために、このＤＮＡを広範な種々の宿主細胞に発現し得る。

【０１１０】本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリ
オファージ、組み込み可能なＤＮＡフラグメント、および宿主ゲノムへのＤＮＡ
フラグメントの組み込みが可能な他のビヒクルを含む。例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓ
ら（１９８５および補遺）ＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓ：ＡＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．；およびＲｏｄｒｉｇｕ
ｅｚら（編、１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：ＡＳｕｒｖｅｙｏｆＭｏｌｅｃ
ｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓａｎｄＴｈｅｉｒＵｓｅｓ、
Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡを参照のこと。

【０１１１】本発明の目的のために、ＤＮＡ配列は、それらが互いに機能的に関連している
時、作動可能に連結されている。例えば、シグナルペプチド（ｐｒｅｓｅｑｅｎ
ｃｅ）または分泌リーダーのＤＮＡは、それがプレタンパク質として発現される
か、または細胞膜へのポリペプチドの方向付けに関与するかまたはポリペプチド
の分泌に関与する場合、ポリペプチドに作動可能に連結されている。プロモータ
ーは、それがポリペプチドの転写を調節する場合、コード配列と作動可能に連結
しており；リボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするように位置する場合
、コード配列と作動可能に連結されている。通常、作動可能に連結されて（して
）いるとは、隣接およびリーディングフレーム内であることを意味するが、リプ
レッサー遺伝子のようなある遺伝子エレメントは、隣接して連結していないが依
然として次に発現を調節するオペレーター配列に結合する。例えば、Ｒｏｄｒｉ
ｇｕｅｚら、第１０章、２０５−２３６頁；ＢａｌｂａｓおよびＢｏｌｉｖａｒ
（１９９０）ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８５：１４−３
７、およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９９３）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、ＧｒｅｅｎｅａｎｄＷｉｌ
ｅｙ、ＮＹを参照のこと。

【０１１２】適切な発現ベクターの代表的な例としては、ｐＣＤＮＡ１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙ
ａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．５：１１３６−１１４２を
参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏＰｏｌｙ−Ａ（Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃ
ｅｌｌ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびｐＡＣ３７３またはｐＡ
Ｃ６１０のようなバキュロウイルスベターが挙げられる。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ
（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１７７−１９９を参
照のこと。

【０１１３】特異的または規定されたグリコシル化パターンを提供するシステムでＤＣ−Ｓ
ＴＡＭＰポリペプチドを発現することが、多くの場合望ましい。例えば、Ｌｕｃ
ｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６：
４７−５５；およびＫａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１
８５：４８７−５１１を参照のこと。

【０１１４】ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−１またはそのフラグメントは、細胞膜に結
合したホスファチジルイノシトール（ＰＩ）へ操作され得るが、ホスファチジル
イノシトール切断酵素（例えば、ホスファチジルイノシトールホスホリパーゼＣ
）を用いた処理によって膜から除取り出され得る。これは、抗原を生物学的に活
性な形で放出し、そしてタンパク質化学の標準的手順による精製を可能にする。
例えば、Ｌｏｗ（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ９８
８：４２７−４５４；Ｔｓｅら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０：１００３
−１００８；およびＢｒｕｎｎｅｒら（１９９１）Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１
１４：１２７５−１２８３を参照のこと。

【０１１５】ここで、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１が特徴付けられ、そのフラグメン
トまたは誘導体を、ペプチド合成の従来の処理によって調製し得る。これらは、
ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐ
ｔｉｄｅＳｙｓｔｈｅｓｉｓ、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、Ｒ
ｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８
４）ＴｈｅＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｓｔｈｅｓｉｓ、
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１
９８４）ＴｈｅＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｓｔｈｅ
ｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ；およびＶｉｌｌ
ａｆｒａｎｃａ（編、１９９１）ＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎ
ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＩＩ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅ
ｇｏ、Ｃａで記載されているような手順を含む。（ＶＩＩＩ．使用）本発明は、例えばＤＣ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞または肥満細胞が媒介する状態
、または下記の診断キットの記載において、本明細書中の他の箇所で記載される
ように、診断的適用において用途を見出す試薬を提供する。その遺伝子は、例え
ば、げっ歯類をヒトと区別するために、または異なる発現または修飾パターンを
示す、異なる細胞間を区別するマーカーとして、法科学において有用であり得る
。

【０１１６】本発明はまた、有意な商業および／または治療的可能性を有する試薬を提供す
る。ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１（天然に存在するまたは組換えの）、そ
のフラグメント、およびそれに対する抗体は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−
１に結合親和性を有すると同定された化合物とともに、分子生物学、免疫学、ま
たは生理学の技術を教える試薬として有用である。適切なキットを、例えばタン
パク質、抗体、クローニング法、組織学等の産生または使用の実際的な研究室実
習において、試薬で調製し得る。

【０１１７】その試薬はまた、炎症性状態を含む異常な生理学または発症に関連する状態の
処置に有用である。それらは、相互作用する成分の存在または非存在に関するイ
ンビトロ試験に有用であり得る。それは特定の治療ストラテジーの成功と相関し
得る。特に、様々な、例えば造血またはリンパ性細胞の生理機能の調節を、本明
細書中で提供される組成物を用いる適切な治療法によって達成する。例えば、Ｔ
ｈｏｍｓｏｎ（編、１９８８）ＴｈｅＣｙｔｏｋｉｎｅＨａｎｄｂｏｏｋ（
第３版）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ；Ｍｅｔｃａｌｆ
およびＮｉｃｏｌａ（１９９５）ＴｈｅＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＣｏｌ
ｏｎｙＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒｓ、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＵｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ；およびＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍ
ａｎ（１９９１）ＨｕｍａｎＣｙｔｏｋｉｎｅｓ、ＢｌａｃｋｗｅｌｌＰｕ
ｂを参照のこと。

【０１１８】例えば、異常な発現またはＤＣ−ＳＴＡＭＰによる異常なシグナル伝達に関連
する疾患または障害は、アゴニストまたはアンタゴニストについての標的である
ようである。その新規膜タンパク質は造血細胞（例えばリンパ球）の調節または
発生において役割を果たし、造血細胞は免疫学的反応（例えば、炎症および／ま
たは自己免疫疾患）に影響を与える。あるいは、これは血管生理学または発生、
または神経効果に影響を与え得る。

【０１１９】特に、ＤＣ−ＳＴＡＭＰは、ＤＣ機能を媒介する際に重要であるようである。
ＤＣは、Ｔ細胞およびＢ細胞に細胞を提示する専門の抗原であり、そしてＴ細胞
媒介免疫応答において重要である。Ｔ細胞免疫性の増加は、例えば、腫瘍免疫治
療、アレルギー状態、およびワクチンアジュバントにおいて重要である。重要な
腫瘍としては、例えば癌（肺癌、結腸癌、前立腺癌および癌乳癌、ならびに黒色
腫を含む）が挙げられる。例えば、Ｂｅｒｔｉｎｏら（編，１９９６）Ｅｎｃ
ｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＣａｎｃｅｒ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；Ｄ
ｅｖｉｔａら（編，１９９７）Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ＆Ｐｒ
ａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ；Ｄｅｖｉｔａ（１９９７）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ
ａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔ
ＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ；Ｃａｖａｌｌｉら（１９９６）
ＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆＭｅｄｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，Ｄｕｎｉｔｚ
ＭａｒｔｉｎＬｔｄ；Ｈｏｒｗｉｃｈ（編，１９９５）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ：Ａ
ＭｕｌｔｉｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙＴｅｘｔｂｏｏｋ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏ
ｔｔ−Ｒａｖｅｎ；Ｐｅｃｋｈａｍら（編，１９９５）ＯｘｆｏｒｄＴｅｘｔ
ｂｏｏｋｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ；Ｍ
ｅｎｄｅｌｓｏｈｎら（１９９５）ＴｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＢａｓｉｓ
ｏｆＣａｎｃｅｒＳａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ；ならびに
ＭｃＡｒｄｌｅ（１９９０）ＳｕｒｇｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ：Ｃｕｒｒｅ
ｎｔＣｏｎｃｅｐｔｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ
−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎを参照のこと。例えば、Ｔｈ２ヒト応答からＴｈ１細胞性
応答へのシフトが示される、アレルギー状態としては、ぜん息、花粉症、医薬ア
レルギー、食物アレルギー、ハウスダストダニアレルギーなどが挙げられる。例
えば、ＬｏｃｋｅｙおよびＢｕｋａｎｔｚ（編，１９９８）Ａｌｌｅｒｇｅｎ
Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ；ａｎｄＰａｔｔｅｒｓｏｎ（編，１９９７）Ａ
ｌｌｅｒｇｉｃＤｉｓｅａｓｅｓ：ＤｉａｇｎｏｓｉｓおよびＭａｎａｇｅｍ
ｅｎｔを参照のこと。その結果、Ｔ細胞免疫性の減少は、例えは、自己免疫状態
または移植拒絶状況において重要である。自己免疫疾患としては、例えば、真性
糖尿病、乾癬および多発性硬化症が挙げられる。例えば、Ｍｏｒｒｏｗ（編，１
９９９）ＡｕｔｏｉｍｍｕｎｅＲｈｅｕｍａｔｉｃＤｉｓｅａｓｅ，Ｗｅｅ
ｔｍａｎ（編，１９９８）ＥｎｄｏｃｒｉｎｅＡｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｖａ
ｎｄＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓ；ＲｏｓｅおよびＭａｃｋ
ａｙ（編，１９９８）ＴｈｅＡｕｔｏｉｍｍｕｎｅＤｉｓｅａｓｅｓ（第３
版）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ；Ｋａｙ（編，１９９
７）ＡｌｌｅｒｃｙａｎｄＡｌｌｅｒｇｉｃＤｉｓｅａｓｅｓＢｌａｃ
ｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＭａｌｄｅｎＭＡ；Ｓａｍｔｅｒら（編）Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＤｉｓｅａｓｅｓ第１巻および第２巻，Ｌｉｔｔｌ
ｅ，ＢｒｏｗｎａｎｄＣｏ．；ならびにＣｏｕｔｉｎｈｏおよびＫａｚａｔ
ｃｈｋｉｎｅ（編，１９９３）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｖ：Ｐｈｖｓｉｏｌｏｇ
ｙａｎｄＤｉｓｅａｓｅを参照のこと。移植片拒絶および処置は、例えば、
Ｒａｃｕｓｅｎ（編，１９９８）ＫｉｄｎｅｙＴｒａｎｓｐｌａｎｔ５Ｒ
ｅｊｅｃｔｉｏｎ；ＫｅｌｓｏおよびＣｌｏｕｓｔｏｎ（１９９６）Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅｓｉｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ；ならびにＳｏｌｅｚら（編
，１９９６）ＳｏｌｉｄＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔＲｅｊｅｃｔｉ
ｏｎを参照のこと。状態の症状を処置するために使用される別の治療剤（例えば
、Ｆｌｔ３リガンド、Ｇ、ＣＳＦ、照射療法または化学療法、抗ヒスタミン、Ｉ
Ｌ−１０、Ｔｅｒｇ１細胞、シクロスポリンまたはインターフェロン）と、ＤＣ
−ＳＴＡＭＰシグナル伝達またはＤＳＰ−１シグナル伝達に関与する治療薬とを
組み合わせて、併用治療が使用され得た。

【０１２０】同様に、ＤＳＰ−１治療試薬は、単球媒介性状態、Ｔ細胞媒介性状態、ＮＫ細
胞媒介性状態または脂肪細胞媒介性状態の機能を調節するために有用であり得る
。ＤＳＰ−１治療試薬は、脂肪細胞マーカーとして有用であり、これらの細胞上
に存在し、そして同様に、これらの細胞でかまたはこれらの細胞によりシグナル
伝達を媒介する。

