JP2003052390A - 成長ホルモン及び成長ホルモン放出ホルモン組成物 - Google Patents

成長ホルモン及び成長ホルモン放出ホルモン組成物

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JP2003052390A JP2002171697A JP2002171697A JP2003052390A JP 2003052390 A JP2003052390 A JP 2003052390A JP 2002171697 A JP2002171697 A JP 2002171697A JP 2002171697 A JP2002171697 A JP 2002171697A JP 2003052390 A JP2003052390 A JP 2003052390A
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growth hormone
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hormone
growth
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アリ モルセイ モハマド
Michael George Sheppard
ジョージ シェパード マイケル
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 成長ホルモン及び／又は成長ホルモン放出ホ
ルモンを含む新規な組成物の提供。 【解決手段】 本発明は、動物に投与した場合に成長ホ
ルモンの放出及び上昇を促進する、成長ホルモン及び／
又は成長ホルモン放出ホルモンの方法及び組成物に関す
る。更に本発明は、成長ホルモン関連欠乏によって生じ
る疾患又は障害を治療するための、成長ホルモン及び／
又は成長ホルモン放出ホルモンの方法及び組成物に関す
る。更に本発明は、新規成長ホルモン放出ホルモン変異
の製造法及びその使用法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】緒言 本発明は、酵素分解に対する抵抗性が増強された、成長
ホルモン放出ホルモン(GHRH)の新規変形体、及びこのよ
うなGHRH変異をコードしているポリヌクレオチドに関す
る。本発明は、ヒト、ペット、家畜又は家禽に、GHRH又
はその変異体をコードしているポリヌクレオチドを含む
プラスミド組成物を、単独で、あるいは成長ホルモン又
は修飾された成長ホルモンをコードしているポリヌクレ
オチドと一緒に投与することを含む、成長ホルモン関連
欠乏症を治療するための方法及び治療組成物に関する。
【０００２】本発明は、更にGHRH変異、GHRH又は修飾さ
れたGHRH、及び／又はGH又は修飾されたGHをコードして
いるプラスミド組成物を投与することを含む、ペット、
家畜又は家禽の成長及び機能を増強するために成長ホル
モンの放出及び発現を促進する方法及び組成物に関す
る。
【０００３】ある実施態様において、本発明のGHRH変異
は、GHRHのアミノ末端（１位）への１個のアミノ酸、好
ましくは疎水性残基及びより好ましくはチロシン残基の
付加を含む。別の実施態様において、GHRH変異は、GHRH
のアミノ末端（１位）への２個のアミノ酸の付加を含
み、ここで第二のアミノ酸はプロリン又はアラニンでは
ない。別の実施態様において、GHRH変異は、GHRHのアミ
ノ末端（１位）への３個のアミノ酸の付加を含み、ここ
で第二のアミノ酸はプロリンまたはアラニンではない。
【０００４】GHRHペプチドは、ヒト、ブタ、ヒツジ及び
ウシを含むいくつかの種から単離され特徴付けられてい
る。これらの種の各GHRHは、44個のアミノ酸からなる小
さいポリペプチドである(GHRH(1-44)-NH2)。しかし、最
初の( アミノ末端)29 個のアミノ酸からなるより小さい
断片で最も注目すべきもの（GHRH1-29断片と称する）
が、完全な長さの親分子と同じ固有の生体活性を保持し
ていることが示されている。
【０００５】GHRHは、種によって決まる107 又は108 個
のアミノ酸からなる前駆体ポリペプチドとして合成され
る。合成後、前駆体GHRHポリペプチドは逐次的処理を受
ける。最初にGHRH前駆体ポリペプチドの31個のアミノ酸
シグナルペプチド(Met-30 からArg0) が切断される(Smi
thら、Biotechnology 、10:315-319(1992)) 。その後GH
RH前駆体ポリペプチドは、46-47 位及び45-46 位で、そ
れぞれ、トリプシン様エンドペプチダーゼ及びカルボキ
シペプチダーゼにより切断され、GHRH(1-45)-OH 及びGC
TP で消化された30個のアミノ酸ペプチド( アミノ酸77
-107) を生成する(Brar, A.K. ら、Endocrinology 、12
9:3274-3280(1991))。
【０００６】更にGHRH(1-45)-OH ポリペプチドは、ペプ
チジルグリシンα−アミド化モノオキシゲナーゼ( “PA
M ”) によって処理され、これによりアミド基がGly45
からLeu44 へと転移し、完全な長さのGHRHであるGHRH(1
-44)-NH2を生成する(Brar, A.K. ら、Endocrinology 、
129:3274-3280(1991))。更にGCTPも、PAM による処理を
受け、これによりアミド基のGly77 からGln76 への転移
が生じる。GH放出誘導に関して、GHRH(1-44)-NH2の役割
はよく確立されているが、GCTPペプチドの役割はあまり
明確ではない。ある論文は、食餌行動の制御にGCTPペプ
チドを関連付けている(Arase, K.ら、Endocrinology 、
121:1960-1965(1982))。
【０００７】GHは同定され、かつその遺伝子は、ヒト、
ブタ、ウシ及びウマを含む多くの種からクローニングさ
れている。GHRHとは異なり、特定の種ではGHに天然の変
異が存在する。例えばウシGHは、互いに1 個以上のアミ
ノ酸が異なる4 種の変異体のうちのひとつが下垂体から
放出され、かついくつかの研究は、これらの変異の効力
が（例えば、それらのミルク生産能について）異なるこ
とを示している。いくつかの研究は、更にGHのその受容
体への親和性の増大及び／又は酵素分解に対する増加さ
れた安定性につながるアミノ酸置換を確認している。
【０００８】研究は更に、GHからの特定のペプチド（例
えば、GHのアミノ酸35−53からなるペプチド）に対する
免疫処置が、成長ホルモンに結合しかつGH治療効果を高
める抗体の産生をもたらし、この抗体は恐らく循環から
のGHのクリアランスを遅延し、その結果GH半減期が延長
し、そして／又はタンパク質分解からGHを保護するから
であろうということを示している(Bomford, F.及びAsto
n, P. 、Endocrinology 、125:31-38(1990))。
【０００９】多くの研究努力は、GH及びGHRHの構造特
性、更にはそれらの生体活性及び発育活性に焦点を当て
ている。多くのグループが、ヒト及び動物においてGH及
びGHRHを使用して、重要な治療及び経済上の恩典を提供
することができるような方法の探求を試みている。例え
ばGH- 欠乏児の従来の治療では、ヒト下垂体から単離さ
れた成長ホルモンが投与されるが、しかしこれらの調製
物は、米国においては検体のウイルス汚染のために最早
利用することができない(Vance, Clin. Chem 、36/3:4
15-420(1990)) 。
【００１０】組換えにより発現されかつ精製されたGH
は、GH- 欠乏児の治療において何らかの恩典があること
が示されてはいるが、GH- 欠乏児の治療における組換え
発現されたGH及びGHRHの併用は矛盾する結果も提供して
いる(Vance, 前記) 。更に精製されたGH及びGHRHは、こ
れらのポリペプチドが血清へ曝露されるとかなり異なる
生物学的特性及び医薬特性を示すポリペプチドへ迅速に
分解されるので、有効であるためには非常に多量が投与
されなければならない(Fronmanら、J. Clin. Invest.、
83:1533-1540(1989)) 。
【００１１】別の研究は、精製されたポリペプチドとし
て投与されたGH又はGHRHが、動物の発育（筋肉及び骨の
成長）、平均日増加、ミルクの生産、飼料効率（体重増
加に対する消費された飼料の比）、脂肪組織の蓄積など
において顕著な影響を有することを示している。例え
ば、33〜77日目の成長期のブタに投与されたGHの有効最
高日用量は、平均日増加を-10 〜20％増加し、飼料効率
を13〜33％促進し、脂肪組織の蓄積を70％も減少し、か
つタンパク質付着（筋肉の成長）を62％も刺激すること
が示されている(Etherton ら、Physiological Reviews
、78:745-761(1998)) 。更にGHが乳牛に投与された場
合には、ミルク生産高が10〜15％増加した（□4 〜6kg/
日）(Etherton ら、Physiological Reviews 、78:745-7
61(1998)) 。
【００１２】GHRHペプチドの治療及び経済上の可能性を
満たすための大きい障害は、それらが、特定の組織及び
血漿のタンパク質分解酵素；最も注目されるのはジペプ
チジルペプチダーゼIV( “DPPIV ”) により、切断（及
びその後不活性型へ転換）を受けやすいことである。多
くの研究者が、著しい治療上の可能性のある化合物を開
発するためにGHRHを操作することに集中している。
【００１３】その結果、様々な合成GHRHペプチドアナロ
グが作出されている。これらは１個以上のアミノ酸が化
学的に修飾されたか、または、他のL-もしくはD-アミノ
酸と置換されたようなGHRHポリペプチドからなる。これ
らの修飾または置換は、効力、安定性、並びに化学的及
び酵素的分解に対する抵抗性の点で、親分子よりも優れ
た生物学的特性を有するアナログを得るように設計され
ている。しかし、これらの化学的に修飾されたポリペプ
チドは、ヒト又は動物への投与に適した形では容易かつ
効果的には生成されない。
【００１４】前述のようにGH又はGHRHには重要な治療及
び経済上の恩典があるにもかかわらず、GH又はGHRHタン
パク質の動物への外からの補充は、動物の肉の品質を向
上し及び／又は家畜の繁殖を増強するための日常的な管
理手順の一部としては広くは受け入れられていない。そ
の理由は、これらの恩典を得るためには、動物にGH又は
GHRHポリペプチドを反復投与しなければならないことで
ある（多くは毎日であるが、典型的には7 〜10日毎に投
与される徐放性製剤として）(Etherton, T.D.、Nature
Biotechnology、15:1248(1997))。
【００１５】この状況は労働集約的であり、時間と費用
がかかり、かつ動物が多数飼育され、かつほとんど手入
れされないような現在の管理法には合致せず、従ってGH
及び／又はGHRH投与の治療及び経済上の恩典を実現する
ためには、これらのホルモンを供給するための非常に改
良された製剤が、それらの使用に際しての現時点の欠
点；すなわち反復投与の必要性を克服するために開発さ
れなければならない。
【００１６】発明の概要 本発明は、酵素分解に対する抵抗性が増強された新規の
GHRH変異、及び該変異をコードしているポリヌクレオチ
ドに関する。本発明は更に、GHRH変異をコードしている
ポリヌクレオチド配列を、単独で、又はGHRH、修飾され
たGHRH、GH及び／又は修飾されたGHをコードしているポ
リヌクレオチド配列と共に含有する医薬製剤に関する。
【００１７】本発明は更に、GHRH変異ペプチドを、単独
で、又はGHRHポリペプチド、修飾されたGHRHポリペプチ
ド、GHポリペプチド及び／又は修飾されたGHポリペプチ
ドと共に含む医薬製剤に関する。本発明は更に、イヌ又
はネコのGHRHペプチドを、単独で、又はGHRH変異ポリペ
プチド、修飾されたGHRHポリペプチド、GHポリペプチド
及び／又は修飾されたGHポリペプチドと共に含む医薬組
成物に関する。
【００１８】本発明は、更にヒト、ペット、家畜及び家
禽の成長ホルモン( “GH”) 及び／又は成長ホルモン放
出ホルモン( “GHRH”) を含む成長ホルモン関連欠乏症
を治療するための治療法および組成物に関する。本発明
は更に、ヒト、ペット、家畜及び家禽の健康を増進する
ための方法に関する。更に本発明は、ペットの肥満及び
虚弱性を治療する方法に関する。本発明は更に、ペッ
ト、家畜および家禽の生育及び機能を増強する方法に関
する。
【００１９】本発明の方法は、ヒト、ペット、家畜又は
家禽に投与した場合に、成長ホルモンの発現を増強する
かもしくは成長ホルモンの放出を促進するか、もしくは
これら両方の働きをする医薬組成物を含む。
【００２０】本発明において、用語“GHRH”は、44個の
アミノ酸(aa)である完全な長さの野生型GHRH又はGHRH
前駆体を意味する。本発明において、用語“修飾された
GHRH”は、長さが29個のアミノ酸から107 又は108 個の
アミノ酸の長さを有するGHRHアミノ末端ポリペプチド断
片のいずれか、並びにヌクレオチド又はアミノ酸レベル
での付加、欠失又は置換を含み、これが少なくとも野生
型GHRHの活性レベル、すなわち、野生型GHRHと同等レベ
ルでGH遺伝子転写を誘発する能力を保持しているような
GHRH変異体を意味する。
【００２１】本発明において、用語“GHRH変異体”は、
１個以上のアミノ酸が該ポリペプチドのカルボキシ末端
又はアミノ末端に結合しているGHRHポリペプチド、又は
１個以上のアミノ酸の置換を含む野生型GHRHポリペプチ
ドを意味し、そのためGHRH変異体は、野生型GHRHと少な
くとも同等又は増強された活性を保持し、かつ野生型GH
RHと比べて酵素分解に対する増強された抵抗性を有す
る。本発明における野生型GHRH活性は、それがGH遺伝子
転写を誘発する能力によって測定される。本発明におけ
る酵素分解に対する抵抗性は、ジペプチジルペプチダー
ゼIV型によって引き起こされた分解に抵抗するポリペプ
チドの能力によって測定される。
【００２２】本発明において、用語“GH”は、191 個の
アミノ酸である完全な長さの野生型GHを意味し、そして
用語“修飾されたGH”は、GHの断片、及びヌクレオチド
又はアミノ酸レベルでの付加、欠失又は置換を含む変異
体を意味し、これは、少なくとも野生型のGH活性レベ
ル、すなわち、インスリン様増殖因子(IGF) 遺伝子の転
写を野生型GHと同程度のレベルで誘発するか、またはGH
の抗脂肪分解及び脂質分解の作用を模倣する能力を有す
る。
【００２３】発明の具体的な説明 本発明は、酵素分解に対する増強された抵抗性を有する
GHRHの新規変異体、及びこのGHRH変異体をコードしてい
るポリヌクレオチドに関する。本発明は、GHの放出及び
／又は発現を促進する医薬組成物に関する。特に本発明
の医薬組成物は、GHRH変異体をコードしているポリヌク
レオチド配列を単独で、又はGHRH、修飾されたGHRH、GH
及び／又は修飾されたGHをコードしているポリヌクレオ
チド配列、又はそれらの組合せと共に含有する医薬組成
物に関する。別の実施態様において、本発明の医薬組成
物は、GHRH変異体ポリペプチドを単独で、又はGHRHポリ
ペプチド、GHRH修飾されたポリペプチド、GHポリペプチ
ドもしくはGH修飾されたポリペプチド、又はそれらのい
ずれかの組合せて含む。
【００２４】本発明は、GH発現及び／又は放出を増強す
る医薬製剤を投与することを含む、ヒト、ペット、家畜
及び家禽においてGH関連欠乏症に関連した障害を治療す
る方法に関する。本発明は更に、GH発現及び／又は放出
を増強する医薬製剤を投与することを含む、成長及び機
能を増強するために家畜及び家禽を処置する方法に関す
る。
【００２５】本発明の方法において投与される医薬製剤
は、(a) GHRH変異体をコードしているポリヌクレオチド
配列；(b) GHRH又は修飾されたGHRHをコードしているポ
リヌクレオチド配列；(c) GH又は修飾されたGHをコード
しているポリヌクレオチド配列；あるいはそれらのいず
れかの組合せを含有し、ここでこれらのポリヌクレオチ
ド配列はプロモーター又は調節エレメントに機能的に結
合されており、かつ好ましくは筋肉組織において転写活
性があるようなプラスミド組成物を包含している。
【００２６】本発明の方法に従って投与される医薬製剤
は、以下のものを含む：(i) GH又は修飾されたもしくは
変異GHRHの遺伝子をコードしているポリヌクレオチドを
含むプラスミド組成物；(ii) GH 及びGHRH遺伝子の両方
をコードしているポリヌクレオチドを含むプラスミド組
成物；(iii)GHRH 遺伝子、GH遺伝子、又はGH由来のペプ
チドとGHの効力を増強する抗体誘導のためのキャリヤタ
ンパク質からなる融合タンパク質をコードしている遺伝
子、をコードしているポリヌクレオチドを含むプラスミ
ド組成物；(iv) イヌのGHRH又はネコのGHRHを含む組換
えタンパク質、そのペプチド、断片又は誘導体；(v) 本
発明のGHRH変異体の組換えタンパク質、そのペプチド、
断片又は誘導体；並びに(vi) GH 及びGHRHを含む組換え
融合タンパク質、そのペプチド、断片又は誘導体。
【００２７】ある実施態様において、本発明の医薬組成
物は、イヌ又はネコのGHRHをコードしているポリヌクレ
オチド配列を単独で、あるいはGHRH変異体、修飾された
GHRH、GH及び／又は修飾されたGHをコードしているポリ
ヌクレオチド配列またはそれらの組合せと共に含有す
る。別の実施態様において、本発明の医薬組成物は、イ
ヌ又はネコのGHRHポリペプチドを単独で、又はGHRH変異
ポリペプチド、修飾されたGHRHポリペプチド、GHポリペ
プチドもしくはGH修飾されたポリペプチド又はそれらの
組合せと共に含む。
【００２８】本発明の医薬組成物は、成長ホルモン関連
欠乏症の治療、または家畜及び家禽の成長及び機能の増
強のために、ヒト、ペット、家畜又は家禽に投与するの
に適した製剤である。本発明の医薬組成物は、更にペッ
トの肥満及び虚弱性を治療し、かつヒト、ペット、家畜
及び家禽の健康を改善するのに適した製剤でもある。
【００２９】本発明は、成長ホルモン( “GH”) ；修飾
されたGH；成長ホルモン放出ホルモン( “GHRH”) ；GH
RH 変異体；修飾されたGHRH又はそのいずれかの組合せ
を含む、成長ホルモン関連欠乏症を治療するための治療
法及び組成物に関する。本発明の治療用組成物は、動
物、好ましくは哺乳類、より好ましくはペット（例えば
イヌ、ネコ及びウマ）、家畜（例えばウシ及びブタ）並
びに家禽（例えばニワトリ及び七面鳥）、及び最も好ま
しくはヒトに投与される。
【００３０】本発明は更に、組成物がマウス、ラット、
げっ歯類、モルモット又はウサギには投与されないとい
う条件で、動物、より好ましくは哺乳類、並びに最も好
ましくは家畜（例えばウシ及びブタ）及び家禽（例えば
ニワトリ及び七面鳥）の成長及び機能を増強する方法及
び組成物に関する。本発明は更に、動物、好ましくは哺
乳類、より好ましくはペット（例えばイヌ、ネコ及びウ
マ）の肥満及び虚弱性の治療のための方法及び組成物に
関する。
【００３１】本発明は更に、動物、好ましくは哺乳類、
より好ましくはペット（例えばイヌ、ネコ及びウマ）、
家畜（例えばウシ及びブタ）並びに家禽（例えばニワト
リ及び七面鳥）、並びに最も好ましくはヒトの健康を増
進する方法及び組成物に関する。
【００３２】本発明は、少なくとも野生型GHRHと同レベ
ルの活性を有する、すなわち野生型GHRHと同レベルのGH
遺伝子転写を誘発する能力を保持し、かつ野生型GHRHと
比べて増強された酵素分解抵抗性を有するような組換え
操作されたGHRH変異体の発見を一部ベースとしている。
本発明のGHRH変異体は、宿主細胞において高レベルで組
換え発現され、そしてヒト及び動物への投与に適した形
状に容易に単離精製され得る。従って本発明のGHRH変異
体は、天然のGHRH配列に修飾を誘導するための従来の化
学的方法を用いて修飾された当該技術分野における修飾
されたGHRHポリペプチドに対して高レベルで効率的に作
出しかつ単離することができる。
【００３３】ある実施態様において、本発明のGHRH変異
は、GHRHのアミノ末端（１位）への１個のアミノ酸、好
ましくは疎水性残基及びより好ましくはチロシン残基の
付加を含む。別の実施態様において、GHRH変異は、GHRH
のアミノ末端（１位）への２個のアミノ酸の付加を含
み、ここで第二のアミノ酸はプロリン又はアラニンでは
ない。別の実施態様において、GHRH変異は、GHRHのアミ
ノ末端（１位）への３個のアミノ酸の付加を含み、ここ
で第二のアミノ酸はプロリンまたはアラニンである。
【００３４】別の実施態様において、GHRH変異は、GHRH
のアミノ末端（１位）への３個より多くのアミノ酸の付
加を含み、ここでこの付加は、GHRHの機能活性、すなわ
ちGHRHがGH遺伝子転写を誘発する能力を妨害しない。本
発明の好ましい実施態様において、GHRH変異は、アミノ
末端へのトリペプチドの付加を含み、ここでこのトリペ
プチドは、ジプロチン(diprotin)A もしくはジプロチン
B 、又はジプロチンAもしくはジプロチンB と構造の類
似性を伴うペプチドである。更に別の実施態様におい
て、GHRH変異は、カルボキシ末端へのグリシン及びアル
ギニンの付加を含む。この付加は、GHRHのアミド化を生
じさせる。すなわち、グリシン及びアルギニンを切断
し、グリシン付加の前に、直前のアミノ酸をアミド化す
る。
【００３５】ある実施態様において、GHRH変異は、前述
のいずれかのアミノ酸付加、及び残基15位のグリシンの
アラニンによる置換を含む。別の実施態様において、GH
RH変異は、前述のいずれかのアミノ酸付加、及び残基22
位のロイシンのアラニンによる置換を含む。別の実施態
様において、GHRH変異は、前述のいずれかのアミノ酸付
加、並びに残基15位のグリシンのアラニンによる、及び
残基22位のロイシンのアラニンによる置換を含む。別の
実施態様において、GHRH変異は、アミノ末端でのアミノ
酸付加、並びにカルボキシ末端でのアミノ酸付加を含
む。
【００３６】他の実施態様において、GHRH変異は、前述
のアミノ末端でのアミノ酸付加、前述のカルボキシ末端
でのアミノ酸の付加、並びに残基15位のグリシンのアラ
ニンによる置換を含む。別の実施態様において、GHRH変
異は、前述のアミノ末端でのアミノ酸付加、前述のカル
ボキシ末端でのアミノ酸の付加、並びに残基22位のロイ
シンのアラニンによる置換を含む。更に別の実施態様に
おいて、GHRH変異は、前述のアミノ末端でのアミノ酸付
加、前述のカルボキシ末端でのアミノ酸の付加、残基15
位のグリシンのアラニンによる置換、及び残基22位のロ
イシンのアラニンによる置換を含む。
【００３７】本願明細書において使用される用語“GHRH
前駆体変異体”は、１個以上のアミノ酸が該ポリペプチ
ドのアミノ末端に結合し、及び／又は、１個以上のアミ
ノ酸の置換を含むような、完全な長さの野生型GHRHポリ
ペプチドの前駆体型を意味し、その結果このGHRH前駆体
変異は、少なくとも野生型GHRH活性と同等の又は増強さ
れた活性を有し、かつ野生型GHRHと比べて増強された酵
素分解抵抗性を有する。
【００３８】ある本発明の実施態様において、GHRH前駆
体変異は、前述のアミノ酸付加及び／又はアミノ酸置換
を含む。本発明は更に、前述のGHRH変異及びGH又は修飾
されたGHのいずれかを含む融合変異体も包含している。
本願明細書において使用される用語“融合変異体”は、
GHRH変異体又は修飾されたGHRHとGH又は修飾されたGHと
を含む融合タンパク質を意味する。ある本発明の実施態
様において、融合変異体は、前述のアミノ末端でのアミ
ノ酸付加及び／又はアミノ酸置換、及びGH又は修飾され
たGHからなるGHRH変異のいずれかを含む。
【００３９】本願明細書に記されるGHRHの修飾及び／又
は置換は、完全な長さの野生型GHRHと少なくとも同等の
生体活性を保持するGHRHポリペプチド、好ましくはGHRH
前駆体型、より好ましくは約29個のアミノ酸から約44個
のアミノ酸からなるGHRH配列を作出する。本願明細書に
記されたGHRH変異体をコードしているポリヌクレオチド
配列も、本発明の範囲内である。
【００４０】本発明は、これらのポリペプチドが、本発
明の核酸断片により、または本発明の核酸断片の縮重変
異によりコードされていることを提供する。“縮重変
異”は、ヌクレオチド配列が本発明の核酸断片とは異な
