JP2003513027A - アテローム性動脈硬化症の診断、結像、治療用の薬剤及びその方法 - Google Patents

アテローム性動脈硬化症の診断、結像、治療用の薬剤及びその方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、ファージディスプレイによりクローンされた新規なヒトＭａｂＦａｂを提供し、かつ診断法及び治療法でのその使用を提供するものである。特に、本発明は、イン・ビボのアテローム性動脈硬化病変部のＯｘＬＤＬ成分を解析する方法及びその相対的病変を決定する手段を提供するものである。この方法は、マウスＭａｂよりもヒトＦａｂをベースとしているので、病気の進行あるいは復帰は、いつでもモニターされる。抗体もＯｘＬＤＬの存在に対するイン・ビトロの外科用サンプルあるいは血清サンプルの解析用に使用される。この抗体は、アテローム性動脈硬化病変部の部位に対する目標の治療薬に使用してもよいし、あるいはそれ自身治療薬として使用してもよい。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願に対する相互参照） 本出願は、１９９９年１０月２６日に出願された米国仮出願番号６０／１６１
４９３の優先権の利益を主張するものであり、完全を帰するために参照としてこ
こに組み入れている。
【０００２】 （発明の背景） （発明の分野） 本発明は、ここにおいて、低密度リポ蛋白（ＯｘＬＤＬ）及び生来のものでは
ないＬＤＬの酸化された形態に特異的に結合するファージディスプレイによりク
ローン化された新規なヒトのモノクロナール抗体断片（Ｆａｂ）に関するもので
ある。さらに詳しくは、本発明は、アテローム性動脈硬化症の診断及び治療法の
改良のための抗体の使用に関するものである。
【０００３】 （先行技術の記述） アテローム性動脈硬化症は、高脂血症及び、種々の環境因子、代謝因子及び遺
伝的リスク因子の複雑な相互作用から生じる慢性の炎症性疾患である。低密度リ
ポ蛋白（ＬＤＬ）の酸化は、アテローム発生過程で、必須の役割ではないが、中
心的な役割を演じている。以前の研究では、ＬＤＬのアセチル化が、マクロファ
ージによる摂取を大いに高め、かつこの摂取は、典型的なＬＤＬリセプターとは
異なる「スカベンジャーリセプター」を経由して起こることが示された。大抵の
リセプターとは異なり、これらのスカベンジャーリセプターは、ＯｘＬＤＬの摂
取に続いてダウンレグレートされなかった。ＯｘＬＤＬの過剰摂取及びマクロフ
ァージによる結合された脂質により、細胞は、特徴的な泡沫様の外観を呈する。
そのような細胞の外観は、アテローム性動脈硬化症の顕著な特徴の一つである。
この泡沫細胞は、血管壁の脈管内膜（内皮ライニング下の）内に蓄積し、そこで
それらは不安定となり、病変部となり、より進行した疾患の顕著な特徴となる。
炎症性の状態は、悪化した病変へと進行する兆しとして現れる。
【０００４】 ＯｘＬＤＬは、数多くのメカニズムによりアテローム発生の原因となるという
多くの証拠がある。リポ蛋白の燐脂質中のポリ不飽和脂肪酸の酸化は、マロンジ
アルデヒド（ＭＤＡ）、４−ヒドロキシノネナール（４−ＨＮＥ）及び酸化され
た燐脂質に結合した他の反応性部分などの多くの分解産物を発生させる。これら
の多くの中間体は高活性であり、結合蛋白のリジン残基及びリン脂質と相互に作
用し、多くの付加物を発生させる。これらの付加物は、イン・ビボで発生し、免
疫原性であることが知られている。アポ−Ｅ欠失ネズミ（ＡｐｏＥ−／−）ネズ
ミのようなアテローム性動脈硬化のハツカネズミモデルでは、アテローム性動脈
硬化は、 ＯｘＬＤＬの種々の酸化特異性エピトームに対する自己抗体の高い力
価の進行と関連している。このような細胞性及び体液性の反応の重大性は、未だ
あまり理解されていないが、ある条件下では、これらは、病気の本来の履歴を明
白に修飾することが出来る。
【０００５】 これらの特性を決定するのはアテローム性動脈硬化病変の組成、とりわけ、脂
質、ＯｘＬＤＬ、泡沫細胞及び平滑筋細胞の含有量であることが、一般に受け入
れられている。泡沫細胞は、破裂を受けやすい病変のサイト中にしばしば見出さ
れる。活性化マクロファージは、ＯｘＬＤＬのみならず、アポトーシス性泡沫細
胞及び壊死性泡沫細胞を取り除くように、また病変部を弱める因子を分泌するよ
うに補充した。ヒトの病理学研究によると、大きな壊死性コア含んだアテローム
、薄い繊維状キャップ及びショルダー中の多数のマクロファージ／泡沫細胞は、
さらに病変部の破壊及び血栓症の素因となる。血管造影研究において、しばしば
冠動脈狭窄を緩和するように思われるこれらの病変は、病変部の面積の４０％を
越える広範な脂質プールを持った大きなアテロームとして、病理学的に特徴づけ
られる。血管造影は、動脈内腔の尺度を提供するのみであるが、血管壁の病理を
検出しない。それ故、ＯｘＬＤＬ及び脂質含量に重きをおいたアテローム性動脈
硬化病変の全体の尺度を提供する診断法が、望ましい。さらに、アテロームの脂
質コアは、泡沫細胞内に蓄積した広範な酸化脂質を含んでいると仮定する事が出
来し、さらに細胞が壊死及びアポトーシスを受けるときには、遊離すると思われ
る。
【０００６】 アテローム性動脈硬化病変の非侵入型検出は、現在は臨床的には可能ではない
。アテローム性動脈硬化を診断するための金標準は、アテローム性動脈硬化を侵
入することにより生じる異常血管内腔輪郭を検出する血管造影法であるが、血管
壁の異常を直接検出するものではない。血管造影法について広く認識されている
限界は、散漫なアテローム性動脈硬化性血管及び動脈改作のために、機能狭窄、
観察者間及び観察者内変異性、病気の程度の過小評価との相関性に乏しいことを
包含する。Ｂモード及び超血管超音波ホログラフィーは、血管内膜／中膜の濃厚
化及び血管壁の石灰化を検出することが出来るが、特異的組織の特性を明確に評
価できない。電子ビーム計算断層撮影法は、血管壁のカルシウムのみを検出する
。磁気共鳴結像は、いまだ病変部成分の検出用の研究道具のレベルのままである
。
【０００７】 病変部破壊が、多く脂質を帯びたマクロファージ及び動脈アテローム内の大き
な脂質プールを含む非血管造影的に有為な病変中にしばしば起きていることが、
ヒトの研究により示された。したがって、脂質の豊富な領域に向けられたアテロ
ーム性動脈硬化の結像は、病変部の負荷の程度を検出するためばかりでなく、臨
床的には静かではあるが、「活性な」病変を検出するためにも価値がある。以前
の放射線シントグラフィー結像剤は、特異性が低いこと、アテローム性動脈硬化
病変部でのイン・ビボでの摂取が低いこと、循環からの脱離が遅いことにより、
制限されており、このため病変／バックグラウンド比が低い。Ｘ線ラベルＬＤＬ
、アポリポ蛋白Ｂのフラグメント、自己の血小板、抗血小板抗体、非特異性抗体、
Ｆｃフラグメント、ヘマトポルフィリン誘導体、及び抗マロン酸モノクロナール
抗体（Ｍａｂｓ）を含めた種々の結像剤が、これまで使用されてきた。
【０００８】 ＯｘＬＤＬ特異的抗体は、イン・ビトロでＯｘＬＤＬのエピトームを認識し、
かつイン・ビトロでアテローム性動脈硬化病変を染色する硬く結合したＩｇＧｓ
を含むヒト及びうさぎのアテローム性動脈硬化病変から単離された。マウスのハ
イブリドーマ細胞系統は、ＯｘＬＤＬに対するＭａｂｓの生産のために発生され
、その抗体は、生来の燐脂質よりもむしろ酸化された燐脂質に特異的に結合する
ことが見出された。しかしながら、以前述べた全ての抗体は、単一特異性であり
、ＯｘＬＤＬの１つの形態のみに結合する。パリンスキーら（１９９６年）によ
り記述されたマウスＭａｂｓのＥＯ系列は、ＯｘＬＤＬかあるいはＭＤＡ−ＬＤ
Ｌかどちらかと結合するが、両方とは結合しない。同様に、他の研究で記述され
