JP2003500365A - 体液性および細胞性免疫応答を増強するための安定性、生体適合性最適化アジュバント（ｓｂａ） - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、１以上の抗原と一緒に注射した場合の体液性および細胞性免疫応答を増強するための、安定性および生体適合性が最適化されたアジュバント（ＳＢＡ）に関する。このアジュバントは、固体脂質および固体脂質混合物ベースの粒子からなる。可能性のある適用としては、より良好な効力かつより良好な耐性のあるワクチンの生成、ヒトおよび動物へのワクチン接種、そしてまた、抗体の産生が含まれる。粒子サイズ、粒子の電荷および表面特性を選択することによって、免疫応答の強さが特異的に調節され得、そしてさらに、種特異的に調整され得る。さらなるアジュバント（例えば、ＧＭＤＰのような分子アジュバント）が、ＳＢＡに添加され得、さらに、細胞性免疫応答を増加させる。ＳＢＡは、効力がありそして低コストであり、現存するアジュバントよりも取り扱いが単純であり、そしてインビボで十分耐性がある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （１．発明の背景） 抗原は、抗体を生成するために動物およびヒトに投与される。このことを行う
目的は、例えば、疾患に対する防御のためにヒトもしくは動物を免疫すること、
または引き続いて生成物に単離およびプロセスされる抗体の産生である。抗原は
、非経口的に最も頻繁に投与され、代替的方法としては、例えば、経口的、鼻的
、および局所適用がある。

【０００２】 頻繁に起こる問題は、投与される抗原に対する免疫応答の強さが、しばしば意
図する目的のために十分ではないことである。時々、この問題は、投与される抗
原の用量を非常に増加させることによって解決され得る。しかし、抗原がしばし
ば非常に高価であり、そして用量を増加させることは、ワクチンのコストの対応
する増加をもたらすということは深刻な問題である。これらのコストは、健康の
システムに考慮すべき緊張をもたらす；多くの社会的階層−とりわけ第３世界に
おいては、ワクチンは非常に高価になるので、所望される集団のワクチン接種は
実行され得ない。

【０００３】 別のアプローチは、アジュバントと一緒に抗原を投与することである。これは
、抗原の高価を増強し、従って、より高い抗体力価をもたらす。アジュバントの
原理は、１９４８年にＪｕｌｅｓ Ｆｒｅｕｎｄによって最初に説明され（Ｆｒ
ｅｕｎｄ，Ｊ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９４８，６０，３８３−３９８
）、そして２つの鉱油ベースのエマルジョンで達成された。フロイント（Ｆｒｅ
ｕｎｄ’ｓ）不完全アジュバント（ＦＩＡ）は、マンニド（ｍａｎｎｉｄｅ）モ
ノオレアート（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ，Ａｒｌａｃｅｌ）を有する鉱油の混合物で
ある。適用のためには、これを抗原溶液と混合し、そして形成したエマルジョン
を注射する。このようにして引き起こされた免疫応答の増加は非常に大きいので
、新規なアジュバントが開発されそして試験される場合に、ＦＩＡがなお、「標
準物質（ｇｏｌｄ ｓｔａｎｄａｒ）」といわれている。それらの効力および品
質は、ＦＩＡとの比較によって評価される。しかし、多くの新規に開発されたア
ジュバントは、ＦＩＡの効力よりも下にとどまっている（例えば、ＦＩＡ＝１．
０に対して０．２）。

【０００４】 ＦＩＡへの不活化したミコバクテリア（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓ）の添加は、さらに免疫応答を増加させる。この混合物は、フロイント完全ア
ジュバント（ＦＣＡ）と命名されている。しかし、Ｆｒｅｕｎｄに従うオイルエ
マルジョンは、炎症性および潰瘍性の腫脹（肉芽腫）を注射の部位に生成し、そ
のいくつかはバーストして、広範な膿瘍になる。従って、現在の標準に従うと、
Ｆｒｅｕｎｄによるヒトのためのオイルエマルジョンの使用は、完全に疑う余地
がない。これは、時々動物において使用されるが、しばしば、動物の一般的な状
態が非常に損なわれて、非経済的な損失が生じる。Ｆｒｅｕｎｄによって提案さ
れた完全アジュバントのためのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓまたはＭ．ｂｕｔ
ｙｒｉｃｕｍミコバクテリアもまた、耐えるのは難しい。これらもまた、注射の
部位で肉芽腫および熱ならびに膿瘍を引き起こす（Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ａ．Ｒｅｖ
．Ａｌｌｅｒｇｙ １９６９ ２３（５）：３８９−４００）。

【０００５】 従って、特に、安価なワクチンを製造すること、および特定の疾患に対して所
望される世界規模の免疫を可能にすることの観点で、十分に耐性があるアジュバ
ントを見出すという課題が存在する。このような免疫は、低コストワクチンを用
いてのみ経済的に達成され得、免疫学的産生技術および生成物の重要性が増大し
ている。また、動物の保護の必要性が認識されてきて、そして対応する法律の立
法化についての圧力が増大してきたので、十分に耐性があり（すなわち、生体適
合性）、同様に効力があるが、同時に低コストのアジュバントが見出されなくて
はならない。さらにそれは、注射の前の混合は必要なく、そして効力の変動（例
えば、微細な分散の違いによって引き起こされる）は除去されるように物理的に
安定でなくてはならない。

【０００６】 現在、ヒトへの適用について認可されている最も頻繁に使用されているアジュ
バントは、水酸化アルミニウムの微細な懸濁物であり、この起源は、Ｆｒｅｕｎ
ｄのエマルジョンよりもさらにさかのぼる（Ｇｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｔ．ら、Ｊ．Ｐ
ａｔｈｏｌ．１９２６，２９３１−４０）。これは、抗原は、水酸化アルミニウ
ム粒子の表面に吸着した場合に、免疫系によってより良好に認識されるという仮
定に基づいている。しかし、この不利な点は、水酸化アルミニウムはＦｒｅｕｎ
ｄアジュバントよりも効力が弱く、そしてこれもまた、肉芽腫を引き起こし得る
ということである。

【０００７】 Ｆｒｅｕｎｄのエマルジョンから出発して、最近、より耐性がある物質（例え
ば、スクアランおよびスクアレン）からなるエマルジョンが記載されている（Ｓ
ａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓｔａｄｏｒ，Ｌ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８８ １
４１，１７２０−１７２７，Ｍａｓｉｈｉ ＫＮ、Ｌｕｎｇｅ Ｗ．、Ｂｒｅｍ
ｅｒ Ｗ．、Ｒｉｂｉ Ｅ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ−ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
１９８６ ８（３）、３３９−４５、Ｈｕｎｔｅｒ Ｒ．Ｌ．、Ｂｅｎｎｅｔｔ
，Ｂ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８６ ２３（３）、２８７−３０
０、Ａｌｌｉｓｏｎ ＡＣら、Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０ ２（５
）、３６９−７４）。これらのシステムの１つは、ＭＦ５９である（欧州特許出
願番号０３９９８４３Ａ２）。

【０００８】 Ｇｌｅｎｎｙによる懸濁物に基づいて、異なるポリマーから種々の有機および
無機粒子（例えば、炭素）までの範囲の粒子が使用された（Ｏ’Ｈａｇａｎ，Ｄ
．Ｔ．、Ｊｅｆｆｒｅｙ，Ｈ．、Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｍ．Ｊ．、ＭｃＧｅｅ，Ｊ．
Ｐ．、Ｄａｖｉｅｓ，Ｓ．Ｓ．Ｖａｃｃｉｎｅ．１９９１ ９（１０）、６８−
７１、Ｇｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｔ．ら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９２６，２９ ３１−
４０）。これらのシステムの不利な点は、いくつかのポリマーの細胞毒性（例え
ば、ポリアルキルシアノアクリレートの場合におけるホルムアルデヒド形成）、
分解しないこともしくは生物中で分解速度が遅すぎること（例えば、ポリスチレ
ンまたはポリメタクリレート誘導体）、不十分な生体適合性（例えば、ＰＬＡ粒
子の場合のカプセル形成、ｐＨがｐＨ２にシフトする）および登録の当局からの
登録を得ることが不可能であること（例えば、すすの粒子）である。

【０００９】 特定のアジュバント（例えば、油滴または固体粒子）を使用する代替的な方法
は、高分子アジュバントの使用である。Ｆｒｅｕｎｄによって記載されたミコバ
クテリアは、その莢膜物質からの成分で置き換えられ得ることが示された。これ
は、身体には、より耐性である。特に記載され合成されているものは、ＭＤＰ（
Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）（Ａｄａｍ，Ａ．
、Ｌｅｄｅｒｅｒ，Ｅ．、Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．１９８４ ４、１１１−１
５２）、Ｔｈｒ−ＭＤＰ（ＭＤＰのスレオニルアナログ）（Ｂｙａｒｓ ＮＥら
、Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８７ ５（３）、２２３−８）、およびヨーグルトバチ
ルスから生じたＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル
−ジペプチド）（Ｇｒｕｂｈｏｆｅｒ，Ｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ １９９５ ４４，１９−２４）であった。ＧＭＤＰは、ＭＤＰのホモログ
であり；免疫系刺激効果の増加は、現在、ＧＭＤＰについて実証されている（特
許明細書ＤＥ１９６１１２３５ Ｃ１）。

