JP2003246748A - 感染症治療剤 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】グラニュライシンについて、さらに詳細に検討
を行い、これを感染症治療剤として用いる手段を提供す
ること。 【解決手段】それ自体、細胞傷害性を示さない、１５Ｋ
グラニュライシンが、マクロファージに取り込まれ、そ
の後、活性化し、マクロファージ内に取り込まれた細菌
を殺傷する、新たな経路が存在することを見出し、さら
に、これを有効成分とすることにより、副作用が少な
く、かつ、細菌が耐性獲得をし難く、有効な感染症治療
剤を提供し得ることを見出した。すなわち、１５Ｋグラ
ニュライシンを有効成分とする、感染症治療剤を提供こ
とにより、上記の課題を解決し得ることを見出した。
を行い、これを感染症治療剤として用いる手段を提供す
ること。 【解決手段】それ自体、細胞傷害性を示さない、１５Ｋ
グラニュライシンが、マクロファージに取り込まれ、そ
の後、活性化し、マクロファージ内に取り込まれた細菌
を殺傷する、新たな経路が存在することを見出し、さら
に、これを有効成分とすることにより、副作用が少な
く、かつ、細菌が耐性獲得をし難く、有効な感染症治療
剤を提供し得ることを見出した。すなわち、１５Ｋグラ
ニュライシンを有効成分とする、感染症治療剤を提供こ
とにより、上記の課題を解決し得ることを見出した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、結核等の感染症を
治療するための感染症治療剤に関する発明である。
治療するための感染症治療剤に関する発明である。
【０００２】
【従来の技術】医療において、感染症治療剤の存在が不
可欠であることは言うまでもないことである。現在、数
多くの抗生物質や合成抗菌剤等の感染症治療剤が提供さ
れており、医療現場において用いられている。
可欠であることは言うまでもないことである。現在、数
多くの抗生物質や合成抗菌剤等の感染症治療剤が提供さ
れており、医療現場において用いられている。
【０００３】しかしながら、現在、感染症治療剤とし
て、主に提供されている抗菌剤には、耐性菌の出現とい
う、不可避の問題が伴っていることも事実である。つま
り、新たな抗菌剤が提供されることにより、新たな耐性
菌が生み出されている、という皮肉な状態が続いてい
る。
て、主に提供されている抗菌剤には、耐性菌の出現とい
う、不可避の問題が伴っていることも事実である。つま
り、新たな抗菌剤が提供されることにより、新たな耐性
菌が生み出されている、という皮肉な状態が続いてい
る。
【０００４】例えば、単一感染症において、死亡率第１
位を占めている結核は、最近の増加傾向が、世界的な問
題となっている。さらに、殆どの抗生物質に対して耐性
を有する耐性菌の存在も確認されており、この問題も顕
在化しつつある。
位を占めている結核は、最近の増加傾向が、世界的な問
題となっている。さらに、殆どの抗生物質に対して耐性
を有する耐性菌の存在も確認されており、この問題も顕
在化しつつある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】最近になって、グラニ
ュライシンと呼ばれる、ＮＫ細胞やＣＴＬに発現してい
る分子が、結核菌等の細菌に対する、直接の殺傷能力を
有することが明らかとなっている〔Stenger,S.et al.,S
cience 282,121-125(1998)〕。
ュライシンと呼ばれる、ＮＫ細胞やＣＴＬに発現してい
る分子が、結核菌等の細菌に対する、直接の殺傷能力を
有することが明らかとなっている〔Stenger,S.et al.,S
cience 282,121-125(1998)〕。
【０００６】グラニュライシンは、１５Ｋの前駆体とし
て造られた後、細胞傷害性顆粒内で、９Ｋにプロセシン
グされ、この９Ｋグラニュライシンが、抗菌活性を有す
ることが知られている（Pena,S.V.et al.,J.Immunol,15
8,2680-2688(1997))。さらに、同じ細胞傷害性顆粒内分
子であるパーフォリンが、標的細胞に穴を空け、グラニ
ュライシンが、ここから細胞内に入り込み、細胞内にお
いて感染している細菌を殺傷する経路が報告されている
〔Stenger,S.et al.,Science 282,121-125(1998)〕。
て造られた後、細胞傷害性顆粒内で、９Ｋにプロセシン
グされ、この９Ｋグラニュライシンが、抗菌活性を有す
ることが知られている（Pena,S.V.et al.,J.Immunol,15
8,2680-2688(1997))。さらに、同じ細胞傷害性顆粒内分
子であるパーフォリンが、標的細胞に穴を空け、グラニ
ュライシンが、ここから細胞内に入り込み、細胞内にお
いて感染している細菌を殺傷する経路が報告されている
〔Stenger,S.et al.,Science 282,121-125(1998)〕。
【０００７】このように、グラニュライシンは、感染防
御に重要な役割を果たしていると考えられる。活性型の
９Ｋグラニュライシンは、それに対する細菌の耐性の獲
得も考え難く、抗生物質とは異なる特徴を有する感染症
治療薬への応用が考えられる。また、最近になって、９
Ｋグラニュライシンによる細胞内感染菌の除去に関する
パーフォリン経路の存在が疑問視されている(David,H.
C.et al.,J.Immunol,167,2734-2742(2001))。その上、
この分子には、細胞傷害性が認められており（Pena,S.
V.et al.,J.Immunol,158,2680-2688(1997))、これをそ
のまま投与した場合には、相当の副作用が懸念される。
御に重要な役割を果たしていると考えられる。活性型の
９Ｋグラニュライシンは、それに対する細菌の耐性の獲
得も考え難く、抗生物質とは異なる特徴を有する感染症
治療薬への応用が考えられる。また、最近になって、９
Ｋグラニュライシンによる細胞内感染菌の除去に関する
パーフォリン経路の存在が疑問視されている(David,H.
C.et al.,J.Immunol,167,2734-2742(2001))。その上、
この分子には、細胞傷害性が認められており（Pena,S.