たマウスＭａｂｓのＭＤＡ２及びＮＡ５９は、それぞれＭＤＡ−ＬＤＬ及びＨＮ
Ｅ−ＬＤＬと結合する。最も重要なことは、これらのマウス抗体は、反復投与を
妨げる免疫性応答を不正にするので、ヒトのイン・ビボ適用に対する有用性に制
限があることである。
【０００９】 ハツカネズミＭａｂｓを発生させるのに広く使用されているハイブリドーマ技
術は、ヒトのハイブリドーマ生産にはあまり成功していない。エプスタイン・バ
ー・ウイルス（ＥＢＶ）は、ヒトの白血球を不死化するために使用されている。
しかし、ＯｘＬＤＬ中のネオエピトームの幅広い変化により、多くの異なるエピ
トームに対するヒトのＭａｂｓの取得は、困難である。さらに、この技術により
由来したクローンは、しばしば不安定であり、低分泌型である。さらに、ＥＢＶ
形質転換体は、ＩｇＭ抗体を生産するが、抗−ＯｘＬＤＬ抗体は、ＩｇＧ及びＩ
ｇＭアイソタイプの両方になることができる。
【００１０】 ファージ表示コンビナトーリアル・ライブラリ技術（バータス及びレーマー；
１９９１年、ヒューズら；１９８９年）は、ヒトのＭａｂｓを生産するための有
用な方法を提供する。リンパ球ｍＲＮＡから作られたこのライブラリーは、モノ
クロナールＦａｂのレパートリーの１０８組換え体よりなっている。このライブ
ラリーをフィラメント・ファージ表面上に表示することにより、またモデルエピ
トームに対してパンニングすることにより、モノクロナールＦａｂ抗体を選択で
き、かつその免疫学的特性及び生理活性を解析できる。それらが、大量に安価に
製造できるから、またそれらが、生来、非免疫抗原性であるから、Ｆａｂｓは、
治療法及び診断法両方に用いるために理想的である。さらに、それらは、全部が
抗体分子ではないから、抗原に対しての結合に対して免疫応答をカスケード的に
開始できる。
【００１１】 （発明の要約） ここにおいて、本発明は、生来のＬＤＬにではなく、ＯｘＬＤＬ及びＭＤＡ−
ＬＤＬの新しいエピトープに結合する抗体を発見にもとづくが、標的治療の手段
として、及びそれ自身治療薬として、あるいはアテロ―ム性動脈硬化の治療用の
新治療法の開発に対するモデル構造として、アテロ―ム性動脈硬化病変部の結像
における使用の発見にもとづく。
【００１２】 本発明は、ＭＤＡ−ＬＤＬに対する高抗体力価を持つことが見出された患者か
ら取得した末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）からのｍＲＮＡから作製したファージ
ディスプレイライブラリイから単離された、クローンされたヒトモノクロナール
Ｆａｂにもとづく。一連のパニングのラウンド後、モノクロナールＩｇＧＦａｂ
抗体は、単離されたが、それは、直接結合テスト及び競争結合テストの双方から
定量されるように、特異的にＭＤＡ−ＬＤＬ及び銅誘導ＯｘＬＤＬ双方に結合す
るが、生来のＬＤＬには結合しない。このＦａｂは、ヒト、ネズミ及びウサギの
組織中で、インビボ及びインビトロでアテロ―ム性動脈硬化病変部に特異的に結
合することが見出された。さらに、マクロファージによるＯｘＬＤＬの摂取を阻
害することが見出されたし、そのことは、Ｆａｂにより定義されるＯｘＬＤＬ上
のエピトームは、正常なクリアランスあるいはアテローム発生において、マクロ
ファージ・スカベンジャー・リセプタに対する重要なリガンドであることを示唆
している。我々は、このＦａｂをＩＫ１７と命名した。
【００１３】 さらに、本発明は、アテロ―ム性動脈硬化病変に対する従来技術の検出法の欠
陥を、ＩＫ１７により克服することができる。本発明は、検出用の適切な分子に
共役したＦａｂの使用により、非侵襲的にアテロ―ム性動脈硬化病変を画像化す
る新しい方法を記載している。このことは、さらに、インビボでの脂質の豊富な
成分及び酸化の豊富な成分を特別に識別する方法を提供する。本発明を使用した
結像法の非侵襲性質は、患者へのコスト及びリスクを削減し、かつ１次検出法と
してのみならず、治療法の効果をモニターする手段としての方法を提供するもの
である。ここで開示した結像方法は以前の方法よりも高感度であり、冠動脈及び
非冠動脈双方のアテロ―ム性動脈硬化の検出が出来るために、狭窄が起こる前に
、早期の介在が出来る。本発明は、血管自身の観察もできるとともに、病変中に
存在する脂質の量を評価する方法を提供するとともに、前兆インジケータを提供
して、病変の病理の程度を見積もる方法を提供する。ヒトの抗体は、免疫応答を
誘発しないから、治療の養生法の効果を定量的にモニターする方法でもある。こ
のタイプの監視は、非ヒト抗体の反復投与に対して発生する、生命を脅かす可能
性のある免疫応答のためにハツカネズミ抗体では行うことが出来ない。
【００１４】 本発明は、現在の治療法の改善を行うと共に、アテロ―ム性動脈硬化治療に対
する新しい治療法の開発を可能にするものである。このＦａｂは、血栓溶解剤、
酸化防止剤、抗メタロプロテアーゼ剤あるいは他の治療薬抗体を共有結合させて
、治療薬を病変部位に指向させる手段を提供するものである。一方、ＩＫ１７自
身、あるいはＩＫ１７の小分子アナログは、医薬として使用できる。ＩＫ１７は
、マクロファージによるＯｘＬＤＬの摂取を阻害することが知られており、かく
して泡沫細胞の形成をも阻害する。泡沫細胞の形成阻害は、脂質の血管壁への沈
着を減少させ、かつ病気の進行を遅らせる事が出来る。
【００１５】 本発明は、ＯｘＬＤＬとＭＤＡ−ＬＤＬの両方に特異的に結合するが、しかし
自然ＬＤＬとはしない、ＩＫ１７と本発明者らが命名しているヒトモノクローナ
ルＦａｂの発見にもとづき、該Ｆａｂのアテローム性動脈硬化の改良された検出
及び、治療における使用に関する。これは、ＬＤＬの２つの修飾形を認識する抗体
の最初の発見である。ＩＫ１７は冠状動脈心臓疾患に罹ったドナーからのＰＭＮ
ＣｓからのＲＮＡから調製したファージディスプレイライブラリーより単離した
。それは、精製したＬＤＬを用いる相当数の直接及び競合結合アッセイによって
Ｃｕ−ＯｘＬＤＬ及びＭＤＡ−ＬＤＬに特異的であることが見出された。それは
、マクロファージ取り込みアッセイにおいて高い有効性をもつこともまた見出さ
れＯｘＬＤＬ及びアポトーシス細胞の両方のファゴサイトーシスを阻害する。加
えて、該Ｆａｂはインビトロ及びインビボの両方で、アテローム性動脈硬化症プ
ラークを標識するために有用であることが見出された。マウスに注射した放射性
標識ＩＫ１７は、スダン染色によって測定されるアテローム性動脈硬化症プラー
クに共−局在化することが見出された。
【００１６】 ＩＫ１７は、当業者に周知の方法によって組換えＦａｂライブラリーからクロ
ーニングされた。要するに、ヒト血漿試料を、化学発光アッセイを用いるＯｘＬ
ＤＬに対する抗体の存在についてスクリーニングした（Ｈｏｒｋｋｏら、１９９
６）。患者は、ＭＤＡ−ＬＤＬに対し高い抗体力価を持っていることで同定され
た。ＰＢＭＣは患者から単離し、全ＲＮＡが抽出され且つｃＤＮＡを合成するた
めの鋳型として使用した。該ｃＤＮＡは、前に記載されたように（Ｂａｒｂａｓ
及びＬｅｒｎｅｒ、１９９１）、軽鎖と重鎖のＰＣＲ増幅用の鋳型として用いた
。続いて、延長プライマーの３対を、フラグメントの３つの組、Ｖ−カッパ、Ｖ
−ラムダ、及びＶＨのそれぞれに制限部位を加えるための二次増幅用に用いた。
【００１７】 予期したサイズのＰＣＲ生産物は、ファージディスプレイベクターｐＣｏｍｂ
３Ｈ内にクローニングした。結果として生じるファージミドＤＮＡは、エレクト
ロポレーションによってＸＬ−１ブルー大腸菌細胞内に形質転換した。クローン
はＥＬＩＳＡプレート上に被覆したＭＤＡ−ＬＤＬに対してパンニングした。組
換えファージのほぼ１０９−１０１０（１００μｌ）を含んでいる懸濁液は、各
被覆ウェルに入れて３７℃で１時間インキュベーションした。インキュベーショ
ン後、パンニングの最初のラウンド後に一度または以降のラウンド後１０回、未