【０１２１】例えば、ノーザンブロット分析によるｍＲＮＡ発現によって評価されるように
、ＤＣ−ＳＴＡＭＰを産生する異なる細胞型における、様々な異常な状態が公知
である。Ｂｅｒｋｏｗ（編）ＴｈｅＭｅｒｃｋＭａｎｕａｌｏｆＤｉａ
ｇｎｏｓｉｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、
Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆ
ＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎ．Ｙ．；
およびＷｅａｔｈｅｒａｌｌら（編）ＯｘｆｏｒｄＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ、Ｏｘｆ
ｏｒｄを参照のこと。多くの他の医学的状態および疾患が、Ｔ細胞による活性化
を含み、そしてこれらの多くが、本明細書中で提供されるアゴニストまたはアン
タゴニストによる治療に反応性である。例えば、ＳｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ（
編、１９９１）ＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
、ＡｐｐｌｅｔｏｎａｎｄＬａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ｃｏｎｎｅｔｉｃ
ｕｔ；およびＳａｍｔｅｒら（編）ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＤｉｓｅａｓ
ｅｓ、Ｌｉｔｔｌｅ，ＢｒｏｗｎａｎｄＣｏを参照のこと。これらの問題は
、本明細書中で提供される組成物を使用する予防または治療の影響を受けやすい
。

【０１２２】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１、アンタゴニスト、抗体等は、精製し次い
で患者、獣医的またはヒトに投与し得る。これらの試薬を、治療的使用のために
、例えば伝統的な薬剤学的に受容可能な担体または希釈剤、例えば免疫原性アジ
ュバント中で、生理学的に無害な安定化剤、賦形剤、または保存剤とともに、さ
らなる活性または不活性成分と組み合わせ得る。これらの組み合せを滅菌濾過し
、そして投薬バイアル中における凍結乾燥によるように投薬形式に配置、または
安定化水性調製物中で保存し得る。本発明はまた、補体結合をしない形態を含む
、抗体またはその結合フラグメントの使用を企図する。

【０１２３】ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−１またはそのフラグメントを用いた薬剤の
スクリーニングを、結合親和性を有する、またはＤＣ−ＳＴＡＭＰ機能に対して
他の関連する生物学的効果を有する化合物を同定（関連する成分の単離を含む）
するために実施し得る。次いで続く生物学的アッセイを、その化合物が内因性の
刺激活性を有するかどうか、および従ってＤＣ−ＰＴＡＭＰシグナル伝達または
ＤＳＰ−１シグナル伝達の活性を阻害する阻害剤またはアンタゴニストであるか
どうかを決定するために利用し得る。同様に、内因性刺激活性を有する化合物は
、シグナル伝達経路を活性化し得、そして従ってＤＣ−ＳＴＡＭＰシグナル伝達
またはＤＳＰ−１シグナル伝達の活性を刺激するアゴニストである。抗体は、例
えば、抗原依存性細胞媒介性細胞障害性（補体結合）を媒介して、診断標識とし
て、酵素または不活性なプロ毒（ｐｒｏ−ｔｏｘｉｎｅ）を極在化させるための
他の手段に使用され得るか、またはエネルギーを吸収して抗体が結合する近位に
細胞を除去する化合物に結合体化され得る。

【０１２４】本発明はさらに、アンタゴニストとしてのこれらの抗体に対する阻害抗体、お
よびアゴニストとしての刺激抗体の治療的使用を企図する。このアプローチは、
他のＤＣ−ＳＴＡＭＰ種変異体またはＤＳＰ−１種変異体で特に有用であるはず
である。

【０１２５】有効な治療に必要な試薬の量は、投与手段、標的部位、患者の生理的状態、お
よび投与される他の薬剤を含む、多くの異なる因子に依存する。従って、治療投
与量は、安全性および有効性を最適化するために滴定されるべきである。代表的
には、インビトロで使用される投与量が、これらの試薬のインサイチュ投与に有
用な量の、有用な指標を提供し得る。特定の障害の治療に関する有効な投与量の
動物試験は、ヒト投与量のさらに予期される指標を提供する。例えば、Ｇｉｌｍ
ａｎら（編）ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓ：ＴｈｅＰｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｅｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、最新版
、ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、最新版、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇＣｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎに様々な考慮事項が記載されている。投
与方法は、例えば経口、静脈内、腹腔内、または筋肉内投与、経皮拡散などに関
して、その中および以下で議論される。薬剤学的に受容可能な担体は、水、生理
食塩水、緩衝液、および例えばＭｅｒｃｋＩｎｄｅｘ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、
Ｒａｈｗａｙ、ＮｅｗＪｅｒｓｅｙで記載されている他の化合物を含む。投与
量範囲は、適切な担体とともに、普通１ｍＭ濃度より低い、代表的には約１０μ
Ｍ濃度未満、通常約１００ｎＭ未満、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモル）未満、
そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル）未満であることが予期される。
徐放性の処方または徐放性の装置が、連続的または長期投与のために多くの場合
利用される。例えばＬａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２
７−１５３３を参照のこと。

【０１２６】ＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくはＤＳＰ−１、そのフラグメント、およびそれに対す
る抗体またはそのフラグメント、アンタゴニスト、およびアゴニストを、治療さ
れる宿主へ直接投与し得るか、または化合物の大きさに依存して、投与の前にそ
れらを卵アルブミンまたは血清アルブミンのような担体タンパク質に結合体化さ
せることが望ましくあり得る。治療的処方を、多くの伝統的な投薬処方で投与し
得る。活性成分を単独で投与することが可能であるが、それを薬剤学的処方とし
て提供することが好ましい。処方は、代表的には上記で定義されたような少なく
とも１つの活性成分を、１つ以上のその受容可能な担体とともに含む。各担体は
、他の成分と適合性であり、そして患者に有害でないという意味で、薬剤学的に
もおよび生理学的にも受容可能であるべきである。処方は、経口、直腸内、鼻腔
内、局所、または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）投与に適
切なものを含む。処方は、単位投薬形式で簡便に提供され得、そして薬学の分野
で周知のあらゆる方法によって調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編、１
９９０）ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓ：ＴｈｅＰｈａｒｍａｃ
ｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｅｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐ
ｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０）、ＭａｃｋＰｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら（編、１９９
３）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔ
ｅｒａｌＭｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｌｉｅ
ｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅ
Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ；およびＬｉ
ｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇ
ｅＦｏｒｍｓ：ＤｉｓｐｅｒｓｅＳｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋを参照のこと。本発明の治療は、他の薬剤、記載される徴候の症状の処
置のための他の医薬と組み合わせ得る、またはそれと共同して使用し得る。

【０１２７】本発明のＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１の天然に存在する形態および組換
え形態は両方とも、化合物をそのタンパク質への結合活性に関してスクリーニン
グすることができるキットおよびアッセイ方法で特に有用である。自動化アッセ
イのいくつかの方法が近年開発され、その結果、短い期間で何万もの化合物のス
クリーニングを可能にした。例えば、Ｆｏｄｏｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５１：７６７−７７３を参照のこと。それは固体基板上で合成された複数の
規定されたポリマーによる、結合親和性の試験手段を記載している。適切なアッ
セイの開発は、本発明によって提供されるような、大量の精製、可溶性抗原のア
ベイラビリティーによって非常に促進され得る。

【０１２８】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１の対レセプターまたはリガンド相互作用に
おいて重要な残基を決定するために、他の方法を使用し得る。相互作用および／
またはシグナル伝達において重要な特定の残基を決定するために、突然変異分析
を行い得る。例えば、Ｓｏｍｏｚａら（１９９３）Ｊ．Ｅｘｐｔｌ．Ｍｅｄ．１
７８：５４９−５５８を参照のこと。ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（１
９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ１９：５５−７２）およびＤＳＣ（Ｋｉｎｇおよび
Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．５：２２９８−２３
１０）は、αヘリックス（Ｈ）、β鎖（Ｅ）またはコイル（Ｌ）の２次構造の予
測を提供し得る。表面の曝された残基は、リガンドまたはレセプター結合に影響
し、一方、埋没した残基は、全体的な構造に影響を与える。

【０１２９】例えば、一旦抗原が構造的に定義されれば、例えば３次構造データによって、
アンタゴニストは普通見出され得る。可能性のある相互作用アナログの試験は、
精製ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１を用いた高度に自動化されたアッセイ方
法の開発によって現在可能である。特に、新規アゴニストおよびアンタゴニスト
が、本明細書中で記載されるスクリーニング技術を用いて発見される。ある範囲
のＤＣ−ＳＴＡＭＰ分子に対してあわせた結合親和性を有することが見出された
化合物、例えばＤＣ−ＳＴＡＭＰの種変異体に対してアンタゴニストとして作用
し得る化合物が特に重要である。

【０１３０】薬剤スクリーニングの１つの方法は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１を発
現する組換えＤＮＡ分子で安定に形質転換した真核または原核宿主細胞を利用す
る。他の分子と離れて抗原を発現する細胞を単離し得る。そのような細胞を、生
存可能なまたは固定された形式のいずれかで、標準的な結合パートナー結合アッ
セイで使用し得る。Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：２４３
−２４７；およびＯｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：４００７−４０１１も参照のこと。それは細胞反応を
検出する鋭敏な方法を記載している。

【０１３１】薬剤スクリーニングの別の技術は、抗原に対して適当な結合親和性を有する化
合物のハイスループットスクリーニングを提供するアプローチを含み、そしてそ
れは１９８４年９月１３日に公開されたＧｅｙｓｅｎ、欧州特許出願第８４／０
３５６４号に詳しく記載されている。まず、多くの異なる小さなペプチド試験化
合物を固体基板、例えばプラスチックピンまたは他の適当な表面上に合成する。
Ｆｏｄｏｒら（１９９１）を参照のこと。次いで全てのピンを可溶化未精製ＤＣ
−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１、または可溶化精製ＤＣ−ＳＴＡＭＰと反応させ
、そして洗浄する。次の工程は、結合したＤＣ−ＳＴＡＭＰを検出することを含
む。

【０１３２】合理的な薬剤設計も、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１および他のエフェク
ターまたはアナログの分子形の構造的研究に基づき得る。エフェクターは、結合
に反応して他の機能を媒介する他のタンパク質、または通常ＤＣ−ＳＴＡＭＰま
たはＤＳＰ−１と相互作用する他のタンパク質、例えば受容体であり得る。特定
の他のタンパク質とどの部位が相互作用しているか決定する１つの方法は、物理
的構造決定、例えばＸ線結晶学、または２次元ＮＭＲ技術である。これらは、例
えば他のサイトカイン−受容体モデルに対してモデルを作ったときに、どのアミ
ノ酸残基が分子接触領域を形成するかに関して指標を提供する。タンパク質構造
決定の詳しい記載に関しては、例えば、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ
（１９７６）ＰｒｏｔｅｉｎＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃａｄｅｍ
ｉｃＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋを参照のこと。

【０１３３】（ＩＸ．キット）本発明はまた、別のＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１または結合パートナー
の存在を検出するための、様々な診断キットおよび方法において、ＤＣ−ＳＴＡ
ＭＰまたはＤＳＰ−１タンパク質、そのフラグメント、ペプチド、およびその融
合産物の使用を企図する。代表的には、キットは、規定されたＤＣ−ＳＴＡＭＰ
またはＤＳＰ−１ペプチドもしくは遺伝子セグメントのいずれか、またはどちら
か１つ（例えばＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１フラグメントもしくは抗体）
を認識する試薬を含む区画を有する。