【００１０】 アジュバントの開発のさらなる段階には、高濃度の分子アジュバントの使用が
含まれ、その結果、溶解度が卓越し、そして懸濁物が得られた（例えば、ＤＤＡ
（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）（Ｇｒｕｂｈｏｆｅｒ，Ｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９９５ ４４、１９−２４））。そ
して体液性応答を増強させるために、高分子アジュバントの混合物（例えば、固
体粒子を伴う糖ペプチド（例えば、コロイド粒子を伴うＧＭＤＰ））（Ｇｒｕｂ
ｈｏｆｅｒ，Ｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９９５ ４４，１
９−２４）が得られた。

【００１１】 しかし、現在までに、フロイントアジュバントの抗力と等しい効力を有し、同
時に他の要件に合致する溶液は見出されていない：新規なエマルジョンは常に副
作用なしには得られないし、合成高分子（例えば、糖ペプチド）は、これまでは
ミコバクテリアよりも優れていることは示されていないし、そしてさらに、それ
らは非常に高価である。固体粒子には登録の問題がある。多くのアジュバントは
、非常に高レベルの毒性を示し、従って、生体適合性のレベルが非常に低い。さ
らに、物理的な安定性の問題が存在する（凝集および／または融合（ｃｏａｌｅ
ｓｃｅｎｃｅ）を避けること）。従って、ＦＩＡエマルジョンは、新鮮に製造さ
れそして注射されなくてはならない；長期保存は不可能である。しかし、保存中
の十分な物理的安定性は、製品（とりわけ薬物）には必須である。

【００１２】 従って、本発明の目的は、新規なアジュバントの生成に関し、そのアジュバン
トは、 １．十分な物理的安定性、 ２．低い細胞毒性および十分な生体適合性、 ３．ＦＩＡの効力に匹敵する効力、 ４．低い製造コスト、 を有する。

【００１３】 （２．発明の詳細な説明） 現在まで、免疫系刺激効果を増大させるために、ＧＭＤＰは、粒子サイズが２
００ｎｍ未満のコロイド分散固体脂質粒子との混合物で用いられなければならな
かった（Ｇｅｒｂｕの米国特許、米国特許出願第０８／８１６，７８７号）。粒
子の構造を、本発明の研究において体系的に改変して（例えば、使用した界面活
性剤、安定化剤）、ＧＭＤＰの免疫系刺激効果をさらに増強し得る脂質粒子を見
出した。驚くべきことに、この粒子単独でも、脂質粒子とＧＭＤＰとの組合わせ
と、まさに同程度に有効であることが同時に見出された（実施例９）。従って、
本発明において、高価なＧＭＤＰは必要なく、そして匹敵するレベルの体液性免
疫系刺激が低コスト脂質粒子単独で達成され得る。

【００１４】 ここで免疫系刺激効果の強さは、粒子の表面特性（使用される界面活性剤、脂
質電荷）および粒子サイズに依存する。脂質粒子が負電荷を有する場合、有効量
は、ＦＩＡの量の約１／３に匹敵し；ＥＱ１の添加により正に荷電した脂質粒子
の産物では、有効性は、ＦＩＡに匹敵する（有意差なし、ｔ検定）（実施例９）
。従って、所望の有効性は、使用される脂質粒子の組成を介して調節され得る。
このことは、生物の過剰反応を回避する。

【００１５】 現在までの無機およびポリマー懸濁物に対して行われたアジュバントの研究か
ら、各抗原に対して最大の有効性を有する粒子サイズが存在することが公知であ
り、同様に、種依存性があることも公知である。従って、ワクチンのために最良
に適した水酸化アルミニウム懸濁物の粒子サイズは、経験的に決定され；免疫の
ためのアジュバントとしてのポリマー粒子は、それらのサイズに依存して種々の
効果を有した［Ｋｒｅｕｔｅｒ Ｊ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８６，４，１２
５−９］。非常に異なるマトリックス材料にも拘わらず、驚くべきことに脂質粒
子に対して同じ効果が認められた。その結果、粒子サイズを抗原特異的および種
特異的に変化させることにより、有効性が調節され得る。安定な生体適合性アジ
ュバント（ＳＢＡ）の脂質粒子分散物は、水または水性液体もしくは非水性（例
えば、油性液体）中に分散された脂質粒子からなる。これらの粒子は、おそらく
、界面活性剤またはポリマーにより安定化されるが、必ずしも、界面活性剤また
はポリマーにより安定化されなくてもよい。外側相が十分に高粘性であるか、ま
たは粒子が細かいと、物理的に安定な分散物が得られる。同じことがまた、低粘
性外側相の場合にも適用され、従って、粒子が十分に高い電荷を有する場合、形
成される沈澱が容易に再分散され得る。

【００１６】 ＳＡＢの生成は、薬学またはプロセスエンジニアリングの基本書において記載
される一般に公知の方法を用いて、分散技術または沈澱により行う。分散の間に
、大ざっぱに分散した脂質は、機械的プロセスにより崩壊される。この脂質は固
体凝集状態で存在し得る（例えば、モルタルミル）か、または液体凝集状態で存
在し得る（例えば、スターラーによる脂質融解物の乳化）。ＳＢＡ分散物を生成
するために、脂質を最初に細分し、次いで、外側（水性）相に分散するか、ある
いは外側相に直接細分され得る。分散によりＳＢＡ分散物を生成するために、例
えば、とりわけ以下が用いられ得る：ピストンギャップホモジナイザー（例えば
、ＡＰＶホモジナイザー、Ｆｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓ）、ジェットストリームホ
モジナイザー（例えば、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）、ローターステーター
（Ｒｏｔｏｒ−Ｓｔａｔｏｒ）撹拌機（例えば、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ，Ｓｉ
ｌｖｅｒｓｏｎホモジナイザー）、小規模および大規模静的ミキサー（例えば、
ｃｏｍｐａｎｙ Ｓｕｌｚｅｒからのミキサー）、ガスジェットミル、ローター
ステーターコロイドミルおよびモルタルミル（実施例１５）。

【００１７】 ＳＢＡ分散物は、十分に長期間、物理的安定性を示す。光子相関分光法（ｐｈ
ｏｔｏｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）およびレーザ
ー回折法（ＬＤ）を用いた粒子サイズの決定は、１〜３年の期間にわたり粒子成
長を全く示さなかったか、またはごくわずかであった（実施例３）。ＳＢＡ懸濁
物の安定性は、フロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）の安定性よりはるかに
優れており（実施例１）、そしてまた、より最近のアジュバントエマルジョンと
比較して、より大きな安定性を示す（実施例２）。

【００１８】 安定性：ＳＢＡ分散物は、単純な系を示す。糖ペプチドとは対称的に、使用さ
れるアジュバント物質は、構造において化学的に単純かつ強い。安定化プロセス
における熱の適用は、いずれの化学的分解ももたらさず、この分散物は、物理的
に安定なままであり、そして粒子凝集は全く起こらない。オートクレーブ（１２
１℃、１５分、２バール）によるＳＢＡ分散物の安定性の例を、実施例４に示す
。ＦＩＡは、同じ条件下で相分離を示す。

【００１９】 多くのワクチンは、低温（４〜６℃）で保管される。最適化されたＳＢＡ分散
物では、物理的不安定性が生じることなく、保管は室温でも可能であり、そして
また、より高い温度ですらも可能である（実施例１１）。このことは、特により
暑い気候帯に関して、ＳＢＡベースの製品の取り扱い（例えば、第三世界の国々
での集団ワクチン接種におけるアジュバントとしての使用）を容易にする。

【００２０】 生体適合性：低毒性および良好な生体適合性は、広範な適用に加えてアジュバ
ントに必須である。ヒツジを用いた研究において、ＳＢＡ分散物の適用の後に、
適用部位に何ら変わったことは認められなかった（実施例６）。この分散物が十
分に許容されたという事実は、細胞培養物においてインビトロで観察された脂質
の非常に低毒性により説明される。非経口投与についてドイツ登録当局およびＦ
ＤＡにより受け入れられたポリマーと比較すると、この細胞培養物は、高濃度粒
子の場合において約２０倍高い生存能力を示す（実施例５）。良好な生体適合性
は、一般に身体のタンパク質が表面粒子に対してわずかな程度しか吸着しないと
いう事実に帰する（他の粒子とは対照的）（実施例７）。さらに、不耐性反応を
刺激するタンパク質は、表面で検出されなかった。

【００２１】 アジュバントの広範な適用のために、コストが理由で、それ自体を提示する解
決法は、適用の前に抗原溶液に混合されるアジュバント調製物を作製することで
ある。理想的には、アジュバントは、多くの種々の抗原と混合され得るような特
性を伴って生成されるべきである。注射の疼痛を低減するために、この混合物は
、生理学的塩化ナトリウム溶液または他の無機溶液中で投与されるべきである。
ζ電位の低下に起因して、生理学的塩化ナトリウム溶液は、分散物において不安
定化、引き続き凝集をもたらす［Ｌｕｃｋｓ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａ
ｒｍ．１９９０ ５８，２２９−２３５］。ＳＢＡアジュバントは、無機溶液中
で抗原と混合した後に、十分に長期間にわたり、物理的に安定であるはずである
。実施例８は、生理的塩化ナトリウム溶液と混合した後の脂質粒子が、６時間に
わたってもなお安定であり、測定可能な凝集が生じないことを示す。

