JP2003507339A - ＰＥＧ−ＩＦＮ−αと共同させたミコフェノラートモフェチル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 肝臓病患者を処置するための薬の製造のための、処置に有効な量のミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグと共同させた処置に有効な量のＩＦＮ−α又はＰＥＧ−ＩＦＮ−αの使用。両成分を、処置終了後２４週間で前記患者の末梢血液中に存在するＨＣＶ−ＲＮＡの量を１００コピー／ml未満に減らすのに少なくとも充分な期間にわたって投与する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 本発明は、（ｉ）インターフェロンα又はＰＥＧ化インターフェロンα及び（
ii）ミコフェノール酸の薬学的許容しうる塩又はプロドラッグを投与することに
よって肝臓病、特にＣ型肝炎感染症を処置する分野に関する。

【０００２】 発明の背景 Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、肝硬変、肝不全又は肝臓ガンにつながるおそ
れのある、肝臓を損傷する感染症である。現在、このウイルスに感染している人
が全世界で１億７０００万〜２億人いると推定される。

【０００３】 インターフェロン（ＩＦＮ）は、抗ウイルス活性、免疫調節活性及び抗腫瘍活
性のような特徴的な生物学的効果を有する自然に産生する小さなタンパク質及び
糖タンパク質の種族である。これらは、いくつかの疾病、特にウイルス感染に反
応して大部分の動物有核細胞によって産生、分泌される。

【０００４】 インターフェロン系は、より抗ウイルス性の保護機構よりも広い意義を有する
。ＩＦＮは、ウイルス性、悪性、血管由来性、アレルギー性、炎症性及び線維症
性の起源の多くの異なる疾病で見られている（A. Billiau (1984), Elsevier Sc
iences Publisher B. V., vol. 1, 25-28）。

【０００５】 ヒトＩＦＮの四つの異なるクラスがすでに記載されている（Peska et al. (19
87), Ann. Rev. Biochem, 56, 727-777 and Emanuel and Peska (1993), J. Bio
l. Chem., 268, 12565-12569）。天然起源からの精製ＩＦＮ及び組み換えＤＮＡ
技術が多くの出版物の主題である。組み換えＩＦＮの調製は、たとえばNature 2
95, (1982), 503-508、Nature 284, (1980), 320-326、Nature 290, (1981), 20-
26、Nucleic Acids Res. 8 (1980), 4057-4074ならびに欧州特許第３２１３４号
、第４３９８０号及び第２１１１４８号から公知である。

【０００６】 ＩＦＮの種族のうち、ＩＦＮ−αが、刺激を受けた末梢血液白血球（Peska et
al. loc. cit.、Have et al., (1975), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72, 2185-
2187、Cavalieri et al., (1977), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 3287-3291
）ならびにリンパ芽球及び骨髄芽球セルライン（Familletti et al., (1981), A
ntimicrob. Agents. Chemother., 20, 5-9）によって産生されるＩＦＮの主要な
クラスを構成する。ＩＦＮ−αは、細胞連絡及び免疫学的制御に影響する、成長
及び分化の重要な調節体として明らかになった。ＩＦＮ−αは、慢性Ｃ型肝炎の
ような慢性肝炎の処置にしばしば使用される。

【０００７】 実際、ＩＦＮは、今なお、慢性ＨＣＶ感染症（ＣＨＣ）に認められた唯一のモ
ノセラピーである。処置の目標は、処置終了後６ヶ月の時点で持続性のウイルス
学的反応（すなわち、末梢血液中でＨＣＶ−ＲＮＡが検出不可能（＜１００コピ
ー／ml））を達成することである。しかし、ＣＨＣの処置におけるＩＦＮの有効
性は不満足である。ＩＦＮ−αモノセラピーは、全ＣＨＣ人口の５〜２０％でし
か持続性の反応をもたらさない（Fried et al., (1995), “Therapy of hepatit
is C”, Semin. Liver Dis., 15 (1), 82-91）。さらに、ＩＦＮは通常、処置の
開始時にインフルエンザ様の症候を引き起こす。

【０００８】 ＩＦＮは、とりわけ体循環から急速に消去されるため、最大臨床効力を達成す
ることはないと考えられている。ＩＦＮαに関して、ポリエチレングリコール（
ＰＥＧ）との結合が浄化率を低減させることがわかった。さらには最近、第二相
の研究で、ＰＥＧ ＩＦＮ−α２Ａ結合体が、肝硬変を伴わないＣＨＣの３６％
において、ウイルスを検出不可能レベルまで持続的に減少させることがわかった
（Shiffman M, Pockros PJ, Reddy RK et al., “A controlled, randomized, m
ulticenter, ascending dose phase II trial of pegylated interferon alfa-2
a (PEG) vs. standard interferon alfa-2a (IFN) for treatment of chronic h
epatitis C”, Gastroneterology 1999; 116 (pt 2): 1275. Abstract LO148）
。その後、肝硬変を伴うＣＨＣ患者における第三相の研究が２９％の持続性ウイ
ルス学的反応を実証した（Heathcote J, Shiffman ML, Cooksley G, et al., “
Multinational evaluation of the efficacy and safety of once weekly PEG i
nterferon alfa-2a (PEG-IFN) in patients with chronic hepatitis C (CHC) w
ith compensated cirrhosis.” Hepatology 1999; 30 (suppl): 316A）。

