JP2003128559A - ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤 - Google Patents
ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、転写調節因子ＮＦ−κＢに起因す
る疾患、例えば虚血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾
患、ガンの転移浸潤、悪液質等の疾患を治療および予防
することを課題とする。 【解決手段】 ＮＦ−κＢの核酸結合部位に対するデコ
イ、つまりＮＦ−κＢが結合する核酸部位と特異的に拮
抗する化合物を投与することにより、ＮＦ−κＢによっ
て活性化される遺伝子の発現を抑制し、転写調節因子Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患、例えば虚血性疾患、炎症性疾
患、自己免疫疾患、ガンの転移浸潤、悪液質等の疾患を
治療および予防する。
る疾患、例えば虚血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾
患、ガンの転移浸潤、悪液質等の疾患を治療および予防
することを課題とする。 【解決手段】 ＮＦ−κＢの核酸結合部位に対するデコ
イ、つまりＮＦ−κＢが結合する核酸部位と特異的に拮
抗する化合物を投与することにより、ＮＦ−κＢによっ
て活性化される遺伝子の発現を抑制し、転写調節因子Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患、例えば虚血性疾患、炎症性疾
患、自己免疫疾患、ガンの転移浸潤、悪液質等の疾患を
治療および予防する。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】（技術分野）本発明は、サイ
トカインや接着因子等の転写調節因子の１つとして知ら
れるＮＦ−κＢに起因する様々な疾患の予防又は治療に
関する。詳細にはＮＦ−κＢのデコイ、該デコイを含有
するＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤なら
びに治療および予防方法に関する。 【０００２】 【従来の技術】（背景技術）喘息、ガン、心臓病、自己
免疫疾患およびウイルス感染症などの様々な疾患は、異
なる症状を示すにも拘わらず、１種類または数種類の蛋
白質が、過剰発現あるいは過少発現したことが原因の多
くを占めることが示唆されている。また、蛋白質の発現
には様々な転写活性化因子および転写抑制因子等の転写
調節因子が関与している。転写調節因子の１つとして知
られているＮＦ−κＢは、ｐ６５とｐ５０のヘテロダイ
マーからなっている。通常は、細胞質内に阻害因子Ｉκ
Ｂが結合した形で存在し、核移行が阻止されている。と
ころが、何らかの原因でサイトカインや、虚血、再潅流
といった何らかの刺激が加わるとＩκＢがリン酸化さ
れ、分解されることにより、ＮＦ−κＢは活性化されて
核内に移行する。ＮＦ−κＢは染色体のＮＦ−κＢ結合
部位に結合することにより、その下流にある遺伝子の転
写を促進する。ＮＦ−κＢにより制御される遺伝子に
は、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８などのサイ
トカイン類や、ＶＣＡＭ−１やＩＣＡＭ−１などの接着
因子がある。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明は、転写調節因
子ＮＦ−κＢに起因する疾患、例えば虚血性疾患、炎症
性疾患、自己免疫疾患、ガンの転移浸潤、悪液質等の疾
患を治療および予防することを課題とする。 【０００４】 【課題を解決するための手段】１つの局面において、本
発明は、ＮＦ−κＢのデコイを含有するＮＦ−κＢに起
因する疾患の治療および予防剤に関する。 【０００５】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、炎症性疾患、自
己免疫疾患である上記の治療および予防剤である。 【０００６】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患である上記の治療
および予防剤である。 【０００７】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患の再潅流障害、臓
器移植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再
狭窄である上記の治療および予防剤である。 【０００８】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性心疾患の再潅流障害、
心臓移植又は心臓の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の
再狭窄である上記の治療および予防剤である。 【０００９】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患がガンの転移・浸潤、悪疫質で
ある上記の治療および予防剤である。 【００１０】１つの局面において、本発明は、配列表の
配列番号１に記載された配列の５’末端から８から１７
番目で表される配列をもつ核酸およびその変異体を含む
核酸に関する。 【００１１】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢのデコイが上記の核酸である上記の治療および
予防剤である。 【００１２】好ましい実施形態において、本発明は、上
記のＮＦ−κＢのデコイを含有するリポソーム製剤であ
る。 【００１３】１つの局面において、本発明は、ＮＦ−κ
Ｂのデコイの有効量を哺乳動物に投与することからなる
ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防方法に関す
る。 【００１４】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、炎症性疾患、自
己免疫疾患である上記の治療および予防方法である。 【００１５】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患である上記の治療
および予防方法である。 【００１６】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患の再潅流障害、臓
器移植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再
狭窄である上記の治療および予防方法である。 【００１７】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性心疾患の再潅流障害、
心臓移植又は心臓の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の
再狭窄である上記の治療および予防方法である。 【００１８】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患がガンの転移・浸潤、悪疫質で
ある上記の治療および予防方法である。 【００１９】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢのデコイが請求の範囲第７項記載の核酸である
上記の治療および予防方法である。 【００２０】１つの局面において、本発明は、ＮＦ−κ
ＢのデコイのＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予
防のための使用に関する。 【００２１】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、炎症性疾患、自
己免疫疾患である上記の治療および予防のための使用で
ある。 【００２２】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患である上記の治療
および予防のための使用である。 【００２３】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患の再潅流障害、臓
器移植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再
狭窄である上記の治療および予防のための使用である。 【００２４】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性心疾患の再潅流障害、
心臓移植又は心臓の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の
再狭窄である上記の治療および予防のための使用であ
る。 【００２５】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患がガンの転移・浸潤、悪疫質で
ある上記の治療および予防のための使用である。 【００２６】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢのデコイが上記の核酸である上記の治療および
予防のための使用である。 【００２７】 【発明の実施の形態】（発明の開示）前出のサイトカイ
ン類や接着因子の生産の活性化が、虚血性疾患、炎症性
疾患、自己免疫疾患、ガンの転移浸潤、悪液質等の種々
の疾患を引き起こす一つの原因となっていると予測し、
鋭意研究の結果、ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療に
は、ＮＦ−κＢの核酸結合部位に対するデコイ、つまり
ＮＦ−κＢが結合する核酸部位と特異的に拮抗する化合
物を投与することによりＮＦ−κＢにより活性化される
遺伝子の発現を抑制することが非常に有効であることを
見いだし、本発明を完成した。 【００２８】すなわち、本発明は、ＮＦ−κＢのデコイ
を主成分として含有する、ＮＦ−κＢに起因する種々の
疾患の治療および予防剤及びその予防治療方法を提供す
るものである。 【００２９】本発明の治療予防剤の対象とする疾患は、
ＮＦ−κＢに起因する疾患、すなわち、転写調節因子Ｎ
Ｆ−κＢが制御する遺伝子の所望しない活性化に起因す
る疾患であり、このような疾患としては、例えば虚血性
疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、ガンの転移・浸潤、
悪液質等が挙げられる。虚血性疾患としては虚血性臓器
疾患（例えば心筋梗塞、急性心不全、慢性心不全等の虚
血性心疾患、脳梗塞等の虚血性脳疾患および肺梗塞等の
虚血性肺疾患等）、臓器移植・臓器手術後の予後の悪化
（例えば心移植、心臓手術、腎移植、腎臓手術、肝移
植、肝臓手術、骨髄移植、皮膚移植、角膜移植、肺移植
等の予後の悪化）、再潅流障害、ＰＴＣＡ後の再狭窄等
が挙げられる。炎症性疾患としては腎炎、肝炎、関節炎
等の種々の炎症、急性腎不全、慢性腎不全、動脈硬化等
が挙げられる。また、自己免疫疾患としてはリューマ
チ、多発性硬化症、橋本甲状腺炎等が挙げられる。特に
本発明により得られるＮＦ−κＢのデコイを主成分とし
て含有する医薬品は、虚血性疾患の再潅流障害、臓器移
植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再狭
窄、ガンの転位・浸潤、ガン発生後に伴う体重減少等の
悪液質の治療および予防には好適である。 【００３０】本発明で用いられるＮＦ−κＢのデコイと
しては、染色体上に存在するＮＦ−κＢの核酸結合部位
と特異的に拮抗する化合物であればよく、例えば核酸お
よびその類似体が含まれる。好ましいＮＦ−κＢのデコ
イの例としては、核酸配列ＧＧＧＡＴＴＴＣＣＣ（配列
表の配列番号１の５’末端から８から１７番目の配列）
またはその相補体を含むオリゴヌクレオチド、その変異
体、またはこれらを分子内に含む化合物があげられる。
オリゴヌクレオチドはＤＮＡでもＲＮＡでもよく、また
そのオリゴヌクレオチド内に核酸修飾体または／および
擬核酸を含むものであってもよい。また、これらのオリ
ゴヌクレオチド、その変異体、またはこれらを分子内に
含む化合物は１本鎖でも２本鎖であってもよく、線状で
あっても環状であってもよい。変異体とは上記配列の一
部が、変異、置換、挿入、欠失しているもので、ＮＦ−
κＢが結合する核酸結合部位と特異的に拮抗する核酸を
示す。さらに好ましいＮＦ−κＢのデコイしては、上記
核酸配列を１つまたは数個含む２本鎖オリゴヌクレオチ
ドまたはその変異体があげられる。本発明で用いられる
オリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合部の酸素
原子をイオウ原子で置換したチオリン酸ジエステル結合
をもつオリゴヌクレオチド（Ｓ−オリゴ）、または、リ
ン酸ジエステル結合を電荷をもたないメチルホスフェー
ト基で置換したオリゴヌクレオチド等の生体内でオリゴ
ヌクレオチドが分解を受けにくくするために改変したオ
リゴヌクレオチド等が含まれる。 【００３１】本発明で用いられるＮＦ−κＢのデコイの
製造方法としては、一般的な化学合成法または生化学合
成法を用いることが出来る。例えばＮＦ−κＢのデコイ
として核酸を用いる場合、遺伝子工学で一般的に用いら
れる核酸合成法を用いることが出来、例えば、ＤＮＡ合
成装置を用いて目的のデコイヌクレオチドを直接合成し
てもよいし、またこれらの核酸、それを含む核酸または
その一部を合成した後、ＰＣＲ法またはクローニングベ
クター等を用いて核酸を増幅してもよい。さらに、これ
らの方法により得られた核酸を、制限酵素等を用いて切
断後、ＤＮＡリガーゼ等を用いて結合等を行い目的とす
る核酸を製造してもよい。また、さらに細胞内でより安
定なデコイヌクレオチドを得るために、核酸の塩基、
糖、リン酸部分を例えばアルキル化、アシル化等の化学
修飾を施してもよい。 【００３２】本発明により得られるＮＦ−κＢのデコイ
を主成分として含有する製剤は、主薬が患部の細胞また
は目的とする組織の細胞内に取り込まれるような製剤で
あれば特に限定されるものではなく、ＮＦ−κＢのデコ
イ単独で、もしくは慣用の担体と混合して、経口投与、
非経口投与、局所投与ないしは外用の形で投与される。
これらの製剤は溶液、懸濁液、シロップ、リポソーム製
剤、乳剤、シロップ等の液体の投与形態であってもよい
し、錠剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤などの固形の投
与形態であってもよい。必要に応じ、上記製剤には各種
の担体、助剤、安定剤、潤滑剤、その他一般に使用され
る添加剤、例えば乳糖、クエン酸、酒石酸、ステアリン
酸、ステアリン酸マグネシウム、白陶土、蔗糖、コーン
スターチ、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、落下生
油、オリーブ油、カカオバター、エチレングリコールな