【００２２】 粒子サイズに加えて、表面特性（例えば、電荷）はまた、種特異的ＳＢＡアジ
ュバントが有効な強度で生成され得るように特異的に調節され得る。正電荷およ
び負電荷は、対応して荷電した界面活性剤または安定化材の混合により生成され
得る。電荷の強度は、添加物の濃度により調節され得、理想的な添加物は、無機
物質である。同様に、セチルピリミジニウムクロリドは非経口適用のための保存
剤として受け入れられる（実施例１２）。

【００２３】 非常に多くの種々の脂質がＳＢＡ分散物の生成のために使用され得る。これら
は、化学的に均質な脂質およびそれらの混合物の両方である。この脂質は結晶状
態（例えば、β、βｉ−修飾）で、または液晶状態（α−修飾）で、またはそれ
らの混合物でＳＢＡ分散物最終製品に存在するということにより特徴付けられる
。脂質混合物が使用される場合、液体脂質（例えば、油、親油性炭化水素、およ
び親油性有機性液体（例えば、オレイルアルコール））はまた、固体脂質（例え
ば、グリセリド、親油性炭化水素（例えば、固形パラフィン））とともに混合さ
れ得る（「脂質ブレンド」）。

【００２４】 以下の脂質は分散相としての例のために用いられ、そしてまた個々の成分また
は混合物として適用され得る：天然または合成トリグリセリドおよび／またはそ
れらの混合物、モノグリセリドおよびジグリセリド（単独で、またはこれらの混
合物、または例えばトリグリセリドとの混合物）、自己乳化修飾脂質、天然およ
び合成のろう、脂肪アルコール（それらのエステルおよびエーテルを含む。およ
び脂質ペプチドの形態において）、あるいは任意のこれらの混合物。個々の物質
または混合物として、特に合成モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセ
リド（例えば、硬性脂質（ｈａｒｄ ｆａｔ））、Ｉｍｗｉｔｏｒ ９００、ト
リグリセリド（例えば、グリセロールトリラウレート、グリセロールミリステー
ト、グリセロールパルミテート、グリセロールステアレートおよびグリセロール
ベヘナート）、およびろう（例えば、セチルパルミテートおよび白ろう（ＤＡＢ
−ドイツ薬局方））。炭化水素（例えば、固形パラフィン）もまた適切である。

【００２５】 全体の処方物に対する内側相または脂質の割合は、０．１％〜８０％（ｍ／ｍ
）であり、そして好ましくは、１％〜４０％（ｍ／ｍ）内である。安定な分散物
を生成し得るために、分散物安定化剤の添加が必要であるか、または所望される
のであれば（例えば、乳化剤）、これらは、純粋な物質の形態または混合物の形
態で組み込まれて、粒子を安定化させ得る。

【００２６】 このような添加され得る添加物の量は、水性分散物の全重量部に対して、０．
０１％〜３０％の範囲内であり、好ましくは、０．５％〜２０％の範囲内である
。ＳＢＡ分散物の安定化のために、またはそれらの特異的表面修飾のために、界
面活性剤、安定化剤およびポリマーが使用され得、これらは、分散物の生成から
一般に理解される。この例は、以下である： １．立体的に安定化させる物質（例えば、ポロキサマーおよびポロキシアミン
（ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ）（ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロ
ックコポリマー）、エトキシル化ソルビタン脂肪酸エステル、特に、ポリソルベ
ート（例えば、ポリソルベート ８０／Ｔｗｅｅｎ ８０（登録商標））、エト
キシル化モノグリセリドおよびエトキシル化ジグリセリド、エトキシル化脂質、
エトキシル化脂肪アルコールまたは脂肪酸、ならびに糖もしくは糖アルコールと
脂肪酸もしくは脂肪アルコールとのエステルおよびエーテル（例えば、スクロー
スモノステアレート、スクロースジステアレート、スクロースココエート（ｓｕ
ｃｒｏｓｅ ｃｏｃｏａｔｅ）、スクロースステアレート、スクロースジパルミ
テート、スクロースパルミテート、スクロースラウレート、スクロースオクタノ
エート、スクロースオレエート））。

【００２７】 ２．荷電した無機安定化剤（例えば、ジアセチルホスフェート、ホスファチジ
ルグリセリン、種々の起源のレシチン（例えば、卵レシチンまたは大豆レシチン
）、化学的に修飾されたレシチン（例えば、水素化レシチン）、ならびにリン脂
質およびスフィンゴ脂質、レシチンとリン脂質、ステロール（例えば、コレステ
ロールおよびコレステロール誘導体、ならびにスチグマステロール）との混合物
、ならびにまた、飽和および不飽和の脂肪酸、コール酸ナトリウム、グリコール
酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムまたは
それらの混合物、アミノ酸または抗凝集剤（例えば、クエン酸ナトリウム、ピロ
リン酸ナトリウム、ソルビン酸ナトリウム）［Ｌｕｃｋｓ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｉｎｔ
．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１９９０ ５８，２２９−２３５］）。双性イオン界面活性
剤（例えば、３−［（３−コラミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−２−ヒ
ドロキシ−１−プロパンスルホネート［ＣＨＡＰＳＯ］、３−［（３−コラミド
プロピル）−ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート［ＣＨＡＰＳ］
、およびＮ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスル
ホネート）。陽イオン性界面活性剤（特に保存剤として用いられる化合物）（例
えば、ベンジルジメチル−ヘキサデシルアンモニウムクロリド、メチルベンゼト
ニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、セチルピリミジウムクロリド）。

【００２８】 ３．粘性増加物質（例えば、セルロースエーテルおよびセルロースエステル（
例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピル
セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニル誘導体なら
びにポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアセテート、ア
ルギン酸、ポリアクリレート（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ）、キサンタンおよび
ペクチン）。

【００２９】 荷電した安定化剤は、必要または所望であれば、好ましくは、０．０１％〜２
０％（ｍ／ｍ）の範囲の量で、特に０．０５％〜１０％の量でＳＢＡ分散物中に
含まれる。粘性増加物質は、必要または所望であれば、同様な割合で、好ましく
は０．０１〜２０％の量で、そして特に０．１％〜１０％（ｍ／ｍ）の量で、そ
して好ましくは０．５％〜５％の範囲で処方物中に組み込まれる。

【００３０】 外側相（分散媒体、連続相）として、水、水溶液または水と混和可能な液体（
例えば、グリセリンまたはポリエチレングリコール）ならびに油状液体（例えば
、ミグリコール（ｍｉｇｌｙｃｏｌ）（中鎖トリグリセリド−ＭＣＴ））および
他の油（ヒマシ油、落花生油、大豆油、綿実油、菜種油、亜麻仁油、オリーブ油
、ヒマワリ油、およびサフラワー油））が用いられ得る。

【００３１】 界面活性剤を含まないＳＢＡは、水溶液中に脂質相を分散させることにより生
成される。水溶液は、１つ以上の粘性増加物質単独で、または他の物質（例えば
、糖、糖アルコール（特に、グリルコース、マンノース、トレハロース、マンニ
トール、ソルビトールなど））との組合わせのいずれかを含む。さらに、粘性増
加物質の組合わせ、またはこれらと糖もしくは糖アルコールとの組合わせ、また
は荷電した安定化剤もしくは抗凝集剤とのさらなる組合わせを使用することが可
能である。

【００３２】 ＳＢＡ分散物は、種々の疾患に対する免疫のために多くの異なる抗原に対する
アジュバントとして使用され得る。この例は、以下である： 糖タンパク質（例えば、淋菌タンパク質Ｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕ
ｓ抗原、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎ
ｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）。

【００３３】 ウイルス抗原（例えば、セムリキ森林ウイルス、脳心筋炎ウイルス、ブタラロ
ウイルス（ｒａｒｏ ｖｉｒｕｓ）、仮性狂犬病ウイルス、ニューカッスル病ウ
イルス、ウシのウイルス性下痢、ＨＩＶ、インフルエンザ、サイトメガロウイル
ス、単純ヘルペス、Ｃ型肝炎、麻疹など）。

【００３４】 寄生生物（例えば、マラリア、アイメリア ｓｐｐ．など）。

【００３５】 まとめると、ＳＢＡ分散物とともに、以下のアジュバントが利用可能であると
いうことができる： １．十分な物理的安定性を有して、製品として、特に医薬品として生成されるア
ジュバント、 ２．特に生物学的に分解性の脂質（例えば、グリセリド）が使用される場合、低
毒性かつ良好な生体適合性を有するアジュバント、 ３．フロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）に匹敵する効果を有するアジュバ
ント、および ４．低コストの製造方法を用いて、低コスト賦形剤からコスト効率的に生成され
得るアジュバント。

【００３６】 ＳＢＡ分散物は、抗原用量（従って、コスト）を広範に減少させるために使用
され得、毒物学的に受容可能な賦形剤を伴って、同様に、ＳＢＡの添加とともに
、同じ免疫系刺激効果がより低い抗原用量で達成される。

【００３７】 従来、ワクチンのためにはあまり十分な抗原性を有さなかった抗原は、免疫応
答刺激ＳＢＡの添加によって効果的なワクチンに作製され得る。

【００３８】 ＦＩＡの有効性に匹敵する現在の有効性を伴ったコスト効率的な生産のおかげ
で、ＳＢＡ分散物は、非常に低コストなワクチンのみが有益であるために使用さ
れ得る場合、獣医学的ワクチン接種のためのアジュバントとして適切である。