【０００９】 ミコフェノール酸（ＭＰＡ）は、グアニンヌクレオチドの新生合成経路におけ
る主要酵素であるイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰ−ＤＨ）の非競合
的かつ可逆性の阻害によってＢ及びＴリンパ球の増殖を阻害する活性薬剤である
。ＭＰＡのモルホリノエチルエステルプロドラッグであるミコフェノラートモフ
ェチルが、特に肝移植患者における難治性拒絶反応の処置に有効である免疫抑制
剤として実証されている。これは、モノセラピーとして、又はシクロスポリン及
びコルチコステロイドとの組み合わせで使用されてきた（J. Neyts and E. de C
lercq, (1998), Antiviral Research 40, 53-56; Z. J. Gong et al., “The In
fluences of immunosuppressive agents on HBV replication in vitro” and K
. P. Platz et al., (1998), Elsevier Science Inc., 2232-2233）。

【００１０】 ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグとの共同における
ＩＦＮ−αは、肝臓病、特に慢性Ｃ型ウイルス肝炎の処置で重要であり得る。

【００１１】 発明の概要 本発明は、肝臓病患者を処置するための医薬の製造のための、ミコフェノール
酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグと共同させたＩＦＮ−αの使用を提
供する。本発明はまた、肝臓病の処置で同時、部分的に同時、別々又は順次に使
用するための複合製剤としての、ＩＦＮ−α及びミコフェノール酸の薬学的に許
容しうる塩又はプロドラッグを含む医薬を目的とする。最後に、本発明は、肝臓
病患者を処置するための、ＭＰＡ又はそのプロドラッグの１種、たとえばミコフ
ェノラートモフェチルと共同させたＩＦＮ−αを前記患者に投与することを含む
方法に関する。

【００１２】 本発明の組み合わせ処置を実施するためのＩＦＮ−αの量は、週３回の投与で
３，０００，０００〜６,０００，０００国際単位（IU）である。本発明の組み
合わせ処置を実施するのに好ましい量は、週３回の投与で３，０００，０００IU
である。本発明の組み合わせ処置を実施するためのＰＥＧ ＩＦＮ−αの用量は
、週１回の投与で４０〜２７０μgである。好ましい量は、週１回の投与で１８
０μgである。本発明を実施するためのＭＰＡ又はそのプロドラッグもしくは塩
の１種（たとえばＭＭＦ）の用量は、１日当り２５０〜２０００mg、好ましくは
５００〜１０００mgである。この１日用量は、１日２〜４回に分けて投与するこ
ともできる。

【００１３】 換算に関して、ＩＦＮ−α１mgは２．７×１０⁸IUに等しい。したがって、Ｉ
ＦＮ−α３，０００，０００IUはＩＦＮ−α１１．１μgに等しい。

【００１４】 特に、本発明は、ＨＣＶ感染症患者を処置してウイルス感染症の重症度を軽減
するための、ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグと共同
させたＩＦＮ−αの使用に関する。使用は、活性成分としてＭＰＡのプロドラッ
グ又は薬学的に許容しうる塩をウイルス感染症の重症度を軽減するための処置に
有効な量で含む医薬組成物からなる第一の成分と、活性成分としてＩＦＮ−α又
はＰＥＧ化ＩＦＮ−α結合体をウイルス感染症の重症度を軽減するための処置に
有効な量で含む注射溶液からなる第二の成分とを患者に随伴的に投与することを
含む。両成分は、少なくとも患者の末梢血液中に存在するＨＣＶ−ＲＮＡの量を
１００コピー／ml未満に減らすのに十分な期間にわたって投与される。

【００１５】 特定の態様で、本発明は、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者を処置するための
ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグと共同させたＩＦＮ
−αの使用であって、 （ｉ）式

【００１６】

【化１】

【００１７】 の薬学的に許容しうる塩又は式

【００１８】

【化２】

【００１９】 （式中、Ｙは、

【００２０】

【化３】

【００２１】 であり、Ｚは、水素又は−（ＣＯ）Ｒであり、Ｒは、低級アルキル又はアリール
である） の化合物を活性成分として含む医薬組成物からなる第一の成分（第一の成分の充
分な有効量は、毎日、１日当り約２５０mg〜約２０００mgの量で投与される）と
、 （ii）インターフェロンα又はＰＥＧ化インターフェロンα結合体を活性成分
として含む注射溶液からなる第二の成分（第二の成分の活性成分は、週３回、３
，０００，０００〜６，０００，０００IUの量で投与される）と を、約２４週〜約７２週の期間にわたって随伴的に患者に投与することを含む使
用に関する。

【００２２】 本発明の二成分の投与は、結果として、たとえば投与終了後２４週間で、末梢
血液中に存在するＨＣＶ−ＲＮＡの量を１００コピー／ml未満に減らす。

【００２３】 もう一つ態様で、本発明はキットに関する。キットは、第一の成分及び第二の
成分を含む。第一の成分は活性成分の１個以上の経口単位剤形を含み、各単位は
活性成分を約２５０mg〜約２０００mgの量で含み、活性成分はＭＰＡの薬学的に
許容しうる塩又はプロドラッグである。第二の成分はバイアル又は一連のバイア
ルを含み、各バイアルは単一の注射可能な溶液用量又は複数の注射可能な溶液用
量を含み、各用量はインターフェロンα又はＰＥＧ化インターフェロンα約４０
μg〜約２７０μgを活性成分として含む。