る（例えばORF ）が、しかし遺伝暗号の縮重のために、
同じポリペプチド配列をコードしているヌクレオチド断
片が意図されている。本発明の好ましい核酸断片は、タ
ンパク質をコードしているORF である。本発明は、いず
れかの種のポリヌクレオチド配列によってコードされた
GHRH 変異を包含している。
【００４１】本発明は、いずれかの種のGHRH前駆体型、
完全な長さの野生型GHRH、修飾されたGHRH、GHRH変異
体、及び長さが29個のアミノ酸から44個のアミノ酸まで
のGHRH断片、をコードしているポリヌクレオチド配列を
包含している。例えば、ヒト、ブタ及びウシの成長ホル
モン放出ホルモンをコードしているポリヌクレオチド配
列は、それぞれ、Genbank 寄託番号SEG ＿HSGHRH、寄託
番号U90275、及び寄託番号U29611で公開されており、こ
れらは参照として本願明細書に組入れられている。
【００４２】本発明は更に、いずれかの種の開示された
GHRHポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド配
列を包含している（例えばGenbank 寄託番号P01286で開
示されたヒトGHRH前駆体ポリペプチドをコードしている
ポリヌクレオチド配列は、参照として本願明細書に組入
れられている。）。本発明は更に、いずれかの種の完全
な長さの野生型GH又は修飾されたGHをコードしているポ
リヌクレオチド配列を包含している。
【００４３】例えば、ヒト、ブタ及びウシの成長ホルモ
ンをコードしているポリヌクレオチド配列は、それぞ
れ、Genbank 寄託番号J03071、寄託番号U19787、及び寄
託番号E00293で明らかにされ、これらは参照として本願
明細書に組入れられている。本発明は更に、いずれかの
種の開示されたGHポリペプチドをコードしているポリヌ
クレオチド配列も包含している（例えば、Genbank 寄託
番号STBOに記されたウシGHポリペプチドをコードしてい
るポリヌクレオチド配列は、参照として本願明細書中に
組入れられている。）。
【００４４】GHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異体をコ
ードしているポリヌクレオチド配列は、適当な発現ベク
ター、すなわち、挿入されたタンパク質−コード配列の
転写及び翻訳に必須のエレメントを含むベクターへと挿
入することができる。GH又は修飾されたGHをコードして
いるポリヌクレオチド配列は、適当な発現ベクター、す
なわち、挿入されたタンパク質−コード配列の転写及び
翻訳に必須エレメントを含むベクターへと挿入すること
ができる。必要な転写及び翻訳のシグナルも、同じく、
天然のGH遺伝子もしくは天然のGHRH遺伝子、又はそのフ
ランキング領域によって提供され得る。
【００４５】様々な宿主−ベクター系を、タンパク質−
コード配列を発現するために利用することができる。こ
れらはウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、アデノ
ウイルスなど）に感染される哺乳類細胞系；ウイルス
（例えば、バキュロウイルス）に感染される昆虫細胞
系；酵母ベクターを含む酵母のような微生物、又はバク
テリオファージ、DNA 、プラスミドDNA 、又はコスミド
DNA により形質転換される細菌を含むが、これらに限定
されるものではない。
【００４６】ベクターの発現エレメントは、それらの強
度及び特異性に応じて変動する。利用される宿主−ベク
ター系に応じて、多くの適当な転写及び翻訳エレメント
のいずれかひとつを用いることができる。ある実施態様
において、野生型又は修飾されたヒトGH遺伝子が発現さ
れる。別の実施態様においては、野生型、修飾された又
は変異ヒトGHRHが発現される。更に別の実施態様におい
ては、野生型又は修飾されたヒトGH及び野生型、修飾さ
れたもしくは変異ヒトGHRH遺伝子が発現される。
【００４７】DNA 断片のベクターへの挿入に関する既報
の方法のいずれかを、適当な転写及び翻訳の制御シグナ
ル並びにタンパク質コード配列からなり、GH又は修飾さ
れたGH及びGHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異体を含む
キメラ遺伝子を含む発現ベクターを構築するために用い
ることができる。これらの方法は、in vitro組換えDNA
及び合成法、並びにin vivo 組換え（遺伝子組換え）を
含むことができる。GH又は修飾されたGHをコードしてい
る核酸配列の発現は、第二の核酸配列によって調節する
ことができ、その結果GH又は修飾されたGHが、この組換
えDNA 分子により形質転換された宿主において発現され
る。
【００４８】GHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異体をコ
ードしている核酸配列の発現は、第二の核酸配列によっ
て調節され、その結果GHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変
異体が、この組換えDNA 分子により形質転換された宿主
において発現される。例えば、GH又はGHRHの発現は、当
該技術分野において公知のいずれかのプロモーター又は
エンハンサーエレメントによって制御することができ
る。
【００４９】GH及び／又はGHRH遺伝子発現を制御するた
めに使用されるプロモーターは以下を含むが、これらに
限定されるものではない：サイトメガロウイルス(CMV)
前初期プロモーター領域、SV40初期プロモーター領域
（Bernoist及びChambon 、Nature、290:304-310(1981)
）、ラウス肉腫ウイルスの3'長末端反復配列に含まれ
たプロモーター（Yamamotoら、Cell、22:787-797(198
0)）、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Wagner
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、78:1441-1445(198
1)）、メタロチオネイン遺伝子調節配列（Brinsterら、
Nature、296:39-42(1982) ）；
【００５０】真核細胞発現ベクター、例えばβ−ラクタ
マーゼプロモーター（Villa-Kamaroffら、Proc. Natl.
Acad. Sci. USA、75:3727-3731(1978)）、又はtac プロ
モーター（DeBoerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、8
0:21-25(1983)）；更にScientific American 、242:74-
94(1980) の「組換え細菌由来の有用なタンパク質(Usef
ul Proteins from recombinant bacteria) 」も参照の
こと；ノパリンシンターゼプロモーター領域を含む植物
の発現ベクター（Herrera-Estrellaら、Nature、303:20
9-213 ）又はカリフラワーモザイクウイルス35S RNAプ
ロモーター（Gardner ら、Nucl. Acids Res.、9:2871(1
981)）、及び光合成酵素リブロースビスリン酸カルボキ
シラーゼのプロモーター（Herrera-Estrellaら、Natur
e、310:115-120(1984) ）；
【００５１】酵母又は他の真菌由来のプロモーターエレ
メント、例えばGal4プロモーター、ADC （アルコールデ
ヒドロゲナーゼ）プロモーター、PGK （ホスホグリセロ
ールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼ
プロモーター、並びに以下の動物の転写制御領域で、組
織特異性を示し、かつトランスジェニック動物において
使用されるもの：膵腺房細胞において活性を示すエラス
ターゼI 遺伝子制御領域（Swift ら、Cell、38:639-646
(1984)；Ornitzら、Cold Spring Harbor Symp.Quant. B
iol. 、50:399-409(1986)；MacDonald 、Hepatology、
7:425-515(1987) ）；
【００５２】膵β細胞において活性を示すインスリン遺
伝子制御領域（Hanahan 、Nature、315:115-122(1985)
）、リンパ系細胞において活性があるイムノグロブリ
ン遺伝子制御領域（Grosschedlら、Cell、38:647-658(1
984)；Adamesら、Nature、318:533-538(1985) ；Alexan
der ら、Mol. Cell. Biol.、7:1436-1444(1987) ）、精
巣、乳房、リンパ系、マスト細胞において活性があるマ
ウス乳腺癌ウイルス制御領域（Leder ら、Cell、45:485
-495(1986)）、肝において活性があるアルブミン遺伝子
制御領域（Pinkert ら、Genes and Devel.、1:268-276
(1987) ）、肝において活性があるα−胎児性タンパク
質遺伝子制御領域（Krumlaufら、Mol. Cell.Biol.、5:1
639-1648(1985) ；Hammerら、Science 、235:53-58(198
7) ）；
【００５３】肝において活性があるα1-アンチトリプシ
ン遺伝子制御領域（Kelseyら、Genes and Devel.、1:16
1-171(1987) ）、骨髄細胞において活性があるβ−グロ
ブリン遺伝子制御領域（Mogramら、Nature、315:338-34
0(1985) ；Kollias ら、Cell、46:89-94(1986)）；脳の
乏突起膠細胞において活性があるミエリン塩基性タンパ
ク質遺伝子制御領域領域（Readheadら、Cell、48:703-7
12(1987)）；
【００５４】骨格筋において活性があるミオシンL 鎖-2
遺伝子制御領域（Sani、Nature、314:283-286(1985)
）、筋肉で活性があるブタα−骨格筋アクチン制御領
域（Reecy, M. ら、Animal Biotechnology、9:101-120
(1998) ）、及び視床下部で活性がある性腺刺激ホルモ
ン放出ホルモン遺伝子制御領域（Mason ら、Science 、
234:1372-1378(1986) ）である。
【００５５】特定の実施態様においては、GH- 又は修飾
されたGH- をコードする核酸に機能的に結合されたプロ
モーター、１個以上の複製起点、及び任意に１個以上の
選択マーカー（例えば抗生物質耐性遺伝子）を含むベク
ターが使用される。別の実施態様において、GHRH、修飾
されたGHRH又はGHRH変異体をコードしている核酸に機能
的に結合されたプロモーター、１個以上の複製起点、及
び任意に１個以上の選択マーカー（例えば抗生物質耐性
遺伝子）を含むベクターが使用される。更に別の実施態
様において、GH又は修飾されたGHとGHRH、修飾されたGH
RH又はGHRH変異体とをコードしている核酸に機能的に結
合されたプロモーター、１個以上の複製起点、及び任意
に１個以上の選択マーカー（例えば抗生物質耐性遺伝
子）を含むベクターが使用される。
【００５６】遺伝子挿入物を含む発現ベクターは、３種
の一般的方法により同定することができる：(a) 核酸ハ
イブリダイゼーション、(b) “マーカー”遺伝子機能の
有無、及び(c) 挿入された配列の発現。第一の方法にお
いて、発現ベクター（又は複数）に挿入されたGH又は修
飾されたGHをコードしているポリヌクレオチド及びGHR
H、修飾されたGHRH又はGHRH変異をコードしているポリ
ヌクレオチドの存在は、挿入された遺伝子と相同の配列
を含むプローブを使用する核酸ハイブリダイゼーション
により検出することができる。
【００５７】第二の方法において、組換えベクター／宿
主系は、ベクター（又は複数）への遺伝子（又は複数）
挿入により引き起こされた特定の“マーカー”遺伝子の
機能（例えばチミジンキナーゼ活性、抗生物質耐性、形
質転換表現型、バキュロウイルスにおける封入体の形成
など）の有無を基に同定しかつ選択することができる。
例えばGH遺伝子がベクターのマーカー遺伝子配列内に挿
入される場合は、GH遺伝子挿入物を含む組換え体は、マ
ーカー遺伝子機能が存在しないことにより同定すること
ができる。
【００５８】第三の方法において、組換え発現ベクター
は、組換え体により発現された遺伝子産物をアッセイす
ることにより同定することができる。このようなアッセ
イは、例えばGHの抗-GH 抗体との結合、又はGHRHの抗-G
HRH 抗体との結合のような、in vitroアッセイシステム
におけるGH及びGHRHの生理的又は機能的特性などを基に
することができる。
【００５９】一旦、特定の組換えDNA 分子が同定されか
つ単離されたならば、いくつかの当該技術分野において
公知の方法を用いて増殖することができる。一旦、適当
な宿主システム及び増殖条件が確立されたならば、組換
え発現ベクターを増やし、多量に調製することができ
る。前述のように、使用することができる発現ベクター
は、以下のベクター又はそれらの誘導体を含むが、これ
らに限定されるものではない：ほんの２、３例を挙げる
と、ヒト又は動物のウイルス、例えばワクシニアウイル
ス又はアデノウイルス；昆虫のウイルス、例えばバキュ
ロウイルス；酵母ベクター；バクテリオファージベクタ
ー（例えばラムダ）、並びにプラスミド及びコスミドDN
A ベクターがある。
【００６０】加えて、挿入された配列の発現を変調する
か、あるいは、所望の特異的形で遺伝子産物を修飾しか
つプロセシングする宿主細胞株を選択することができ
る。特定のプロモーターからの発現を、特定のインデュ
ーサの存在下で上昇することができ；従って遺伝子操作
された発現が制御される。更に異なる宿主細胞は、翻訳
及び翻訳後プロセシング並びに修飾について特徴的かつ
特異的機能を有する（例えば、タンパク質のグリコシル
化、リン酸化）。
【００６１】適当な細胞株又は宿主系は、発現された外
来タンパク質の所望の修飾及びプロセシングを確実にす
るために選択することができる。例えば、細菌システム
における発現を用いて、グリコシル化されないコアタン
パク質産物を生成することができる。酵母での発現は、
グリコシル化された産物を産生するであろう。哺乳類細
胞での発現を用いて、異種タンパク質の“本来の”グリ
コシル化を確実にすることができる。更に様々なベクタ
ー／宿主発現システムを、様々な程度にプロセッシング
反応することができる。
【００６２】組換えタンパク質の長期にわたる高収率の
産生ためには、安定した発現が好ましい。例えば、異な
って発現されるかもしくは経路づけられた(pathway) 遺
伝子タンパク質を安定して発現する細胞株を操作するこ
とができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを
使用するよりむしろ、宿主細胞を、適当な発現制御エレ
メント（例えばプロモーター、エンハンサー、配列、転
写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）並びに選
択マーカーで制御されたDNA で形質転換することができ
る。
【００６３】外来DNA の導入後、操作された細胞を栄養
強化培地において1 〜2 日間増殖し、その後選択培地に
移した。組換えプラスミドの選択マーカーは、選択に対
する抵抗性をもたらし、かつ細胞に安定してプラスミド
をその染色体へと組込ませ、かつ細胞増殖体(foci)を形
成し、これは次にクローン化され細胞株へと増大され
る。この方法は、異なるように発現されるかもしくは経
路付けられた遺伝子タンパク質を発現する細胞株を操作
するために有利に使用することができる。このような操
作された細胞株は、特に異なるように発現されるかもし
くは経路付けられた遺伝子タンパク質の内因性の活性に
影響を及ぼす化合物のスクリーニング及び評価において
有用である。
【００６４】多くの選択系を使用することができ、これ
は以下を含むが、これらに限定されるものではない：単
純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wiglerら、Cel
l、11:223(1977)）、ヒポキサンチングアニンホスホリ
ボシルトランスフェラーゼ（Szybalska 及びSzybalski
、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、48:2026(1962) ）、
及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Lowy
ら、Cell、22:817(1980)）遺伝子を、各々、tk- 、hgpr
t-又はaprt- 細胞において使用することができる。
【００６５】更にメトトレキセートに対する耐性を付与
するdhfr（Wiglerら、Natl. Acad.Sci. USA、77:3567(1
980) ；O'Hareら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、78:15
27(1981) ）；ミコフェノール酸耐性を付与するgpt （M
ulligan及びBerg、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、78:20
72(1981) ）；アミノグリコシドG-418 耐性を付与するn
eo （Colberre-Garapinら、J. Mol. Biol. 、150:1(198
1) ）；及びヒグロマイシン耐性を付与するhygro （San
terreら、Gene、30:147(1984)）遺伝子の選択を基にし
た、代謝拮抗物質耐性を用いることができる。
【００６６】本発明は、ヒト、ペット、家畜又は家禽に
GH発現及び／又は放出を増強する医薬製剤を投与するこ
とを含む、GH欠乏によって特徴付けられる障害を含むGH
関連の疾患又は障害の治療又は予防を提供する。本発明
は更に、家畜又は家禽にGH発現及び／又は放出を増強す
る医薬製剤を投与することを含む、家畜及び家禽の成長
及び機能を増強する方法及びプロトコールを提供する。
本発明は更に、ペットにGH発現及び／又は放出を増強も
しくは変更する医薬製剤を投与することを含む、肥満及
び虚弱性の治療法を提供する。
【００６７】本発明は更に、ヒト、ペット、家畜又は家
禽にGH発現及び／又は放出を増強する医薬製剤を投与す
ることを含む、健康を増進する方法を提供する。本発明
に従って、発明の方法は、以下を含有する医薬製剤の投
与を包含している：
【００６８】(a) GHRH変異をコードしているポリヌクレ
オチド配列を単独で、あるいは、GHRH、修飾されたGHR
H、GH、修飾されたGHをコードしているポリヌクレオチ
ド配列又はそれらのいずれかの組合せと共に、ここで該
ポリヌクレオチド配列は、プロモーター又は調節エレメ
ントに、好ましくは筋肉組織において転写活性のあるも
のと機能的に結合している；
【００６９】(b) イヌ又はネコのGHRHをコードしている
ポリヌクレオチド配列を単独で、あるいは、GHRH変異
体、修飾されたGHRH、GH、修飾されたGHをコードしてい
るポリヌクレオチド配列、又はそれらのいずれかの組合
せと共に、ここで該ポリヌクレオチド配列は、プロモー
ター又は調節エレメントに、好ましくは筋肉組織におい
て転写活性のあるものと機能的に結合している； (c)GH
RH、修飾されたGHRH、GH、修飾されたGHをコードしてい
るポリヌクレオチド配列又はそれらのいずれかの組合せ
で、ここで該ポリヌクレオチド配列はプロモーター又は
調節エレメントに、好ましくは筋肉組織において転写活
性のあるものと機能的に結合している；
【００７０】(c) 融合タンパク質として発現された変異
GHRHポリペプチドを単独で、あるいはGHRH、修飾された
GHRH、GH又は修飾されたGHポリペプチド又はそれらのい
ずれかの組合せと共に；あるいは(d) 融合タンパク質と
して発現されたイヌ又はネコのGHRHポリペプチドを単独
で、又はGHRH変異体、修飾されたGHRH、GHもしくは修飾
されたGHポリペプチド又はそれらのいずれかの組合せと
共に。
【００７１】一般に、患者の種と同じ種に起源するか又
は種反応性（抗体の場合）の生成物の投与が好ましい。
従って好ましい実施態様において、ヒトGH及び／又はGH
RH遺伝子、その遺伝子断片又は誘導体が、ヒト患者に治
療又は予防のために投与される。
【００７２】特定の実施態様において、GH及び／又はGH
RHをコードしている配列を含む核酸又はそれらの機能的
誘導体を、遺伝子治療により成長ホルモンの放出及び／
又は上昇を促進するために投与することができる。遺伝
子治療とは、発現された又は発現可能な核酸を対象へ投
与することにより行われる治療を意味する。本発明のこ
の実施態様において、核酸は、GHの融合を促進すること
により治療効果を媒介するそれらがコードするタンパク
質を産生する。
【００７３】当該技術分野において利用できる遺伝子治
療のあらゆる方法を、本発明に従って使用することがで
きる。方法の例を以下に記す。
【００７４】遺伝子治療法の一般的総説については、次
の論文を参照のこと：Goldspiel ら、Clinical Pharmac
y 、12:488-505(1993)；Wu及びWu、Biotherapy、3:87-9
5(1991) ；Tolstoshev、Ann. Rev. Pharmacol. Toxico
l、32:573-596(1993)；Mulligan、Science 、260:926-9
32(1993) ；Morgan及びAnderson、Ann. Rev. Bioche
m.、62:191-217(1993)；May 、TIBTECH 、11(5):155-21
5(1993) 。
【００７５】当該技術分野において公知の使用すること
のできる組換えDNA 技法は、Ausubel らの編集の「分子
生物学の最新プロトコール(Current Protocols in Mole
cular Biology)」、1993年、John Wiley & Sons 、NY；
及びKrieglerの「遺伝子導入及び発現：実験マニュア
ル」、1990年、Stockton Press、NYに記されている。
【００７６】好ましい態様において、組成物は、GH又は
修飾されたGH、及びGHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異
体をコードしている核酸配列を含み、該核酸配列は、適
当な宿主においてGH又は修飾されたGH、及びGHRH、修飾
されたGHRH又はGHRH変異体を発現する発現ベクターの一
部である。特にこのような核酸配列は、GH又は修飾され
たGH、及びGHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異体のコー
ド領域に機能的に結合したプロモーターを有し、該プロ
モーターは、誘導又構築することができ、かつ任意に、
組織特異性である。
【００７７】別の特定の実施態様において、GH又は修飾
されたGH、及びGHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異体を
コードしている配列、並びにいずれか他の所望の配列
が、ゲノムの所望の位置での異種組換えを促進するよう
な領域に隣接しているような核酸分子を使用することが
でき、従ってGH又は修飾されたGH、及びGHRH、修飾され
たGHRH又はGHRH変異体の核酸の染色体内発現を提供する
ことができる（Koller及びSmithies、Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA、86:8932-8935(1989)；Zijlstraら、Natur
e、342:435-438(1989) ）。
【００７８】核酸の患者への供給は、直接的（この場合
は患者は核酸又は核酸を保持するベクターに直接晒され
る）、あるいは間接的（この場合は細胞が最初にin vit
roで核酸により形質転換され、その後患者に移植され
る）のいずれかであることができる。これら２種の方法
は、各々、in vivo 又はex vivo 遺伝子治療として公知
である。
【００７９】特定の実施態様において、核酸配列は、in
vivo で直接投与することができ、この場合核酸が発現
され、コードされた産物が生成される。これは多くの当
