JP2003009863A - プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 - Google Patents
プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片Info
- Publication number
- JP2003009863A JP2003009863A JP2001204628A JP2001204628A JP2003009863A JP 2003009863 A JP2003009863 A JP 2003009863A JP 2001204628 A JP2001204628 A JP 2001204628A JP 2001204628 A JP2001204628 A JP 2001204628A JP 2003009863 A JP2003009863 A JP 2003009863A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmid
- dna fragment
- gene
- ala
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 136
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 95
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 72
- 230000010076 replication Effects 0.000 title abstract description 10
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 claims abstract description 44
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 39
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 35
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 32
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 abstract 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 96
- 241000187693 Rhodococcus rhodochrous Species 0.000 description 23
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 14
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 14
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 14
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NKVZTQVGUNLLQW-JBDRJPRFSA-N Ile-Ala-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N NKVZTQVGUNLLQW-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- NWVVKQZOVSTDBQ-CIUDSAMLSA-N Ala-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NWVVKQZOVSTDBQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SYIFFFHSXBNPMC-UWJYBYFXSA-N Ala-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N SYIFFFHSXBNPMC-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N Arg-Arg-Thr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- GOWZVQXTHUCNSQ-NHCYSSNCSA-N Arg-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GOWZVQXTHUCNSQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- FFEUXEAKYRCACT-PEDHHIEDSA-N Arg-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(O)=O FFEUXEAKYRCACT-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 2
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- ASQKVGRCKOFKIU-KZVJFYERSA-N Arg-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O ASQKVGRCKOFKIU-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FHPXTPQBODWBIY-CIUDSAMLSA-N Glu-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FHPXTPQBODWBIY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- WPLGNDORMXTMQS-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPLGNDORMXTMQS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- UMZHHILWZBFPGL-LOKLDPHHSA-N Glu-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O UMZHHILWZBFPGL-LOKLDPHHSA-N 0.000 description 2
- HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N Glu-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 2
- PHONXOACARQMPM-BQBZGAKWSA-N Gly-Ala-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PHONXOACARQMPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- ZWRDOVYMQAAISL-UWVGGRQHSA-N Gly-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZWRDOVYMQAAISL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N Gly-Thr-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- AOFYPTOHESIBFZ-KKUMJFAQSA-N Leu-His-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O AOFYPTOHESIBFZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N Lys-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N Met-Gly-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- GGXZOTSDJJTDGB-GUBZILKMSA-N Met-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GGXZOTSDJJTDGB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000057361 Pseudogenes Human genes 0.000 description 2
- 108091008109 Pseudogenes Proteins 0.000 description 2
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 2
- NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 2
- LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 108010018691 arginyl-threonyl-arginine Proteins 0.000 description 2
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010008237 glutamyl-valyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 2
- 150000003071 polychlorinated biphenyls Chemical class 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- DMSDCBKFWUBTKX-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1-nitrosoguanidine Chemical compound CN=C(N)NN=O DMSDCBKFWUBTKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N Ala-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- XEXJJJRVTFGWIC-FXQIFTODSA-N Ala-Asn-Arg Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XEXJJJRVTFGWIC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- LNNSWWRRYJLGNI-NAKRPEOUSA-N Ala-Ile-Val Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LNNSWWRRYJLGNI-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- YHKANGMVQWRMAP-DCAQKATOSA-N Ala-Leu-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YHKANGMVQWRMAP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- YNOCMHZSWJMGBB-GCJQMDKQSA-N Ala-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YNOCMHZSWJMGBB-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- AENHOIXXHKNIQL-AUTRQRHGSA-N Ala-Tyr-Ala Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]([NH3+])C)CC1=CC=C(O)C=C1 AENHOIXXHKNIQL-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N Ala-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N Ala-Val-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- 101000942941 Arabidopsis thaliana DNA ligase 6 Proteins 0.000 description 1
- OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N Arg-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- NONSEUUPKITYQT-BQBZGAKWSA-N Arg-Asn-Gly Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N)CN=C(N)N NONSEUUPKITYQT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- OANWAFQRNQEDSY-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N OANWAFQRNQEDSY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XLWSGICNBZGYTA-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XLWSGICNBZGYTA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LCBSSOCDWUTQQV-SDDRHHMPSA-N Arg-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N LCBSSOCDWUTQQV-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- AUZAXCPWMDBWEE-HJGDQZAQSA-N Arg-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AUZAXCPWMDBWEE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- POZKLUIXMHIULG-FDARSICLSA-N Arg-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N POZKLUIXMHIULG-FDARSICLSA-N 0.000 description 1
- CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- DHVMIHWNDBFTHB-FXQIFTODSA-N Asn-Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DHVMIHWNDBFTHB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SGAUXNZEFIEAAI-GARJFASQSA-N Asn-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O SGAUXNZEFIEAAI-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UJGRZQYSNYTCAX-SRVKXCTJSA-N Asp-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O UJGRZQYSNYTCAX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SZXSSXUNOALWCH-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SZXSSXUNOALWCH-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N Glu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- PVBBEKPHARMPHX-DCAQKATOSA-N Glu-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O PVBBEKPHARMPHX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N Glu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MLILEEIVMRUYBX-NHCYSSNCSA-N Glu-Val-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O MLILEEIVMRUYBX-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- LXXLEUBUOMCAMR-NKWVEPMBSA-N Gly-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)O LXXLEUBUOMCAMR-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- JPWIMMUNWUKOAD-STQMWFEESA-N Gly-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)CN JPWIMMUNWUKOAD-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N His-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N His-Ala-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- YIGCZZKZFMNSIU-RWMBFGLXSA-N His-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N YIGCZZKZFMNSIU-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- CSRRMQFXMBPSIL-SIXJUCDHSA-N His-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N CSRRMQFXMBPSIL-SIXJUCDHSA-N 0.000 description 1
- DVRDRICMWUSCBN-UKJIMTQDSA-N Ile-Gln-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N DVRDRICMWUSCBN-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- JVTYXRRFZCEPPK-RHYQMDGZSA-N Leu-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O JVTYXRRFZCEPPK-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N Leu-Val-Arg Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- CLBGMWIYPYAZPR-AVGNSLFASA-N Lys-Arg-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O CLBGMWIYPYAZPR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N Lys-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NCTDKZKNBDZDOL-GARJFASQSA-N Lys-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O NCTDKZKNBDZDOL-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- RMKJOQSYLQQRFN-KKUMJFAQSA-N Lys-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RMKJOQSYLQQRFN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBQMBZLJHOQAIH-GUBZILKMSA-N Met-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FBQMBZLJHOQAIH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N Phe-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- OOLOTUZJUBOMAX-GUBZILKMSA-N Pro-Ala-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOLOTUZJUBOMAX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JFNPBBOGGNMSRX-CIUDSAMLSA-N Pro-Gln-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JFNPBBOGGNMSRX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SPLBRAKYXGOFSO-UNQGMJICSA-N Pro-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O SPLBRAKYXGOFSO-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- FIODMZKLZFLYQP-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FIODMZKLZFLYQP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 101710090029 Replication-associated protein A Proteins 0.000 description 1
- RZUOXAKGNHXZTB-GUBZILKMSA-N Ser-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RZUOXAKGNHXZTB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N Ser-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- BEAFYHFQTOTVFS-VGDYDELISA-N Ser-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BEAFYHFQTOTVFS-VGDYDELISA-N 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- HJOSVGCWOTYJFG-WDCWCFNPSA-N Thr-Glu-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O HJOSVGCWOTYJFG-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- KRGDDWVBBDLPSJ-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KRGDDWVBBDLPSJ-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- NWECYMJLJGCBOD-UNQGMJICSA-N Thr-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NWECYMJLJGCBOD-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- NIWAGRRZHCMPOY-GMVOTWDCSA-N Trp-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N NIWAGRRZHCMPOY-GMVOTWDCSA-N 0.000 description 1