【００２４】 ある特定の態様で、本発明は、第一の成分及び第二の成分を含むキットに関す
る。第一の成分は活性成分の１個以上の経口単位剤形を含み、各単位は活性成分
を約２５０mg〜約２０００mg含み、活性成分は、式

【００２５】

【化４】

【００２６】 （式中、Ｙは、

【００２７】

【化５】

【００２８】 であり、Ｚは、水素である） の化合物である。第二の成分はバイアル又は一連のバイアルを含み、各バイアル
は単一の注射可能な溶液用量又は複数の注射可能な溶液用量を含み、各用量はＰ
ＥＧ化インターフェロンα結合体約４０μg〜約２７０μgを活性成分として含む
。

【００２９】 発明の詳細な説明 ＭＰＡは、式

【００３０】

【化６】

【００３１】 の公知の化合物である。

【００３２】 本発明の第一の成分は、活性成分としてＭＰＡのプロドラッグ又は薬学的に許
容しうる塩をウイルス感染症の重症度を軽減するための処置に有効な量で含む医
薬組成物からなる。

【００３３】 本明細書で使用する「ＭＰＡの薬学的に許容しうる塩」とは、ＭＰＡの生物学
的有効性及び性質を保持し、適当な非毒性の有機もしくは無機酸又は有機もしく
は無機塩基から形成される慣用の塩又は塩基付加塩である。好ましいものは、た
とえばアルカリ金属のカチオン性塩、特にナトリウム塩である。ナトリウムミコ
フェノラート塩がたとえばＷＯ９７／３８６８９で公知である。

【００３４】 本明細書で使用する「ＭＰＡのプロドラッグ」とは、生理学的条件の下又はソ
ルボリシスによってＭＰＡに転換される化合物をいう。ＭＰＡのプロドラッグは
、対象者に投与されたとき不活性であってもよいが、インビボでＭＰＡに転換さ
れる。

【００３５】 ＭＰＡのプロドラッグとして好ましいものは、式

【００３６】

【化７】

【００３７】 （式中、Ｙは、

【００３８】

【化８】

【００３９】 であり、Ｚは、水素又は−（ＣＯ）Ｒであり、Ｒは、低級アルキル又はアリール
である） の化合物である。

【００４０】 これらの化合物は、引用例として本明細書に取り込む米国特許第４，７５３，
９３５号から公知である。もっとも好ましいものは、化合物ＭＭＦ（Ｚは水素で
ある）である。

【００４１】 第二の成分は、活性成分としてＩＦＮ−α又はＰＥＧ化ＩＦＮ−α結合体をウ
イルス感染症の重症度を軽減するための処置に有効な量で含む注射溶液からなる
。

【００４２】 本明細書で使用する「ＩＦＮ−α」は、天然物質（たとえば白血球、線維芽細
胞、リンパ球）又は天然物質由来の物質（たとえばセルライン）又は組み換えＤ
ＮＡ技術によって調製されたものに由来するＩＦＮ−αを含む。ＩＦＮ−αのク
ローニング及び特にE. coliにおけるその直接発現の詳細が多くの出版物の主題
になっている。組み換えＩＦＮ−αの調製は、たとえばGoeddel et al. (1980)
Nature 284, 316-320及び(1980), Nature 290, 20-26ならびに欧州特許第３２１
３４号、第４３９８０号及び第２１１１４８号から公知である。多くのタイプの
ＩＦＮ−α、たとえばＩＦＮ−αＩ、ＩＦＮ−α２ならびにさらにはそのサブタ
イプ、たとえばＩＦＮ−α２Ａ、ＩＦＮ−α２Ｂ、ＩＦＮ−α２Ｃ及びＩＦＮ−
αII（ＩＦＮ−αII又はｗ−ＩＦＮとも呼ぶ）がある。本発明では、ＩＦＮ−α
２Ａの使用が好ましい。ＩＦＮ−α２Ａの製造は、欧州特許第４３９８０号及び
第２１１１４８号に記載されている。

【００４３】 本発明で使用されるＩＦＮ−αは、ポリマー、たとえばポリアルキレングリコ
ール（置換又は非置換）、たとえばポリエチレングリコールと結合してＰＥＧ−
ＩＦＮ−αを形成することができる。結合は、当該技術で公知の種々の結合体、
特に欧州特許出願第０５１０３５６及び第５９３８６８号公報ならびに欧州特許
第９７１０８２６１．５号に開示されている結合体によって達成することができ
る。好ましくはポリエチレングリコールであるポリマーの分子量は、３００〜３
００，０００ダルトンの範囲であることができ、１個以上、好ましくは１〜３個
のポリマーがＩＦＮ−αに結合することができる。

【００４４】 もっとも好ましくは、試薬は、たとえばリジンの第一級アミノ基又はＩＦＮ−
αのＮ末端に結合する。試薬はまた、たとえばセリンのヒドロキシルに結合する
ができる。１個以上、好ましくは１〜３個のＰＥＧがＩＦＮ−αに結合すること
ができる。