【０１３４】試験化合物のＤＣ−ＳＴＡＭＰへの結合親和性を決定するキットは、代表的に
は試験化合物；標識化合物、例えばＤＣ−ＳＴＡＭＰに対して公知の結合親和性
を有する結合パートナーまたは抗体；ＤＣ−ＳＴＡＭＰの供給源（天然に存在す
るものまたは組換え体）；および分子を固定化する固相のような、遊離標識化合
物から結合したものを分離する手段を含む。試薬、および指示が含まれる区画が
、通常は供給される。一旦試験化合物をスクリーニングすると、抗原に対して適
当な結合親和性を有するものを、当該分野で周知であるような適当な生物学的ア
ッセイで評価して、それらがＤＣ−ＳＴＡＭＰシグナル伝達経路に対してアゴニ
ストまたはアンタゴニストとして作用するかどうか決定し得る。組換えＤＣ−Ｓ
ＴＡＭＰポリペプチドが入手可能であることはまた、そのようなアッセイを較正
する、よく規定された標準を提供する。

【０１３５】ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１またはフラグメントに特異的な、抗原結合
フラグメントを含む抗体は、上昇したレベルの抗原および／またはそのフラグメ
ントの存在を検出する診断的適用に有用である。そのような診断的アッセイは、
溶解物、生きた細胞、固定細胞、免疫蛍光、細胞培養物、体液を採用し得、そし
てさらに血清等におけるその抗原に関連する抗原の検出を含み得る。診断アッセ
イは、同種（遊離試薬および抗原−結合パートナー複合体間の分離工程なし）ま
たは異種（分離工程あり）であり得る。ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素
結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩ
Ａ）、酵素増幅免疫測定法（ＥＭＩＴ）、基質標識蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦ
ＩＡ）等のような様々な市販のアッセイが存在する。例えば、ＶａｎＶｕｎａ
ｋｉｓら（１９８０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０：１−５２５；Ｈａｒｌ
ｏｗおよびＬａｎｅ（１９８０）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏ
ｒｙＭａｎｕａｌ、ＣＳＨＰｒｅｓｓ、ＮＹ；およびＣｏｌｉｇａｎら（編
、１９９３）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｉｌｅｙ、ＮＹを参照のこと。

【０１３６】抗イディオタイプ抗体を、様々な異常状態の診断になり得るので、ＤＣ−ＳＴ
ＡＭＰまたはＤＳＰ−１に対する抗体の存在を診断するために同様に使用し得る
。例えば、ＤＳＰ−１の過剰産生は、特にアレルギー状態において、異常な生理
的状態の診断となり得る様々な免疫反応の産生を引き起こし得る。

【０１３７】多くの場合、アッセイの感受性を最適化するために、診断アッセイの試薬はキ
ットで供給される。本発明のために、アッセイの性質に依存して、プロトコール
、および標識、標識化もしくは未標識化抗体または結合パートナーのいずれか、
または標識化抗原が提供される。これは普通、緩衝剤、安定化剤、酵素の基質の
ようなシグナル産生に必要な材料等のような、他の添加剤と組み合わせられる。
好ましくは、キットはまた、適当な使用および使用後の内容物の廃棄に関する指
示を含む。代表的には、キットは各有用な試薬のための区画を有する。望ましく
は、試薬は凍結乾燥粉末として提供される。ここで試薬は、アッセイを行うのに
適当な試薬濃度を提供する水性溶媒中で再構築され得る。

【０１３８】薬剤スクリーニングおよび診断アッセイの、多くの前述の成分は、修飾無しで
使用し得る、または様々な方法で修飾し得る。例えば、標識は、直接または間接
的に検出可能なシグナルを提供する部分と共有または非共有結合させることによ
って達成し得る。いかなるこれらのアッセイにおいても、結合パートナー、試験
化合物、抗原、またはそれに対する抗体は、直接または間接的に標識し得る。直
接標識の可能性は、標識群：¹²⁵Ｉのような放射性標識、ペルオキシダーゼおよ
びアルカリホスファターゼのような酵素（米国特許第３，６４５，０９０号）、
および蛍光強度の変化、波長の変化、または蛍光の偏光をモニターすることがで
きる蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）を含む。間接的標識の可能性
は、１つの成分のビオチン化、続く上記の標識群の１つと結合したアビジンへの
結合を含む。

【０１３９】遊離抗原から結合したものを、あるいは遊離試験化合物から結合したものを分
離する多くの方法も存在する。抗原を様々なマトリックスに固定化、続いて洗浄
し得る。適当なマトリックスは、ＥＬＩＳＡプレートのようなプラスチック、フ
ィルター、およびビーズを含む。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編、１９９３）Ｃ
ｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１巻、第
２章、ＧｒｅｅｎｅａｎｄＷｉｌｅｙ、ＮＹを参照のこと。他の適当な分離
技術は、制限無しに、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０：
１４５７−１４６１で記載されたフルオレセイン抗体磁化可能粒子法、および米
国特許第４，６５９，６７８号で記載されたような二重抗体磁気粒子分離を含む
。

【０１４０】タンパク質またはそのフラグメントを様々な標識に結合させる方法は、周知で
ある。その技術の多くは、結合のために、ペプチド結合を形成するためにカルボ
ジイミドまたは活性エステルの使用による活性化カルボキシル基の使用、メルカ
プト基のクロロアセチルのような活性化ハロゲンまたはマレイミドのような活性
化オレフィンとの反応によるチオエーテルの形成等を含む。融合タンパク質もこ
れらの適用において使用される。

【０１４１】本発明の別の診断的局面は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１の配列から取
られたオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの
配列を、異常な状態、例えば炎症または自己免疫を有することが疑われる患者由
来の試料中で、抗原メッセージのレベルを検出するプローブとして使用し得る。
ＲＮＡおよびＤＮＡヌクレオチド配列の両方の調製、配列の標識、および配列の
好ましいサイズは、文献において豊富に記載および議論されている。例えば、Ｌ
ａｎｇｅｒ−Ｓａｆｅｒら（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．７９：４３８１−４３８５；Ｃａｓｋｅｙ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ２
３６：９６２−９６７；およびＷｉｌｃｈｅｋら（１９８８）Ａｎａｌ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．１７１：１−３２を参照のこと。

【０１４２】他の分子の定性または定量的発現を試験する診断キットもまた企図される。診
断または予後はマーカーとして使用される複数の指標の組み合わせに依存し得る
。従って、キットはマーカーの組み合わせに関して試験し得る。例えば、Ｖｉａ
ｌｌｅｔら（１９８９）ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ
Ｒｅｓ．１：８９−９７を参照のこと。キットは、他の細胞サブセットを評価
するために追加の試薬を含み得る。

【０１４３】（Ｘ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１リガンドまたは受容体の単離）ＤＣ−ＳＴＡＭＰおよびＤＳＰ−１の両方は細胞表面抗原であり、これらはリ
ガンドまたは他の表面抗原に対する受容体であり得る。そのような相互作用の１
つの成分が単離されたなら、リガンドまたは結合受容体パートナーを単離する方
法が存在する。Ｇｅａｒｉｎｇら（１９８９）ＥＭＢＯＪ．８：３６６７−３
６７６を参照のこと。例えば、そのパートナーへの結合を阻害することなく抗原
を標識する手段を決定し得る。例えば、親和性標識をリガンドのアミノ末端また
はカルボキシル末端のいずれかに融合し得る。そのような標識は、ＦＬＡＧエピ
トープタグ、または、例えばＩｇまたはＦｃドメインであり得る。発現ライブラ
リーを、例えば細胞分類、または他のスクリーニングによって、抗原に対する特
異的な結合に関してスクリーニングして、そのような結合成分を発現する部分集
団を検出し得る。例えば、Ｈｏら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１１２６７−１１２７１；およびＬｉｕら（１９９４
）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１８２１−２９を参照のこと。あるいは、パニ
ング法を使用し得る。例えば、ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ（１９８７）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：３３６５−３３６９を参照
のこと。

【０１４４】標識とのタンパク質架橋技術を適用して、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１
サイトカインの結合パートナーを単離し得る。これは、例えばリガンド−受容体
、または受容体−受容体の様式でサイトカインと特異的に相互作用するタンパク
質の同定を可能にする。

【０１４５】当業者に明らかであるように、本発明の多くの修飾および変化が、その意図お
よび範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書中で記載された特定の実施
形態は、例示のためにのみ提供され、そして本発明は、このような請求が権利を
与えられる同等物の全範囲とともに、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ
制限される。

【０１４６】（実施例）（Ｉ．一般方法）以下の多くの標準方法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｎｕａｌ，Ｃ
ｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐ
ｒｉｎｇＨａｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ
（第２版）第１〜３巻，ＣＳＨＰｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒ
ｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；もしくはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および補遺）Ｃｕｒ
ｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，
Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；Ｉｎｎｉｓら（１９９０編）ＰＣＲＰｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ：ＡＧｕｉｄｅｔｏＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＡｐｐｌｉｃ
ａｔｉｏｎｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮＹに記載されるか、または援
用される。タンパク質精製のための方法としては、例えば、硫酸アンモニウム沈
殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化等の方法が挙げら
れる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、（１９８７および定期補遺）；Ｄｅｕｔｓｃ
ｈｅｒ（１９９０）「ＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ」，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ第１８２巻，および
このシリーズにおける他の巻；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９５および補遺）Ｃｕｒ
ｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ，Ｊｈ
ｏｎＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ；Ｐ．Ｍａｔｓｕｄ
ａｉｒａ（１９９３編）ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔ
ｅｉｎａｎｄＰｅｐｔｉｄｅＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒＭｉｃ
ｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅ
ｇｏ，ＣＡ；ならびにタンパク質精製製品の使用における製造業者の印刷物、例
えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，またはＢｉｏ−Ｒａ
ｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡを参照のこと。組み換え技術との組み合せは、適切
なセグメント（エピトープタグ）との融合を可能にする（例えば、ＦＬＡＧ配列
との融合、または、例えば、プロテアーゼ除去配列を経て融合され得る等価物と
の融合）。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９８９）ＣｈｅｍｉｓｃｈｅＩｎｄｕ
ｓｔｒｉｅ，１２：６９−７０；Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｌｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＰｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈＭ
ｅｔａｌＣｈｅｌａｔｅＡｂｓｏｒｂｅｎｔ」Ｓｔｅｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅ
ｔｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅａｎｄＭｅｔｈｏｄ
ｓ１２：８７−９８，ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，ＮＹ；ならびにＣｒｏｗｅ
ら（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：ＴｈｅＨｉｇｈＬｅｖｅｌＥｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ＆ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓｔｅ
ｍ，ＱＵＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡを参照のこと。

【０１４７】標準免疫学技術は、例えば、Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら，（１９９６編）Ｗｅ
ｉｒ’ｓＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ第１〜４巻，ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｎｃｅ；Ｃｏｌｉｇａｎ（
１９９１）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
，Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；ならびにＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ第７０巻，第７３巻，第７４巻，第８４巻，第９２巻，第９３巻
，第１０８巻，第１１６巻，第１２１巻，第１３２巻，第１５０巻，第１６２巻
，および第１６３巻において記載される。サイトカインアッセイは、例えば、Ｔ
ｈｏｍｓｏｎ（１９９８編）ＴｈｅＣｙｔｏｋｉｎｅＨａｎｄｂｏｏｋ（第
３版）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ；Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕ
ｉｓおよびＴｈｏｒｐｅ（１９９８）ＣｙｔｏｋｉｎｅｓＡｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９
５）ＴｈｅＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＣｏｌｏｎｙＳｔｉｍｕｌａｔｉ
ｎｇＦａｃｔｏｒｓ，ＣａｍｂｒｉｄｇｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓ
ｓ；ならびにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａ
ｎＣｙｔｏｋｉｎｅｓ，ＢｌａｃｋｗｅｌｌＰｕｂ．において記載される。