- RSUXQZNWAOTBQF-XIRDDKMYSA-N Trp-Arg-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RSUXQZNWAOTBQF-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- NKUIXQOJUAEIET-AQZXSJQPSA-N Trp-Asp-Thr Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NKUIXQOJUAEIET-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XOLLWQIBBLBAHQ-WDSOQIARSA-N Trp-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XOLLWQIBBLBAHQ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- NQJDICVXXIMMMB-XDTLVQLUSA-N Tyr-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NQJDICVXXIMMMB-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N Tyr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PAPWZOJOLKZEFR-AVGNSLFASA-N Val-Arg-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PAPWZOJOLKZEFR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N Val-Asp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- ZQGPWORGSNRQLN-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N ZQGPWORGSNRQLN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- GVNLOVJNNDZUHS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GVNLOVJNNDZUHS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N Val-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 108010045350 alanyl-tyrosyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000003876 biosurfactant Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 238000006477 desulfuration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000023556 desulfurization Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- UOEFDXYUEPHESS-QMGXLNLGSA-N isopropyl beta-D-galactopyranoside Chemical compound CC(C)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UOEFDXYUEPHESS-QMGXLNLGSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010034507 methionyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 108010005652 splenotritin Proteins 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
- C12N15/69—Increasing the copy number of the vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 プラスミドの自律増殖に関する遺伝子を含む
DNA断片およびプラスミドの自律増殖に関する遺伝子を
含むDNA断片であって、プラスミドのコピー数を増加さ
せうる変異点が該遺伝子内の少なくとも1ヵ所に存在す
るDNA断片を提供する。 【解決手段】 ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自
律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片、プ
ラスミドのコピー数を増加させうる変異点が該遺伝内の
少なくとも１ヵ所に存在するDNA断片、およびプラスミ
ドのコピー数を増加させうる変異点が該遺伝子の少なく
とも1ヵ所に存在するDNA断片を保有するプラスミド。
DNA断片およびプラスミドの自律増殖に関する遺伝子を
含むDNA断片であって、プラスミドのコピー数を増加さ
せうる変異点が該遺伝子内の少なくとも1ヵ所に存在す
るDNA断片を提供する。 【解決手段】 ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自
律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片、プ
ラスミドのコピー数を増加させうる変異点が該遺伝内の
少なくとも１ヵ所に存在するDNA断片、およびプラスミ
ドのコピー数を増加させうる変異点が該遺伝子の少なく
とも1ヵ所に存在するDNA断片を保有するプラスミド。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、プラスミドの自律
増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片に関
し、さらに、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律
増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片であっ
て、プラスミドのコピー数を増加させうる変異点が該遺
伝子内の少なくとも1カ所に存在するDNA断片および該DN
A断片を有する多コピー数プラスミドベクターに関す
る。
増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片に関
し、さらに、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律
増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片であっ
て、プラスミドのコピー数を増加させうる変異点が該遺
伝子内の少なくとも1カ所に存在するDNA断片および該DN
A断片を有する多コピー数プラスミドベクターに関す
る。
【０００２】
【従来の技術】ロドコッカス属に属する微生物は、ニト
リル類を水和して対応するアミド類または酸を生産する
ための微生物触媒として知られており、また、PCB（ポ
リ塩化ビフェニル）等の分解あるいは原油の脱硫に関与
する酵素を生産すること、さらには、排水処理に用いら
れるようなバイオサーファクタントを生産することなど
の非常に多様な性質を示すことから、工業的に極めて有
用な微生物であることが知られている。またロドコッカ
ス ロドクロウス種（Rhodococcus rhodochrous）に属
する微生物が極めて高性能なニトリル水和活性を有する
ことが知られており、バイオ法アクリルアミドの製造触
媒として工業的に利用されている。
リル類を水和して対応するアミド類または酸を生産する
ための微生物触媒として知られており、また、PCB（ポ
リ塩化ビフェニル）等の分解あるいは原油の脱硫に関与
する酵素を生産すること、さらには、排水処理に用いら
れるようなバイオサーファクタントを生産することなど
の非常に多様な性質を示すことから、工業的に極めて有
用な微生物であることが知られている。またロドコッカ
ス ロドクロウス種（Rhodococcus rhodochrous）に属
する微生物が極めて高性能なニトリル水和活性を有する
ことが知られており、バイオ法アクリルアミドの製造触
媒として工業的に利用されている。
【０００３】このような状況下、ロドコッカス属の宿主
ベクター系の開発が以前から期待され、幾つか開発され
ている。ロドコッカス属細菌の工業的に有用なプラスミ
ドベクターとしては、例えばロドコッカス ロドクロウ
ス ATCC4276が保持するプラスミドpRC001、ロドコッカ
ス ロドクロウス ATCC14349が保持するpRC002、ロド
コッカス ロドクロウス ATCC14348が保持するpRC003
およびロドコッカスロドクロウス IFO 3338が保持する
プラスミドpRC004（特許第2983602号公報参照）、およ
び大腸菌細胞内で複製増殖可能なプラスミドDNA領域お
よび薬剤耐性遺伝子を含むDNA領域を有してなる複合プ
ラスミドベクターpK1、pK2、pK3およびpK4（特開平5-64
589号公報参照）、ロドコッカス エリスロポリス IFO
12320が保持するpRC020（特開平9-28379号公報参照）な
どが挙げられる。ロドコッカス属細菌を宿主とするプラ
スミドベクターに有用遺伝子を導入して、該遺伝子を発
現させる場合、その有用遺伝子の発現量はプラスミドベ
クターのコピー数にほぼ比例することが知られている。
しかしながら、これらのプラスミドのロドコッカス属細
菌の細胞内のコピー数は2〜6程度であり、外来遺伝子を
高発現させるためには必ずしも充分なものではない。
ベクター系の開発が以前から期待され、幾つか開発され
ている。ロドコッカス属細菌の工業的に有用なプラスミ
ドベクターとしては、例えばロドコッカス ロドクロウ
ス ATCC4276が保持するプラスミドpRC001、ロドコッカ
ス ロドクロウス ATCC14349が保持するpRC002、ロド
コッカス ロドクロウス ATCC14348が保持するpRC003
およびロドコッカスロドクロウス IFO 3338が保持する
プラスミドpRC004（特許第2983602号公報参照）、およ
び大腸菌細胞内で複製増殖可能なプラスミドDNA領域お
よび薬剤耐性遺伝子を含むDNA領域を有してなる複合プ
ラスミドベクターpK1、pK2、pK3およびpK4（特開平5-64
589号公報参照）、ロドコッカス エリスロポリス IFO
12320が保持するpRC020（特開平9-28379号公報参照）な
どが挙げられる。ロドコッカス属細菌を宿主とするプラ
スミドベクターに有用遺伝子を導入して、該遺伝子を発
現させる場合、その有用遺伝子の発現量はプラスミドベ
クターのコピー数にほぼ比例することが知られている。
しかしながら、これらのプラスミドのロドコッカス属細
菌の細胞内のコピー数は2〜6程度であり、外来遺伝子を
高発現させるためには必ずしも充分なものではない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】したがって、多コピー
数プラスミドベクターに有用遺伝子を挿入したものを細
胞内に導入することにより高い遺伝子増幅効果が期待さ
れる。本発明は、ロドコッカス属細菌内で自律複製し得
るプラスミドに由来し、プラスミドの自律増殖に関する
遺伝子を含むDNA断片、さらにはロドコッカス属細菌内
で自律複製し得るプラスミドに由来し、プラスミドの自
律増殖に関する遺伝子を含むDNA断片であって、プラス
ミドのコピー数を増加させうる変異点が該遺伝子内の少
なくとも1ヵ所に存在するDNA断片を提供することを目的
とする。
数プラスミドベクターに有用遺伝子を挿入したものを細