V.et al.,J.Immunol,158,2680-2688(1997))、これをそ
のまま投与した場合には、相当の副作用が懸念される。
【０００８】本発明が解決すべき課題は、グラニュライ
シンについて、さらに詳細に検討を行い、これを感染症
治療剤として用いる手段を提供することにある。
シンについて、さらに詳細に検討を行い、これを感染症
治療剤として用いる手段を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者は、この課題を
解決するために、鋭意検討を行った。その結果、１５Ｋ
グラニュライシンが、マクロファージに取り込まれ、そ
の後、活性化し、マクロファージ内に取り込まれた細菌
を殺傷する、新たな経路が存在することを見出した。
解決するために、鋭意検討を行った。その結果、１５Ｋ
グラニュライシンが、マクロファージに取り込まれ、そ
の後、活性化し、マクロファージ内に取り込まれた細菌
を殺傷する、新たな経路が存在することを見出した。
【００１０】すなわち、それ自体、細胞傷害性を示さな
い１５Ｋグラニュライシンを有効成分とすることによ
り、副作用が少なく、かつ、細菌が耐性獲得をし難く、
有効な感染症治療剤を提供し得ることを見出した。
い１５Ｋグラニュライシンを有効成分とすることによ
り、副作用が少なく、かつ、細菌が耐性獲得をし難く、
有効な感染症治療剤を提供し得ることを見出した。
【００１１】本発明は、１５Ｋグラニュライシンを有効
成分とする、感染症治療剤（以下、本治療剤ともいう）
を提供する発明である。なお、本発明において、１５Ｋ
グラニュライシンとは、上述したように、細胞傷害性顆
粒に局在する、１４５アミノ酸からなる、分子量１万５
千(15k) のタンパク質である。細胞傷害性顆粒内では一
部切断されて、分子量９千(9k)のタンパク質として存在
している(Pena,S.V., et al., J.Immunol., 158, 2680-
2688 (1997), Stenger,S., et al., Science, 282, 121
-125 (1998))。
成分とする、感染症治療剤（以下、本治療剤ともいう）
を提供する発明である。なお、本発明において、１５Ｋ
グラニュライシンとは、上述したように、細胞傷害性顆
粒に局在する、１４５アミノ酸からなる、分子量１万５
千(15k) のタンパク質である。細胞傷害性顆粒内では一
部切断されて、分子量９千(9k)のタンパク質として存在
している(Pena,S.V., et al., J.Immunol., 158, 2680-
2688 (1997), Stenger,S., et al., Science, 282, 121
-125 (1998))。
【００１２】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。 Ａ．本治療剤の有効成分 本治療剤の有効成分として用いる１５Ｋグラニュライシ
ンは、生体から分離して用いることも可能であるが、生
体微量成分である故、１５Ｋグラニュライシンをコード
する遺伝子を発現させて得られる、組換え蛋白質として
用いることが好適である。また、１５Ｋグラニュライシ
ンをコードする遺伝子が組み込まれた、１５Ｋグラニュ
ライシンの体内発現ベクターを有効成分として、体内で
１５Ｋグラニュライシンを産生させることも、好適な手
段である。
て説明する。 Ａ．本治療剤の有効成分 本治療剤の有効成分として用いる１５Ｋグラニュライシ
ンは、生体から分離して用いることも可能であるが、生
体微量成分である故、１５Ｋグラニュライシンをコード
する遺伝子を発現させて得られる、組換え蛋白質として
用いることが好適である。また、１５Ｋグラニュライシ
ンをコードする遺伝子が組み込まれた、１５Ｋグラニュ
ライシンの体内発現ベクターを有効成分として、体内で
１５Ｋグラニュライシンを産生させることも、好適な手
段である。
【００１３】１５Ｋグラニュライシンの組換え蛋白質
１５Ｋグラニュライシンをコードする遺伝子配列は、既
に報告されており（Jongstra, et al.,J.Exp.Med,165,6
01）、具体的には、配列番号１で表される塩基配列の遺
伝子およびこれに対応するアミノ酸配列の１５Ｋグラニ
ュライシン蛋白質である。これを基に、１５Ｋグラニュ
ライシンをコードする遺伝子を効率的に調製して、この
遺伝子を発現させることにより、１５Ｋグラニュライシ
ンの組換え蛋白質を調製することが可能である。
に報告されており（Jongstra, et al.,J.Exp.Med,165,6
01）、具体的には、配列番号１で表される塩基配列の遺
伝子およびこれに対応するアミノ酸配列の１５Ｋグラニ
ュライシン蛋白質である。これを基に、１５Ｋグラニュ
ライシンをコードする遺伝子を効率的に調製して、この
遺伝子を発現させることにより、１５Ｋグラニュライシ
ンの組換え蛋白質を調製することが可能である。
【００１４】具体的には、１５Ｋグラニュライシンをコ
ードする遺伝子配列の両端に対して相補的なヌクレオチ
ド鎖を増幅用プライマーして、ＰＣＲ法等の遺伝子増幅
法により、１５Ｋグラニュライシンをコードする遺伝子
の遺伝子増幅産物を調製してする。
ードする遺伝子配列の両端に対して相補的なヌクレオチ
ド鎖を増幅用プライマーして、ＰＣＲ法等の遺伝子増幅
法により、１５Ｋグラニュライシンをコードする遺伝子
の遺伝子増幅産物を調製してする。
【００１５】これを、適切な遺伝子発現用ベクターに組
み込み、かかる組換えベクターで形質転換を行った大腸
菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞などの適切な宿主から、所
望する１５Ｋグラニュライシンを得ることができる。
み込み、かかる組換えベクターで形質転換を行った大腸
菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞などの適切な宿主から、所
望する１５Ｋグラニュライシンを得ることができる。
【００１６】ここで用いる遺伝子発現用ベクターは、通
常発現しようとする遺伝子の上流域にプロモーター，エ