どを添加することができる。 【００３３】特に、ＮＦ−κＢのデコイとして核酸また
はその修飾体を用いる場合には、好ましい製剤としては
一般に用いられている遺伝子導入法で用いられる形態、
例えばセンダイウイルス等を用いた膜融合リポソーム製
剤やエンドサイトーシスを利用するリポソーム製剤等の
リポソーム製剤、リポフェクトアミン（ライフテックオ
リエンタル社製）等のカチオン性脂質を含有する製剤ま
たはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター
等を用いるウイルス製剤を用いるのが有利であり、特に
膜融合リポソーム製剤が好ましい。 【００３４】リポソーム製剤は、そのリポソームの構造
体が、大きな１枚膜リポソーム（ＬＵＶ）、多重層リポ
ソーム（ＭＬＶ）、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）
のいずれであってもよい。その大きさも、ＬＵＶでは２
００から１０００ｎｍ、ＭＬＶでは４００から３５００
ｎｍ、ＳＵＶでは２０から５０ｎｍ程度の粒子系をとり
得るが、センダイウイルス等を用いる膜融合リポソーム
製剤の場合は粒子系２００から１０００ｎｍのＭＬＶを
用いるのが好ましい。 【００３５】リポソームの製造方法は、デコイが保持さ
れるものであれば特に限定されるものではなく、慣用の
方法、例えば逆相蒸発法（Ｓｚｏｋａ，Ｆ．ら：Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．６０１
５５９（１９８０））、エーテル注入法（Ｄｅａｍｅ
ｒ，Ｄ．Ｗ．：Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，
Ｖｏｌ．３０８ ２５０（１９７８））、界面活性剤法
（Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｊ．ら： Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．４５５ ３２２（１９７
６））等を用いて製造することができる。 【００３６】リポソーム構造を形成するための脂質とし
てはリン脂質、コレステロール類や窒素脂質等が用いら
れるが、一般的にはリン脂質が好適であり、ホスファチ
ジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグ
リセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、カルジオリ
ピン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチ
ン、リゾレシチン、等の天然リン脂質、あるいはこれら
を常法によって水素添加したものの他、ジセチルホスフ
ェート、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスフ
ァチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチ
ジルセリン、エレオステアロイルホスファチジルコリ
ン、エレオステアロイルホスファチジルエタノールアミ
ン、エレオステアロイルホスファチジルセリン等の合成
リン脂質等を使用することができる。 【００３７】これらのリン脂質を含む脂質類は単独で用
いることもできるが、２種以上を併用することも可能で
ある。このとき、エタノールアミンやコリン等の陽性基
をもつ原子団を分子内に持つものを用いることにより、
電気的に陰性なデコイヌクレオチドの結合率を増加させ
ることもできる。これらリポソーム形成時の主要リン脂
質の他に一般にリポソーム形成用添加剤として知られる
コレステロール類、ステアリルアミン、α−トコフェロ
ール等の添加剤を用いることもできる。 【００３８】このようにして得られるリポソームは患部
の細胞または目的とする組織の細胞内に取り込みを促進
するために、膜融合促進物質、例えばセンダイウイル
ス、不活化センダイウイルス、センダイウイルスより精
製された膜融合促進蛋白質、ポリエチレングリコール等
を加えることができる。 【００３９】リポソーム製剤の製造法の例を具体的に説
明すると、たとえば前記したリポソーム形成物質をコレ
ステロール等と共にテトラヒドロフラン、クロロホル
ム、エタノール等の有機溶媒に溶解し、これを適当な容
器に入れて減圧下に溶媒を留去して容器内面にリポソー
ム形成物質の膜を形成する。これにＮＦ−κＢのデコイ
を含有する緩衝液を加えて撹拌し、得られたリポソーム
にさらに所望により前記した膜融合促進物質を加えた
後、リポソームを単離する。このようにして得られるＮ
Ｆ−κＢのデコイを含有するリポソームは適当な溶媒中
に懸濁させるか、或いはいったん凍結乾燥したものを適
当な溶媒に再分散させて治療に用いることができる。膜
融合促進物質はリポソーム単離後、使用までの間に加え
てもよい。 【００４０】この様にして得られたＮＦ−κＢのデコイ
を主成分として含有する製剤における、デコイの含有割
合は、ＮＦ−κＢに起因する疾患を有効に阻止できる量
が含有されていれば特に限定されず、適用疾患、適用部
位、投与形態および投与方法に応じて種々設定すること
ができる。 【００４１】この様にして得られるＮＦ−κＢを主成分
として含有する医薬品は、疾患の種類、使用するデコイ
の種類等により各種の方法で投与することができ、例え
ば虚血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患およびガンの
転移・浸潤、悪液質においては血管内投与、疾患部位に
塗布、疾患部位内に投与または疾患部位に血管内投与等
する事ができる。さらに具体的な例としては、たとえば
臓器梗塞等でＰＴＣＡを行う場合には、同時またはその
前後に患部血管に投与する事ができ、また、臓器移植等
では移植する臓器を予め本願で用いられる製剤で処置し
て用いてもよい。また、たとえば変形関節炎リュウマチ
等では直接関節内に注入して用いることもできる。 【００４２】ＮＦ−κＢのデコイの投与量は、年齢その
他患者の条件、疾病の種類、使用するデコイの種類等に
より適宜選択されるが、例えば血液内投与、筋肉内投
与、関節内投与等では一般には１回あたり１０から１
０、０００ｎｍｏｌｅを１日１回から数回投与する事が
できる。 【００４３】（発明を実施するための最良の形態）以下
に本発明の実施例によりさらに具体的に説明する。 【００４４】 【実施例】（実施例１：ＮＦ−κＢのデコイ（デコイオ
リゴヌクレオイド）の合成）ＤＮＡ合成機でＳ−オリゴ
用いて、それぞれ下記の塩基配列を持つＮＦ−κＢのデ
コイオリゴヌクレオチドおよびスクランブルデコイオリ
ゴヌクレオチド（ＮＦ−κＢのデコイヌクレオチドと同
じ塩基組成を持つが配列がランダムなヌクレオチド）を
合成した。これらのヌクレオチドを８０度、３０分加熱
した後、室温に２時間かけて室温まで冷却し、２本鎖Ｄ
ＮＡを得た。ＮＦ−κＢデコイオリゴヌクレオチド 【００４５】 【化１】 【００４６】スクランブルデコイオリゴヌクレオチド 【００４７】 【化２】 【００４８】（実施例２：リポソーム製剤の製造）フォ
スファチジルセリン、フォスファチジルコリンおよびコ
レステロールを重量比１：４．８：２（合計１０ｍｇ）
をテトラヒドロフランに溶解させた。ロータリーエバポ
レーターを用いて、この脂質溶液からテトラハイドロフ
ランを除去し、脂質をフラスコ表面に付着させた。この
フラスコに、実施例１で得られたＮＦ−κＢデコイオリ
ゴヌクレオチド（０．７ｍｇ）を含む生理食塩水（ＢＳ