胞内に導入することにより高い遺伝子増幅効果が期待さ
れる。本発明は、ロドコッカス属細菌内で自律複製し得
るプラスミドに由来し、プラスミドの自律増殖に関する
遺伝子を含むDNA断片、さらにはロドコッカス属細菌内
で自律複製し得るプラスミドに由来し、プラスミドの自
律増殖に関する遺伝子を含むDNA断片であって、プラス
ミドのコピー数を増加させうる変異点が該遺伝子内の少
なくとも1ヵ所に存在するDNA断片を提供することを目的
とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ロドコッ
カス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する機能を有
する遺伝子を含むDNA領域を明らかにし、プラスミドの
コピー数を増加させうる変異点が該遺伝子内の少なくと
も1カ所に存在するDNA断片を取得することにより本発明
を完成させた。すなわち、本発明は、プラスミドpRC00
1、pRC002、pRC003およびpRC004から選ばれるプラスミ
ドに由来し、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律
増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片、さら
には、ロドコッカス属細菌内で自律複製し得るプラスミ
ドに由来し、プラスミドの自律増殖に関する遺伝子を含
むDNA断片であって、プラスミドのコピー数を増加させ
うる変異点が該遺伝子内の少なくとも1カ所に存在するD
NA断片、に関するものである。
カス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する機能を有
する遺伝子を含むDNA領域を明らかにし、プラスミドの
コピー数を増加させうる変異点が該遺伝子内の少なくと
も1カ所に存在するDNA断片を取得することにより本発明
を完成させた。すなわち、本発明は、プラスミドpRC00
1、pRC002、pRC003およびpRC004から選ばれるプラスミ
ドに由来し、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律
増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片、さら
には、ロドコッカス属細菌内で自律複製し得るプラスミ
ドに由来し、プラスミドの自律増殖に関する遺伝子を含
むDNA断片であって、プラスミドのコピー数を増加させ
うる変異点が該遺伝子内の少なくとも1カ所に存在するD
NA断片、に関するものである。
【０００６】すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１） プラスミドpRC001、pRC002、pRC003およびpRC0
04から選ばれるプラスミドに由来し、ロドコッカス（Rh
odococcus）属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する
機能を有する遺伝子を含むDNA断片、（２） 大きさが
1.6kbであり、制限酵素SplIおよびSacI切断点を末端に
有する（１）のDNA断片、（３） 大きさが1.7kbであ
り、制限酵素SmaIおよびSacI切断点を末端に有する
（１）のDNA断片、（４） 大きさが1.9kbであり、制限
酵素SmaI切断点を両末端に有する（１）のDNA断片、
（５） 大きさが2.3kbであり、制限酵素SacI切断点を
両末端に有する（１）のDNA断片、（６） pRC004に含
まれ、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含む、配列番号１の塩基配
列からなる（１）のDNA断片、（７） pRC004に含ま
れ、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含む、配列番号３の塩基配列
からなる（１）のDNA断片、（８） pRC004に含まれ、
ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する
機能を有する遺伝子を含む、配列番号７の塩基配列から
なる（１）のDNA断片、（９） プラスミドのコピー数
を増加させうる変異点が少なくとも1カ所に存在する
（１）〜（８）のいずれかのDNA断片、（１０） プラ
スミドのコピー数を増加させうる変異点が1カ所に存在
する、配列番号２の塩基配列からなる（９）のDNA断
片、（１１） プラスミドのコピー数を増加させうる変
異点が1カ所に存在する、配列番号４の塩基配列からな
る（９）のDNA断片、（１２）プラスミドのコピー数を
増加させうる変異点が1カ所に存在する、配列番号９の
塩基配列からなる（９）のDNA断片、（１３） （９）
〜（１２）のいずれかのDNA断片を保有する、ロドコッ
カス属細菌内で自立増殖し多コピー数存在し得るプラス
ミド、および（１４） 請求項１１に記載のDNA断片を
保有する、ロドコッカス属細菌内で自律増殖し多コピー
数存在し得るプラスミドpLK006。
04から選ばれるプラスミドに由来し、ロドコッカス（Rh
odococcus）属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する
機能を有する遺伝子を含むDNA断片、（２） 大きさが
1.6kbであり、制限酵素SplIおよびSacI切断点を末端に
有する（１）のDNA断片、（３） 大きさが1.7kbであ
り、制限酵素SmaIおよびSacI切断点を末端に有する
（１）のDNA断片、（４） 大きさが1.9kbであり、制限
酵素SmaI切断点を両末端に有する（１）のDNA断片、
（５） 大きさが2.3kbであり、制限酵素SacI切断点を
両末端に有する（１）のDNA断片、（６） pRC004に含
まれ、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含む、配列番号１の塩基配
列からなる（１）のDNA断片、（７） pRC004に含ま
れ、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含む、配列番号３の塩基配列
からなる（１）のDNA断片、（８） pRC004に含まれ、
ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する
機能を有する遺伝子を含む、配列番号７の塩基配列から
なる（１）のDNA断片、（９） プラスミドのコピー数
を増加させうる変異点が少なくとも1カ所に存在する
（１）〜（８）のいずれかのDNA断片、（１０） プラ
スミドのコピー数を増加させうる変異点が1カ所に存在
する、配列番号２の塩基配列からなる（９）のDNA断
片、（１１） プラスミドのコピー数を増加させうる変
異点が1カ所に存在する、配列番号４の塩基配列からな
る（９）のDNA断片、（１２）プラスミドのコピー数を
増加させうる変異点が1カ所に存在する、配列番号９の
塩基配列からなる（９）のDNA断片、（１３） （９）
〜（１２）のいずれかのDNA断片を保有する、ロドコッ
カス属細菌内で自立増殖し多コピー数存在し得るプラス
ミド、および（１４） 請求項１１に記載のDNA断片を
保有する、ロドコッカス属細菌内で自律増殖し多コピー
数存在し得るプラスミドpLK006。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明の、ロドコッカス属細菌内
でプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含むDNA断片であって、プラスミドのコピー数を増加さ
せうる変異点が該遺伝子内の少なくとも1カ所に存在す
るDNA断片（以下、多コピープラスミドDNA断片という）
とは、プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝
子を含むDNA断片であって、変異点を有さないDNA断片を
用いて作成されたプラスミドベクターのコピー数と比較
して、変異点を有するDNA断片を用いて作成されたプラ
スミドベクターのコピー数を増加させうる作用を有する
DNA断片を意味する。本明細書においては、コピー数と
いう術語は１細胞当たりのプラスミド分子数（プラスミ
ドの存在数）を意味し、多コピー数という述語は、プラ
スミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDN
A断片であって、変異点を有さないDNA断片を用いて作成
されたプラスミドベクターのコピー数よりも多いコピー
数を意味する。
でプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含むDNA断片であって、プラスミドのコピー数を増加さ
せうる変異点が該遺伝子内の少なくとも1カ所に存在す
るDNA断片（以下、多コピープラスミドDNA断片という）
とは、プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝
子を含むDNA断片であって、変異点を有さないDNA断片を
用いて作成されたプラスミドベクターのコピー数と比較
して、変異点を有するDNA断片を用いて作成されたプラ
スミドベクターのコピー数を増加させうる作用を有する
DNA断片を意味する。本明細書においては、コピー数と
いう術語は１細胞当たりのプラスミド分子数（プラスミ
ドの存在数）を意味し、多コピー数という述語は、プラ
スミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDN
A断片であって、変異点を有さないDNA断片を用いて作成
されたプラスミドベクターのコピー数よりも多いコピー
数を意味する。
【０００８】本発明の多コピープラスミドDNA断片は、
ロドコッカス属細菌内で自律増殖するプラスミドあるい
はプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含むDNA断片を適当な変異処理したものの中から取得す
ることができる。通常は、ロドコッカス属細菌内で自律
増殖するプラスミドあるいはプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含むDNA断片をマーカーとな
りうる薬剤耐性遺伝子を有するベクタープラスミド、例
えばカナマイシン耐性遺伝子を有するpHSG298（宝酒造
製）、クロラムフェニコール耐性遺伝子を有するpHSG39
8（宝酒造製）、テトラサイクリン耐性遺伝子を有するp
BR322（宝酒造製）あるいはアンピシリン耐性遺伝子を
有するpUC18（宝酒造製）に公知の方法で挿入し、この
ベクタープラスミドを電気パルス法により宿主ロドコッ
カス属細菌に形質転換し、得られる形質転換体から公知
の方法、例えばアルカリSDS法などによりプラスミドDNA
を回収し、制限酵素処理断片の解析などにより目的DNA
断片を確認することができる。
ロドコッカス属細菌内で自律増殖するプラスミドあるい
はプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含むDNA断片を適当な変異処理したものの中から取得す
ることができる。通常は、ロドコッカス属細菌内で自律
増殖するプラスミドあるいはプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含むDNA断片をマーカーとな
りうる薬剤耐性遺伝子を有するベクタープラスミド、例
えばカナマイシン耐性遺伝子を有するpHSG298（宝酒造
製）、クロラムフェニコール耐性遺伝子を有するpHSG39
8（宝酒造製）、テトラサイクリン耐性遺伝子を有するp
BR322（宝酒造製）あるいはアンピシリン耐性遺伝子を
有するpUC18（宝酒造製）に公知の方法で挿入し、この
ベクタープラスミドを電気パルス法により宿主ロドコッ
カス属細菌に形質転換し、得られる形質転換体から公知
の方法、例えばアルカリSDS法などによりプラスミドDNA
を回収し、制限酵素処理断片の解析などにより目的DNA
断片を確認することができる。
【０００９】適当な変異処理とは、上記のようにして作
成したプラスミド保持菌に、紫外線、Ｘ線、γ線などを
照射させるか、あるいはN-メチル-N'-ニトロソグアニジ
ンなどの変異剤で処理することなどである。また、生物
が増殖する際に起こる自然突然変異を利用することも可
能である。
成したプラスミド保持菌に、紫外線、Ｘ線、γ線などを
照射させるか、あるいはN-メチル-N'-ニトロソグアニジ
ンなどの変異剤で処理することなどである。また、生物