ンハンサー，および下流域に転写終了配列などを保有す
るものを用いるのが好適である。
常発現しようとする遺伝子の上流域にプロモーター，エ
ンハンサー，および下流域に転写終了配列などを保有す
るものを用いるのが好適である。
【００１７】また、１５Ｋグラニュライシン遺伝子の発
現は、直接発現系に限らず、例えばβ−ガラクトシダー
ゼ遺伝子，グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ遺伝
子やチオレドキシン遺伝子を利用した融合タンパク質発
現系とすることもできる。
現は、直接発現系に限らず、例えばβ−ガラクトシダー
ゼ遺伝子，グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ遺伝
子やチオレドキシン遺伝子を利用した融合タンパク質発
現系とすることもできる。
【００１８】遺伝子発現用ベクターとしては、例えば、
宿主を大腸菌とするものとしては、ｐＱＥ，ｐＧＥＸ，
ｐＴ７−７，ｐＭＡＬ，ｐＴｒｘＦｕｓ，ｐＥＴ，ｐＮ
Ｔ２６ＣIIなどを例示することができる。また、宿主を
枯草菌とするものとしては、ｐＰＬ６０８，ｐＮＣ３，
ｐＳＭ２３，ｐＫＨ８０などを例示することができる。
宿主を大腸菌とするものとしては、ｐＱＥ，ｐＧＥＸ，
ｐＴ７−７，ｐＭＡＬ，ｐＴｒｘＦｕｓ，ｐＥＴ，ｐＮ
Ｔ２６ＣIIなどを例示することができる。また、宿主を
枯草菌とするものとしては、ｐＰＬ６０８，ｐＮＣ３，
ｐＳＭ２３，ｐＫＨ８０などを例示することができる。
【００１９】また、宿主を酵母とするものとしては、ｐ
ＧＴ５，ｐＤＢ２４８Ｘ，ｐＡＲＴ１，ｐＲＥＰ１，Ｙ
Ｅｐ１３，ＹＲｐ７，ＹＣｐ５０などを例示することが
できる。
ＧＴ５，ｐＤＢ２４８Ｘ，ｐＡＲＴ１，ｐＲＥＰ１，Ｙ
Ｅｐ１３，ＹＲｐ７，ＹＣｐ５０などを例示することが
できる。
【００２０】また、宿主を哺乳動物細胞または昆虫細胞
とするものとしては、ｐ９１０２３，ｐＣＤＭ８，ｐｃ
ＤＬ−ＳＲα２９６，ｐＢＣＭＧＳＮｅｏ，ｐＳＶ２ｄ
ｈｆｒ，ｐＳＶｄｈｆｒ，ｐＡｃ３７３，ｐＡｃＹＭ
１，ｐＲｃ／ＣＭＶ，ｐＲＥＰ４，ｐｃＤＮＡＩなどを
例示することができる。
とするものとしては、ｐ９１０２３，ｐＣＤＭ８，ｐｃ
ＤＬ−ＳＲα２９６，ｐＢＣＭＧＳＮｅｏ，ｐＳＶ２ｄ
ｈｆｒ，ｐＳＶｄｈｆｒ，ｐＡｃ３７３，ｐＡｃＹＭ
１，ｐＲｃ／ＣＭＶ，ｐＲＥＰ４，ｐｃＤＮＡＩなどを
例示することができる。
【００２１】これらの遺伝子発現ベクターは、１５Ｋグ
ラニュライシンを発現させる目的に応じて選択すること
ができる。例えば、１５Ｋグラニュライシンを発現させ
る場合には、宿主として大腸菌，枯草菌または酵母など
を選択し得る遺伝子発現ベクターを選択するのが好まし
く、少量でも確実に活性を有するように１５Ｋグラニュ
ライシンを発現させる場合には、哺乳動物細胞や昆虫細
胞を宿主として選択し得る遺伝子発現ベクターを選択す
るのが好ましい。
ラニュライシンを発現させる目的に応じて選択すること
ができる。例えば、１５Ｋグラニュライシンを発現させ
る場合には、宿主として大腸菌，枯草菌または酵母など
を選択し得る遺伝子発現ベクターを選択するのが好まし
く、少量でも確実に活性を有するように１５Ｋグラニュ
ライシンを発現させる場合には、哺乳動物細胞や昆虫細
胞を宿主として選択し得る遺伝子発現ベクターを選択す
るのが好ましい。
【００２２】また、上記のように既存の遺伝子発現ベク
ターを選択することも可能であるが、目的に応じて適宜
遺伝子発現ベクターを作出して、これを用いることも勿
論可能である。
ターを選択することも可能であるが、目的に応じて適宜
遺伝子発現ベクターを作出して、これを用いることも勿
論可能である。
【００２３】１５Ｋグラニュライシン遺伝子を組み込ん
だ上記遺伝子発現用ベクターの宿主細胞への導入および
これによる形質転換法は、一般的な方法、例えば宿主細
胞が大腸菌や枯草菌である場合には、塩化カルシウム法
やエレクトロポレーション法などを；宿主が哺乳動物細
胞や昆虫細胞の場合はリン酸カルシウム法，エレクトロ
ポレーション法またはリポソーム法などの手段により行
うことができる。
だ上記遺伝子発現用ベクターの宿主細胞への導入および
これによる形質転換法は、一般的な方法、例えば宿主細
胞が大腸菌や枯草菌である場合には、塩化カルシウム法
やエレクトロポレーション法などを；宿主が哺乳動物細
胞や昆虫細胞の場合はリン酸カルシウム法，エレクトロ
ポレーション法またはリポソーム法などの手段により行
うことができる。
【００２４】このようにして得られる形質転換体を常法
に従い培養することにより、所望する１５Ｋグラニュラ
イシンが蓄積される。かかる培養に用いられる培地は、
宿主の性質に応じて適宜選択することができるが、例え
ば宿主が大腸菌である場合には、ＬＢ培地やＴＢ培地な
どが、宿主が哺乳動物細胞の場合には、ＲＰＭＩ１６４
０培地などを適宜用いることができる。
に従い培養することにより、所望する１５Ｋグラニュラ
イシンが蓄積される。かかる培養に用いられる培地は、
宿主の性質に応じて適宜選択することができるが、例え
ば宿主が大腸菌である場合には、ＬＢ培地やＴＢ培地な
どが、宿主が哺乳動物細胞の場合には、ＲＰＭＩ１６４
０培地などを適宜用いることができる。
【００２５】この培養により得られる培養物からの１５
Ｋグラニュライシンの単離および精製は、常法に従い行
うことが可能であり、例えば培養物を、１５Ｋグラニュ
ライシンの物理的および／または化学的性質を利用した
各種の処理操作を用いて行うことが可能である。
Ｋグラニュライシンの単離および精製は、常法に従い行
うことが可能であり、例えば培養物を、１５Ｋグラニュ
ライシンの物理的および／または化学的性質を利用した
各種の処理操作を用いて行うことが可能である。
【００２６】具体的には、タンパク沈澱剤による処理，
限外濾過，ゲル濾過，高速液体クロマトグラフィー，遠
心分離，電気泳動，特異抗体を用いたアフィニティクロ
マトグラフィー，透析法などを単独でまたはこれらの方
法を組み合わせて用いることができる。
限外濾過，ゲル濾過，高速液体クロマトグラフィー，遠
心分離，電気泳動，特異抗体を用いたアフィニティクロ