【００３９】 従来使用されたアジュバントは、体液性免疫応答を増強することに焦点を当て
てきた。ＳＢＡ分散物の有効性を鑑みると、ＳＢＡ脂質粒子に対するさらなるア
ジュバントの添加はもはや必要なく、および／またはＧＭＤＰのようなアジュバ
ントの添加は体液性免疫応答のさらなる増加をもたらさない。明らかにその最大
の応答能力の免疫系に対しては、さらなるアジュバントは、さらなる効果をもた
らし得ない。従って、ＳＢＡへの添加は、体液性応答に対する利点をもたらさず
、Ｇｅｒｂｕの特許（特許明細書ＤＥ １９６１１２３５ Ｃ１）に記載される
もののような添加剤は、本発明において記載されたＳＢＡについて見出された驚
くべき有効性のおかげで不必要である。

【００４０】 しかし、驚くべきことに、ＳＢＡ分散物との組合わせでＧＭＤＰの適用後に、
その後の再接種（ブースター）の場合に、以前にＳＢＡ分散物をアジュバントと
して単独で用いた場合より、明らかに増強された細胞性免疫応答を達成したこと
が確認された。従って、ＳＢＡ分散物の組合わせは、再接種の場合の細胞性免疫
応答を増大させるために特に適切であることが新たに発見された。以前にＧＭＤ
ＰのようなさらなるアジュバントをＳＢＡ分散物と混合して用いた場合、その後
の２回目の接種の場合に免疫応答が増大する（実施例１３）。

【００４１】 従って、細胞性免疫応答を増強する目的でアジュバントを生成するために、Ｓ
ＢＡ分散物とさらなるアジュバントとを組合わせることは、有利である。組み合
わせのためのさらなるアジュバントは、以下である：Ｎ−アセチルグリコサミニ
ル−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン
［ＧＭＤＰ］、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド［ＤＤＡ］、Ｎ−
アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン［ＭＤＰ］、Ｎ，Ｎ ジ
（β−ステアロイルエチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド［ＥＱ１
］、糖ペプチド、ミコバクテリアの細胞壁成分、サポニン、四級アミン（例えば
、セチルピリミジウムクロリドおよびベンザルコニウムクロリドなど）、双性イ
オンアミン（例えば、ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コラミドプロピル）−ジメチル
アンモニオ］１−プロパンスルホネート））、硫酸デキストラン、デキストラン
、３−オデサシル（ｏｄｅｓａｃｙｌ）−４’−モノホスホリルリピドＡ［ＭＰ
Ｌ（登録商標）］、Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル（ｄｉ
ｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｙｌ）−Ｌ−アラニン−８２）−１，２−ジパルミトイル
−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−ホスホリルオキシ）エチルアミド（一ナ
トリウム塩）［ＭＴＰ−ＰＥ］、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子［Ｇ
Ｍ−ＣＳＦ］、ブロックコポリマー（例えば、Ｐ１２０５、ポロキサマー４０１
（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１））、ジミリストイル−ホスファチジルコリン［
ＤＭＰＣ］、デヒドロエピアンドロステロン−３β−０１−１７−オン［ＤＨＥ
Ａ］、ジミリストイル−ホスファチジルグリセロール［ＤＭＰＧ］、デオキシコ
ール酸ナトリウム塩、サイトカイン、ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ、ＤＴＰ−ＧＤＰ、サ
ポニン、７−アリル−８−オキソグアソニン（ｏｘｏｇｕａｓｏｎｉｎ）、モン
タニド（ｍｏｎｔａｎｉｄｅ） ＩＳＡ ５１、モンタニド ＩＳＡ ７２０、
ＭＰＬ、Ｍｕｒａｍｅｔｉｄｅ、Ｍｕｒａｐａｌｍｉｔｉｎ、Ｄ−Ｍｕｒａｐａ
ｌｍｉｔｉｎ、１−モノパルミトイル−ｒａｃ−グリセロール、ジセチルホスフ
ェート、ポリメチルメタクリレート［ＰＭＭＡ］、ＰＥＧ−ソルビタン脂肪酸エ
ステル（例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０（登録商標）））、Ｑ
ｕｉｌ Ａサポニン、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ソルビタントリオレ
エート（ＳＰＡＮ（登録商標）８５，Ａｒｌａｃｅｌ ８５））、ＤＴＰ−ＤＰ
Ｐ、ステアリル−チロシン、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（２−
ヒドロキシエチル）プロパンジアミン、カルシトリオール。

【００４２】 ＳＢＡ分散物により引き起こされた体液性免疫応答の増大に加えて、本発明は
、ＳＢＡ分散物と他のアジュバントとの組合わせにより、２回目の接種の場合に
おける細胞性免疫応答を増強する可能性を開く。

【００４３】 細胞性免疫応答を増強するためにアジュバントと混合するかわりに、このアジ
ュバントはまた、脂質粒子に組み込まれ得る。組み込みは、固体粒子マトリクス
に包含させること、両親媒性アジュバントの場合は、界面での蓄積、または粒子
表面への単純な吸着により可能になる。アジュバントの組み込みは、粒子生成の
間またはその後に（例えば、組み込みの場合、実施例１６）生じ得る。生成の間
の組み込みに関しては、アジュバントは、脂質融解相において溶解され、次いで
、可溶化されたか、もしくは分散され、かつアジュバントを含む脂質相は、さら
に処理される。両親媒性アジュバントの場合には、これらはまた、ＳＢＡ分散物
の外側相に溶解され得、次いで、粒子表面において富化されるか、表面への吸着
により富化される。アジュバントの組み込みは、拡散により、または酵素による
粒子分解の過程の間に長期化した放出をもたらす。かなり長期間にわたる遅延型
放出は、免疫応答を増強する。

【００４４】 適用のためのさらに魅力的な分野は、動物における抗体生成である。抗体収量
は、アジュバントの添加により明らかに増加し得る。

【００４５】 （実施例） （実施例１：ＳＢＡ 対 フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）の物理的
安定性の測定） 水性ＳＢＡ分散物を、２０％ 蜜蝋、２％Ｔｗｅｅｎ ８０（ＰＣＳ直径２８
９ｎｍ、多分散指数０．１０１）中で、９５℃での高圧ホモジナイザーションに
より生成した。ＦＩＡをフロイント［Ｆｒｅｕｎｄ，Ｊ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ １９４８，６０，３８３−３９８］により記載された方法に従って生成し
た。ＳＢＡおよびＦＩＡを、薬物の安定性試験のために使用した気候帯の温度で
保管した［ＥＭＥＡ Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ ＣＰＭＰ／ＱＷＰ／１５９／９６，
１９９８年１月］。保管温度は、以下であった：５℃、２５℃、４０℃。物理的
安定性を、レーザー回折法（ＬＤ）を用いた粒子サイズの測定により決定し、特
徴付けパラメーターは、５０％直径および９５％直径（粒子の５０％／９０％が
、示したサイズ未満であり、粒子凝集の高感度パラメーター）であった。数分間
の保管後（室温ですら）、ＦＩＡは、明らかな粒子成長を示した；従って、ＦＩ
Ａは、保管中に安定なアジュバントではない。対照的に、ＳＢＡの粒子サイズは
、１年間にわたる３つの保管条件下でも変化しないままであった（表１）。

【００４６】

【表１】 （実施例２：ＳＢＡ 対 スクアレンアジュバントの物理的安定性の測定） ＳＢＡを実施例１に記載のように生成した。このアジュバントは、１０％セチ
ルパルミテートおよび１．２％Ｍｉｒａｎｏｌ（ＰＣＳ直径２１０ｎｍ、ＰＣＳ
多分散指数０．１８９）を含んでいた。スクアレンアジュバントは、欧州特許出
願０ ３９９ ８４３（１９９０５月２５日出願）に記載のように生成した（Ａ
ｄｊｕｖａｎｔ ＭＦ５９）。粒子サイズをレーザー回折法により測定し、実施
例１のように３つに温度で保管を行った（表２）。加速させた安定性試験を行っ
たことに加えて、ＳＢＡおよびＭＦ５９分散物を５０Ｈｚの周波数、４０℃で振
盪した（表３）。ＳＢＡは、通常の保管およびストレス試験（ｓｔｒｅｓｓ ｔ
ｅｓｔ）の両方においても増加した安定性を示す。

【００４７】

【表２】

【００４８】

【表３】 （実施例３．ＳＢＡの長期安定性：２０％蜜蝋（ｂｅｅｓｗａｘ）、２％Ｔｗ
ｅｅｎ８０からなるＳＢＡ分散物を１年間４〜６℃で保管した。ＰＣＳデータお
よびレーザー回折法直径は、変化をほとんど示さないかまたは全く示さなかった
（表４）。