が増殖する際に起こる自然突然変異を利用することも可
能である。
【００１０】あるいは、ロドコッカス属細菌内で自律増
殖するプラスミドあるいはプラスミドの自律増殖に関す
る機能を有する遺伝子を含むDNA断片を直接、あるいは1
本鎖DNAにした後に、ヒドラジン、ギ酸あるいは亜硝酸
で処理すること、または、適当なプライマーを選択し
て、ヌクレオチドアナログあるいはマンガンイオンの存
在下などでPCRを行うことによるエラー誘発PCRなどを含
む公知の方法によりDNA断片に直接変異を導入すること
も効果的である。この方法によれば、DNA配列の特定の
場所に集中的に変異を導入することが可能なため、例え
ば本発明で開示しているようなプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片に特異的に変
異を導入することが可能である。また、プラスミドの自
律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片を合
成することも可能である。
殖するプラスミドあるいはプラスミドの自律増殖に関す
る機能を有する遺伝子を含むDNA断片を直接、あるいは1
本鎖DNAにした後に、ヒドラジン、ギ酸あるいは亜硝酸
で処理すること、または、適当なプライマーを選択し
て、ヌクレオチドアナログあるいはマンガンイオンの存
在下などでPCRを行うことによるエラー誘発PCRなどを含
む公知の方法によりDNA断片に直接変異を導入すること
も効果的である。この方法によれば、DNA配列の特定の
場所に集中的に変異を導入することが可能なため、例え
ば本発明で開示しているようなプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片に特異的に変
異を導入することが可能である。また、プラスミドの自
律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片を合
成することも可能である。
【００１１】以上のようにして変異を導入した薬剤マー
カー遺伝子を有するプラスミドベクターを保持する組換
え体を各種濃度の薬剤マーカーによる選択下で培養して
薬剤耐性濃度の上昇した菌株を選択することによりプラ
スミドコピー数の上昇したものを得ることができる。こ
のような菌株は、コピー数上昇による遺伝子増幅効果に
より薬剤耐性濃度が上昇したものと考えることができ
る。このような菌株からプラスミドを回収して多コピー
プラスミドDNA断片を得ることができる。
カー遺伝子を有するプラスミドベクターを保持する組換
え体を各種濃度の薬剤マーカーによる選択下で培養して
薬剤耐性濃度の上昇した菌株を選択することによりプラ
スミドコピー数の上昇したものを得ることができる。こ
のような菌株は、コピー数上昇による遺伝子増幅効果に
より薬剤耐性濃度が上昇したものと考えることができ
る。このような菌株からプラスミドを回収して多コピー
プラスミドDNA断片を得ることができる。
【００１２】変異処理を施したロドコッカス属細菌内で
自律増殖するプラスミドあるいはプラスミドの自律増殖
に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片の場合には
適当な薬剤耐性遺伝子を有する上述のプラスミドベクタ
ーを挿入した後、電気パルス法により宿主ロドコッカス
属細菌に形質転換し、各種濃度の薬剤マーカーによる選
択下で培養して薬剤耐性濃度の上昇した菌株を選択する
ことによりプラスミドコピー数の上昇したものを得るこ
とができる。マーカー遺伝子は、薬剤耐性遺伝子を用い
るのが簡便であるが、アルカリホスファターゼ、ルシフ
ェラーゼあるいはlacZ遺伝子など検出が簡便な公知の方
法を使用することもできる。
自律増殖するプラスミドあるいはプラスミドの自律増殖
に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片の場合には
適当な薬剤耐性遺伝子を有する上述のプラスミドベクタ
ーを挿入した後、電気パルス法により宿主ロドコッカス
属細菌に形質転換し、各種濃度の薬剤マーカーによる選
択下で培養して薬剤耐性濃度の上昇した菌株を選択する
ことによりプラスミドコピー数の上昇したものを得るこ
とができる。マーカー遺伝子は、薬剤耐性遺伝子を用い
るのが簡便であるが、アルカリホスファターゼ、ルシフ
ェラーゼあるいはlacZ遺伝子など検出が簡便な公知の方
法を使用することもできる。
【００１３】コピー数の解析は、例えば Journal of Ba
cteriology, 152, p.722 (1982)に記載の方法に従い行
うことができる。すなわち、細胞より染色体DNAおよび
プラスミドDNAを抽出し、双方の分子数の比を求めるこ
とにより行うことができる。より簡便には、変異点を有
しないプラスミドを保持する組換え体と変異点を有する
プラスミドを保持する組換え体を全く同様に培養し、プ
ラスミドを回収してアガロース電気泳動を行い、エチジ
ウムブロミドなどで染色した後デンシトメトリーにより
分析することによりコピー数の比較を行うこともでき
る。
cteriology, 152, p.722 (1982)に記載の方法に従い行
うことができる。すなわち、細胞より染色体DNAおよび
プラスミドDNAを抽出し、双方の分子数の比を求めるこ
とにより行うことができる。より簡便には、変異点を有
しないプラスミドを保持する組換え体と変異点を有する
プラスミドを保持する組換え体を全く同様に培養し、プ
ラスミドを回収してアガロース電気泳動を行い、エチジ
ウムブロミドなどで染色した後デンシトメトリーにより
分析することによりコピー数の比較を行うこともでき
る。
【００１４】ロドコッカス ロドクロウス IFO 3338由
来のプラスミドpRC004塩基配列を決定した結果を配列番
号1に示す。塩基配列情報から、pRC004には２つのオー
プンリーディング フレーム(ORF)が推定された。１つ
は配列番号５に示される921塩基（配列番号１の塩基配
列の1142番から2062番の塩基）にコードされると予想さ
れるORFであり（配列番号６に推定されるアミノ酸配列
を示す）、これは、ロドコッカス ロドクロウス NCIM
B13064由来のプラスミドのpKA22およびマイコバクテリ
ウム フォルツイタム由来のpAL5000のプラスミドの複
製に関与するRepAタンパクと類似している。もう１つは
配列番号７に示される282塩基（配列番号１の塩基配列
の2052番から2333番の塩基）にコードされると推定され
るORFであり（配列番号８に推定されるアミノ酸配列を
示す）、ロドコッカス エリスロポリス NI86/21由来
のプラスミドpFAJ2600のDNA結合性のプラスミド複製因
子と推定されているORFと類似している。しかしなが
ら、以上の考察は遺伝子の類似性に基づくものであり、
それらの機能を決定しているわけではなく、実際には機
能していない疑似遺伝子（シュードジーン）の可能性も
高い。
来のプラスミドpRC004塩基配列を決定した結果を配列番
号1に示す。塩基配列情報から、pRC004には２つのオー
プンリーディング フレーム(ORF)が推定された。１つ
は配列番号５に示される921塩基（配列番号１の塩基配
列の1142番から2062番の塩基）にコードされると予想さ
れるORFであり（配列番号６に推定されるアミノ酸配列
を示す）、これは、ロドコッカス ロドクロウス NCIM
B13064由来のプラスミドのpKA22およびマイコバクテリ
ウム フォルツイタム由来のpAL5000のプラスミドの複
製に関与するRepAタンパクと類似している。もう１つは
配列番号７に示される282塩基（配列番号１の塩基配列
の2052番から2333番の塩基）にコードされると推定され
るORFであり（配列番号８に推定されるアミノ酸配列を
示す）、ロドコッカス エリスロポリス NI86/21由来
のプラスミドpFAJ2600のDNA結合性のプラスミド複製因
子と推定されているORFと類似している。しかしなが
ら、以上の考察は遺伝子の類似性に基づくものであり、
それらの機能を決定しているわけではなく、実際には機
能していない疑似遺伝子（シュードジーン）の可能性も
高い。
【００１５】本発明により初めて、pRC004のSplIとSacI
による切断で生じる約1.6kbのDNA断片（配列番号３）
が、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含む領域であることが判明し
た。すなわち、pRC004をSmaIで切断して生じた約1.9kb
のDNA断片およびSacIで切断して生じた約2.3kbのDNA断
片にロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含む領域が含まれていること
が判明した。さらにこのSmaIで切断して生じた約1.9kb
のDNA断片をSacIで切断して生じた約1.7kbを調べたとこ
ろ、このDNA断片にもロドコッカス属細菌内でプラスミ
ドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含む領域が
含まれていることが判明した。さらにこの約1.7kbのDNA
断片をSplIで切断することにより生じた約1.6kbのDNA断
片にもロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含む領域が含まれているこ
とが判明した。
による切断で生じる約1.6kbのDNA断片（配列番号３）
が、ロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含む領域であることが判明し
た。すなわち、pRC004をSmaIで切断して生じた約1.9kb
のDNA断片およびSacIで切断して生じた約2.3kbのDNA断
片にロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関
する機能を有する遺伝子を含む領域が含まれていること
が判明した。さらにこのSmaIで切断して生じた約1.9kb
のDNA断片をSacIで切断して生じた約1.7kbを調べたとこ
ろ、このDNA断片にもロドコッカス属細菌内でプラスミ
ドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含む領域が
含まれていることが判明した。さらにこの約1.7kbのDNA
断片をSplIで切断することにより生じた約1.6kbのDNA断
片にもロドコッカス属細菌内でプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含む領域が含まれているこ
とが判明した。
【００１６】上記の制限酵素SplIおよびSacI切断点を末
端に有する約1.6kbのDNA断片中に存在するBamHI、BglI
I、SphI、XhoI認識部位をそれぞれの制限酵素で切断し
てklenow fragmentなどで処理して末端平滑化してセル
フライゲーションしたところ、ロドコッカス属細菌内で
のプラスミドの自律増殖の機能が失われたことから、こ
の領域に実際に機能しうるタンパク性の因子が存在する
ことが判明した。
端に有する約1.6kbのDNA断片中に存在するBamHI、BglI
I、SphI、XhoI認識部位をそれぞれの制限酵素で切断し
てklenow fragmentなどで処理して末端平滑化してセル
フライゲーションしたところ、ロドコッカス属細菌内で
のプラスミドの自律増殖の機能が失われたことから、こ
の領域に実際に機能しうるタンパク性の因子が存在する
ことが判明した。
【００１７】さらに、pRC004の該DNA断片における少な
くとも１カ所の変異点の導入によりプラスミドのコピー
数を増加させうるという知見は、本発明により初めて開
示されたものである。すなわち、pRC004にマーカーとし
て機能しうるカナマイシン耐性遺伝子を含むプラスミド
ベクターを挿入した複合プラスミドベクターを用いて、
カナマイシン耐性度が向上した変異体を取得することに
より、多コピー変異プラスミドを本発明により初めて取
得することができた。
くとも１カ所の変異点の導入によりプラスミドのコピー
数を増加させうるという知見は、本発明により初めて開
示されたものである。すなわち、pRC004にマーカーとし
て機能しうるカナマイシン耐性遺伝子を含むプラスミド
ベクターを挿入した複合プラスミドベクターを用いて、
カナマイシン耐性度が向上した変異体を取得することに
より、多コピー変異プラスミドを本発明により初めて取
得することができた。
【００１８】このロドコッカス属細菌内でプラスミドの
