JP2003507050A - 乳癌のヒト内在性レトロウイルス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、乳癌ウイルス（ＭＴＶ）に関する。ＭＴＶは、マウス内で腫瘍性の乳疾病の原因となると公知のウイルスであるマウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）に非常に高度の相同性を所有するレトロウイルスの群を表す。ここで述べるように、ＭＴＶ'sがヒト、ネコ、及びアカゲザル内で同定された。本発明は、特にこれらＭＴＶ's由来の組換え核酸とポリペプチド、及びこれら生物分子を使用する方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） 本出願は1999年６月30日に出願された米国仮特許出願番号60/141,626の優先権
を得ており、この仮出願の全文は参照によって本明細書に明確に取り込まれる。 １．発明の分野 本発明は、発癌性障害、特に乳癌の検出、予後評価、及び治療のための組成物
及び方法に関する。 詳細には、本発明は、ヒト、ネコ、及び非ヒト霊長類のサブセット中に存在す
る新規に同定された内在性レトロウイルスに関連する障害を同定及び治療するの
に有用な組成物を提供する。

【０００２】 ２．本発明で提言される技術的課題 公知の感受性遺伝子の変異が、すべての乳癌の理由とはならない 乳癌（ＢＣ）は、女性の癌死亡の主な理由の１つである。ＢＣの誘発は、宿主
の遺伝的、ホルモンの、免疫学的及び生理的状態、並びに食生活及び化学薬品、
放射性又は感染性物質への曝露を含むいくつかの因子の相互作用に関わると考え
られる。現在、ＢＲＣＡ-１及びＢＲＣＡ-２を含むいくつかの遺伝子の変異が、
ＢＣの発生の非常に高いリスクをもたらし得ることは明らかである。しかし、公
知のＢＣ感受性遺伝子の欠陥は、ＢＣ、いわゆる家族性症例のたった約５％の理
由でしかない（Armstrongら,2000；Gaytherら,1998）。 他のタイプの癌におけると同様に、散発的に生じるＢＣにウイルスが病原学的
に関与する可能性は取り除かれていない。その結果、何らかのウイルスがＢＣの
発生に時折つながるとしたら、それを決定することが長い間要望されている。こ
のようなウイルスの同定は、おそらくＢＣ医学における次の分野：予防、診断、
予後の判定、及び治療に貴重な助けを与えるだろう。

【０００３】 ３．関連技術の説明 マウスにおける乳癌のレトロウイルス誘発 マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、Ｂ型レトロウイルスは、1930年代にジャク
ソン研究所でマウスの遺伝性癌の研究中に発見された（Bittner,1936）。遅発性
癌化レトロウイルスのプロトタイプのように、ＭＭＴＶはマウス内でＢＣを生じ
させることが決定的に示された。先行研究は、ＭＭＴＶが内在性プロウイルスと
して生殖系列内で、また乳汁を介して外因的に、両方で伝播されることを確証し
た。内在性要素として、ＭＭＴＶプロウイルスはゲノム中の他の配列と同様にメ
ンデル遺伝のパターンに従う（Cohenら,Cell,1979；Cohen及びVarmus,1979,1980
；Trainaら,1981；Traina-Dorge及びCohen,1983；Traina-Dorgeら,1985；Varmus
ら,1978）。ＭＭＴＶの水平伝播は、典型的には感染ダムの乳汁中に存在するＭ
ＭＴＶビリオンによるマウスの子の感染によって起こる。このように、授乳によ
ってマウスにＭＭＴＶを伝播できる。内在性ＭＭＴＶの３０以上の特異的プロウ
イルス組込み部位が同定されている。しかし、いずれの内在性ＭＭＴＶプロウイ
ルスも運ばない野生マウスもいる（Cohen及びVarmus,1979；Cohenら,1982）。こ
の結果は、多くの内在性ＭＭＴＶプロウイルスが比較的最近マウスゲノムに加わ
ったことを示唆している。最も有望な説明は、Mus属のいろいろな種及び亜種間
の進化的分割後の複数機会にＭＭＴＶが特定のマウス（他のマウスではなく）の
生殖系列に入ったということである。特定の内在性ＭＭＴＶはホルモンによって
活性化され、長い潜伏期間後に乳癌を誘発できる感染性ビリオンを形成すること
ができる。ほとんどの内在性ＭＭＴＶプロウイルスは不完全で、感染性ビリオン
をコードしない。

【０００４】 ＭＭＴＶ遺伝子と発癌性の細胞性遺伝子の役割 ＭＭＴＶ Ｏｒｆタンパク質は、スーパー抗原（ＳＡ）として機能しうる。胎
児性／初期発生の際に胸腺内で発現されると、それはＳＡ反応性のＴ細胞の完全
又は不完全な欠失を媒介できる。ＳＡ発現は、育児している子の腸関連リンパ系
組織内でＭＭＴＶのＢ細胞標的を活性化するために必要である。従って、ＳＡ応
答性クローンの完全な欠失はマウスに腸内ＭＭＴＶ感染に対する抵抗性を与え、
ひいてはＭＭＴＶ誘発型腫瘍の発生率を低くする。他方、リンパ系細胞の部分的
にのみ欠失された応答性クローンを有するマウスでは、ＳＡ活性化は標的の拡大
及びＭＭＴＶの伝播を刺激する。雌の感染動物が思春期に達すると、エストロゲ
ンホルモンがそのホルモン応答性要素（ＨＲＥ）を通じてＭＭＴＶロングターミ
ナルリピート（ＬＴＲ）を発現させる。これは、ＭＭＴＶの生産と構築及び乳房
及び卵巣を含む他のホルモン感受性組織へのウイルスの伝播を可能にする。ＭＭ
ＴＶ ＬＴＲｓをプロト癌遺伝子Int、Wnt及びFgfのような特定の細胞性遺伝子に
隣接して組込むと、これら遺伝子の発現を増大し、その結果ＢＣ及び他の癌にな
りうる。

【０００５】 ＭＭＴＶ間の分子遺伝相互作用、そのマウス宿主の免疫系、及びこのレトロウ
イルスによって悪性に形質転換された乳房や他のホルモン感受性細胞について広
範に研究されている。ＭＭＴＶは、挿入突然変異誘発によってマウスの乳腺癌の
成長を促進する（Varmusら,1978；Varmusら,1985）。ＭＭＴＶプロウイルスＬＴ
Ｒ要素は、Wnt、Fgf及びIntを含む種々の細胞性発癌遺伝子のステロイドホルモ
ン依存性トランス活性化を方向づけし、それによって腫瘍細胞のクローン拡大を
促進する（Shackleford及びVarmus,1987,Shacklefordら,1993；Jakobovitsら,19
86；Nusse,1991；Nusseら,1985）。生産的な持続性感染及びその複製サイクルの
完成のため、ＭＭＴＶはスーパー抗原を含み、かつ機能的な宿主免疫系と相互作
用しなければならない（Golovkinaら,1995；Luther及びAcha-Orbea,1996；Coffi
n,1992）。

【０００６】 ヒト乳癌ウイルスの検索 発癌遺伝子ＭＭＴＶの発見は、多くの研究者がヒトのＢＣに対するレトロウイ
ルス病因学を探求するのを促した（Sarkar,1980）。過去５０年にわたって収集
されたデータは、ＭＭＴＶのヒト相同体の存在を示唆している。1971年、Moore
と共同研究者らは、一般的集団の５％と比較してＢＣ患者由来のヒト乳汁試料の
60％が電子顕微鏡でＭＭＴＶと識別不能なＢ型粒子を含有していることを報告し
た（Mooreら,1971）。この研究者らは、インドの39％のParsi女性、すなわちＢ
Ｃの発生率が２倍多い近交系集団が彼女たちの乳汁中にＢ型粒子を有することを
も報告した（Dasら,1972；Moore,1971）。いくつかの研究によって、ＢＣ細胞は
、すべてのレトロウイルスに付随する酵素である逆転写酵素（ＲＴ）をも含有す
るが、正常組織由来の細胞は含有しないことが示された。正常組織由来でない細
胞を除き、多くの研究者は、ＭＭＴＶと反応性の抗体の存在について血清及び母
乳を調査した。これら研究のほとんどが、プレＡＩＤＳ段階で、献血中のＨＩＶ
抗体の検出に必要とされる抗レトロウイルス抗体を検出するための高感度かつ特
有な技術が出現する前に行われた。