【００４９】

【表４】 （実施例４．ＦＩＡおよびＭＦ５９に対する、オートクレーブ（熱、圧力）の
間のＳＢＡの熱安定性）ＳＢＡ分散を、１８％の固形パラフィン、４％Ｔｗｅｅ
ｎ８０／Ｓｐａｎ ８５（７／３）および水で作製した。欧州薬局方の標準的条
件（１２１℃、２ｂａｒ、１５分）に従って注射バイアル中で、各例において２
０ｍＬの滅菌を実行した。ＰＣＳおよびレーザー回折法を用いて粒子サイズを決
定した（ＬＤ９５％）（Ｐ．Ｉ．：多分散性係数（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔ
ｙ ｉｎｄｅｘ）、粒子サイズ分布の範囲の測定、ＡＶ：３つの測定による平均
値、：Ｓｔ．ｄｅｖ．標準偏差、Ｐ．Ｉ．多分散性係数）（表５）。オートクレ
ーブした後、ＦＩＡエマルジョンは、相分離を示し、そしてＭＦ５９は、別個の
粒子サイズ成長を示した。ＳＢＡは、物理的に安定であり、そしてオートクレー
ブにより滅菌され得る。

【００５０】

【表５】 （実施例５．生理学的許容度）許容度（耐容性）を評価するために、細胞培養
物（ヒト顆粒球、ＨＬ６０細胞）中で、ＳＢＡの細胞毒性を決定した。毒性を定
量するために、細胞の生存度をＭＴＴ試験を用いて決定した［Ｍｏｓｍａｎｎ，
Ｔ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１９９３，６５，５５〜６３］。ＳＢＡ
分散物を、１０％のセチルパルミテート、０．５％ポロキサマー（ｐｏｌｏｘａ
ｍｅｒ）１８８および水で作製した。ウェルあたりの細胞数は、ヒト顆粒球の場
合は２００，０００に、そしてＨＬ６０細胞の場合は、２００，０００に達した
。インキュベーションを１２時間行った。ＳＢＡの場合、生存度は、顆粒球で８
０％に達し、ＨＬ６０細胞で８５％に達した。ＰＬＡのナノ粒子（ｎａｎｏｐａ
ｒｔｉｃｌｅ）の場合、生存度はわずか５％であったが、ＰＬＡ／ＧＡのナノ粒
子については、０％まで低下した。ＳＢＡ許容度は、非経口投与についてＦＤＡ
により承認されたポリマーの倍数よりも細胞培養中で少なくとも２０倍多い倍多
い。

【００５１】 （実施例６：非経口投与後の耐性）以下の組成の水性ＳＢＡ分散物を用いた：
５％固形パラフィン、５％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）および水。
ヒツジへの非経口注射（ｎ＝３０）を実行した。注射部位は、側部胸壁であり、
注射の容量は、５ｍＬで４つの注射部位に分けた。注射部位にも、ヒツジの挙動
にもなんら異常は見られなかった。

【００５２】 （実施例７：生体適合性−身体のタンパク質との相互作用）ＳＢＡ分散を１０
％Ｃｏｍｐｒｉｔｏｌ、２．５％Ｐｏｌｏｘａｍｏｒ４０７および水から作製し
た。生成は、高圧ホモジナイザーを用いて実行した。粒子を５分間ヒト血漿とと
もにインキュベートし、次いで、血漿から分離し、２次元ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動を用いて粒子表面上に吸着した身体のタンパク質を決定した［Ｂｌｕ
ｎｋ，Ｔら、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １４，１３８２〜１３８７（１
９９３）］。匹敵する粒子表面積の場合、非常に少ない量のタンパク質がＳＢＡ
上に吸着した。これは、エマルジョンと比較して９６．４１ｃｐｍ（１分あたり
のカウント）であった（これに匹敵する値は：エマルジョン上で４７２ｃｐｍ、
ポリスチレン粒子上で３９０ｃｐｍ）［Ｈａｒｎｉｓｃｈ，Ｓら、Ｅｌｅｃｔｒ
ｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １９９８，１９，３４９〜３５４、Ｂｌｕｎｋ，Ｔ．，Ｅ
ｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １９９３、１４、１３８２〜１３８７］。不耐
性を促進する補完要素は、ＳＢＡ表面上では検出されなかった。

【００５３】 （実施例８：リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中の安定性）２０％固形パラ
フィン、５％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ ８５（７／３）および水から構成され
るＳＢＡをＰＢＳと混合した（２ｍＬ ＳＢＡ＋２ｍＬ塩溶液）。時間の関数と
してレーザー回折法を用いて、生理食塩水中の物理的安定性を決定した。６時間
にわたって、粒子サイズの増大は存在しなかった（９０％直径および９５％直径
、表６）（Ｓｔ．ｄｅｖ．：標準偏差）。

【００５４】

【表６】 （実施例９：分子アジュバント（ＧＭＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ
−アセチルムラミル−ジペプチド）およびＦＩＡと比較したアジュバントの効果
）ヒツジに、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ（マイコプラズマ）Ｂｏｖｉｓ ＰＧ４５Ｒ
９株を接種した。接種抗原の培養中での培養は、ヘーフリック（Ｈａｙｆｌｉｃ
ｋ’ｓ）培地中で微好気性条件下で７２時間にわたって行った。０．１％βプロ
ピオラクトンの添加により不活性化を達成した。この細胞を分離し、ｐＨ７．４
のリン酸緩衝液で洗浄し、そして１×１０¹⁰ＣＦＵ／ｍＬの含量に調節した。ド
イツ薬局方第１０版（Ｇｅｒｍａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｉｅａ）に従って調
製物の無菌性を試験した。乾燥質量決定により、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｂｏｖ
ｉｓ抗原の１ｍｇ／ｍＬの含量が示された。アジュバントＳＥＡ、ＧＭＤＰおよ
びＦＩＡを抗原と等量で、緩衝液中で混合した。注射容量は５ｍＬであって、４
つの注射部位に分けた。

【００５５】 ＳＢＡ組成は、４％固形パラフィン、１％ＥＱ１（Ｎ，Ｎジ−（β−ステアロ
イルエチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロライド）および４％Ｔｗｅｅ
ｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）であった。ＧＭＤＰアジュバントの組成は、５
％脂質および０．５％界面活性剤であった。ＦＩＡを実施例１のように生成した
。

【００５６】 血液サンプルを０日目（注射前）、３５日目、および６３日目に採取した。Ｅ
ＬＩＳＡを用いて抗体の決定を行った。ＥＬＩＳＡ試験のために、Ｓｉｇｍａか
ら市販のマーク（標識）した抗−ＩｇＧ−ヒツジを用いた。

【００５７】 ＳＢＡは、脂質粒子とＧＭＤＰの組合せの有効強度に匹敵する効果強度を示し
た。さらに、ＳＢＡは、ＦＩＡの有効性に匹敵する効率性であった（図１）。３
つのアジュバントの間に効果強度の有意な差異はなかった。

【００５８】 図１：分子アジュバント（ＧＭＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセ
チルムラミル−ジペプチド）およびＦＩＡと比較したアジュバントの効果。ＳＢ
Ａ組成物は、４％固形パラフィン、１％ＥＱ１（Ｎ，Ｎジ−（β−ステアロイル
エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロライド）および４％Ｔｗｅｅｎ８
０／Ｓｐａｎ８５（７／３）および水であった。ＧＭＤＰアジュバントの組成は
、５％ＥＱ１および０．５％モンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）８８８であった
。脂質および０．５％界面活性物質であった。ＦＩＡを実施例１のように生成し
た。

【００５９】 （実施例１０．抗体力価に対するＳＢＡ組成物の効果）ＳＢＡ分散を同一の脂
質（ただし表面上の界面活性物質は異なる（すなわち、その表面特性が異なる）
）から生成した。ＳＢＡ−１処方物は、４％固形パラフィン、４％Ｔｗｅｅｎ８
０／Ｓｐａｎ８５（７／３）および水から構成された；ＳＢＡ−２処方物は、４
％固形パラフィン、１％ＥＱ１および４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／
３）および水を含む。抗体力価の増大の効率を、実施例９と同様に試験した。比
較としてはＦＩＡを用いた。表面特性に依存して、２つのＳＢＡ分散について異
なる免疫応答のレベルが得られた（図２）。従って、表面特性のバリエーション
（界面活性物質、安定化剤、電荷など）により、所望の免疫応答の強度を調節し
得る。

【００６０】 図２：抗体力価に対するＳＢＡ組成物の効果：ＳＢＡ−１処方物は、４％固形
パラフィン、４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）および水から構成さ
れる；ＳＢＡ−２処方物は、４％固形パラフィン、１％ＥＱ１および４％Ｔｗｅ
ｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）および水を含む。

【００６１】 （実施例１１）：ＳＢＡ−２の貯蔵安定性：実施例１１に由来するＳＢＡ分散
ＳＢＡ−２を異なる温度にて貯蔵して、そしてその物理的安定性をＰＣＳについ
ての粒子サイズを測定することによって決定した。粒子成長は生じなかった（図
３）。

【００６２】 （図３）：ＳＢＡ−２の貯蔵安定性：実施例１１に由来するＳＢＡ分散ＳＢＡ
−２を異なる温度にて貯蔵して、そしてその物理的安定性をＰＣＳについての粒
子サイズを測定することによって決定した。

