JP2003502631A - 生物学的由来流体を試験する方法及び装置 - Google Patents

生物学的由来流体を試験する方法及び装置

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    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/27—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands using photo-electric detection ; circuits for computing concentration
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Abstract

(57)【要約】 第１の波長範囲での吸収スペクトルは、単に理論的な曲線と、第１の波長範囲での第１の純物質のスペクトルとを組み合わせることによって近似する。次いで、第２の波長範囲で、仮想曲線と、既に決定された濃度を有する第１の成分のスペクトル６４と、第２の純成分のスペクトル６５とを組み合わせることにより測定スペクトル６２を近似することによって、この推定を繰り返す。仮想曲線は、勾配及び縦座標セクションによって定義される直線であるのが好ましい。この血液定性試験を利用することによって、ビリルビン及びヘモグロビンを定量的に決定することができ、同時に、差スペクトルを用いることによって、脂質成分と共にバックグラウンドを定性的に調べることができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、請求項１の前文に記載の流体を試験するための方法に関する。本発
明は更に、その方法を実施するための装置にも関する。
【０００２】 臨床検査は、全血の血清又は血漿について日常的に行われている。それら検査
では通常、分光測定による検出を容易にする発色団が発生した後に終了する一連
の諸反応が採用される。大抵の分光試験の精度は、幾分、生体外干渉に悪影響を
受ける。生体外干渉は、生化学的分析が生物学的流体［例えば、血清、血漿又は
尿］を構成する複合マトリックス中で行われるという事実によって生じる。これ
ら流体には、試験の試薬と反応し得る化学基を有するか又は目標検体の物理特性
若しくは光学特性を持つこともある多くの化合物が含有されている。更に、体液
の化学組成は、疾病プロセスの特質及び程度によって変化する。生体外干渉は、
２つの種類、即ち、光学的干渉と化学的干渉とに分類することができる。最も一
般的に観察される干渉は、溶血、黄疸及び脂肪血である。外来診療所患者及び入
院患者から得られる試料の約３０％は、溶血しているか、黄疸にかかっているか
又は高脂血症にかかっている。溶血が起こる主な原因は未熟者による採血又は試
料の調製であり、黄疸の主な原因は黄疸症であり、また、脂肪血の主な原因は採
血前の脂肪栄養物摂取である。
【０００３】 試料の品質モニタリングの目的は、意味のある精確な結果を提供するために、
十分に自動化された臨床検査を実施する前に、干渉性物質であるヘモグロビン、
ビリルビン及び脂質を決定することである。もし、試料が干渉物質で汚染されて
いる場合、その検査は行われないか、又はその検査結果は信頼できないことを示
すように合図が成されることがある。特に、そのような検査は、完全自動で且つ
個々の血液試料のいかなる特性又は諸性質をも考慮しないで、試料の分析のほと
んどを行う臨床化学分析装置の使用を関連させることが望ましい。
【０００４】 米国特許第４，２６３，５１２号明細書には、希釈された血清試料について多
数波長測定を行って、ヘモグロビン及びビリルビンを半定量的に試料の品質モニ
タリングするための既知の方法と装置とが記述されている。この方法には次の諸
欠点がある： − この方法は、試料に含有されるいかなる干渉性物質の定量をも与えない。
更に、 − この方法は、試料に関し特別で特異的な条件を必要とする。別の方法は、
干渉性物質の濃度を、クロマトグラフィを用いるか又は臨床化学的に決定するこ
とである。クロマトグラフィによる測定は、長い測定時間と精密機器とを必要と
するのに対して、臨床化学的決定は、試薬なし測定には適していない。
【０００５】 従って、本発明の目的は、生体外（in vitro）診断検査によって分析されるべ
き流体生物学的試料の中の、少なくとも１種の干渉性成分の濃度を迅速に推定す
る方法を提供することである。
【０００６】 上記目的は、請求項１に規定される本発明の方法によって達成される。残りの
諸請求項は、その方法の好ましい態様及び応用と、その方法を実施するための手
段とを規定する。
【０００７】 本発明の好ましい方法において、純粋状態での諸成分の第１の成分の吸収スペ
クトルと、バックグラウンドの吸収を近似する関数との組合せ又は重ね合わせ（
superposition，重畳）は、決定されるべき第１の成分が有意的又は特徴的形状
の吸収曲線を示す波長範囲で分析されるべき流体の測定スペクトルに当てはめら
れる。バックグラウンドの吸収を近似する関数は、例えば、直線であり、この場
合、その波長範囲は、予想されるバックグラウンド吸光スペクトルが直線に類似
する範囲で選定するのが好ましい。
【０００８】 本発明は、図面を参照しながら例示的諸具体例に言及しながら更に説明する。
【０００９】 可視及び近赤外の範囲での光学的吸収分光分析法によって血清又は血漿を試料
の品質モニタリングするための本発明の方法を、以下に記述する。目標物の測定
範囲は、測定精度２０％で、ヘモグロビン０．１〜１０ｇ／リットル、ビリルビ
ン２〜２０ｍｇ／ｄｌ（１ｄｌ＝０．１リットル）、及び脂質１００〜２０００
ｍｇ／ｄｌである。本発明の方法によって行われる推定によって、例えば、ヘモ
グロビン及びビリルビンの含有量が分かる。光散乱と脂質濃度の間の再現性のあ
る関係が欠如しているため、光学的吸収分光分析法によって脂質濃度を定量する
ことはできない。従って、差吸収スペクトルは、目標試料の吸収スペクトルから
ヘモグロビン及びビリルビンの濃度を減じることによって得られる。その差吸収
スペクトルには、脂質及びマトリックス（例えば、血清又は血漿）のスペクトル
寄与率（spectral contributions）が含まれており、それらの寄与率は、続いて
、スペクトル異形のために調べられることがある。この方法は、一連の１２５個
の合成試験試料と一連の９２個の実在血清とを使用し、実験的に吟味した。分光
分析測定装置の性能に対する精度及び再現性について、以下に記述し解説する。