【０００７】 ヒト乳癌組織、乳汁、患者の血清、及びＭＭＴＶのヒト相同体の存在を示唆す
る乳癌細胞系に関する多くの電子顕微鏡、生化学及び免疫学的研究にもかかわら
ず、このような物質が存在するという証拠は依然として排他的なままである（An
derssonら,1996；Ziegler,1997）。ほとんどの著者は、多くのヒト内在性レトロ
ウイルス（ＨＥＲＶｓ）の存在という理由からＭＭＴＶのヒト相同体の証拠を示
すことを主張する先行研究の重要性を退けた（Larssonら,1994；Liら,1996；Low
erら,1996；Meeseら,1996；Ono,1986；Patienceら,1996；Faffら,1992）。ヒト
ゲノムには約50,000のＨＥＲＶｓ又はＨＥＲＶ関連配列があり、そのいくつかが
ＭＭＴＶに対して60％までの相同性を有することがわかっている。このことにつ
いては、ＨＥＲＶ-Ｋ１０に対する当該血清反応性に注目することは重要であり
、この点で、ＭＭＴＶに最も親密に関連すると考えられるＨＥＲＶは、乳癌患者
の血清及び健康な個体の少数に存在するＭＭＴＶ反応性抗体の理由とはなりえな
い（Vogetsederら,1995）。さらに、我々は、これらＭＭＴＶ関連配列の存在が
ＭＭＴＶのヒト相同体が分子技法によって確証的に以前には示されなかったまさ
にその理由であると考える。これら関連するが異なる配列の存在が、サザンブロ
ット法のようなあまり感受性でない技法を用いていた以前の研究者による、より
密接に関連した配列の検出を世に埋もれさせたのだろう。

【０００８】 最近になってＭＭＴＶの配列に対してかなり高度な相同性（＞90％）を有する
配列がヒトＢＣ組織から単離された（Wangら,1995,1998；）。ＭＭＴＶ envと95
〜99％同様の配列がＰＣＲによって314個の非選択性乳癌腫瘍試料の121個（38.5
％）で増幅された。ＭＭＴＶ様の配列は、整復乳房形成由来の107個の検体のた
った２個だけで（1.8％）検出され、また正常組織又は非乳房腫瘍由来の試料で
は０／80だった。ＭＭＴＶ-env様ＲＮＡは（ＲＴ-ＰＣＲによって決定されるよ
うに）66％のＤＮＡ ＰＣＲ陽性の乳房腫瘍で発現された（Wangら,1998）。ＭＭ
ＴＶに対して94％の類似性を有する完全な9.9kbプロウイルスが２個の乳房腫瘍
内で検出された。ＦＩＳＨ（蛍光インサイツハイブリッド形成法）は、ＢＣ腫瘍
由来のＤＮＡの数部位における組込みを明らかにしたが、正常の乳房細胞では見
られなかった（Wangら,1999 ＡＣＲ mtg. アブストラクツ#2933,2944）。Wangら
は、感染の内在性ルートで伝播される（水平伝播）ヒト乳癌ウイルス（ＨＭＴＶ
）の存在を示唆した。これら及び他の研究者らによるＭＭＴＶ関連ウイルスの他
の領域を、ＢＣを持っていない被検者のゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡから増幅する
という試みは、ＭＭＴＶに対して約60％の相同性しか有していないＨＥＲＶ配列
（ＨＥＲＶ-Ｋ１０のような）を与えた。このように、ＢＣ組織は、ＭＭＴＶの
配列と高度に類似する配列が今までに見出されている唯一の組織である。従って
、正常な乳房組織及び他の組織はＭＭＴＶに高度な相同性を有するウイルスの発
現に対して陰性であると考えられる。

【０００９】 ＭＭＴＶは水平に或いは垂直に伝達されうる レトロウイルス複製サイクルは、ビリオン関連逆転写酵素（ＲＴ）の多酵素活
性による一本鎖ＲＮＡウイルスゲノムの二本鎖プロウイルスＤＮＡへの転換を特
徴とする。他のレトロウイルスの場合と同様に、ウイルスタンパク質の発現及び
感染子孫の産生のため、ＭＭＴＶプロウイルスＤＮＡを宿主細胞のゲノムへ組込
む必要がある。感染マウス乳腺のみならず異種細胞の両方で、ＭＭＴＶプロウイ
ルスＤＮＡは多数の明らかにランダムな部位に組み込まれる。Int、Wnt、及びFg
fのようないくつかの細胞性遺伝子（プロト−発癌遺伝子）の近傍に転写的に活
性なＬＴＲを含有するＭＭＴＶプロウイルスを組込むと、その結果、これら遺伝
子の過剰発現、細胞形質転換及び腫瘍細胞のクローン拡大となりうる（Varmus,1
985；Shacklefordら,1993；Jackobovitsら,1986；Cohen,1980；Breznik及びCohe
n,1982）。ＭＭＴＶ誘発発癌の長い潜伏は、部分的にはプロウイルスのこれら特
定部位への組込みの必要性によって説明される。

【００１０】 ＭＭＴＶのウイルス株間の遺伝的相違は、部分的にはマウスの多種多様な株で
ＢＣの発生率が変わることで説明できる。Ｃ３Ｈ系統のマウスは、ＢＡＬＢ/ｃ
マウスのＢＣ発生率が＜１％であるのに比し、90％より多いＢＣ発生率を有する
。Ｃ３Ｈの雌に授乳されたＢＡＬＢ/ｃマウスは、高いＢＣ発生率を有し、Ｃ３
Ｈの腫瘍化ＭＭＴＶが乳汁内で水平に伝達されうることを示唆している（Bittne
r,1936）。逆に、Ｃ３ＨマウスがＢＡＬＢ/ｃの雌に授乳された場合、ＢＣの発
生率は顕著に低減するが（22〜55％）、低発生率のマウス系統ほど低くはない。
この後者の観察は、高発生率系統の水平伝播される乳汁由来ウイルスの重要性を
強調しているが、内在性ＭＭＴＶプロウイルス間の腫瘍化の可能性における実質
的な相違をも示している。高低の腫瘍発生率を有する種々のマウスのプロウイル
スは、溶液ハイブリダイゼーション反応速度論及び制限エンドヌクレアーゼ消化
パターンの相違によって区別できるだろう（Cohenら,Cell,1979；Cohen及びVarm
us,1979,1980；Traina-Dorge及びCohen,1983；Breznikら,1984）。低メチル化Ｄ
ＮＡとメチル化ＤＮＡとを区別する制限酵素を用いて、ほとんどの内在性プロウ
イルスが大量の５-メチルシトシンを含有するのに対して、乳汁由来ＭＭＴＶの
プロウイルスが低メチルであることも示された（Cohen,1980；Breznik及びCohen
,1982；Breznikら,1984）。低メチル化は遺伝子発現の増加と関連するので、こ
の観察はＢＣの高発生率を有するマウス系統中の水平伝播される乳汁由来ＭＭＴ
Ｖの重要性を説明できる。内在性ＭＭＴＶプロウイルス特有の低メチル化は、Ｂ
ＡＬＢ/ｃマウスの授乳中乳腺の1.6kb転写物の発現に関連していた（Traina-Dor
geら,1985）。

【００１１】 他の研究では、内在性ＭＭＴＶプロウイルスは、同系交配時に安定な遺伝ユニ
ットとして分離し、特定のこれら内在性プロウイルスが転写的に活性であること
が示された（Cohenら,Cell,1979；Cohen及びVarmus,1979,1980；Trainaら,1981
；Traina-Dorge及びCohen,1983；Traina-Dorgeら,1985；Varmusら,1978）。組換
え型近交（ＲＩ）系統のマウスを使用してＭＭＴＶプロウイルス組成物及び染色
体位置を定義した（Trainaら,1981；Traina-Dorge及びCohen,1983）。ＲＩ系統
は、２匹の高度な近交系由来マウスを交雑し、ランダムにそのＦ２世代の兄弟と
姉妹を番わせて別個の系としてそれぞれ維持することによって発生された。多く
の遺伝子座はこれら系統の特異的な染色体に配置された。これら遺伝的マーカー
を有する種々のＭＭＴＶプロウイルスの分離パターンを制限エンドヌクレアーゼ
解析及びサザンブロット法で解析することによって、これら系統の多数のＭＭＴ
Ｖプロウイルスの染色体位置を決定し、かつメンデル遺伝の法則によってこれら
プロウイルスが分離することを確証することができる。これら及び他の解析によ
って、これら動物内のいくつかは全長でいくつかは不完全な１０の別個のＭＭＴ
Ｖユニット（プロウイルス）が定義された。ほとんどのＭＭＴＶプロウイルスに
ついての遺伝の割合は単純な単一遺伝子遺伝と一致したが、３つのＭＭＴＶユニ
ットはいくつかの変化を示した。最も注目すべきは、解析された26種のＲＩ系統
のうち23種に存在していた１匹の親に寄与するユニットの存在だった。転写的に
活性かつ腫瘍産生の増加に関連する特有のプロウイルスユニットが同定された（
Traina-Dorgeら,1985）。重要なことに、病気が進行している宿主遺伝子の関与
を示すウイルス発現にかなり関連している細胞性遺伝子が同定された（Traina-D
orgeら,1985）。

【００１２】 いくつかの系の証拠は、比較的最近に種々の系統のマウスの生殖系列で内在性
ＭＭＴＶプロウイルスが組込まれたことを示している（Cohen及びVarmus,1979；
Varmusら,1978）。ＭＭＴＶがハツカネズミ（実験マウス）の前駆体に存在する
要素から進化されたとすれば、すべての個々のマウスは同様のＭＭＴＶプロウイ
ルスを有すると予想されるだろう。しかし、実験マウスと野生マウスの両方とも
ＭＭＴＶプロウイルスに対してかなり変化する数と分布の生殖系列組込み部位を
有するいくつかの場所で捕捉した（Cohen及びVarmus,1979）。これら結果で最も
衝撃的な発見は、内在性ＭＭＴＶプロウイルスを何も含有しない野生動物が存在
することだった。これら結果の最も可能性のある説明は、内在性ＭＭＴＶプロウ
イルスが、マウスの進化した前駆体中に存在する遺伝的要素から生じるのではな
く、むしろMus属の特異化後に胚芽細胞のＤＮＡ中への多数の独立した組込みに
よって生じたということである。