【０１４８】脈管の生物学的活性に関するアッセイは、当該分野において周知である。これ
らのアッセイは、腫瘍における脈管形成活性および血管拡張活性、または他の組
織（例えば、動脈の平滑筋）の増殖（例えば、Ｋｏｙｏｍａら（１９９６）Ｃｅ
ｌｌ８７：１０６９−１０７８を参照のこと）、脈管上皮に対する単球接着（
例えば、ＭｃＥｖｏｙら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６９−
２０７７を参照のこと）等を包含する。また、Ｒｏｓｓ（１９９３）Ｎａｔｕｒ
ｅ３６２：８０１−８０９；ＲａｋｈｔｅｒおよびＧｏｒｄｏｎ（１９９５）
Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：６６８−６７７；Ｔｈｙｂｅｒｇら（１９９
０）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ１０：９６６−９９０；ならびにＧｕｍ
ｂｉｎｅｒ（１９９６）Ｃｅｌｌ８４：３４５−３５７を参照のこと。

【０１４９】神経細胞の生物学的活性に関するアッセイは、例えば、Ｗｏｕｔｅｒｌｏｏｄ
（１９９５編）ＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，モジュール１
０，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ；およびＮｅｕｒｏｍｅｔｈｏｄｓ，Ｈｕｍａｎ
ａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪにおいて記載される。発生系の方法論は、
例えば、Ｍｅｉｓａｍｉ（編）ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＨｕｍａｎＧｒｏｗ
ｔｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＣＲＣＰｒｅ
ｓｓ；およびＣｈｒｉｓｐｅｅｌｓ（編）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓａｎｄＡｐｐｒｏａｃｈｅｓｉｎＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅにおいて記載される。

【０１５０】ＦＡＣＳ分析は、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒ
ｙａｎｄＳｏｒｔｉｎｇ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏ
ｒｋ，ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）ＰｒａｃｔｉｃａｌＦｌｏｗＣｙ
ｔｏｍｅｔｒｙ，Ｌｉｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎ
ら（１９９３）ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙＭｅ
ｔｈｏｄｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹにおいて記載され
る。

【０１５１】（ＩＩ．ヒトＤＣ−ＳＴＡＭＰおよびＤＳＰ−１のクローニング）霊長類（例えば、ヒト）ＤＣ−ＳＴＡＭＰ遺伝子の配列は、表１に示される。
この配列は、樹状細胞から単離されたｃＤＮＡクローンの配列から誘導される。
この配列は、この遺伝子の細胞分布を測定するためのＰＣＲプライマー、または
プローブの調製を可能にする。この配列は、このメッセージをコードするゲノム
ＤＮＡの単離を可能にする。

【０１５２】ＤＣ−ＳＴＡＭＰのＯＲＦは、推定分子量およそ５３ｋＤおよび等電点９．４
１を有する４７０アミノ酸のタンパク質を予測する。このタンパク質のアミノ終
端は、疎水性アミノ酸の短ストレッチで始まり、これは、非切断シグナル配列を
予測する（ｐＳＯＲＴ，ＯｓａｋａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊａｐａｎ）。配
列の疎水性分析では、１８〜２０アミノ酸のである５つの強い疎水性ストレッチ
および２つの弱い疎水性ストレッチを示し、これは、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ分子が複
数回膜を架橋していることを示唆している。ＢＣＭサーチランチャー（ＢＣＭ
ＳｅａｒｃｈＬａｕｎｃｈｅｒ）（Ｋ．ＨｏｆｍａｎおよびＷ．Ｈｏｆｍａｎ
）由来のＴＭ予測プログラムは、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質が、Ｎ末端が膜の
外側に位置し、Ｃ末端が膜のルミナール側（ｌｕｍｉｎａｌｓｉｄｅ）に位置
するのにともなう、７回膜貫通架橋領域を含むことをトポロジーモデル（ｔｏｐ
ｏｌｏｇｙｍｏｄｅｌ）において示唆している。

【０１５３】興味深いことに、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質は、２組のシステイン残基を含
み、一方は、第１膜貫通ドメイン（ＴＭ１）で開始し、他方は第２膜貫通ドメイ
ン（ＴＭ２）で終止する。これらのシステインは、膜の外側付近でジスルフィド
架橋を形成し得、そしてタンパク質の構造を安定化し得る。タンパク質の前部位
（ｐｒｏｓｉｔｅ）解析は、３つの可能性のあるグリコシル化部位（２つは第２
推定細胞外ループおよび１つは第３推定細胞外ループ）を示した。さらに、プロ
テインキナーゼＣによる第５膜貫通領域および第６膜貫通領域の間でのリン酸化
のためのコンセンサス配列が存在しており、これは、提示されたトポロジーに従
った第２細胞内ループである。ＤＣ−ＳＴＡＭＰの７２アミノ酸の細胞質下端は
、いくつかのセリン残基を含み、このうちの２つは、リン酸化のための標的とし
ての役割を果たし得る。興味深いことに、ＤＣ−ＳＴＡＭＰタンパク質のＣ末端
は、正に帯電した残基に驚くほど富み、これは、２５％の下端を含み、そして全
体で正電荷（＋１４）を与えている。

【０１５４】ＤＳＰ−１遺伝子を、ヒトＨＥＬ細胞より作製したｃＤＮＡライブラリーから
単離した。

【０１５５】プローブまたはＰＣＲプライマーを使用して、種々の組織または細胞型を探索
して、細胞分布を測定する。ＰＣＲ産物を、例えば、ＴＡクローニングキット（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてクローン化する。生じるｃＤＮＡプラスミドを
、自動シーケンサー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で両終端からシ
ークエンスする。

【０１５６】（白血球調製）ＰＢＭＣを、健常なドナー（ｄｏｎｏｒ）由来の血液の白血球除去法により得
、２時間の接着で、非接着ＰＢＬ画分を得た。単球を、逆流遠心分離によりＰＢ
ＭＣから洗い分け、８５％より多いＣＤ１４⁺である細胞集団を得た。画分は、
５％のＦＣＳおよび１％の抗生物質／抗真菌剤を補充したＩｓｃｏｖｅ’ｓ培地
（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ
，ＮＹ）で培養した。非接着ＰＢＬおよび全ＰＢＬの両方を、フィトヘムアグル
チニン（ＰＨＡ；１μｇ／ｍｌ；ＭｕｒｅｘＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＬｔｄ、
Ｄａｒｔｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）およびｒＩＬ−２（２００Ｕ／ｍｌ；Ｃｅ
ｔｕｓＣｏｒｐ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）で１６時間刺激した。洗い
分けられた単球を、２μｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。

【０１５７】ＤＣを、所望の方法の改変を使用して単球からインビトロで生成した。例えば
、Ｒｉｄｇｅら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ３９３：４７４−４７８；およびＢ
ｅｎｎｅｔｔら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ３９３：４７８−４８０を参照のこ
と。単球を、５％胎児ウシ血清を補充し、８００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦおよび
５００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４（両方とも、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ，Ｔｈ
ｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ由来）が存在するＡＩＭ−Ｖ培地（ＬｉｆｅＴｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＬｔｄ，Ｐａｉｓｌｙ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）で、５〜７
日間培養した。得られたＤＣを、直接収集するか、あるいは１６時間ＬＰＳ（２
μｇ／ｍｌ）で刺激、または、ＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍｌ、２４時間）および一
般にＤＮＡＸにより提供される活性化抗ＣＤ４０抗体ＭＡＢ８９（Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ，ＣＡ（１．５μｇ／ｍｌ、２４時間））を連続添加、のいずれかの後
で収集した。精製された扁桃腺Ｂリンパ球を、Ｆａｌｋｏｆｆら（１９８２）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ５０：３９−４９により記載される方法に
従って、単離した。

【０１５８】（ｃＤＮＡライブラリー調製）相補ＤＮＡライブラリーを、調製した。Ｍａｒｌａｎｄら（１９９７）Ｒｉｃ
ｃｉａｒｄｉ−Ｃａｓｔｏｇｎｏｌｉ（編）ＤｅｎｄｒｉｃＣｅｌｌｓｉｎ
ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
，第３巻，ＰｌｅｎｕｍＰｕｂｌ．Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；およびＡｄｅｍ
ａら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ３８７：７１３−７１７を参照のこと。ヌクレ
オチド配列を、ＢＬＡＳＴプログラムを使用して、非重複性のＧｅｎＢａｎｋお
よびＥＭＢＬデータベースに対して分析した。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０を参照のこと。

【０１５９】（ＤＣ−ＳＴＡＭＰに関するノーザンブロット分析）全ＲＮＡを、ＤＣ培養物から単離した。例えば、単球由来のＤＣを、ＩＬ−４
およびＧＭ−ＣＳＦ中で７日間培養し、新たにチオシアン酸グアニジン／塩化セ
シウム製法を使用してリンパ球および細胞株を単離した。Ｐｏｌｙ（Ａ）⁺ＲＮ
Ａを、アフィニティークロマトグラフィー（Ｏｌｉｇｏｔｅｘ，Ｑｉａｇｅｎ）
によりＤＣ画分から単離した。サンプルに対して２０μｇの全ＲＮＡまたは２μ
ｇのＰｏｌｙ（Ａ）⁺ＲＮＡを、ホルムアルデヒドゲル上に一晩散らし、キャピ
ラリーブロッティングによりナイロン膜に移した。ハイブリダイゼーションを、
Ｃｈｕｒｃｈ溶液（０．５ＭのＮａＨＰＯ₄，ｐＨ７．２；７％ＳＤＳ；０
．５ＭのＥＤＴＡ）中で一晩６５℃で実施した。複数組織のノーザンブロット＃
７７８０−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）を、探索し、製
造業者の推奨に従ってストリンジェントな条件下で洗浄した。ノーザンブロット
はどちらも、ＤＣ−ＳＴＡＭＰの３’ＵＴＲの一部を含み、ランダムに³²Ｐで標
識された４４４ｂｐのＳａｌＩ−ＲｃａＩフラグメントで探索した（Ｔ７Ｑｕ
ｉｃｋＰｒｉｍｅＫｉｔ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。

【０１６０】（ＲＴ−ＰＣＲ）全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を用いて単離し、ＤＮ
Ａｓｅを含まないＲＮＡｓｅ（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）で処
置した。１μｇのＲＮＡを、ｏｌｉｇｏｄＴプライマーおよびＳｕｐｅｒｓｃｒ
ｉｐｔＩＩ逆転写酵素（ＲＴ，ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を用いてｃＤＮＡに転写
した。半分のｃＤＮＡを使用し、標準ＰＣＲプロトコールに従って、ＤＣ−ＳＴ
ＡＭＰメッセージを増幅した（２４サイクル）。プライマーを、ほとんどＤＣ−
ＳＴＡＭＰＯＲＦの３’部分に位置づけて、３３４ｂｐの特異的産物を得た。
ＲＮＡの品質のためにコントロールとして、もう半分のＤＮＡを使用して、３２
８ｂｐのβアクチン産物を増幅した（１８サイクル）。ＰＣＲ産物のサザンブロ
ット分析を、³²Ｐ端（³²Ｐ−ｅｎｄ）標識した内部のオリゴヌクレオチド（ＤＣ
−ＳＴＡＭＰまたはβアクチンのどちらか由来）（Ｋｌｅｎｏｗｐｏｌｙｍｅ
ｒａｓｅ，ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）を使用して実施した。Ｒ
Ｔ無しのサンプルは常にネガティブであった。