Ｓ；１３９ｍＭ ＮａＣｌ，５．４ｍＭ ＫＣｌ，１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．６）２００ｍｌに加
え、常法により、攪拌及び超音波処理し、ＮＦ−κＢの
デコイオリゴヌクレオチドを含むリポソーム懸濁液を調
製した。得られたリポソーム懸濁液（０．５ｍｌ，１０
ｍｇの脂質を含有）に、精製したセンダイウイルス（Ｚ
株：１００００ ｈｅｍａｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇ ｕ
ｎｉｔｓ）を使用する３分前にＵＶ照射（１１０ｅｒｇ
／ｍｍ2／ｓｅｃ）で不活化したものを混合し、ＢＳＳ
で合計４ｍｌとした。混合物を４℃で５分間保持した
後、３７℃で穏やかに３０分間振とうした。スクロース
密度勾配遠心により、リポソームに結合していないセン
ダイウイルスを除いた後、最上層を採取し、ＢＳＳで濃
度を調節し、８μＭのＮＦ−κＢデコイオリゴヌクレオ
チドが封入されたリポソーム製剤を得た。同様にＮＦ−
κＢデコイオリゴヌクレオチドの代わりに実施例１で得
られたスクランブルデコイオリゴヌクレオチドを用いて
製剤を得た。 【００４９】（実施例３：再灌流モデル実験） （１）実験方法 ９−１０週齢のＳＤラットをペントバルビタールナトリ
ウムで麻酔した後、気道に近接した左頸動脈にカニュー
レを挿入し心臓の大動脈弁の近傍（冠動脈の流入口の近
く）に留置した。さらに、気管にカニューレをほどこ
し、人工呼吸器につないで人工呼吸をおこなった。その
後、左胸部肋間を切開し、ラット心臓の左前下行枝を糸
で結紮し、虚血を作成した。３０分後、結紮した糸を切
り、再灌流を開始した後すぐに実施例２で作成したリポ
ソームに封入したＮＦ−κＢデコイヌクレオチドおよび
スクランブルデコイヌクレオチドを１．５ｍｌ／ラット
で冠動脈の流入口の近くに留置したカニューレにより投
与した。その後、閉胸し、気管も縫合し生存放置してお
く。２４時間後、ラットを再度麻酔し、心臓を取り出
し、生理食塩水で洗浄した後、ラット心室を６切片に切
断し、ＴＴＣ（塩化テトラゾリウム）染色を行った。６
切片の写真を取り、それぞれ画像解析を行った。なお、
梗塞領域は以下の式に従って算出した。 【００５０】梗塞率（％）＝６切片の梗塞面積の和／６
切片の面積の和×１００ なお、統計計算は多重間比較（Ａｎｏｖａ）にて実施し
た。 【００５１】（２）結果 結果を表１に示した。無処置群とスクランブルデコイ投
与群においては、両間にほぼ同程度の心筋梗塞の発生が
観察されたが、ＮＦ−κＢデコイヌクレオチド投与群で
はその発生が１９％と、無処置群並びにスクランブルデ
コイ投与群に比し梗塞が有意（Ｐ＜０．０１）に抑制さ
れていた。 【００５２】 【表１】 【００５３】なお、梗塞直前投与においても同様に抑制
効果が得られた。 【００５４】（実施例４：ガン転移の抑制） （１）実験方法 ７週令のＣ５７ＢＬ／６系雌性マウスに、マウス細網肉
腫Ｍ５０７６細胞１×１０4個を静脈内投与し、その２
４時間後に、実施例２と同様にして製造したＮＦ−κＢ
デコイヌクレオチド０．２ｍｌ（６ｎｍｏｌｅｓ）を静
脈内投与した。コントロール群には生理食塩水０．２ｍ
ｌを投与した。Ｍ５０７６の静脈内投与後１４日目に解
剖し、肝臓表面上の腫瘍結節数を実体顕微鏡下で計数し
た。一群当たり１０匹のマウスを用いた。統計学的解析
には、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓの検定及びＤｕｎ
ｎｅｔｔの多重比較検定を用いた。 【００５５】（２）結果 コントロール群の腫瘍結節数が、平均値１６６、中央値
１７３（１１６〜１９８）であったのに対しＮＦ−κＢ
デコイ投与群では、平均値２９、中央値２７（１９〜５
４）であり、ＮＦ−κＢデコイ投与群とコントロール群
との間には危険率１％以下で有意な差が認められた。 【００５６】（実施例５：悪液質の抑制） （１）実験方法 ７週令のＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウスに、マウス結腸ガン
Ｃｏｌｏｎ２６の２ｍｍ角の腫瘍片を皮下移植し、その
７日目からＮＦ−κＢデコイまたはスクランブルデコイ
各０．２ｍｌ（６ｎｍｏｌｅｓ）を腫瘍内に投与し、経
時的に体重及び腫瘍重量を計測した。また、１３日目に
解剖し、副睾丸脂肪及び腓腹筋を摘出し、その重量を測
定した。さらに、残ったすべての臓器及び腫瘍を除いた
カルカス湿重量を測定した。腫瘍重量は、各腫瘍の長径
及び短径より以下の式にて腫瘍重量を計算した。 【００５７】腫瘍重量（ｍｇ）＝長径×短径2／２ 一群当たり１０匹のマウスを用いた。統計学的解析に
は、一元配置分散分析及びＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検
定を用いた。 【００５８】（２）結果 担癌群においては腫瘍の増殖に伴い、体重、副睾丸脂肪
重量、腓腹筋重量及びカルカス湿重量の有意な減少が認
められた。ＮＦ−κＢデコイ投与群では、体重を４７
％、副睾丸脂肪重量を４２％、腓腹筋重量を６０％及び
カルカス湿重量を５２％改善させたが、スクランブルデ
コイ投与群では全く回復作用を示さなかった。腫瘍重量
には明らかな作用は認められなかった。 【００５９】 【発明の効果】ＮＦ−κＢが結合する核酸部位と特異的
に拮抗する化合物であるデコイを投与することによっ
て、転写調節因子ＮＦ−κＢに起因する疾患、例えば虚
血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、ガンの転移浸
潤、悪液質等の疾患の治療および予防し得る。 【００６０】 【配列表】 【００６１】 【化３】
トカインや接着因子等の転写調節因子の１つとして知ら
れるＮＦ−κＢに起因する様々な疾患の予防又は治療に
関する。詳細にはＮＦ−κＢのデコイ、該デコイを含有
するＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤なら
びに治療および予防方法に関する。 【０００２】 【従来の技術】（背景技術）喘息、ガン、心臓病、自己
免疫疾患およびウイルス感染症などの様々な疾患は、異
なる症状を示すにも拘わらず、１種類または数種類の蛋
白質が、過剰発現あるいは過少発現したことが原因の多
くを占めることが示唆されている。また、蛋白質の発現
には様々な転写活性化因子および転写抑制因子等の転写
調節因子が関与している。転写調節因子の１つとして知
られているＮＦ−κＢは、ｐ６５とｐ５０のヘテロダイ
マーからなっている。通常は、細胞質内に阻害因子Ｉκ
Ｂが結合した形で存在し、核移行が阻止されている。と
ころが、何らかの原因でサイトカインや、虚血、再潅流
といった何らかの刺激が加わるとＩκＢがリン酸化さ
れ、分解されることにより、ＮＦ−κＢは活性化されて
核内に移行する。ＮＦ−κＢは染色体のＮＦ−κＢ結合
部位に結合することにより、その下流にある遺伝子の転
写を促進する。ＮＦ−κＢにより制御される遺伝子に
は、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８などのサイ
トカイン類や、ＶＣＡＭ−１やＩＣＡＭ−１などの接着
因子がある。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明は、転写調節因
子ＮＦ−κＢに起因する疾患、例えば虚血性疾患、炎症
性疾患、自己免疫疾患、ガンの転移浸潤、悪液質等の疾
患を治療および予防することを課題とする。 【０００４】 【課題を解決するための手段】１つの局面において、本