自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含む領域に変異
点を少なくとも１カ所導入することにより多コピー変異
プラスミドが得られることを初めて見いだした意義は大
きく、この発明を基に公知の方法により容易に多コピー
変異プラスミドが得られることを意味しているものと思
われる。
自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含む領域に変異
点を少なくとも１カ所導入することにより多コピー変異
プラスミドが得られることを初めて見いだした意義は大
きく、この発明を基に公知の方法により容易に多コピー
変異プラスミドが得られることを意味しているものと思
われる。
【００１９】このような多コピー変異プラスミドの例と
しては、本発明で得られたプラスミドpLK006などを挙げ
ることができる。pLK006では、ロドコッカス属細菌内で
プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含
む領域のうち、配列番号３に示される領域において1336
番目のグアニン塩基がチミン塩基へ置換した変異体であ
る（配列番号４）。これは、配列番号１の塩基配列の22
62番目の塩基、配列番号７の塩基配列の211番目の塩基
に相当し、配列番号２および配列番号９はそれぞれ配列
番号１および配列番号７の１つの塩基において変異を有
する配列を示している。推定されるORFのコードするア
ミノ酸配列は、配列番号８の71番目のグリシンがセリン
に変異（置換）したものである（配列番号１０）。な
お、プラスミドpLK006は、独立行政法人産業技術総合研
究所 特許生物寄託センターに、受託番号FERM P-1839
2として、平成13年6月22日に寄託されている。
しては、本発明で得られたプラスミドpLK006などを挙げ
ることができる。pLK006では、ロドコッカス属細菌内で
プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含
む領域のうち、配列番号３に示される領域において1336
番目のグアニン塩基がチミン塩基へ置換した変異体であ
る（配列番号４）。これは、配列番号１の塩基配列の22
62番目の塩基、配列番号７の塩基配列の211番目の塩基
に相当し、配列番号２および配列番号９はそれぞれ配列
番号１および配列番号７の１つの塩基において変異を有
する配列を示している。推定されるORFのコードするア
ミノ酸配列は、配列番号８の71番目のグリシンがセリン
に変異（置換）したものである（配列番号１０）。な
お、プラスミドpLK006は、独立行政法人産業技術総合研
究所 特許生物寄託センターに、受託番号FERM P-1839
2として、平成13年6月22日に寄託されている。
【００２０】また、本発明のDNA断片には、該DNAとスト
リンジェントな条件でハイブリダイズし、かつロドコッ
カス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する機能を有
する遺伝子を含むDNA断片、または該DNAとストリンジェ
ントな条件でハイブリダイズし、かつロドコッカス属細
菌内でプラスミドの自律増殖に関する機能を有し、プラ
スミドのコピー数を増加させうる変異点が少なくとも1
ヵ所に存在する遺伝子を含むDNA断片も含まれる。ここ
で、ストリンジェントな条件とは、いわゆる特異的なハ
イブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成
されない条件をいう。この条件は、相同性が高いDNA同
士、例えば少なくとも60％以上、好ましくは80％以上、
さらに好ましくは95％以上の相同性を有するDNA同士が
ハイブリダイズし、それより相同性の低いDNA同士がハ
イブリダイズしない条件、あるいは通常のサザンハイブ
リダイゼーション洗いの条件である60℃、1×SSC、0.1%
SSD、好ましくは、0.1×SSC、0.1%SDSに相当する塩濃度
でハイブリダイズする条件があげられる。このようなDN
Aは、例えば部位特異的変異法によって、本発明のDNA断
片の塩基配列を改変することによって得られる。
リンジェントな条件でハイブリダイズし、かつロドコッ
カス属細菌内でプラスミドの自律増殖に関する機能を有
する遺伝子を含むDNA断片、または該DNAとストリンジェ
ントな条件でハイブリダイズし、かつロドコッカス属細
菌内でプラスミドの自律増殖に関する機能を有し、プラ
スミドのコピー数を増加させうる変異点が少なくとも1
ヵ所に存在する遺伝子を含むDNA断片も含まれる。ここ
で、ストリンジェントな条件とは、いわゆる特異的なハ
イブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成
されない条件をいう。この条件は、相同性が高いDNA同
士、例えば少なくとも60％以上、好ましくは80％以上、
さらに好ましくは95％以上の相同性を有するDNA同士が
ハイブリダイズし、それより相同性の低いDNA同士がハ
イブリダイズしない条件、あるいは通常のサザンハイブ
リダイゼーション洗いの条件である60℃、1×SSC、0.1%
SSD、好ましくは、0.1×SSC、0.1%SDSに相当する塩濃度
でハイブリダイズする条件があげられる。このようなDN
Aは、例えば部位特異的変異法によって、本発明のDNA断
片の塩基配列を改変することによって得られる。
【００２１】
【実施例】次に、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、下記の実施例は本発明の技術的範囲を限定す
るものではない。 〔実施例１〕pRC004のロドコッカス属細菌でプラスミド
の自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片
の調製ロドコッカス ロドクロウス IFO 3338から抽出
したプラスミドpRC004(1μg)を制限酵素SmaIあるいはSa
cIを5units加え37℃、1時間反応させプラスミドDNAを切
断した。制限酵素で切断したプラスミド液を0.7% アガ
ロースゲル電気泳動に供し、SmaIで切断したものは、約
650bp、約1.9kbのDNA画分を、SacIで切断したものは、
約300bp、約2.3kbのDNA断片をそれぞれ切り出した。
明するが、下記の実施例は本発明の技術的範囲を限定す
るものではない。 〔実施例１〕pRC004のロドコッカス属細菌でプラスミド
の自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片
の調製ロドコッカス ロドクロウス IFO 3338から抽出
したプラスミドpRC004(1μg)を制限酵素SmaIあるいはSa
cIを5units加え37℃、1時間反応させプラスミドDNAを切
断した。制限酵素で切断したプラスミド液を0.7% アガ
ロースゲル電気泳動に供し、SmaIで切断したものは、約
650bp、約1.9kbのDNA画分を、SacIで切断したものは、
約300bp、約2.3kbのDNA断片をそれぞれ切り出した。
【００２２】一方、カナマイシン耐性遺伝子を有するプ
ラスミドベクターpHSG299（宝酒造製）0.5μgを制限酵
素SmaIあるいはSacIを5units加え37℃、1時間反応させ
プラスミドDNAを切断した。反応液に1M-Tris-HCl(pH9.
0) を1/10量加え、アルカリホスファターゼ(1unit）と6
5℃、1時間反応させた。制限酵素で切断したプラスミド
ベクター液を0.7% アガロースゲル電気泳動に供し、そ
れぞれ2.7kbのDNA断片を切り出した。
ラスミドベクターpHSG299（宝酒造製）0.5μgを制限酵
素SmaIあるいはSacIを5units加え37℃、1時間反応させ
プラスミドDNAを切断した。反応液に1M-Tris-HCl(pH9.
0) を1/10量加え、アルカリホスファターゼ(1unit）と6
5℃、1時間反応させた。制限酵素で切断したプラスミド
ベクター液を0.7% アガロースゲル電気泳動に供し、そ
れぞれ2.7kbのDNA断片を切り出した。
【００２３】DNA断片の切り出しの際は、サイズマーカ
ーとしてラムダファージDNAのHindIII消化物を用い、DN
Aのサイズを算出した。Gene clean kit（フナコシ
（株))を用いてアガロースゲルよりDNAを回収しＴＥ緩
衝液（10mMTris-HCl, １mMEDTA, (pH8.0)）に溶解し
た。それぞれのDNA断片を含む液を等量ずつ混合し、T4D
NAリガーゼ1unit, １mM ATP, 10mM ジチオスレイトー
ル, 10mM MgCl2となるように各成分を加えて4℃、1夜反
応させた。
ーとしてラムダファージDNAのHindIII消化物を用い、DN
Aのサイズを算出した。Gene clean kit（フナコシ
（株))を用いてアガロースゲルよりDNAを回収しＴＥ緩
衝液（10mMTris-HCl, １mMEDTA, (pH8.0)）に溶解し
た。それぞれのDNA断片を含む液を等量ずつ混合し、T4D
NAリガーゼ1unit, １mM ATP, 10mM ジチオスレイトー
ル, 10mM MgCl2となるように各成分を加えて4℃、1夜反
応させた。
【００２４】大腸菌JM105株のコンピテントセル（宝酒
造製）に上記反応液を加え、0℃、１時間静置後、42
℃、2分間の熱処理を行い、2×YT培地（0.5％NaCl，1％
イーストエキス、1.6％トリプトン）を加えて37℃、1時
間振とうした。 25μｇ／mlカナマイシン、１mM IPTG
（イソプロピル-β-ガラクトピラノシド）、および0.02
％X-gal(5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラク
トピラノシド)を含む2×YT寒天培地に塗布し、37℃、1
夜静置培養した。出現したコロニーより白色のコロニー
を選択し、50μg/mlカナマイシン入りの2×YT培地（3m
l）で37℃にて8時間振とう培養した。
造製）に上記反応液を加え、0℃、１時間静置後、42
℃、2分間の熱処理を行い、2×YT培地（0.5％NaCl，1％
イーストエキス、1.6％トリプトン）を加えて37℃、1時
間振とうした。 25μｇ／mlカナマイシン、１mM IPTG
（イソプロピル-β-ガラクトピラノシド）、および0.02
％X-gal(5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラク
トピラノシド)を含む2×YT寒天培地に塗布し、37℃、1
夜静置培養した。出現したコロニーより白色のコロニー
を選択し、50μg/mlカナマイシン入りの2×YT培地（3m
l）で37℃にて8時間振とう培養した。
【００２５】15,000rpm、5分間の遠心分離により菌体を
回収し、0.35ml STET溶液（8％シュークロース、0.５％
TritonX-100, 50mM EDTA, 10mM Tris-HCl(pH8.0))に懸
濁した。リゾチーム液（10mg／ml）25μlを加え、Vorte
xで3秒間攪拌後、沸騰している湯に50秒間浸した。15,0
00rpm、15分間の遠心分離により沈澱を取り除き上清を
得た。これにTE飽和フェノール：クロロホルム（1:1）
液を0.5ml加え攪拌後、15,000rpm、5分遠心分離を行
い、上層を得た。ジエチルエーテル0.5mlを加えて混合
後、遠心分離を行い上層を除去した。イソプロパノール
0.5ml、2.5M酢酸ナトリウム液 (pH4.5) 50μlを加え、
−80℃、30分静置後15,000rpm、10分遠心分離を行い沈
澱を得た。70％エタノールで洗浄し、減圧乾燥させ、0.
１mlのTE緩衝液に溶解させた。
回収し、0.35ml STET溶液（8％シュークロース、0.５％
TritonX-100, 50mM EDTA, 10mM Tris-HCl(pH8.0))に懸
濁した。リゾチーム液（10mg／ml）25μlを加え、Vorte
xで3秒間攪拌後、沸騰している湯に50秒間浸した。15,0
00rpm、15分間の遠心分離により沈澱を取り除き上清を
得た。これにTE飽和フェノール：クロロホルム（1:1）
液を0.5ml加え攪拌後、15,000rpm、5分遠心分離を行
い、上層を得た。ジエチルエーテル0.5mlを加えて混合
後、遠心分離を行い上層を除去した。イソプロパノール
0.5ml、2.5M酢酸ナトリウム液 (pH4.5) 50μlを加え、
−80℃、30分静置後15,000rpm、10分遠心分離を行い沈
澱を得た。70％エタノールで洗浄し、減圧乾燥させ、0.