該技術分野において公知の方法のいずれかで達成するこ
とができ、例えばこれらを適当な核酸発現ベクターの一
部として構築し、これを例えば欠損した又は減弱したレ
トロウイルス又は他のウイルスベクターを用いて感染す
ることにより（米国特許第4,980,286 号を参照のこ
と）、もしくははだかのDNA を直接注入することによ
り、もしくは微粒子ボンバードメント（例えば遺伝子ガ
ン；Biolistic, Dupont ）を使用することにより、又は
脂質もしくは細胞表面受容体又はトランスフェクション
試薬(transfecting agent)で被覆するか、リポソーム、
微小粒子又はマイクロカプセルへ封入することにより、
もしくはこれらを核に侵入することが公知であるペプチ
ドと結合して投与することにより、レポーターによって
媒介されたエンドサイトーシスを受けるリガンドに連結
して投与すること（例えば、Wu及びWu, J. Biol. Che
m., 262:4429-4432(1987) ）（これは受容体を特異的に
発現している標的細胞型に使用することができる）など
により、細胞内にあるように投与する。別の実施態様に
おいて、リガンドがfusogenic ウイルスペプチドを含み
エンドソームを崩壊させるような核酸−リガンド複合体
を形成することができ、これは核酸がリソソームを崩壊
するのを防ぐ。
【００８０】更に別の実施態様において、核酸は、特異
的受容体を標的とすることにより、細胞に特異的な取り
込み及び発現をin vivo で標的化することができる（例
えば、PCT 国際公開公報第92/06180号、1992年4 月16日
(Wu ら) ；国際公開公報第92/22635号、1992年12月23日
(Wilson ら) ；国際公開公報第92/20316号、1992年11月
26日(Findeisら) ；国際公開公報第93/14188号、1993年
7 月22日(Clarke ら)、国際公開公報第93/20221号、199
3年10月14日(Young) ）。あるいは、核酸は、同種組換
えにより、細胞内に導入し、かつ発現のために宿主細胞
DNA に組込むことができる（Koller及びSmithies、Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA、86:8932-8935(1989)；Zijls
traら、Nature、342:435-438(1989) ）。
【００８１】特定の実施態様において、GH又は修飾され
たGH及び／又はGHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異をコ
ードしている核酸配列を含むウイルスベクターを使用す
ることができる。例えば、レトロウイルスベクターを使
用することができる（Millerら、Meth. Enzymol.、217:
581-599(1993) ）。これらのレトロウイルスベクター
は、ウイルスゲノムのパッケージング及び宿主細胞DNA
への組込みには必須でないレトロウイルス配列を欠損し
ている。遺伝子治療で使用することができるGH又は修飾
されたGH、及びGHRH、修飾されたGHRH又はGHRH変異体を
コードしている核酸配列を、１個以上のベクターにクロ
ーン化することができ、これは患者への遺伝子の供給を
促進する。
【００８２】レトロウイルスベクターに関する詳細は、
Boesenらの論文（Biotherapy、6:291-302(1994) ）に認
めることができ、これは、造血幹細胞を化学療法に対し
てより抵抗性にするために、幹細胞にmdr1遺伝子を送達
するためのレトロウイルスベクターの使用について記し
ている。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの
使用について記した他の参考文献は、以下である：Clow
esら、J. Clin. Invest.、93:644-651(1994)；Kiemら、
Blood 、83:1467-1473(1994)；Salmons 及びGunzberg、
Human Gene Therapy、4:129-141(1993) ；並びにGrossm
an及びWilson、Curr. Opin. in Genetics and Devel.、
3:110-114(1993) 。
【００８３】アデノウイルスは、遺伝子治療において使
用することができる別のウイルスベクターである。アデ
ノウイルスは、気道上皮への遺伝子の供給に関して特に
魅力的な担体である。アデノウイルスは、気道上皮に天
然に感染し、そこで中等度の疾患を引き起こす。アデノ
ウイルスをベースにした送達システムの他の標的は、
肝、中枢神経系、内皮細胞、及び筋肉である。アデノウ
イルスは、非分裂細胞に感染することが可能であるとい
う利点がある。Kozarsky及びWilsonの論文（Current Op
inion in Genetics and Development 、3:499-503(199
3) ）は、アデノウイルスをベースにした遺伝子治療を
検証している。
【００８４】Boutらの論文（Human Gene Therapy、5:3-
10(1994)）は、アカゲザルの気道上皮への遺伝子導入に
対するアデノウイルスベクターの使用を明らかにしてい
る。他の遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用例
は、Rosenfeld らの論文（Science 、252:431-434(199
1) ）； Rosenfeldらの論文（Cell、68:143-155(199
2)）；Mastrangeli らの論文、J. Clin. Invest.、91:2
25-234(1993)；PCT 国際公開公報第94/12649号；及びWa
ngらの論文、Gene Therapy、2:775-783(1995) ）に見る
ことができる。好ましい実施態様において、アデノウイ
ルスベクターが使用される。アデノ−関連ウイルス(AA
V) も、遺伝子治療における使用が提唱されている（Wal
sh ら、Proc. Soc. Exp. Biol. Med.、204:289-300(199
3) ；米国特許第5,436,146 号）。
【００８５】別の遺伝子治療の方法は、組織培養物中の
細胞への、電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシ
ウム媒介型トランスフェクション又はウイルス感染など
のような方法による、遺伝子の導入に関する。通常導入
法は、選択マーカーの細胞への導入を含む。その後細胞
は選択条件下に置かれ、導入された遺伝子を取り込みか
つ発現している細胞を単離する。これらの細胞が患者へ
供給される。
【００８６】この実施態様において、核酸は、得られた
組換え細胞をin vivo 投与する前に細胞に導入される。
このような導入は、当該技術分野において公知のいずれ
かの方法により実行することができ、これはトランスフ
ェクション、電気穿孔、微量注入、核酸配列を含むウイ
ルス又はバクテリオファージベクターによる感染、細胞
融合、染色体が媒介した遺伝子導入、微小細胞が媒介し
た遺伝子導入、スフェロプラスト融合などを含むが、こ
れらに限定されるものではない。
【００８７】細胞への外来遺伝子の導入については、当
該技術分野において多くの方法が公知であり（Loeffler
及びBehr、Meth. Enzymol.、217:599-618(1993) ；Cohe
n ら、Meth. Enzymol.、217:618-644(1993) ；Cline 、
Pharmac. Ther.、29:69-92(1985)）、かつレシピエント
細胞の必要な発達及び生理的機能が破壊されない限り
は、本発明に従って使用することができる。この技法
は、細胞への核酸の安定した導入を提供し、その結果核
酸は細胞によって発現可能であり、好ましくはその細胞
の子孫によって受け継がれかつ発現されることが可能で
ある。
【００８８】得られる組換え細胞は、当該技術分野にお
いて公知の様々な方法で対象に供給することができる。
組換え血液細胞（例えば造血幹細胞又は始原細胞）は、
静脈内投与されることが好ましい。使用のために想定さ
れる細胞量は、所望の作用、対象の状態などによって決
まり、かつ当業者によって決定され得る。
【００８９】遺伝子治療の目的で核酸を導入することが
できる細胞は、あらゆる望ましい利用可能な細胞型を包
含し、かつこれは上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイ
ト、繊維芽細胞、筋細胞、肝細胞；T リンパ球、B リン
パ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核
球、顆粒球などの血液細胞；様々な幹細胞又は始原細
胞、特に例えば骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝などから
得られる造血幹細胞又は始原細胞などを含むが、これら
に限定されるものではない。
【００９０】好ましい実施態様において、遺伝子治療に
使用される細胞は、対象に対して自己由来のものであ
る。
【００９１】遺伝子治療において組換え細胞を使用する
実施態様において、GH又は修飾されたGH、及び／又はGH
RH、修飾されたGHRH又はGHRH変異をコードしている核酸
配列が前述の細胞に導入され、その結果これらは細胞又
はそれらの子孫によって発現可能となり、その後該組換
え細胞は治療作用を目的としてin vivo 投与される。特
定の実施態様において、幹細胞又は始原細胞が使用され
る。
【００９２】In vitroにおいて単離されかつ維持される
あらゆる幹細胞及び／又は始原細胞が、本発明のこの実
施態様において使用することができる可能性がある（例
えばPCT 、国際公開公報第94/08598号、1994年4 月28
日；Stemple 及びAnderson、Cell、71:973-985(1992)；
Rheinwald、Meth Cell Bio 、21A:229(1980) ；並びに
Pittelkow 及びScott 、Mayo Clinic Proc. 、61:771(1
986)）。
【００９３】特定の実施態様において、遺伝子治療を目
的として導入される核酸は、コード領域に機能的に結合
した誘導可能なプロモーターを含み、その結果該核酸の
発現は、転写の適当なインデューサの有無を制御するこ
とによって制御可能である。
【００９４】本発明のポリペプチドは、イヌ又はネコの
GHRHアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。本発明
のポリペプチドは更に、発明のGHRH変異体のアミノ酸配
列を有するポリペプチドを含む。更に本発明のポリペプ
チドは、GH又は修飾されたGH、及びGHRH、修飾されたGH
RHのアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明の
タンパク質組成物は更に、許容できる担体、例えば親水
性担体、例えば医薬として許容できる担体を含む。
【００９５】本発明は更に、適当な培養培地における本
発明の細胞培養物の増殖及び培養物からタンパク質の精
製を含むポリペプチドの製造法に関する。例えば本発明
の方法は、本発明のヌクレオチドを含む適当な発現ベク
ターを含む宿主細胞が、コードされたポリペプチドの発
現を可能にするような条件下で培養されるポリペプチド
の製造法を含む。このポリペプチドは、培養物から、簡
便には培養培地から回収し、更に精製することができ
る。
【００９６】本発明は更に、本発明の核酸断片によっ
て、又は本発明の核酸断片の縮重変異によって、コード
された単離されたポリペプチドを提供する。“縮重変
異”は、ヌクレオチド配列が本発明の核酸断片とは異な
るが（例えばORF ）、遺伝暗号の縮重により同じポリペ
プチド配列をコードしているヌクレオチド断片が意図さ
れている。本発明の好ましい核酸断片は、タンパク質を
コードしているORF である。当該技術分野において公知
の様々な方法論を、本発明の単離されたポリペプチド又
はタンパク質のいずれかひとつを得るために使用するこ
とができる。
【００９７】最も簡単なレベルで、アミノ酸配列は、市
販のペプチド合成装置を用いて合成することができる。
これは小さいペプチド及び比較的大きいポリペプチドの
断片の産生において特に有用である。例えば天然のポリ
ペプチドに対する抗体の産生において、断片が有用であ
る。代わりの方法において、ポリペプチド又はタンパク
質が、天然に該ポリペプチド又はタンパク質を産生する
細菌細胞から精製される。当業者は、単離された本発明
のポリペプチド又はタンパク質を得るために、ポリペプ
チド又はタンパク質を単離するための公知の方法を容易
に行うことができる。
【００９８】これらは、イムノクロマトグラフィー、HP
LC、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマ
トグラフィー、及び免疫アフィニティークロマトグラフ
ィーを含むが、これに限定されるものではない。例え
ば、Scopesの「タンパク質精製：原理と実践(Protein P
urification:Principles and Practice)」、Springer-V
erlag (1994 年) ；Sambrookら、「分子クローニング：
実験マニュアル」；Ausubel ら、「分子生物学最新のプ
ロトコール」を参照のこと。
【００９９】あるいは、本発明のポリペプチド及びタン
パク質は、所望のポリペプチド又はタンパク質を発現す
るように変更された細胞から精製することができる。本
願明細書において使用されるように、細胞は、遺伝子操
作により細胞が通常は産生しないもしくは細胞が通常は
低レベルでしか産生しないようなポリペプチド又はタン
パク質を産生するように変更された場合に、所望のポリ
ペプチド又はタンパク質を発現するように変更されると
称される。
【０１００】当業者は、本発明のポリペプチド又はタン
パク質の一つを産生する細胞を作出するために、原核又
は真核細胞へと、組換え配列又は合成配列のいずれかを
導入しかつ発現する方法を容易に受け入れることができ
る。精製されたポリペプチドを、該ポリペプチドに結合
する分子を同定するための、当該技術分野において周知
のin vitro結合アッセイにおいて使用することができ
る。これらの分子は、例えば小さい分子、コンビナトリ
アルライブラリーから得た分子、抗体又は他のタンパク
質を含むことができるが、これらに限定されるものでは
ない。
【０１０１】本発明のタンパク質は、更にトランスジェ
ニック動物の産物として、例えば該タンパク質をコード
しているヌクレオチド配列を含む体細胞又は生殖細胞を
特徴とするトランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ、又は
ヒツジのミルク成分として発現され得る。
【０１０２】このタンパク質は、更に公知の常法の化学
合成によっても生成することもできる。合成手段により
本発明のタンパク質を構築する方法は、当業者には公知
である。合成により構築されたタンパク質配列は、タン
パク質の１次、２次又は３次構造及び／又はコンホメー
ション特徴を共有することによって、タンパク質活性を
含む、その中で共通の生物学的特性を有することができ
る。従って、これらは、治療用化合物のスクリーニング
及び抗体開発のための免疫学的方法において、天然の精
製されたタンパク質に対する生物学的活性又は免疫的置
換として使用することができる。
【０１０３】このタンパク質は、更に１種以上の昆虫の
発現ベクターにおいて本発明の単離されたポリペプチド
を適当な制御配列に機能的に結合し、かつ昆虫の発現シ
ステムを使用することによって製造することもできる。
バキュロウイルス／昆虫細胞発現系に関する材料及び方
法は、例えばInvitrogen（サイディエゴ、カリフォルニ
ア、U.S.A.）からキット(the MaxBat.RTM.キット) とし
て市販されており、かつこのような方法は、本願明細書
に参照として組入れられているSummers 及びSmith の論
文（Texas Agricultural Experiment Station Bulletin
No. 1555 (1987)）に記されているように、当該技術分
野において周知である。本願明細書において使用される
ように、本発明のポリヌクレオチドを発現することが可
能な昆虫細胞は、“形質転換される”。
【０１０４】本発明のタンパク質は、形質転換された宿
主細胞を、組換えタンパク質の発現に適した培養条件下
で培養することによって調製することができる。得られ
る発現されたタンパク質は、その後ゲルろ過及びイオン
交換クロマトグラフィーのような公知の精製法を用い
て、このような培養物（すなわち、培養培地又は細胞抽
出物）から精製される。
【０１０５】タンパク質の精製は、該タンパク質に結合
するであろう物質を含むアフィニティーカラム；コンカ
ナバリンA −アガロース、ヘパリン−トリオパールRTM
、又はシバクロンブルー3GA セファロースRTM のよう
なアフィニティー樹脂上での１回以上のカラム工程；フ
ェニルエーテル、ブチルエーテル、又はプロピルエーテ
ルのような樹脂を使用する疎水性相互クロマトグラフィ
ーのような１回以上の工程；又はイムノアフィニティー
クロマトグラフィーなどを含むこともできる。
【０１０６】あるいは、本発明のタンパク質は、精製を
促進する形で発現することもできる。例えば、マルトー
ス結合タンパク質(MBP) 、グルタチオン-S- トランスフ
ェラーゼ(GST) 又はチオレドキシン(TRX) のような、融
合タンパク質として発現することもできる。このような
融合タンパク質の発現及び精製のためのキットが、それ
ぞれ、New England BioLab（ビバリー、マサチューセッ
ツ）、Pharmacia （ピスケートウェイ、N.J.）及びIn V
itrogen から入手できる。タンパク質も、エピトープで
標識することができ、その後このようなエピトープに対
して指向された特異的抗体を用いて精製することができ
る。このようなエピトープのひとつ (“Flag”) は、Ko
dak （ニューヘブン、コネチカット）から市販されてい
る。
【０１０７】最後に、例えばペンダント基メチル又は他
の脂肪族基を有するシリカゲルのような、疎水性RP-HPL
C 媒体を使用する逆相高速クロマトグラフィー(RP-HPL
C) の１以上の工程を、タンパク質の更なる精製のため
に使用することができる。前述の精製工程の一部又は全
てを、様々な組合せで、実質的に相同の単離された組換
えタンパク質を提供するために利用することができる。
従って精製されたタンパク質は、実質的に他の哺乳類タ
ンパク質を含まず、かつ本発明において¨ 単離された
タンパク質¨ と定義される。
【０１０８】本発明の化合物は、ヒトで使用する前に、
所望の治療又は予防活性についてinvitroで、その後in
vivo で試験されることが好ましい。例えば特定の化合
物の投与を適用することができるかどうかを決定するた
めに使用することができるinvitroアッセイは、患者の
組織検体を培地において増殖し、化合物を曝露さもなけ
れば投与し、このような化合物の組織検体に対する作用
を観察するin vitro細胞培養アッセイを含む。
【０１０９】GH又は修飾されたGH、及びGHRH、修飾され
たGHRH又はGHRH変異体の発現は、イムノアッセイ、ゲル
電気泳動とその後の可視化、又は当該技術分野において
公知のいずれか他の方法によってアッセイすることがで
きる。様々な特定の実施態様において、患者の障害に関
連した細胞型の代表的細胞を使って、化合物がこのよう
な細胞型に対して所望の作用を有するかどうかを決定す
るためのin vitroアッセイを行うことができる。本発明
において、GHRH の機能活性は、それがin vitroにおい
てGH遺伝子転写を誘導する能力により測定することがで
きる。本発明において、GHRH機能活性は、それがin vit
roにおいてIGF 遺伝子転写を誘導する能力により測定す
ることができる。
【０１１０】治療で使用するための化合物を、ヒトで試
験する前に、ブタ、ニワトリ、ウシ又はサルを含むが、
これに限定されるものではない、適当な動物モデル系で
試験することができる。本発明は更に、本発明の化合物
を有効量対象へ投与することによる治療（及び予防）法
を提供する。好ましい態様において、この化合物は実質
的に精製される（例えば作用を限定し、望ましくない副
作用を生じるような物質を実質的に含まない。）。この
場合の対象は、好ましくは動物であり、ウシ、ブタ、ウ
マ、ニワトリ、ネコ、イヌなどを含むが、これらに限定
されるものではなく、好ましくは哺乳類であり、最も好
ましくはヒトである。特定の実施態様において、ヒトで
ない哺乳類が対象である。
【０１１１】化合物が核酸を含む場合に使用することが
できる製剤及び投与法は、前述のものであり；別の適当
な製剤及び投与経路は、以下に説明されたものの中から
選択することができる。
【０１１２】例えば、リポソームへの封入、微小粒子、
マイクロカプセル、化合物の発現が可能な組換え細胞、
受容体が媒介したエンドサイトーシス（例えば、Wu及び
Wu、J. Biol. Chem.、262:4429-4432(1987) を参照）；
レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の
構築などのような、様々な送達システムが公知であり、
かつ本発明の化合物を投与するために使用することがで
きる。導入法は、腫瘍内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈
内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口へのを含むが、こ
れらに限定されるものではない。
【０１１３】これらの化合物は、いずれか簡便な経路、
例えば例えば注入又はボーラス注射、上皮又は粘膜の内
層を通じての吸収（例えば口腔粘膜、直腸及び小腸粘膜
など）により投与することができ、かつ他の生体活性物
質と共に投与することができる。投与は、全身性又は局
所性であることができる。加えて本発明の医薬組成物
を、脳室内及びくも膜下への注入を含む適当な経路によ
り、中枢神経系に導入することが望ましく；脳室内注入
は、例えばOmmaya貯蔵器のような貯蔵器に接続された脳
室内カテーテル法によって促進される。肺への投与も、
例えば吸引器又は噴霧器の使用、及びエーロゾル化した
薬物を伴う製剤により行うことができる。
【０１１４】特定の実施態様において、本発明の医薬組
成物を、治療が必要な領域に局所的に投与することが好
ましく；これは例えば手術時の局所注入、局所的塗布、
例えば術後に創傷包帯と共に、注射により、カテーテル
により、坐薬により、又はインプラントにより達成する
ことができるが、これらに限定されるものではなく、前
記インプラントは、サイラスティック膜のような膜、又
は繊維を含む多孔質、非孔質又はゼラチン状の物質であ
ることができる。ある実施態様において、悪性腫瘍又は
新生物形成又は新生物形成前の組織の部位（又は前の部
位）に直接注射することによって投与することができ
る。
【０１１５】別の実施態様において、この化合物は、小
胞、特にリポソームにおいて送達することができる（La
nger、Science 、249:1527-1533(1990) ；Treat ら、
「感染症及び癌の治療におけるリポソーム(Liposomes i
n the Therapy of InfectiousDisease and Cancer)
」、Lopez-Berestein 及びFidler編集、Liss, New Yor
k、353-365 ページ(1989 年) ；Lopez-Berestein 、前
記、317-327 ページ；前記を全般的に参照）。
【０１１６】更に他の実施態様において、この化合物
は、制御された放出系で送達することができる。ある実
施態様において、ポンプを使用することができる（Lang
er、前記；Sefton、CRC Crit. Ref. Biomed. Eng、14:2
01(1987)；Buchwaldら、Surgery 、88:507(1980)；Saud
ekら、N. Engl. J. Med.、321:574(1989) を参照のこ
と）。
【０１１７】別の実施態様において、高分子材料を使用
することができる（「放出制御剤の医療適用(Medical A