発明は、ＮＦ−κＢのデコイを含有するＮＦ−κＢに起
因する疾患の治療および予防剤に関する。 【０００５】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、炎症性疾患、自
己免疫疾患である上記の治療および予防剤である。 【０００６】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患である上記の治療
および予防剤である。 【０００７】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患の再潅流障害、臓
器移植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再
狭窄である上記の治療および予防剤である。 【０００８】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性心疾患の再潅流障害、
心臓移植又は心臓の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の
再狭窄である上記の治療および予防剤である。 【０００９】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患がガンの転移・浸潤、悪疫質で
ある上記の治療および予防剤である。 【００１０】１つの局面において、本発明は、配列表の
配列番号１に記載された配列の５’末端から８から１７
番目で表される配列をもつ核酸およびその変異体を含む
核酸に関する。 【００１１】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢのデコイが上記の核酸である上記の治療および
予防剤である。 【００１２】好ましい実施形態において、本発明は、上
記のＮＦ−κＢのデコイを含有するリポソーム製剤であ
る。 【００１３】１つの局面において、本発明は、ＮＦ−κ
Ｂのデコイの有効量を哺乳動物に投与することからなる
ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防方法に関す
る。 【００１４】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、炎症性疾患、自
己免疫疾患である上記の治療および予防方法である。 【００１５】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患である上記の治療
および予防方法である。 【００１６】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患の再潅流障害、臓
器移植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再
狭窄である上記の治療および予防方法である。 【００１７】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性心疾患の再潅流障害、
心臓移植又は心臓の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の
再狭窄である上記の治療および予防方法である。 【００１８】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患がガンの転移・浸潤、悪疫質で
ある上記の治療および予防方法である。 【００１９】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢのデコイが請求の範囲第７項記載の核酸である
上記の治療および予防方法である。 【００２０】１つの局面において、本発明は、ＮＦ−κ
ＢのデコイのＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予
防のための使用に関する。 【００２１】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、炎症性疾患、自
己免疫疾患である上記の治療および予防のための使用で
ある。 【００２２】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患である上記の治療
および予防のための使用である。 【００２３】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性疾患の再潅流障害、臓
器移植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再
狭窄である上記の治療および予防のための使用である。 【００２４】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患が虚血性心疾患の再潅流障害、
心臓移植又は心臓の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の
再狭窄である上記の治療および予防のための使用であ
る。 【００２５】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢに起因する疾患がガンの転移・浸潤、悪疫質で
ある上記の治療および予防のための使用である。 【００２６】好ましい実施形態において、本発明は、Ｎ
Ｆ−κＢのデコイが上記の核酸である上記の治療および
予防のための使用である。 【００２７】 【発明の実施の形態】（発明の開示）前出のサイトカイ
ン類や接着因子の生産の活性化が、虚血性疾患、炎症性
疾患、自己免疫疾患、ガンの転移浸潤、悪液質等の種々
の疾患を引き起こす一つの原因となっていると予測し、
鋭意研究の結果、ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療に
は、ＮＦ−κＢの核酸結合部位に対するデコイ、つまり
ＮＦ−κＢが結合する核酸部位と特異的に拮抗する化合
物を投与することによりＮＦ−κＢにより活性化される
遺伝子の発現を抑制することが非常に有効であることを
見いだし、本発明を完成した。 【００２８】すなわち、本発明は、ＮＦ−κＢのデコイ
を主成分として含有する、ＮＦ−κＢに起因する種々の
疾患の治療および予防剤及びその予防治療方法を提供す
るものである。 【００２９】本発明の治療予防剤の対象とする疾患は、
ＮＦ−κＢに起因する疾患、すなわち、転写調節因子Ｎ
Ｆ−κＢが制御する遺伝子の所望しない活性化に起因す
る疾患であり、このような疾患としては、例えば虚血性
疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、ガンの転移・浸潤、
悪液質等が挙げられる。虚血性疾患としては虚血性臓器
疾患（例えば心筋梗塞、急性心不全、慢性心不全等の虚
血性心疾患、脳梗塞等の虚血性脳疾患および肺梗塞等の
虚血性肺疾患等）、臓器移植・臓器手術後の予後の悪化
（例えば心移植、心臓手術、腎移植、腎臓手術、肝移
植、肝臓手術、骨髄移植、皮膚移植、角膜移植、肺移植
等の予後の悪化）、再潅流障害、ＰＴＣＡ後の再狭窄等
が挙げられる。炎症性疾患としては腎炎、肝炎、関節炎
等の種々の炎症、急性腎不全、慢性腎不全、動脈硬化等
が挙げられる。また、自己免疫疾患としてはリューマ
チ、多発性硬化症、橋本甲状腺炎等が挙げられる。特に
本発明により得られるＮＦ−κＢのデコイを主成分とし
て含有する医薬品は、虚血性疾患の再潅流障害、臓器移
植又は臓器の手術後の予後の悪化、ＰＴＣＡ後の再狭