１mlのTE緩衝液に溶解させた。
【００２６】このようにして調製した上記プラスミド溶
液を用いて、制限酵素SmaIあるいはSacIで切断して、目
的のDNA断片が挿入されていることを確認した。それぞ
れのDNA断片が挿入されたプラスミドを用いて、電気パ
ルス法によりロドコッカス ロドクロウス ATCC12674
を宿主として形質転換を行った。
液を用いて、制限酵素SmaIあるいはSacIで切断して、目
的のDNA断片が挿入されていることを確認した。それぞ
れのDNA断片が挿入されたプラスミドを用いて、電気パ
ルス法によりロドコッカス ロドクロウス ATCC12674
を宿主として形質転換を行った。
【００２７】電気パルス法による形質転換は、以下の方
法で行った。ロドコッカス ロドクロウス ATCC12674
株の対数増殖期の細胞を遠心分離機により集菌し、氷冷
した滅菌水にて3回洗浄し、滅菌水に懸濁した。上記の
プラスミド1μlと菌体懸濁液10μlを混合し氷冷した。
キュベットにDNAと菌体の懸濁液を入れ、遺伝子導入装
置Gene Pulser(BIO RAD)により2.0kV、200 OHMSで電気
パルス処理を行った。電気パルス処理液を氷冷下、10分
間静置し、37℃で10分間ヒートショックを行い、MYK培
地（0.5％ポリペプトン、0.3％バクトイーストエキス、
0.3％バクトモルトエキス、0.2％K2HPO4、0.2％KH2PO4)
500μlを加え、30℃、5時間静置した後、50mg/Lカナマ
イシン入りMYK寒天培地に塗布し、30℃、3日間培養し
た。
法で行った。ロドコッカス ロドクロウス ATCC12674
株の対数増殖期の細胞を遠心分離機により集菌し、氷冷
した滅菌水にて3回洗浄し、滅菌水に懸濁した。上記の
プラスミド1μlと菌体懸濁液10μlを混合し氷冷した。
キュベットにDNAと菌体の懸濁液を入れ、遺伝子導入装
置Gene Pulser(BIO RAD)により2.0kV、200 OHMSで電気
パルス処理を行った。電気パルス処理液を氷冷下、10分
間静置し、37℃で10分間ヒートショックを行い、MYK培
地（0.5％ポリペプトン、0.3％バクトイーストエキス、
0.3％バクトモルトエキス、0.2％K2HPO4、0.2％KH2PO4)
500μlを加え、30℃、5時間静置した後、50mg/Lカナマ
イシン入りMYK寒天培地に塗布し、30℃、3日間培養し
た。
【００２８】表１に使用したプラスミドと形質転換体の
取得の有無を示す。pRC004の約1.9kbのSmaI切断断片及
び約2.3kbのSacI断片をプラスミドベクターpHSG299に挿
入したプラスミドを用いた場合にカナマイシン耐性組換
え体が得られた。得られた組換え体からプラスミドを抽
出してアガロース電気泳動により分析したところそれぞ
れ形質転換に使用したプラスミドと同じ分子量を示すプ
ラスミドが得られた。
取得の有無を示す。pRC004の約1.9kbのSmaI切断断片及
び約2.3kbのSacI断片をプラスミドベクターpHSG299に挿
入したプラスミドを用いた場合にカナマイシン耐性組換
え体が得られた。得られた組換え体からプラスミドを抽
出してアガロース電気泳動により分析したところそれぞ
れ形質転換に使用したプラスミドと同じ分子量を示すプ
ラスミドが得られた。
【００２９】
【表１】
【００３０】〔実施例２〕実施例２と同様にしてロドコ
ッカス ロドクロウス IFO 3338から抽出したプラスミ
ドpRC004(1μg)を制限酵素SmaI及びSacIを5units加え37
℃、1時間反応させプラスミドDNAを切断した。制限酵素
で切断したプラスミド液を0.7% アガロースゲル電気泳
動に供し、約1.7kbのDNA断片を切り出した。
ッカス ロドクロウス IFO 3338から抽出したプラスミ
ドpRC004(1μg)を制限酵素SmaI及びSacIを5units加え37
℃、1時間反応させプラスミドDNAを切断した。制限酵素
で切断したプラスミド液を0.7% アガロースゲル電気泳
動に供し、約1.7kbのDNA断片を切り出した。
【００３１】一方、カナマイシン耐性遺伝子を有するプ
ラスミドベクターpHSG299（宝酒造製）0.5μｇを制限酵
素SmaI及びSacIを5units加え37℃、1時間反応させプラ
スミドDNAを切断した。反応液に1M-Tris-HCl(pH9.0) を
1/10量加え、アルカリホスファターゼ(1unit）と65℃、
１時間反応させた。制限酵素で切断したプラスミドベク
ター液を0.7% アガロースゲル電気泳動に供し、2.7kbの
DNA断片を切り出した。
ラスミドベクターpHSG299（宝酒造製）0.5μｇを制限酵
素SmaI及びSacIを5units加え37℃、1時間反応させプラ
スミドDNAを切断した。反応液に1M-Tris-HCl(pH9.0) を
1/10量加え、アルカリホスファターゼ(1unit）と65℃、
１時間反応させた。制限酵素で切断したプラスミドベク
ター液を0.7% アガロースゲル電気泳動に供し、2.7kbの
DNA断片を切り出した。
【００３２】それぞれのDNA断片を含む液を等量ずつ混
合し、T4DNAリガーゼ1unit, １mM ATP、 10mM ジチオス
レイトール, 10mM MgCl2となるように各成分を加えて4
℃、1夜反応させた。上記反応液で大腸菌JM105を形質転
換し、上記の約1.7kbのDNA断片の挿入されたプラスミド
を取得した。得られたプラスミドを用いて電気パルス法
によりロドコッカス ロドクロウス ATCC12674を形質
転換したところカナマイシン耐性の形質転換体が取得で
きた。
合し、T4DNAリガーゼ1unit, １mM ATP、 10mM ジチオス
レイトール, 10mM MgCl2となるように各成分を加えて4
℃、1夜反応させた。上記反応液で大腸菌JM105を形質転
換し、上記の約1.7kbのDNA断片の挿入されたプラスミド
を取得した。得られたプラスミドを用いて電気パルス法
によりロドコッカス ロドクロウス ATCC12674を形質
転換したところカナマイシン耐性の形質転換体が取得で
きた。
【００３３】〔実施例３〕実施例２で得られたプラスミ
ドを制限酵素SplIおよびSmaIを5units加え37℃、1時間
反応させプラスミドDNAを切断した。切断したプラスミ
ドをエタノール沈殿により回収した後、klenow fragmen
t 5units添加して末端平滑化し、T4DNAリガーゼ1unit、
1mM ATP,10mM ジチオスレイトール, 10mM MgCl2となる
ように各成分を加えて4℃、1夜反応させた。
ドを制限酵素SplIおよびSmaIを5units加え37℃、1時間
反応させプラスミドDNAを切断した。切断したプラスミ
ドをエタノール沈殿により回収した後、klenow fragmen
t 5units添加して末端平滑化し、T4DNAリガーゼ1unit、
1mM ATP,10mM ジチオスレイトール, 10mM MgCl2となる
ように各成分を加えて4℃、1夜反応させた。
【００３４】上記反応液で大腸菌JM105を形質転換し、
上記の約1.6kbのDNA断片の挿入されたプラスミドを取得
した。得られたプラスミドを用いて電気パルス法により
ロドコッカス ロドクロウス ATCC12674を形質転換し
たところカナマイシン耐性の形質転換体が取得できた。
上記の約1.6kbのDNA断片の挿入されたプラスミドを取得
した。得られたプラスミドを用いて電気パルス法により
ロドコッカス ロドクロウス ATCC12674を形質転換し
たところカナマイシン耐性の形質転換体が取得できた。
【００３５】〔実施例４〕
多コピープラスミドDNA断片の取得。
プラスミドpRC004とプラスミドpHSG299とからなる複合
プラスミドベクターpK4を用いて、電気パルス法により
ロドコッカス sp N775（独立行政法人産業技術総合研
究所 特許生物寄託センター 寄託番号FERM BP-961）
を形質転換した。得られた形質転換体を10mlのMYK培地
で30℃にて1日培養したものをクリーンベンチ内で紫外
線を照射することにより変異処理を行った。変異処理を
行った培養液を50〜400μg/mlのカナマイシンを含むMYK
寒天培地に塗布し、30℃、3日間培養した。
プラスミドベクターpK4を用いて、電気パルス法により
ロドコッカス sp N775（独立行政法人産業技術総合研
究所 特許生物寄託センター 寄託番号FERM BP-961）
を形質転換した。得られた形質転換体を10mlのMYK培地
で30℃にて1日培養したものをクリーンベンチ内で紫外
線を照射することにより変異処理を行った。変異処理を
行った培養液を50〜400μg/mlのカナマイシンを含むMYK
寒天培地に塗布し、30℃、3日間培養した。
【００３６】生育してきたコロニーを培養し、プラスミ
ドを回収した。回収したプラスミドを用いてロドコッカ
ス sp N775を再形質転換して、カナマイシン耐性濃度