【００１０】 試料の品質モニタリングのための光学的吸収分光分析法の基本構成を図１に示
す。複数の光波長光源２によって発せられた光線１は、レンズ３によって平行な
光束を作り（collimated）、それによって、スペクトル密度Ｉo（λ）の光が目
標試料６に向けられる。その目標試料内の光学通路は「ｄ」によって示す。レン
ズ４によって、密度Ｉ（λ）の透過光を集める。次いで、この透過光は、入力５
を有するスペクトル波長分析器によって検出する。
【００１１】 光学的吸収量は一般に、吸収Ｅ（λ）によって特徴付けられ、この吸収Ｅ（λ
）は、
【００１２】 目標試料中にＪ個の干渉性物質［例えば、ヘモグロビン、ビリルビン及び脂質
（即ち、Ｊ＝３）］が存在する場合、目標試料の吸収Ｅ（λ）は、線形結合： ［式中、Ｋj及びＣjはそれぞれ、干渉性物質ｊ（ｊ＝１，２，）］によって、記
述することができる。目標試料の希釈率は、ｑdil、即ち、（初期濃度）：（試
料濃度）（１：ｑdil）によって表わされる。Ｅgは、マトリックス、即ち、血清
又は血漿の吸収特性である。図２において、可視及び近赤外の範囲における、ヘ
モグロビンの吸収係数ＫH、ビリルビンの吸収係数ＫB、及び脂質の吸収係数ＫL
［イントラリピド２０％（Pharmacia，スウェーデン）］はそれぞれ、線１０、
１１及び１２によって表わされる。標準血清［対照血清Ｎ（ヒト）（Hoffmann-L
aRoche，スイス）］の吸収スペクトルＥgは、図２の点線１３によって表わされ
る。
【００１３】 式（２）における４個の未知パラメータ、即ち、干渉物質であるヘモグロビン
の濃度（ＣH）と、ビリルビンの濃度（ＣB）と、脂質の濃度（ＣL）と、マトリ
ックス部分に対応する吸収成分（Ｅg）とは、試料の品質モニタリングの範囲内
で、統計的に独立した吸収値Ｅ（λn）（ｎ＝１，…，４）の最小の数Ｎmin＝４
によって決定されるべきである。ＣH、ＣB及びＣLの最良推定値を得るために、
式（２）で定義される吸収スペクトルの数学的モデルを、Ｎ（＞Ｎmin）の測定
値Ｅ（λn）（ｎ＝１，２，…，Ｎ）に最小自乗法により当てはめることによっ
て、一層再現性のある結果が期待される。
【００１４】 しかし、実在血清中における脂質の特定の吸収係数ＫL（λ）は、再現性がな
い。これは主として、脂質中の散乱中心の大きさの統計的分布に起因する。 更に、図２に示す通り、波長に対して単調減少する脂質の吸収スペクトルには
、典型的（局部的）特徴が欠如している。従って、後方のスペクトルは、マトリ
ックスに対応する吸収スペクトルの成分（Ｅg）から識別することができない。
【００１５】 図３は、ヘモグロビン及びビリルビンの吸光寄与率が減じられた、実在全血血
清の吸収スペクトル３１を示す。従って、これらの差スペクトル３１は、脂質の
スペクトル寄与率とマトリックスのスペクトル寄与率との和を表わす。示される
これら吸収スペクトルは、λ＝７００ｎｍでの吸光に正規化される。実線３０は
イントラリピドの参照溶液の吸収スペクトルを示し、点線３１は、ヘモグロビン
及びビリルビンの吸光寄与率を減じた後の、実在全血血清の幾つかの試料につい
ての吸収スペクトルを示す。
【００１６】 それ故に、ヘモグロビン濃度（ＣH）、ビリルビン濃度（ＣB）及び脂質濃度（
ＣL）の定量は、目標試料の光学的吸収スペクトルを測定し、次いで、式（２）
のモデルを測定値Ｅ（λn）に当てはめることによっては実行できないように思
える。
【００１７】 従って、本発明によると、最初にヘモグロビン濃度（ＣH）を、次いで、ビリ
ルビン濃度（ＣB）を逐次決定して、測定された吸収スペクトルＥ（λ）からヘ
モグロビン濃度及びビリルビン濃度を減じることによって差スペクトルＥdiffを
得ることが提案される。このように、差スペクトルＥdiffは、目標試料の吸収ス
ペクトルＥ（λ）に対する、脂質の寄与率（ＥL）及びマトリックスの寄与率（
Ｅg）の和を表わし、しかも、付加的に、全スペクトル範囲に渡ってのスペクト
ルの異形（anomalies，特徴的型からのずれ）が調べられる場合がある。
【００１８】 図４のブロック図に、試料の品質モニタリングを行うための、本発明によって
提案される測定・推定の方法の例をまとめる。 この方法は、限定された波長範囲λrにおける差スペクトルＥdiff＝Ｅg＋ＥL
を１つの直線によって近似することに基づいている。
【００１９】 第１の段階３２では、ヘモグロビン濃度が、波長範囲 において第１の測定吸収スペクトルＥ1（λ）から決定される。スペクトルＥ1（
λ）を含む１組の吸光値はブロック３５によって表わされる。図２に示される通
り、波長範囲 において、ヘモグロビンは典型的なスペクトル特性を有し、吸収スペクトルに対
するビリルビンの寄与率は、ある程度無視することができる（図２）。
【００２０】 曲線当てはめ段階３７では、式（３）及び（４）によって定義される吸収スペ
クトルの数学的モデルが、線形最小自乗法の演算手順によって、範囲λrhにおい
て分光分析により測定されたＮ1個の値Ｅ1（λn）（ｎ＝１，２，…，Ｎ1）に当
てはめられる。
【００２１】 曲線当てはめ段階３７において、吸収スペクトルＥ1（λn）は、 ［式中、ＥH（λ）はヘモグロビンの寄与率であって によって定義され；Ｅd1は脂質の寄与率とマトリックスの寄与率との和によって
線形的に近似され、しかも、Ｅd1は、Ｅd1＝ａ0h＋ａ1hλによって定義される関
数である］によって近似される。パラメータａ0h及びａ1hは物理的意義を何ら持
たないことに注意。
【００２２】 当てはめ段階３７から、ヘモグロビン濃度ＣH及びａ0h、ａ1hの最良推定値が
送り出される。この組の値は、ブロック３８によって表わされる。 第２の段階３３では、ビリルビン濃度が、波長範囲 において第２の測定吸収スペクトルＥ2（λn）から決定される。スペクトルＥ2
（λ）を含む１組の吸光値はブロック３５によっても表わされる。
【００２３】 曲線当てはめ段階４１では、式（５）及び（６）によって定義される吸収スペ
クトルの数学的モデルが、線形最小自乗法の演算手順によって、波長範囲λrbに
おいて分光分析により測定されたＮ2個の値Ｅ2（λn）（ｎ＝１，２，…，Ｎ2）
に当てはめられる。
【００２４】 曲線当てはめ段階４１において、吸収スペクトルＥ2（λn）は、 ［式中、 はビリルビンの寄与率であり；ＥHは前に決定したヘモグロビンの寄与率であり
；また、Ｅd2は脂質の寄与率とマトリックスの寄与率との和によって線形的に近
似され、しかも、Ｅd2は、とりわけＥd2＝ａ0b＋ａ1bλによって、また、一般的