マトグラフィー，透析法などを単独でまたはこれらの方
法を組み合わせて用いることができる。
【００２７】以上のようにして、１５Ｋグラニュライシ
ンを単離・精製することが可能である。１５Ｋグラニュ
ライシンは、これを、感染症治療剤の有効成分として使
用することにより、血液中のマクロファージに取り込ま
れて、その中で活性化されることにより、マクロファー
ジが貪食した、感染症を惹き起こす細菌類、ウイルス
類、真菌類等を殺傷することにより、これらの微生物に
よる感染症を治療することが可能となる。前述したよう
に、１５Ｋグラニュライシンは、９Ｋグラニュライシン
と異なり、それ自体に細胞傷害性は認められず、投与に
よる副作用が少ない感染症治療剤として、その効果が期
待される。
ンを単離・精製することが可能である。１５Ｋグラニュ
ライシンは、これを、感染症治療剤の有効成分として使
用することにより、血液中のマクロファージに取り込ま
れて、その中で活性化されることにより、マクロファー
ジが貪食した、感染症を惹き起こす細菌類、ウイルス
類、真菌類等を殺傷することにより、これらの微生物に
よる感染症を治療することが可能となる。前述したよう
に、１５Ｋグラニュライシンは、９Ｋグラニュライシン
と異なり、それ自体に細胞傷害性は認められず、投与に
よる副作用が少ない感染症治療剤として、その効果が期
待される。
【００２８】１５Ｋグラニュライシンの体内発現ベク
ター この形態の本治療剤の有効成分は、上記の組換え蛋白質
の発現に用いられた、１５Ｋグラニュライシンをコード
する遺伝子を、体内発現ベクターに組み込んだ、組換え
ベクターである。
ター この形態の本治療剤の有効成分は、上記の組換え蛋白質
の発現に用いられた、１５Ｋグラニュライシンをコード
する遺伝子を、体内発現ベクターに組み込んだ、組換え
ベクターである。
【００２９】体内発現ベクターとしては、例えば、アデ
ノウイルスベクター、レトロウイルスベクター等を挙げ
ることができるが、これらに限定されるものではない。
組換え体内発現ベクターは、例えば、上記のウイルス遺
伝子を組み込んだコスミドベクターに、さらに、１５Ｋ
グランニュライシンを発現可能な遺伝子を組み込んで、
このコスミドベクターと、制限酵素処理を行った親ウイ
ルスＤＮＡ−ＴＰを、２９３細胞にトランスフェクショ
ンすることにより、この２９３細胞内で相同組換えが起
こり、所望する体内発現ベクターが生産される。
ノウイルスベクター、レトロウイルスベクター等を挙げ
ることができるが、これらに限定されるものではない。
組換え体内発現ベクターは、例えば、上記のウイルス遺
伝子を組み込んだコスミドベクターに、さらに、１５Ｋ
グランニュライシンを発現可能な遺伝子を組み込んで、
このコスミドベクターと、制限酵素処理を行った親ウイ
ルスＤＮＡ−ＴＰを、２９３細胞にトランスフェクショ
ンすることにより、この２９３細胞内で相同組換えが起
こり、所望する体内発現ベクターが生産される。
【００３０】Ｂ．本治療剤の形態 １５Ｋグラニュライシンの組換え蛋白質を有効成分と
した本治療剤 本治療剤の第１の形態は、１５Ｋグラニュライシンを有
効成分として配合するが、これと共に、適切な医薬製剤
担体を配合して、製剤組成物の形態に調製することが可
能である（１５Ｋグラニュライシンのみでも勿論可能で
ある）。医薬製剤担体としては、例えば、具体的な剤型
に応じて、適宜医薬製剤担体として慣用され得る、充填
剤、増量剤、結合剤、付湿剤、安定剤、溶解補助剤、崩
壊剤、表面活性剤などの賦形剤や希釈剤を自由に選択す
ることができる。製剤組成物の形態は、１５Ｋグラニュ
ライシンを、感染症の治療用途に効果に用い得る形態で
あれば特に限定されず、例えば、錠剤、粉末剤、顆粒
剤、丸剤などの固剤であっても、液剤、懸濁剤、乳剤な
どの注射剤形態とすることもできる。また、１５Ｋグラ
ニュライシンに適切な担体を添加することによって、用
時に液状とするべき乾燥品とすることも可能である。
した本治療剤 本治療剤の第１の形態は、１５Ｋグラニュライシンを有
効成分として配合するが、これと共に、適切な医薬製剤
担体を配合して、製剤組成物の形態に調製することが可
能である（１５Ｋグラニュライシンのみでも勿論可能で
ある）。医薬製剤担体としては、例えば、具体的な剤型
に応じて、適宜医薬製剤担体として慣用され得る、充填
剤、増量剤、結合剤、付湿剤、安定剤、溶解補助剤、崩
壊剤、表面活性剤などの賦形剤や希釈剤を自由に選択す
ることができる。製剤組成物の形態は、１５Ｋグラニュ
ライシンを、感染症の治療用途に効果に用い得る形態で
あれば特に限定されず、例えば、錠剤、粉末剤、顆粒
剤、丸剤などの固剤であっても、液剤、懸濁剤、乳剤な
どの注射剤形態とすることもできる。また、１５Ｋグラ
ニュライシンに適切な担体を添加することによって、用
時に液状とするべき乾燥品とすることも可能である。
【００３１】このようにして得られる本治療剤の投与量
は、剤の投与方法、投与形態、患者の症状などに応じて
適宜選択することが可能であり、特に限定されるべきも
のではない。
は、剤の投与方法、投与形態、患者の症状などに応じて
適宜選択することが可能であり、特に限定されるべきも
のではない。
【００３２】このような各種の形態の医薬製剤は、その
形態に応じて適当な投与経路、例えば、注射剤形態の場
合には、静脈内、筋肉内、骨内、関節内、皮下、皮内、
腹腔内投与などにより、固剤形態の場合には、経口や経
腸投与などにより投与され得る。
形態に応じて適当な投与経路、例えば、注射剤形態の場
合には、静脈内、筋肉内、骨内、関節内、皮下、皮内、
腹腔内投与などにより、固剤形態の場合には、経口や経
腸投与などにより投与され得る。
【００３３】１５Ｋグラニュライシンの体内発現ベク
ターを有効成分とした本治療剤 上述のようにして調製され得る体内発現ベクターを、単
離・精製して、これを生体に投与することにより、生体
内に１５Ｋグラニュライシンが産生され、この１５Ｋグ
ラニュライシンの薬理効果が発揮され得る。
ターを有効成分とした本治療剤 上述のようにして調製され得る体内発現ベクターを、単
離・精製して、これを生体に投与することにより、生体