pplications of Controlled Release)」、Langer及びWi
se編集、CRC Pres. 、Boca Raton、フロリダ(1974 年)
；「放出制御剤の生体適合性、医薬品の設計及び性能
(Controlled Drug Bioavailability、Drug Product Des
ign and Performance)」、Smolen及びBall編集、Wiley
、New York、(1984 年)；Ranger及びPeppas、J. Macro
mol. Sci. Rev. Macromol. Chem.、23:61(1983)；更にL
evyら、Science 、228:190(1985) ；Duringら、Ann. Ne
urol.、25:351(1989)；Howardら、J. Neurosurg. 、71:
105(1989)を参照のこと）。
【０１１８】更に別の実施態様において、放出制御シス
テムを、脳のような治療標的の近傍に置くことができ、
従って、全身投与用量の一部のみを必要とする（例えば
Goodson 、「放出制御剤の医療適用」、前記、第2 巻、
115-138 ページ、(1984 年)）。他の放出制御系が、Lan
gerによって検証されている（Science 、249:1527-1533
(1990) ）。
【０１１９】本発明の化合物がタンパク質をコードして
いる核酸であるような特定の実施態様において、適当な
核酸発現ベクターを一部として構築し、かつ例えばレト
ロウイルスベクターを使用することによって（米国特許
第4,980,286 号参照）、又は直接注射することによっ
て、又は微小粒子ボンバードメントを使用することによ
って（例えば遺伝子ガン；Biolistic, Dupont ）、又は
脂質又は細胞表面受容体又はトランスフェクション試薬
によって被覆することによって、又は核に侵入すること
がわかっているホメオボックス様受容体に結合して投与
する（例えばJoliotら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、
88:1864-1868(1991)参照）ことなどにより細胞内に入る
ように投与することで、この核酸をコードされたタンパ
ク質の発現を促進するために、in vivo で投与すること
ができる。あるいは、核酸を細胞内に導入し、かつ相同
組換えにより発現のための宿主細胞DNA に組込むことが
できる。
【０１２０】本発明は更に医薬組成物も提供する。この
ような組成物は、治療有効量の化合物、医薬として許容
できる担体を含む。特定の実施態様において、用語“医
薬として許容できる”とは、連邦の規制当局又は政府に
よって承認されたか、もしくは、米国薬局方又は他の動
物、より詳細にはヒトでの使用に関して一般に認められ
た局方に列記されていることを意味する。用語“担体”
は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦
形剤、又は溶媒を意味する。
【０１２１】このような医薬担体は、滅菌した液体、例
えば水又は、石油、動物、植物又は合成物を起源とする
油、例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など
を意味する。医薬組成物が静脈内に投与される場合は、
水が好ましい担体である。生理食塩水並びに水性デキス
トロース及びグリセロール溶液も、特に注射液のため
に、液体担体として使用することができる。適当な医薬
用賦形剤は、デンプン、ブドウ糖、乳糖、ショ糖、ゼラ
チン、麦芽、コメ、コムギ、チョーク、シリカゲル、ス
テアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレー
ト、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリ
セロール、プロピレングリコール、水、エタノールなど
である。
【０１２２】望ましいならば、この組成物は、少量の湿
潤剤もしくは乳化剤、又はpH緩衝剤を含むこともでき
る。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸
剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などであることがで
きる。この組成物は、トリグリセリドのような従来の結
合剤及び担体を用いて、坐剤として製剤することができ
る。経口製剤は、医薬等級のマンニトール、乳糖、デン
プン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウ
ム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準の
担体を含むことができる。
【０１２３】適当な医薬担体の例は、「レミントンの薬
科学(Remington's PharmaceuticalSciences) 」、E.W.
Martin に記載されている。このような組成物は、患者
への適切な投与のための剤形を提供するために、治療に
有効量の化合物を、好ましくは純粋な形状で、適量の担
体と共に含むであろう。この製剤は投与形態に適してい
なければならない。
【０１２４】好ましい実施態様において、本組成物は、
ヒトへの静脈内投与に適した医薬組成物として通常の手
順に従って製剤される。典型的には、静脈内投与用の組
成物は、滅菌された等張の水性緩衝液中の液剤である。
必要であるならば、この組成物は更に、可溶化剤及び注
射部位の疼痛を緩和するためにリグノカインのような局
所麻酔剤を含む。
【０１２５】一般に、成分は単位剤形で個別に又は他と
混合して、例えばアンプル又はサシェのような密封され
た容器中に凍結乾燥された粉末又は水を含まない濃縮物
として有効成分の量を明示した形で供給される。組成物
が注入により投与される場合は、これは滅菌された医薬
等級の水又は生理食塩水が入った注入ボトルに分注され
る。組成物が注射により投与される場合は、投与前に成
分を混合することができるように、注射用の滅菌水又は
生理食塩水のアンプルが提供される。
【０１２６】本発明の化合物は、中性塩(neutral or sa
lt) の形状で製剤することができる。医薬として許容で
きる塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸など
から誘導されたもののような、遊離のアミノ基により形
成されたもの、及びナトリウム、カリウム、アンモニウ
ム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリ
エチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジ
ン、プロカインなどのような、遊離のカルボキシル基と
共に形成されたものを含む。
【０１２７】癌の治療において効果がある本発明の化合
物の量は、通常の臨床における技術により決定すること
ができる。加えて、至適用量範囲の決定を補助するため
に、in vitroアッセイを任意に使用することができる。
製剤において使用される正確な用量は、投与経路、疾患
又は障害の重篤度に応じて決まり、かつ実践者の判断及
び各患者の状況に応じて決定され得る。しかしながら、
静脈内投与に適した用量範囲は、一般に体重1kg 当たり
活性化合物約20〜500 μg である。点鼻投与のために適
当な用量範囲は、一般に約0.01pg／体重kgから1mg ／体
重kgである。有効用量は、in vitro又は動物モデルの試
験システムから得られた用量−反応曲線から外挿するこ
とができる。
【０１２８】坐薬は一般に活性成分を、0.5 重量％〜10
重量％で含み；経口製剤は、好ましくは活性成分を10重
量％〜95重量％含む。本発明は更に、本発明の医薬組成
物の１種以上の成分で満たされた１個以上の容器が収め
られた医薬パック又はキットも提供する。任意のこのよ
うな容器（複数）の添付文書(notice)は、医薬品又は生
物製品の製造、使用又は販売を規制する政府当局によっ
て規定された形式であり、この添付文書はヒト投与に関
する製造、使用及び販売の規制当局による承認を反映し
ている。
【０１２９】実施例 イヌ及びネコのGHRHのクローニング 1. イヌGHRHのクローニング イヌGHRHをクローニングするために、イヌのゲノムライ
ブラリー(Clonetech Lab) を、ブタのGHRH (配列番号：
1)をコードしている放射標識した断片により、当業者に
公知のプロトコールに従いスクリーニングした。
【０１３０】ブタGHRH (配列番号：1)をコードしている
断片を、市販のDNA 標識キットを用いて、製造業者の指
示に従い標識した。イヌ前駆体GHRHをコードしている遺
伝子を含むことが同定されたクローンを単離し、当業者
に公知の方法に従って配列決定した。クローンの両DNA
鎖の配列決定から得られた配列の結果を、公知のGHRH種
と比較し、かつイヌのGHRHを適当なプラスミドベクター
（例えばpVR1012 ；Vical 、サンディエゴ、CA）に、当
業者に公知のプロトコールに従ってクローニングした。
【０１３１】2. ネコのGHRHのクローニング ネコのGHRHをクローニングするために、ネコのゲノムラ
イブラリー(ClonetechLab) を、ブタのGHRH (配列番
号：1)をコードしている放射標識した断片により、当業
者に公知のプロトコールに従いスクリーニングした。ブ
タGHRH (配列番号：1)をコードしている断片を、市販の
DNA 標識キットを用いて、製造業者の指示に従い標識し
た。ネコ前駆体GHRHをコードしている遺伝子を含むこと
が同定されたクローンを単離し、当業者に公知の方法に
従って配列決定した。クローンの両DNA 鎖の配列決定か
ら得られた配列の結果を、公知のGHRH種と比較し、かつ
ネコのGHRHを適当なプラスミドベクター（例えばpVR101
2 ；Vical 、サンディエゴ、CA）に、当業者に公知のプ
ロトコールに従ってクローニングした。
【０１３２】GHRH構築物の合成 3. pGHRH-4(pGHRH1-44WTCMV) 天然のブタGHRHポリペプチドをコードしている遺伝子を
含むプラスミドを構築し、かつ該プラスミドが動物に注
射された場合にこれを循環血中に分泌するために、GHRH
-1( 配列番号：61) 、GHRH-2( 配列番号：62) 、GHRH-4
( 配列番号：66) 、及びGHRH-7( 配列番号：67) と称さ
れるプライマーを合成した。これらのプライマーを用い
て、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)を行い、ヒ
トのmRNAからヒトGHRHシグナル配列を、ブタのmRNAから
ブタのGHRHタンパク質配列を増幅した。
【０１３３】得られたPCR-増幅したヒトGHRHシグナル配
列及びブタGHRHタンパク質配列を、各々、BglII 及びBa
mHI により消化した。その後断片を互いに連結し、プラ
スミドpVR1012 （Vical 、サンディエゴ、CA）のBamHI
部位に、クローニングし、プラスミドpGHRH-4(図1)を作
出した。ヒトGHRHタンパク質からのシグナル配列(31ア
ミノ酸) に先行するブタGHRHタンパク質配列(44 アミノ
酸) を含む75アミノ酸ポリペプチドをコードしている、
GHRHオリゴヌクレオチド( 配列番号：1 及び2)の発現
は、サイトメガロウイルス前初期(CMV IE)プロモーター
／エンハンサーエレメントによって駆動された。
【０１３４】4. pG HRH1-44WSK685: ブタα- 骨格筋アクチンプロモーター( 配列番号：3)に
由来する685bp 断片により駆動された、前述の75- アミ
ノ酸GHRHタンパク質をコードしているポリヌクレオチド
配列を含むプラスミドは、下記のように構成した。75ア
ミノ酸GHRHタンパク質( 配列番号：1)をコードしている
オリゴヌクレオチド断片を、HindIII 部位を含むプライ
マーp97-S1（配列番号：4 ）及びXbaI部位を含むプライ
マーp97-A258( 配列番号：5)を用いて、プラスミドpGHR
H-4 からPCR-増幅した。次にこのPCR-増幅した配列を、
プラスミドpGL3ベーシック(Promega) のHindIII-XbaI部
位にクローニングし、プラスミドGHRH1-44 SK(図2)を作
出した。
【０１３５】SK685 と称されるブタα−骨格筋アクチン
プロモーターの一部に相当する685bp 断片は、KpnI部位
を含むプライマーSK-3( 配列番号：6)及びHindIII 部位
を含むプライマーSK-4( 配列番号：7)を用いて、ブタゲ
ノムDNA から、PCR-増幅した。次にPCR-増幅したSK685
プロモーター断片を、KpnI及びHindIII 酵素で消化した
プラスミドGHRH1-44SKにクローニングし、プラスミドGH
RH1-44WTSK685 を作出した( 図3)。
【０１３６】5. pGHRH1-44WTSK2014 ブタα−骨格筋アクチンプロモーター由来の断片約2014
bp( 配列番号：8)に機能的に連結した、前述の75- アミ
ノ酸GHRHタンパク質をコードしているポリヌクレオチド
配列を含むプラスミドを、下記のように構築した。
【０１３７】ブタα−骨格筋アクチンプロモーターの一
部に相当する適当な2014bp断片SK 2014 は、KpnI部位を
含むプライマーSK-7（配列番号：9 ）及びHindIII 部位
を含むプライマーSK-8( 配列番号：10) を使ってブタゲ
ノムDNA からPCR-増幅した。次にPCR-増幅したSK2014プ
ロモーター断片を、KpnI及びHindIII 酵素で消化したプ
ラスミドGHRH1-44SKにクローニングし、プラスミドGHRH
1 -44WTSK2014(図4)を作出した。
【０１３８】6. pGHRH1-29WTCMV ヒトGHRHポリヌクレオチド由来のシグナル配列をコード
し、かつブタGHRHタンパク質の1-29アミノ酸をコードし
ているポリヌクレオチド配列を含むプラスミドを、下記
のように作出した。適当な189bp DNA 断片を、プラスミ
ドpGHRH-4 から、BamHI 部位を有するプライマーGHRH-5
( 配列番号：11) 及びBglII 部位を有するプライマーGH
RH-6 (配列番号：12) を使ってPCR-増幅した。このPCR-
増幅された断片を、BamHI 及びBglII 酵素で消化し、か
つBamHI 及びBglII 酵素で消化したプラスミドpVRI012
(Vical 、サンディエゴ、CA) にクローニングし、プラ
スミドGHRH1 -29WTCMV( 配列番号：51) を作出し、ここ
ではGHRH 1-29 タンパク質の発現は、CMV IEプロモータ
ー／エンハンサー配列によって駆動された。
【０１３９】7. pGHRH1-29YWTCMV 酵素分解（例えばDPPIV 酵素分解）に対する安定性が増
加した新規GHRHタンパク質変異体を作出するために、ヒ
トGHRHのシグナル配列をコードしているポリヌクレオチ
ド配列及び変更された1-29ブタGHRHタンパク質を含むプ
ラスミドを作出した。この変更は、天然のブタGHRH 1-2
9 の第一のチロシン残基の直前への余分なチロシン残基
の付加からなる。この修飾は、アミノ末端を変更し、最
早DPPIV酵素によって認識も切断もされなくなる。この
変異GHRHタンパク質の遺伝子を含むプラスミドを下記の
ように作出した。
【０１４０】重なっているオリゴヌクレオチドのセット
（配列番号：13-25 ）を合成し、混合し、かつGHRHをPC
R 法を用いて増幅した。PCR 反応は、チロシン残基をコ
ードしているヌクレオチドがGHR(1-29) のコード配列の
すぐ5'側に挿入され、更にBamHI(5'末端) 及びBglII(3'
末端) 部位を含む、GHRHのアミノ酸1-29をコードしてい
る約192bp の断片を形成した。その後192bp 断片をBamH
I 及びBglII 酵素で消化し、BamHI 及びBglII 酵素で消
化されたプラスミドpVR1012 にクローニングし、プラス
ミドGHRH1-29YWTCMV( 配列番号：52) を作出し、ここで
はGHRH1-29( ここでは30) の発現は、CMV IEプロモータ
ーエンハンサーエレメントによって駆動される。
【０１４１】8. pGHRH1-29YWTSK685 前記セクション５記載の192bp 断片を含むプラスミド
を、SK685 プロモーター断片の制御下で、下記のように
作出した。192bp 断片を、２種のプライマー5'末端Hind
III 部位を含むp99-S1( 配列番号：26) 及び3'末端XbaI
部位を含むp99-A214( 配列番号：27) を用いて増幅し
た。その後PCR-増幅した断片を、HindIII 及びXbaI酵素
で切断し、かつHindIII 及びXbaI酵素で消化したプラス
ミドGHRH1-29 Yala 1522SK685(下記参照) にクローニン
グし、プラスミドGHRH1-29YWTSK685( 配列番号：53) を
作出した。
【０１４２】9. pGHRH1-29YWTSK2014 前記セクション５に記された192bp 断片を含むプラスミ
ドを、SK2014プロモーター断片の制御下で、下記のよう
に作出した。192bp 断片を、２種のプライマー5'末端Hi
ndIII 部位を含むp99-S1( 配列番号：28) 及び3'末端Xb
aI部位を含むp99-A214( 配列番号：29) を用いて増幅し
た。その後PCR-増幅した断片を、HindIII 及びXbaI酵素
で切断し、かつHindIII 及びXbaI酵素で消化したプラス
ミドGHRH1-29 Yala 1522SK2014( 下記参照) にクローニ
ングし、プラスミドGHRH1-29YWTSK2014(配列番号：54)
を作出した。
【０１４３】10. pGHRH 1-29YAla1522CMV 酵素分解（例えばDPPIV 酵素によるもの）に対する安定
性を増強しかつ効力を増強したGHRHタンパク質の新規変
異を作出するために、ヒトGHRHのシグナル配列及び変更
された1-29ブタGHRHタンパク質を含むプラスミドを作出
した。この変更は、天然のブタGHRH 1-29 配列の第一の
チロシン残基の直前への余分なチロシン残基の付加、並
びに15位グリシン及び22位ロイシンのアラニンへの置換
からなる。これらの修飾は、GHRH1-29のアミノ末端を変
更し、最早DPPIV 酵素によって認識も切断もされなくな
り、かつ修飾されたタンパク質は29-44 アミノ酸GHRHタ
ンパク質に比べて効力が増している。この変異GHRHタン
パク質の遺伝子を含むプラスミドを下記のように作出し
た。
【０１４４】重なっているオリゴヌクレオチドのセット
（配列番号：30-42 ）を合成し、混合し、かつPCR 法を
用いて増幅した。PCR 反応は、BamHI(5'末端) 及びBglI
I(3'末端) 部位を含む、およそ192bp の断片の形成を生
じ、ここではチロシンをコードしている余分の３個のヌ
クレオチドが、GHRH1-29配列の1 位の天然のチロシンを
コードしているヌクレオチド配列のすぐ5'側に挿入され
ている。
【０１４５】更にこの変更は、アラニンをコードしてい
る3 個のヌクレオチドによる15位のグリシンをコードし
ている3 ヌクレオチドの置換、並びに22位のロイシンを
コードしている３個のヌクレオチドのアラニンをコード
している３個のヌクレオチドによる置換を含んでいる。
次に192bp 断片をBamHI 及びBglII 酵素で消化し、BamH
I 及びBglII 酵素で消化されたプラスミドpVR1012 にク
ローニングし、プラスミドGHRH1-29YAla 1522CMVを作出
し、ここでは変異GHRH1-29( ここでは30) の発現は、CM
V IEプロモーターエンハンサーエレメント( 配列番号：
55) によって駆動されている。
【０１４６】11. pGHRH1-29YAla 15225K685 前記のGHRH1-29YAla 1522 断片を含むプラスミドを、SK
685 プロモーター断片の制御下で、下記のように作出し
た。前記セクション８に記載されたようなおよそ192bp
断片を、5'末端にHindIII部位を有するプライマーp99-S
1( 配列番号：26) 及び3'末端にXbaI部位を有するプラ
イマーp99-A214 (配列番号：27) によりPCR-増幅した。
【０１４７】PCR-増幅された断片を、HindIII 及びXbaI
酵素により消化し、かつHindIII 及びXbaI酵素により消
化されたプラスミドpGL3(Promega) へクローニングし、
プラスミドGHRH1-29YAla 1522SK(配列番号：56) を作出
した。ブタのα−骨格筋アクチンプロモーターの一部に
相当する685bp 断片を、プライマーSK-3(KpnI 部位)及
びSK-4(HindIII部位) を用いて、ブタゲノムDNA からPC
R-増幅した。この断片は、SK685 と称した。その後PCR-
増幅したSK685 プロモーター断片を、KpnI及びHindIII
酵素で消化したプラスミドGHRH1-29YAla 1522SK にクロ
ーニングし、プラスミドGHRH1-29YA1a 1522SK685( 配列
番号：57) を作出した。
【０１４８】12. pGHRH1-29Yala1522SK2014 前述のGHRH1-29YAla 1522 断片を含むプラスミドを、SK
2014プロモーター断片の制御下で、下記のように作出し
た。前記セクション８に記載されたようなおよそ192bp
断片を、5'末端にHindIII部位を有するプライマーp99-S
1 (配列番号：26) 及び3'末端にXbaI部位を有するプラ
イマーp99-A214 (配列番号：27) によりPCR-増幅した。
PCR-増幅された断片を、HindIII 及びXbaI酵素により消
化し、かつHindIII 及びXbaI酵素により消化されたプラ
スミドpGL3(Promega) へクローニングし、プラスミドGH
RH1-29YAla 1522SK(配列番号：56) を作出した。
【０１４９】ブタのα−骨格筋アクチンプロモーターの
一部に相当する2014bp断片を、プライマーSK-7(KpnI 部
位) 及びSK-8(HindIII部位) を用いて、ブタゲノムDNA
からPCR-増幅した。この断片は、SK2014と称した。その
後PCR-増幅したSK2014プロモーター断片を、KpnI及びHi
ndIII 酵素で消化したプラスミドGHRH1-29YAla 1522SK
にクローニングし、プラスミドGHRH1-29YA1a 1522SK201
4(配列番号：58) を作出した。
【０１５０】13. pGHRH1-44YWTCMV 酵素分解（例えばDPPIV 酵素によるもの）に対する安定
性を増強したGHRHタンパク質の新規変異を作出するため
に、ヒトGHRHのシグナル配列及び変更された1-44ブタGH
RHタンパク質を含むプラスミドを作出した。この変更
は、天然のブタGHRH 1-44 配列の第一のチロシン残基を
コードしているヌクレオチド配列のすぐ5'側に余分なチ
ロシン残基の付加からなる。これらの修飾は、アミノ末
端を変更し、最早DPPIV 酵素によって認識も切断もされ
なくなった。この修飾されたGHRHタンパク質の遺伝子を
含むプラスミドを下記のように作出した。
【０１５１】消化されたプライマーセットGHRH-1( 配列
番号：61) 及びGHRH-3( 配列番号：65) をPCR 反応にお
いて使用し、pGHRH1-29YWTCMV からヒトGHRHシグナル配
列及びブタGHRHを増幅した。得られるGHRH断片を、BamH
I 及びBglII で消化し、かつプラスミドpVR1012(Vical
、サンディエゴ、CA) のBamHI 部位にクローニング
し、プラスミドGHRH1-44YWTCMV( 配列番号：59) を作出
した。
【０１５２】14. GH構築物の合成 成長ホルモン疾病の治療に適し、かつ動物の健康及び繁
殖を増強するGH遺伝子を含むプラスミド構築物を提供す
るために、本発明のプラスミドの構築及びそれらの使用
法を以下に詳細に記す。イヌのGH遺伝子を、下記手順に
より、本発明の様々な態様に適したプラスミドベクター
にクローニングした。総RNA を、Biotecx Laboratories
（ヒューストン、TX）の試薬及び手順を用いRNAzol B法
によりイヌの下垂体から調製した。
【０１５３】簡単に述べると、RNase-非含有のガラス製
ホモジナイザーに入れたRNAzol B溶液2ml 中で組織約0.