結合ファージを除去するために、該ウェルを洗浄した。結合ファージを溶離し、
当業者に周知の方法によって増幅用の細菌に感染させるために用いた。パンニン
グの最後のラウンドの後、ファージミドＤＮＡは、エンドヌクレアーゼ消化及び
再連結によって、ファージ表面上のＦａｂを固定する遺伝子ＩＩＩを取り除くよ
うに調製した。結果として得られた生産物は、イソプロピルベータ−Ｄ−チオガ
ラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）での誘発により可溶性Ｆａｂを発現するようにＸ
Ｌ１−ブルー細胞内に形質転換した。細胞溶解液を調製し、さらにＥＬＩＳＡア
ッセイを、Ｆａｂ生産物とＭＤＡ−ＬＤＬとの結合活性を解析するため実行した
。次の実験用に、選択したモノクローナルＦａｂは、当業者に周知の方法により
ＩｇＧ（Ｆａｂ）アフィニティカラムを用いて精製した。
【００１８】 ＦａｂのＶＨ及びＶＬ遺伝子を含んでいるプラスミドＤＮＡは、細胞から単離
し、自動シークェンサーを用いて配列決定した。ヌクレオチド配列は、ＥＭＢＬ
／ＧｅｎＢａｎｋデータベースを用いて解析した。解析は、本発明のＦａｂ軽鎖
のレパートリーがＪκ２への再配列とともにｖ−カッパ３ファミリー遺伝子（Ｖ
ｇ／３８κ／Ｌ６）を用いることが示された。重鎖のレパートリーは、ＪＨ４ｂ
への再配列とともに、ＶＨ３ファミリー遺伝子、３−２３／ＶＨ２６ｃ／ＤＰ４
７を用いる。
【００１９】 アフィニティ精製したＦａｂの結合特異性は、直接結合及び競合アッセイの両
方を用い、ＭＤＡ−ＬＤＬ、Ｃｕ−ＯｘＬＤＬ、及び自然ＬＤＬ並びに非関連タ
ンパク質と核酸抗原のパネルに対する精製したタンパク質の結合を解析すること
によって試験した。Ｆａｂの結合は、３７ｎＭの親和性を持つＭＤＡ−ＬＤＬへ
の優先性で、ＭＤＡ−ＬＤＬ及びＣｕ−ＯｘＬＤＬに特異的であることが見出さ
れた。該Ｆａｂは４−ＨＮＥ−ＬＤＬに対して有意に結合しないし、非特異的Ｍ
ＤＡ修飾タンパク質にも結合しない。該Ｆａｂは、Ｃｕ−ＯｘＬＤＬの脂質及び
タンパク質分画の両方に結合することができたが、しかし全体または分断した何
れかの天然ＬＤＬに結合しない。
【００２０】 アテローム性動脈硬化症に局在化する該Ｆａｂの能力は、アテローム性動脈硬
化症の病巣の検出方法における使用に理想的である。該Ｆａｂは、ハイブリドー
マ細胞系から生産した抗体とは対照的に、容易に及び大量で安価に生産できる。
加えて、ハイブリドーマ系は不安定であり且つ経時的に抗体発現が減じるであろ
う。Ｆａｂが生産される大腸菌内にはＩｇＧ型分子が存在しないので、精製は単
一のアフィニティ精製工程で実行できる。その抗体は、放射性同位体、強磁性体
標識、エコー源性、またはイメージング法によって検出することができる他の適
当な薬剤に結合させることができ、及び宿主静脈内に注射できる。適当な経時後
、イメージングは、治療養生法への宿主反応を評価するための定量的な手法にお
いて、診断目的のためには全身でまた頸動脈のような特有の部位で局所的の何れ
かで実行できる。
【００２１】 ＬＤＬ及びアポトーシス細胞は、アテローム性動脈硬化症の部位で蓄積し、病
気の病因に寄与すると思われる。しかし、それらは病巣への薬剤の標的化のため
の手段として利用できる。アテローム性動脈硬化症の治療用の薬剤は、ＩＫ１７
にそれらを結合させると、該病巣中の特有の酸化特異的エピトープに結合して、
適当な部位に標的化できる。そのような方法は、病巣の部位に対しそれらを標的
化すること及びそれらを保留することによってアテローム性動脈硬化症のため現
在使用されている薬剤の有効量を減少させるために使用できる。加えてそれは、
効果を奏するにはあまりに迅速に分解されてしまうことが見出された望ましい活
性をもつ治療薬を標的化するために使用できる。
【００２２】 上記の通り、アテローム性動脈硬化症の動物モデルにおいて、ＭＤＡ−ＬＤＬ
での免疫化は、その疾患の進行を好転できることが実証されている。ＩＫ１７は
、アテローム性動脈硬化症の進行を好転するための手段として、タンパク質とし
て投与でき、あるいは遺伝子治療ベクターを用いて投与できる。
【００２３】 ＩＫ１７の配列がクローニングされると、相当数の用途のために容易に操作で
きる。リシンまたはシステインのようなリンカーアミノ酸のコード配列を、イメ
ージングまたは治療薬でのＩＫ１７の修飾のために付加できる。該抗体の薬物動
態学的特性を変更して、安定性、血漿クリアランス及び組織取り込みを増加させ
ることができる。抗原認識領域の配列は、突然変異させることができ且つ他のＯ
ｘＬＤＬ結合抗体を同定するための異なるモデル化合物に対するファージディス
プレイでの更なるスクリーニングのラウンドに供することができる。
【００２４】 （好ましい実施形態） 本発明の好ましい実施形態が以下に記載される。ここに記載した全ての公知文
献は、本発明の実践において使用し得るがしかし必須ではない、周知の方法及び
／又は材料を説明するために参考として本明細書に組み入れられる。
【００２５】 コンビナトリアルＦａｂライブラリーの調製及びＯｘＬＤＬ特異的Ｆａｂのクロ
ーニング 患者からの血漿は、高感度化学発光イムノアッセイ（Ｈｏｒｋｋｏら、１９９
６）を用い、ＯｘＬＤＬのエピトープに対する抗体の存在に関してスクリーニン
グされた。スクリーニング用に用いた抗原は、モデルエピトープとしてＣｕ−Ｏ
ｘＬＤＬとＭＤＡ−ＬＤＬ及び陰性対照として天然ＬＤＬを含んだ。これらの抗
原は文献のとおり調製した（Ｐａｌｉｎｓｋｉら、１９９６）。深刻な冠状動脈
疾患に罹った患者が、ＭＤＡ−ＬＤＬに対する高い抗体力価を有していた。
【００２６】 末梢血液単核細胞を患者から分離し、全ＲＮＡを製造者の指示に従ってＲＮＡ
ＳＴＡＴ−６０（Ｔｅｌ−ＴＥＳＴ）を用いて単離した。ｃＤＮＡはＳｕｐｅ
ｒｓｃｒｉｐｔＩＩｃＤＮＡ合成キット（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を用いるオリゴ
ｄＴプライマーで合成した。ＰＣＲ反応は、鋳型として当該ｃＤＮＡを用いて実
行した。１７対のプライマーは、前に記載された通り（Ｂａｒｂａｓ及びＬｅｒ
ｎｅｒ、１９９１）、Ｖ−カッパ遺伝子のイムノグロブリン軽鎖の４対とＶ−ラ
ムダ遺伝子の５対、同じく重鎖の可変領域（ＶＨ遺伝子）の５対を含んでいる。
加えて、延長プライマーの３対は、Ｖ−カッパ、Ｖ−ラムダ、及びＶＨに対する
制限部位を加えるため二次増幅用に用いた。
【００２７】 予期したサイズのＰＣＲ生産物は、２つの工程によりファージディスプレイベ
クターｐＣｏｍｂ３Ｈ内にクローニングした。まずＶ−カッパまたはＶ−ラムダ
フラグメントはベクターのＳａｃＩ及びＸｂａＩ内にクローニングし、ＸｈｏＩ
及びＳｐｅＩ部位内へのＶＨ生産物のクローニングを次に行った。結果として得
られたファージミドＤＮＡは、エレクトロポレーションによってＸＬ−１ブルー
大腸菌細胞に形質転換した。クローンはＥＬＩＳＡプレート上に被覆したＭＤＡ
−ＬＤＬに対してパンニングした。組換えファージのほぼ１０９−１０１０（１
００μｌ）を含んでいる懸濁液は、各被覆ウェルに入れて３７℃で１時間インキ
ュベーションした。インキュベーション後、未結合ファージを除去するためパン
ニングの最初のラウンド後に一度または後のラウンド後に１０回、該ウェルは１
％ＢＳＡを含むホウ酸緩衝化生理食塩水（ＢＢＳ）で洗浄した。結合ファージは
酢酸（ｐＨ２．０）で溶離し、２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．５）で中和した。各
パンニングからの溶離液は、当業者に周知の方法によって増幅用の細菌に感染さ
せるために用いた。
【００２８】 パンニングの最後のラウンドの後、ファージミドＤＮＡは、感染した細菌から