には、Ｅdk（λ，ａi,Sk）（式中、ｉは０から少なくとも１までの範囲にわたる
）によって定義される関数である］によって近似される。パラメータａ0b及びａ 1b は物理的意義を何ら持たないことに注意。
【００２５】 当てはめ段階４１から、ビリルビン濃度ＣB及びａ0b、ａ1bの最良推定値が送
り出される。この組の値は、ブロック４２によって表わされる。 更なる方法の段階３４では、式（２）、（４）及び（６）が用いられ、また、
差スペクトルＥdiffは、式 Ｅdiff（λ）＝Ｅ（λ）−ＥH（λ）−ＥB（λ） (7) によって得られる。
【００２６】 Ｅdiffの値の組は、ブロック４５によって表示される。次いで、この組の値に
よって、スペクトル異形を調べることができ、ブロック４６によって表示される
結果となり、これによって、とりわけ、目標試料の異常な脂質含有量を表示する
ことができる。 本発明による方法は、目標試料中に含有されるｋ個の純物質の濃度を決定する
のに使用することができる。
【００２７】 そのために、一層概括的に言えば、本発明は、 （ａ）第１の選択した波長範囲λ＝λ1,1〜λ1,nにおいて、液体試料の第１の
吸収スペクトルＥ1（λ）を測定する過程と、 （ｂ）第１の測定吸収スペクトルＥ1（λ）に、近似スペクトル を当てはめる過程であって、該近似スペクトル が、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅd1（λ，ａi,S1）（式
中、ｉは０から少なくとも１までの範囲にわたる）と、決定すべき諸成分の第１
の純成分の予定された吸収スペクトルＥS1（ＣS1，λ）との組み合わせであり；
前記の第１の干渉性成分の濃度ＣS1と前記係数ａi,S1の少なくとも２つとを変化
させることによって前記当てはめ過程を実施して、前記の第１の干渉性成分の濃
度を決定するために、第１の測定吸収スペクトルＥ1（λ）と前記近似スペクト
ル との間の偏差値が最小になるようにし；しかも、前記の第１の干渉性成分の濃度
ＣS1を明白に決定することができるように、前記の第１選択波長範囲を選定する
、前記当てはめ過程と、 を含む。
【００２８】 好ましい態様において、近似スペクトル は、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅd1（λ，ａi,S1）と、
濃度ＣS1の第１の純成分の予定された吸収スペクトルＥS1（ＣS1，λ）との和で
ある。
【００２９】 目標試料の第ｋ番目の純成分の濃度を決定するために、本発明の方法は、 （ａ）少なくとも１つの更に選定された波長範囲λ＝λk,1〜λk,n（式中、ｋ
≧２）において、前記液体試料の少なくとも１つの更なる吸収スペクトルＥk（
λ）を測定する過程と、 （ｂ）前記の少なくとも１つの更に測定された吸収スペクトルＥk（λ）に、
少なくとも１つの更なる近似スペクトルＥk（λ）を当てはめる過程であって、
該少なくとも１つの更なる近似スペクトル が、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅdk（λ，ａi,Sk）（式
中、ｉは０から少なくとも１までの範囲にわたる）と、前もって決定した（ｋ−
１）個の純成分の、前もって決定した吸収スペクトルＥSL（ＣSL，λ）（式中、
ＬはＬ＝１〜ｋ−１の範囲で変化する）と、決定すべき濃度ＣSkの第ｋ番目の純
成分の予定された吸収スペクトルＥSk（ＣSk，λ）との組み合わせであり；前記
濃度ＣSkと前記係数ａi,Skの少なくとも２つとを変化させることによって前記当
てはめ過程を実施して、前記の第２の成分の濃度を決定するために、測定吸収ス
ペクトルと近似スペクトルとの間の偏差が最小になるようにし；しかも、前記の
第ｋ番目の純成分の濃度ＣSkを明白に決定することができるように、前記の少な
くとも１つの更なる選択波長範囲を選定する、前記当てはめる過程と、 を更に含む。
【００３０】 好ましい態様において、近似スペクトル は、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅdk（λ，ａi,Sk）と、
前もって決定した（ｋ−１）個の純成分の、前もって決定した吸収スペクトルＥ SL （ＣSL，λ）［式中、ＬはＬ＝１〜（ｋ−１）の範囲で変化する］と、濃度Ｃ Sk の第ｋ番目の純成分の予定された吸収スペクトルＥSk（ＣSk，λ）との和であ
る。
【００３１】 再現性 範囲λrhでの測定吸光値Ｅ（λn）の最小の数Ｎmin＝３を使用し、上述の当て
はめ段階３７によって式（３）からＣHを決定する場合、及び範囲λrbでの測定
吸光値Ｅ（λn）の最小の数Ｎmin＝３を使用し、上述の当てはめ段階４１によっ
て式（５）からＣBを決定する場合、ヘモグロビンの測定濃度ＣHの再現性及びビ
リルビンの測定濃度ＣBの再現性は、分析により計算することができる。
【００３２】 測定濃度Ｃの再現性は通常、変動係数ＣＶ＝σc／Ｅ｛ｃ｝［式中、σx及びＥ
｛ｘ｝はそれぞれ、｛ｘ｝の標準偏差及び統計的期待値（平均値）を表わす］に
よって特徴付けられる。式（１）、（２）及び（７）を用いれば、測定濃度Ｃj
の再現性は通常、変動係数ＣＶが、関係式 ｛式中、 は各々測定範囲λrの中心波長であり；Ｄ＝［ｌｎ（１０）／４］・［２Ｋj（λ 2 ）−Ｋj（λ1）−Ｋj（λ3）］・［ｄ／ｑdil］；ｌｎ（ｘ）は（ｘ）の自然対
数である｝によって、（物理的に）測定された光学的強度σI／Ｉoの再現性に関
連付けられることが容易に分かる。
【００３３】 図４で、中心波長 は参照番号４７によって示される。 脂質及びマトリックスのバックグラウンドの寄与率Ｅd（λ）は測定濃度Ｃjの
再現性を低下させることに注意。
【００３４】 Ｎ（＞Ｎmin）個の統計的に独立した測定値Ｅ（λn）が、線形最小自乗法の演
算手順のために使用されるとき、測定ヘモグロビン濃度の変動係数ＣＶも測定ビ
リルビン濃度の変動係数ＣＶも、関係式 ［式中、Ｍ＝Ｎ−Ｎminは余剰測定値の数である］によって、式（８）に関連付
けられる。
【００３５】 図４には、測定ヘモグロビン濃度の変動係数ＣＶを演算するための方法の段階
４８と、測定ヘモグロビン濃度の変動係数ＣＶを演算するための方法の段階４９
とが表わされる。
【００３６】 式（９）から、測定濃度の再現性は、曲線当てはめの方法の段階のために考慮
される測定吸光値の数Ｎと共に増大することが分かる。数Ｎは、スペクトル分解
と、分光分析測定装置の試料採取速度と、波長範囲λrとによって与えられる。
【００３７】 波長範囲λrを拡張することによって、所定のスペクトル分解及び試料採取速