窄、ガンの転位・浸潤、ガン発生後に伴う体重減少等の
悪液質の治療および予防には好適である。 【００３０】本発明で用いられるＮＦ−κＢのデコイと
しては、染色体上に存在するＮＦ−κＢの核酸結合部位
と特異的に拮抗する化合物であればよく、例えば核酸お
よびその類似体が含まれる。好ましいＮＦ−κＢのデコ
イの例としては、核酸配列ＧＧＧＡＴＴＴＣＣＣ（配列
表の配列番号１の５’末端から８から１７番目の配列）
またはその相補体を含むオリゴヌクレオチド、その変異
体、またはこれらを分子内に含む化合物があげられる。
オリゴヌクレオチドはＤＮＡでもＲＮＡでもよく、また
そのオリゴヌクレオチド内に核酸修飾体または／および
擬核酸を含むものであってもよい。また、これらのオリ
ゴヌクレオチド、その変異体、またはこれらを分子内に
含む化合物は１本鎖でも２本鎖であってもよく、線状で
あっても環状であってもよい。変異体とは上記配列の一
部が、変異、置換、挿入、欠失しているもので、ＮＦ−
κＢが結合する核酸結合部位と特異的に拮抗する核酸を
示す。さらに好ましいＮＦ−κＢのデコイしては、上記
核酸配列を１つまたは数個含む２本鎖オリゴヌクレオチ
ドまたはその変異体があげられる。本発明で用いられる
オリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合部の酸素
原子をイオウ原子で置換したチオリン酸ジエステル結合
をもつオリゴヌクレオチド（Ｓ−オリゴ）、または、リ
ン酸ジエステル結合を電荷をもたないメチルホスフェー
ト基で置換したオリゴヌクレオチド等の生体内でオリゴ
ヌクレオチドが分解を受けにくくするために改変したオ
リゴヌクレオチド等が含まれる。 【００３１】本発明で用いられるＮＦ−κＢのデコイの
製造方法としては、一般的な化学合成法または生化学合
成法を用いることが出来る。例えばＮＦ−κＢのデコイ
として核酸を用いる場合、遺伝子工学で一般的に用いら
れる核酸合成法を用いることが出来、例えば、ＤＮＡ合
成装置を用いて目的のデコイヌクレオチドを直接合成し
てもよいし、またこれらの核酸、それを含む核酸または
その一部を合成した後、ＰＣＲ法またはクローニングベ
クター等を用いて核酸を増幅してもよい。さらに、これ
らの方法により得られた核酸を、制限酵素等を用いて切
断後、ＤＮＡリガーゼ等を用いて結合等を行い目的とす
る核酸を製造してもよい。また、さらに細胞内でより安
定なデコイヌクレオチドを得るために、核酸の塩基、
糖、リン酸部分を例えばアルキル化、アシル化等の化学
修飾を施してもよい。 【００３２】本発明により得られるＮＦ−κＢのデコイ
を主成分として含有する製剤は、主薬が患部の細胞また
は目的とする組織の細胞内に取り込まれるような製剤で
あれば特に限定されるものではなく、ＮＦ−κＢのデコ
イ単独で、もしくは慣用の担体と混合して、経口投与、
非経口投与、局所投与ないしは外用の形で投与される。
これらの製剤は溶液、懸濁液、シロップ、リポソーム製
剤、乳剤、シロップ等の液体の投与形態であってもよい
し、錠剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤などの固形の投
与形態であってもよい。必要に応じ、上記製剤には各種
の担体、助剤、安定剤、潤滑剤、その他一般に使用され
る添加剤、例えば乳糖、クエン酸、酒石酸、ステアリン
酸、ステアリン酸マグネシウム、白陶土、蔗糖、コーン
スターチ、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、落下生
油、オリーブ油、カカオバター、エチレングリコールな
どを添加することができる。 【００３３】特に、ＮＦ−κＢのデコイとして核酸また
はその修飾体を用いる場合には、好ましい製剤としては
一般に用いられている遺伝子導入法で用いられる形態、
例えばセンダイウイルス等を用いた膜融合リポソーム製
剤やエンドサイトーシスを利用するリポソーム製剤等の
リポソーム製剤、リポフェクトアミン（ライフテックオ
リエンタル社製）等のカチオン性脂質を含有する製剤ま
たはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター
等を用いるウイルス製剤を用いるのが有利であり、特に
膜融合リポソーム製剤が好ましい。 【００３４】リポソーム製剤は、そのリポソームの構造
体が、大きな１枚膜リポソーム（ＬＵＶ）、多重層リポ
ソーム（ＭＬＶ）、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）
のいずれであってもよい。その大きさも、ＬＵＶでは２
００から１０００ｎｍ、ＭＬＶでは４００から３５００
ｎｍ、ＳＵＶでは２０から５０ｎｍ程度の粒子系をとり
得るが、センダイウイルス等を用いる膜融合リポソーム
製剤の場合は粒子系２００から１０００ｎｍのＭＬＶを
用いるのが好ましい。 【００３５】リポソームの製造方法は、デコイが保持さ
れるものであれば特に限定されるものではなく、慣用の
方法、例えば逆相蒸発法（Ｓｚｏｋａ，Ｆ．ら：Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．６０１
５５９（１９８０））、エーテル注入法（Ｄｅａｍｅ
ｒ，Ｄ．Ｗ．：Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，
Ｖｏｌ．３０８ ２５０（１９７８））、界面活性剤法
（Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｊ．ら： Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．４５５ ３２２（１９７
６））等を用いて製造することができる。 【００３６】リポソーム構造を形成するための脂質とし
てはリン脂質、コレステロール類や窒素脂質等が用いら
れるが、一般的にはリン脂質が好適であり、ホスファチ
ジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグ
リセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、カルジオリ
ピン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチ
ン、リゾレシチン、等の天然リン脂質、あるいはこれら
を常法によって水素添加したものの他、ジセチルホスフ
ェート、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパル
ミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスフ
ァチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチ
ジルセリン、エレオステアロイルホスファチジルコリ
ン、エレオステアロイルホスファチジルエタノールアミ
ン、エレオステアロイルホスファチジルセリン等の合成
リン脂質等を使用することができる。 【００３７】これらのリン脂質を含む脂質類は単独で用
いることもできるが、２種以上を併用することも可能で
ある。このとき、エタノールアミンやコリン等の陽性基
をもつ原子団を分子内に持つものを用いることにより、
電気的に陰性なデコイヌクレオチドの結合率を増加させ
ることもできる。これらリポソーム形成時の主要リン脂
質の他に一般にリポソーム形成用添加剤として知られる
コレステロール類、ステアリルアミン、α−トコフェロ