【００６３】 （実施例１２）：ＳＢＡ分散の表面修飾：表面電荷の修飾のために、相互（ｉ
ｎｔｅｒａｃｉａｌ）活性な正に荷電した安定剤（ＥＱ１−ジスステアロイルエ
チルジアンモニウムクロリド、セチルピリジニウムクロリド）および負に荷電し
た安定剤（ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ））を用いてＳＢＡ分散を生成した
。ＳＢＡ分散の組成物は以下であった：ＳＢＡ−ＥＱ１（２０％セチルパルミテ
ート、４％Ｔｗｅｅｎ ８０／Ｓｐａｎ ８５（７／３）、１％ＥＱ１）、ＳＢ
Ａ−ＣＰＣ（１８％脂質、１０％界面活性剤、０．１％セチルピリジニウムクロ
リド）およびＳＢＡ−ＳＤＳ（２０％セチルパルミテート、１％ＳＤＳ ８０）
。荷電の測定と同様に、ゼータ電位をミリボルト（ｍＶ）にて測定した（電気泳
動測定）（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ４（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，
ＵＫ））。電気泳動移動度のゼータ電位への転換は、Ｈｅｌｍｈｏｌｔｚ−Ｓｍ
ｏｌｕｃｈｏｗｓｋｉ式を使用して行った。このゼータ電位は、３ ＳＢＡ分散
について＋４０ｍＶ、＋２８ｍＶおよび−３５ｍＶに達した。

【００６４】 （実施例１３）：最初の免疫化の時にＧＭＤＰ含有アジュバント（ＳＢＡ）で
処置した雌鳥において、ブースター注射の場合では細胞性免疫応答は増加した。
ＳＢＡ（５％ＥＱ１、０．５％Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ８８８）を、抗原（ウサギ
由来のＩｇＧ）と共に１：１で混合し、そして皮下注射した。ＳＢＡは、５μｇ
のＧＭＤＰを含み、そして免疫スケジュールは、以下のようであった；最初の免
疫化そして１４日目および２８日目の２回のブースター注射。抗体測定を、４２
日目に実施して、そして卵黄内のＩｇＹ力価を測定した。任意の増強した細胞性
免疫応答を研究するために、１００日目に新たな抗原接触（さらなるブースター
注射）が行われ、そして１２０日目に、抗体測定を行った。その結果は、更新さ
れた抗原接触を伴うＧＭＤＰ含有ＳＢＡを用いる最初の免疫化（１４日目および
２８日目）の場合において、強力に増強された抗体産生が生じることを示す。図
４における欄２、３および４。

【００６５】 （図４）：基本的な免疫化および１００日目に更新された抗原接触後の雌鳥に
おける抗体産生。基本的な免疫化の最終的な抗体測定を４２日目に行い、ブース
ター注射（１００日目）後の抗体測定を１２０日目に行った。実施例１〜５のワ
クチンの成分は、以下の通りである： １．４２日目、ＰＢＳ中の抗原、１００日目：ＰＢＳ中の抗原（該当せず：ア
ジュバント無し、ＰＢＳ中の抗原） ２．４２日目、ＧＭＤＰを有するＳＢＡ中の抗原、１００日目：ＳＢＡ中の抗
原 ３．４２日目、ＧＭＤＰを有するＳＢＡ中の抗原、１００日目：ＦＣＡ中の抗
原（ＦＣＡ＝フロイント完全アジュバント） ４．４２日目、ＧＭＤＰを有するＰＢＳ中の抗原、１００日目：ＰＢＳ中の抗
原 ５．４２日目、ＦＣＡ中の抗原、１００日目：ＰＢＳ中の抗原 （実施例１４）：ＳＢＡ粒子へのＧＭＤＰの吸着を、ＰＣＳを使用して試験し
た。ＧＭＤＰをＳＢＡ（４％固形パラフィン、４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８
５（７／３））と共に混合し、そして粒子上へのＧＭＤＰの吸着が可能となるよ
うに３０分間室温に放置した。最終濃度は、１．４３５ｍｇ／ｍｌに達した。サ
イズの成長は、３．９ｎｍに達した。（ＧＭＤＰを伴わないＰＣＳ直径：９９．
４ｎｍ、標準偏差：０．７６４、ＧＭＤＰを伴う直径：１０３．３ｎｍ、標準偏
差：０．７５５）。

【００６６】 （実施例１５）：粒子サイズの調節：実施例１２由来のＥＱ１を用いるＳＢＡ
分散を、粒子サイズを変更するために種々の製造プロセスを使用して産生した。
粒子サイズを、レーザー回折法（レーザー回折計ＬＳ ２３０、Ｃｏｕｌｔｅｒ
Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｇｅｒｍａｎｙ、測定範囲：４０ｎｍ〜２０００μ
ｍ）を使用して測定した。５０％の粒子の直径を、特徴付けパラメーターとして
得る。以下の産生方法を使用した： ａ）高圧均質化：脂質を溶かし、水性界面活性剤溶液に注ぎ、攪拌器で分散さ
せ、そして得られた生のエマルジョンを、高圧ホモジナイザーを用いて８０℃に
て均質化した（Ｍｉｃｒｏｎ ＬＡＢ４０、ＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ Ｈｏｍｏｇ
ｅｎｉｓｅｒ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。均質化パラメーターは、５００バ
ール圧、３均質化サイクルであった。５０％の粒子直径は、０．１５μｍに達し
た。

【００６７】 ｂ）生のエマルジョンをａ）に記載されるように産生し、そしてマイクロフル
イダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（デバイス型１１０−Ｙ、Ｍｉｃ
ｒｏｆｌｕｉｄｉｘ Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて均質化した。均質化パラメー
ターは、７００バール、１０分間の循環時間であった。平均粒子直径は０．４５
２μｍに達した。

【００６８】 ｃ）ローターステーター分散：生のエマルジョンをａ）に記載されるように産
生し、次いでＵｌｔｒａｔｕｒｒａｘ（Ｔｙｐｅ Ｔ２５、Ｊａｈｎｋｅおよび
Ｋｕｎｋｅｌ、Ｓｔａｕｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）をを用いて１０，０００ｒｐ
ｍの速度で１分間および１０分間分散させた（分散温度８０℃）。粒子直径は、
７．５μｍおよび１．２μｍに達した。

【００６９】 ｄ）静的ミキサー：ａ）由来の脂質および水性界面活性剤溶液を８０℃にて加
熱して、そして静的ミキサーにおいて混合した（Ｓｕｌｚｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ
）。粒子サイズは、１５．８μｍに達した。

【００７０】 ｅ）ガスジェットミル（Ｇａｓ−ｊｅｔ ｍｉｌｌ）：ベヘン酸トリグリセリ
ドを、空気ジェットミルし（Ｊｅｔｍｉｌｌ，Ｍｏｓｏｋａｗａ Ａｌｐｉｎｅ
ＡＧ）、次いで、室温において、水性界面活性剤溶液中で攪拌により分散させ
た。５０％の粒子直径は、３７．０３μｍに達した。

【００７１】 ｆ）モルタルミル（Ｍｏｒｔａｒ ｍｉｌｌ）：あらく粉末化された脂質を、
３分間および１５分間、液体窒素を添加してモルタルミルでひいた（Ｒｅｔｓｃ
ｈ ｍｏｒｔａｒ ｍｉｌｌ，Ｒｅｔｓｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。その脂質をｅ
）におけるように水中で分散させた。平均粒子サイズは４０μｍであった。

【００７２】 （実施例１６）：ＳＢＡ中に取り込まれる細胞性免疫応答を増強させるための
分子アジュバント：ＧＭＤＰをＳｐａｎ８５（Ｗ／Ｏ）乳化機中で溶解し、そし
てセチルパルミテートを添加した。この混合物を７０℃にて融解させ、そして再
度冷却した後、液体窒素を添加してモルタルミルでひいた。粉にした脂質−ＧＭ
ＤＰ混合物を２．５％Ｔｗｅｅｎ８０溶液中で分散させ、そしてＵｌｔｒａｔｕ
ｒｒａｘを用いて１分間８０００ｒｐｍで予備（ｐｒｅ）分散させた。この分散
物を、高圧均質化を３サイクル、１０００バールにおいて４℃で使用して均質化
した。このＰＣＳ直径は、０．４３０の多分散性指標を用いて、２６０ｎｍに達
した。

【００７３】 （実施例１７）：界面表面に取り込まれる細胞性免疫応答を増加させるための
分子アジュバント：一般的に、サポニンが細胞性免疫応答を増加させることが公
知である。この粒子の産生を、ローターステーターを用いて実施例１５に類似し
て行った。ＳＢＡ分散の組成物は５％セチルパルミテート、０．５％サポニン（
Ｑｕｉｌ Ａ Ｓａｐｏｎｉｎ）および水である。このサポニンを、水相にて溶
解し、これを８０℃まで加熱し、そして脂質融解物を添加した。産生を、Ｕｌｔ
ｒａｔｕｒｒａｘを用いて、１０，０００ｒｐｍにて５分間攪拌して行った。レ
ーザー回折法を用いて決定された５０％直径は、２．２８μｍに達した。

【００７４】 （実施例１８）：両親媒性アジュバントの存在下におけるＳＢＡの産生。両親
媒性界面活性剤ＣＨＡＰＳが、免疫応答を増強させる手段として文献に記載され
る。この粒子は、５％セチルパルミテートおよび０．５％ＣＨＡＰＳから構成さ
れる。粒子の産生を、実施例２０に類似するように実施した。レーザー回折法を
用いて決定された５０％直径は、１．８９７μｍに達した。