内に１５Ｋグラニュライシンが産生され、この１５Ｋグ
ラニュライシンの薬理効果が発揮され得る。
【００３４】この場合の投与形態は、注射剤形態である
ことが一般的であり、静脈内、筋肉内、骨内、関節内、
皮下、皮内、腹腔内投与などにより、投与され得る。こ
のような本治療剤の投与量は、剤の投与方法、投与形
態、患者の症状などに応じて適宜選択することが可能で
あり、特に限定されるべきものではないが、一般には、
有効成分である、１５Ｋグラニュライシンを発現する体
内発現ベクターを適度に調製して、この製剤を、適量、
一日１回または数回に分けて投与するのが好適である。
ことが一般的であり、静脈内、筋肉内、骨内、関節内、
皮下、皮内、腹腔内投与などにより、投与され得る。こ
のような本治療剤の投与量は、剤の投与方法、投与形
態、患者の症状などに応じて適宜選択することが可能で
あり、特に限定されるべきものではないが、一般には、
有効成分である、１５Ｋグラニュライシンを発現する体
内発現ベクターを適度に調製して、この製剤を、適量、
一日１回または数回に分けて投与するのが好適である。
【００３５】
【実施例】以下に、本発明の実施例を記載する。〔試験
例〕１５Ｋグラニュライシンとマクロファージを共存さ
せた場合の、結核菌に対する抗菌効果についての検討 （１）１５Ｋグラニュライシンに対して特異的なモノク
ローナル抗体の調製 １００〜２００unit/ml のＩＬ−２の存在下で培養した
ヒトの末梢血リンパ球（２×１０6 細胞／mlのヒト末梢
血リンパ球を、１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０
培地で、３７℃・５％ＣＯ2 下で１０日間培養を行っ
た）より、常法に従ってＲＮＡを抽出し、このＲＮＡを
鋳型として、ＲＴ−ＰＣＲ法（ＰＣＲプライマー１：配
列番号２、ＰＣＲプライマー２：配列番号３）を行い、
１５Ｋグラニュライシンの蛋白質全長をコードする領域
を含む遺伝子部分〔Jongstra, et al.,J.Exp.Med,165,6
01：配列番号１のアミノ酸配列に相当する部分〕を相補
的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の増幅産物として合成した。この
１５Ｋグラニュライシンの蛋白質全長をコードするｃＤ
ＮＡを、哺乳動物用発現ベクターであるｐＲｃ／ＣＭＶ
またはｐｃＤＬ−ＳＲα２９６に組み込み、得られた組
換えベクターを生理食塩水に溶かして、マウスの皮下ま
たは皮内に免疫した。１〜２週間隔で、４〜５回免疫
後、間接蛍光抗体法（後述の方法に準じて行った）によ
り抗体価の上昇が認められたマウスの脾細胞を、常法に
従って細胞融合した後、グラニュライシンに特異的に結
合する抗体を産生するハイブリドーマを、再び間接蛍光
抗体法で検索した。すなわち、上述した１５Ｋグラニュ
ライシンをコードする遺伝子で形質転換して、これを発
現させた細胞（Ｃｏｓ７）を、４％パラフォルムアルデ
ヒドで固定後、０．５％ｔｗｅｅｎ２０で膜を可溶化
し、これに、ハイブリドーマの培養上清を加えて、抗体
を反応させた後、蛍光ラベルされた抗マウスＩｇＧ抗体
を反応させ、蛍光を検出することにより、グラニュライ
シンに特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ
をスクリーニングした。その結果、９個のグラニュライ
シンに特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ
が得られた。得られたハイブリドーマのそれぞれの培養
上清を用いて、硫安沈澱およびプロテインＧカラムによ
る精製を行い、１５Ｋグラニュライシンに対するモノク
ローナル抗体を、２種類調製した。以下、これをモノク
ローナル抗体ＲＦ１０（１５Ｋグラニュライシンに対し
て結合するが、９Ｋグラニュライシンに対しては結合し
ない）と、モノクローナル抗体ＲＣ８（１５Ｋグラニュ
ライシンに対しても、９Ｋグラニュライシンに対しても
結合する）ともいう。
例〕１５Ｋグラニュライシンとマクロファージを共存さ
せた場合の、結核菌に対する抗菌効果についての検討 （１）１５Ｋグラニュライシンに対して特異的なモノク
ローナル抗体の調製 １００〜２００unit/ml のＩＬ−２の存在下で培養した
ヒトの末梢血リンパ球（２×１０6 細胞／mlのヒト末梢
血リンパ球を、１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０
培地で、３７℃・５％ＣＯ2 下で１０日間培養を行っ
た）より、常法に従ってＲＮＡを抽出し、このＲＮＡを
鋳型として、ＲＴ−ＰＣＲ法（ＰＣＲプライマー１：配
列番号２、ＰＣＲプライマー２：配列番号３）を行い、
１５Ｋグラニュライシンの蛋白質全長をコードする領域
を含む遺伝子部分〔Jongstra, et al.,J.Exp.Med,165,6
01：配列番号１のアミノ酸配列に相当する部分〕を相補
的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の増幅産物として合成した。この
１５Ｋグラニュライシンの蛋白質全長をコードするｃＤ
ＮＡを、哺乳動物用発現ベクターであるｐＲｃ／ＣＭＶ
またはｐｃＤＬ−ＳＲα２９６に組み込み、得られた組
換えベクターを生理食塩水に溶かして、マウスの皮下ま
たは皮内に免疫した。１〜２週間隔で、４〜５回免疫
後、間接蛍光抗体法（後述の方法に準じて行った）によ
り抗体価の上昇が認められたマウスの脾細胞を、常法に
従って細胞融合した後、グラニュライシンに特異的に結
合する抗体を産生するハイブリドーマを、再び間接蛍光
抗体法で検索した。すなわち、上述した１５Ｋグラニュ
ライシンをコードする遺伝子で形質転換して、これを発
現させた細胞（Ｃｏｓ７）を、４％パラフォルムアルデ
ヒドで固定後、０．５％ｔｗｅｅｎ２０で膜を可溶化
し、これに、ハイブリドーマの培養上清を加えて、抗体
を反応させた後、蛍光ラベルされた抗マウスＩｇＧ抗体
を反応させ、蛍光を検出することにより、グラニュライ
シンに特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ
をスクリーニングした。その結果、９個のグラニュライ
シンに特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ
が得られた。得られたハイブリドーマのそれぞれの培養
上清を用いて、硫安沈澱およびプロテインＧカラムによ
る精製を行い、１５Ｋグラニュライシンに対するモノク
ローナル抗体を、２種類調製した。以下、これをモノク
ローナル抗体ＲＦ１０（１５Ｋグラニュライシンに対し
て結合するが、９Ｋグラニュライシンに対しては結合し
ない）と、モノクローナル抗体ＲＣ８（１５Ｋグラニュ
ライシンに対しても、９Ｋグラニュライシンに対しても
結合する）ともいう。
【００３６】（２）１５Ｋグラニュライシンに対するポ
リクローナル抗体の調製 グラニュライシンの部分アミノ酸配列（２９アミノ酸）
（J. Exp. Med. 165:601-614 (1987), J.Exp.Med., 17
2:1159-1163 (1990) ）：Arg Thr Gly Arg SerArg Trp
Arg Asp Val Cys Arg Asn Phe Met Arg Arg Tyr Gln Se
r Arg Val ThrGln Gly Leu Val Ala Gly （Ｎ５−１：
配列番号４）の傘貝ヘモシアニンとの結合体で、ウサギ
を常法に従って免疫し、抗血清を得た。得られた抗血清
について、硫安沈澱およびプロテインＧカラムによる精
製を行い、さらに上記の合成ペプチド（Ｎ５−１）を結
合したカラムによるアフィニティークロマトグラフィー
による精製を行い、グラニュライシンに対するポリクロ
ーナル抗体（抗Ｎ５−１抗体）を調製した。
リクローナル抗体の調製 グラニュライシンの部分アミノ酸配列（２９アミノ酸）
（J. Exp. Med. 165:601-614 (1987), J.Exp.Med., 17
2:1159-1163 (1990) ）：Arg Thr Gly Arg SerArg Trp
Arg Asp Val Cys Arg Asn Phe Met Arg Arg Tyr Gln Se
r Arg Val ThrGln Gly Leu Val Ala Gly （Ｎ５−１：
配列番号４）の傘貝ヘモシアニンとの結合体で、ウサギ
を常法に従って免疫し、抗血清を得た。得られた抗血清
について、硫安沈澱およびプロテインＧカラムによる精
製を行い、さらに上記の合成ペプチド（Ｎ５−１）を結
合したカラムによるアフィニティークロマトグラフィー
による精製を行い、グラニュライシンに対するポリクロ
ーナル抗体（抗Ｎ５−１抗体）を調製した。
【００３７】（３）グラニュライシン含有培養上清の調
製 配列番号１の塩基配列のうち、１５Ｋグラニュライシン
蛋白質に相当する部分をコードする塩基配列のヌクレオ
チド鎖を、常法により、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶベクター
（シグマ社製）に組み込んだ、遺伝子組換えベクターを
作出した。なお、コントロールとして、遺伝子による組
換えを行っていない、上記ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶベクター
を用いた。これらの遺伝子組換えベクターを、Ｃｏｓ７
細胞に導入し、これを、ＤＭＥＭ培地（ギブコ社製）に
おいて、５％ＣＯ2 ・３７℃で培養を、７２時間行っ
た。培養終了後、培養物に、遠心分離（２５００rpm ・
２０分・４℃）を施し、その培養上清を得た。
製 配列番号１の塩基配列のうち、１５Ｋグラニュライシン
蛋白質に相当する部分をコードする塩基配列のヌクレオ
チド鎖を、常法により、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶベクター
（シグマ社製）に組み込んだ、遺伝子組換えベクターを
作出した。なお、コントロールとして、遺伝子による組
換えを行っていない、上記ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶベクター
を用いた。これらの遺伝子組換えベクターを、Ｃｏｓ７
細胞に導入し、これを、ＤＭＥＭ培地（ギブコ社製）に
おいて、５％ＣＯ2 ・３７℃で培養を、７２時間行っ
た。培養終了後、培養物に、遠心分離（２５００rpm ・
２０分・４℃）を施し、その培養上清を得た。
【００３８】各々の培養上清について、SDS-PAGEによ
り、蛋白質を分離した。電気泳動を行ったSDS-PAGEのゲ
ルから、蛋白質をナイロン膜に転写した後、ブロッキン
グ液(1% スキムミルク/ 洗浄液) で膜をブロックした
後、この膜に対して、１５Ｋグラニュライシンに特異的
なモノクローナル抗体ＲＦ１０を結合させて、これに対
して酵素標識抗マウス抗体と発色基質を作用させて、バ
ンドの発色を行った。その結果、１５Ｋグラニュライシ
ン蛋白質をコードする遺伝子を発現させて得た上清にお
いては、分子量１５Ｋを示すバンドが現れたが、コント
ロールは、このバンドは認められなかった。また、同様
の試験を、１５Ｋと９Ｋのグラニュライシンに対して結
合するポリクローナル抗体Ｎ５−１を用いて行ったとこ
ろ、１５Ｋを示すバンドは認められたが、９Ｋを示すバ
ンドは認められなかった。
り、蛋白質を分離した。電気泳動を行ったSDS-PAGEのゲ
ルから、蛋白質をナイロン膜に転写した後、ブロッキン
グ液(1% スキムミルク/ 洗浄液) で膜をブロックした
後、この膜に対して、１５Ｋグラニュライシンに特異的
なモノクローナル抗体ＲＦ１０を結合させて、これに対
して酵素標識抗マウス抗体と発色基質を作用させて、バ
ンドの発色を行った。その結果、１５Ｋグラニュライシ
ン蛋白質をコードする遺伝子を発現させて得た上清にお
いては、分子量１５Ｋを示すバンドが現れたが、コント
ロールは、このバンドは認められなかった。また、同様
の試験を、１５Ｋと９Ｋのグラニュライシンに対して結
合するポリクローナル抗体Ｎ５−１を用いて行ったとこ
ろ、１５Ｋを示すバンドは認められたが、９Ｋを示すバ
ンドは認められなかった。
【００３９】この結果により、上記のグラニュライシン