【０１６１】（ライブラリースクリーニングおよび５’ＲＡＣＥＰＣＲ）プローブとして本来９３６ｂｐのｃＤＮＡクローン由来のランダムに標識化し
た４４４ｂｐＲｃａＩ／ＳａｌＩフラグメントを使用して、無刺激性のＤＣ由
来のｃＤＮＡライブラリーからの１００，０００個のコロニーを、スクリーニン
グした。ＤＣ−ＳＴＡＭＰｃＤＮＡの大部分の５’末端を、５’ＲＡＣＥＰ
ＣＲによって単離した。簡潔には、全ＤＣＲＮＡの１μｇを、ＤＣ−ＳＴＡＭ
Ｐ特異的な５’ＲＡＣＥ−１プライマーを使用して、ｃＤＮＡ（Ｓｕｐｅｒｓ
ｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素、ＧｉｂｃｏＢＲＬ）に転写した。このｃＤＮ
ＡをＱＩＡＱｕｉｃｋＰＣＲ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ）で精製し、そして、
引き続いて、ｄＣＴＰ（５μＭ）および０．７５ｍＭＣａＣｌ₂（１５分、３
７℃）の存在下で、末端転移酵素（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）
の５０Ｕを使用してテーリングした。このテーリング化ｃＤＮＡを、一度フェノ
ール／クロロホルムで抽出し、そしてグリコーゲン（５０μｇ）を使用して、沈
殿させた。テーリング化ｃＤＮＡの５％を、ｃＤＮＡのＣテールにアニーリング
するネスト化（ｎｅｓｔｅｄ）ＤＣ−ＳＴＡＭＰ特異的プライマー５’ＲＡＣＥ
−２および５’プライマーを使用して、半ネスト化（ｈｅｍｉ−ｎｅｓｔｅｄ）
ＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲの３０サイクルは、標準プログラム（１分９４℃
、１分５８℃、１分７２℃、１０分７２℃で伸長）を使用して行った。得
られたＰＣＲ産物を、ゲル精製し、そしてＴＡクローニングベクターｐＧＥＭ（
Ｐｒｏｍｅｇａ）にクローニングした。重複ｃＤＮＡフラグメントを、ＡＬＦ発
現自動化シーケンサー（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）で、ジデオキシ
鎖反応（自動読み込み（ＡｕｔｏＲｅａｄ）配列決定キット、Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａＢｉｏｔｅｃｈ）によって配列決定をした。ＤＣ−ＳＴＡＭＰの完全ＯＲＦ
を、エキスパンドロング（ＥｘｐａｎｄＬｏｎｇ）テンプレートＰＣＲシステ
ム（３０サイクル、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）を使用して、オ
リゴｄｔ転写ｃＤＮＡ（ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ、ＧｉｂｃｏＢＲＬ）
で増幅し、そしてｐＧＥＭ−ＴＥａｓｙにクローニングした。いくつかのクロ
ーンの配列分析は、５’ＲＡＣＥＰＣＲによって得られた配列と一致した。

【０１６２】（４７０アミノ酸多重膜（ｍｕｌｔｉｍｅｍｂｒａｎｅ）架橋分子をコード
するＤＣ−ＳＴＡＭＰｃＤＮＡ）ＤＣ−ＳＴＡＭＰの発現は、ＤＣにおいて特異的に検出されるので、ＤＣｃ
ＤＮＡライブラリーを、全長翻訳物を得るため、ＤＣ−ＳＴＡＭＰのための特異
的プローブでスクリーニングした。いくつかのＤＣ−ＳＴＡＭＰｃＤＮＡクロ
ーン（１．４ｋｂの挿入物を含む最も長いクローン）は、単離され、その３’末
端での本来のクローンに一致する。５’ＲＡＣＥＰＣＲは、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ
メッセンジャーの大部分の５’領域のクローニングに起因する。プローブとして
この５’ＤＣ−ＳＴＡＭＰフラグメントに使用したノザンブロット分析は、上記
（単鎖ｃＤＮＡに属する両フラグメントを示す）の同じ２．３ｋｂに起因する。
ＤＣ−ＳＴＡＭＰをコードするこのｃＤＮＡは、１９４５ｂｐの全長を有する。
これは、ノザンブロット（約３５０ｂｐのポリＡテールを示唆する）の２．３ｋ
ｂのメッセンジャーにぴったり一致する。このｃＤＮＡは、ヌクレオチド５２で
最初のＡＴＧコドンで始まる１４１０のヌクレオチドの単長ＯＲＦを含む。これ
は、転写開始のための適切な配列コンテクスト（Ｋｏｚａｋ（１９８７）Ｎｕ
ｃｌｅｉｃＡｃｉｄ．Ｒｅｓ．１５：８１２５−８１４８）であり、そして４
９０−ヌクレオチド３’ＵＴＲに続く。ポリＡテールは、単配列ＡＴＴＡＡＡの
ポリアデニル化より前に行なわれる。表１を参照のことジーンバンク／ＥＭＢＬデータベースにおける公知の配列のヌクレオチド配列
とＤＣ−ＳＴＡＭＰアミノ酸配列の比較は、ｄｂＥＳＴ（ヒト皮膚腫瘍およびヒ
ト神経内分泌肺カルチノイド（それぞれ、受入番号ＡＡ３８０００９およびＡＩ
２６８４０７）由来）における未公開のＥＳＴフラグメントに一致する２つのヌ
クレオチドを除いて、無相同性を明らかにした。

【０１６３】霊長類（例えば、ヒト）の配列である、ＤＳＰ−１遺伝子は、表２に提供され
る。この配列は、ヒトＨＦＬ細胞から単離されたｃＤＮＡの配列に由来する。

【０１６４】（ＩＩＩ抗原の細胞内発現）適切なプローブまたは霊長類の抗原をコードするｃＤＮＡのための特異的なプ
ライマーを調製した。代表的には、このプローブは、標識化される（例えば、ラ
ンダムプライミングによって）。

【０１６５】サザン分析：一次増幅されたｃＤＮＡライブラリーからのＤＮＡ（５μｇ）を
、挿入物を遊離するために適切な制限酵素で切断し、１％アガロースゲルに泳動
し、そしてナイロン膜に転写した（ＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒおよびＳｃｈｕｅｌｌ
、Ｋｅｅｎｅ、ＮＨ）。

【０１６６】ヒトｍＲＮＡ単離物のサンプルは、以下を含み得る：末梢血単核細胞（単球、
Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）、休止（Ｔ１００）；末梢血単核細胞、２
、６、１２時間抗ＣＤ３で活性化してプール（Ｔ１０１）；Ｔ細胞、ＴＨ０クロ
ーンＭｏｔ７２、休止（Ｔ１０２）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、３、
６、１２時間抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で活性化してプール（Ｔ１０３）；Ｔ細
胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、２、７、１２時間特異的ペプチドでアネルギー
処理してプール（Ｔ１０４）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、休止（Ｔ１０
７）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、３、６、１２時間抗ＣＤ２８および抗
ＣＤ３で活性化してプール（Ｔ１０８）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、２
、６、１２時間特異的なペプチドでアネルギー処理してプール（Ｔ１０９）；Ｔ
細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５、休止（Ｔ１１０）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローン
ＨＹ９３５、２、７、１２時間抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で活性化してプール（
Ｔ１１１）；Ｔ細胞腫瘍株ＪｕｒｋａｔおよびＨｕｔ７８、休止（Ｔ１１７）；
Ｔ細胞クローン、プールしたＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ７８３．
１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９、休止（Ｔ１１８）；Ｔ細胞ランダ
ムγδＴ細胞クローン、休止（Ｔ１１９）；ＣＤ２８−Ｔ細胞クローン；脾臓細
胞、休止（Ｂ１００）；脾臓細胞、抗ＣＤ４０およびＩＬ−４で活性化（Ｂ１０
１）；Ｂ細胞ＥＢＶ株、プールしたＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１
．２２１、ＲＭ３、ＨＳＹ、休止（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ、１、６時間ＰＭ
Ａおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｂ１０３）；プールしたＮＫ２０
クローン、休止（Ｋ１００）；プールしたＮＫ２０クローン、６時間ＰＭＡおよ
びイオノマイシンで活性化（Ｋ１０１）；ＮＫＬクローン、ＬＧＬ白血病患者の
末梢血由来、ＩＬ−２処理（Ｋ１０６）；造血前駆細胞株ＴＦ１、１、６時間Ｐ
ＭＡおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｃ１００）；Ｕ９３７前単球株
、休止（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株、１、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシ
ンで活性化してプール（Ｍ１０１）；溶出（ｅｌｕｔｒｉａｔｅ）単球、１、２
、６、１２、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で活性化してプール（Ｍ
１０２）；溶出単球、１、２、６、１２、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１
０で活性化してプール（Ｍ１０３）；溶出単球、４、１６時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ
、抗ＩＬ−１０で活性化してプール（Ｍ１０６）；溶出単球、４、１６時間ＬＰ
Ｓ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で活性化してプール（Ｍ１０７）；溶出（ｅｌｕｔｒ
ｉａｔｅ）単球、１時間ＬＰＳで活性化（Ｍ１０８）；溶出単球、６時間ＬＰＳ
で活性化（Ｍ１０９）；ＤＣ７０％ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ由
来、ＴＮＦα １２日間、休止（Ｄ１０１）；ＤＣ７０％ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３
４＋ＧＭ−ＣＳＦ由来、ＴＮＦα １２日間、１時間ＰＭＡおよびイオノマイ
シンで活性化（Ｄ１０２）；ＤＣ７０％ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳ
Ｆ由来、ＴＮＦα １２日間、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化（Ｄ
１０３）；ＤＣ９５％ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ由来、ＴＮＦα
１２日間、ＦＡＣＳ分類、１、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化し
てプール（Ｄ１０４）；ＤＣ９５％ＣＤ１４＋、ｅｘＣＤ３４＋ＧＭ−Ｃ
ＳＦ、ＴＮＦα １２日間、ＦＡＣＳ分類、１、６時間ＰＭＡおよびイオノマイ
シンで活性化してプール（Ｄ１０５）；ＤＣＣＤ１ａ＋ＣＤ８６＋、ＣＤ３
４＋ＧＭ−ＣＳＦ由来、ＴＮＦα １２日間、ＦＡＣＳ分類、１、６時間ＰＭ
Ａおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｄ１０６）；単球ＧＭ−ＣＳＦ由
来ＤＣ、ＩＬ−４５日間、休止（Ｄ１０７）；単球ＧＭ−ＣＳＦ由来ＤＣ、Ｉ
Ｌ−４５日間、休止（Ｄ１０８）；単球ＧＭ−ＣＳＦ由来ＤＣ、ＩＬ−４５
日間、４、１６時間ＬＰＳで活性化してプール（Ｄ１０９）；単球ＧＭ−ＣＳＦ
由来ＤＣ、ＩＬ−４５日間、４、１６時間ＴＮＦα、単球スープ（ｓｕｐｅ）
で活性化してプール（Ｄ１１０）；上皮細胞、未刺激；上皮細胞、ＩＬ−１β活
性化；肺線維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５、１、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで
活性化してプール（Ｃ１０１）；腎臓上皮癌細胞株ＣＨＡ、１、６時間ＰＭＡお
よびイオノマイシンで活性化してプール（Ｃ１０２）。