15mgをホモジナイズした。その後材料を２つに等分し、
かつRNA をクロロホルムで抽出し及びエタノール沈殿し
た。核酸ペレット乾燥し、RNase-非含有の水に溶解し
た。Perkin-Elmer（ノーウォーク、CT）から購入したRT
-PCRキットを使って、総RNA の逆転写(RT)を、容量20ml
で、RNA 0.02mg、オリゴ#2( 配列番号：43)138pmol、Mn
Cl2 1mM 、及び推奨量のdNTP及びrTth酵素を用いて行っ
た。この反応は、Perkin-Elmer Thermalサイクラーの中
で、70℃で11分間行った。
【０１５４】次に、完了した(RT)反応物にPCR を行うた
めに、RT-PCR反応キットのオリゴ#1( 配列番号：44)66p
mol 、MgCl2 2.5mM 、及びキレートバッファーを添加し
た。PCR 条件は次のようなものであった：94℃、1 分
間；55℃、 1分間；及び72℃、2 分間；32サイクル。得
られた約0.7kb PCR-増幅したDNA 断片を、Stratagene
（ラホヤ、CA）から購入したプラスミドpCRScript に、
製造業者の指示に従いクローニングした。
【０１５５】こうして作製した組換えプラスミドは、cC
G-SPと称した。挿入断片を部分的に配列決定し、成長ホ
ルモン(¨GH¨)DNA 配列を含むことを確認した。その後
cGH-SPプラスミドDNA を鋳型として使用し、Perkin-Elm
er のPCR システムキットの試薬を使い、オリゴヌクレ
オチドであるオリゴ#3( 配列番号：45) 及びオリゴ#4(
配列番号：46) を用いて、標準の手順及び以下のサイク
ル条件を使ってPCR-増幅した：94℃、1 分、1 サイク
ル；94℃、30秒；55℃、30秒；72℃、1 分；30サイク
ル。得られた約0.7kb PCR-増幅したDNA 断片を、カラム
精製し(Qiagen 、チャトワース、CA) 、及び常法により
制限酵素EcoRV 及びBglII で消化した(Sambrook ら、19
89) 。
【０１５６】消化したPCR 断片を、多クローンサイトを
lacZ遺伝子の適所に持つように操作したpCMVb (Clontec
h 、パロアルト、CA) のプラスミド誘導体であるpCMV-M
CSをEcoRV-BglII で消化したものに連結した。この連結
産物を使ってE. coli を形質転換し、形質転換体をアン
ピシリン(pCMV-MCS がコードしたマーカー) 耐性につい
て選択した。
【０１５７】形質転換体を、プラスミドDNA 調製物及び
制限部位分析により分析し、かつpCMV-MCS 中のGH DNA
配列のクローンを単離した(pCGH#9 と称す) 。挿入配列
は常法により完全に配列決定し、GH DNA配列が存在する
ことを確認した。同じくpCGH#9 からEcoRV-BglII GH
断片も、遺伝子治療用プラスミドVR1012（Vical 、サン
ディエゴ、CAから得た）へとサブクローニングした。こ
のクローンをpC51と称した。
【０１５８】15. GH-GHRH 構築物の合成 GHのカルボキシ末端の20個のアミノ酸及び完全な長さの
野生型GHRHを含むGH-GHRH 融合タンパク質を作出した。
完全な長さのGHRH遺伝子を、プラスミドpGHRH-4 から、
２種のプライマーBglII 部位を有するGHRH-1 (配列番
号：61) 及びBamHI 部位を有するGHRH-2( 配列番号：6
2) を用いて、PCR 増幅した。その後PCR-増幅した断片
を、pVR1012 プラスミドのBamHI 部位にクローニングし
た。GHのカルボキシ末端アミノ酸172-191 をコードして
いる２種の相補オリゴヌクレオチド（GH-1オリゴ；配列
番号：62及びGH-2オリゴ；配列番号：63）を合成した。
GH-1及びGH-2オリゴヌクレオチドを、アニーリングし、
かつ完全な長さのGHRH遺伝子を含むpVR1012 プラスミド
のBamHI 部位にクローニングし、pGHRH1-44WTGHpep (配
列番号：60) を作出した。
【０１５９】16. GHRH発現レベルを評価するin vitro試
験 pGHRH-4 からのGHRH発現レベルを評価するために、この
プラスミド又はpVR1012 を、遺伝子融合(fugene)試薬(B
oehringer Ingelheim)を製造業者の指示に従って用いて
、C2C12 マウスの筋原細胞にトランスフェクションし
た。トランスフェクションした又はしない細胞から様々
な時点で収集した上清を、市販のラジオイムノアッセイ
キット(Pennisula Laboratories)を用いてGHRHの存在に
ついてアッセイした。図5 に示した結果は、GHRH生産が
トランスフェクション後24時間検出されたことが示され
た。
【０１６０】17. ブタの成長に対するGHプラスミド注射
の作用 ブタの成長に対するGH遺伝子を含有するプラスミドの単
回注射の作用を評価するために、異なる年齢のブタに対
するGH処置の作用を評価する実験を、以下に記した実験
デザインに従い実施した。材料及び方法 36匹の雌雄の3-週齢( 離乳) の交雑育種した（ヨークシ
ャー×ランドレース）ブタを、実験畜舎で育種し、3 週
間馴化させた。動物を、処置群別に追込畜舎（2 ／追込
畜舎）で飼育した。動物には、医薬品非含有市販のブタ
用飼料を毎日自在摂取させ飼養し（体重45kgまではタン
パク質16％ペレット、その後屠殺まではタンパク質14％
ペレット）、新鮮な水を自由に摂取させた。
【０１６１】動物を、体重、性別及び同腹子(litter)に
応じて、４処置群のひとつに無作為化した（A-D ；表
１）。A 群の動物8 匹には、6 週齢目にGH遺伝子を含む
プラスミドを1 回注射した。対照（動物10匹；C 群）に
も、6 週齢目に、空のプラスミドベクターを注射した。
B 群の動物8 匹には、13週齢目にGH遺伝子を含むプラス
ミドを１回注射した。対照（D 群；動物10匹）にも、13
週齢目に空のプラスミドベクターを注射した。飼料の消
費を追込畜舎毎に毎日記録し、動物を屠殺まで毎週連続
２日秤量した。屠殺時に、ロインアイ(loin eye)領域及
び背脂肪について質を調べた。
【０１６２】
【表１】
【０１６３】結果 表２に示したように、GH遺伝子をコードしているプラス
ミドによる6 週齢のブタの処置は、機能の上昇をもたら
した。これは、GH注射した動物対プラセボ注射したブタ
の間で、体重増加の5 ％の上昇及び平均日増加(ADG) の
5.1 ％の上昇を示した。更にこのデータは、GHプラスミ
ド注射は、飼料効率（体重増加に対する消費した飼料の
比）を3.3 ％改善し、更にGHプラスミド注射した動物の
ロインアイ領域を7.2 ％増加したことを示した。
【０１６４】表３のデータは、GH遺伝子をコードしてい
るプラスミド処置した13週齢のブタは、処置した6 週齢
のブタも、同年齢のプラセボ注射した対照と比べた場合
の動物の機能の増加の割合がより大きいことを示した。
これは、GH注射した動物対プラセボ注射したブタの間
で、体重増加の9.5 ％の上昇及び平均日増加(ADG) の9.
3 ％の上昇を示した。更にこのデータは、GHプラスミド
注射は、飼料効率（体重増加に対する消費した飼料の
比）を6.7 ％改善し、更にGHプラスミド注射した動物の
ロインアイ領域を6.8 ％増加したことを示した。従っ
て、動物のGH遺伝子含有プラスミドによる処置は、動物
の成長及び機能の増強をもたらした。
【０１６５】
【表２】
【０１６６】
【表３】 多くの参照文献を引用しているが、そこに記された全て
が参照として本願明細書に組入れられている。本発明の
個々の態様を単に説明することが意図された記載された
具体的な実施態様によって、本発明の範囲が限定される
ものではなく、機能的に同等の方法及び成分は本発明の
範囲内である。本願明細書に示され説明されたものに加
え、実際に本発明の様々な修飾が、前述の説明及び添付
図面から当業者には明らかであろう。このような修飾
は、添付された特許請求の範囲の範囲内に収まることが
意図されている。
【配列表】
【０１６７】 SEQUENCE LISTING <110> PFIZER PRODUCTS INC. <120> GROWTH HORMONE AND GROWTH HORMONE RELEASING HORMONE COMPOSITIONS <130> B005505 <140> US 60/128,830 <141> 1999-04-12 <160> 67 <170> PatentIn Ver. 2.1
【０１６８】 <210> 1 <211> 246 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: oligonucleotide <400> 1 ggatccgcca ccatgccact ctgggtgttc ttctttgtga tcctcaccct cagcaacagc 60 tcccactgct ccccacctcc ccctttgacc ctcaggatgc ggcggtatgc agatgccatc 120 ttcaccaaca gctaccggaa ggtgctgggc cagctgtccg cccgcaagct gctccaggac 180 atcatgagca ggcagcaggg agagagaaac caagagcaag gagcaagggt gcggctttga 240 agatct 246
【０１６９】 <210> 2 <211> 75 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: GHRH protein <400> 2 Met Pro Leu Trp Val Phe Phe Phe Val Ile Leu Thr Leu Ser Asn Ser 1 5 10 15 Ser His Cys Ser Pro Pro Pro Pro Leu Thr Leu Arg Met Arg Arg Tyr 20 25 30 Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln Leu 35 40 45 Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg Gln Gln Gly Glu 50 55 60 Arg Asn Gln Glu Gln Gly Ala Arg Val Arg Leu 65 70 75
【０１７０】 <210> 3 <211> 685 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: obligonucleotide <400> 3 ggtaccatcg ctggggagct gggggagggg tcgccttcct gccctaccca ggactccggg 60 tgcgaccgct cctctatctc tccagcccac caccactcca ccacttggac acgtctccct 120 cctccctgga gtcgctctag agggtttggg ggtctgagta aagaacccga agtagggata 180 cagtgtggcg gcaccttcca gaggccccgg gcgcagggta gaccggggcg gggcggcccg 240 cggacaggtg cagccccagg cgcaggcgca ctcgcgcctc ccggcgcagg cggtgaacct 300 cgccccaccc cagcccctcc ggggggcagc tgggccgggt cgggaggggc ccaccagccc 360 gggagacact ccatatacgg ccaggcccgc tttacctggg ctccggccag gccgctcctt 420 ctttggtcag cacaggggac ccgggcgggg gcccaggccg ctaacccgcc gggggagggg 480 gctccagtgc ccaacaccca aatatggctc gagaagggga gcgacattcc agtgaggcgg 540 ctcgggggga gaacccgcgg gctatataaa acctgagcgt ggggaccagc ggccaccgca 600 gcggacagcg ccgagagaag cctcgcttcc ctcccgcggc gaccagggcc ccagccggag 660 agcagcaggt gtagccacca agctt 685
【０１７１】 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: primer <400> 4 aatcccaagc ttgccaccat gccactctgg 30
【０１７２】 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 5 tattgctcta gatcaaagcc gcacccttgc 30
【０１７３】 <210> 6 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 6 cgggtaccat cgctggggga gctggggcag gggtcgcct 39
【０１７４】 <210> 7 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 7 cccgcttggt ggctacacct gctgctctcc ggctggggcc 40
【０１７５】 <210> 8 <211> 2014 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: SK 2014 <400> 8 ggtaccgcta taggagagaa aagagctgca ctgagcaccc tccttcccct ttaaatgtca 60 acagattagg agtcagtgaa tgacagcaca cctcttgcta ccttagagac caaaatttaa 120 gctactcccc ttaagctata gctagagtgc acctgccagt gtctttagtc cccactgatg 180 gaacaggacc caaggtattg aagatggaac atagttattc attcatcctc taatttaaaa 240 agctggatat gctgtacagc agaaattgac ggaacaatgt aaatcaacta taacagaaga 300 aataaaaacc tggggggaaa gaagctgact atgaaacccc aggagctttc tacatgggcc 360 tggactcacc aaactcttta ttttgtaatg gacttctgac atttttagga agggctgtcc 420 tgatgtgggc tatagaagag ggtttcacat gcttcttcaa gaggacccac actgtcccag 480 ttgctgagtc ccaccaccag atgctagtgg cagctatttg gggaacactt aggcactaca 540 aaaaaatgag tgattccatt ctggctcaca ccatatccct gatgtacccc ttaaagcatg 600 tcactgagtt catcacagaa aattgtttcc cctgtgcctt ccacaacaag gttagagctg 660 tccttggggc caggggaagg gggcagggag tgagaagcac caactggata acctcctctg 720 acccccactc caccttacca taagtagatc caaatccttc tagaaaatta ggaaggcata 780 tccccatata tcagcgatat aaatagaact gcttcagcgc tctggtagac ggtgactctc 840 caaggtggac tgggaggcag cctggccttg gctgggcatc gtcctctaaa tagaaagatg 900 aacttgttca gcctttccag aaggaaaact gctgcccagc ctacagtgca acgtccttgt 960 cttccatctg gaggaagcac gggtgacata tcatctagta agggcacctc tctgtttcca 1020 cctccaggtc gaggggtgtg acccttactt ctcagcctca agggagggac actcaacycc 1080 ccaaaaagac atgagggcgc tcagctcggc ccaccgcacc ccggaccgga gccgtcaccc 1140 cccgaaattc actcccttca caagccccca agcgcgttct ctggtgcgga ctgctccggg 1200 gccctggctt tgtgcccagc gttgtcagag ccaccgccct gagcctgtcc ccgggagccc 1260 cgcgcctcct cccaccgctc crctctcgcg ccccgcggcc agttgtctgc cccgagacag 1320 ctgcgcgccc tcccgctgcc ggtggccctc tccggtgggg gtggggaccg acagggtcag 1380 ccctccggat ccggggcgct ccgggtagcg gggagaagtg atcgctgggg agctggggga 1440 ggggtcgcct tcctgcccta cccaggactc cgggtgcgac cgctcctcta tctctccagc 1500 ccaccaccac tccaccactt ggacacgtct ccctcctccc tggagtcgct ctagagggtt 1560 tgggggtctg agtaaagaac ccgaagtagg gatacagtgt ggcggcacct tccagaggcc 1620 ccgggcgcag ggtagaccgg ggcggggcgg cccgcggaca ggtgcagccc caggcgcagg 1680 cgcactcgcg cctcccggcg caggcggtga acctcgcccc accccagccc ctccgggggg 1740 cagctgggcc gggtcgggag gggcccacca gcccgggaga cactccatat acggccaggc 1800 ccgctttacc tgggctccgg ccaggccgct ccttctttgg tcagcacagg ggacccgggc 1860 gggggcccag gccgctaacc cgccggggga gggggctcca gtgcccaaca cccaaatatg 1920 gctcgagaag gggagcgaca ttccagtgag gcggctcggg gggagaaccc gcgggctata 1980 taaaacctga gcgtggggac cagcggccaa gctt 2014
【０１７６】 <210> 9 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 9 cccaagcttg gccgctggtc cccacgctca 30
【０１７７】 <210> 10 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 10 caggtaccgc tataggagac aaaagagtgc actgagca 38
【０１７８】 <210> 11 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 11 agatatcccg gccgctctag accaggcccc tggatccgcc accatg 46
【０１７９】 <210> 12 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 12 gaagatctct acctgctcat gatgtcctgg agcagcttgc gggc 44
【０１８０】 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 13 gtcattccga gattcggata 20
【０１８１】 <210> 14 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 14 gtcattccga gattcggata cacaggatcc gccaccatcc 40
【０１８２】 <210> 15 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 15 cactctgggt gttcttcttt gtgatcctca ccctcagcaa 40
【０１８３】 <210> 16 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 16 cagctcccac tgctccccac ctcccccttt gaccctcagg 40
【０１８４】 <210> 17 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 17 atgcggcggt attatgcaga tgccatcttc accaacagct 40
【０１８５】 <210> 18 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 18 accggaaggt gctgggccag ctgtccgccc gcaagctcct 40
【０１８６】 <210> 19 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 19 ccaggacatc atgagcaggt agagatctga taagcgttat 40
【０１８７】 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 20 ataacgctta tcagatctct 20
【０１８８】 <210> 21 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 21 acctgctcat gatgtcctgg accagcttgc gggcggacag 40
【０１８９】 <210> 22 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 22 ctggcccagc accttccggt agctgttggt gaagatggca 40
【０１９０】 <210> 23 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 23 tctgcataat accgccgcat cctgagggtc aaacccccag 40
【０１９１】 <210> 24 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 24 gtggggagca gtgggagctg ttgctgaggg tgaggatcac 40
【０１９２】 <210> 25 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 25 gtggggagca gtgggagctg ttgctgaggg tcaggatcac 40
【０１９３】 <210> 26 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 26 gagctcaagc ttgccaccat gccactctgg 30
【０１９４】 <210> 27 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 27 aagatctaga ctacctgctc atgatgtc 28
【０１９５】 <210> 28 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 28 gagctcaagc ttgccaccat gccactctgg 30
【０１９６】 <210> 29 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 29 aagatctaga ctacctgctc atgatgtc 28
【０１９７】 <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 30 gtcattccga gattcggata 20
【０１９８】 <210> 31 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 31 gtcattccga gattcggata cacaggatcc gccaccatcc 40
【０１９９】 <210> 32 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 32 cactctgggt gttcttcttt gtgatcctca ccctcagcaa 40
【０２００】 <210> 33 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 33 cagctccact gctccccacc tccccctttg accctcagg 39
【０２０１】 <210> 34 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 34 atgcggcggt attatgcaga tcccatcttc accaacagct 40
【０２０２】 <210> 35 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 35 accggaaggt gctggcccag ctgtccgccc gcaaggccct 40
【０２０３】 <210> 36 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 36 ccaggacatc atgagcaggt agagatctga taagcgttat 40
【０２０４】 <210> 37 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 37 ataacgctta tcagatctct 20
【０２０５】 <210> 38 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 38 acctgctcat gatgtcctgg agggccttgc gggcccacag 40
【０２０６】 <210> 39 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 39 ctgggccagc accttccggt acctgttggt gaagatggca 40
【０２０７】 <210> 40 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 40 tctccataat accgccgcat cctgagggtc aaagggggag 40
【０２０８】 <210> 41 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 41 gtggggagca gtgggagctg ttgctgaggg tgaggatcac 40
【０２０９】 <210> 42 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 42 gtggggagca gtgggagctc ttgctgaggg tgaggatcac 40
【０２１０】 <210> 43 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 43 ctagaaggca cagctgcttt ccacg 25
【０２１１】 <210> 44 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 44 atggctgcag gcccccggac ctctg 25
【０２１２】 <210> 45 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 45 aaagatatca tggctgcagg cccccgg 27
【０２１３】 <210> 46 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 46 aaaagatctc tagaaggcac agctgct 27
【０２１４】 <210> 47 <211> 5185 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH-4 construct <400> 47 gctgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc 60 ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt 120 ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat 180 tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatgggtac ccaggtgctg 240 aagaattgac ccggttcctc ctgggccaga aagaagcagg cacatcccct tctctgtgac 300 acaccctgtc cacgcccctg gttcttagtt ccagccccac tcataggaca ctcatagctc 360 aggagggctc cgccttcaat cccacccgct aaagtacttg gagcggtctc tccctccctc 420 atcagcccac caaaccaaac ctagcctcca agagtgggaa gaaattaaag caagataggc 480 tattaagtgc agagggagag aaaatgcctc caacatgtga ggaagtaatg agagaaatca 540 tagaatttct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 600 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 660 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 720 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 780 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 840 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 900 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 960 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 1020 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 1080 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 1140 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 1200 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 1260 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 1320 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 1380 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 1440 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 1500 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 1560 cggggggggg gggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc 1620 ctgaatcgcc ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt 1680 gtaggtggac cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 1740 gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg 1800 ccgtcccgtc aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat 1860 tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata 1920 ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat 1980 aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct 2040 attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact 2100 gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc aacaggccag 2160 ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc 2220 gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa 2280 tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga atcaggatat 2340 tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca 2400 tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt cagccagttt 2460 agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg tttcagaaac 2520 aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga ttgcccgaca 2580 ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt taatcgcggc 2640 ctcgagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac cccttgtatt actgtttatg 2700 taagcagaca gttttattgt tcatgatgat atatttttat cttgtgcaat gtaacatcag 2760 agattttgag acacaacgtg gctttccccc cccccccatt attgaagcat ttatcagggt 2820 tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt 2880 ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca 2940 ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc ctcgcgcgtt tcggtgatga 3000 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga 3060 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg 3120 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat 3180 accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcagattg gctattggcc attgcatacg 3240 ttgtatccat atcataatat gtacatttat attggctcat gtccaacatt accgccatgt 3300 tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc 3360 ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc 3420 aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg 3480 actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat 3540 caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc 3600 tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta 3660 ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag 3720 cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt 3780 tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa 3840 atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt 3900 cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga 3960 tccagcctcc gcggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac 4020 gtaagtaccg cctatagact ctataggcac acccctttgg ctcttatgca tgctatactg 4080 tttttggctt ggggcctata cacccccgct tccttatgct ataggtgatg gtatagctta 4140 gcctataggt gtgggttatt gaccattatt gaccactccc ctattggtga cgatactttc 4200 cattactaat ccataacatg gctctttgcc acaactatct ctattggcta tatgccaata 4260 ctctgtcctt cagagactga cacggactct gtatttttac aggatggggt cccatttatt 4320 atttacaaat tcacatatac aacaacgccg tcccccgtgc ccgcagtttt tattaaacat 4380 agcgtgggat ctccacgcga atctcgggta cgtgttccgg acatgggctc ttctccggta 4440 gcggcggagc ttccacatcc gagccctggt cccatgcctc cagcggctca tggtcgctcg 4500 gcagctcctt gctcctaaca gtggaggcca gacttaggca cagcacaatg cccaccacca 4560 ccagtgtgcc gcacaaggcc gtggcggtag ggtatgtgtc tgaaaatgag cgtggagatt 4620 gggctcgcac ggctgacgca gatggaagac ttaaggcagc ggcagaagaa gatgcaggca 4680 gctgagttgt tgtattctga taagagtcag aggtaactcc cgttgcggtg ctgttaacgg 4740 tggagggcag tgtagtctga gcagtactcg ttgctgccgc gcgcgccacc agacataata 4800 gctgacagac taacagactg ttcctttcca tgggtctttt ctgcagtcac cgtcgtcgac 4860 acgtgtgatc agatatcgcg gccgctctag accaggcgcc tggatccgcc accatgccac 4920 tctgggtgtt cttctttgtg atcctcaccc tcagcaacag ctcccactgc tccccacctc 4980 cccctttgac cctcaggatg cggcggtatg cagatgccat cttcaccaac agctaccgga 5040 aggtgctggg ccagctgtcc gcccgcaagc tgctccagga catcatgagc aggcagcagg 5100 gagagagaaa ccaagagcaa ggagcaaggg tgcggctttg aagatcttag tagtagtagg 5160 cggccgctct agaggatcca gatct 5185
【０２１５】 <210> 48 <211> 3369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-44SK construct <400> 48 ggtaccgagc tcttacgcgt gctagcccgg gctcgagatc tgcgatctaa gtaagcttgc 60 caccatgcca ctctgggtgt tcttctttgt gatcctcacc ctcagcaaca gctcccactg 120 ctccccacct ccccctttga ccctcaggat gcggcggtat gcagatgcca tcttcaccaa 180 cagctaccgg aaggtgctgg gccagctgtc cgcccgcaag ctgctccagg acatcatgag 240 caggcagcag ggagagagaa accaagagca aggagcaagg gtgcggcttt gatctagagt 300 cggggcggcc ggccgcttcg agcagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc 360 acaactagaa tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta 420 tttgtaacca ttataagctg caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg 480 tttcaggttc agggggaggt gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt 540 ggtaaaatcg ataaggatcc gtcgaccgat gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc 600 cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt cgccgcactt atgactgtct tctttatcat 660 gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc 720 gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat 780 ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca 840 ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc 900 atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc 960 aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg 1020 gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcaatgc tcacgctgta 1080 ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg 1140 ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac 1200 acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag 1260 gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat 1320 ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat 1380 ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc 1440 gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt 1500 ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct 1560 agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt 1620 ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc 1680 gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac 1740 catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat 1800 cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg 1860 cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata 1920 gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta 1980 tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt 2040 gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag 2100 tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa 2160 gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc 2220 gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt 2280 taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc 2340 tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta 2400 ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa 2460 taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca 2520 tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac 2580 aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgcgccc tgtagcggcg 2640 cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc 2700 tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc 2760 gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg 2820 accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg 2880 tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg 2940 gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt 3000 cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa 3060 tattaacgtt tacaatttcc cattcgccat tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgat 3120 cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc ccaagctacc atgataagta agtaatatta 3180 aggtacggga ggtacttgga gcggccgcaa taaaatatct ttattttcat tacatctgtg 3240 tgttggtttt ttgtgtgaat cgatagtact aacatacgct ctccatcaaa acaaaacgaa 3300 acaaaacaaa ctagcaaaat aggctgtccc cagtgcaagt gcaggtgcca gaacatttct 3360 ctatcgata 3369