調製した。そのＤＮＡはＳｐｅＩ及びＮｈｅＩで消化し、ゲル精製し、自己連結
し、さらにＸＬ−１ブルー細胞の中に形質転換した。
【００２９】 培養物を増殖し、Ｆａｂ発現をイソプロピルベータ−Ｄ−チオガラクトピラノ
シド（ＩＰＴＧ）で誘発した。細胞溶解液を調製し、さらにＥＬＩＳＡアッセイ
を、Ｆａｂ生産物とＭＤＡ−ＬＤＬとの結合活性を解析するため実行した。次の
実験用に、選択したモノクローナルＦａｂｓは、当業者に周知の方法によりＩｇ
Ｇ（Ｆａｂ）アフィニティカラムに対して精製した。
【００３０】 抗ＭＤＡ−ＬＤＬクローンの配列解析 培養物を増殖し、プラスミドＤＮＡを、自動シークェンサー（ＡＢＩプリズム
）を用いて配列決定するために単離した。ヌクレオチド配列は、ＥＭＢＬ／Ｇｅ
ｎＢａｎｋデータベースを用いて解析した。解析の結果、本発明のＦａｂ、軽鎖
のレパートリーＪκ２への再配列とともにｖ−カッパ３ファミリー遺伝子（Ｖｇ
／３８κ／Ｌ６）を用いることが示された。重鎖のレパートリーは、ＪＨ４ｂへ
の再配列とともに、ＶＨ３ファミリー遺伝子、３−２３／ＶＨ２６ｃ／ＤＰ４７
を用いる。
【００３１】 マクロファージＯｘＬＤＬ結合アッセイ マクロファージスカベンジャー受容体に対するＯｘＬＤＬの結合を阻害する該
Ｆａｂの能力を確認するため、マクロファージ結合アッセイを実行した。マウス
腹腔マクロファージは、生理食塩水洗浄によって細胞を採取する３日前に、チオ
グリコレートメディウム（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の２ｍｌの
腹腔内注射して誘発した。そのマクロファージは、５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）
を添加したＲＰＭＩ １６４０中ウェル当たり１×１０６細胞の濃度で２４−ウ
ェルに群集したディッシュ中でプレーティングした。非−付着細胞は３時間後に
取り除き、培地を一晩インキュベーション毎に取り替えた。
【００３２】 マクロファージに対する１２５Ｉ−Ｃｕ−ＯｘＬＤＬの結合または分解は、前
に記載された通りＧｏｌｄｓｔｅｉｎらの方法を用いて測定した（Ｈｏｒｒｋｏ
ら、１９９９）。
【００３３】 結合アッセイ用に、細胞は、ＯｘＬＤＬのインターナリゼーション（ｉｎｔｅ
ｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）を防ぐために方法全体を通して氷上で維持した。細胞
を、非−放射性Ｃｕ−ＯｘＬＤＬ、ＯｘＬＤＬに対して導かれたマウスモノクロ
ーナル、本発明のＦａｂ、及びヒトＩｇＧＦａｂを含む１２５Ｉ−Ｃｕ−ＯｘＬ
ＤＬを競合物の不在下または存在下で添加する前に血清フリー培地中３０分間４
℃でインキュベーションした。３時間後、細胞を１％ＢＳＡを含む氷冷ＰＢＳで
洗浄し、次いで０．２Ｎ ＮａＯＨ中で可溶化した。タンパク質及び放射能の定
量用にアリコートを取り出した。
【００３４】 ＩＫ１７は、容量依存手法においてマクロファージ効率（７０−８５％）に対
する１２５Ｉ−Ｃｕ−ＯｘＬＤＬの結合を阻害できる。１２５Ｉ−Ｃｕ−ＯｘＬ
ＤＬの結合は、非−特異的ヒトＩｇＧＦａｂの存在によっては影響を受けず、こ
れは、その阻害が特異的であること及びＩＫ１７がスカベンジャー受容体により
見られたＯｘＬＤＬ上のエピトープを効率的にマスクできることを実証している
。
【００３５】 マクロファージＯｘＬＤＬ分解アッセイ マクロファージを採取し、上記結合アッセイにおけると同じ方法によってプレ
ート培養した。血清フリー培地中における特定の濃度の１２５Ｉ−Ｃｕ−ＯｘＬ
ＤＬまたは１２５Ｉ−ＭＤＡ−ＬＤＬを、３７℃で５時間、競合物の不在下また
は存在下で各ウェルに加えた。分解したリポタンパク質の量は、培地中に存在す
る１２５Ｉ−標識トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）−可溶性物（非ヨウ素化物）の量に
よって測定した。ＩＫ１７は、特異的な濃度においてマクロファージによる１２ ５ Ｉ−Ｃｕ−ＯｘＬＤＬの分解を５０〜６５％阻害した。１２５Ｉ−Ｃｕ−Ｏｘ
ＬＤＬ及び１２５Ｉ−ＭＤＡ−ＬＤＬの分解は、非−特異的ヒトＩｇＧＦａｂの
存在によっては影響を受けず、これはその阻害が特異的であったこと及びＩＫ１
７がスカベンジャー受容体により見られたＯｘＬＤＬ上のエピトープを効率的に
マスクできることを実証している。
【００３６】 結合及び分解アッセイの両方において、結合または分解したリポタンパク質の
量は細胞タンパク質のｍｇ当たりで計算し、その結果はいずれの競合物も存在し
ない対照の％として表した。
【００３７】 アポトーシス細胞へのＩＫ１７の結合及びマクロファージ取り込みの阻害。
【００３８】 ＦＡＣＳｃａｎ：デキサメタゾン処理したアポトーシス胸腺細胞を採取し、０
．１％ＢＳＡを含む氷冷ＰＢＳで洗浄した。１×１０６細胞を、４℃で２０分間
、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で、ＩＫ１７または同位体適合した対照ヒトＩ
ｇＧ（Ｆａｂ）の５０μｇ／ｍｌと共にインキュベーションし、洗浄し、次いで
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）の１０−２０μｇ／ｍｌとともにさらに２０分間イ
ンキュベーションし、直ちに、蛍光標識式細胞分取器（ＦＡＣＳ）解析により解
析した。ＰＩ染色はアポトーシス及び生存細胞の分離を与える。分取した細胞を
、ＩＫ１７を結合するその能力についてさらに解析した。ＩＫ１７は、アポトー
シス細胞に結合するが、しかし細胞がＩＫ１７により認識されるエピトープを表
示されるアポトーシスを受けていることを示している生存細胞ではないことが見
いだされた。
【００３９】 ファゴサイトーシスアッセイ：アポトーシス胸腺細胞のファゴサイトーシスは
、Ｃｈａｎｇら、１９９９により記載された通り測定した。マクロファージを取
り出し且つ上述した通りプレートした。細胞をデキサメタゾンで処理し、０．１
％ＢＳＡを含むＰＢＳの０．５ｍｌに懸濁し、さらに３７℃で１５分間、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ＰｒｏｂｅｓからのカルセインＡＭ（登録商標）で標識した。細
胞を洗浄し、補充したＤＭＥＭ中に再懸濁した。ファゴサイトーシス評価のため
、標識したアポトーシス胸腺細胞を、ＩＫ１７または競合物としての非−ヒトＦ
ａｂの不在下または存在下、マクロファージ含有ウェルに加え、９０分間３７℃
でインキュベーションした。ウェルを洗浄した。マクロファージを採取し且つ固
定した。蛍光はＦＡＣＳにより解析した。細胞を、マクロファージとより小さく
ない細胞とを選択するためサイズにより分取した。マクロファージの蛍光標識は
、標識されたアポトーシス細胞の取り込みを示した。これらの実験は、アポトー
シス細胞の取り込みがＩＫ１７により４３％阻害されたことを示し、そして、Ｉ
Ｋ１７がマクロファージスカベンジャー受容体によって認識されるアポトーシス
細胞上のエピトープをマスクできることを示している。
【００４０】 免疫組織化学 免疫組織化学は、ヒト及びウサギの動脈からの各種の段階の病巣について実行
した。これらの組織の大部分からの切片は、相当数の研究において以前から用い
られており、且つマクロファージの存在及び酸化特異的エピトープの存在に関し
て特徴付けされている。組織は外科手術または検死の間に得られ、固定化し、切
片化し、且つ当業者に周知の方法により染色した。ヒト及びウサギの動脈中のア
テローム性動脈硬化症病巣の染色は、ＩＫ１７により認識されたエピトープが壊
死したコアにおいて主として生じることを示した。マクロファージ−富化の早期