【０１６７】げっ歯類の対応物（例えば、マウス）は、同定され、そしてそれらの分布は、
同様に評価される。マウスｍＲＮＡ単離のためのサンプルは、以下を含む：休止
マウス線維芽Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセプター
に融合したＢｒａｆ）トランスフェクト細胞、コントロール（Ｃ２０１）；脾臓
由来Ｍｅｌ１４＋未処理Ｔ細胞、休止（Ｔ２０９）；脾臓由来Ｍｅｌ１４＋未処
理Ｔ細胞、ＴＨ１細胞へ分極化（ｐｏｌａｒｉｚｅｄ）させるためにＩＦＮγ、
ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４で刺激、６、１２、２４時間ＩＦＮγおよびＩＬ
−４へ曝露してプール（Ｔ２１０）；脾臓由来Ｍｅｌ１４＋未処理Ｔ細胞、Ｔｈ
２細胞へ分極化させるためにＩＬ−４および抗ＩＦＮγで刺激、６、１３、２４
時間ＩＬ−４および抗ＩＦＮγへ曝露してプール（Ｔ２１１）；Ｔ細胞、ＴＨ１
分極化（脾臓由来のＭｅｌ１４光（ｂｒｉｇｈｔ）ＣＤ４＋細胞、ＩＦＮγおよ
び抗ＩＬ−４で７日間分極化；Ｔ２００）；Ｔ細胞、ＴＨ２分極化（脾臓由来の
Ｍｅｌ１４光ＣＤ４＋細胞、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγで７日間分極化；Ｔ２０
１）；Ｔ細胞、トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来の高度にＴＨ１分極化３×
（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１
３６７を参照のこと；２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化してプール；Ｔ２０２
）；Ｔ細胞、トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来の高度にＴＨ２分極化３×（
２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化してプール；Ｔ２０３）；Ｔ細胞、トランス
ジェニックＣ５７ｂｌ／６由来の高度にＴＨ１分極化３×（２、６、２４時間抗
ＣＤ３で活性化してプール；Ｔ２１２）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７ｂ
ｌ／６由来の高度にＴＨ２分極化３×（２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化して
プール；Ｔ２１３）；Ｔ細胞、高度にＴＨ１分極化（トランスジェニックＢａｌ
ｂ／Ｃ由来の未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４
で分極化３×；６、１２、２４時間ＩＧＩＦ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４で
刺激、プール）；ＣＤ４４− ＣＤ２５＋前駆Ｔ細胞、胸腺から分類（Ｔ２０
４）；ＴＨ１Ｔ細胞クローンＤ１．１、抗原による最後の刺激から３週間休止
（Ｔ２０５）；ＴＨ１Ｔ細胞クローンＤ１．１、１５時間１０μｇ／ｍｌ
のＣｏｎＡ刺激（Ｔ２０６）；ＴＨ２Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５、抗原による
最後の刺激から３週間休止（Ｔ２０７）；ＴＨ２Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５、
１５時間１０μｇ／ｍｌのＣｏｎＡ刺激（Ｔ２０８）；未刺激Ｂ細胞株ＣＨ１
２（Ｂ２０１）；未刺激成熟Ｂ細胞白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；脾臓由来
の未刺激ラージＢ細胞（Ｂ２０２）；全脾臓由来のＢ細胞、ＬＰＳ刺激（Ｂ２０
３）；脾臓由来メトリザマイド濃縮樹状細胞、休止（Ｄ２００）；骨髄由来樹状
細胞、休止（Ｄ２０１）；抗Ｂ２２０、抗ＣＤ３、および抗クラスＩＩで枯渇し
た未刺激骨髄由来樹状細胞、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中で培養（Ｄ２０２）
；抗Ｂ２２０、抗ＣＤ３、および抗クラスＩＩで枯渇した骨髄由来樹状細胞、Ｇ
Ｍ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中で培養、１、５時間抗ＣＤ４０で刺激、プール（Ｄ
２０３）；ＬＰＳで４時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ２６４．７（Ｍ２００）
；ＧＭおよびＭ−ＣＳＦで得た骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；ＧＭ−ＣＳＦ
で得た骨髄マクロファージ、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、およびＩＬ−１０で刺
激（Ｍ２０５）；ＧＭ−ＣＳＦで得た骨髄マクロファージ、２４時間ＬＰＳ、Ｉ
ＦＮγ、および抗ＩＬ−１０で刺激（Ｍ２０６）；腹腔マクロファージ（Ｍ２０
７）；マクロファージ細胞株Ｊ７７４、休止（Ｍ２０２）；０．５、１、３、６
、１２時間のマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１０、プール（
Ｍ２０３）；０．５、１、３、５、１２時間のマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋
ＬＰＳ＋ＩＬ−１０、プール（Ｍ２０４）；未刺激肥満細胞株ＭＣ−９およびＭ
ＣＰ−１２（Ｍ２０８）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、未刺激
（Ｅ２００）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαで一晩刺
激（Ｅ２０１）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαで一晩
刺激（Ｅ２０２）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαおよ
びＩＬ−１０で一晩刺激（Ｅ２０３）；ｗｔＣ５７ｂｌ／６マウス由来の全大動
脈；５ヶ月齢ＡｐｏＥＫＯマウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；１２ヶ月齢
ＡｐｏＥＫＯマウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；ｗｔ胸腺（Ｏ２１４）；
全胸腺、ｒａｇ−１（Ｏ２０８）；全腎臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０９）；全腎臓、
ＮＺＢ／Ｗマウス；および全心臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０２）。

【０１６８】ＤＣ−ＳＴＡＭＰの発現パターンの更なる分析のために、新しく単離した休止
している白血球集団または活性化している白血球集団、ならびに造血および非造
血起源のいくつかの細胞株のパネルからのＲＮＡに対して、ＲＴ−ＰＣＲを行っ
た。ＰＣＲ産物をサザンブロットし、そして特定のＤＣ−ＳＴＡＭＰオリゴヌク
レオチドとハイブリダイズした。予期した大きさの明瞭なバンドを、ＬＰＳまた
はＴＮＦαおよび活性化している抗−ＣＤ４０抗体の組み合わせのいずれかで刺
激した、未成熟ＤＣおよび成熟ＤＣ中で検出した。対照的に、新しく単離した単
球は、ＬＰＳで一晩刺激した後でさえも、ＤＣ−ＳＴＡＭＰのＲＮＡを発現しな
かった。全ＰＢＭＣ中で低い発現が検出され（それは、汚染しているＤＣの存在
によって説明され得た）、そして前単球細胞株Ｕ９３７中でも低い発現が検出さ
れた。βアクチンｍＲＮＡコントロールは、全てのサンプルにおいて同様であり
、このことはＲＴ−ＰＣＲに対して等量のＲＮＡが使用されたことを示している
。

【０１６９】ＤＣ−ＳＴＡＭＰ特異的プローブとの１２のヒト組織（ＣｌｏｎｔｅｃｈＭ
ＴＮ番号７７８０−１）由来のｍＲＮＡを含むノーザンブロットのハイブリ
ダイゼーションは、数日間のブロットの暴露の後でさえ、検出可能ないかなるシ
グナルをも生じなかった。試験された１２の異なるヒト組織において、ＤＣ−Ｓ
ＴＡＭＰの検出可能な発現がないということは、ＤＣにおける比較的低い発現に
矛盾しない。

【０１７０】ＤＳＰ−１に関する、初期分布（ｉｎｉｔｉａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
）の研究は、抗原が主に、単球、肥満細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞において発現
することを示唆する。従って、そのレセプターは、これらの細胞型に対して負の
調節の役割を有するようである。

【０１７１】（ＩＶ．融合タンパク質構築物）ＤＣ−ＳＴＡＭＰＯＲＦを、ＥｃｏＲＩまたはＢｇｌＩＩ部位をそれぞれ含
んでいる適切なプライマーを用いて、ＰｗｏＤＮＡポリメラーゼ（Ｂｏｅｈｒ
ｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）で増幅しこれは、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ終止コドン
を欠失していた。このＰＣＲ産物を、ＥｃｏＲＩ／ＢｇｌＩＩフラグメントとし
て、ｐＮ３−ＥＧＦＰ発現ベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰａｌｏＡｌｔｏ，
ＣＡ）へクローン化し、ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩで消化し、強化緑色蛍光タ
ンパク質（ＥＧＦＰ）をコードしている転写物の、ＤＣ−ＳＴＡＭＰｃＤＮＡ
のＮ末端を挿入した。ＣＣＲ１分子を、ＲＴ−ＰＣＲによって、単球からの全Ｒ
ＮＡおよび公開された配列（Ａｄｅｍａら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ３８７：
７１３−７１７；およびＦａｌｋｏｆｆら（１９８２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ５０：３９−４９を参照のこと）に基づくプライマーを使用して
、増幅し、そして同様のアプローチを用いて、ＧＦＰ融合タンパク質としてクロ
ーン化した。プライマーは、ＮｏｔＩまたはＢａｍＨＩ制限酵素認識部位を含ん
でいた。消化されたＰＣＲ産物を、ＮｏｔＩ−ＢａｍＨＩ消化したｐＢｌｕｅｓ
ｃｒｉｐｔＳＫ^-ベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ
）へクローン化し、そして次いで、ＳａｃＩ−ＢａｍＨＩフラグメントとして、
発現ベクターｐＮ３−ＥＧＦＰへクローン化した。

【０１７２】同様の構築物を、ＤＳＰ−１配列を用いて作製し得る。

【０１７３】（Ｖ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰの細胞局在）ＤＣ−ＳＴＡＭＰの細胞局在を決定するため、ＤＣ−ＳＴＡＭＰ−ＥＧＥＰ（
ＥｎｈａｎｃｅｄＧｒｅｅｎＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰｒｏｔｅｉｎ（強
化緑色蛍光タンパク質））融合タンパク質を、分析にかけた。この構築物は、Ｄ
Ｃ−ＳＴＡＭＰＯＲＦのＣ末端へ融合されたＥＧＦＰ配列を有していた。２９
３細胞を、この構築物を用いてトランスフェクションし、そして共焦点レーザー
走査顕微鏡（ＣｏｎｆｏｃａｌＬａｓｅｒＳｃａｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙ
（ＣＬＳＭ）によって分析した。多膜間タンパク質（ｍｕｌｔｉｍｅｍｂｒａｎ
ｅｓｐａｎｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ）は非常に疎水性でありかつ複雑なタ
ンパク質であるから、ＣＣＲ１分子（細胞膜で発現している７ＴＭケモカイン
レセプター）を、コントロールとして比較した。ＣＣＲ１−ＥＧＦＰの、２９３
細胞へのトランスフェクションは、しばしば細胞質（あるいはゴルジを代表して
いる）内における更に強い蛍光スポットを伴い、鮮明な膜の蛍光を生じた。ＤＣ
−ＳＴＡＭＰ−ＥＧＦＰ構築物の、一時的かつ安定な形質導入体の分析は、ＣＣ
Ｒ１−ＥＧＦＰに対して見られたパターンと同様の蛍光染色パターンを示し、こ
のことはＤＣ−ＳＴＡＭＰが細胞表面においてもまた、発現され得ることを表し
ている。ＥＧＦＰタンパク質単独を発現している形質導入体は、鮮明な細胞質の
蛍光を示し、特定の細胞構造に局在化していなかった。