【００１３】 （発明の概要） 本発明は、ＭＭＴＶの配列に対して相同性の内在性レトロウイルスである１種
以上の乳癌ウイルス由来の組換えＤＮＡ分子を提供する。詳細には、本発明の配
列は、配列番号２、３、４、５、６、７、８、２１、２３、２５、２７、若しく
は２９の全部若しくは一部と少なくとも99％の同一性、又は配列番号１０と少な
くとも92％の同一性を有する。 また、本発明は上述のＤＮＡの転写によって生成されるＲＮＡ分子を提供する
。さらに、本発明は本発明のＭＴＶ ＤＮＡから転写されたＲＮＡのインフレー
ム翻訳の結果生じるポリペプチドを提供する。本発明により、限定するものでは
ないが、ヒト、ネコ、及びアカゲザルを含むソースのようないずれかの適切なソ
ースから、関連ＤＮＡ配列が誘導できる。

【００１４】 本発明は、乳癌ウイルス（ＭＴＶ）ＤＮＡ、配列番号２、３、４、５、６、７
、８、１０、２１、２３、２５、２７、若しくは２９の配列、又はそれらと少な
くとも99％の同一性を有する配列を含む組換えＤＮＡプラスミド（ベクター）を
も提供する。すなわち、前記ＤＮＡ配列がベクターに取り込まれる。 本発明の一実施形態では、ベクターはさらにＭＴＶ配列に作用可能に連結され
る（すなわち、機能性ＭＴＶ ＲＮＡ及び／又はタンパク質のインビボ及びイン
ビトロ生成が可能なように適切な読み枠に結合される）異種プロモーターを含む
。本発明のこの実施形態の一局面では、ＭＴＶ ＤＮＡを含むベクターは、以下
の細胞型の少なくとも１種内でエピソーム複製又は染色体組込みが可能である：
細菌細胞、イースト細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、及び哺乳類細胞（この細胞型の
リストは代表であり、網羅されていると考えるべきでない）。本発明のこの実施
形態の別の局面では、異種プロモーターが１種以上の細胞型内でＭＴＶ ＤＮＡ
配列を発現させる。本発明のこの局面の一部として有用と考えられる細胞型とし
ては、限定するものではないが、細菌細胞、イースト細胞、昆虫細胞、鳥類細胞
、及び哺乳類細胞が挙げられる。

【００１５】 本発明の別の実施形態により、上述のＭＴＶ ＤＮＡ配列を使用して、（血清
その他のような生物学的起源の）試料中のＭＴＶ ＤＮＡ又はＲＮＡの存在を検
出する方法を提供できる。 本発明の別の実施形態は、試料が上記ＭＴＶ ＤＮＡ配列（例えば、配列番号
２、３、４、５、６、７、８、１０、２１、２３、２５、２７、若しくは２９の
転写及び翻訳から誘導されるポリペプチド配列）由来のタンパク質を認識する抗
体を含むかどうかを決定する方法を提供する。この局面に対する結果として、本
発明は本発明の１種以上のポリペプチドを特異的に検出する抗体をも提供する。

【００１６】 本発明の別の実施形態は、生物学的又は他タイプの試料中の乳癌ウイルス由来
のＤＮＡ、ＲＮＡ、又はポリペプチドを検出するのに有用な診断用キットを提供
する。 本発明の別の実施形態は、宿主動物内のＭＴＶの活性を弱め又は取り除く方法
を提供する。この実施形態の種々の局面によって、ＭＴＶ逆転写酵素、プロテア
ーゼ、又はインテグラーゼ酵素の活性を破壊する物質を含む医薬組成物が提供さ
れる。この実施形態の別の局面によって、宿主動物内の免疫応答を誘発可能な医
薬組成物が提供される。

【００１７】 以下の図面は本明細書の一部を構成し、かつ本発明の特定の局面をさらに説明
することを意図している。本発明は、本明細書に提示された特定の実施形態の詳
細な説明と共にこれら図面の１つ以上を参照することにより、さらに良く理解す
ることができる。 図１は、ヒト乳癌組織由来のＭＭＴＶに関連する配列の増幅結果を示す。パネ
ルＡ：ＤＮＡはヒト乳癌（Michael Press,M.D.,USC,Los Angeles又はDerrick Be
ech M.D.,TMC/UT Memphisの好意によって提供された）から抽出され、該ヒトＭ
ＭＴＶ env−関連遺伝子に特異的なプライマーを用いてＰＣＲを行った。ブロッ
ト法によってＰＣＲ生成物をニトロセルロースに伝達し、ＭＭＴＶ関連生成物を
1.8kbのＭＭＴＶ envプローブへのハイブリダイゼーションによって検出した。
レーンａ：非放射性マーカー、示さず；レーンｂ〜ｄ、ｆ〜ｈ、ｊ：乳癌ＤＮＡ
；レーンｅ及びｉ：ＤＮＡなし；レーンｋ：水の対照；レーンｌ正の対照：pBlu
escript^TM内でクローン化されたＭＭＴＶ env断片。パネルＢ：臨床試料由来の
ＤＮＡの組込みの試験として、Griffithsら（1997）によって開発されたＰＣＲ
条件を用いてＨＥＲＶ-３プロウイルスＤＮＡ、単一コピーヒト内在性レトロウ
イルスを増幅した。臭化エチジウム検出（マーカーはレーンａに見える）。レー
ン１以外パネルＡと同一試料：正の対照、pBluescript^TM（Stratagene）内でク
ローン化されたＨＥＲＶ３ pol断片。可視バンドがレーンｃとｇに存在したが、
うまく複製しない。

【００１８】 図２は、健康な対照の血液由来のＭＭＴＶに関連する配列の増幅の例を示す。
パネルＡ：ＤＮＡは健康な対照被験者の全血から抽出し、ヒトＭＭＴＶ env関連
遺伝子に特異的なプライマーを用いてＰＣＲを行って、ＰＣＲ生成物をサザンハ
イブリダイゼーション法によって検出した。レーンａ：マーカー；レーンｂ〜ｋ
：健康な対照の全血由来のＤＮＡ；レーンｌ：水の対照；レーンｍ正の対照：pB
luescript^TM（Stratagene）内のＭＭＴＶ env断片。パネルＢ：ＨＥＲＶ-３のＰ
ＣＲ増幅。臭化エチジウム検出（マーカーはレーンａに見える）。レーンｍ：正
の対照、pBluescript^TM（Stratagene）内のＨＥＲＶ３ pol断片以外はパネルＡ
と同一試料。

【００１９】 図３は、ＨＭＴＶ ｍＲＮＡのリボヌクレアーゼ保護アッセイによる検出の例
を示す。ＲＮＡは３種のＨＭＴＶ ＰＣＲ陽性乳癌腫瘍又はイースト細胞から抽
出し、ＨＭＴＶに特異的な189塩基プローブか、β-アクチン用の245塩基プロー
ブのどちらかにハイブリダイズした。そして、試料をＲＮアーゼ A/T1で消化し
た。ハイブリダイズされたＲＮＡによって検出された標識プローブの断片を可視
化し、変性ポリアクリルアミドゲル上で分離後解析した。３つの腫瘍試料のうち
２つは、ＨＭＴＶプローブで予期した大きさのの保護断片を与えたが（矢印）（
レーン１〜３）、β−アクチンプローブですべての３つの腫瘍ＲＮＡｓが保護断
片を与えた（レーン５〜７）。予想どおり、どのプローブもイーストＲＮＡによ
っては特異的に保護されなかった（レーン４、８）。

【００２０】 （発明の詳細な説明） 本発明は、マウス乳癌ウイルスに高度の配列相同性のウイルスである乳癌ウイ
ルス（ＭＴＶ）由来の単離ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びポリペプチドを提供する。さら
に、本発明はこれら巨大分子を用いた診断方法を提供する。また、本発明は、こ
の開示された方法に従って使用可能なＭＴＶ ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又はポリ
ペプチドを含む医薬組成物及び診断キットをも提供する。

【００２１】 本発明の種々の実施形態は、少なくとも以下の１つに対応するＭＴＶ核酸を提
供する：以下の１つと少なくとも99％の同一性を有するＤＮＡ配列： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性。

【００２２】 好ましくは、配列は配列番号２、３、４、５、６、７、８、２１、２３、２５
、２７、若しくは２９の200、250、300、350若しくは400個より多くのヌクレオ
チドと99％より高い同一性を有する。別の好ましい実施形態では、配列は配列番
号１０と93％、94％、95％、96％、97％、98％又は99％より高い同一性を有する
。さらに好ましくは、これら核酸はヒト、ネコ、又はアカゲザルＭＴＶの核酸由
来である。最も好ましくは、ＤＮＡは、配列番号２、３、４、５、６、７、８、
１０、２１、２３、２５、２７、若しくは２９の全部又は一部と同一である。 本発明のこの実施形態の一局面では、上述のＭＴＶ ＤＮＡ配列はベクターに
組み込まれる。本発明の種々の関連した局面では、ＭＴＶ配列は、異種プロモー
ターの転写調節下にある。本発明に有用と考えられるベクターは、以下の細胞型
の少なくとも１種内でＭＴＶ ＤＮＡ配列を発現できる：昆虫細胞、細菌細胞、
鳥類細胞、イースト細胞、又は哺乳類細胞。さらに、本発明のこの局面のベクタ
ーは、リストされた細胞型の少なくとも１種内でエピソーム複製及び／又は染色
体組込みが可能である。