【０２１６】 <210> 49 <211> 3976 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-44WTSK685 construct <400> 49 ggtaccatcg ctggggagct gggggagggg tcgccttcct gccctaccca ggactccggg 60 tgcgaccgct cctctatctc tccagcccac caccactcca ccacttggac acgtctccct 120 cctccctgga gtcgctctag agggtttggg ggtctgagta aagaacccga agtagggata 180 cagtgtggcg gcaccttcca gaggccccgg gcgcagggta gaccggggcg gggcggcccg 240 cggacaggtg cagccccagg cgcaggcgca ctcgcgcctc ccggcgcagg cggtgaacct 300 cgccccaccc cagcccctcc ggggggcagc tgggccgggt cgggaggggc ccaccagccc 360 gggagacact ccatatacgg ccaggcccgc tttacctggg ctccggccag gccgctcctt 420 ctttggtcag cacaggggac ccgggcgggg gcccaggccg ctaacccgcc gggggagggg 480 gctccagtgc ccaacaccca aatatggctc gagaagggga gcgacattcc agtgaggcgg 540 ctcgggggga gaacccgcgg gctatataaa acctgagcgt ggggaccagc ggccaccgca 600 gcggacagcg ccgagagaag cctcgcttcc ctcccgcggc gaccagggcc ccagccggag 660 agcagcaggt gtagccacca agcttgccac catgccactc tgggtgttct tctttgtgat 720 cctcaccctc agcaacagct cccactgctc cccacctccc cctttgaccc tcaggatgcg 780 gcggtatgca gatgccatct tcaccaacag ctaccggaag gtgctgggcc agctgtccgc 840 ccgcaagctg ctccaggaca tcatgagcag gcagcaggga gagagaaacc aagagcaagg 900 agcaagggtg cggctttgat ctagagtcgg ggcggccggc cgcttcgagc agacatgata 960 agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt 1020 tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt 1080 aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt 1140 taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt aaaatcgata aggatccgtc gaccgatgcc 1200 cttgagagcc ttcaacccag tcagctcctt ccggtgggcg cggggcatga ctatcgtcgc 1260 cgcacttatg actgtcttct ttatcatgca actcgtagga caggtgccgg cagcgctctt 1320 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag 1380 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca 1440 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt 1500 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc 1560 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct 1620 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg 1680 tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca 1740 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact 1800 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta 1860 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta 1920 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct 1980 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt 2040 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga 2100 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca 2160 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat 2220 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg 2280 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt 2340 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag 2400 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc 2460 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag 2520 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca 2580 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa 2640 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga 2700 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata 2760 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca 2820 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg 2880 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg 2940 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg 3000 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag 3060 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac 3120 tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca 3180 tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag 3240 tgccacctga cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca 3300 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct 3360 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt 3420 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac 3480 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct 3540 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt 3600 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac 3660 aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac aatttcccat tcgccattca 3720 ggctgcgcaa ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc ttcgctatta cgccagccca 3780 agctaccatg ataagtaagt aatattaagg tacgggaggt acttggagcg gccgcaataa 3840 aatatcttta ttttcattac atctgtgtgt tggttttttg tgtgaatcga tagtactaac 3900 atacgctctc catcaaaaca aaacgaaaca aaacaaacta gcaaaatagg ctgtccccag 3960 tgcaagtgca ggtgcc 3976
【０２１７】 <210> 50 <211> 5325 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-44WTSK2014 construct <400> 50 ggtaccgcta taggagagaa aagagctgca ctgagcaccc tccttcccct ttaaatgtca 60 acagattagg agtcagtgaa tgacagcaca cctcttgcta ccttagagac caaaatttaa 120 gctactcccc ttaagctata gctagagtgc acctgccagt gtctttagtc cccactgatg 180 gaacaggacc caaggtattg aagatggaac atagttattc attcatcctc taatttaaaa 240 agctggatat gctgtacagc agaaattgac ggaacaatgt aaatcaacta taacagaaga 300 aataaaaacc tggggggaaa gaagctgact atgaaacccc aggagctttc tacatgggcc 360 tggactcacc aaactcttta ttttgtaatg gacttctgac atttttagga agggctgtcc 420 tgatgtgggc tatagaagag ggtttcacat gcttcttcaa gaggacccac actgtcccag 480 ttgctgagtc ccaccaccag atgctagtgg cagctatttg gggaacactt aggcactaca 540 aaaaaatgag tgattccatt ctggctcaca ccatatccct gatgtacccc ttaaagcatg 600 tcactgagtt catcacagaa aattgtttcc cctgtgcctt ccacaacaag gttagagctg 660 tccttggggc caggggaagg gggcagggag tgagaagcac caactggata acctcctctg 720 acccccactc caccttacca taagtagatc caaatccttc tagaaaatta ggaaggcata 780 tccccatata tcagcgatat aaatagaact gcttcagcgc tctggtagac ggtgactctc 840 caaggtggac tgggaggcag cctggccttg gctgggcatc gtcctctaaa tagaaagatg 900 aacttgttca gcctttccag aaggaaaact gctgcccagc ctacagtgca acgtccttgt 960 cttccatctg gaggaagcac gggtgacata tcatctagta agggcacctc tctgtttcca 1020 cctccaggtc gaggggtgtg acccttactt ctcagcctca agggagggac actcaacccc 1080 ccaaaaagac atgagggcgc tcagctcggc ccaccgcacc ccggaccgga gccgtcaccc 1140 cccgaaattc actcccttca caagccccca agcgcgttct ctggtgcgga ctgctccggg 1200 gccctggctt tgtgcccagc gttgtcagag ccaccgccct gagcctgtcc ccgggagccc 1260 cgcgcctcct cccaccgctc cgctctcgcg ccccgcggcc agttgtctgc cccgagacag 1320 ctgcgcgccc tcccgctgcc ggtggccctc tccggtgggg gtggggaccg acagggtcag 1380 ccctccggat ccggggcgct ccgggtagcg gggagaagtg atcgctgggg agctggggga 1440 ggggtcgcct tcctgcccta cccaggactc cgggtgcgac cgctcctcta tctctccagc 1500 ccaccaccac tccaccactt ggacacgtct ccctcctccc tggagtcgct ctagagggtt 1560 tgggggtctg agtaaagaac ccgaagtagg gatacagtgt ggcggcacct tccagaggcc 1620 ccgggcgcag ggtagaccgg ggcggggcgg cccgcggaca ggtgcagccc caggcgcagg 1680 cgcactcgcg cctcccggcg caggcggtga acctcgcccc accccagccc ctccgggggg 1740 cagctgggcc gggtcgggag gggcccacca gcccgggaga cactccatat acggccaggc 1800 ccgctttacc tgggctccgg ccaggccgct ccttctttgg tcagcacagg ggacccgggc 1860 gggggcccag gccgctaacc cgccggggga gggggctcca gtgcccaaca cccaaatatg 1920 gctcgagaag gggagcgaca ttccagtgag gcggctcggg gggagaaccc gcgggctata 1980 taaaacctga gcgtggggac cagcggccaa gcttgccacc atgccactct gggtgttctt 2040 ctttgtgatc ctcaccctca gcaacagctc ccactgctcc ccacctcccc ctttgaccct 2100 caggatgcgg cggtatgcag atgccatctt caccaacagc taccggaagg tgctgggcca 2160 gctgtccgcc cgcaagctgc tccaggacat catgagcagg cagcagggag agagaaacca 2220 agagcaagga gcaagggtgc ggctttgatc tagagtcggg gcggccggcc gcttcgagca 2280 gacatgataa gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca gtgaaaaaaa 2340 tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt gctttatttg taaccattat aagctgcaat 2400 aaacaagtta acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg ggaggtgtgg 2460 gaggtttttt aaagcaagta aaacctctac aaatgtggta aaatcgataa ggatccgtcg 2520 accgatgccc ttgagagcct tcaacccagt cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac 2580 tatcgtcgcc gcacttatga ctgtcttctt tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc 2640 agcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag 2700 cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag 2760 gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc 2820 tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc 2880 agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc 2940 tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt 3000 cgggaagcgt ggcgctttct caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg 3060 ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat 3120 ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag 3180 ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt 3240 ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc 3300 cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta 3360 gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag 3420 atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga 3480 ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa 3540 gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa 3600 tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc 3660 ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga 3720 taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa 3780 gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt 3840 gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg 3900 ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc 3960 aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg 4020 gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag 4080 cactgcataa ttctcttact 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gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc 4980 tgatttaaca aaaatttaac gcgaatttta acaaaatatt aacgtttaca atttcccatt 5040 cgccattcag gctgcgcaac tgttgggaag ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac 5100 gccagcccaa gctaccatga taagtaagta atattaaggt acgggaggta cttggagcgg 5160 ccgcaataaa atatctttat tttcattaca tctgtgtgtt ggttttttgt gtgaatcgat 5220 agtactaaca tacgctctcc atcaaaacaa aacgaaacaa aacaaactag caaaataggc 5280 tgtccccagt gcaagtgcag gtgccagaac atttctctat cgata 5325
【０２１８】 <210> 51 <211> 5108 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29WTCMV construct <400> 51 gctgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc 60 ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt 120 ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat 180 tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatgggtac ccaggtgctg 240 aagaattgac ccggttcctc ctgggccaga aagaagcagg cacatcccct tctctgtgac 300 acaccctgtc cacgcccctg gttcttagtt ccagccccac tcataggaca ctcatagctc 360 aggagggctc cgccttcaat cccacccgct aaagtacttg gagcggtctc tccctccctc 420 atcagcccac caaaccaaac ctagcctcca agagtgggaa gaaattaaag caagataggc 480 tattaagtgc agagggagag aaaatgcctc caacatgtga ggaagtaatg agagaaatca 540 tagaatttct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 600 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 660 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 720 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 780 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 840 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 900 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 960 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 1020 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 1080 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 1140 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 1200 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 1260 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 1320 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 1380 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 1440 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 1500 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 1560 cggggggggg gggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc 1620 ctgaatcgcc ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt 1680 gtaggtggac cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 1740 gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg 1800 ccgtcccgtc aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat 1860 tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata 1920 ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat 1980 aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct 2040 attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact 2100 gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc aacaggccag 2160 ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc 2220 gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa 2280 tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga atcaggatat 2340 tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca 2400 tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt cagccagttt 2460 agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg tttcagaaac 2520 aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga ttgcccgaca 2580 ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt taatcgcggc 2640 ctcgagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac cccttgtatt actgtttatg 2700 taagcagaca gttttattgt tcatgatgat atatttttat cttgtgcaat gtaacatcag 2760 agattttgag acacaacgtg gctttccccc cccccccatt attgaagcat ttatcagggt 2820 tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt 2880 ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca 2940 ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc ctcgcgcgtt tcggtgatga 3000 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga 3060 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg 3120 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat 3180 accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcagattg gctattggcc attgcatacg 3240 ttgtatccat atcataatat gtacatttat attggctcat gtccaacatt accgccatgt 3300 tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc 3360 ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc 3420 aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg 3480 actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat 3540 caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc 3600 tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta 3660 ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag 3720 cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt 3780 tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa 3840 atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt 3900 cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga 3960 tccagcctcc gcggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac 4020 gtaagtaccg cctatagact ctataggcac acccctttgg ctcttatgca tgctatactg 4080 tttttggctt ggggcctata cacccccgct tccttatgct ataggtgatg gtatagctta 4140 gcctataggt gtgggttatt gaccattatt gaccactccc ctattggtga cgatactttc 4200 cattactaat ccataacatg gctctttgcc acaactatct ctattggcta tatgccaata 4260 ctctgtcctt cagagactga cacggactct gtatttttac aggatggggt cccatttatt 4320 atttacaaat tcacatatac aacaacgccg tcccccgtgc ccgcagtttt tattaaacat 4380 agcgtgggat ctccacgcga atctcgggta cgtgttccgg acatgggctc ttctccggta 4440 gcggcggagc ttccacatcc gagccctggt cccatgcctc cagcggctca tggtcgctcg 4500 gcagctcctt gctcctaaca gtggaggcca gacttaggca cagcacaatg cccaccacca 4560 ccagtgtgcc gcacaaggcc gtggcggtag ggtatgtgtc tgaaaatgag cgtggagatt 4620 gggctcgcac ggctgacgca gatggaagac ttaaggcagc ggcagaagaa gatgcaggca 4680 gctgagttgt tgtattctga taagagtcag aggtaactcc cgttgcggtg ctgttaacgg 4740 tggagggcag tgtagtctga gcagtactcg ttgctgccgc gcgcgccacc agacataata 4800 gctgacagac taacagactg ttcctttcca tgggtctttt ctgcagtcac cgtcgtcgac 4860 acgtgtgatc agatatcgcg gccgctctag accaggcgcc tggatccgcc accatgccac 4920 tctgggtgtt cttctttgtg atcctcaccc tcagcaacag ctcccactgc tccccacctc 4980 cccctttgac cctcaggatg cggcggtatg cagatgccat cttcaccaac agctaccgga 5040 aggtgctggg ccagctgtcc gcccgcaagc tgctccagga catcatgagc aggtagagat 5100 ccagatct 5108
【０２１９】 <210> 52 <211> 5108 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29YWTCMV construct <400> 52 gctgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc 60 ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt 120 ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat 180 tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatgggtac ccaggtgctg 240 aagaattgac ccggttcctc ctgggccaga aagaagcagg cacatcccct tctctgtgac 300 acaccctgtc cacgcccctg gttcttagtt ccagccccac tcataggaca ctcatagctc 360 aggagggctc cgccttcaat cccacccgct aaagtacttg gagcggtctc tccctccctc 420 atcagcccac caaaccaaac ctagcctcca agagtgggaa gaaattaaag caagataggc 480 tattaagtgc agagggagag aaaatgcctc caacatgtga ggaagtaatg agagaaatca 540 tagaatttct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 600 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 660 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 720 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 780 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 840 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 900 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 960 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 1020 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 1080 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 1140 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 1200 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 1260 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 1320 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 1380 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 1440 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 1500 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 1560 cggggggggg gggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc 1620 ctgaatcgcc ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt 1680 gtaggtggac cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 1740 gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg 1800 ccgtcccgtc aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat 1860 tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata 1920 ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat 1980 aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct 2040 attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact 2100 gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc aacaggccag 2160 ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc 2220 gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa 2280 tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga atcaggatat 2340 tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca 2400 tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt cagccagttt 2460 agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg tttcagaaac 2520 aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga ttgcccgaca 2580 ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt taatcgcggc 2640 ctcgagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac cccttgtatt actgtttatg 2700 taagcagaca gttttattgt tcatgatgat atatttttat cttgtgcaat gtaacatcag 2760 agattttgag acacaacgtg gctttccccc cccccccatt attgaagcat ttatcagggt 2820 tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt 2880 ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca 2940 ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc ctcgcgcgtt tcggtgatga 3000 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga 3060 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg 3120 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat 3180 accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcagattg gctattggcc attgcatacg 3240 ttgtatccat atcataatat 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cacccccgct tccttatgct ataggtgatg gtatagctta 4140 gcctataggt gtgggttatt gaccattatt gaccactccc ctattggtga cgatactttc 4200 cattactaat ccataacatg gctctttgcc acaactatct ctattggcta tatgccaata 4260 ctctgtcctt cagagactga cacggactct gtatttttac aggatggggt cccatttatt 4320 atttacaaat tcacatatac aacaacgccg tcccccgtgc ccgcagtttt tattaaacat 4380 agcgtgggat ctccacgcga atctcgggta cgtgttccgg acatgggctc ttctccggta 4440 gcggcggagc ttccacatcc gagccctggt cccatgcctc cagcggctca tggtcgctcg 4500 gcagctcctt gctcctaaca gtggaggcca gacttaggca cagcacaatg cccaccacca 4560 ccagtgtgcc gcacaaggcc gtggcggtag ggtatgtgtc tgaaaatgag cgtggagatt 4620 gggctcgcac ggctgacgca gatggaagac ttaaggcagc ggcagaagaa gatgcaggca 4680 gctgagttgt tgtattctga taagagtcag aggtaactcc cgttgcggtg ctgttaacgg 4740 tggagggcag tgtagtctga gcagtactcg ttgctgccgc gcgcgccacc agacataata 4800 gctgacagac taacagactg ttcctttcca tgggtctttt ctgcagtcac cgtcgtcgac 4860 acgtgtgatc agatatcgcg gccgctctag accaggcgcc tggatccgcc accatgccac 4920 tctgggtgtt cttctttgtg atcctcaccc tcagcaacag ctcccactgc tccccacctc 4980 cccctttgac cctcaggatg cggcggtatg cagatgccat cttcaccaac agctaccgga 5040 aggtgctggg ccagctgtcc gcccgcaagc tcctccagga catcatgagc aggtagagat 5100 ccagatct 5108