【００４５】 もっとも好ましい試薬は、式

【００４６】

【化９】

【００４７】 （式中、全部で２個のモノメトキシＰＥＧ（ｍ−ＰＥＧ）鎖が、リジンに対し、
カルバメート（ウレタン）結合により、αアミノ基及びεアミノ基に１個ずつ結
合し、リジンカルボキシル基がスクシンイミジルエステルに活性化されている）
の試薬である。この試薬は、従来の手段により、Ｒが低級アルキルであり、所望
のｎを有する試薬に適用しうる公知の手法（Monfardini et al., “A branched
monomethoxypoly(ethylene glycol) for protein modification”, Bioconjugat
e Chem. 6:62, 1995）にしたがって得ることができる。この試薬は、Shearwater
Polymers, Inc.（アラバマ州Huntsville）から得ることができる。ＰＥＧの好
ましい平均分子量は約２０，０００ダルトンであり、ＰＥＧ２−ＮＨＳで約４０
，０００ダルトンの総ＰＥＧ質量を与える（他の分子量は、上記式の試薬の場合
、ＰＥＧ−アルコール出発原料のｎを従来の手段によって変化させることによっ
て得ることができる）。

【００４８】 好ましいＰＥＧ化ＩＦＮ−α結合体は、式

【００４９】

【化１０】

【００５０】 （式中、Ｒ及びＲ′は、独立して、低級アルキルであり、Ｘは、ＮＨ又はＯであ
り、ｎ及びｎ′は、６００〜１５００の合計を有する整数であり、前記結合体中
のポリエチレングリコールの平均分子量は約２６，０００ダルトン〜約６６，０
００ダルトンである） を有する。

【００５１】 もっとも好ましいものは、式

【００５２】

【化１１】

【００５３】 （式中、ｎ及びｎ′は、独立して、４２０又は５２０である） のＰＥＧ化インターフェロンαである。このＰＥＧ化ＩＦＮ−α結合体は、たと
えば、引用例として本明細書に取り込む欧州特許出願ＥＰ８０９９９６で公知で
ある。

【００５４】 本発明を実施するには、ＩＦＮ−α及びミコフェノール酸の薬学的に許容しう
る塩又はプロドラッグを肝臓病患者に投与する。

【００５５】 特に、本発明で記載される、ＩＦＮ−αと、ミコフェノール酸の薬学的に許容
しうる塩又はプロドラッグとの共同は、ウイルス感染症、特に慢性Ｃ型肝炎を処
置するのに効果的である。

【００５６】 本発明によると、ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグ
と共同させたＩＦＮ−αの投与は、各成分を別々に投与することによって得られ
る慢性Ｃ型肝炎の処置を相乗的に増強する。この相乗効果が持続性の反応をもた
らす。「持続性の反応」とは、末梢血液中のＨＣＶ−ＲＮＡのコピー数として記
される末梢血液中のＨＣＶの量が、二成分の投与終了後２４週間で計測した場合
に１００コピー／ml未満になることをいう。

【００５７】 ＨＣＶ−ＲＮＡ／mlのコピー数として記される末梢血液中のＨＣＶの量は、公
知の方法によって測定される。量を測定するためのインビトロ診断キットは市販
されており、たとえば、Amplicor（登録商標）ＨＣＶモニターテスト（１０００
コピー／mlまで感知する定量試験）、Amplicor（登録商標）Ｃ型肝炎ウイルス（
ＨＣＶ）テスト（１００コピー／mlまで感知する定性試験）、Cobas Amplicor（
商標）Ｃ型肝炎ウイルステスト（１００コピー／mlまで感知する自動化定性試験
）及びCobas Amplicor（商標）ＨＣＶモニターテスト（１０００コピー／mlまで
感知する自動化定量試験）である（各テストは、Roche Diagnostic Systems, In
c.、ニュージャージー州Branchburgから得ることができる）。量を測定するのに
好ましい方法は例で述べる。

【００５８】 ＩＦＮ−α又はＰＥＧ化ＩＦＮ−αの注射溶液は、非経口的に、好ましくは皮
下（ｓｃ）注射又は筋内（ｉｍ）注射によって患者に投与する。好ましくは、Ｍ
ＰＡの薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグは、経口単位剤形、より好ましく
はカプセル、丸剤、サシェ又は錠剤の形態で、ＩＦＮ−α又はＰＥＧ化ＩＦＮ−
αの非経口投与と共同させて患者に投与する。

【００５９】 当然、利用可能であるならば、両方の薬の他のタイプの投与、たとえば点鼻ス
プレー、経皮、坐剤、徐放剤形などによる投与が考えられる。活性成分を破壊す
ることなく適量が送達される限り、あらゆる投与形態が有効である。

【００６０】 本発明の成分は、Ｃ型肝炎感染症の重症度を軽減するのに効果的である量及び
期間で投与される。

【００６１】 一般に、第一の成分の投与と第二の成分の投与とは、約２４〜約７２週間、好
ましくは約２４〜約４８週間、もっとも好ましくは約４８週間、随伴的に実施す
る。

【００６２】 一般に、注射溶液の活性成分（ＩＦＮ−α又はＰＥＧ化ＩＦＮ−α）の量は、
週に約１回の投与で、約０．５μg/kg体重〜約３．６μg/kg体重である。一般に
、ＭＰＡの薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグの量は、毎日の投与で、約３
mg/kg〜約４０mg/kg、好ましくは約５mg/kg〜約３６mg/kg、もっとも好ましくは
約１２mg/kg〜約２５mg/kgである。用量のレベルは、患者の必要性及び処置に対
する患者の反応に依存しながら医師が変更して、本明細書で記したものよりも高
く又は低くすることもある。