【００２３】 この実施形態の別の局面では、ＤＮＡ配列は１つ以上の検出部分を含む。本発
明に好適と考えられる検出部分としては、限定するものではないが、蛍光染料、
及び亜リン酸、イオウ、酸素、炭素、若しくは水素の放射性同位体が挙げられる
。 本発明のこの実施形態のさらに別の局面では、単離ＤＮＡ分子が本発明に適合
する希釈剤に懸濁又は溶解される。好適な希釈剤は本発明の種々の実施形態によ
るＤＮＡの使用を妨げない。本発明のこの実施形態により有用な希釈剤は当業者
には周知である。それらは、限定するものではないが、緩衝水溶液を含む。これ
らは本発明と適合するいずれの化合物とも緩衝させることができる。例示的な緩
衝剤としては、ホスフェート緩衝液及びトリスヒドロキシアミノメタン（Tris）
を含む緩衝液が挙げられる。このような緩衝水溶液は、さらに本発明の実施を妨
げない塩化ナトリウムのようないずれの他の化合物をも含んでよい。本発明のこ
の局面により、ＭＴＶ ＤＮＡはいずれの適切な濃度でも存在しうる。約0.1ng/
μl〜100μg/μlの濃度が好ましい。

【００２４】 本発明の他の実施形態は、上述の核酸によってコードされるＲＮＡ転写物及び
／又はポリペプチドを提供する。この実施形態の種々の局面で、これらＲＮＡ転
写物及びポリペプチドは上記ＤＮＡ配列のいずれによってもコードされる。これ
らＲＮＡ転写物及びポリペプチドはＭＭＴＶ env、gag、又はpol遺伝子によって
コードされるＲＮＡ転写物及びポリペプチドの相同体である。この実施形態の一
局面では、ＲＮＡ転写物は上述のＤＮＡ配列によってコードされる。このような
ＲＮＡ転写物は該ＲＮＡがチミジンの代わりにウリジンを含有すること以外開示
されたＤＮＡ配列と同一の配列を有する。この実施形態の別の好ましい局面では
、精製ポリペプチドは、ヒト、ネコ、又はアカゲザル乳癌ウイルス由来のタンパ
ク質生成物であるenv、gag、又はproの全部又は一部と配列で一致する。ペプチ
ドは精製されたポリペプチドであることが好ましい。本発明の好ましい局面では
、精製ポリペプチドは、上述のいずれのＭＴＶ ＤＮＡ配列のインフレーム転写
及び翻訳から生じる配列の全部又は一部からも構成される。本発明のさらに好ま
しい局面では、ポリペプチドは、配列番号２、３、４、５、６、７、８、１０、
２１、２３、２５、２７、若しくは２９のインフレーム翻訳の生成物に配列で一
致する。最も好ましくは、本発明のポリペプチド配列は、配列番号１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、２０、２２、２４、２６、若しくは２８の全部
又は少なくとも８０個のアミノ酸に一致する。用語「ＭＴＶ ＤＮＡに由来する
」とは、該ＲＮＡ又はペプチドが、それぞれＭＴＶ ＤＮＡの転写によって、又
は転写とインフレーム翻訳によって産生されたＲＮＡ又はペプチドに配列で一致
することを表す意である。

【００２５】 「精製ポリペプチド」とは、試料中のポリペプチドの過半数（50％より多く）
がＭＴＶポリペプチドであることを意味する。好ましくは、ＭＴＶポリペプチド
が精製ポリペプチド試料中の70％より多くのポリペプチドを構成する。さらに好
ましくは、ＭＴＶポリペプチドが試料中のポリペプチドの90％より多くを構成す
る。さらにもっと好ましくは、ＭＴＶポリペプチドが試料中のポリペプチドの95
％より多くを構成する。さらに、用語「精製ポリペプチド」は、試料が本発明の
実施を妨げる物質を含有しないことを示す。本発明によって得られる精製ポリペ
プチドは、本発明に適合するいずれの適切なソース由来でもよい。

【００２６】 本発明の別の実施形態は、上述のようなＭＴＶポリペプチドに対する抗体を提
供する。本発明のこの局面による抗体は、１種以上の本発明のポリペプチドを抗
原性物質として使用して生成される。このような抗体は事実上モノクロナール又
はポリクロナールのどちらかでよい。好ましくは、抗体はモノクロナールである
。一旦ＭＴＶが供給されると、本発明のこの局面の抗体は当業者に周知の方法に
従って調製することができる。例えば、ポリクロナール抗体は、一般に抗原性物
質を（完全なフロイントのアジュバントのような免疫応答促進剤の存在下で）ヒ
ツジ、ウシ、ウマ、ヤギ、又はウサギのような動物に注射することによって産生
される。

【００２７】 本発明のこの局面のモノクロナール抗体は、ハイブリドーマ融合法又はエプス
タイン・バーウイルス（ＥＢＶ）を利用する技術−ここで述べるように改変され
た当業者には周知であるような不死化技術（ヒトmAbsを生成するための）によっ
て調製することができる。本発明の方法において、これら技法は、当該動物内で
所望の免疫応答を誘発する（すなわち、抗体の産生）ように免疫原、この場合精
製ＭＴＶポリペプチドを注射することを含む。実験動物（例えば、マウス）は同
一の不死化細胞系の反復注射（ブースト）を投与される。最終段階で、動物は選
択された細胞型の一次細胞の注射が投与される。

【００２８】 ここで、巨核球細胞に対するアゴニストモノクロナール抗体の生産についての
説明用実施例では、ＣＭＫ細胞調製品及びＣＭＳ細胞調製品を第１免疫原として
使用した；しかし、Ｍｏ７ｅ又はＤＡＭＩ細胞のような別の不死化巨核球細胞を
使用することができる。本発明のアゴニスト抗体に類似する別のモノクロナール
抗体ＢＡＨ-１は、特異的にＣ-Ｍｐｌレセプターを認識するが、免疫原として膜
結合ｃ-Ｍｐｌレセプタータンパク質を用いて生成できる。他の細胞型に対する
アゴニストモノクロナール抗体を生成するため、造血性系列の他の細胞、例えば
幹細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞が選択される。第１免疫化段階では、幹細胞は、例えば
不死化細胞系ＣＴＳによって表すことができ；不死化細胞系ＡＲＨ-77、ＳＢ又
はＮａｌ-６によってＢ細胞；また不死化細胞系ジャーカット細胞又はＨ９によ
ってＴ細胞を表すことができる。

【００２９】 十分な時間の後、動物は犠牲にされ、体細胞性の抗体産生細胞が初回刺激を受
けた動物のリンパ節、脾臓及び末梢血液から得られる。脾臓細胞が好ましい。マ
ウスリンパ球は、後述するマウス骨髄腫との安定融合を高パーセンテージで与え
る。ラット、ウサギ、カエル、ヒツジ及び他の哺乳類の体細胞性細胞を使用する
こともできる。所望の免疫グロブリンをコードする脾臓細胞染色体は、脾臓を骨
髄腫細胞と、通常ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような融合剤の存在下で
融合することによって不死化される。標準法の融合相手として多くの骨髄腫細胞
系のいずれも使用できる；例えば、P3-NS1/1-Ag4-1、P3-x63-Ag8.653又はSp2/O-
Ag14骨髄腫系。これら骨髄腫系は、American Type Culture Collection(ＡＴＣ
Ｃ),10801 University Boulevard,Manassas,Va.20110-2209から入手可能である
。

【００３０】 その結果の細胞は所望のハイブリドーマを含んでおり、ＨＡＴ培地のような選
択培地で成長し、融合されない親の骨髄腫又はリンパ球細胞は最終的に死ぬ。ハ
イブリドーマ細胞だけが生き残り、限界希釈条件下で成長して単離クローンを得
ることができる。このハイブリドーマの上清を所望の特異性の抗体が存在するか
について、例えば本明細書で述べるようなイムノアッセイ法によって、免疫原用
に使用されている抗原を用いてスクリーニングする。そして、陽性クローンを限
界希釈条件下でサブクローニングし、産生されたモノクロナール抗体を単離する
ことができる。他のタンパク質や他の混入物を無くすようにモノクロナール抗体
を単離及び精製するために種々の慣習的な方法がある。モノクロナール抗体の精
製に一般に使用される方法としては、硫酸アンモニウム沈殿法、イオン交換クロ
マトグラフィー、及びアフィニティクロマトグラフィーが挙げられる。これら方
法によって生成されるハイブリドーマは、技術的に公知の技法によってインビト
ロ又はインビボ（腹水中で）増殖させることができる（一般的には、Harlowら,A
ntibodies.実験室マニュアル，Cold Spring Harbor Laboratory,pp.1-726,1988
参照）。