【０１７４】ＤＣ−ＳＴＡＭＰ−ＥＧＦＰタンパク質のＣ末端の局在を、透過化前または透
過化後のいずれかにおいて、ポリクローナル抗−ＧＦＰ血清を用いて、ＤＣ−Ｓ
ＴＡＭＰ−ＥＧＦＰの一時的形質導入体を染色することによって、決定した。細
胞スピン染色（ｃｙｔｏｓｐｉｎｓｔａｉｎｉｎｇ）は、ＥＧＦＰが透過化後
のみに検出され得たことを示し、このことはＤＣ−ＳＴＡＭＰが細胞内のＣ末端
を有していることを表している。陽性細胞の量は、ＦＡＣＳ分析によって観察さ
れたような、一時的にトランスフェクションされたバルク集団中のＧＦＰ陽性細
胞のパーセンテージ（３０％）に矛盾しなかった。抗−ＧＦＰ血清と共にプレイ
ンキュベーションした後に、陽性に染色された少数の細胞は、死んだ細胞への抗
体の漏れ（ｌｅａｋａｇｅ）に起因していた。

【０１７５】（ＶＩ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰおよびＤＳＰ−１の染色体マッピング）抗原をコードしている、単離されたｃＤＮＡを使用する。染色体マッピングは
標準的な技術である。例えばＢＩＯＳＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＮｅｗＨ
ａｖｅｎ，ＣＴ）およびＰＣＲを用いてマウス体細胞ハイブリッドパネル（ｈｙ
ｂｒｉｄｐａｎｅｌ）を使用する方法を参照のこと。

【０１７６】（ＶＩＩ．ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１タンパク質の精製）他の細胞に比べて高いレベルで、所望される抗原を発現しているものについて
、多重トランスフェクションされた（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅ
ｄ）細胞株をスクリーニングする。種々の細胞株をスクリーニングし、取り扱い
において、有利な特性について選択する。天然の抗原を、天然の供給源から単離
し得るか、あるいは適切な発現ベクターを使用して形質転換した細胞からの発現
によって単離し得る。発現されたタンパク質の精製を、標準の手順により達成す
るかあるいは、細胞の溶解産物または上澄みから高い効率で、効果的に精製する
ための改変された方法と組み合わせ得る。ＦＬＡＧまたはＨｉｓ₆セグメントは
、このような精製の特徴のために使用され得る。あるいは、アフィニティークロ
マトグラフィーを、特定の抗体を用いて使用し得る（以下を参照のこと）。所望
の場合、タンパク質を腸細菌（ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、または哺乳動物発現系に
おいて産生する。

【０１７７】ヒト胎児性腎臓（ＨｕｍａｎＥｎｂｒｙｏｎｉｃＫｉｄｎｅｙ）（ＨＥＫ
）２９３細胞を、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を使用し
て、３μｇのＤＣ−ＳＴＡＭＰＤＮＡを用いてトランスフェクションした。Ｌ
ａｎｉｅｒら、（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：２４１７−２４２８
を参照のこと。トランスフェクションの２日後、細胞を回収し、共焦点レーザー
走査顕微鏡（ＣｏｎｆｏｃａｌＬａｓｅｒＳｃａｎｎｉｎｇＭｉｃｒｏｓ
ｃｏｐｙ（ＣＬＳＭ）に対して使用した。発現を、ＦＩＴＣチャネルでのＦＡＣ
Ｓｃａｎ分析（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ＆ＣＯ．，Ｏｘｎａｒｄ
，ＣＡ）によって確認し、そして通常、細胞の３０〜６０％が発現について陽性
であった。安定した大量の集団を得るために、Ｇ４１８（１ｍｇ／ｍｌ；Ｌｉｆ
ｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＬｔｄ，Ｐａｉｓｌｅｙ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）
を、トランスフェクションの２日後に培養培地に加えた。１〜２週間後、細胞を
、ＣｏｕｌｔｅｒＥｐｉｃｓＥｌｉｔｅ（Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｈｉａｌｅａｈ
，ＦＬ）上で、ＧＦＰ発現について分類し、そして生じた大量の集団を、ＣＬＳ
Ｍのために使用した。細胞スピンの調製前、または調製後のいずれかに、細胞を
ウサギポリクローナル抗−ＧＦＰ血清（Ｅ．Ｃｕｐｐｅｎ，Ｄｅｐｔ．ｏｆＣ
ｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＨｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆＮｉｊｍｅｇｅｎ，ＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓによって、好意的
に提供された）を用いて染色した。細胞スピンを１０分間アセトンで固定し、ウ
マ抗−マウスビオチン化抗体とインキュベートし、そして陽性細胞を、免疫ペル
オキシダーゼ染色（ＶａｃｔａｓｔａｉｎＥｌｉｔｅＡＢＣｋｉｔ，Ｖｅ
ｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＵＳＡ；ＡＥＣ
ＳｕｂｓｔｒａｔｅＫｉｔ，ＺｙｍｅｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣＡ
）によって、視覚化した。（共焦点レーザー走査顕微鏡）細胞を、ポリ−１−リジンでコーティングしたスライドガラスに付着させ、そ
の後、ＧＦＰ融合タンパク質の分布を測定した後、クリプトン／アルゴンレーザ
ー（Ｂｉｏｒａｄ１０００，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて４８８ｎｍで
、共焦点レーザー走査顕微鏡（ＣｏｎｆｏｃａｌＬａｓｅｒＳｃａｎｎｉｎ
ｇＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）（ＣＬＳＭ）によって、決定した。ＣＳＬＭの設定
は、レンズ、６０倍；ゲイン、１１００〜１３５０；ピンホール、１．５μｍ；
および倍率、６０倍であった。

【０１７８】（ＶＩＩＩ．相同遺伝子の単離）ＤＣ−ＳＴＡＭＰｃＤＮＡまたはＤＳＰ−１ｃＤＮＡ、あるいはそれに対
応する他の種の配列を、所望される供給源からのライブラリー（例えば、霊長類
細胞のｃＤＮＡライブラリー）を、スクリーニングするためのハイブリダイゼー
ションプローブとして使用し得る。簡単なハイブリダイゼーションのために必要
なストリンジェンシー、およびプローブを使用する存在の両方について、多くの
異なる種をスクリーニングし得る。適切なハイブリダイゼーション条件を、交差
ハイブリダイゼーションの特異性を示すクローンに対する選択のために使用する
。

【０１７９】ペプチド配列に基づく縮重プローブを使用するハイブリダイゼーションによる
スクリーニングはまた、適切なクローンの単離を可能にする。あるいは、ＰＣＲ
スクリーニングに適切なプライマーの使用が、適切な核酸クローンの豊富さをも
たらす。

【０１８０】同様の方法を、種改変体、多型改変体、または対立遺伝子改変体のいずれかを
単離するために、適用し得る。プローブとしての、ある種からの全長単離物また
はフラグメントの単離に基づく、交差種（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ）ハイブ
リダイゼーション技術を使用して、種改変体を単離する。

【０１８１】あるいは、ヒト抗原に対して惹起した抗体を、交差反応性タンパク質を発現す
る細胞について、適切なライブラリー（例えばｃＤＮＡライブラリー）から、ス
クリーニングするために使用する。精製されたタンパク質または規定されたペプ
チドは、上記に記載したような標準的な方法によって抗体を生成するために有用
である。合成ペプチドまたは精製タンパク質を、モノクローナル抗体またはポリ
クローナル抗体を生成するための免疫系へ提示する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（
１９９１）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌＣｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ。生じた抗体を、記載したように、ス
クリーニング、精製、または診断に使用する。

【０１８２】（９．抗原に対する特異的抗体の調製）合成ペプチドまたは精製タンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクロー
ナル抗体を産生するために免疫系に提示される。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９
９１）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＷ
ｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌＣｏｌｄＳ
ｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓを参照。ポリクローナル血清またはハイ
ブリドーマを調製し得る。適切な条件において、結合試薬は、上記のように例え
ば蛍光またはその他でラベルされるか、またはパニング方法のための基質への固
定化のいずれかがなされる。免疫選択、吸収、および関連する技術を、例えば結
合選択性に望ましいスペクトルを提示する選択的試薬を調製するために利用可能
である。

【０１８３】（１０．生物学的機能の範囲の評価）ＤＣ−ＳＴＡＭＰは、潜在的に成長因子または成長ホルモンの受容体として役
立ち、それは活性状態においてＤＣへの分化を誘導し、またはＴ細胞応答を志向
することによりＤＣ機能を修飾する。もう一つの可能性は、免疫系へ神経内分泌
系をつなげる受容体としてのＤＣ−ＳＴＡＭＰの推定上の役割である。様々な刺
激による分化、成熟の効果の分析、およびＤＣ−ＳＴＡＭＰの発現レベルにおけ
るＴ細胞との共培養は、このＤＣ上の新規の多重膜表面受容体の特異的機能への
見識をさらに提供する。

【０１８４】最近、腫瘍抗原でのＤＣパルスは、黒色腫患者における抗腫瘍Ｔ細胞活性の誘
導に、インビボで首尾よく使用された。Ｎｅｓｔｌｅら（１９９８）Ｎａｔ．Ｍ
ｅｄ．４：３２８−３３２。したがってこれらの試薬でのＤＣ処置は、例えば細
胞移送またはインビトロ細胞処置などの細胞に基づいた治療に有用であり得る。

【０１８５】抗原に対する抗体の生物学的活性は、部分的にＤＣ−ＳＴＡＭＰと他の膜タン
パク質の間の配列上および構造上相同性に基づいて試験される。最初に、７ＴＭ
受容体の生物学的活性を示すアッセイが実施される。ＤＳＰ−１については、単
球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／またはマスト細胞の機能に関連する生物学的活性
ついて試験される。したがって、抗原を有する細胞に影響を与えるアンタゴニス
ト抗体を含むようなポリクローナル抗体の効果についてのアッセイが試験される
。主なアッセイは、様々な細胞型（例えば、単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／ま
たはマスト細胞）についての遊走アッセイを含む。マスト細胞特異的アッセイは
、例えばＩｇＥ介在脱顆粒アッセイ、マスト細胞遊走アッセイおよびマスト細胞
増殖により誘導されるＳＣＦ／．ＩＬ‐６の影響アッセイを含む。同様にＴ細胞
、ＮＫ細胞または単球における影響についてのアッセイが試験される。

【０１８６】（Ａ．前駆細胞の増殖／分化における影響）様々な細胞型の増殖／分化における影響を抗体の様々な濃度で評価する。用量
応答分析を実施する。

【０１８７】特に、抗体を、それらが臍帯血細胞の初期の前駆体細胞の増殖または分化への
効果を有するか否かをみるため、臍帯血細胞について試験する。好ましくは細胞
は、初期の前駆細胞であり、例えば幹細胞（例えば、臍帯血、骨髄、胸腺、膵臓
またはＣＤ３４＋前駆細胞に由来するもの）である。抗体をＢ細胞前駆細胞を含
めた、骨髄前駆細胞および／または赤血球前駆細胞への影響を試験する。

【０１８８】（Ｂ．増殖における抗体の効果）全てのＰＢＭＣを記述されるように（Ｂｏｙｕｍら）フィコール−ハイパーク
により遠心することにより正常な健常人ドナーのバフィーコートから単離した。
ＰＢＭＣを１％ヒトＡＢ血清を含有するＹｓｓｅｌ培地（ＧｅｍｉｎｉＢｉｏ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌａｂａｓａｓ、ＣＡ）の２００μｌ中、抗体の存在下
または抗体の不在下について９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ、Ｂｅｃｔｏｎ
‐Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＮＪ）において培養する。細胞を培地のみにおいて、ま
たは１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）を培地と合わせて、
１２０分間培養する。３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（０．１ｍＣｉ）を培養の最後
の６時間の間において加え、そして３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅの取り込みを液体
シンチレーション計測によって決定する。