【００６３】 量は、患者の要件にしたがって医師によって決定される服用スケジュールにし
たがって投与することができる。たとえば、二成分それぞれの量は、一回で投与
することもできるし、分けて投与することもできる。

【００６４】 ＩＦＮ−α又はＰＥＧ−αの処置に有効な量及びＭＰＡ又はそのプロドラッグ
もしくは塩の１種（たとえばＭＭＦ）の処置に有効な量は、同時、部分的に同時
、別々又は順次に投与することができる。たとえば、ＭＰＡ又はそのプロドラッ
グもしくは塩の１種（たとえばＭＭＦ）の処置に有効な量は、ＩＦＮ−α又はＰ
ＥＧ ＩＦＮ−αの処置に有効な量と共同させて患者に投与することができる。
すなわち、ＩＦＮ−α又はＰＥＧ ＩＦＮ−α量は、患者がＭＰＡ又はそのプロ
ドラッグもしくは塩の１種（たとえばＭＭＦ）の投与量を受ける同じ期間に投与
することもできるし、異なる期間に投与することもできる。

【００６５】 本発明によると、Ｃ型肝炎を処置するのに有用なキットが提供される。キット
は、第一の成分及び第二の成分を含む。第一の成分は活性成分の１個以上の経口
単位剤形を含み、各単位は活性成分を約２５０mg〜約２０００mg（好ましくは５
００〜１０００mg）含み、活性成分はＭＰＡの薬学的に許容しうる塩又はプロド
ラッグである。第二の成分はバイアル又は一連のバイアルを含み、各バイアルは
単一の注射可能な溶液用量又は複数の注射可能な溶液用量を含み、各用量はイン
ターフェロン又はＰＥＧ化インターフェロンα結合体約４０μg〜約２７０μg（
好ましくは１８０μg）を活性成分として含む。

【００６６】 好ましくは、第一の成分は、患者が約１〜約４週間、活性成分１日当り約２グ
ラムを投与されるのに充分な数の単位を含み、第二の成分は、患者が約１〜約４
週間、週当りインターフェロンα又はＰＥＧ化インターフェロンα結合体約１８
０μgを投与されるのに充分な数の用量を含む。

【００６７】 好ましくは、第一の成分の活性成分は、式

【００６８】

【化１２】

【００６９】 （式中、Ｙは、

【００７０】

【化１３】

【００７１】 であり、Ｚは、水素又は−（ＣＯ）Ｒであり、Ｒは、低級アルキル又はアリール
である） を有するミコフェノラートモフェチルのプロドラッグである。

【００７２】 もっとも好ましくは、第一の成分の活性成分は、式

【００７３】

【化１４】

【００７４】 （式中、Ｙは、

【００７５】

【化１５】

【００７６】 であり、Ｚは、水素である） の化合物である。

【００７７】 好ましくは、各注射可能な溶液用量の活性成分は、ＰＥＧ化インターフェロン
α２ａ結合体、より好ましくは、式

【００７８】

【化１６】

【００７９】 （式中、Ｒ及びＲ′は、独立して、低級アルキルであり、Ｘは、ＮＨ又はＯであ
り、ｎ及びｎ′は、６００〜１５００の合計を有する整数であり、前記結合体中
のポリエチレングリコールの平均分子量は、約２６，０００〜約６６，０００ダ
ルトンである） のＰＥＧ化インターフェロンα２ａ結合体である。

【００８０】 もっとも好ましくは、各注射可能な溶液用量の活性成分は、式

【００８１】

【化１７】

【００８２】 （式中、ｎ及びｎ′は、独立して、４２０又は５２０である） のＰＥＧ化インターフェロンα２ａ結合体である。

【００８３】 本発明は、本発明を限定せずに例示する、以下の例に示すコントロールされた
臨床試験によって例証することができる。

【００８４】 例 患者 患者６０人を処置した。全患者は、ＨＣＶの血清学的証拠を示し、＞２０００
コピー／mlで定量しうる血清ＨＣＶ−ＲＮＡを有し、試験薬服用開始前３５日間
に記録された血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）活性の増強を示
し、試験薬服用開始前２４ヶ月間に得られた生検で慢性ＨＣＶ感染症と合致する
慢性肝臓病を有していた。

【００８５】 患者は、他の形態の肝臓病（肝硬変を含む）、貧血、肝細胞ガン、以前からの
重度のうつ症もしくは他の精神病、心臓病、腎臓病、発作障害又は重度の網膜症
を有しないものとした。

【００８６】 薬処方 処方１ 錠剤処方

【００８７】

【表１】

【００８８】 処方２

【００８９】

【表２】

【００９０】 処置 処方１を、１日２回で４８週間、各患者に経口投与した。それに伴い、処方２
を、週１回で４８週間、各患者に皮下注射として投与した。

【００９１】 一次効力パラメータ 一次効力パラメータとは、持続性のウイルス学的反応速度である（すなわち、
２４週間の非処置追跡期間の終了時に検出不可能な（＜１００コピー／ml）ＨＣ
Ｖ−ＲＮＡ）。