度のためのＮは増加するが、式（３）及び（５）における脂質の寄与率とマトリ
ックスの寄与率との和の線形近似値Ｅdは益々不精確になるということに注意す
べきである。変動係数ＣＶの値は、式（８）と（９）から計算されるが、次いで
、比較段階５０において、予定された限界値ＣＶlimと比較して、濃度測定の質
を特徴付けることができる。この比較によって、ＣＶ値がＣＶlimよりも大きい
ことが示される場合、これによって、結果（即ち、諸濃度及び差スペクトル）の
再現性が乏しいことに対する危険性の表示５１が与えられる。従って、その測定
値は、例えば、無視されるか、繰り返されるか、又は、信頼性の低いものとして
記録される。
【００３８】 最新式の分光計（Cary V，VARIAN，オーストラリア）を用いて、図１に示され
るような光学的吸収分光分析法に基づく試料品質モニタリングを実験によって調
べた。平行調整ビームは、約５×２ｍｍ2のスポットサイズを有した。試験試料
の光学距離は、ｄ＝１０ｍｍであった。試料の希釈率は、１：２０（ｑdil＝２
０）であった。試験試料のスペクトルは、波長範囲λ＝［３００，１２００］ｎ
ｍ、Δλ＝０．０５ｎｍのスペクトル分解、及びΔλS＝１ｎｍ／ピクセルのス
ペクトル試料採取速度で測定した。ヘモグロビン濃度ＣHは、波長範囲λrh＝［
５４５，５７５］ｎｍでのＮ1＝２８の測定値Ｅ（λn）に、式（３）及び（４）
のモデルを線形最小自乗法により当てはめることによって得た。ビリルビン濃度
ＣBは、波長範囲λrb＝［４８０，５４５］ｎｍでのＮ2＝６３の測定値Ｅ（λn
）に、式（５）及び（６）のモデルを線形最小自乗法により当てはめることによ
って得た。差吸収スペクトルＥdiffは、式（７）から得た。次いで、ヘモグロビ
ン及びビリルビンの測定濃度の再現性は、測定された光学的強度の再現性のため
のσI／Ｉo＝５・１０-5で、式（８）及び（９）に従って計算した。
【００３９】 例として、実験的に測定した、実在典型的な全血血清５５の吸収スペクトルＥ
（λ）を図５に示す。式（３）及び（５）中の、ヘモグロビン５７及びビリルビ
ン５９のための最良当てはめ吸光モデルはそれぞれ、バツ印及び丸い点によって
示される。最良当てはめのヘモグロビン濃度及びビリルビン濃度はそれぞれ、Ｃ H ＝０．１８ｇ／ｌ（ＣＶ＝１．５％）及びＣB＝０．６７ｍｇ／ｄｌ（ＣＶ＝０
．３％）である。また、差吸収スペクトルＥdiff（λn）６０も点線で示す。
【００４０】 図６及び７に、実在全血血清の他の例（即ち、それぞれ高いヘモグロビン含有
量、及び高度に黄疸の試料を有するもの）を示す。図６には、更に、異形の差ス
ペクトルが示される。この異形差スペクトルは単に一定であるが、付加的に約６
５０ｎｍ以上では波長が大きくなるにつれて、吸光が増大している。実線６２は
測定スペクトルであり、破線６４及び点線６５はそれぞれ、ヘモグロビンの寄与
及びビリルビンの寄与であり、一点鎖線６６は差スペクトルであり、それぞれ記
述した方法による結果から計算される。
【００４１】 精度 本方法の精度を調べるために、一連の１２５個の独立した試験試料のヘモグロ
ビン及びビリルビンの濃度を測定した。それら諸試料は、ヘモグロビン［ヘモリ
サット（Hemolysat）（Hoffmann-La Roche，スイス）］、ビリルビン［Ｂ−４１
２６ 混合異性体（Sigma，スイス）］及び脂質［イントラリピド２０％（Pharm
acia，スウェーデン）］が添加されている標準血清［対照血清Ｎ（ヒト）（Hoff
mann-La Roche，スイス）］を用いて調製した。ヘモグロビン、ビリルビン及び
脂質の添加濃度はそれぞれ、ＣH＝［０，０．１７，０．８３，３．３３，１５
］ｇ／ｌ、ＣB＝［０，１，２，１０，２０］ｍｇ／ｄｌ、及びＣL＝［０，５０
，１００，４００，１８００］ｍｇ／ｄｌであり、５・５・５の試験試料の組と
した。添加濃度に対する、光学的に測定したヘモグロビン濃度７０、及びビリル
ビン濃度７２を、図８及び９に示す。
【００４２】 ヘモグロビンの場合（図８）、線形最小自乗法当てはめ７４（ｃfit,h＝ｃ0,h ＋ｍhＣH）によって、オフセット濃度ｃ0,h＝０．１２ｇ／ｌ、及び勾配ｍh＝０
．９５が得られる。最良当てはめと測定値の間の相関係数は、ρ＝０．９９９で
ある。ビリルビンの場合（図９）、第２の線形最小自乗法当てはめ７６（ｃfit, b ＝ｃ0,b＋ｍbＣB）によって、オフセット濃度ｃ0,b＝１．６４ｍｇ／ｄｌ、及
び勾配ｍb＝０．９９９が得られる。最良当てはめと測定値の間の相関係数は、
ρ＝０．９９５である。対照血清Ｎ（ヒト）は、 の近似ビリルビン濃度を持つことに注意。更に、添加したヘモグロビン、ビリル
ビン及び脂質の量も精度が限定されていると言える。
【００４３】 次いで、一連の９２個の実在全血血清のヘモグロビン及びビリルビンの濃度を
測定した。それら濃度値は、ヘモグロビンがＣH＝［０，５］ｇ／ｌ、ビリルビ
ンがＣB＝［０，４５］ｍｇ／ｄｌの範囲であった。それら濃度は、基準値とし
て、臨床化学分析［Cobas（登録商標）Integra 700分析器（Hoffmann-La Roche
，スイス）］によって測定した。図１０及び１１に、臨床化学的に決定したヘモ
グロビン濃度９０（ビリルビン濃度９１）に対する、光学的に決定したそれら濃
度を示す。
【００４４】 それら結果により、本方法の感度は、おおよそ、ヘモグロビンが であり、ビリルビンが であることが分かる。基準値９３（９４）と、光学的に決定したヘモグロビン濃
度９０（ビリルビン濃度９１）の間の観測相関係数はそれぞれ、ρ＝０．９８０
及びρ＝０．９９６であった。臨床化学的方法も精度が制限される；即ち、光学
的に測定したビリルビン濃度の精度は、ヘモグロビン濃度決定の精度に影響を受
けるものの、ビリルビン濃度（図１１）はヘモグロビン濃度（図１０）よりも一
層優れた相関関係を示す［ヘモグロビン及びビリルビンの逐次決定は、上記参照
］。
【００４５】 比較のために、ベンチマークの日立方式（米国特許第４，２６３，５１２号明
細書）推定演算手順を用いて、光学的吸収スペクトルを評価した。基準値と日立
方式での決定濃度値の間の観測相関係数は、ヘモグロビンがρ＝０．８７９であ
り、ビリルビンがρ＝０．９９２であった。
【００４６】 再現性 測定したヘモグロビン及びビリルビンの濃度の変動係数ＣＶは、式（８）［式
中、σI／Ｉ0＝５・１０-5は測定した光学的強度の再現性であり；ヘモグロビン
のλrhの中心波長は であり；ビリルビンのλbの中心波長は であった］から計算した。図１２〜１５に、９２個の組の実在血清の光学的に測