【００３１】 本発明の他の実施形態は、生物学的及び／又は他のタイプの試料中のＭＴＶか
らＤＮＡ、ＲＮＡ及び／又はタンパク質を検出する方法を提供する。 本発明のこの実施形態の一局面は、以下の工程を含む、試料中のＭＴＶ ＤＮ
Ａの検出方法を提供する： i）１種以上の上記ＭＴＶ ＤＮＡ配列を含有する疑いのある試料を得る工程； ii）工程ｉ）で定義されるようなＤＮＡ配列を増幅するためにポリメラーゼ鎖
反応（ＰＣＲ）を行う工程；及び iii）工程ii）で生成されたアンプリコン（amplicon）（ＰＣＲ増幅されたＤ
ＮＡ）の配列を決定するか、又はそうでなくても特徴づけて、前記試料中に工程
ｉ）で定義されるようなＤＮＡ配列が存在するか否かを決定する工程。

【００３２】 この実施形態の別の局面は、以下の工程を含む、試料中のＭＴＶ ＲＮＡの検
出方法を提供する： i）１種以上の上記ＭＴＶ ＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡを含有する
疑いのある試料を得る工程； ii）ＲＮアーゼタンパク質アッセイ（ＲＰＡ）を行う工程；及び iii）前記ＲＰＡの結果を解析して、前記試料中に工程ｉ）で定義されるよう
なＲＮＡが存在するかを決定し、任意に前記ＲＮＡを定量化する工程。 これら方法の工程を最適化するために必要なパラメータの選択は、十分に当業
者の能力内であることは当業者によって認められるだろう。これらパラメータ、
例えば、ＰＣＲ条件（例えば、アニーリング温度、伸長時間、及びプライマーの
選択）及びＤＮＡ配列決定法は、このような分子生物学法が利用される研究室で
日常的に決定される。

【００３３】 本発明のこの実施形態の別の局面は、試料がＭＴＶポリペプチドを認識する抗
体を含有するかどうかを決定するために試料を解析する方法を提供する。この方
法は、以下の工程を含む： i）乳癌ウイルス抗体に特異的な抗体を含有する疑いのある試料を得る工程； ii）少なくとも１種の精製ＭＴＶポリペプチドを得る工程； iii）工程i）の試料と工程ii）のポリペプチドとを用いて、ウェスタンイムノ
ブロット解析を行う工程；及び iv）工程iii）の結果を解析して、前記試料中に工程ii）のポリペプチドと特
異的に相互作用する抗体が存在するか否かを決定する工程。

【００３４】 本発明のこの実施形態の別の局面は、試料がＭＴＶタンパク質を含有するかを
決定するために１種以上の免疫組織化学的方法によって細胞培養又は組織試料を
解析する方法を提供する。この方法は、以下の工程を含む： i）乳癌ウイルスタンパク質を含有する疑いのある試料を得る工程； ii）工程i）の試料を免疫化学的解析用に調製する工程； iii）工程ii）の試料を、１種以上の上記ＭＴＶ ＤＮＡ配列によってコードさ
れるＭＴＶポリペプチドに特異的なモノクロナール又はポリクロナール抗体の１
種又は２種以上の組合せとインキュベートする工程であって、前記抗体が任意に
それらの特異的検出を可能にする部分を有する工程； iv）前記試料を洗浄して、特異的に結合されない抗体を除去する工程； v）前記試料を選択された検出法に適するように加工する工程；及び vi）工程v）の結果を解析して、前記試料中にＭＴＶタンパク質が存在するか
否かを決定する工程。

【００３５】 免疫化学的解析は、限定するものではないが、ウェスタンブロッティング又は
エンザイム-リンクドイムノソルベントアッセイによる解析が含まれると考えら
れる。これら方法の実施を最適化するために必要なパラメータの選択は当業者の
能力内であることが認められる。解析は直接的な免疫化学（抗体が検出可能な部
分で標識されている場合）又は間接的な免疫化学によって行うことができる。

【００３６】 本発明の他の実施形態は、上述のＭＴＶ ＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質を含
有する医薬組成物を提供する。これら組成物は、さらに製薬的に許容される賦形
剤、キャリヤー、又は希釈剤を含んでよく、いかなる生物学的に有害な物質も含
まない。本発明の医薬組成物は、当業者によって処方されうる。好適な製薬的処
方は、本分野の標準テキストであるReimington's Pharmaceutical Sciencesに記
載されており、これは参照によって本明細書に取り込まれる。

【００３７】 医薬組成物は、さらに着色若しくは安定剤、浸透圧剤、抗菌剤、又は該組成物
の機能を妨げない限りいずれの他の物質も含んでよい。本発明の医薬組成物は、
製薬的に許容される非経口的媒体と共に、例えば溶液、懸濁液、又はエマルジョ
ンとして調製することができる。このような媒体の例は、水、食塩水、リンガー
溶液、ブドウ糖溶液、及び５％ヒトアルブミンである。リポソームも使用できる
。媒体は等張性（例えば、塩化ナトリウム又はマンニトール）を及び化学的安定
性（例えば、緩衝液及び保存剤）を維持する添加剤を含有してよい。内毒素コン
タミネーションは安全レベル、例えば0.5ng/mgタンパク質未満に保持されるべき
であることは明らかである。さらにヒト投与のためには、調製品は、生物学標準
の米国食品医薬品局によって要求される無菌性、発熱性、一般的な安全性及び純
度基準に応じるべきである。製剤はろ過のような一般的に使用される技法で無菌
にすることができる。

【００３８】 フレーズ「製薬的に許容される」とは、動物、又はヒトに適切に投与された場
合、有害な、アレルギー性の、又はそうでなくても都合の悪い反応を生じない物
質及び組成物を意味する。これら有害な効果を引き起こす物質は、本発明の範囲
内で「生物学的に有害」として分類される。製薬的に許容される物質及び組成物
としては、限定するものではないが、溶剤、分散媒、被覆物、抗菌剤及び抗真菌
剤、等張剤及び吸収遅延剤が挙げられる。本発明に不適合でない限り、いずれの
通常成分の使用も考慮される。さらに、いくつかの他の製薬的に都合のよい目的
に役立つ補助活性成分も本組成物に取り入れることができる。

【００３９】 上述の方法及び組成物は、患者の組織内にＭＴＶ又はＭＴＶウイルス成分が存
在するか否かの決定を助けるのに甚大な利益を与えると考えられる。この知見は
、病原学的にＭＴＶに由来する癌に対する患者の罹患率を予測する助けになるだ
ろう。本方法は、患者のウイルス負荷（その人の組織に存在するウイルスの量）
を決定する手段を提供する。この点で、本明細書で述べる方法を一般集団の広範
囲のスクリーニング、特にすべての成人した女性のスクリーニングに採用するこ
とによって莫大な利益がもたらされると予想される。 本発明の種々の実施形態の一部として考えられる他の組成物は、ヒト又は他の
動物に存在するウイルスの量を安定化又は低減する手段を提供する。

【００４０】 上述の種々の方法は、ＭＴＶ ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又はポリペプチドの存
在を検出するための診断用キットを調製するのに容易に適応可能である。結果と
して、本発明の臨床プラクティスのため、本発明のさらなる別の実施形態が考慮
され、診断用キットが提供される。このようなキットは試料中に存在するＭＴＶ
ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又はポリペプチドを検出し、かつできればその量を決
定するために試料を定性及び定量分析するのに有用である。本発明のこの実施形
態の一局面では、キットはその成分の一部として、１種以上の上記ＭＴＶ ＤＮ
Ａ配列を含む１種以上の組換えＤＮＡ分子を含有する。また本発明のこの局面に
従い、キットは組換えＭＴＶ ＤＮＡに加え（又はそれに代えて）、これらＭＴ
Ｖ ＤＮＡ配列のＰＣＲ増幅に有用な１種以上の合成オリゴヌクレオチドプライ
マー対を含むことができる。

【００４１】 本発明のこの実施形態の別の局面は、乳癌ウイルスタンパク質を特異的に認識
する抗体を検出するためのキットを提供する。その成分の一部として、このキッ
トは、上記ＭＴＶ ＤＮＡ配列によってコードされる１種以上のポリペプチドを
含む試薬を含有する。 また、免疫細胞化学によって、少なくとも１種のＭＴＶポリペプチドに特異的
である１種以上の抗体（モノクロナール又はポリクロナールのどちらか）を含む
ＭＴＶタンパク質の存在を検出するのに有用なキットが考慮される。任意に、こ
れら抗体は検出部分（例えば、蛍光染料又は³⁵Ｓのような放射性同位体）を含む
ように修飾してよい。