【００９２】 ＨＣＶ−ＲＮＡを検出するために、まず、ＨＣＶ−ＲＮＡを、カオトロピー剤
によるウイルス粒子の溶解により、血清又は血漿から単離させ、次いで、アルコ
ールでＲＮＡを沈殿させた。第二の標的配列（標準）を溶解試薬とともに導入し
た。好ましくは、標準は、ＨＣＶ標的配列と同一のプライマ結合領域を有する非
感染性３５１ヌクレオチドインビトロ転写ＲＮＡ分子であった。好ましくは、標
準は、ＫＹ７８及びＫＹ８０プライマ結合領域を含み、ＨＣＶ標的ＲＮＡと同じ
長さ（２４４塩基）及びベース組成の生成物を産生するものであった。標準アン
プリコンのプローブ結合領域を増幅して、標準アンプリコンをＨＣＶ標的アンプ
リコンから区別した。標準を標本調製工程、逆転写工程、増幅工程及び検出工程
に通した。標準は、阻害の効果を補正し、増幅過程を制御して、ＨＣＶ−ＲＮＡ
の正確な定量を可能にした。

【００９３】 ＨＣＶの標的ＲＮＡ配列の選択は、種々のＨＣＶ遺伝子型の間で最大保存を示
すＨＣＶゲノム内の領域の特定に依存した。ＨＣＶゲノムの５′非翻訳領域が、
公知のＨＣＶ遺伝子型の中でＲＮＡ配列の最大保存を有することが示された。好
ましくは、プライマＫＹ７８及びＫＹ８０を使用して、ＨＣＶゲノムの高度に保
存された５′非翻訳領域のヌクレオチド２４４個の配列を定義した。Young, K.,
Resnick, and Myers, T., 1992. Detection of Hepatitis C Virus RNA by com
bined reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay, Journal of
Clinical Microbiology 31:882-866）。捕捉プローブ配列及びプライマー配列を
、５′非翻訳領域内のもっとも保存されたドメインに位置づけた（Bukh, J., Pu
rcell, R. H., and Miller R. H., 1992. Sequence analysis of the 5' noncod
ing region of hepatitis C virus, Proceedings of the National Academy of
Sciences, USA 89:4942-4946）。

【００９４】 熱安定性の組み換え酵素Thermus thermophilus ＤＮＡポリメラーゼ（ｒＴｔ
ｈ ｐｏｌ）を用いて逆転写及び増幅反応を実施した。マンガンの存在で、適当
な緩衝条件の下、ｒＴｔｈ ｐｏｌは、逆転写酵素活性及びＤＮＡポリメラーゼ
活性を示した。これは、逆転写及びＰＣＲ増幅を同じ反応混合物中で発生させた
。

【００９５】 処理した標本を、逆転写及びＰＣＲ増幅の両方が起こる反応管の中で増幅混合
物に加えた。下流側又はアンチセンスプライマ（ＫＹ７８）を５′末端でビオチ
ニル化した。上流側又はセンスプライマ（ＫＹ８０）はビオチニル化しなかった
。反応混合物を加熱して、下流側プライマをＨＣＶ標的ＲＮＡ及びＨＣＶ標準Ｒ
ＮＡに特異的にアニーリングさせた。過剰なデオキシヌクレオシド三リン酸（ｄ
ＮＴＰ）、たとえばデオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシシチジ
ン及びデオキシウリジン（チミジンの代わり）三リン酸の存在で、ｒＴｔｈ ｐ
ｏｌが、アニーリングしたプライマを延長させて、ＲＮＡ標的に相補的なＤＮＡ
鎖（ｃＤＮＡ）を形成した。

【００９６】 ＨＣＶ標的ＤＮＡ及びＨＣＶ標準ＲＮＡの逆転写ののち、反応混合物を加熱し
てＲＮＡ：ｃＤＮＡハイブリッドを変性させ、プライマ標的配列を露出させた。
混合物が冷めるにつれ、上流側プライマ（ＫＹ８０）がｃＤＮＡ鎖に特異的にア
ニーリングし、ｒＴｔｈ ｐｏｌがプライマを延長させ、第二のＤＮＡ鎖が合成
された。これがＰＣＲの最初のサイクルを完了させ、ＨＣＶ及び標準ＲＮＡの標
的領域の二本鎖ＤＮＡコピーを生じさせた。反応混合物を再び加熱して、得られ
た二本鎖ＤＮＡを分離させ、プライマ標的配列を露出させた。混合物が冷めるに
つれ、プライマＫＹ７８及びＫＹ８０は標的ＤＮＡにアニーリングした。ＲＴｔ
ｈ ｐｏｌは、過剰なｄＮＴＰの存在で、アニーリングしたプライマを標的鋳型
に沿って延長させて、アンプリコンと呼ばれる２４４塩基対二本鎖ＤＮＡ分子を
生成した。この方法を指定のサイクル数だけ繰り返すと、各サイクルがアンプリ
コンＤＮＡの量を効果的に倍増した。増幅は、プライマ間のＨＣＶゲノムの領域
でのみ起こった。ＨＣＶゲノム全体が増幅されたわけではない。