病巣及び一過性病巣のショルダー領域は、ほとんどＩＫ１７染色されなかった。
数名のヒトの冠状動脈病巣のみが弱い細胞性の染色ポケットを含んだ。これに対
して、強いＩＫ１７染色がヒト冠状動脈の進行した病巣の壊死エリアと、ヒトの
脳動脈中の古典的アテロームのコアとにおいて見出された。同様に、アテローム
性動脈硬化症のウサギモデル系からの大動脈において、ＩＫ１７は壊死エリアを
染色するが、一方、早期病巣及び表在性マクロファージでは弱い染色のみが検出
された。
【００４１】 これらの結果は、酸化したＬＤＬと同種のものまたはアテローム性動脈硬化症
ａｐｏＥ−／−マウスからクローニングした自然Ｍａｂで免疫化することによっ
て誘導されている酸化特異的エピトープに対する抗血清及びＭａｂで得られた染
色パターンと対比される。これらの抗体の全ては、壊死エリアにおいて相対的に
より弱い染色をもつヒト、ウサギ、及びマウスにおける早期病巣においてより強
いマクロファージ関連性であって拡散する細胞外染色を一貫して示した。
【００４２】 使用されるＩＫ１７の最適化 ＩＫ１７をコードするｃＤＮＡは、画像診断と、その他の適用で使用するため
にそれを最適化するよう、無作為方法あるいは指示される方法で容易に操作する
ことができる。標識化試薬、小さな分子、または、製薬薬剤を付着させるための
リンカーのコード配列は、遺伝子工学的に処理してそのｃＤＮＡに入れることが
できる。さらに、ＩＫ１７はそれ自体、安定性を改善し、プラズマ除去率を増加
させ、バックグラウンド及び増加組織摂取率を減らすよう修飾することができる
。そのコード配列は、突然変異誘発に曝すことができ、わずかに異なる特異性を
有する抗体を得るために、ＭＤＡ−ＬＤＬ以外のモデル化合物に対してスクリー
ニングすることができる。修飾は、選ばれたのシステムにおいて、発現レベルを
最適化するために行うことができる。
【００４３】 ＩＫ１７のｓｃＦｖへの変換 ＩＫ１７のｃＤＮＡ配列を分析した後、ＰＣＲプライマーは、ＩＫ１７のＶＬ
及びＶＨ遺伝子に関するｃＤＮＡを宿らせる親ｐＣｏｍｂ３Ｈベクターからヒト
ｓｃＦｖを作り出すように設計された。その変異遺伝子再配列を増幅するために
、ＶＨ（４００塩基対）増幅と、Ｖｋ（３５０ｂｐ）増幅が実施された。それぞ
れの反応の産物は別々にプールされ、エタノール沈殿が行われた。重複ＰＣＲを
実施するため、Ｖｋ産物のアリコートがＶＨ産物の等量と混ぜ合わされた。その
プライマーは、重複ＰＣＲにより、ｓｃＦｖをコードするインフレーム遺伝子を
作り出すことを可能にするよう、Ｖｋ産物の下流部分と、ＶＨ産物の上流部分に
ある同一配列により作り出された。Ｖｋ−リンカー−ＶＨ産物の７５０ｂｐ産物
が確認され、また、アガロースゲルサイズ分画が実施された。Ｖｋ−リンカー−
ＶＨ配列はその後に、高いレベルの発現のためのアラビノース誘導性プロモータ
ーと、ニッケルカラムを用いた親和性精製用ポリヒスチジンタグを有する、原核
細胞発現ベクターｐＡＲＡのＳｆｉ部位に入れられサブクローン化された。ｓｃ
ＦｖＩＫ１７は配列決定され、これは、およそ３０ｋＤの分子量を有し、７アミ
ノ酸リンカーにより連結されている全Ｖｋ領域と全ＶＨ領域（各１２５アミノ酸
）から成る。免疫学的試験により、ｓｃＦｖＩＫ１７が、ＦａｂＩＫ１７と非常
に類似している結合特性を有することが示された。さらに、ｓｃＦｖＩＫ１７は
、化学発光ＥＬＩＳＡ法によって測定されたように、その親Ｆａｂのものよりも
、Ｃｕ−ＯｘＬＤＬ及びＭＤＡ−ＬＤＬに対して５０〜５００大きな結合活性を
示している。
【００４４】 非侵襲性画像診断のための標識化技術 ＩＫ１７は、核シンチグラフィ画像診断のため９９ｍＴｃ結合部位を含めるよ
う、遺伝子工学的に、または化学工学的に処理することができる。インビボＳＰ
ＥＣＴ画像診断法は、数多くのアテローム性動脈硬化症の宿主で実施することが
できる。核シンチグラフィ自体は小さな病変部を検出するのに理想的な解決策を
有しているわけではないので、磁気共鳴及び経血管または血管内超音波画像診断
では、それぞれ、ＩＫ１７を、ガドリニウムまたはエコー源性リポソームにより
標識化することができる。
【００４５】 アテローム性動脈硬化症の経血管造影増強のためのエコー源性リポソームに対す
るヒトＭＡｂの結合（コンジュゲート） 最近、部位特異的血管内（３０ＭＨｚ）及び経血管（１５ＭＨｚ）画像造影増
強に対する抗体結合エコー源性リポソームが開発された。抗フィブリノーゲンと
抗細胞間接着分子−１（抗ＩＣＡＭ−１）抗体は、音響的に反射するリポソーム
に対して結合されており、また、その画像が血栓とアテローム性動脈硬化症病変
部の動物モデルで得られている。これらの音響的リポソームは、ホスファチジル
コリン：ホスファチジル−エタノールアミン：ホスファチジルグリセロールの６
０：８：２：３０モル混合物から成り、また、脱水／再水和混合により調製され
た。これらは、うまく分離した脂質二重層と、エコー源性を付与している内部小
胞により多重膜になっている。これらの平均サイズは、準弾性光散乱法により測
定されたところでは、〜８００ｎｍである。これらリポソームは血液循環では安
定しており、抗体を結合した後も、ガスをトラップせず、肺毛細血管を通過し、
その特性を３７℃で維持している。その抗体はＮ−スクシンイミジル−３−（２
−ピリジルジチオ）プロピオネートでチオール化され、還元され、また、その抗
体とリン脂質の間にチオエーテル結合を作ることによりリポソームとコンジュゲ
ートされる。そのコンジュゲート抗体は安定しており、また長い貯蔵寿命を有し
ている。アテローム性動脈硬化症病変部は透過性が増進していることが知られて
おり、それが、プラークのさらに深い領域へと侵入していくことを促進する。非
常に薄い「キャップ」、すなわち、アテロームの上に被さっている内皮／平滑筋
細胞障壁をまとったプラークは、非常に脆く破れやすいものであるが、それはま
た、非常に透過性が強いものでもある。画像診断は以下のように実施される。
【００４６】 ガトリニウム（Ｇｄ３＋）標識化ｓｃＦｖ抗体 増強された解像度（＜０．５ｍｍ）を提供する１つの代替的な画像診断方法で
ある磁気共鳴画像診断法（ＭＲＩ）は、造影剤としてＧｄ３＋標識化ＩＫ１７を
用いてその評価を行う。ＭＲＩは迅速な画像取得、増強した解像度、放射性が存
在しないこと、及び、血管管腔のシグナルから干渉を受けることなく血管壁を画
像処理する能力といったような長所を有する。しかしながら、造影剤としての遊
離Ｇｄ３＋は毒性があるため、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）に結合
させて、臨床上のＭＲＩ画像診断に使用される。環状ジアミントリアミン五酢酸
無水物（ｃ−ＤＴＰＡ）にＭＡｂを反応させることによりＭＡｂにＧｄ３＋を結
合させる先例が存在する。この技術を用いた当初の試みは、最適条件には及ばな
かったが、しかし、その後の研究により、ポリリシン−ＤＴＰＡ−Ｇｄ３＋−結
合抗体は、抗体親和性に有意な影響を与えることなく共役した３０Ｇｄ３＋イオ
ンまでにより、腫瘍画像診断に使用することができる。Ｇｄ３＋標識化ＭＡｂを
使用した以前の研究では、利用可能なＮＨ２基に直接Ｇｄ３＋を結合させるか、
または化学的にポリリシンと結合させるかのいずれかであった。ＤＴＰＡを結合
するための自然部位は、ｓｃＦｖ（一本鎖抗体）分子に限られている。したがっ
て、本発明者らは、ポリリシン基（長さ６〜３０）のいくつかのクラスターを遺
伝子工学的に、ｓｃＦｖＭＡｂのＮ末端またはＣ末端に融合させて、またこれと
、ｃ−ＤＴＰＡを反応させた。他のアミノ酸基も潜在的に反応することが可能で
あるが、その分子の尾部におけるポリリシンの有用性により、好ましい部位指定
標識化が可能になって然るべきである。そのポリリシン部位に対する生物工学的