【０２２０】 <210> 53 <211> 3954 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29YWTSK685 construct <400> 53 ggtaccatcg ctggggagct gggggagggg tcgccttcct gccctaccca ggactccggg 60 tgcgaccgct cctctatctc tccagcccac caccactcca ccacttggac acgtctccct 120 cctccctgga gtcgctctag agggtttggg ggtctgagta aagaacccga agtagggata 180 cagtgtggcg gcaccttcca gaggccccgg gcgcagggta gaccggggcg gggcggcccg 240 cggacaggtg cagccccagg cgcaggcgca ctcgcgcctc ccggcgcagg cggtgaacct 300 cgccccaccc cagcccctcc ggggggcagc tgggccgggt cgggaggggc ccaccagccc 360 gggagacact ccatatacgg ccaggcccgc tttacctggg ctccggccag gccgctcctt 420 ctttggtcag cacaggggac ccgggcgggg gcccaggccg ctaacccgcc gggggagggg 480 gctccagtgc ccaacaccca aatatggctc gagaagggga gcgacattcc agtgaggcgg 540 ctcgggggga gaacccgcgg gctatataaa acctgagcgt ggggaccagc ggccaccgca 600 gcggacagcg ccgagagaag cctcgcttcc ctcccgcggc gaccagggcc ccagccggag 660 agcagcaggt gtagccacca agcttgccac catgccactc tgggtgttct tctttgtgat 720 cctcaccctc agcaacagct cccactgctc cccacctccc cctttgaccc tcaggatgcg 780 gcggtattat gcagatgcca tcttcaccaa cagctaccgg aaggtgctgg gccagctgtc 840 cgcccgcaag ctcctccagg acatcatgag caggtagtct agagtcgggg cggccggccg 900 cttcgagcag acatgataag atacattgat gagtttggac aaaccacaac tagaatgcag 960 tgaaaaaaat gctttatttg tgaaatttgt gatgctattg ctttatttgt aaccattata 1020 agctgcaata aacaagttaa caacaacaat tgcattcatt ttatgtttca ggttcagggg 1080 gaggtgtggg aggtttttta aagcaagtaa aacctctaca aatgtggtaa aatcgataag 1140 gatccgtcga ccgatgccct tgagagcctt caacccagtc agctccttcc ggtgggcgcg 1200 gggcatgact atcgtcgccg cacttatgac tgtcttcttt atcatgcaac tcgtaggaca 1260 ggtgccggca gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc 1320 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg 1380 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg 1440 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac 1500 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg 1560 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct 1620 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc aatgctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg 1680 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct 1740 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac 1800 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt 1860 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc 1920 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca 1980 ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat 2040 ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac 2100 gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt 2160 aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc 2220 aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg 2280 cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg 2340 ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc 2400 cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta 2460 ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg 2520 ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct 2580 ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta 2640 gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg 2700 ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga 2760 ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt 2820 gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca 2880 ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt 2940 cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt 3000 ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga 3060 aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt 3120 gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 3180 gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg cgccctgtag cggcgcatta agcgcggcgg 3240 gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg cccgctcctt 3300 tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa gctctaaatc 3360 gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc aaaaaacttg 3420 attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt cgccctttga 3480 cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca acactcaacc 3540 ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa 3600 aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta acgtttacaa 3660 tttcccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt 3720 cgctattacg ccagcccaag ctaccatgat aagtaagtaa tattaaggta cgggaggtac 3780 ttggagcggc cgcaataaaa tatctttatt ttcattacat ctgtgtgttg gttttttgtg 3840 tgaatcgata gtactaacat acgctctcca tcaaaacaaa acgaaacaaa acaaactagc 3900 aaaataggct gtccccagtg caagtgcagg tgccagaaca tttctctatc gata 3954
【０２２１】 <210> 54 <211> 5163 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29YWTSK2014 construct <400> 54 ggtaccgcta taggagagaa aagagctgca ctgagcaccc tccttcccct ttaaatgtca 60 acagattagg agtcagtgaa tgacagcaca cctcttgcta ccttagagac caaaatttaa 120 gctactcccc ttaagctata gctagagtgc acctgccagt gtctttagtc cccactgatg 180 gaacaggacc caaggtattg aagatggaac atagttattc attcatcctc taatttaaaa 240 agctggatat gctgtacagc agaaattgac ggaacaatgt aaatcaacta taacagaaga 300 aataaaaacc tggggggaaa gaagctgact atgaaacccc aggagctttc tacatgggcc 360 tggactcacc aaactcttta ttttgtaatg gacttctgac atttttagga agggctgtcc 420 tgatgtgggc tatagaagag ggtttcacat gcttcttcaa gaggacccac actgtcccag 480 ttgctgagtc ccaccaccag atgctagtgg cagctatttg gggaacactt aggcactaca 540 aaaaaatgag tgattccatt ctggctcaca ccatatccct gatgtacccc ttaaagcatg 600 tcactgagtt catcacagaa aattgtttcc cctgtgcctt ccacaacaag gttagagctg 660 tccttggggc caggggaagg gggcagggag tgagaagcac caactggata acctcctctg 720 acccccactc caccttacca taagtagatc caaatccttc tagaaaatta ggaaggcata 780 tccccatata tcagcgatat aaatagaact gcttcagcgc tctggtagac ggtgactctc 840 caaggtggac tgggaggcag cctggccttg gctgggcatc gtcctctaaa tagaaagatg 900 aacttgttca gcctttccag aaggaaaact gctgcccagc ctacagtgca acgtccttgt 960 cttccatctg gaggaagcac gggtgacata tcatctagta agggcacctc tctgtttcca 1020 cctccaggtc gaggggtgtg acccttactt ctcagcctca agggagggac actcaacccc 1080 ccaaaaagac atgagggcgc tcagctcggc ccaccgcacc ccggaccgga gccgtcaccc 1140 cccgaaattc actcccttca caagccccca agcgcgttct ctggtgcgga ctgctccggg 1200 gccctggctt tgtgcccagc gttgtcagag ccaccgccct gagcctgtcc ccgggagccc 1260 cgcgcctcct cccaccgctc cgctctcgcg ccccgcggcc agttgtctgc cccgagacag 1320 ctgcgcgccc tcccgctgcc ggtggccctc tccggtgggg gtggggaccg acagggtcag 1380 ccctccggat ccggggcgct ccgggtagcg gggagaagtg atcgctgggg agctggggga 1440 ggggtcgcct tcctgcccta cccaggactc cgggtgcgac cgctcctcta tctctccagc 1500 ccgggcgcag ggtagaccgg ggcggggcgg cccgcggaca ggtgcagccc caggcgcagg 1560 cgcactcgcg cctcccggcg caggcggtga acctcgcccc accccagccc ctccgggggg 1620 cagctgggcc gggtcgggag gggcccacca gcccgggaga cactccatat acggccaggc 1680 ccgctttacc tgggctccgg ccaggccgct ccttctttgg tcagcacagg ggacccgggc 1740 gggggcccag gccgctaacc cgccggggga gggggctcca gtgcccaaca cccaaatatg 1800 gctcgagaag gggagcgaca ttccagtgag gcggctcggg gggagaaccc gcgggctata 1860 taaaacctga gcgtggggac cagcggccaa gcttgccacc atgccactct gggtgttctt 1920 ctttgtgatc ctcaccctca gcaacagctc ccactgctcc ccacctcccc ctttgaccct 1980 caggatgcgg cggtattatg cagatgccat cttcaccaac agctaccgga aggtgctggg 2040 ccagctgtcc gcccgcaagc tcctccagga catcatgagc aggtagtcta gagtcggggc 2100 ggccggccgc ttcgagcaga catgataaga tacattgatg agtttggaca aaccacaact 2160 agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta 2220 accattataa gctgcaataa acaagttaac aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag 2280 gttcaggggg aggtgtggga ggttttttaa agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa 2340 atcgataagg atccgtcgac cgatgccctt gagagccttc aacccagtca gctccttccg 2400 gtgggcgcgg ggcatgacta tcgtcgccgc acttatgact gtcttcttta tcatgcaact 2460 cgtaggacag gtgccggcag cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg 2520 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag 2580 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc 2640 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca 2700 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt 2760 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc 2820 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc tgtaggtatc 2880 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc 2940 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact 3000 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg 3060 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta 3120 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca 3180 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa 3240 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg 3300 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc 3360 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg 3420 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat 3480 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg 3540 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa 3600 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca 3660 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc 3720 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt 3780 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa 3840 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat 3900 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct 3960 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga 4020 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag 4080 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga 4140 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca 4200 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg 4260 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc 4320 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag 4380 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgc gccctgtagc ggcgcattaa 4440 gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc 4500 ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag 4560 ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca 4620 aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc 4680 gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa 4740 cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct 4800 attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattttaac aaaatattaa 4860 cgtttacaat ttcccattcg ccattcaggc tgcgcaactg ttgggaaggg cgatcggtgc 4920 gggcctcttc gctattacgc cagcccaagc taccatgata agtaagtaat attaaggtac 4980 gggaggtact tggagcggcc gcaataaaat atctttattt tcattacatc tgtgtgttgg 5040 ttttttgtgt gaatcgatag tactaacata cgctctccat caaaacaaaa cgaaacaaaa 5100 caaactagca aaataggctg tccccagtgc aagtgcaggt gccagaacat ttctctatcg 5160 ata 5163
【０２２２】 <210> 55 <211> 5111 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29Yala1522CMV construct <400> 55 gctgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc 60 ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt 120 ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat 180 tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatgggtac ccaggtgctg 240 aagaattgac ccggttcctc ctgggccaga aagaagcagg cacatcccct tctctgtgac 300 acaccctgtc cacgcccctg gttcttagtt ccagccccac tcataggaca ctcatagctc 360 aggagggctc cgccttcaat cccacccgct aaagtacttg gagcggtctc tccctccctc 420 atcagcccac caaaccaaac ctagcctcca agagtgggaa gaaattaaag caagataggc 480 tattaagtgc agagggagag aaaatgcctc caacatgtga ggaagtaatg agagaaatca 540 tagaatttct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 600 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 660 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 720 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 780 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 840 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 900 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 960 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 1020 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 1080 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 1140 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 1200 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 1260 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 1320 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 1380 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 1440 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 1500 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 1560 cggggggggg gggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc 1620 ctgaatcgcc ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt 1680 gtaggtggac cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 1740 gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg 1800 ccgtcccgtc aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat 1860 tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata 1920 ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat 1980 aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct 2040 attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact 2100 gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc aacaggccag 2160 ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc 2220 gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa 2280 tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga atcaggatat 2340 tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca 2400 tcaggagtac ggataaaatg 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gtacatttat attggctcat gtccaacatt accgccatgt 3300 tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc 3360 ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc 3420 aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg 3480 actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat 3540 caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc 3600 tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta 3660 ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag 3720 cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt 3780 tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa 3840 atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt 3900 cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga 3960 tccagcctcc gcggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac 4020 gtaagtaccg cctatagact ctataggcac acccctttgg ctcttatgca tgctatactg 4080 tttttggctt ggggcctata 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【０２２３】 <210> 56 <211> 3327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29Yala1522SK construct <400> 56 ggtaccgagc tcttacgcgt gctagcccgg gctcgagatc tgcgatctaa gtaagcttgc 60 caccatgcca ctctgggtgt tcttctttgt gatcctcacc ctcagcaaca gctcccactg 120 ctccccacct ccccctttga ccctcaggat gcggcggtat tatgcagatg ccatcttcac 180 caacagctac cggaaggtgc tggcccagct gtccgcccgc aaggccctcc aggacatcat 240 gagcaggtag tctagagtcg gggcggccgg ccgcttcgag cagacatgat aagatacatt 300 gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt 360 tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt taacaacaac 420 aattgcattc attttatgtt tcaggttcag ggggaggtgt gggaggtttt ttaaagcaag 480 taaaacctct acaaatgtgg taaaatcgat aaggatccgt cgaccgatgc ccttgagagc 540 cttcaaccca gtcagctcct tccggtgggc gcggggcatg actatcgtcg ccgcacttat 600 gactgtcttc tttatcatgc aactcgtagg acaggtgccg gcagcgctct tccgcttcct 660 cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa 720 aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa 780 aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc 840 tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga 900 caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc 960 cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt 1020 ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct 1080 gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg 1140 agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta 1200 gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct 1260 acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa 1320 gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt 1380 gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta 1440 cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat 1500 caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa 1560 gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct 1620 cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta 1680 cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct 1740 caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg 1800 gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa 1860 gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt 1920 cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta 1980 catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca 2040 gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta 2100 ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct 2160 gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg 2220 cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac 2280 tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact 2340 gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa 2400 atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt 2460 ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat 2520 gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg 2580 acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg 2640 ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca 2700 cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta 2760 gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc 2820 catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg 2880 gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat 2940 aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta 3000 acgcgaattt taacaaaata ttaacgttta caatttccca ttcgccattc aggctgcgca 3060 actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagccc aagctaccat 3120 gataagtaag taatattaag gtacgggagg tacttggagc ggccgcaata aaatatcttt 3180 attttcatta catctgtgtg ttggtttttt gtgtgaatcg atagtactaa catacgctct 3240 ccatcaaaac aaaacgaaac aaaacaaact agcaaaatag gctgtcccca gtgcaagtgc 3300 aggtgccaga acatttctct atcgata 3327
【０２２４】 <210> 57 <211> 4469 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29Yala1522SK construct <400> 57 bbsggtacca tcgctgggga gctgggggag gggtcgcctt cctgccctac ccaggactcc 60 gggtgcgacc gctcctctat ctctccagcc caccaccact ccaccacttg gacacgtctc 120 cctcctccct ggagtcgctc tagagggttt gggggtctga gtaaagaacc cgaagtaggg 180 atacagtgtg gcggcacctt ccagaggccc cgggcgcagg gtagaccggg gcggggcggc 240 ccgcggacag gtgcagcccc aggcgcaggc gcactcgcgc ctcccggcgc aggcggtgaa 300 cctcgcccca ccccagcccc tccggggggc agctgggccg ggtcgggagg ggcccaccag 360 cccgggagac actccatata cggccaggcc cgctttacct gggctccggc caggccgctc 420 cttctttggt cagcacaggg gacccgggcg ggggcccagg ccgctaaccc gccgggggag 480 ggggctccag tgcccaacac ccaaatatgg ctcgagaagg ggagcgacat tccagtgagg 540 cggctcgggg ggagaacccg cgggctatat aaaacctgag cgtggggacc agcggccacc 600 gcagcggaca gcgccgagag aagcctcgct tccctcccgc ggcgaccagg gccccagccg 660 gagagcagca ggtgtagcca ccaagcttgc caccatgcca ctctgggtgt tcttctttgt 720 gatcctcacc ctcagcaaca gctcccactg ctccccacct ccccctttga ccctcaggat 780 gcggcggtat tatgcagatg ccatcttcac caacagctac cggaaggtgc tggcccagct 840 gtccgcccgc aaggccctcc aggacatcat gagcaggtag tctagagtcg gggcggccgg 900 ccgcttcgag cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg 960 cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt 1020 ataagctgca ataaacaagt taacaacaac aattgcattc attttatgtt tcaggttcag 1080 ggggaggtgt gggaggtttt ttaaagcaag taaaacctct acaaatgtgg taaaatcgat 1140 aaggatccgt cgaccgatgc ccttgagagc cttcaaccca gtcagctcct tccggtgggc 1200 gcggggcatg actatcgtcg ccgcacttat gactgtcttc tttatcatgc aactcgtagg 1260 acaggtgccg gcagcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc 1320 ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag 1380 gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa 1440 aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc 1500 gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc 1560 ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg 1620 cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt 1680 cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc 1740 gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc 1800 cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag 1860 agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg 1920 ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa 1980 ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag 2040 gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact 2100 cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa 2160 attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt 2220 accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag 2280 ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca 2340 gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc 2400 agccagccgg aagggccgag 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taatntndtg tmsnwrmans ymbaracrrn whrbrbggta 4140 ccatcgctgg ggagctgggg gaggggtcgc cttcctgccc tacccaggac tccgggrgad 4200 vsnrgadvsn hggtaccatc gctggggagc tgggggaggg gtcgccttcc tgccctaccc 4260 aggactccgg gcgtargadv sngggargad vsnggmcrst wrdswsdhrn cggtaccatc 4320 gctggggagc tgggggaggg gtcgccttcc tgccctaccc aggactccgg gttdgdanbc 4380 dcdc*rtntr ysstabwrdd cmntsmmary nrmatndcmn tsmmarynrm atncmbbcts 4440 smcrstwrdd cmntmswrdd cwrddcmnt 4469