【００９７】 ウラシル−Ｎ−グリコシラーゼＵＮＧ及びデオキシウリジン三リン酸（ｄＵＴ
Ｐ）の使用により、臨床標本からの標的核酸の選択的増幅を達成した。ウラシル
−Ｎ−グリコシラーゼＵＮＧは、デオキシウリジンを含むＤＮＡ鎖の崩壊を認識
し、触媒したが、チミジンを含むＤＮＡの崩壊は認識、触媒しなかった。デオキ
シウリジンは、自然に発生するＤＮＡ中には存在しないが、マスタミックス試薬
中のｄＮＴＰの一つとしてチミジン三リン酸に代わるデオキシウリジン三リン酸
の使用により、アンプリコン中に常に存在した。したがって、アンプリコンだけ
がデオキシウリジンを含有した。デオキシウリジンは、標的ＤＮＡの増幅の前に
、汚染性のアンプリコンをウラシル−Ｎ−グリコシラーゼＵＮＧによる崩壊を受
けやすくした。マスタミックス試薬に含まれるウラシル−Ｎ−グリコシラーゼＵ
ＮＧは、デオキシリボース鎖をＣ−１位置で開裂させることによってデオキシウ
リジン残基でデオキシウリジン含有ＤＮＡの開裂を触媒した。第一の熱循環工程
でマスタミックスのアルカリ性ｐＨで加熱されると、アンプリコンＤＮＡ鎖は、
デオキシウリジンの位置で破断し、それにより、ＤＮＡを増幅不可能にした。ウ
ラシル−Ｎ−グリコシラーゼＵＮＧは、５５℃を超える温度、すなわち、熱循環
工程を通じて不活性であり、したがって、標的アンプリコンを破壊しなかった。
増幅の後、残留する酵素を変性溶液の添加によって変性させ、それにより、標的
アンプリコンの破壊を防止した。ウラシル−Ｎ−グリコシラーゼＵＮＧは、ＰＣ
Ｒあたり少なくとも１０³コピーのデオキシウリジン含有ＨＣＶアンプリコンを
不活性化することが実証された。

【００９８】 ＰＣＲ増幅ののち、変性溶液の添加によってＨＣＶアンプリコン及び標準アン
プリコンを化学的に変性して一本鎖ＤＮＡを形成した。変性したアンプリコンの
アリコートを、ＨＣＶ特異的オリゴヌクレオチドプローブ（たとえばＫＹ１５０
）及び標準特異的オリゴヌクレオチドプローブ（たとえばＳＫ５３５）でコーテ
ィングしたマイクロウェルプレース（ＭＷＰ）の個々のウェルに添加した。ＨＣ
Ｖ及び標準アンプリコンを、ＭＷＰ結合オリゴヌクレオチドプローブへのハイブ
リダイゼーションにより、それぞれＨＣＶ及び標準ウェルに結合させた。大きな
ダイナミックレンジにわたって定量的結果を達成するため、変性アンプリコンの
連続希釈物をＭＷＰによって分析した。

【００９９】 ハイブリダイゼーション反応ののち、ＭＷＰを洗浄して非結合物質を除去し、
アビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体をＭＷＰの各ウェルに加えた。ア
ビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体は、ＭＷＰに結合した標的特異的オ
リゴヌクレオチドプローブ（ＨＣＶ又は標準）によって捕捉されたビオチン標識
アンプリコンに結合した。ＭＷＰを再び洗浄して非結合の結合体を除去し、過酸
化水素及び３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を含有する
基質溶液をウェルに加えた。過酸化水素の存在で、結合した西洋ワサビペルオキ
シダーゼがＴＭＢの酸化を触媒して、着色された複合体を形成した。弱酸の添加
によって反応を停止させ、自動化マイクロウェルプレートリーダを使用して４５
０nmで光学密度を計測した。

【０１００】 検定の直線範囲内で、ＭＷＰの各ウェルの光学密度（ＯＤ）は、ウェル中のＨ
ＣＶアンプリコン又は標準アンプリコンの量に比例していた。計算した全ＯＤは
、各逆転写／ＰＣＲ増幅反応中にそれぞれ存在するＨＣＶ ＲＮＡ又は標準ＲＮ
Ａの量に比例していた。各標本中のＨＣＶ ＲＮＡの量は、以下の等式を使用し
て、全標準ＯＤに対する全ＨＣＶ ＯＤの比率及び標準ＲＮＡ分子の入力数から
計算した。

【０１０１】

【数１】

【０１０２】 ただし、全ＨＣＶ ＯＤ＝ＨＣＶアンプリコンの場合で計算された全ＯＤ 全ＱＳ ＯＤ＝ＱＳアンプリコンの場合で計算された全ＯＤ 入力ＨＣＶ ＱＳコピー／ＰＣＲ＝各反応におけるＱＳのコピー数 ２００＝コピー／ＰＣＲをコピー／mlに換算するための係数

【０１０３】 結果 予想外にも、処置した患者の２０％超で、上記例の２種の処方の投与が、処置
終了後２４週間で末梢血液中に存在するＨＣＶ−ＲＮＡの量を１００コピー／ml
未満に減らすことが見いだされた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/14 Ａ６１Ｐ 43/00 １２１ 43/00 １２１ Ａ６１Ｋ 37/66 Ｇ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ， ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 パッパス，スティーブン・クリストファー アメリカ合衆国、ニュージャージー 07013、クリフトン、シー−４、バリー・ ロード 900 (72)発明者 ツァーム，フリーデリーケ ドイツ国、79104 フライブルク、シュタ ットシュトラーセ 18 Ｆターム(参考） 4C076 AA11 BB11 CC16 CC35 4C084 AA02 BA44 CA62 DA21 DA22 MA02 MA17 MA66 NA05 ZA751 ZB332 ZC751 4C086 AA01 AA02 BA17 MA02 MA04 MA07 MA17 MA52 NA05 NA14 ZA75 ZB33 ZC75