【００４２】 本発明のこれら実施形態のキットは、パッケージを含み、それぞれ個々の診断
試験を行うのに必要な１種以上のいろいろな試薬（典型的には濃縮形態で）を含
有することができる。本発明のこれら実施形態のキットは、生物学的（又は他の
タイプの）試料中のＭＴＶ ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又はタンパク質を検出及び
／又は定量するのに役立つように考慮される。このような試料は、限定するもの
ではないが、以下から選択することができる：血漿又は血清、全血、尿、痰、結
腸流出液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、組織試料（直視下生検由来のような）、
又はこれら生物学的分子を含有する疑いのある他の試料。 さらに、キットは１種以上の基準(fiduciary)結果を含んでもよい。本明細書
で使用する場合、「基準結果」は、ある試験結果を比較して定性及び／又は定量
の面から該結果を判断する参考基準を指す。「基準系列」は、定性又は定量スケ
ールに沿う点を表すような複数の基準である。この点で、結果を解釈するための
基準系列を包含するキットが好ましい。基準は１つ以上の写真の形態でよく、又
は文書の説明書を含む他の方法で示されてもよい。

【００４３】 このように、本発明のこの局面に従い、基準はキットの一部として開発され、
結果の解釈を導くことができる。この点で、生体試料由来のＲＮＡ又はポリペプ
チド濃度は前述のとおりに特徴づけられる。試料は、病気のいろいろな段階（無
症候性又は本質的に病気でない状態を含む）の患者の代表的な断面から採取して
基準系列を調製することができる。この点についての特徴づけは、患者が診断、
治療を受け、その後も続けるとき、患者の新生物発達の実際の経過に従うことに
よって、後になって利益を得ることができる。上述したように、公知の乳癌状態
のいろいろな患者と最終結果、及びこれら値の結果として起こる連関についての
ウイルス負荷の決定は（ＭＴＶ ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はポリペプチドの量によっ
て決定されるような）、計り知れない予後の値である。これは、患者により正確
な予知を与えるのに役立ち、かつそれはこのような処置が必要な場合、治療的処
置の最良のコースを決定するのに患者及び腫瘍学者を助ける。

【００４４】 本発明の別の実施形態は、動物内でＭＴＶに対する免疫応答を誘発する組成物
を提供する。この発明の特に熟考した局面は、ヒト内でヒト乳癌ウイルスタンパ
ク質に対する免疫応答を誘発する組成物である（実施例７参照）。このように誘
発された免疫は、ホルモン感受性組織に対するウイルスの拡散を遮断することに
よって、内在性ＭＴＶを保有する個体内の乳癌を阻止することができる。 動物内でウイルスＤＮＡ及び／又はＲＮＡに対する免疫応答を引き起こす方法
も公知であり、例えば参照によって本明細書に取り込まれる、米国特許第5,990,
091号及び第6,004,799号を参照されたい。

【００４５】 他の実施形態は、ヒト乳癌ウイルスの活性及び存在を減少させる治療組成物を
提供する。全レトロウイルスの一般的な特徴は、ウイルス複製サイクルの種々の
段階に関与する３つの酵素、逆転写酵素（ＲＴ）、プロテアーゼ（ＰＲ）、及び
インテグラーゼ（ＩＮ）の存在である。ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、すな
わちＭＴＶと離れた関係のレトロウイルスのＲＴ及びＰＲを標的にする種々の医
薬品が開発されている。さらに、選択的にＨＩＶ ＩＮを阻害する薬品が同定さ
れ、この酵素を標的にするプロトタイプ薬が開発中である（Hongら,1998；Mathe
,1999；Robinson,1998；Singhら,2000）。本発明の一局面により、１種又は２種
以上のレトロウイルスインヒビターを本発明のＭＴＶのレトロウイルスの活性又
は拡散を阻害するのに有効量で含有する医薬組成物が提供される。

【００４６】 この実施形態の医薬組成物用の薬剤又は複数薬剤の同定は、当業者に公知の方
法を用いて行うことができる。プロテアーゼと逆転写酵素インヒビター及びレト
ロウイルスとしてのこのような薬剤の有効性を決定する方法の例については、米
国特許第5,858,738号、第6,017,928号及び第6,046,228号を参照されたい。これ
ら特許は参照によって本明細書に取り込まれる。本発明のこの実施形態の種々の
組成物は、例えば、現在公知のＨＩＶインテグラーゼ、プロテアーゼ、又は逆転
写酵素インヒビターを含み；代わりに、このようなインヒビターを修飾してＭＴ
Ｖウイルスに対する特異性を高めることができる。同様に、膜貫通糖タンパク質
の類似体であるペプチドのような別分類のＨＩＶインヒビターは、プロドラッグ
として役立ち、ヒト及び他の種内でＭＴＶの活性及び存在を低減する特異的な薬
剤を開発できる。これら組成物は、内在性遺伝的要素としてこれらウイルスを保
有するヒト及び他の種内におけるＭＴＶの活性及び拡散を阻害するのに有用であ
ると考えられる。このような薬剤を使用してＭＴＶに冒された乳癌患者を治療で
き、また病気の重大度を寛解させ、かつ再発を減少させることが期待される。さ
らに、このような薬剤を予防的に使用して、病気を発生する高い危険性のある個
体の出現を予防することができるだろう。

【００４７】

【実施例】

以下の実施例は本発明の好ましい実施形態を説明するために挙げられる。以下
の実施例で開示される方法は、本発明の実施でうまく機能するように本発明者ら
によって発見された方法を表し、従って本発明の実施に好適な態様を構成すると
みなすことができることは、当業者に理解されるべきである。しかし、本発明の
開示に照らし、開示された特定の実施形態に多くの変更を為すことができ、なお
かつ本発明の精神及び範囲から逸脱することなく同等又は同様の結果を得ること
ができることを当業者は認めるべきである。

【００４８】 実施例１：ヒトのＭＭＴＶ関連配列 ＢＣ（乳癌）組織と非ＢＣ組織の両方のサブセットを含有するヒトＤＮＡ試料
から、ＰＣＲによってＭＭＴＶ env遺伝子に高度に類似する（＞95％）配列を増
幅した。ＭＭＴＶ関連配列は、ＰＣＲ及び高感度ブロッティン法によって、乳癌
腫瘍内のみならず（図１参照）、健康な対照（図２参照）、及び乳癌ではなく全
身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者の血液サブセット内でも見出された。我々
の結果は、Wangと共同研究者らの研究（1995）とは異なっており、彼らはほとん
ど例外なく、乳房腫瘍内だけでＭＭＴＶ様配列を検出できた。ヒトＤＮＡ由来の
配列は、対照として用いたＭＭＴＶ配列とははっきりと識別され、これらのＰＣ
Ｒ反応は我々の結果がコンタミネーションのため単純でないことを示している。
リボヌクレアーゼ保護アッセイを使用して、非ＰＣＲベースの方法でＰＣＲ陽性
ＢＣ組織の大多数がｍＲＮＡレベルでこの配列を発現するが、ＰＣＲ陰性組織は
何も発現しないことを決定し、これら結果を確認した。これらＰＣＲ反応からの
多くの生成物を配列決定した。これら配列の解析は、ＰＣＲコンタミネーション
が観察結果について見込みのない説明であるというさらに有力な証拠を与える。
同一のＰＣＲ実験で導かれた異なる個体由来のＭＭＴＶ env様配列は、相互に区
別された。この結果は、種々の反応チューブ内で同一であるべき（又はほとんど
同一であるべき）より一貫性の配列を生成したであろうユービキタスＰＣＲ混入
物の欠如を示している。さらに、個々の被験者のＤＮＡは、ＰＣＲ実験ごとに内
部的に一貫したＭＭＴＶ env様配列を産生した。所定患者由来のＭＭＴＶ関連配
列内の変異は、Taqエラー数が少ないことを示しているかもしれないが、複製レ
トロウイルスと予想される変異（逆転写酵素エラー）の示唆でもある。

【００４９】 実施例２：ＭＴＶ ＲＮＡレベルのＲＮアーゼ保護アッセイ決定 リボヌクレアーゼ保護アッセイ（ＲＰＡ）はＰＣＲ増幅ではなく特定のＲＮＡ
種のレベルを決定するために本技術の当業者によって頻繁に用いられる定量的ア
ッセイである。簡単には、それは本発明の転写物について以下のように行う：均
一長さのプローブをクローン化鋳型のインビトロ転写によって合成し、高度に特
異的な活性に標識化する。150〜400bp範囲の大きさのクローン化ＭＴＶ断片を含
有するプラスミドから^[35]Ｓ標識リボプローブを調製した。そのプローブをハイ
ブリダイズしてＲＮＡを検定し、ハイブリダイズされないままのＲＮＡ断片はＲ
ＮアーゼＡ/Ｔ１による消化から保護されない。ハイブリダイズされたＲＮＡに
よって保護された標識化リボプローブの断片を可視化し、変性ポリアクリルアミ
ドゲル上で分離後解析した。各試料中のＭＴＶ関連ｍＲＮＡのレベルをβアクチ
ン遺伝子、「ハウスキーピング」遺伝子によって産生されたｍＲＮＡのレベルと
比較して、ＲＮＡ試料の統合性を確実にした（すなわち、ＲＮＡは分解されなか
った）。ＲＰＡは、３つのＰＣＲ陽性乳房腫瘍のうち２つでＲＮＡを検出した（
図３参照）。ＲＰＡは、レアなメッセンジャーＲＮＡの検出用の「ノーザン」解
析よりも10〜15倍の感受性である。ＲＰＡ解析は、定量解析にエラーをもたらし
うるいずれの前操作もせずに、全ＲＮＡについて直接行われる。