【０２２５】 <210> 58 <211> 5283 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-29Yala1522SK2014 construct <400> 58 ggtaccgcta taggagagaa aagagctgca ctgagcaccc tccttcccct ttaaatgtca 60 acagattagg agtcagtgaa tgacagcaca cctcttgcta ccttagagac caaaatttaa 120 gctactcccc ttaagctata gctagagtgc acctgccagt gtctttagtc cccactgatg 180 gaacaggacc caaggtattg aagatggaac atagttattc attcatcctc taatttaaaa 240 agctggatat gctgtacagc agaaattgac ggaacaatgt aaatcaacta taacagaaga 300 aataaaaacc tggggggaaa gaagctgact atgaaacccc aggagctttc tacatgggcc 360 tggactcacc aaactcttta ttttgtaatg gacttctgac atttttagga agggctgtcc 420 tgatgtgggc tatagaagag ggtttcacat gcttcttcaa gaggacccac actgtcccag 480 ttgctgagtc ccaccaccag atgctagtgg cagctatttg gggaacactt aggcactaca 540 aaaaaatgag tgattccatt ctggctcaca ccatatccct gatgtacccc ttaaagcatg 600 tcactgagtt catcacagaa aattgtttcc cctgtgcctt ccacaacaag gttagagctg 660 tccttggggc caggggaagg gggcagggag tgagaagcac caactggata acctcctctg 720 acccccactc caccttacca taagtagatc caaatccttc tagaaaatta ggaaggcata 780 tccccatata tcagcgatat aaatagaact gcttcagcgc tctggtagac ggtgactctc 840 caaggtggac tgggaggcag cctggccttg gctgggcatc gtcctctaaa tagaaagatg 900 aacttgttca gcctttccag aaggaaaact gctgcccagc ctacagtgca acgtccttgt 960 cttccatctg gaggaagcac gggtgacata tcatctagta agggcacctc tctgtttcca 1020 cctccaggtc gaggggtgtg acccttactt ctcagcctca agggagggac actcaacccc 1080 ccaaaaagac atgagggcgc tcagctcggc ccaccgcacc ccggaccgga gccgtcaccc 1140 cccgaaattc actcccttca caagccccca agcgcgttct ctggtgcgga ctgctccggg 1200 gccctggctt tgtgcccagc gttgtcagag ccaccgccct gagcctgtcc ccgggagccc 1260 cgcgcctcct cccaccgctc cgctctcgcg ccccgcggcc agttgtctgc cccgagacag 1320 ctgcgcgccc tcccgctgcc ggtggccctc tccggtgggg gtggggaccg acagggtcag 1380 ccctccggat ccggggcgct ccgggtagcg gggagaagtg atcgctgggg agctggggga 1440 ggggtcgcct tcctgcccta cccaggactc cgggtgcgac cgctcctcta tctctccagc 1500 ccaccaccac tccaccactt ggacacgtct ccctcctccc tggagtcgct ctagagggtt 1560 tgggggtctg 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aggtgtggga ggttttttaa agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa 2460 atcgataagg atccgtcgac cgatgccctt gagagccttc aacccagtca gctccttccg 2520 gtgggcgcgg ggcatgacta tcgtcgccgc acttatgact gtcttcttta tcatgcaact 2580 cgtaggacag gtgccggcag cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg 2640 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag 2700 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc 2760 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca 2820 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt 2880 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc 2940 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc tgtaggtatc 3000 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc 3060 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact 3120 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg 3180 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta 3240 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca 3300 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa 3360 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg 3420 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc 3480 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg 3540 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat 3600 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg 3660 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa 3720 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca 3780 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc 3840 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt 3900 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa 3960 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat 4020 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct 4080 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga 4140 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag 4200 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga 4260 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca 4320 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg 4380 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc 4440 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag 4500 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgc gccctgtagc ggcgcattaa 4560 gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc 4620 ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag 4680 ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca 4740 aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc 4800 gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa 4860 cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct 4920 attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattttaac aaaatattaa 4980 cgtttacaat ttcccattcg ccattcaggc tgcgcaactg ttgggaaggg cgatcggtgc 5040 gggcctcttc gctattacgc cagcccaagc taccatgata agtaagtaat attaaggtac 5100 gggaggtact tggagcggcc gcaataaaat atctttattt tcattacatc tgtgtgttgg 5160 ttttttgtgt gaatcgatag tactaacata cgctctccat caaaacaaaa cgaaacaaaa 5220 caaactagca aaataggctg tccccagtgc aagtgcaggt gccagaacat ttctctatcg 5280 ata 5283
【０２２６】 <210> 59 <211> 5188 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-44YWTCMV construct <400> 59 gctgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc 60 ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt 120 ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat 180 tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatgggtac ccaggtgctg 240 aagaattgac ccggttcctc ctgggccaga aagaagcagg cacatcccct tctctgtgac 300 acaccctgtc cacgcccctg gttcttagtt ccagccccac tcataggaca ctcatagctc 360 aggagggctc cgccttcaat cccacccgct aaagtacttg gagcggtctc tccctccctc 420 atcagcccac caaaccaaac ctagcctcca agagtgggaa gaaattaaag caagataggc 480 tattaagtgc agagggagag aaaatgcctc caacatgtga ggaagtaatg agagaaatca 540 tagaatttct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 600 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 660 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 720 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 780 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 840 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 900 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 960 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 1020 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 1080 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 1140 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 1200 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 1260 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 1320 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 1380 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 1440 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 1500 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 1560 cggggggggg gggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc 1620 ctgaatcgcc ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt 1680 gtaggtggac cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 1740 gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg 1800 ccgtcccgtc aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat 1860 tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata 1920 ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat 1980 aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct 2040 attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact 2100 gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc aacaggccag 2160 ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc 2220 gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa 2280 tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga atcaggatat 2340 tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca 2400 tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt cagccagttt 2460 agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg tttcagaaac 2520 aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga ttgcccgaca 2580 ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt taatcgcggc 2640 ctcgagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac cccttgtatt actgtttatg 2700 taagcagaca gttttattgt tcatgatgat atatttttat cttgtgcaat gtaacatcag 2760 agattttgag acacaacgtg gctttccccc cccccccatt attgaagcat ttatcagggt 2820 tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt 2880 ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca 2940 ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc ctcgcgcgtt tcggtgatga 3000 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga 3060 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg 3120 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat 3180 accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcagattg gctattggcc attgcatacg 3240 ttgtatccat atcataatat gtacatttat attggctcat gtccaacatt accgccatgt 3300 tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc 3360 ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc 3420 aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg 3480 actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat 3540 caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc 3600 tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta 3660 ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag 3720 cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt 3780 tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa 3840 atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt 3900 cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga 3960 tccagcctcc gcggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac 4020 gtaagtaccg cctatagact ctataggcac acccctttgg ctcttatgca tgctatactg 4080 tttttggctt ggggcctata cacccccgct tccttatgct ataggtgatg gtatagctta 4140 gcctataggt gtgggttatt gaccattatt gaccactccc ctattggtga cgatactttc 4200 cattactaat ccataacatg gctctttgcc acaactatct ctattggcta tatgccaata 4260 ctctgtcctt cagagactga cacggactct gtatttttac aggatggggt cccatttatt 4320 atttacaaat tcacatatac aacaacgccg tcccccgtgc ccgcagtttt tattaaacat 4380 agcgtgggat ctccacgcga atctcgggta cgtgttccgg acatgggctc ttctccggta 4440 gcggcggagc ttccacatcc gagccctggt cccatgcctc cagcggctca tggtcgctcg 4500 gcagctcctt gctcctaaca gtggaggcca gacttaggca cagcacaatg cccaccacca 4560 ccagtgtgcc gcacaaggcc gtggcggtag ggtatgtgtc tgaaaatgag cgtggagatt 4620 gggctcgcac ggctgacgca gatggaagac ttaaggcagc ggcagaagaa gatgcaggca 4680 gctgagttgt tgtattctga taagagtcag aggtaactcc cgttgcggtg ctgttaacgg 4740 tggagggcag tgtagtctga gcagtactcg ttgctgccgc gcgcgccacc agacataata 4800 gctgacagac taacagactg ttcctttcca tgggtctttt ctgcagtcac cgtcgtcgac 4860 acgtgtgatc agatatcgcg gccgctctag accaggcgcc tggatccgcc accatgccac 4920 tctgggtgtt cttctttgtg atcctcaccc tcagcaacag ctcccactgc tccccacctc 4980 cccctttgac cctcaggatg cggcggtatt atgcagatgc catcttcacc aacagctacc 5040 ggaaggtgct gggccagctg tccgcccgca agctgctcca ggacatcatg agcaggcagc 5100 agggagagag aaaccaagag caaggagcaa gggtgcggct ttgaagatct tagtagtagt 5160 aggcggccgc tctagaggat ccagatct 5188
【０２２７】 <210> 60 <211> 5254 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: pGHRH1-44WTGHpep construct <400> 60 gctgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc 60 ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt 120 ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat 180 tgggaagaca atagcaggca tgctggggat gcggtgggct ctatgggtac ccaggtgctg 240 aagaattgac ccggttcctc ctgggccaga aagaagcagg cacatcccct tctctgtgac 300 acaccctgtc cacgcccctg gttcttagtt ccagccccac tcataggaca ctcatagctc 360 aggagggctc cgccttcaat cccacccgct aaagtacttg gagcggtctc tccctccctc 420 atcagcccac caaaccaaac ctagcctcca agagtgggaa gaaattaaag caagataggc 480 tattaagtgc agagggagag aaaatgcctc caacatgtga ggaagtaatg agagaaatca 540 tagaatttct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 600 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 660 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 720 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 780 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 840 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 900 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 960 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 1020 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 1080 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 1140 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 1200 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 1260 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 1320 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 1380 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 1440 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 1500 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 1560 cggggggggg gggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc 1620 ctgaatcgcc ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt 1680 gtaggtggac cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 1740 gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg 1800 ccgtcccgtc aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat 1860 tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata 1920 ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat 1980 aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct 2040 attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact 2100 gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc aacaggccag 2160 ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc 2220 gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa 2280 tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga atcaggatat 2340 tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca 2400 tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt cagccagttt 2460 agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg tttcagaaac 2520 aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga ttgcccgaca 2580 ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt taatcgcggc 2640 ctcgagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac cccttgtatt actgtttatg 2700 taagcagaca gttttattgt tcatgatgat atatttttat cttgtgcaat gtaacatcag 2760 agattttgag acacaacgtg gctttccccc cccccccatt attgaagcat ttatcagggt 2820 tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt 2880 ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca 2940 ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc ctcgcgcgtt tcggtgatga 3000 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga 3060 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg 3120 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatgc ggtgtgaaat 3180 accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcagattg gctattggcc attgcatacg 3240 ttgtatccat atcataatat gtacatttat attggctcat gtccaacatt accgccatgt 3300 tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc 3360 ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc 3420 aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg 3480 actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat 3540 caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc 3600 tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta 3660 ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag 3720 cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt 3780 tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa 3840 atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt 3900 cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga 3960 tccagcctcc gcggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac 4020 gtaagtaccg cctatagact ctataggcac acccctttgg ctcttatgca tgctatactg 4080 tttttggctt ggggcctata cacccccgct tccttatgct ataggtgatg gtatagctta 4140 gcctataggt gtgggttatt gaccattatt gaccactccc ctattggtga cgatactttc 4200 cattactaat ccataacatg gctctttgcc acaactatct ctattggcta tatgccaata 4260 ctctgtcctt cagagactga cacggactct gtatttttac aggatggggt cccatttatt 4320 atttacaaat tcacatatac aacaacgccg tcccccgtgc ccgcagtttt tattaaacat 4380 agcgtgggat ctccacgcga atctcgggta cgtgttccgg acatgggctc ttctccggta 4440 gcggcggagc ttccacatcc gagccctggt cccatgcctc cagcggctca tggtcgctcg 4500 gcagctcctt gctcctaaca gtggaggcca gacttaggca cagcacaatg cccaccacca 4560 ccagtgtgcc gcacaaggcc gtggcggtag ggtatgtgtc tgaaaatgag cgtggagatt 4620 gggctcgcac ggctgacgca gatggaagac ttaaggcagc ggcagaagaa gatgcaggca 4680 gctgagttgt tgtattctga taagagtcag aggtaactcc cgttgcggtg ctgttaacgg 4740 tggagggcag tgtagtctga gcagtactcg ttgctgccgc gcgcgccacc agacataata 4800 gctgacagac taacagactg ttcctttcca tgggtctttt ctgcagtcac cgtcgtcgac 4860 acgtgtgatc agatatcgcg gccgctctag accaggcgcc tggatccgcc accatgccac 4920 tctgggtgtt cttctttgtg atcctcaccc tcagcaacag ctcccactgc tccccacctc 4980 cccctttgac cctcaggatg cggcggtatt atgcagatgc catcttcacc aacagctacc 5040 ggaaggtgct gggccagctg tccgcccgca agctgctcca ggacatcatg agcaggcagc 5100 agggagagag aaaccaagag caaggagcaa gggtgcggct tgggcggaaa gtagaaacgt 5160 ttctgcgtat tgtacagtgt cgtagcgtag aagggagctg tgggttttga agatcttagt 5220 agtagtaggc ggccgctcta gaggatccag atct 5254
【０２２８】 <210> 61 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 61 agatctgcca ccatgccact ctgggtgttc ttctttgtg 39
【０２２９】 <210> 62 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 62 ggatccaagc cgcacccttg ctccttgctc ttggtt 36
【０２３０】 <210> 63 <211> 492 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 63 bbttttttst ggatccaagg ccgagacgta cctgcgggtc atgaagtgtc gccgcttcgt 60 ggaaagcagc tgtgccttcc cnrmamhada taragrahnt anttacrgad vsnasysdat 120 aatntndtgt msnwrmansy mbaracrrnw hrbrbybgga tccaaggccg agacgtacct 180 gcgggtcatg aagtgtcgcc gcttcgtgga aagcagcrga dvsnrgadvs nhhcggatcc 240 aaggccgaga cgtacctgcg ggtcatgaag tgtcgccgct tcgtggaaag cagcgatrga 300 dvsnccgarg advsnccmcr stwrdssydh rnccggatcc aaggccgaga cgtacctgcg 360 ggtcatgaag tgtcgccgct tcgtggaaag cagcttdgda nbcdcdcrtn trybsstabw 420 rddcmntsmm arynrmatnd cmntsmmary nrmatncmbb ctssmcrstw rddcmntmsw 480 rddcwrddcm nt 492
【０２３１】 <210> 64 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 64 ggatccgaag gcacagctgc tttccacgaa gcggcgacac ttcatgaccc gcaggtacgt 60 ctcggcctt 69
【０２３２】 <210> 65 <211> 102 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 65 agatcttcaa agccgcaccc ttgctccttg ctcttggttt ctctctccct gctgcctgct 60 catgatgtcc tggagcagct tgcgggcgga cagctggccc ag 102
【０２３３】 <210> 66 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 66 ccgcggcatc ctgagggtca a 21
【０２３４】 <210> 67 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 67 tatgcagatg ccatcttcaa c 21
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、pGHRH-4 構築物の地図である( 配列番
号：47) 。
【図２】図２は、pGHRH1-44SK 構築物の地図である( 配
列番号：48) 。
【図３】図３は、pGHRH1-44WTSK685構築物の地図である
( 配列番号：49) 。
【図４】図４は、pGHRH1-44WTSK2014 構築物の地図であ
る( 配列番号：50) 。
【図５】図５は、pGHRH-4 でトランスフェクションされ
た細胞の上清中に検出されたGHRH発現レベルを示すグラ
フである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 14/60 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 15/00 ＺＮＡＡ 1/21 Ａ６１Ｋ 37/43 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者 マイケル ジョージ シェパード アメリカ合衆国，コネチカット 06340, グロトン，イースタン ポイント ロー ド，ファイザー セントラル リサーチ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA10 BA03 CA03 CA06 CA07 DA02 EA04 FA02 FA06 FA10 GA11 HA01 HA06 HA17 4B065 AA90Y AA91X AA93Y AB01 AC14 BA02 BA25 CA23 CA24 CA44 4C084 AA02 AA07 AA13 BA01 BA08 BA19 BA23 BA35 CA17 CA18 CA20 CA21 CA22 CA53 CA56 CA59 DB14 NA14 ZB262 ZC042 4H045 AA10 AA30 BA10 CA40 DA31 DA46 EA05 EA30 FA72 FA74 GA45

Claims (22)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒト又は家畜への供給に適した医薬製剤
    中の、GHRHのアミノ酸29個のアミノ末端断片のアミノ末
    端への１個のアミノ酸の付加並びにカルボキシ末端への
    グリシン及びアルギニンの付加を含む成長ホルモン放出
    ホルモン(GHRH)変形体。
  2. 【請求項２】 前記アミノ末端に付加されるアミノ酸が
    疎水性残基又はチロシンである、請求項１記載の成長ホ
    ルモン放出ホルモン変形体。
  3. 【請求項３】 ヒト又は家畜への供給に適した医薬製剤
    中の、GHRHのアミノ酸29個のアミノ末端断片のアミノ末
    端への2 又は3 個のアミノ酸の付加を含み、ここで前記
    付加されたアミノ酸の第二のアミノ酸がプロリン又はア
    ラニンではなく、さらにカルボキシ末端にグリシン及び
    アルギニンの付加を含む成長ホルモン放出ホルモン(GHR
    H)変形体。
  4. 【請求項４】 GHRHのアミノ酸29個のアミノ末端断片の
    アミノ末端への3 個以上のアミノ酸の付加並びにカルボ
    キシ末端へのグリシン及びアルギニンの付加を含み、こ
    こでこれらの付加がGHRHの機能活性を妨害しない、請求
    項３記載の成長ホルモン放出ホルモン変形体。
  5. 【請求項５】 更に、残基15でのグリシンのアラニンと
    の置換を含む、請求項１、３又は４記載の成長ホルモン
    放出ホルモン変形体。
  6. 【請求項６】 更に、残基22でのロイシンのアラニンと
    の置換を含む、請求項１、３又は４記載の成長ホルモン
    放出ホルモン変形体。
  7. 【請求項７】 更に、残基15でのグリシンのアラニンと
    の、及び残基22でのロイシンのアラニンとの置換を含
    む、請求項１、３又は４記載の成長ホルモン放出ホルモ
    ン変形体。
  8. 【請求項８】 前記アミノ酸が天然のものである、請求
    項１、３又は４記載の成長ホルモン放出ホルモン変形
    体。
  9. 【請求項９】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモン
    放出ホルモン変形体をコードしているポリヌクレオチ
    ド。
  10. 【請求項１０】 請求項９記載のポリヌクレオチド配列
    を含むヌクレオチドベクター。
  11. 【請求項１１】 宿主細胞においてポリヌクレオチド配
    列の発現を制御するヌクレオチド調節配列に機能的に結
    合した請求項９記載のポリヌクレオチド配列を含む発現
    ベクター。
  12. 【請求項１２】 前記調節エレメントが、サイトメガロ
    ウイルスhCMV直前初期遺伝子、SV40アデノウイルスの初
    期又は後期プロモーター、及びブタα−骨格筋アクチン
    プロモーターからなる群より選択される、請求項11記載
    の発現ベクター。
  13. 【請求項１３】 請求項９記載のポリヌクレオチド配列
    を含む遺伝子操作された宿主細胞。
  14. 【請求項１４】 宿主細胞においてポリヌクレオチド配
    列の発現を制御するヌクレオチド調節配列に機能的に結
    合した請求項９記載のポリヌクレオチド配列を含む遺伝
    子操作された宿主細胞。
  15. 【請求項１５】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモ
    ン放出ホルモン変異をコードしているポリヌクレオチド
    配列を含んで成る、動物の成長ホルモン欠乏によって特
    徴付けられた成長ホルモン関連障害の治療のための組成
    物。
  16. 【請求項１６】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモ
    ン放出ホルモン変異体をコードしているポリヌクレオチ
    ド配列を含んで成る、動物の成長及び機能を向上するた
    めの組成物。
  17. 【請求項１７】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモ
    ン放出ホルモン変異体の精製されたポリペプチド。
  18. 【請求項１８】 請求項17記載のポリペプチドの有効量
    をヒト以外の動物に供給することを含む、動物の成長ホ
    ルモン欠乏によって特徴付けられた成長ホルモン関連障
    害の治療法。
  19. 【請求項１９】 請求項17記載のポリペプチドの有効量
    をヒト以外の動物に供給することを含む、動物の成長及
    び機能を向上する方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモ
    ン放出ホルモン変異体を含んで成る、動物における成長
    ホルモンの発現及び上昇を促進するための医薬組成物。
  21. 【請求項２１】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモ
    ン放出ホルモン変異体を含んで成る、動物の成長ホルモ
    ン欠乏によって特徴付けられた成長ホルモン関連障害の
    治療するための医薬組成物。
  22. 【請求項２２】 請求項１、３又は４記載の成長ホルモ
    ン放出ホルモン変異体を含んで成る、動物の成長及び機
    能を向上するための医薬組成物。
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