定した、ヘモグロビン濃度（図１２）；ビリルビン濃度（図１４）；及び各々の
ＣＶ値（それぞれ図１３、１５）；を示す。図１２〜１５を検討すれば、再現性
は大きい濃度値で一層優れており；ヘモグロビン及びビリルビンに対する値は、
９２個の分析済み血清の内それぞれ８９個、９１個について、それぞれＣＶ＜１
０％、ＣＶ＜１％よりも一層優れていることが分かる。
【００４７】 低コスト光学的分光計の構成 次いで、低コスト光学的要素を用い、図１に示す光学的吸収分光分析法に基づ
く試料品質モニタリングを実験により調べた。複数の光波長の光源は、白色ハロ
ゲンランプ［ハロゲン ５Ｖ，５Ｗ， ＠λ＝５３０ｎｍ（MICROPARTS GmbH，ドイツ）］であった。平行調整ビームは
、おおよそＤ＝２ｍｍの直径を有した。試験試料の光学距離は、ｄ＝１０ｍｍで
あった。試料の希釈率は、１：２０（ｑdil＝２０）であった。透過光は、レン
ズ（焦点距離ｆ＝５ｍｍ）で集めて、コア直径φc＝１００μｍを持つ光ファイ
バーに接続した。光は、スペクトル分解 を持つ、低コストの平凹分光器ＰＣＳ［CSEM-Z，スイス］によって分光分析を行
った。試験試料のスペクトルは、波長範囲λ＝［４２１，７０４］ｎｍで、線状
フォトダイオード・アレー（linear photodiode array）［５１２画素；心間間
隔Δｘ＝２５ｎｍ］によって測定した。スペクトル試料採取速度は、Δλｓ＝２
．８ｎｍ／画素であった。測定された光学的強度は、σI／Ｉo＝５・１０-4であ
った。ヘモグロビン濃度ＣHは、波長範囲λrh＝［５４５，５７５］ｎｍでのＮ1 ＝１１個の測定値Ｅ（λn）に、式（３）及び（４）のモデルを最小自乗法によ
り当てはめることによって得た。ビリルビン濃度ＣBは、波長範囲λrb＝［４８
０，５４５］ｎｍでのＮ2＝２０個の測定値Ｅ（λn）に、式（５）及び（６）の
モデルを最小自乗法により当てはめることによって得た。差吸収スペクトルＥdi ff は、式（７）から得た。図１６及び１７にそれぞれ、図１０、１１及び１２〜
１５の９２個の組の血清の、最新式（Cary V）の分光分析法により測定したヘモ
グロビン及びビリルビンの濃度に対する、ＰＣＳにより測定した濃度を示す。ヘ
モグロビンの場合（図１６）、濃度範囲ＣH＜２ｇ／ｌでの線形最小自乗法の当
てはめ［Ｃfit,h＝Ｃ0,h＋ｍhＣH］によって、オフセット濃度Ｃ0,h＝０．０４
３ｇ／ｌと、勾配ｍh＝０．８５９とが得られる。最良当てはめ曲線とＰＣＳ測
定値の間の相関関係は、ρ＝０．９９７である。ビリルビンの場合（図１７）、
濃度範囲ＣB＜１５ｍｇ／ｄｌでの線形最小自乗法の当てはめ［Ｃfit,b＝Ｃ0,b
＋ｍbＣB］によって、オフセット濃度Ｃ0,b＝−０．０１０ｍｇ／ｄｌと、勾配
ｍb＝０．９４０とが得られる。最良当てはめ曲線とＰＣＳ測定値の間の相関関
係は、ρ＝０．９９８である。これらの結果によって、低コストの分光器は、試
料品質モニタリング目的のために容易に使用し得ることが分かる。
【００４８】 諸試料を試験することによって、試料の異常状態を示す結果が得られる場合、
試験装置により、例えば、次の信号又は反応： − 特に、異常試料が検出された場合、オペレータの注意を誘うために視覚的
及び／又は音響的に警報すること； − プリンターに結果（スペクトル、係数等）をプリントアウトすること； − 通常の臨床化学的試験の結果が真実であるか若しくはアーチファクト（ar
tefacts，人工物）の傾向があるかをオペレータが迅速に分かるように、分析器
のプリントアウト上にプリントすること；又は − 例えば、新たな試験試料を用いて、測定を自動的に繰り返すこと； の１つ以上を発生させることができる。
【００４９】 記述した本方法は、種々のアレンジにより、好ましくは自動分析器を伴って、
例えば次の通りに、実施することができる： − 定性試験は、分析器の光度測定サイトにおける第１の光度測定のパス（pa
ss，試み）として実施することができる。それによって、その分析器の能率は低
減する。なぜなら、この予備検査及び正規の光度測定パスが引き続いて行われる
（即ち、試料物質が消費されて追加の試料が必要である）からである。 − 追加の光度測定サイトが、定性試験のために提供される；
【００５０】 − ピペット［一層一般的に言えば、試験すべき流体のための、分析器の供給
装置］には、透明サイト［即ち、光学的フロースルーセル（ＯＦＴＣ）］が、光
度計を伴って備えられる；必要ならば、とりわけ、配管システムによって、様々
に希釈された諸試料が提供されるときは、種々の希釈率を補償するためのフロー
開閉器を伴って、種々の光学的経路の長さを持った種々のＯＦＴＣ経路を配置す
ることができる； − 定性試験専用の独立型光度計；
【００５１】 − 例えば、図１８によって示される型の構造を有する浸漬プローブ１１０。
プローブ１１０は、管状体１１１を有し、試料容器に入った液体試料の中に浸漬
するように適合させる。内部に光ガイド１１５及び１１９が配置され、管状体１
１１の長軸に沿って伸びる。管状体１１１は端部１１２と、端部１１２から一定
間隔を置いた窪み１１３とを有する。管状体は、断面が減少したセグメント１１
４を持つ。このセグメントの位置は、窪み１１３の位置に対応する。レンズ１１
７及び１１８と、管状体１１１の内部でその端部１１２に配置されたプリズム１
１６とによって、浸漬プローブ１１０の構造は完成する。光ガイド１１５及びレ
ンズ１１８を通って送られる光は、プリズム１１６に衝突し、プリズム１１６に
よって反射され；試験すべき液体試料の分量が存在する窪み１１３を横切り；レ
ンズ１１７によって集められ；次いで、光ガイド１１９を経由して光度計に送ら
れる。
【００５２】 − 種々の長さの光学的観測経路を補償することができ（即ち、それら経路が
決定され、定性試験装置にインプットすることができ）；及び／又は諸試料管が
十分に同じような大きさであり、それら光学的経路が小さい範囲内で（大抵は、
むらのない無視し得る変動範囲で）のみ相違するに過ぎないという条件で、それ
ら試料管それ自体、測光用のキュベット（cuvette，セル）として使用すること
ができる。
【００５３】 上記の記述から、当業者は、特許請求の範囲に規定する本発明の範囲から離れ
ないで、本発明の変形を考え出すことが可能である。例えば： − 本方法を拡張し、第３番目、第４番目等の成分の濃度を確定するために、
前に決定した２個、３個、４個等の諸成分を用いて逐次決定方法を続けることに
より、第３の及び更なる成分を決定すること； − 差スペクトルの曲率（即ち、第二次導関数）及び／又は勾配（即ち、第一