【００５０】 実施例３：ＭＴＶ ＲＮＡレベルのＲＴ-ＰＣＲ決定 ＭＴＶ ｍＲＮＡｓは、リアルタイムＲＴ-ＰＣＲ（逆転写酵素連結ポリメラー
ゼ鎖反応）を用いても検出できる。例えば、Ｉ-Cycler（BioRad）は、蛍光検出
設備で、ＰＣＲ反応の対数直線期のＰＣＲ生成物を定量化することによってＰＣ
Ｒ増幅生成物のリアルタイム反応速度論を決定することができる。この方法によ
って、リアルタイム熱サイクルは、再現性のある様式で、少量の公知ヌクレオチ
ド鋳型と確実に比較できる。

【００５１】 実施例４：ウェスタンブロット解析による血液中の抗ＭＴＶ抗体の検出 よく特徴づけられたバキュロウィルス発現系と同様の方法で昆虫細胞内におけ
る組換えタンパク質の安定した生産を可能にするInsectSelect^TM系（Invitrogen
）を用いて組換えＭＴＶタンパク質を生成できる。これは、持続的に高品質のタ
ンパク質を産生する安定な細胞系の創製を可能にするウイルスの無い系である。
約９日で産生される安定な細胞系は、組換えタンパク質の持続的な長期生産に使
用できる。InsectSelect^TM発現系は、安定的に発現する昆虫細胞系を選択するた
めの抗生物質抵抗性遺伝子を保有するプラスミドベクターに基づいている。この
発現ベクターは、遺伝子発現用のDouglas Fir Tussoc moth OpMNPVバキュロウィ
ルス由来の速効性初期プロモーター、OpIE2を使用する。OpIE2は、蚊及び双翅類
細胞系のみならず鱗翅目（Sf9,5121,High Five^TM（Invitrogen））内で強い転写
プロモーターである。発現ベクターpIZ/V5-His（Invitrogen）は、複数のクロー
ニング部位と、昆虫細胞内の組換えタンパク質の生産及び解析を単純にするいく
つかの特徴とを有する。それは、安定的に形質移入される細胞、Ｖ５エピトープ
をコードするＣ末端タグ、及びＣ末端ポリヒスチジン（6xHis）配列の迅速な選
択を可能にするZeocin抵抗性遺伝子を包含する。これら後者の特徴は、抗Ｖ５抗
体（Invitrogen）による迅速なタンパク質検出及びポリヒスチジンに結合する樹
脂によるタンパク質精製を容易にする。ＭＭＴＶ関連タンパク質用のこれとは別
の真核生物発現系は、インビトロ転写されかつキャップされたｍＲＮＡを有する
インビトロウサギ網状赤血球ライセート系（Promega）又はSindbisウイルス発現
系（Invitrogen）である。

【００５２】 ＭＭＴＶ関連遺伝子は、ｐＧＥＸベクター（Pharmacia）にクローン化され、
かつ細菌内で発現されてイムノブロット研究用グルタチオンＳ-トランスフェラ
ーゼ（ＧＳＴ）タンパク質で組換え融合タンパク質を構成することもできる。こ
の系は、組換えタンパク質の生産、単離、及び精製の容易さが少しもない、タン
パク質発現の他の方法論と比べていくつかの利点を有する。ＧＳＴタンパク質で
生成される融合タンパク質は通常可溶性で、細胞ライセートからの回収を可能に
する。精製時に変性条件が必要ないので、該タンパク質の抗原及び酵素特性が維
持されることが多い。さらに、ＧＳＴ融合タンパク質は、グルタチオン被覆ビー
ズ又はカラム上にＧＳＴを固定化することによって効率的かつ迅速に精製し、還
元型グルタチオンで溶出することができる。

【００５３】 ウェスタンイムノブロットを行うため、ＭＴＶタンパク質を溶解緩衝液に（0.
25Ｍトリス塩基、ｐＨ6.8、４％ドデシル硫酸ナトリウム、10％ジチオスレイト
ール、20％グリセロール、及び0.01％w/vブロモフェノールブルー含有）に溶解
し、３分間100℃に加熱し、10％ポリアクリルアミドゲル上でドデシル硫酸ナト
リウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ-ＰＡＧＥ）に供する。これ
らタンパク質を、20％メタノールを有するトリス-グリシン（ｐＨ8.3）緩衝液中
のニトロセルロース膜（Protran^TM；Schleicher＆Schuell）に電気泳動的に移動
させてよい。ブロットを遮断緩衝液内で（0.02Ｍトリス、0.1Ｍ ＮａＣｌ、熱失
活ヤギ血清、0.01チメロサール、及び５％脱脂粉乳）、試験するヒト又は動物由
来の血清又は血漿と共に一晩中インキュベートしてよい（１：100希釈又は最適
希釈）。第２の抗体、すなわち遮断緩衝液中１：500又は１：1,000希釈されたビ
オチン化抗ヒト（又は他の種）ＩｇＧヤギ抗体と、アビジン−西洋わさびペルオ
キシダーゼとのインキュベーションを２時間室温で行ってよい。イムノブロット
は、7.8mM 4-クロロ-1-ナフトール及び0.03％過酸化水素で展開させることがで
きる。ＭＴＶタンパク質に相当するバンドを走査して定量化し、かつ画像解析ソ
フトウェア（NIH Image）で処理する。

【００５４】 実施例５：エンザイムリンクドイムノアッセイによる抗ＭＴＶ抗体の検出 ＭＴＶタンパク質に特異的に結合する抗体は、該抗体用標的としてＭＴＶタン
パク質又は複数のＭＴＶタンパク質によるエンザイムリンクドイムノアッセイを
用いて検出することができる。この方法では、バキュロウィルス／昆虫細胞培養
系のような発現系で産生された或いはウイルス調製品から精製されたＭＴＶタン
パク質を、複数ウェルのプラスチック製微量定量プレート内のウェル底部に結合
する。ヒト又は他の種由来の血清又は血漿を、経験的に決定された最適希釈度に
希釈し、かつ１時間から一晩中約25℃（室温）でインキュベートする。Tween(登
録商標)20（Aldrich）又はNP-40（Igepal^TM CA-630として容易に入手可能、Sigm
a）清浄剤を含有する食塩水内で自動化プレートウォッシャーを用いてウェルを
３回洗浄する。ＭＴＶタンパク質に結合された抗体は、ウェルを経時的にビオチ
ン化されたヤギの抗ヒト免疫グロブリンを含有する緩衝液、次いで西洋わさびペ
ルオキシダーゼに結合されたアビジン、最後に西洋わさびペルオキシダーゼ用の
着色反応生成物を生成する基質3,3',5,5'-テトラメチルベンジジンと反応させる
ことによって検出することができる。各工程間に、典型的にTween(登録商標)20
又はNP-40清浄剤を含有する食塩水内で自動化プレートウォッシャーを用いてウ
ェルを３回洗浄する。各ウェル内で起こる着色反応は、分光光度計プレートリー
ダーを用いて定量化される。着色反応生成物の量は、元の試料中に存在するＭＴ
Ｖに対する抗体の量に比例する。

【００５５】 実施例６：免疫組織化学を用いたＭＴＶレトロウイルスタンパク質の現場検出 ＭＴＶレトロウイルスタンパク質は、免疫組織化学的アッセイによって組織試
料内で検出することができる。この方法では、バキュロウィルス／昆虫細胞培養
系のような発現系内で産生され、或いはウイルス調製品から精製されたＭＴＶタ
ンパク質を用いて、本技術の当業者には周知の方法でモノクロナール又はポリク
ロナール抗体を生成できる。これら抗体をビオチン、フルオレッセイン、西洋わ
さびペルオキシダーゼ又はこの目的で使用される他の標識のような検出部分で標
識化することができる。標識化された抗体調製品を経験的に決定された最適希釈
度に希釈し、固定若しくは凍結された薄切片又はＭＴＶタンパク質の存在を試験
すべき試料由来の細胞調製品と共にインキュベートする。用いる標識のタイプに
よって指示されるように試料を処理し、ＭＴＶレトロウイルスタンパク質に対す
る抗体の結合性は、顕微鏡、オートラジオグラフィー、フローサイトメトリー等
によって、この場合もやはり標識部分のアイデンティティによって指示されるよ
うに検出することができる。

【００５６】 実施例７：ヒト内でヒト乳癌ウイルスに対する免疫応答を誘発可能な医薬組成 物の調製 ヒト又は動物内でＭＴＶタンパク質に対する免疫応答を誘発するために使用さ
れる医薬組成物は、以下のように開発することができる。上述のバキュロウィル
ス／昆虫細胞培養系発現系内で産生され、或いはウイルス調製品から精製された
ＭＴＶタンパク質は、カラムクロマトグラフィー及び／又は当業者によって通常
利用されるいずれの他の方法論によっても広範囲に精製することができる。精製
されたＭＴＶタンパク質は、適宜のアジュバント調製品（現在、ミョウバンがヒ
ト用に承認されている唯一のアジュバントである)と混合し或いはエマルジョン
にしてワクチンを製造する。この免疫原性組成物を標的動物中に皮下又は皮内注
射することができる。