な処理が、５'と３'末端の両方でクローン化するため、６リシン残基と制限部位
とをコードするプライマーを用いたＰＣＲにより実施された。
【００４７】９９ｍ Ｔｃ標識化ＭＡｂによる画像診断 酸化特異的抗体の９９ｍＴｃ標識化については以前に記載がある（Ｔｓｉｍｉ
ｋａｓら、１９９９）。９９ｍＴｃ−ＩＫ１７がアテローム性動脈硬化症と正常
なマウスとウサギに静脈内注射され、薬物動態、臓器分布及び大動脈プラーク摂
取に関して分析される。インビボ画像診断では、１〜５ｍＣｉが高コレステロー
ル血症に罹患しているウサギの静脈内に注射され、画像診断が、ＡＤＡＣＰｅｇ
ａｓｙｓコンピュータソフトウェアを装備した９９ｍＴｃ（ＶＸＵＲコリメータ
ー）用の２０％ウインドウに設置した二重検出器ＡＤＡＣバーテックスモデルガ
ンマカメラで実施される。インビボ画像平面（前、後と４５度斜めの位置）とＳ
ＰＥＣＴが、注射後１０分で最少１ｘ１０６カウントに対して２５６ｘ２５６ｘ
１２マトリックス上で取得される。反復画像処理は、インビボ摂取データから得
られるバックグラウンドに対する最適標的の比率に基づいてさまざまな経過時点
で３〜５００，０００カウントに関して実施される。全Ｍａｂを用いた画像研究
では、血液循環中のその９９ｍＴｃ−ＭＡｂの延長された半減期のために、低い
シグナル雑音比（Ｓ／Ｎ比）であった。その抗原の画像処理スピードプラズマク
リアランスに先立って行われたその抗原の注射により画像に関するバックグラウ
ンドが軽減されている。Ｆａｂ、ｓｃＦｖあるいはもっと小さな断片の場合は、
Ｆａｂｓ及びｓｃＦｖが非常に短い半減期（＜３０分）を有しているので、一定
の画像処理条件下でこの問題を無くすることができ、また、抗原の注射は必要と
はならないこともある。シグナル雑音比（Ｓ／Ｎ比）が好ましいものではないと
きには、ＭＤＡ−ＬＤＬ、Ｃｕ−ＯｘＬＤＬまたは、他の適当な抗原が注射され
て、そのバックグラウンドシグナルを一掃する。
【００４８】 Ｇｄ３＋−標識化ＭＡｂによる画像診断 抗体ＤＴＰＡ複合体に対するＧｄ３＋の標識化については以前に記載がある（
Ｌｉｓｔｅｒ−Ｊａｍｅｓら、１９９６；Ｗｕら、１９９５）。インビボ摂取測
定はマウスとウサギで、１５３Ｇｄ−ＩＫ１７により実施され、またＩＫ１７の
薬物動態、体内分布及び大動脈プラーク摂取が測定される。インビボ画像処理は
その後に、小さな表面コイルを用い１．５Ｔ ＧＥ ＭＲＩスキャナーを使用し
て、ウサギで実施される。
【００４９】 ＭＡｂと結合したエコー源性リポソームによるアテローム性動脈硬化症について
の経血管造影増強 未変性ＩＫ１７または、そのタンパク質のＣ末端またはＮ末端にシステインを
付加することにより修飾されたＩＫ１７をチオール化し、リポソームにコンジュ
ゲートした。１２ＭＨｚ画像カテーテル（Ａｃｕｓｏｎ社製）が画像診断（解像
度＜１ｍｍ）に使用される。病変部のエビデンスのため事前にスクリーニングさ
れていたウサギは、ＭＡｂ結合リポソーム、非共役リポソーム及び正常生理食塩
水の２〜４ｍｌが注射される。リポソーム輝度のビデオデンシトメトリーによる
分析はその後に、摂取を評価するため実施される。
【００５０】 アテローム性動脈硬化症病変部の存在または進行／退行を測定するインビボプラ
ーク摂取量測定 インビボにてアテローム性動脈硬化症を評価するために、標識化ＩＫ１７が、
アテローム性動脈硬化症を有する、あるいは有することが疑われているヒトまた
は動物に注射される。所定時間経過後、その標識化試薬の安定性、実施される画
像診断のタイプ（局所かまたは全身か）、また、薬物動態を考慮することにより
、画像診断が実施される。治療養生法の効果を評価するために、局所定量的画像
診断が実施される（例えば、ＳＰＥＣＴによるもの）。疾患が身体のいずれかに
存在するかどうかを判定するためには、全身画像診断が実施される。ＩＫ１７に
関する放射性トレーサーの使用により、プラークの進行または退行は、所望され
る間隔で反復画像処理し、治療の時間的経過にわたって、定量的にモニターする
ことができる。
【００５１】 病変部の血管内画像診断 現在入手可能な血管造影の手法は、増強された画像処理のために、標識化ＩＫ
１７と組み合わせて使用することができた。血管造影法の限界は上に説明されて
いる。画像診断前にプラークの標識化を行うことにより、その動脈をまだ塞いで
はいない、より小さな、またさらにび漫性のものであるプラークの検出が可能に
なるであろう。９９ｍＴｃにより標識化されたＩＫ１７、ガンマ放射線またはエ
コー源性リポソームは、カテーテルを使用することにより、血管内的に検出する
ことができた。これは、その病変部の組成を判定する手段を提供することにより
、本方法の予後徴候診断の価値を増加させることになる。
【００５２】 アテローム性動脈硬化症の存在に関するインビトロ測定 ＩＫ１７により認識されたＯｘＬＤＬの形態がアテローム性動脈硬化症を有す
ることが疑われる宿主の血清に存在するかどうかを判定するために、感受性のあ
る、二重層サンドイッチ化学発光免疫測定法が開発された。例えば、アポＢ、Ｌ
ＤＬの構成要素に結合する抗血清が、マイクロタイタープレートの底上に被覆さ
れた。プラズマの一連の希釈液が加えられ、そのサンドイッチの真中にＬＤＬの
結合が生じる。十分に洗浄した後、ＩＫ１７Ｆａｂの適当な希釈液が、そのサン
ドイッチの上層として加えられる。ＩＫ１７Ｆａｂの存在は、その結果として、
比色法、発光または蛍光測定法により検出される。これは、アルカリホスファタ
ーゼ結合Ｆａｂ特異的抗ヒト抗体を用いて検出され、同様なやり方で、ヒトａｐ
ｏＡ１に対する抗血清は、血漿から得られるＨＤＬを捕捉するために、底層とし
て使用することができ、ＨＤＬにおけるＩＫ１７エピトープの以後の測定を可能
にする。最終的には、ＩＫ１７は、総てのＩＫ１７エピトープの測定値を得るた
めに、そのサンドイッチの一番上と底として使用することができる。
【００５３】 アテローム性動脈硬化症薬剤の標的化 製薬薬剤の開発のなかでももっとも魅力的実施形態の１つは、ドラッグデリバ
リーである。ＩＫ１７の使用により、アテローム性動脈硬化症治療に関する薬剤
は作用が必要とされる部位、そのアテローム性動脈硬化症の病変部に標的を定め
ることができる。その病変部位に作用するアテローム性動脈硬化症の治療に現在
入手可能な一群の薬剤には、血栓溶解剤、抗酸化剤、抗メタロプロテイナーゼ、
免疫調節剤が含まれる。これらの薬剤を、作用の特異的部位に対して標的を定め
ることにより、その活性投与量、また、したがって、副作用を軽減することがで
きる。さらに、不都合な薬物動態を伴う活性薬剤は、そのプラークに対するその
標的化を改善するために、ＩＫ１７に結合することができる。
【００５４】 アテローム性動脈硬化症薬剤の開発 その疾患の重篤度を軽減されたＯｘＬＤＬを有するＬＤＬＲ−１−マウスの免
疫化は、抗ＯｘＬＤＬ抗体の抗体を治療用の薬剤として有用なものとすることが
できたことを示唆している。そのＦａｂは直接に、または、ＩＫ１７が単一遺伝
子から発現するように、遺伝子治療ベクターという手段により、デリバリーする
ことができる。
【００５５】 その抗体に対する作用について考えられるメカニズムは、マクロファージによ
るＯｘＬＤＬの摂取をブロックすることにより、泡沫細胞の形成が阻害され、ま
たその疾患の進行が低減されることである。ＯｘＬＤＬに対するＩＫ１７の結合
部位は、直接的な構造決定法またはモデリング法により決定することができ、ま
た、マクロファージによるＯｘＬＤＬの摂取を阻害する小さな分子の開発の出発
点として使用することができる。
【００５６】 光動力学療法 ＩＫ１７は、カテーテル光源の使用により与えることができる適当な光の波長
による刺激を行う際にエネルギーを発する光動力学的化合物によって標識化する