【０１８９】抗体は、多くの他の生物学的アッセイ系（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞
、マクロファージ、樹状細胞、マスト細胞、造血系前駆体細胞などについての）
においてシグナル活性阻害について試験される。

【０１９０】抗体をマクロファージ／樹状細胞活性における効果について評価し、そして抗
原提示アッセイ、抗原または同種異形の刺激に対する応答でのＴ細胞サイトカイ
ン産性または増殖における効果について評価する。例えば、ｄｅＷａａｌＭ
ａｌｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１２０９〜１２２０
；ｄｅＷａａｌＭａｌｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４
：９１５〜９２４；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４７、３８１５〜３８２２；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１４６：３４４４〜３４５１；およびＧｒｏｕｘら（１９９６）Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１９〜２９を参照。抗体は、マスト細胞の脱顆粒、遊
走などへ影響する能力について試験される。

【０１９１】抗体はまた、ＮＫ細胞刺激における効果についても評価される。アッセイは、
例えば、Ｈｓｕら（１９９２）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５６３
〜５６９；およびＳｃｈｗａｒｚら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１
６：９５〜１０４に基づき得る。その他のアッセイを細胞毒性Ｔ細胞およびＬＡ
Ｋ細胞への効果を評価するために適応する。例えばＮａｍｉｅｎおよびＭｉｒｅ
−Ｓｌｕｉｓ（１９９８）を参照。

【０１９２】Ｂ細胞の増殖および分化の効果は、例えば、Ｄｅｆｒａｎｃｅら（１９９２）
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：６７１〜６８２；Ｒｏｕｓｓｅｔら（１９９２）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１８９０〜１８９３
；に記載される方法論（ＩｇＧ２およびＩｇＡ２スイッチ因子アッセイを含む）
によって分析される。ＣＯＳ７上清と異なり、ＮＩＨ３Ｔ３およびＣＯＰ上清は
、明らかにヒトＢ細胞アッセイの妨げないことに留意すること。

【０１９３】（Ｃ．ヒト単球の細胞表面分子の発現における効果）単球を正常健常人ドナーの末梢血単球細胞から陰性選択により単離する。簡潔
には、フィコールでバンドにされた３×１０⁸単球細胞を、例えば、２００μｌ
のαＣＤ２（Ｌｅｕ−５Ａ）、２００μｌのαＣＤ３（Ｌｅｕ−４）、１００μ
ｌのαＣＤ８（Ｌｅｕ−２ａ）、１００μｌのαＣＤ１９（Ｌｅｕ−１２）、１
００μｌのαＣＤ２０（Ｌｅｕ−１６）、１００μｌのαＣＤ５６（Ｌｅｕ−１
９）、１００μｌのαＣＤ６７（ＩＯＭ６７；Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｗｅｓ
ｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ）、および抗グリコホリン抗体（１０Ｆ７ＭＮ、ＡＴＣＣ、
Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を含むモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ；ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）のカクテルと氷上でインキ
ュベートする。抗体結合細胞を洗浄し、次いでヒツジ抗マウスＩｇＧ結合磁気ビ
ーズ（Ｄｙｎａｌ、Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）と、ビーズと細胞の比が２０：１
の割合にてインキュベートする。抗体結合細胞を磁場を与えることによって単球
から単離する。続いて、ヒト単球を１％ヒトＡＢ血清を含むＹｓｓｅｌ培地（Ｇ
ｅｍｉｎｉＢｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌｂａｓａｓ、ＣＡ）中、抗体の存
在または不在において培養した。

【０１９４】細胞表面分子の発現の分析は、直接の免疫蛍光によって実施され得る。例えば
、２×１０⁵単離ヒト単球を１％ヒト血清を含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）中、氷上で２０分間インキュベートする。細胞を２００×ｇでペレットにす
る。細胞を２０ｍｌのＰＥまたはＦＩＴＣラベルされたｍＡｂ中に懸濁する。さ
らに氷上で２０分間インキュベートした後、細胞を１％ヒト血清を含んだＰＢＳ
中で洗浄し、ＰＢＳのみで２回洗浄する。細胞を１％パラホルムアルデヒドを含
むＰＢＳで固定し、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（ＢｅｃｔｏｎＤｉ
ｃｋｅｎｓｏｎ；ＭｏｕｔａｉｎＶｉｅｗ、ＣＡ）で分析する。典型的なｍＡ
ｂ（例えば：ＣＤ１１ｂ（抗ｍａｃ１）、ＣＤ１１ｃ（ｇｐ１５０／９５）、Ｃ
Ｄ１４（Ｌｅｕ−Ｍ３）、ＣＤ５４（Ｌｅｕ５４）、ＣＤ８０（抗ＢＢ１／Ｂ
７）、ＨＬＡ‐ＤＲ（Ｌ２４３）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ由来）お
よびＣＤ８６（ＦＵＮ１；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ６４（３２．２；Ｍ
ｅｄａｒｅｘ）、ＣＤ４０（ｍＡｂ８９；Ｓｃｅｒｉｎｇ−ｐｌｏｕｇｈＦｒ
ａｎｃｅ）を用いる。

【０１９５】（Ｄ．ヒト単球によるサイトカイン産生における抗体の効果）ヒト単球を記述したように単離し、１％ヒトＡＢ血清を含むＹｓｓｅｌ培地（
ＧｅｍｉｎｉＢｉｏｐｒｏｄｃｔｓ、Ｃａｌａｂａｓａｓ、ＣＡ）中、抗体の
存在または不在において培養する。さらに、単球をＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ０１
２７：Ｂ８Ｄｉｆｃｏ）で、抗体の存在下または不在下において刺激し、そし
て細胞培養液上清におけるサイトカイン（ＩＬ−β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＧＭ
‐ＣＳＦおよびＩＬ−１０）の濃度をＥＬＩＳＡによって測定する。

【０１９６】さらに、アッセイは、骨の再構築、軟骨細胞、神経、脂肪細胞、胃腸上皮、ま
たは気管上皮の領域において試験される。

【０１９７】（１１．遺伝的改変動物の作製と分析）トランスジェニックマウスを標準的な方法によって作製し得る。そのような動
物は、特定の組織において、または生物の全身において、その遺伝子の欠損の影
響を判定するのに有用である。それらは、動物または特定の組織の、様々な発達
段階において興味ある見解を提供し得る。さらには、生物学的ストレスに対する
様々な応答における影響を評価し得る。例えば、Ｈｏｇａｎら（１９９５）Ｍａ
ｎｉｐｕｌａｔｉｎｇｔｈｅＭｏｕｓｅＥｍｂｒｙｏ：ＡＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（第２版）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓを参照。

【０１９８】本明細書中で引用された全ての参考文献は、個々の出版物または特許出願それ
ぞれが、全体として全ての目的のために参考文献に援用されると明確にそして個
々に示されたように同じ程度、本明細書中で参考文献に援用される。

【０１９９】当業者に明らかであるように、本発明の多くの修飾および改変が、その意図お
よび範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書中で記載された特定の実施
態様は、例示のためにのみ提供され、そして本発明は、このような請求が権利を
与えられる同等物の全範囲とともに、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ
制限される。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/06 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｐ 21/02 5/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｅ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者ズロト，コンスタンスエイチ．アメリカ合衆国カリフォルニア 94133，サンフランシスコ，ナンバー６，フィルバートストリート 949 (72)発明者アデマ，ホッセヤンオランダ国エヌエル−6561 エーデーフルースベーク，ハイドンストラート 53 (72)発明者フフドル，カールオランダ国エヌエル−5211 デーデーデンボシュ，ヴェストヴァル 54 (72)発明者フィリップス，ジョセフエイチ．アメリカ合衆国カリフォルニア 94303，パロアルト，ウォルナットドライブ 1511 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA31 BA80 CA04 CA09 DA02 DA03 EA04 GA11 HA12 4B063 QA01 QQ41 QR32 QR56 QS34 4B064 AG01 AG31 CA01 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA93X AA94Y AB01 AC14 BA02 BD50 CA24 CA44 CA46 4H045 AA10 AA11 BA10 CA40 DA86 EA20 EA22 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５も
しくは７に記載される配列からの少なくとも１７個連続したアミノ酸を含む、抗
原性ポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチドまたは組換えポリ
ヌクレオチド。
【請求項２】配列番号５または７からの成熟ポリペプチドをコードする、
請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】配列番号１、４または６のコード部分に、５５℃、５００ｍ
Ｍ塩未満および５０％ホルムアミドでハイブリダイズする、請求項１に記載のポ
リヌクレオチド。
【請求項４】配列番号４または６のコード部分の少なくとも３５個連続し
たヌクレオチドを含む、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】請求項１に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項６】真核生物細胞を含む、請求項５に記載の発現ベクターを含む
、宿主細胞。
【請求項７】請求項１に記載の組換えポリヌクレオチドを発現する工程を
包含する、抗原性ポリペプチドを作製する方法。
【請求項８】請求項１に記載のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するため
の方法であって、該方法は、該ポリヌクレオチドを、配列番号１、４または６の
コード部分の少なくとも２５個連続したヌクレオチドにストリンジェントな条件
下でハイブリダイズするプローブと接触させ；これにより該二重鎖を形成させる
工程を包含する、方法。
【請求項９】請求項１に記載のポリヌクレオチドの検出のためのキットで
あって、該キットは、請求項１に記載のポリヌクレオチドの少なくとも１７個連
続したヌクレオチドにストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドを備える、キット。
【請求項１０】前記プローブが検出可能に標識されている、請求項９に記
載のキット。
【請求項１１】配列番号２、５または７からの少なくとも１７個連続した
アミノ酸に特異的に結合する抗体結合部位を含む、結合化合物。
【請求項１２】請求項１１に記載の結合化合物であって、ここで：ａ）該抗体結合部位は：１）配列番号２、５または７のポリペプチドと特異的に免疫反応性であるか
；２）精製されたかもしくは組換え産生されたヒトＤＣ−ＳＴＡＭＰもしくは
ＤＳＰ−１タンパク質に対して誘起されるか；または３）モノクローナル抗体において、Ｆａｂ、もしくはＦ（ａｂ）２であり；
あるいはｂ）該結合化合物は：１）抗体分子であるか；２）ポリクローナル抗血清であるか；３）検出可能に標識されるか；４）滅菌であるか；または５）緩衝化組成物中に存在する、結合化合物。
【請求項１３】請求項１１に記載の結合化合物を使用する方法であって、
該方法は、抗原を含む生物学的サンプルと該結合化合物とを接触させる工程を包
含し、ここで、該接触させる工程は、結合化合物：抗原複合体の形成を生じる、
方法。
【請求項１４】前記生物学的サンプルがヒト由来であり、そして前記結合
化合物が抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】請求項１２に記載の化合物、および：ａ）該検出のための該検出化合物の使用のための指示物質；またはｂ）該結合化合物の分離を提供する区画、を備える、検出キット。
【請求項１６】霊長類ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１のアゴニストま
たはアンタゴニストと該細胞とを接触させる工程を包含する、細胞または組織培
養細胞の生理学または発達を調節する方法。
【請求項１７】請求項１６に記載の方法であって、ここで：ａ）前記細胞はまた、Ｆｌｔ３リガンドのアゴニストまたはアンタゴニストと
接触されるか；またはｂ）該細胞は、ＤＣ−ＳＴＡＭＰまたはＤＳＰ−１を特異的に結合する抗体結
合部位であるアンタゴニストと接触される、方法。
【請求項１８】配列番号１、４および６からなる群より選択されるヌクレ
オチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１９】配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号５もしくは配
列番号７からの少なくとも１７個連続したアミノ酸を含む、単離されたポリペプ
チド。