次導関数）を決定することにより、差スペクトルが自動的に分析されること［こ
の場合、上述の例示的定性試験における波長の増大に対して、曲率は増大するの
が望ましく、勾配は負であるのが望ましい］；
【００５４】 − 測定スペクトルを近似するために結合すべきスペクトルが、所定の波長範
囲で特異性（peculiarities）を呈し、そのために、近似パラメータ［とりわけ
、求めた成分の濃度］を明白に（unambiguously，一義的に）導き出すことが可
能であるという条件で、特に、定性試験が、諸試料の他の成分を決定するために
使用される場合、外れた波長範囲を選定して光度測定を行うこと； − 個々の成分を決定するのに使用する波長範囲の副範囲（subrange，従属範
囲）で、或いはこの範囲を越えて拡張する範囲でも、差スペクトルを決定するこ
と； を考え出すことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 測光スペクトル測定装置の概略図である。
【図２】 純干渉性物質及び標準血清の吸収スペクトルである。
【図３】 ビリルビン及びヘモグロビンの寄与率が減じられた実在全血血清の正規化済み
吸収スペクトルと、参照脂質溶液試料の正規化済み吸収スペクトルとを示す。
【図４】 試料を品質モニタリングするための推定方法を示す。
【図５】 試験的に測定された実在全血血清の吸収スペクトル、及び推定方法の結果を示
す。
【図６】 強い溶血の全血試料の測定された吸収スペクトル、及び試験方法によって得ら
れた各々吸収スペクトルを示す。
【図７】 強い黄疸の全血試料の、図６と同様のものを示す。
【図８】 独立した１２５個の試験試料についての［光学的に決定されたヘモグロビン濃
度］対［添加された濃度］を示す。
【図９】 独立した１２５個の試験試料についての［光学的に決定されたビリルビン濃度
］対［添加された濃度］を示す。
【図１０】 独立した実在全血血清についての［光学的に決定されたヘモグロビン濃度値］
対［臨床化学的に測定された濃度値］を示す。
【図１１】 独立した実在全血血清についての［光学的に決定されたビリルビン濃度値］対
［臨床化学的に測定された濃度値］を示す。
【図１２】 ９２個の実在全血血清の、光学的に測定されたヘモグロビン濃度を示す。
【図１３】 最新式分光計を用いて得られた、図１２のヘモグロビン濃度のＣＶ値を示す。
【図１４】 ９２個の実在全血血清の、光学的に測定されたビリルビン濃度を示す。
【図１５】 最新式分光計を用いて得られた、図１４のビリルビン濃度のＣＶ値を示す。
【図１６】 ９２個の実在全血血清の、［低コスト分光分析により測定されたヘモグロビン
濃度］対［最新式の分光分析によって測定されたヘモグロビン濃度］を示す。
【図１７】 ９２個の実在全血血清の、［低コスト分光分析により測定されたビリルビン濃
度］対［最新式の分光分析によって測定されたビリルビン濃度］を示す。
【図１８】 浸漬プローブの概略図である。
【符号の説明】
１ 光線 ２ 光源（複数の波長） ３ レンズ ４ レンズ ５ 波長分析器の入力 １０ ヘモグロビンの吸光係数ＫH １１ ビリルビンの吸光係数ＫH １２ 脂質の吸光係数ＫL １３ 標準血清の吸光係数Ｅg ３０ イントラリピド（Intralipid）の参照溶液の吸収スペクトル ３１ 全血血清の幾つかの試料の吸収スペクトル ３２ 方法の段階： ヘモグロビン濃度の決定 ３３ 方法の段階： ビリルビン濃度の決定 ３４ 方法の段階： Ｅdiff及び更なる推定の決定 ３５ おおよその波長範囲 における測定吸収スペクトル ３６ でのＥdlの決定 ３７ 方法の段階： 曲線の当てはめ ３８ 数値の設定： ＣH及びａ0h，ａ1h ４０ でのＥdlの決定 ４１ 方法の段階： 曲線の当てはめ ４２ 数値の設定： ＣB及びａ0b，ａ1b ４５ Ｅdiffの決定 ４６ 方法の段階： スペクトルの異形（異常）に対する検討 ４７ 中心波長 ４８ 測定されたヘモグロビン濃度の変動係数ＣＶ ４９ 測定されたビリルビン濃度の変動係数ＣＶ ５０ 比較段階 ５１ 結果の再現性が不十分であることに対する危険状態の表示 ５５ 典型的な実在全血血清の測定吸収スペクトルＥ（λ） ５７ ヘモグロビンに最もよく当てはまる吸収モデル ５９ ビリルビンに最もよく当てはまる吸収モデル ６０ 差吸収スペクトルＥdiff（λn） ６２ 測定されたスペクトル ６４ ヘモグロビンの寄与率 ６５ ビリルビンの寄与率 ６６ 差スペクトル ７０ 光学的に測定されたヘモグロビン濃度 ７２ 光学的に測定されたビリルビン濃度 ７４ 線形最小自乗法の当てはめ ７６ 線形最小自乗法の当てはめ ９０ 光学的に決定されたヘモグロビン濃度 ９１ 光学的に決定されたビリルビン濃度 ９３ 臨床化学的に決定されたヘモグロビン濃度 ９４ 臨床化学的に決定されたビリルビン濃度 ９６ 最新技術（Cary V）で分光分析法により測定されたヘモグロビン濃度 ９７ 線形最小自乗法の当てはめ ９９ 最新技術（Cary V）で分光分析法により測定されたビリルビン濃度 １００ 線形最小自乗法の当てはめ １１０ 浸漬プローブ １１１ 管状体 １１２ 管状体１１１の端部 １１３ 窪み １１４ 断面が減少しているセグメント １１５ 光ガイド（light guide，光導体） １１６ プリズム １１７ レンズ １１８ レンズ １１９ 光ガイド
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年４月２７日（２００１．４．２７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１７】 測光測定用装置を備えた分析器、好ましくは臨床化学分析
器において、前記測光測定用装置が、プログラム記憶装置と、該プログラムを実
行するための装置とを備えており、しかも、該プログラムの実行によって請求項
１〜１２のいずれか１項に記載の測定方法が実施されることを特徴とする、上記
分析器。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年９月４日（２００１．９．４）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】 図４で、中心波長 は参照番号４７によって示される。この波長 では、方法の段階３６でＥd1が計算され、また、方法の段階４０でＥd2が計算さ
れる。 脂質及びマトリックスのバックグラウンドの寄与率Ｅd（λ）は測定濃度Ｃjの