【００７５】 （実施例１９）：ＳＢＡ対純粋な分子アジュバントの比較：実施例１０（ＳＢ
Ａ−２）由来のＳＢＡ分散番号２を、ヒツジにて試験し（実施例９と同様の条件
）、分子アジュバント（すなわち、純粋なＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグリコサミニ
ル−Ｎ−アセチルムラミル−ジペプチド）と比較した。ＧＭＤＰの濃度（０．１
ｍｇ／ｍｌ）は、実施例９と類似していた。インビボ試験を、実施例９に記載さ
れるように行った。ＳＢＡ２は、純粋ＧＭＤＰよりも高い強度の効果を示す（図
５）。ＳＢＡ−２の組成物：４％固形パラフィン、１％ＥＱ１（Ｎ，Ｎジ−（β
−ステアロイルエチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド）および４％
Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）。

【００７６】 （実施例２０：免疫応答に対する荷電効果（表面特性）（実施例９に類似する
ヒツジの研究）：正に荷電した粒子ＳＢＡ４とＳＢＡ２との間における効果の強
度の差異は検出され得ない。ＳＢＡ２由来のＥＱ１は、毒物学的に試験されて、
そして薬学的防腐剤（ＳＢＡ４）として認可されているセチルピリジニウムクロ
リドによる効果のいかなる損失も伴わずに置換され得る。処方物ＳＢＡ５の負に
荷電した粒子とは対照的に、正に荷電した粒子処方物が、より強い効果を有する
ことが観察される（図６）。

【００７７】 ＳＢＡ処方物は、以下の組成物を有する：ＳＢＡ４：４％固形パラフィン、４
％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）、０．５％セチルピリジニウムクロ
リド。ＳＢＡ５：４％固形パラフィン、デオキシコール酸ナトリウム０．２％、
コール酸ナトリウム０．２％、オレイン酸ナトリウム１％、リポイドＥ８０ ２
％。ＳＢＡ２：４％固形パラフィン、１％ ＥＱ１、および４％Ｔｗｅｅｎ８０
／Ｓｐａｎ８５（７／３）。表面荷電（ゼータ電位）を、５０μｓ／ｃｍの伝導
率を有する伝導水において決定した：ＳＢＡ４：＋４１．４ｍＶ、ＳＢＡ２：＋
４０．５ｍＶ、ＳＢＡ５：−３６．４ｍＶ。サイズ（ＰＣＳ直径および多分散性
指標（Ｐ．Ｉ．））は以下の通りであった：ＳＢＡ４：１０３ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０
．１１０）、ＳＢＡ５：１０７ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０．１１５）、ＳＢＡ２：１０１
ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０．１０１）。

【００７８】 （実施例２１）：効果の種独立性（雌鳥）：実施例９由来の抗原をＳＢＡ１と
ＳＢＡ２とを１：１の比で混合し、そして雌鳥あたり０．５ｍｌ注射した。抗体
力価を雌鳥の卵から決定した。ＥＬＩＳＡ試験を、定量のために使用した。実施
例９における説明とは対照的に、マークされた抗ＩｇＧニワトリをＥＬＩＳＡ試
験に使用した。最初の免疫化を０日目に行った。同じ調製物を有するブースター
を３１日目に与えた。実施例１０における結果と類似して、処方物ＳＢＡ２は、
より強い効果を有することを証明した（図７）。

【００７９】 ＳＢＡ１の組成物：４％固形パラフィン、および４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａ
ｎ８５（７／３）、ＰＣＳ直径：１０７ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０．１１２）；およびＳ
ＢＡ２：４％固形パラフィン、１％ＥＱ１および４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ
８５（７／３）、ＰＣＳ直径：１０１ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０．１０１）。

【００８０】 （実施例２２）：アジュバント効果に対する脂質マトリックスの影響：処方物
ＳＢＡ２の場合において、非生物分解性固形パラフィンを生物分解性グリセロー
ルトリベヘネート（ｔｒｉｂｅｈｅｎａｔｅ）（ＳＢＡ３）と交換した。効果の
強度に差異はない；固形パラフィンは、グリセロールトリベヘネートにより置換
され得る（図８）。ＳＢＡ２の組成物：４％固形パラフィン、１％ＥＱ１および
４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）、ＰＣＳ直径：１０１ｎｍ（Ｐ．
Ｉ．０．１０１）；およびＳＢＡ３：４％グリセロールトリベヘネート、１％Ｅ
Ｑ１および４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）、ＰＣＳ直径：１０５
ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０．１１２）。

【００８１】 （実施例２３）：処方物ＳＢＡ１およびＳＢＡ２を水酸化アルミニウムにおけ
る比較において試験した（実施例９に類似する手順）。ＳＢＡ１およびＳＢＡ２
の効果は、水酸化アルミニウムの効果と同一である（コントロール：ＰＢＳ中の
抗原）。実施例９において、ＳＢＡ２は、ＳＢＡ１より強力な効果を有する（Ｓ
ＢＡ１）（図９）。ＳＢＡ２の組成物：４％固形パラフィン、１％ＥＱ１および
４％Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５（７／３）、ＰＣＳ直径：１０１ｎｍ（Ｐ．
Ｉ．０．１０１）；およびＳＢＡ１：４％固形パラフィン、４％Ｔｗｅｅｎ８０
／Ｓｐａｎ８５（７／３）、ＰＣＳ直径：１０７ｎｍ（Ｐ．Ｉ．０．１１２）。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、分子アジュバント（ＧＭＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−ア
セチルムラミルジペプチド）とＦＩＡとの比較におけるアジュバント効果を示す
。

【図２】 図２は、抗体力価に対するＳＢＡ組成物の効果を示す。

【図３】 図３は、ＳＢＡ−２の保存安定性を示す。

【図４】 図４は、基本的な免疫化および１００日目に更新された抗原接触後の雌鳥にお
ける抗体産生であり、基本的な免疫化の最後の抗体測定を４２日目に行い、ブー
スター注入（１００日目）後の抗体測定を１２０日目に行ったことを示す。

【図５】 図５は、分子アジュバントＧＭＤＰとの比較におけるＳＢＡのアジュバント効
果（実施例１９）を示す。

【図６】 図６は、異なる粒子荷電の効果（実施例２０）を示す。

【図７】 図７は、雌鳥におけるアジュバント効果（実施例２１）を示す。

【図８】 図８は、アジュバント効果に対する脂質マトリックスの影響（実施例２２）を
示す。

【図９】 図９は、水酸化アルミニウムを有するＳＢＡ１およびＳＢＡ２の効果の比較（
実施例２３）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ， ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C085 AA03 AA38 BA01 BB01 EE01 EE06 FF02 FF11 FF12 FF14 FF17 FF18 FF21 FF30 GG01