培養上清には、１５Ｋグラニュライシンが特異的に存在
し、コントロール培養上清には、グラニュライシンは存
在しないことが明らかとなった。
培養上清には、１５Ｋグラニュライシンが特異的に存在
し、コントロール培養上清には、グラニュライシンは存
在しないことが明らかとなった。
【００４０】（４）抗菌効果の検討
常法により、ヒト血液から分離したリンパ球を、プラス
チック製のカルチャープレート（２４ウエル／プレー
ト）に、培地（ＲＰＭＩ１６４０，１０％ヒト血清）
に、培地１ml当り、２×１０7 細胞程度になるように、
懸濁させ、これを、各ウエルに１mlずつ分注して、３７
℃で、２４時間放置して、リンパ球をプレート壁に付着
させて、この付着したマクロファージにおいて、１５Ｋ
グラニュライシンの抗菌効果を検討した。
チック製のカルチャープレート（２４ウエル／プレー
ト）に、培地（ＲＰＭＩ１６４０，１０％ヒト血清）
に、培地１ml当り、２×１０7 細胞程度になるように、
懸濁させ、これを、各ウエルに１mlずつ分注して、３７
℃で、２４時間放置して、リンパ球をプレート壁に付着
させて、この付着したマクロファージにおいて、１５Ｋ
グラニュライシンの抗菌効果を検討した。
【００４１】次に、ウエル中にＲＰＭＩ１６４０（１０
％ヒト血清）を、１ml添加して、ここに、結核菌（Ｈ３
７Ｒｖ，１×１０５〜１×１０６ｃｆｕ）を、３７℃、
５％ＣＯ2 下で、４〜１２時間、静置培養を行って、マ
クロファージに、結核菌を感染させた。感染完了後、Ｇ
ｒｎ上清またはＣｏｎｔ上清を、各１ml、ウエルに添加
して、同条件で、２〜１２時間静置培養を行った。
％ヒト血清）を、１ml添加して、ここに、結核菌（Ｈ３
７Ｒｖ，１×１０５〜１×１０６ｃｆｕ）を、３７℃、
５％ＣＯ2 下で、４〜１２時間、静置培養を行って、マ
クロファージに、結核菌を感染させた。感染完了後、Ｇ
ｒｎ上清またはＣｏｎｔ上清を、各１ml、ウエルに添加
して、同条件で、２〜１２時間静置培養を行った。
【００４２】培養終了後、培養上清を除去して、プレー
ト内の付着細胞を、ＰＢＳで３回洗浄して、トータル５
mlの１％サポニン水溶液で、細胞内の結核菌を抽出し
て、この抽出液を希釈し、平板寒天培地〔７Ｈ１１培地
（ギブコ社製）〕に播いて、３７℃で１４日間静置培養
し、コロニー数を数えた。
ト内の付着細胞を、ＰＢＳで３回洗浄して、トータル５
mlの１％サポニン水溶液で、細胞内の結核菌を抽出し
て、この抽出液を希釈し、平板寒天培地〔７Ｈ１１培地
（ギブコ社製）〕に播いて、３７℃で１４日間静置培養
し、コロニー数を数えた。
【００４３】その結果を、第１図に示す。第１図におい
て、Ｃｏｎｔは、コントロール培養上清を表し、Ｇｒｎ
は、グラニュライシン培養上清を表している。縦軸は、
コロニー数を示している。横軸の１は、上述したよう
に、マクロファージと結核菌と培養上清を接触させた結
果を示している。２は、マクロファージ非存在下で、１
と同様に、各培養上清と結核菌を静置培養、洗浄後、７
Ｈ１１平板寒天培地で静置培養し、結核菌のプレートに
おける非特異的吸着の影響を確認した結果を示してい
る。３は、上記のカルチャープレートにおいて、各培養
上清１mlに、結核菌と共に、３７℃で２時間、静置培養
し、これを ７Ｈ１１平板寒天培地で静置培養した結果
を示している。
て、Ｃｏｎｔは、コントロール培養上清を表し、Ｇｒｎ
は、グラニュライシン培養上清を表している。縦軸は、
コロニー数を示している。横軸の１は、上述したよう
に、マクロファージと結核菌と培養上清を接触させた結
果を示している。２は、マクロファージ非存在下で、１
と同様に、各培養上清と結核菌を静置培養、洗浄後、７
Ｈ１１平板寒天培地で静置培養し、結核菌のプレートに
おける非特異的吸着の影響を確認した結果を示してい
る。３は、上記のカルチャープレートにおいて、各培養
上清１mlに、結核菌と共に、３７℃で２時間、静置培養
し、これを ７Ｈ１１平板寒天培地で静置培養した結果
を示している。
【００４４】この結果、１５Ｋグラニュライシンは、マ
クロファージが介在することにより、結核菌に対する抗
菌効果が認められることが明らかとなった。マクロファ
ージが介在しない場合、１５Ｋグラニュライシンに結核
菌に対する抗菌効果は認められなかった。
クロファージが介在することにより、結核菌に対する抗
菌効果が認められることが明らかとなった。マクロファ
ージが介在しない場合、１５Ｋグラニュライシンに結核
菌に対する抗菌効果は認められなかった。
【００４５】上記の試験例によって、１５Ｋグラニュラ
イシンには、抗菌作用が認められ、感染症治療剤の有効
成分として用いることができることが明らかとなった。
１５Ｋグラニュライシンを、Ｃｏｓ７細胞、ＨｅＬａ、
ＰＣ１２等の細胞にトランスフェクトしたところ、培養
上清中に、１５Ｋグラニュライシンが検出されるが、細
胞にダメージは見受けられなかった。なお、９Ｋグラニ
ュライシンを、１５Ｋグラニュライシンに代えて用いる
と、細胞傷害活性やアポトーシスを惹き起こすことが報
告されている（Pena,S.V.et al.,J.Immunol,158,2680-2
688(1997))。
イシンには、抗菌作用が認められ、感染症治療剤の有効
成分として用いることができることが明らかとなった。
１５Ｋグラニュライシンを、Ｃｏｓ７細胞、ＨｅＬａ、
ＰＣ１２等の細胞にトランスフェクトしたところ、培養
上清中に、１５Ｋグラニュライシンが検出されるが、細
胞にダメージは見受けられなかった。なお、９Ｋグラニ
ュライシンを、１５Ｋグラニュライシンに代えて用いる
と、細胞傷害活性やアポトーシスを惹き起こすことが報
告されている（Pena,S.V.et al.,J.Immunol,158,2680-2
688(1997))。
【００４６】
【発明の効果】本発明により、１５Ｋグラニュライシン
を有効成分とする、副作用が認められず、かつ、有効な
感染症治療剤が提供される。
を有効成分とする、副作用が認められず、かつ、有効な
感染症治療剤が提供される。
【００４７】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> BML, INC.