再現性を低下させることに注意。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】 低コスト光学的分光計の構成 次いで、低コスト光学的要素を用い、図１に示す光学的吸収分光分析法に基づ
く試料品質モニタリングを実験により調べた。複数の光波長の光源は、白色ハロ
ゲンランプ［ハロゲン ５Ｖ，５Ｗ， ＠λ＝５３０ｎｍ（MICROPARTS GmbH，ドイツ）］であった。平行調整ビームは
、おおよそＤ＝２ｍｍの直径を有した。試験試料の光学距離は、ｄ＝１０ｍｍで
あった。試料の希釈率は、１：２０（ｑdil＝２０）であった。透過光は、レン
ズ（焦点距離ｆ＝５ｍｍ）で集めて、コア直径φc＝１００μｍを持つ光ファイ
バーに接続した。光は、スペクトル分解 を持つ、低コストの平凹分光器ＰＣＳ［CSEM-Z，スイス］によって分光分析を行
った。試験試料のスペクトルは、波長範囲λ＝［４２１，７０４］ｎｍで、線状
フォトダイオード・アレー(linear photodiode array)［５１２画素；心間間隔
Δｘ＝２５ｎｍ］によって測定した。スペクトル試料採取速度は、Δλｓ＝２．
８ｎｍ／画素であった。測定された光学的強度は、σI／Ｉo＝５・１０-4であっ
た。ヘモグロビン濃度ＣHは、波長範囲λrh＝［５４５，５７５］ｎｍでのＮ1＝
１１個の測定値Ｅ（λn）に、式（３）及び（４）のモデルを最小自乗法により
当てはめることによって得た。ビリルビン濃度ＣBは、波長範囲λrb＝［４８０
，５４５］ｎｍでのＮ2＝２０個の測定値Ｅ（λn）に、式（５）及び（６）のモ
デルを最小自乗法により当てはめることによって得た。差吸収スペクトルＥdiff は、式（７）から得た。図１６及び１７にそれぞれ、図１０、１１及び１２〜１
５の９２個の組の血清の、最新式（Cary V）の分光分析法により測定したヘモグ
ロビン濃度９６及びビリルビン濃度９９に対する、ＰＣＳにより測定した濃度を
示す。ヘモグロビンの場合（図１６）、濃度範囲ＣH＜２ｇ／ｌでの線形最小自
乗法の当てはめ９７［Ｃfit,h＝Ｃ0,h＋ｍhＣH］によって、オフセット濃度Ｃ0, h ＝０．０４３ｇ／ｌと、勾配ｍh＝０．８５９とが得られる。最良当てはめ曲線
とＰＣＳ測定値の間の相関関係は、ρ＝０．９９７である。ビリルビンの場合（
図１７）、濃度範囲ＣB＜１５ｍｇ／ｄｌでの線形最小自乗法の当てはめ１００
［Ｃfit,b＝Ｃ0,b＋ｍbＣB］によって、オフセット濃度Ｃ0,b＝−０．０１０ｍ
ｇ／ｄｌと、勾配ｍb＝０．９４０とが得られる。最良当てはめ曲線とＰＣＳ測
定値の間の相関関係は、ρ＝０．９９８である。これらの結果によって、低コス
トの分光器は、試料品質モニタリング目的のために容易に使用し得ることが分か
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 シュネル、ウァバーン、ゲオルク スイス国 ミュントシェミアー、ラオエン マッテンヴェグ ７ Ｆターム(参考） 2G045 CA26 DA51 DA53 GC10 JA05 2G059 AA01 BB13 CC16 CC18 DD13 EE01 EE12 GG10 HH02 JJ05 JJ11 JJ12 JJ17 KK04 MM01 MM02 NN01

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 生体外診断方法によって流体生物学的試料を分析する前に、
    該診断方法による目標分析物の測定値に干渉し易い、該試料の少なくとも１つの
    成分の濃度を測定する方法において、 （ａ）第１の選択した波長範囲λ＝λ1,1〜λ1,nにおいて、前記液体試料の第
    １の吸収スペクトルＥ1（λ）を測定する過程と、 （ｂ）第１の測定吸収スペクトルＥ1（λ）に、近似スペクトル を当てはめる過程であって、該近似スペクトル が、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅd1（λ，ａi,S1）（式
    中、ｉは０から少なくとも１までの範囲にわたる）と、決定すべき諸成分の濃度
    ＣS1の第１の純成分の予定された吸収スペクトルＥS1（ＣS1，λ）との組み合わ
    せであり；前記の第１の干渉性成分の前記濃度ＣS1と前記係数ａi,S1の少なくと
    も２つとを変化させることによって前記当てはめ過程を実施して、前記の第１の
    干渉性成分の濃度を決定するために、第１の測定吸収スペクトルＥ1（λ）と前
    記近似スペクトル との間の偏差が最小になるようにし；しかも、前記の第１の干渉性成分の濃度Ｃ S1 を明白に決定することができるように、前記の第１選択波長範囲を選定する、
    前記当てはめ過程と、 を含む、上記の試料の少なくとも１つの成分の濃度を測定する方法。
  2. 【請求項２】 近似スペクトル が、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅd1（λ，ａi,S1）と、
    濃度ＣS1の第１の純成分の予定された吸収スペクトルＥS1（ＣS1，λ）との和で
    ある、請求項１記載の測定方法。
  3. 【請求項３】 （ａ）少なくとも１つの更に選定された波長範囲λ＝λk,1
    〜λk,n（式中、ｋ≧２）において、液体試料の少なくとも１つの更なる吸収ス
    ペクトルＥ2（λ）を測定する過程と、 （ｂ）少なくとも１つの更に測定された吸収スペクトルＥ2（λ）に、少なく
    とも１つの更なる近似スペクトル を当てはめる過程であって、該少なくとも１つの更なる近似スペクトル が、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅdk（λ，ａi,Sk）（式
    中、ｉは０から少なくとも１までの範囲にわたる）と、前もって決定した（ｋ−
    １）個の純成分の、前もって決定した吸収スペクトルＥSL（ＣSL，λ）（式中、
    ＬはＬ＝１〜ｋ−１の範囲で変化する）と、決定すべき濃度ＣSkのｋ純成分の予
    定された吸収スペクトルＥSk（ＣSk，λ）との組み合わせであり；前記濃度ＣSk と前記係数ａi,Skの少なくとも２つとを変化させることによって前記当てはめ過
    程を実施して、前記の第２の成分の濃度を決定するために、測定スペクトルと近
    似スペクトルとの間の偏差が最小になるようにし；しかも、前記の第ｋ番目の純
    成分の濃度ＣSkを明白に決定することができるように、前記の少なくとも１つの
    更なる選択波長範囲を選定する、前記当てはめる過程と、 を更に含む、請求項１又は２に記載の測定方法。