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 肝臓病患者を処置するための医薬の製造のための、処置に有
   効な量のミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグと共同させ
   た処置に有効な量のＩＦＮ−α又はＰＥＧ−ＩＦＮ−αの使用。
2. 【請求項２】 ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグ
   の充分な有効量が１日約２５０mg〜約２０００mgである、請求項１記載の使用。
3. 【請求項３】 ＩＦＮ−αの充分な有効量が週３回の投与で３，０００,０
   ００〜６，０００，０００国際単位である、請求項１記載の使用。
4. 【請求項４】 ＰＥＧ−ＩＦＮ−αの充分な有効量が週１回の投与で約４０
   〜２７０μgである、請求項１記載の使用。
5. 【請求項５】 ＩＦＮ−αがＩＦＮ−α２Ａである、請求項１〜４のいずれ
   かに記載の使用。
6. 【請求項６】 肝臓病がウイルス感染症である、請求項１〜５のいずれかに
   記載の使用。
7. 【請求項７】 ウイルス感染症が慢性Ｃ型肝炎である、請求項６記載の使用
   。
8. 【請求項８】 ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグ
   の充分な量を経口投与する、請求項１記載の使用。
9. 【請求項９】 ＩＦＮ−α又はＰＥＧ−ＩＦＮ−αの充分な量を非経口投与
   する、請求項１記載の使用。
10. 【請求項１０】 まず、ミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロ
    ドラッグの処置に有効な量の一部を投与し、次に、ミコフェノール酸の薬学的に
    許容しうる塩又はプロドラッグの処置に有効な量の残りとＩＦＮ−α又はＰＥＧ
    −ＩＦＮ−αの処置に有効な量とを組み合わせて投与する、請求項１〜９のいず
    れかに記載の使用。
11. 【請求項１１】 活性成分としてミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩
    又はプロドラッグをウイルス感染症の症状を軽減するための処置に有効な量で含
    む医薬組成物からなる第一の成分と、活性成分としてＩＦＮ−α又はＰＥＧ−Ｉ
    ＦＮ−αをウイルス感染症の症状を軽減するための処置に有効な量で含む注射溶
    液からなる第二の成分とを、所与の期間にわたり、患者に随伴的に投与すること
    を含み、前記成分を、少なくとも前記患者の末梢血液中に存在するＨＣＶ−ＲＮ
    Ａの量を１００コピー／ml未満に減らすのに十分な期間にわたって随伴的に投与
    する、請求項１〜９のいずれかに記載の使用。
12. 【請求項１２】 肝臓病の処置で同時、一部同時、別々又は順次に使用する
    ための複合製剤としての、ＩＦＮ−α又はＰＥＧ−ＩＦＮ−α及びミコフェノー
    ル酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグを含む医薬。
13. 【請求項１３】 ＩＦＮ−αがＩＦＮ−α２Ａである、請求項１２記載の医
    薬。
14. 【請求項１４】 ＰＥＧ−ＩＦＮ−αがＰＥＧ−ＩＦＮ−α２Ａである、請
    求項１２記載の医薬。
15. 【請求項１５】 肝臓病がウイルス感染症である、請求項１０〜１４のいず
    れかに記載の医薬。
16. 【請求項１６】 ウイルス感染症が慢性Ｃ型肝炎である、請求項１４記載の
    医薬。
17. 【請求項１７】 （ａ）活性成分の１個以上の経口単位剤形を含み、各単位
    が活性成分を約２５０mg〜約２０００mg含み、活性成分がミコフェノール酸の薬
    学的許容しうる塩又はプロドラッグである第一の成分と、 （ｂ）バイアル又は一連のバイアルを含み、各バイアルが単一の注射可能な溶
    液用量又は複数の注射可能な溶液用量を含み、各用量が約３，０００，０００〜
    ６，０００，０００国際単位のＩＦＮ−α又は約４０μg〜約２７０μgのＰＥＧ
    −ＩＦＮ−αを活性成分として含有する第二の成分と を含むキット。
18. 【請求項１８】 第一の成分が、患者が１日当り約２gのミコフェノール酸
    の薬学的に許容しうる塩又はプロドラッグを約１〜約４週間、投与されるのに充
    分な数の単位を含み、第二の成分が、患者が１週当り約１８０μgのＩＦＮ−α
    又はＰＥＧ−ＩＦＮ−αを約１〜約４週間、投与されるのに充分な数の用量を含
    む、請求項１７記載のキット。
19. 【請求項１９】 各注射可能な溶液の活性成分がＰＥＧ−ＩＦＮ−α２ａで
    ある、請求項１７又は１８記載のキット。
20. 【請求項２０】 肝臓病に感染した患者を処置して病気の症状を軽減する方
    法であって、処置に有効な量のインターフェロンα又はＰＥＧ化インターフェロ
    ンαを処置に有効な量のミコフェノール酸の薬学的に許容しうる塩又はプロドラ
    ッグと共同させて前記患者に投与することを含む方法。