National Kinki Central Hospital For Chest Diseases
<120> Remedy for Infectious Diseases
<130> PBM67
<140>
<141>
<160> 4
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 745
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (129)..(563)
<400> 1
gtatctgtgg taaacccagt gacacggggg agatgacata caaaaagggc aggacctgag 60
aaagattaag ctgcaggctc cctgcccata aaacagggtg tgaaaggcat ctcagcggct 120
gccccacc atg gct acc tgg gcc ctc ctg ctc ctt gca gcc atg ctc ctg 170
Met Ala Thr Trp Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Met Leu Leu
1 5 10
ggc aac cca ggt ctg gtc ttc tct cgt ctg agc cct gag tac tac gac 218
Gly Asn Pro Gly Leu Val Phe Ser Arg Leu Ser Pro Glu Tyr Tyr Asp
15 20 25 30
ctg gca aga gcc cac ctg cgt gat gag gag aaa tcc tgc ccg tgc ctg 266
Leu Ala Arg Ala His Leu Arg Asp Glu Glu Lys Ser Cys Pro Cys Leu
35 40 45
gcc cag gag ggc ccc cag ggt gac ctg ttg acc aaa aca cag gag ctg 314
Ala Gln Glu Gly Pro Gln Gly Asp Leu Leu Thr Lys Thr Gln Glu Leu
50 55 60
ggc cgt gac tac agg acc tgt ctg acg ata gtc caa aaa ctg aag aag 362
Gly Arg Asp Tyr Arg Thr Cys Leu Thr Ile Val Gln Lys Leu Lys Lys
65 70 75
atg gtg gat aag ccc acc cag aga agt gtt tcc aat gct gcg acc cgg 410
Met Val Asp Lys Pro Thr Gln Arg Ser Val Ser Asn Ala Ala Thr Arg
80 85 90
gtg tgt agg acg ggg agg tca cga tgg cgc gac gtc tgc aga aat ttc 458
Val Cys Arg Thr Gly Arg Ser Arg Trp Arg Asp Val Cys Arg Asn Phe
95 100 105 110
atg agg agg tat cag tct aga gtt acc cag ggc ctc gtg gcc gga gaa 506
Met Arg Arg Tyr Gln Ser Arg Val Thr Gln Gly Leu Val Ala Gly Glu
115 120 125
act gcc cag cag atc tgt gag gac ctc agg ttg tgt ata cct tct aca 554
Thr Ala Gln Gln Ile Cys Glu Asp Leu Arg Leu Cys Ile Pro Ser Thr
130 135 140
ggt ccc ctc tgagccctct caccttgtcc tgtggaagaa gcacaggctc 603
Gly Pro Leu
145
ctgtcctcag atcccgggaa cctcagcaac ctctgccggc tcctcgcttc ctcgatccag 663
aatccactct ccagtctccc tcccctgact ccctctgctg tcctcccctc tcacgagaat 723
aaagtgtcaa gcaagaaaaa aa 745
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
catctcagcg gctgccccac catg 24
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
tgtatacctt ctacaggtcc cctctga 27
<210> 4
<211> 29
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Arg Thr Gly Arg Ser Arg Trp Arg Asp Val Cys Arg Asn Phe Met Arg
1 5 10 15
Arg Tyr Gln Ser Arg Val Thr Gln Gly Leu Val Ala Gly
20 25
【図１】１５Ｋグラニュライシンの、結核菌に対する抗
菌効果を検討した結果を示す図面である。
菌効果を検討した結果を示す図面である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 高森 靖
埼玉県川越市的場1361−１ 株式会社ビ
ー・エム・エル総合研究所内
(72)発明者 小川 一行
埼玉県川越市的場1361−１ 株式会社ビ
ー・エム・エル総合研究所内
(72)発明者 永田 欽也
埼玉県川越市的場1361−１ 株式会社ビ
ー・エム・エル総合研究所内
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA01 DA03 GA11
HA17
4C084 AA02 AA13 BA01 BA08 BA21
CA53 DA42 MA17 MA22 MA23
MA35 MA41 MA43 MA52 MA60
MA66 ZB352
4H045 AA30 BA10 CA40 EA29 FA74
HA04 HA05
Claims (3)
- 【請求項１】１５Ｋグラニュライシンを有効成分とす
る、感染症治療剤。 - 【請求項２】１５Ｋグラニュライシンが組換え蛋白質で
ある、請求項１記載の感染症治療剤。 - 【請求項３】１５Ｋグラニュライシンをコードする遺伝
子が組み込まれた、１５Ｋグラニュライシンの体内発現
ベクターを有効成分とする、感染症治療剤。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002045865A JP4149713B2 (ja) | 2002-02-22 | 2002-02-22 | 感染症治療剤 |
| PCT/JP2003/001970 WO2003070268A1 (fr) | 2002-02-22 | 2003-02-24 | Remede contre les infections |
| CA2485882A CA2485882C (en) | 2002-02-22 | 2003-02-24 | A therapeutic agent for mycobacterium tuberculosis comprising 15k granulysin as the active ingredient |
| AU2003211274A AU2003211274A1 (en) | 2002-02-22 | 2003-02-24 | Remedy for infections |
| EP03705402A EP1484066B1 (en) | 2002-02-22 | 2003-02-24 | 15k granulysin for the treatment of infections |
| CNA038043378A CN1635902A (zh) | 2002-02-22 | 2003-02-24 | 感染病治疗剂 |
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