ール等の添加剤を用いることもできる。 【００３８】このようにして得られるリポソームは患部
の細胞または目的とする組織の細胞内に取り込みを促進
するために、膜融合促進物質、例えばセンダイウイル
ス、不活化センダイウイルス、センダイウイルスより精
製された膜融合促進蛋白質、ポリエチレングリコール等
を加えることができる。 【００３９】リポソーム製剤の製造法の例を具体的に説
明すると、たとえば前記したリポソーム形成物質をコレ
ステロール等と共にテトラヒドロフラン、クロロホル
ム、エタノール等の有機溶媒に溶解し、これを適当な容
器に入れて減圧下に溶媒を留去して容器内面にリポソー
ム形成物質の膜を形成する。これにＮＦ−κＢのデコイ
を含有する緩衝液を加えて撹拌し、得られたリポソーム
にさらに所望により前記した膜融合促進物質を加えた
後、リポソームを単離する。このようにして得られるＮ
Ｆ−κＢのデコイを含有するリポソームは適当な溶媒中
に懸濁させるか、或いはいったん凍結乾燥したものを適
当な溶媒に再分散させて治療に用いることができる。膜
融合促進物質はリポソーム単離後、使用までの間に加え
てもよい。 【００４０】この様にして得られたＮＦ−κＢのデコイ
を主成分として含有する製剤における、デコイの含有割
合は、ＮＦ−κＢに起因する疾患を有効に阻止できる量
が含有されていれば特に限定されず、適用疾患、適用部
位、投与形態および投与方法に応じて種々設定すること
ができる。 【００４１】この様にして得られるＮＦ−κＢを主成分
として含有する医薬品は、疾患の種類、使用するデコイ
の種類等により各種の方法で投与することができ、例え
ば虚血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患およびガンの
転移・浸潤、悪液質においては血管内投与、疾患部位に
塗布、疾患部位内に投与または疾患部位に血管内投与等
する事ができる。さらに具体的な例としては、たとえば
臓器梗塞等でＰＴＣＡを行う場合には、同時またはその
前後に患部血管に投与する事ができ、また、臓器移植等
では移植する臓器を予め本願で用いられる製剤で処置し
て用いてもよい。また、たとえば変形関節炎リュウマチ
等では直接関節内に注入して用いることもできる。 【００４２】ＮＦ−κＢのデコイの投与量は、年齢その
他患者の条件、疾病の種類、使用するデコイの種類等に
より適宜選択されるが、例えば血液内投与、筋肉内投
与、関節内投与等では一般には１回あたり１０から１
０、０００ｎｍｏｌｅを１日１回から数回投与する事が
できる。 【００４３】（発明を実施するための最良の形態）以下
に本発明の実施例によりさらに具体的に説明する。 【００４４】 【実施例】（実施例１：ＮＦ−κＢのデコイ（デコイオ
リゴヌクレオイド）の合成）ＤＮＡ合成機でＳ−オリゴ
用いて、それぞれ下記の塩基配列を持つＮＦ−κＢのデ
コイオリゴヌクレオチドおよびスクランブルデコイオリ
ゴヌクレオチド（ＮＦ−κＢのデコイヌクレオチドと同
じ塩基組成を持つが配列がランダムなヌクレオチド）を
合成した。これらのヌクレオチドを８０度、３０分加熱
した後、室温に２時間かけて室温まで冷却し、２本鎖Ｄ
ＮＡを得た。ＮＦ−κＢデコイオリゴヌクレオチド 【００４５】 【化１】 【００４６】スクランブルデコイオリゴヌクレオチド 【００４７】 【化２】 【００４８】（実施例２：リポソーム製剤の製造）フォ
スファチジルセリン、フォスファチジルコリンおよびコ
レステロールを重量比１：４．８：２（合計１０ｍｇ）
をテトラヒドロフランに溶解させた。ロータリーエバポ
レーターを用いて、この脂質溶液からテトラハイドロフ
ランを除去し、脂質をフラスコ表面に付着させた。この
フラスコに、実施例１で得られたＮＦ−κＢデコイオリ
ゴヌクレオチド（０．７ｍｇ）を含む生理食塩水（ＢＳ
Ｓ；１３９ｍＭ ＮａＣｌ，５．４ｍＭ ＫＣｌ，１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．６）２００ｍｌに加
え、常法により、攪拌及び超音波処理し、ＮＦ−κＢの
デコイオリゴヌクレオチドを含むリポソーム懸濁液を調
製した。得られたリポソーム懸濁液（０．５ｍｌ，１０
ｍｇの脂質を含有）に、精製したセンダイウイルス（Ｚ
株：１００００ ｈｅｍａｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇ ｕ
ｎｉｔｓ）を使用する３分前にＵＶ照射（１１０ｅｒｇ
／ｍｍ2／ｓｅｃ）で不活化したものを混合し、ＢＳＳ
で合計４ｍｌとした。混合物を４℃で５分間保持した
後、３７℃で穏やかに３０分間振とうした。スクロース
密度勾配遠心により、リポソームに結合していないセン
ダイウイルスを除いた後、最上層を採取し、ＢＳＳで濃
度を調節し、８μＭのＮＦ−κＢデコイオリゴヌクレオ
チドが封入されたリポソーム製剤を得た。同様にＮＦ−
κＢデコイオリゴヌクレオチドの代わりに実施例１で得
られたスクランブルデコイオリゴヌクレオチドを用いて
製剤を得た。 【００４９】（実施例３：再灌流モデル実験） （１）実験方法 ９−１０週齢のＳＤラットをペントバルビタールナトリ
ウムで麻酔した後、気道に近接した左頸動脈にカニュー
レを挿入し心臓の大動脈弁の近傍（冠動脈の流入口の近
く）に留置した。さらに、気管にカニューレをほどこ
し、人工呼吸器につないで人工呼吸をおこなった。その
後、左胸部肋間を切開し、ラット心臓の左前下行枝を糸
で結紮し、虚血を作成した。３０分後、結紮した糸を切
り、再灌流を開始した後すぐに実施例２で作成したリポ
ソームに封入したＮＦ−κＢデコイヌクレオチドおよび
スクランブルデコイヌクレオチドを１．５ｍｌ／ラット
で冠動脈の流入口の近くに留置したカニューレにより投
与した。その後、閉胸し、気管も縫合し生存放置してお
く。２４時間後、ラットを再度麻酔し、心臓を取り出
し、生理食塩水で洗浄した後、ラット心室を６切片に切
断し、ＴＴＣ（塩化テトラゾリウム）染色を行った。６
切片の写真を取り、それぞれ画像解析を行った。なお、
梗塞領域は以下の式に従って算出した。 【００５０】梗塞率（％）＝６切片の梗塞面積の和／６
切片の面積の和×１００ なお、統計計算は多重間比較（Ａｎｏｖａ）にて実施し
た。 【００５１】（２）結果 結果を表１に示した。無処置群とスクランブルデコイ投
与群においては、両間にほぼ同程度の心筋梗塞の発生が
観察されたが、ＮＦ−κＢデコイヌクレオチド投与群で
はその発生が１９％と、無処置群並びにスクランブルデ
コイ投与群に比し梗塞が有意（Ｐ＜０．０１）に抑制さ
れていた。 【００５２】 【表１】 【００５３】なお、梗塞直前投与においても同様に抑制
効果が得られた。 【００５４】（実施例４：ガン転移の抑制） （１）実験方法 ７週令のＣ５７ＢＬ／６系雌性マウスに、マウス細網肉
腫Ｍ５０７６細胞１×１０4個を静脈内投与し、その２
４時間後に、実施例２と同様にして製造したＮＦ−κＢ
デコイヌクレオチド０．２ｍｌ（６ｎｍｏｌｅｓ）を静
脈内投与した。コントロール群には生理食塩水０．２ｍ
ｌを投与した。Ｍ５０７６の静脈内投与後１４日目に解
剖し、肝臓表面上の腫瘍結節数を実体顕微鏡下で計数し
た。一群当たり１０匹のマウスを用いた。統計学的解析
には、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓの検定及びＤｕｎ
ｎｅｔｔの多重比較検定を用いた。 【００５５】（２）結果 コントロール群の腫瘍結節数が、平均値１６６、中央値
１７３（１１６〜１９８）であったのに対しＮＦ−κＢ
デコイ投与群では、平均値２９、中央値２７（１９〜５