ことができる。その化合物の活性化は、アテローム性動脈硬化症プラークを除去
するか、またはそのプラークの成長を阻害することができる。
【００５７】 本発明の例示的な実施形態は例としてのみ上で説明したが、当業者であれば、
添付の請求項により定義される本発明の範囲から逸脱することなく、開示された
実施形態に対して変更例が作成されうることは、理解されることであろう。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/10 Ｃ０７Ｋ 16/18 ＺＮＡ Ｃ０７Ｋ 16/18 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｗ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 49/02 Ｂ Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ツィミカス、 ソティリオス アメリカ合衆国 カリフォルニア州 92122 サンディエゴ アーノルドソン アヴェニュー 2802 (72)発明者 パリンスキー、 ウルフ アメリカ合衆国 カリフォルニア州 92122−5150 サンディエゴ ポルテ デ パルメス 4031−87 (72)発明者 ショウ、 ピーター エックス． アメリカ合衆国 カリフォルニア州 92122−5150 サンディエゴ カミニート アーケイド 10860 Ｆターム(参考） 4C084 AA13 AA17 4C085 AA14 AA19 AA21 BB41 DD62 EE01 HH03 HH07 HH09 KA04 KA29 KB09 KB12 LL07 4H045 AA11 AA30 BA53 CA42 DA76 EA23 EA50 FA74

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 宿主のアテローム性動脈硬化病変部を結像する方法であって
    、該方法は： 検出が可能なようにラベルされたヒト又はヒト化Ｍａｂ若しくはその断片、Ｆ
    ａｂ、ｓｃＦｖ又はその小分子アナログの診断有効量を宿主の脈管に導入する、 ただし該抗体はアテローム性動脈硬化病変部のコアに存在する酸化特異的エピ
    トープに対して特異的であり且つイン・ビボで正常な脈管構造に対して結合する
    速度よりも検出可能な程度の高速で当該エピトープに結合する；および、 上記抗体が脈管構造に結合したかどうかを決定する、 ただし該抗体の脈管構造への結合がアテローム性動脈硬化病変部の存在の指標
    となり且つ該抗体の脈管組織への結合は病理学的に不安定な病変部を示す； 前記方法。
  2. 【請求項２】 検出が可能なようにラベルされたＦａｂあるいはｓｃＦｖが
    、ＩＫ１７であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 心臓血管組織で検出されたアテローム性動脈硬化病変部の大
    きさが、アテローム性動脈硬化病変部を含んでいない体の他の部位に対し、検出
    可能なようにラベルされた抗体の注入量のパーセントの相関として見積もられる
    ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 結像方法が、アテローム性動脈硬化疾患の進行あるいは退行
    をモニターする手段として使用され、かつアテローム性動脈硬化病変部の相対的
    な病理の前兆となるインジケータとして使用されることを特徴とする請求項１に
    記載の方法。
  5. 【請求項５】宿主内のアテローム性動脈硬化のインジケーターの存在をアッ
    セイする方法であって、該方法は： 患者血清をヒト又はヒト化Ｍａｂ若しくはその断片、Ｆａｂ、ｓｃＦｖに対す
    る結合についてアッセイする、 ただし該抗体はアテローム性動脈硬化病変部に存在する酸化特異的エピトープ
    に対して特異的であり； ＥＬＩＳＡタイプのアッセイで、上記抗体の抗原に対する結合に競合する因子
    が上記血清に含まれているかどうか決定する、 ただし、上記抗体の抗原に対する結合の阻害は上記血清中にアテローム性動脈
    硬化のインジケーターが存在することを示し；又は ＥＬＩＳＡタイプのアッセイで、上記抗体を用いて血清中の全てのＨＤＬ又は
    ＬＤＬ集団を検索し、 ただし該抗体の結合が上記血清中にアテローム性動脈硬化のインジケーターが
    存在することを示す、 前記方法。
  6. 【請求項６】 ＦａｂあるいはｓｃＦｖが、ＩＫ１７であることを特徴とす
    る請求項５に記載の方法。
  7. 【請求項７】 アテローム性動脈硬化病変部への治療薬剤の送達を改善する
    方法であって、該方法は、治療薬剤をヒト又はヒト化Ｍａｂ若しくはその断片、
    Ｆａｂ、ｓｃＦｖ又はその小分子アナログに結合させ、ただし該抗体はアテロー
    ム性動脈硬化病変部のコアに存在する酸化特異的エピトープに対して特異的であ
    る、前記方法。
  8. 【請求項８】 ＦａｂあるいはｓｃＦｖが、ＩＫ１７であることを特徴とす
    る請求項７に記載の方法。
  9. 【請求項９】 治療剤が、光力学的な治療の目的で分配されることを特徴と
    する請求項７に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 Ｉｋ１７により認識されたエピトープをマスクすることに
    よってマクロファージによるＯｘＬＤＬの摂取を阻害する剤よりなる、新規治療
    剤を創る方法。
  11. 【請求項１１】 治療剤が、抗体、ＦａｂあるいはｓｃＦｖ自身であって、
    抗体が組換え法で発現され、かつ宿主に投与され、あるいは抗体が、Ｆａｂあ
    るいはｓｃＦｖのコード領域よりなる遺伝子治療ベクターから宿主によって発現
    されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 マクロファージによるエピトームの摂取を阻害するために
    、治療剤がＩＫ１７と酸化されたエピトームとの相互作用を擬態する小分子であ
    ることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 ＩＫ１７の修飾方法であって、該方法は、該抗体の軽鎖お
    よび重鎖のコード配列を修飾するか又はフランキング配列を付加することを含む
    前記方法。
  14. 【請求項１４】 請求項１３に記載の方法であって、該方法は、結像剤若し
    くは治療剤で修飾するためのサイト若しくはリンカーをＩＫ１７上に設けるため
    にフランキング配列を付加し、又は安定性の変更、バックグランド染色の減少の
    ための血漿除去性の増加および組織への取り込み率増加を含むＩＫ１７の薬力学
    的又は薬物動態学的特性を修飾することを含む、前記方法。
  15. 【請求項１５】 上記ＦａｂまたはｓｃＦｖの結合特異性を変更するための
    ＩＫ１７の修飾を含む請求項１３に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 本明細書に付帯した添付Ａに記載の核酸配列から構成され
    る軽鎖および重鎖を含む抗体。
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030105003A1 (en) 2001-04-05 2003-06-05 Jan Nilsson Peptide-based immunization therapy for treatment of atherosclerosis and development of peptide-based assay for determination of immune responses against oxidized low density lipoprotein