【００５７】 本明細書で開示及び特許請求の範囲に記載されているすべての組成物及び方法
は、本開示に照らして過度の実験を行うことなく製造かつ実施することができる
。この発明の組成物及び方法は、好ましい実施形態というかたちで記述されてい
るが、当業者には本発明の概念、精神及び範囲から逸脱することなく、本明細書
に記載された組成物と方法及び該方法の工程又は工程の順序に変化を加えうるこ
とは明らかである。さらに詳細には、同一若しくは同様の結果を達成しながら、
本明細書に記載された物質を化学的及び生理学的の両方で関連する特定の物質と
置換できることは明白である。本技術の当業者にとって明らかなこのような同様
の置換及び変形のすべては、特許請求の範囲によって定義されるように、本発明
の精神、範囲及び概念内にあると考えられる。

【００５８】 （参考文献） 以下の参考文献は、ここに示した参考文献に、例示的な手続上の又は他の補足
的な詳細を提供する範囲に、参照によって明確にここに組み込まれる。

【００５９】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト乳癌組織由来のＭＭＴＶに関連する配列の増幅結果を示す。

【図２】 健康な対照の血液由来のＭＭＴＶに関連する配列の増幅の例を示す。

【図３】 ＨＭＴＶ ｍＲＮＡのリボヌクレアーゼ保護アッセイによる検出の例を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ０７Ｋ 16/10 ４Ｃ０８７ Ｃ０７Ｋ 14/15 Ｃ１２Ｎ 1/19 ４Ｈ０４５ 16/10 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｍ 5/10 33/566 Ｃ１２Ｑ 1/68 33/574 Ｃ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/574 5/00 Ｂ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA32 BA51 DA02 EA04 FA02 GA11 HA01 HA14 HA15 4B063 QA01 QQ10 QR32 QR55 QS34 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 DA14 4B065 AA90X AA97Y AB01 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA03 AA06 AA07 BA01 BA02 BA08 BA22 BA23 CA53 CA56 DA27 NA14 ZA812 ZB262 4C087 AA01 AA02 AA03 BC83 MA02 NA14 ZA81 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA01 EA28 EA31 EA51 FA74

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下を有するＤＮＡ配列を含む単離ＤＮＡ分子： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
   も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
   個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
   50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
   少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
   れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
   の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
   くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
   配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
   62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
   くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
   れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
   5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
   号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性。
2. 【請求項２】 配列番号２、３、４、５、６、７、８、１０、２１、２３、
   ２５、２７、若しくは２９を含む請求項１に記載の単離ＤＮＡ分子。
3. 【請求項３】 前記ＤＮＡ配列がヒト、アカゲザル、又はネコ由来である請
   求項１に記載の単離ＤＮＡ分子。
4. 【請求項４】 さらに検出部分を含む請求項１に記載の単離ＤＮＡ分子。
5. 【請求項５】 希釈剤に懸濁又は溶解されている請求項１に記載の単離ＤＮ
   Ａ分子。
6. 【請求項６】 前記希釈剤が緩衝水溶液である請求項５に記載の単離ＤＮＡ
   分子。
7. 【請求項７】 前記ＤＮＡが約0.1ng/μl〜100μg/μlの濃度で存在する請
   求項５に記載の単離ＤＮＡ分子。
8. 【請求項８】 以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードさ
   れる精製ポリペプチド： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
   も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
   個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
   50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
   少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
   れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
   の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
   くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
   配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
   62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
   くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
   れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
   5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
   号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性。
9. 【請求項９】 配列番号１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０
   、２２、２４、２６、２８、若しくは３０である請求項８に記載の精製ポリペプ
   チド。
10. 【請求項１０】 医薬組成物中に存在する請求項８に記載の精製ポリペプチ
    ド。
11. 【請求項１１】 以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコード
    されるポリペプチドを認識する抗体であって： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性； 前記抗体が前記ポリペプチドによって産生された抗体。
12. 【請求項１２】 モノクロナール抗体である請求項１１に記載の抗体。
13. 【請求項１３】 以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子に対応するＲＮ
    Ａ： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性。
14. 【請求項１４】 ベクターに組み込まれている請求項１に記載の単離ＤＮＡ
    分子であって；前記ＤＮＡ配列が異種プロモーターの転写調節下にある単離ＤＮ
    Ａ分子。
15. 【請求項１５】 以下の細胞型の少なくとも１種内で前記ＤＮＡ配列を発現
    できる請求項１４に記載のベクター：昆虫細胞、細菌細胞、鳥類細胞、イースト
    細胞、又は哺乳類細胞。
16. 【請求項１６】 前記ベクターが、以下の細胞型の少なくとも１種内でエピ
    ソーム複製又は染色体組込み可能である請求項１４に記載のベクター：昆虫細胞
    、細菌細胞、鳥類細胞、イースト細胞、又は哺乳類細胞。
17. 【請求項１７】 以下の工程を含む乳癌ウイルスＤＮＡの存在を検出する方
    法： i）以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子を含むＤＮＡを含有している疑い
    のある生体試料を得る工程： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性； ii）工程i）で定義されるような疑いのあるＤＮＡ配列を増幅するためにポリメ
    ラーゼ鎖反応を行う工程；及び iii）工程ii）で生成されたアンプリコンの配列を決定するか、又はそうでなく
    ても特徴づけて、前記試料中に工程ｉ）で定義されるようなＤＮＡ配列が存在す
    るか否かを決定する工程。
18. 【請求項１８】 前記生体試料がヒト、アカゲザル、又はネコから得られる
    請求項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 １種以上の乳癌ウイルスポリペプチドを認識する抗体の存
    在を検出する方法であって、以下の工程を含む方法： i）乳癌ウイルス抗体に特異的な抗体を含有する疑いのある試料を得る工程： ii）以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる少なくとも
    １種の精製ポリペプチドを得る工程： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性； iii）工程i）の前記試料と、工程ii）の前記ポリペプチドとを用いて、免疫化学
    的解析を行う工程；及び iv）工程iii）の結果を解析して、前記試料中に工程ii）の前記ペプチドと特異
    的に相互作用する抗体が存在するか否かを決定する工程。
20. 【請求項２０】 工程iii）の免疫化学的解析がウェスタンブロット解析で
    ある請求項１９に記載の方法。
21. 【請求項２１】 工程iii）の免疫化学的解析がエンザイム-リンクドイムノ
    ソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）である請求項１９に記載の方法。
22. 【請求項２２】 １種以上のポリペプチドがenv、又はgag遺伝子由来であり
    、かつ前記抗体が以下のポリペプチド配列番号１２、１３、１４、１５、１６、
    １７、１８、２０、２２、２４、２６、２８、若しくは３０の１種以上に特異的
    である請求項１９に記載の方法。
23. 【請求項２３】 工程ii）の前記試料が、ヒト、アカゲザル、又はネコ由来
    の抗体を含む請求項１９に記載の方法。
24. 【請求項２４】 乳癌ウイルスからＤＮＡ又はＲＮＡを検出するための診断
    用キットであって、以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子の試薬を包含する
    前記キット： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性；
25. 【請求項２５】 乳癌ウイルスに対する抗体を検出するための診断用キット
    であって、以下の１つ又は両方を含む試薬を包含する前記キット： i）以下を有するＤＮＡ配列を含むＤＮＡ分子によってコードされる１種以上の
    ポリペプチド： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性；又は ii）ステップi）に従うポリペプチドに特異的な抗体。
26. 【請求項２６】 以下の工程を含む、試料中のＭＴＶ ＲＮＡの検出方法： i）以下を有する１種以上のＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡを含有する
    疑いのある試料を得る工程： ａ）配列番号２、３、４、５、７、８、２１、２５、若しくは２７と少なくと
    も99％の同一性；又は ｂ）以下の１つ以上と少なくとも99％の同一性：配列番号２の少なくとも340
    個の相接塩基、配列番号３のヌクレオチド１〜380で表される配列の少なくとも1
    50個の相接ヌクレオチド、配列番号４のヌクレオチド１〜400で表される配列の
    少なくとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号５のヌクレオチド１〜360で表さ
    れる配列の少なくとも130個の相接ヌクレオチド、配列番号６の少なくとも130個
    の相接ヌクレオチド、配列番号７のヌクレオチド１〜380で表される配列の少な
    くとも140個の相接ヌクレオチド、配列番号８のヌクレオチド20〜462で表される
    配列の少なくとも210個の相接ヌクレオチド、配列番号２１のヌクレオチド97〜4
    62で表される配列の少なくとも160個の相接ヌクレオチド、配列番号２３の少な
    くとも170個の相接ヌクレオチド、配列番号２５のヌクレオチド337〜462で表さ
    れる配列の少なくとも100個の相接ヌクレオチド、配列番号２７のヌクレオチド8
    5〜462で表される配列の少なくとも300個の相接ヌクレオチド、若しくは配列番
    号２９の少なくとも200個の相接ヌクレオチド；又は ｃ）配列番号１０と少なくとも92％の同一性；； ii）ＲＮアーゼタンパク質アッセイ（ＲＰＡ）を行う工程；及び iii）前記ＲＰＡの結果を解析して、前記試料中に工程i）で定義されるようなＲ
    ＮＡが存在するかを決定し、また任意に前記ＲＮＡを定量化する工程。