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒトおよび動物のワクチン接種の場合において免疫応答を増
   強するため、および抗体産生の収量を増加させるための薬剤であって、該薬剤は
   、室温（＝２０℃）で固体である脂質粒子と抗原との混合物を含むことによって
   特徴付けられ、ここで該脂質粒子が、免疫される被験体のための最適用量および
   最適な粒子サイズ、粒子の電荷、および表面特性（界面活性物質を安定化させる
   ）で特徴付けられるように混合される、薬剤。
2. 【請求項２】 前記粒子のサイズが１０〜１０００ｎｍの範囲内にある、請
   求項１に記載の薬剤。
3. 【請求項３】 前記粒子のサイズが１〜１０μｍの範囲内にある、請求項１
   に記載の薬剤。
4. 【請求項４】 前記粒子のサイズが１０〜２００μｍの範囲内、好ましくは
   １０〜１００μｍの範囲内にある、請求項１に記載の薬剤。
5. 【請求項５】 前記粒子のサイズが２００〜１０００μｍの範囲内、好まし
   くは２００〜５００μｍの範囲内にある、請求項１に記載の薬剤。
6. 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬剤であって、前記脂
   質粒子の生成のために使用される脂質が室温において固体であり、該脂質には、
   例えば、エチルステアレート、オクタデカン、ＤＤＡ、天然および合成のトリグ
   リセリドならびに／またはそれらの混合物、モノグリセリドおよびジグリセリド
   が単独でまたはその混合物で含まれるか、あるいは、該脂質は、例えば、トリグ
   リセリド、自己乳化修飾脂質、天然および合成のろう、脂肪アルコールを伴い、
   そして該脂質はそのエステルおよびエーテル、脂質ペプチドの形態、またはその
   任意の混合物を含み、該脂質として特に適切なものには、合成モノグリセリド、
   ジグリセリド、およびトリグリセリド（個々の物質としてまたは混合物（例えば
   、硬い脂質）、Ｉｍｗｉｔｏｒ ９００、トリグリセリド（例えば、グリセロー
   ルトリラウレート、グリセロールミリステート、グリセロールパルミテート、グ
   リセロールステアレート、およびグリセロールベヘネート）、ならびにろう、例
   えば、セチルパルミテートおよび白ろう（ＤＡＢ）、該脂質は、個々にまたは混
   合物中で使用され、または炭化水素、例えば固形パラフィンである、薬剤。
7. 【請求項７】 請求項６に記載の薬剤であって、液体脂質、例えば、液体グ
   リセリド（ミグリコール）、ピーナッツオイル、ひまし油、大豆油、綿実油、菜
   種油、亜麻仁油、オリーブ油、ヒマワリ油、およびベニバナ油が前記脂質粒子を
   生成するために使用される前記固体脂質に混合され得、該粒子は、室温（２０℃
   ）で固体として生成されることを特徴とする、薬剤。
8. 【請求項８】 正に荷電していることを特徴とする、請求項１〜７に記載の
   薬剤。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の薬剤であって、前記脂質粒子の生成に際し
   て正電荷を生じるために、以下：ベンジルメチルジメチルヘキサデシルアンモニ
   ウムクロリド、メチルベンゼトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、セ
   チルピリジニウムクロリド、Ｎ，Ｎ−ジ（β−ステアロイルエチル）−Ｎ，Ｎ−
   ジメチルアンモニウムクロリド、およびジメチルジオクタデシルアンモニウムブ
   ロマイドからなる群から選択される物質が個々にまたは混合物中で使用され得る
   ことを特徴とする、薬剤。
10. 【請求項１０】 負に荷電していることを特徴とする、請求項１〜７に記載
    の薬剤。
11. 【請求項１１】 請求項１０に記載の薬剤であって、前記脂質粒子の生成に
    際して負電荷を生じるために、以下の化合物：ジアセチルホスフェート、ホスフ
    ァチジルグリセリン、種々の起源のレシチン、例えば、卵レシチン、大豆レシチ
    ン、化学修飾したレシチン（例えば、水素化レシチン）ならびにリン脂質および
    スフィンゴリピド、レシチンとリン脂質との混合物、ステロール（例えば、コレ
    ステロールおよびコレステロール誘導体ならびにスチグマステロール）、ならび
    に飽和脂肪酸および不飽和脂肪酸、コール酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウ
    ム、タウロコール酸ナトリウム、およびデオキシコール酸ナトリウムからなる群
    から選択される物質が個々にまたは混合物中に添加されている、薬剤。
12. 【請求項１２】 荷電していないか、またはわずかだけ荷電していることを
    特徴とする、請求項１〜７に記載の薬剤。
13. 【請求項１３】 請求項１２に記載の薬剤であって、前記脂質粒子の生成に
    際して、以下の荷電していない物質：例えば、ポリエチレングリコールソルビタ
    ン脂肪酸エステル（特にＴｗｅｅｎ８０のようなＴｗｅｅｎシリーズ）、ポリオ
    キシエチレンポリオキシプロピレンコポリマー（特にポロキサマーシリーズおよ
    びポロキサミンシリーズ）、エトキシ化モノグリセリドおよびジグリセリド、エ
    トキシ化脂質、エトキシ化脂肪アルコールまたは脂肪酸、ならびに糖または糖ア
    ルコールの、脂肪酸または脂肪アルコールとのエステルまたはエーテル（例えば
    、サッカロースモノステアレート）からなる群から選択される物質が個々にまた
    は混合物中で互いに添加され得る、薬剤。
14. 【請求項１４】 １以上のアジュバントが添加されていることによって特徴
    付けられる、請求項１〜１３に記載の薬剤。
15. 【請求項１５】 請求項１４に記載の薬剤であって、Ｎ−アセチルグリコサ
    ミニル−（β１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタ
    ミン［ＧＭＤＰ］、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド［ＤＤＡ］、
    Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン［ＭＤＰ］、Ｎ，Ｎ
    −ジ（β−ステアロイルエチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド［Ｅ
    Ｑ１］、グリコペプチド、ミコバクテリアの細胞壁の成分、サポニン、四級アミ
    ン、例えば、セチルピリジニウムクロリド、およびベンザルコニウムクロリド、
    双性イオンアミン、例えば、ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コールアミドプロピル）
    −ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）、デキストランサルフェ
    ート、デキストラン、３−オデサシル−４’−モノホスホリルリピドＡ［ＭＰＬ
    （登録商標）］、Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−ジイソグルタミニル−Ｌ−アラ
    ニン−８２）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−
    ホスホリルオキシ））エチルアミド、１ナトリウム塩［ＭＴＰ−ＰＥ］、顆粒球
    マクロファージコロニー刺激因子［ＧＭ−ＣＳＦ］、ブロックコポリマー、例え
    ば、Ｐ１２０５、ポロキサマー４０１（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１）、ジミリ
    ストイル−ホスファチジルコリン［ＤＭＰＣ］、ジヒドロエピアンドロステロン
    −３β−オール−１７−オン［ＤＨＥＡ］、ジミリストイル−ホスファチジルグ
    リセロール［ＤＭＰＧ］、デオキシコール酸ナトリウム塩、サイトカイン、イミ
    クイモド、ＤＴＰ−ＧＤＰ、サポニン、７−アリル−８−オキソグアソニン、Ｍ
    ｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ５１、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ７２０、ＭＰ
    Ｌ、Ｍｕｒａｍｅｔｉｄ、Ｍｕｒａｐａｌｍｉｔｉｎ、Ｄ−Ｍｕｒａｐａｌｍｉ
    ｔｉｎ、１−モノパルミトイル−ｒａｃ−グリセロール、ジセチルホスフェート
    、ポリメチルメタクリレート、［ＰＭＭＡ］、ＰＥＧ−ソルビタン脂肪酸エステ
    ル、例えば、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、
    Ｑｕｉｌ Ａ サポニン、ソルビタン脂肪酸エステル、例えば、ソルビタントリ
    オレエート（ＳＰＡＮ（登録商標）８５、Ａｒｌａｃｅｌ８５），ＤＴＰ−ＤＰ
    Ｐ、ステアリル−チロシン、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（２−
    ヒドロキシエチル）プロパンジアミン、カルシトリオールからなる群より選択さ
    れる分子アジュバントを含むことを特徴とする、薬剤。
16. 【請求項１６】 前記アジュバントが、例えば、水酸化アルミニウム、ポリ
    マー粒子、またはリポソームのような特定のアジュバントであることによって特
    徴付けられる、請求項１４に記載の薬剤。
17. 【請求項１７】 請求項１４に記載の薬剤であって、二価遷移金属イオン、
    四級アミン、デキストラン、デキストランサルフェート、ビタミンＥ誘導体、例
    えば、ビタミンＥリン酸およびビタミンＥヘミスクシネート、ならびにイソプリ
    ノシンからなる群より選択される前記アジュバントの有効性を増強する物質が該
    アジュバントに添加されることを特徴とする、薬剤。
18. 【請求項１８】 請求項１〜１７のいずれか１項に記載の薬剤であって、前
    記脂質粒子が、固体凝集体状態にある脂質の粉砕、例えば、モルタルミル、ガス
    ジェットミル、エレクトロスパッタリング、高圧均質化、微小流動化によって生
    成されることを特徴とする、薬剤。
19. 【請求項１９】 請求項１〜１７のいずれか１項に記載の薬剤であって、前
    記脂質粒子が、外側相中での分散の際に溶融状態にある脂質の粉砕（例えば、高
    速スターラー、ミクロスケールまたはマクロスケール静的ミキサー、ロータース
    テーターミル、コロイドミル、高圧均質化、微小流動化、スプレープロセス（例
    えば、スプレー乾燥プロセスまたはエレクトロスプレープロセス））によって生
    成され、該外側相が液相（水、有機液体、オイル、またはこれらの混合物）また
    は気相（空気、窒素、希ガス）であり得ることを特徴とする、薬剤。
20. 【請求項２０】 請求項１〜１９のいずれか１項に記載の薬剤であって、前
    記液体粒子およびおそらくさらなるアジュバントが外側相中、例えば、水、等張
    性の糖溶液および等張性の塩化ナトリウム溶液のような水性液体、ＰＥＧ４００
    またはＰＥＧ６００のような非水液体、オイル（ミグリコール、ピーナッツオイ
    ル、ひまし油、大豆油、綿実油、菜種油、亜麻仁油、オリーブ油、ヒマワリ油、
    ベニバナ油または他のオイルもしくはそれらの混合物）のような有機液体中で分
    散されていることを特徴とする、薬剤。
21. 【請求項２１】 例えば外側相に、粘性増加物質が添加されていることを特
    徴とする、請求項２０に記載の薬剤。
22. 【請求項２２】 請求項１〜１９に記載の薬剤であって、前記脂質粒子およ
    びおそらくさらなるアジュバントが、乾燥形態、例えば、凍結乾燥物、スプレー
    乾燥物、固体分散物、ペレットもしくはタブレットであることを特徴とする、薬
    剤。
23. 【請求項２３】 ヒトおよび動物のワクチン接種の場合において免疫応答を
    増強するため、ならびに免疫学的な抗体の収量および抗体産生を増加させるため
    の薬剤であって、該薬剤は脂質微粒子を含むことによって特徴付けられ、ここで
    該脂質微粒子は、室温（＝２０℃）で固体でありかつ１〜１０００μｍの範囲内
    のサイズを有し、免疫される被験体のための最適用量、および最適な粒子サイズ
    、粒子の電荷、および表面特性（界面活性物質層を安定化させる）で特徴付けら
    れるように適用され、簡単に抗原溶液に混合される、薬剤。
24. 【請求項２４】 ヒトおよび動物のワクチン接種の場合において免疫応答を
    増強するため、ならびに免疫学的な抗体の収量および抗体産生を増加させるため
    の薬剤であって、該薬剤は、室温（＝２０℃）で固体であり、固体脂質および液
    体脂質の混合物から調製された脂質粒子を含むことによって特徴付けられ、該脂
    質粒子が、免疫される被験体のための最適用量、および最適な粒子サイズ、粒子
    の電荷、および表面特性（界面活性物質層を安定化させる）で特徴付けられるよ
    うに適用され、簡単に抗原溶液に混合される、薬剤。