SE0103754L (sv) * 2001-04-05 2002-10-06 Forskarpatent I Syd Ab Peptider från apolipoprotein B, användning därav immunisering, diagnosmetod eller terapeutisk behandling av ischemiska kardiovaskulära sjukdomar, samt farmaceutisk komposition och vaccin innehållande sådan peptid
US20030103995A1 (en) 2001-06-04 2003-06-05 Hamblin Michael R. Detection and therapy of vulnerable plaque with photodynamic compounds
US8119590B2 (en) 2001-09-28 2012-02-21 Cedars-Sinai Medical Center Prevention and treatment of restenosis by local administration of drug
JP2003279571A (ja) * 2002-03-20 2003-10-02 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 炎症性疾患検出方法、検出薬、およびその予防治療薬探索方法
SE0302312D0 (sv) 2002-10-04 2003-08-27 Forskarpatent I Syd Ab Peptide-based passive immunization therapy for treatment of atherosclerosis
WO2004030607A2 (en) * 2002-10-04 2004-04-15 Forskarpatent I Syd Ab Peptide-based passive immunization therapy for treatment of atherosclerosis
SE0202959D0 (sv) * 2002-10-04 2002-10-04 Forskarpatent I Syd Ab Ideon Peptide-Base passive immunization therapy for treatment of atherosclerosis
EP1732383A4 (en) 2004-04-06 2007-05-02 Cedars Sinai Medical Center PREVENTION AND TREATMENT OF VASCULAR DISEASES WITH VIRUS VECTORS ASSOCIATED WITH RECOMBINANT ADENOVIRUS CODING APOLIPOPROTEIN A-I AND APOLIPOPROTEIN A-I MILANO
CA2776927C (en) * 2004-04-15 2014-08-12 Athera Biotechnologies Ab Phosphorylcholine conjugates and corresponding antibodies
WO2006102395A2 (en) * 2005-03-22 2006-09-28 Medstar Health Inc Delivery systems and methods for diagnosing and treating cardiovascular diseases
WO2011098407A1 (en) * 2010-02-12 2011-08-18 Cemm Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh Microspheres
EP2563816B1 (en) * 2010-04-27 2014-11-12 National Research Council of Canada Anti-icam-1 single domain antibody and uses thereof
JP2013544243A (ja) 2010-11-12 2013-12-12 シーダース シナイ メディカル センター 動脈瘤の治療及び／又は予防のための免疫調節方法及びシステム
AU2011336997A1 (en) 2010-11-12 2013-05-30 Cedars-Sinai Medical Center Immunomodulatory methods and systems for treatment and/or prevention of hypertension
JP6277126B2 (ja) 2011-08-09 2018-02-07 アセラ・バイオテクノロジーズ・アーベー ホスホリルコリン（ｐｃ）および／またはｐｃコンジュゲートに結合する抗体
SG2014009344A (en) 2011-08-09 2014-07-30 Athera Biotechnologies Ab New antibodies against phosphorylcholine

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998021581A1 (en) * 1996-11-08 1998-05-22 The Regents Of The University Of California Methods and reagents for non-invasive imaging of atherosclerotic plaque
WO1999008109A2 (en) * 1997-08-07 1999-02-18 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes on lipoprotein and methods for their use in detecting, monitoring and inhibiting the growth of atheroma

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2001259730A1 (en) * 2000-05-12 2001-11-26 The Regents Of The University Of California Standardized oxidized ldl assay

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998021581A1 (en) * 1996-11-08 1998-05-22 The Regents Of The University Of California Methods and reagents for non-invasive imaging of atherosclerotic plaque
WO1999008109A2 (en) * 1997-08-07 1999-02-18 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes on lipoprotein and methods for their use in detecting, monitoring and inhibiting the growth of atheroma

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