  4. 【請求項４】 近似スペクトル が、バックグラウンド吸光のための予定された近似関数Ｅdk（λ，ａi,Sk）と、
    前もって決定した（ｋ−１）個の純成分の、前もって決定した吸収スペクトルＥ SL （ＣSL，λ）［式中、ＬはＬ＝１〜（ｋ−１）の範囲で変化する］と、濃度Ｃ Sk の第ｋ番目の純成分の予定された吸収スペクトルＥSk（ＣSk，λ）との和であ
    る、請求項３記載の測定方法。
  5. 【請求項５】 関数Ｅdk（λ，ａi,Sk）（式中、ｋ≧１）の少なくとも１つ
    、好ましくは全てが、 （式中、ｎ≧１、好ましくはｎ＝１）の形であることを特徴とする、請求項１〜
    ４のいずれか１項に記載の測定方法。
  6. 【請求項６】 吸収スペクトルＥ（λi）（式中、ｉ＝１〜Ｎであり、Ｎは
    測定値の数である）の測定値に、近似スペクトル （式中、ｋ≧１）を当てはめる過程は、最小自乗当てはめ法によって行うことを
    特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の測定方法。
  7. 【請求項７】 決定した濃度ＣSk（式中、ｋ≧１）が予定範囲をはずれてい
    る場合、試料は少なくとも特異的であると表示することを特徴とする、請求項１
    〜６のいずれか１項に記載の測定方法。
  8. 【請求項８】 差スペクトル （式中、Ｊは成分の数であり；λは、λ1,1及びλ1,n，λ2,1及びλ2,n，…，λ J,1 及びλJ,nの最も広い組み合わせによって定義される全波長範囲の少なくとも
    ３０％、好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは約１００％以上に及ぶ範
    囲である）を計算し、次いで、特異であることを考慮して、前記差スペクトルを
    分析することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の測定方法。
  9. 【請求項９】 少なくとも１つの予定された波長範囲における差スペクトル
    の曲率及び／又は勾配を決定し、その結果を期待値と比較し；更に、前記の比較
    した期待値が同一の符号を有し、随意的に上限及び下限の曲線によって与えられ
    る予定された範囲に存在する大きさを有する場合、前記差スペクトルには異常が
    ないものと評価することを特徴とする、請求項８記載の測定方法。
  10. 【請求項１０】 試料が、血液、好ましくはヒト血液、又はそれ由来の流体
    であり；第１の波長範囲は、５００〜６００ｎｍ、好ましくは５４５〜５７５ｎ
    ｍ、更に好ましくはこれらの範囲の１つと本質的に同一である範囲で選定し、第
    １の参照スペクトルＥ1（λ）はヘモグロビンのものであり、ヘモグロビンの濃
    度ＣHを決定することができるようにし；しかも、第２の波長範囲は、４００〜
    ６００ｎｍ、好ましくは４８０〜５４５ｎｍ、更に好ましくはこれらの範囲と本
    質的に同一である範囲で選定し、第２の参照スペクトルＥ2（λ）はビリルビン
    のものであり、ビリルビンの濃度ＣBを決定することができるようにすることを
    特徴とする請求項１〜９のいずれか１項に記載の測定方法。
  11. 【請求項１１】 差スペクトルが負の勾配及び／又は正の曲率を有する場合
    、試料の全構成及び脂質の濃度は正常であるものと評価することを特徴とする、
    請求項１０記載の測定方法。
  12. 【請求項１２】 ビリルビン及び／又はヘモグロビンの濃度が予定値を超え
    る場合、及び／又は差スペクトルが特異的である場合、試料は臨界的状態にある
    ものと評価することを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の測定方法。
  13. 【請求項１３】 諸スペクトルを電気信号として与え、諸スペクトルに関す
    る測定方法の諸段階をプログラム制御下で実施するプロセッサを備えた評価装置
    へ前記諸スペクトルを供給すること、並びに、結果を記憶装置、好ましくはディ
    ジタルデータ用記憶装置に記憶させ、及び／又はオペレータに、好ましくは印刷
    し、表示し及び／又は可聴音を生じさせることによって提供することを特徴とす
    る、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の測定方法。
  14. 【請求項１４】 分析器、好ましくは臨床化学分析器と共に使用するための
    請求項１〜１３のいずれか１項に記載の測定方法を実施するための設備において
    、前記分析器の試料流体の供給経路中に少なくとも１つの測光測定位置が設けら
    れていて、吸収スペクトルが該供給経路中の該流体から取られるようになってい
    ることを特徴とする、上記設備。
  15. 【請求項１５】 請求項１〜１３のいずれか１項に記載の測定方法を実施す
    るための測光プローブにおいて、該測光プローブの端部は、２つの対向壁であっ
    て、その１つの壁には光源が備えられており、第２のウェルには光取り込み手段
    が備えられており、光源から放射される光が前記測定位置を通過し、少なくとも
    有効部分へ該光取り込み手段によって取り込まれるように、該光源及び該光取り
    込み手段が配置されている前記対向壁によって区切られた測光測定位置を有する
    ことを特徴とする、上記測光プローブ。
  16. 【請求項１６】 測光プローブが、測定位置を通過する光ガイド（light gu
    ide，光導体）を有すること、及び、光偏向性手段（light deviating means）、
    好ましくはプリズムが、前記光ガイドを出る光が、好ましくは、前記測定位置の
    第１の壁の光出口側の方向に実質的に１８０°の角度で、偏向するように配置さ
    れていることを特徴とする、請求項１５記載の測光プローブ。
  17. 【請求項１７】 測光測定用設備を備えた分析器、好ましくは臨床化学分析
    器において、前記測光測定用設備が、プログラム記憶装置と、該プログラムを実
    行するための装置とを備えており、しかも、該プログラムの実行によって請求項
    １〜１２のいずれか１項に記載の測定方法が実施されることを特徴とする、上記
    分析器。
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