４）であり、ＮＦ−κＢデコイ投与群とコントロール群
との間には危険率１％以下で有意な差が認められた。 【００５６】（実施例５：悪液質の抑制） （１）実験方法 ７週令のＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウスに、マウス結腸ガン
Ｃｏｌｏｎ２６の２ｍｍ角の腫瘍片を皮下移植し、その
７日目からＮＦ−κＢデコイまたはスクランブルデコイ
各０．２ｍｌ（６ｎｍｏｌｅｓ）を腫瘍内に投与し、経
時的に体重及び腫瘍重量を計測した。また、１３日目に
解剖し、副睾丸脂肪及び腓腹筋を摘出し、その重量を測
定した。さらに、残ったすべての臓器及び腫瘍を除いた
カルカス湿重量を測定した。腫瘍重量は、各腫瘍の長径
及び短径より以下の式にて腫瘍重量を計算した。 【００５７】腫瘍重量（ｍｇ）＝長径×短径2／２ 一群当たり１０匹のマウスを用いた。統計学的解析に
は、一元配置分散分析及びＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検
定を用いた。 【００５８】（２）結果 担癌群においては腫瘍の増殖に伴い、体重、副睾丸脂肪
重量、腓腹筋重量及びカルカス湿重量の有意な減少が認
められた。ＮＦ−κＢデコイ投与群では、体重を４７
％、副睾丸脂肪重量を４２％、腓腹筋重量を６０％及び
カルカス湿重量を５２％改善させたが、スクランブルデ
コイ投与群では全く回復作用を示さなかった。腫瘍重量
には明らかな作用は認められなかった。 【００５９】 【発明の効果】ＮＦ−κＢが結合する核酸部位と特異的
に拮抗する化合物であるデコイを投与することによっ
て、転写調節因子ＮＦ−κＢに起因する疾患、例えば虚
血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、ガンの転移浸
潤、悪液質等の疾患の治療および予防し得る。 【００６０】 【配列表】 【００６１】 【化３】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 9/10 １０１ Ａ６１Ｐ 9/10 １０１
13/12 13/12
19/02 19/02
25/28 25/28
29/00 29/00
１０１ １０１
35/00 35/00
35/04 35/04
37/00 37/00
// Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
(72)発明者 森下 竜一
大阪府大阪市淀川区宮原２−11−22−502
(72)発明者 荻原 俊男
大阪府箕面市桜ヶ丘２−７−29
(72)発明者 杉本 聡子
京都府京都市北区小山南大野町33−４−
201
(72)発明者 前田 和宏
奈良県大和高田市東中１−７−38
(72)発明者 川村 郁夫
大阪府枚方市東中振２−９−１−715
(72)発明者 千葉 敏行
奈良県奈良市中辻町１−１−503
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA01 HA17
4C084 AA13 MA17 MA22 MA23 MA24
MA35 MA37 MA41 MA43 MA52
MA55 NA14 ZA361 ZA451
ZA751 ZA811 ZA961 ZB071
ZB111 ZB261 ZC411 ZC541
4C086 AA01 EA16 MA01 MA04 MA17
MA22 MA23 MA35 MA37 MA41
MA43 MA52 MA55 NA14 ZA36
ZA45 ZA75 ZA81 ZA96 ZB07
ZB11 ZB26 ZC41 ZC54
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 ＮＦ−κＢのデコイを含有するＮＦ−κ
Ｂに起因する疾患の治療および予防剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002263431A JP4159836B2 (ja) | 1995-05-12 | 2002-09-09 | ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11499095 | 1995-05-12 | ||
| JP7-114990 | 1995-05-12 | ||
| JP7-285504 | 1995-11-02 | ||
| JP28550495 | 1995-11-02 | ||
| JP2002263431A JP4159836B2 (ja) | 1995-05-12 | 2002-09-09 | ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53394796A Division JP3474879B2 (ja) | 1995-05-12 | 1996-05-10 | ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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| JP4159836B2 JP4159836B2 (ja) | 2008-10-01 |
Family
ID=27312869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4159836B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005314381A (ja) * | 2004-03-30 | 2005-11-10 | Anges Mg Inc | 増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤 |
| WO2007013696A1 (ja) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Torii Pharmaceutical Co., Ltd. | ６’－アミジノ－２’－ナフチル４－グアニジノベンゾエート又はその塩を含んでなる抗腫瘍剤 |
| WO2013024763A1 (ja) * | 2011-08-12 | 2013-02-21 | 独立行政法人理化学研究所 | 核酸アプタマーの作製方法 |
-
2002
- 2002-09-09 JP JP2002263431A patent/JP4159836B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005314381A (ja) * | 2004-03-30 | 2005-11-10 | Anges Mg Inc | 増殖性腎疾患の予防・治療・改善剤 |
| WO2007013696A1 (ja) | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Torii Pharmaceutical Co., Ltd. | ６’－アミジノ－２’－ナフチル４－グアニジノベンゾエート又はその塩を含んでなる抗腫瘍剤 |
| WO2013024763A1 (ja) * | 2011-08-12 | 2013-02-21 | 独立行政法人理化学研究所 | 核酸アプタマーの作製方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4159836B2 (ja) | 2008-10-01 |
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