が上昇していることをチェックした。明らかにカナマイ
シン耐性濃度が向上している組換え体が数株得られた。
得られた組換え体の一つであるpLK006株と変異点を有さ
ない複合ベクターpK4で形質転換した組換え体とから各
々、染色体及びプラスミドDNAを調製してプラスミドの
コピー数を比較したところ変異処理により得られたpLK0
06はpK4と比べて約5倍コピー数が上昇していた。上記微
生物のうち、本発明者らにより作製された遺伝子組換え
体に関しては、上記番号にて独立行政法人産業技術総合
研究所 特許生物寄託センター（旧 通産省工業技術院
生命工学工業技術研究所）に寄託されている。
ドを回収した。回収したプラスミドを用いてロドコッカ
ス sp N775を再形質転換して、カナマイシン耐性濃度
が上昇していることをチェックした。明らかにカナマイ
シン耐性濃度が向上している組換え体が数株得られた。
得られた組換え体の一つであるpLK006株と変異点を有さ
ない複合ベクターpK4で形質転換した組換え体とから各
々、染色体及びプラスミドDNAを調製してプラスミドの
コピー数を比較したところ変異処理により得られたpLK0
06はpK4と比べて約5倍コピー数が上昇していた。上記微
生物のうち、本発明者らにより作製された遺伝子組換え
体に関しては、上記番号にて独立行政法人産業技術総合
研究所 特許生物寄託センター（旧 通産省工業技術院
生命工学工業技術研究所）に寄託されている。
【００３７】〔実施例５〕
変異点の決定。
実施例３により得られた多コピー変異プラスミドpLK006
の塩基配列をファルマシア社蛍光シーケンサALFIIを用
いて決定した。その結果、配列番号４に示される塩基配
列が得られた。配列番号２に示される領域において1336
番目のグアニン塩基がチミン塩基へと変異（置換）して
いる。
の塩基配列をファルマシア社蛍光シーケンサALFIIを用
いて決定した。その結果、配列番号４に示される塩基配
列が得られた。配列番号２に示される領域において1336
番目のグアニン塩基がチミン塩基へと変異（置換）して
いる。
【００３８】
【発明の効果】本発明により提供されるロドコッカス属
細菌を宿主とする多コピー数プラスミドベクターに有用
遺伝子を導入することにより、有用遺伝子の発現量を向
上させることが可能である。このようにして有用遺伝子
の発現量が向上した遺伝子組換え体は産業上非常に有用
である。
細菌を宿主とする多コピー数プラスミドベクターに有用
遺伝子を導入することにより、有用遺伝子の発現量を向
上させることが可能である。このようにして有用遺伝子
の発現量が向上した遺伝子組換え体は産業上非常に有用
である。
【００３９】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> MITSUBISHI RAYON Co.,Ltd.
<120> A DNA fragment comprising a gene which has the function
relating to the autonomous replication of a plasmid
<130> P00-0883
<140>
<141>
<160> 10
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 2582
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 1
cgatggcaag ccaccgcgaa gcggtggcgc ggcagaacct cgttttgccc ctgaggaggt 60
gacgcgaatg catgaagcat gtcgcacttg cgcgccttgt cctgttatct gtaagatcga 120
cccctggtgt acctcgtgca cccaaaatca ggcccggtgg ttcctttgga cccgggcctt 180
cgttatttcc acgccagccc gagctccgcc cgctcgtgca agcgtcatgc tcttcgtccg 240
tgatcaagac ctccgaacct atggccggcc aaccccctcg ggttgcgtcg gcctgacccg 300
ttctagggcg tctacgcggc cgctttccca ctccgtccat accaaccccc gcaccaaagg 360
tccgggggtt ttttcatgcc cggattcggt cgcggctgcg cctcgacggt ctccggttgc 420
ccaaggaggc acccatgact tgctccacct gctcctcgcc tgcccccgaa ccgcgaccgt 480
cgcgcaaaga ggcggtccag caactcgcga tccgatcgct ggcgttcttg tttcgccact 540
gcacacgaat cgccctgaac gaagtggtcc aagaactgat ccgcatcaag ttcggcggtt 600
gaccgcggac gtgcacctgt agagcgggtt gcagcgagac accgatgaac cactctccgc 660
tgcctaggcg acccggttct ggaaagatca tcaccgagtg tccggcccca ccccctgcgg 720
gccggacact catctgtatg gcagcgtgcc tcccttcctg cccttcccac tgatcgtttc 780
ctcctgccaa aaatcgggac acacctcttg cagaagttct gacacccggg aaaggccggc 840
cgaaaggggg cgctcaccga ccactctgat cgagaagttc tgccgcaccc accagccgta 900
cccggccaac cttccgcagt cccagccgta cgaaacggtc tcgtgccact ccaccggccc 960
tggtgtcgat cgactacaaa ccaagatccc cacacacctc atgcactaaa gctgcgacca 1020
cgaagaacaa ggtggtccgg gtaagacgga agggagtttt cccaggaggg tcgccgaaac 1080
atctgacttg gttggcgtgt cctacataaa aaaattgatc ttgcgtgtga gggtgtcacg 1140
catggatatg agcgggggat ctctcagtgg ggactgggag cagttgtggc tgcctctgtg 1200
gccgctcgca acggacgatt tgttgcttgg ggtctaccgg atgcctcgcc aggatgcgct 1260
cgatcggcgc taccttgagg ccaatccgca ggcgctgagc aatctcctcg tcgtcgatgt 1320
cgatcatcca gacgcggcac tgcgggctct gtctgccgcc ggcaaccatc ccttgccgaa 1380
cgcgatcgtg gaaaacccgc gcaatggaca cgcacatgcg gtgtgggcat tgaccgaacc 1440
tttcacgcgc accgagtacg ccagacgtaa gccactcgct tatgccgcag cggtaaacga 1500
ggggctgcgt cgagctgtcg atggcgatgc cgcctattcg gggttgatga cgaagaaccc 1560
gactcactca gcctgggaca cacactggat ccacgccgag actcgatcgc tggcagatct 1620
cgaacatgac ctcggaaagc atatgccgcc accccggtgg cgacagagca aacgtcgtcg 1680
cgaagaccca gtcggactcg gacgtaattg catgctcttc gagacggcac gcacttgggc 1740
ataccgcgaa ttgcgttgcc attggggaga tcccgaaggt ttagggaaag caattcaggt 1800
cgaagccgca gaccttaacg ctgccttctc tgagcctttg ccggtaagcg aagtacgagc 1860
tatcgcagcc agcattcacc gctggatcgt caccaagtcc cgcatgtggg ccgatggccc 1920
tgcggtttac gaagccacct tcgtcgctat ccaatccgct cgcggacgca agatgacgga 1980
gaagaagcgc gaggccaatc gtcgccgtgc aacgaagtac gaccgcgacc tcgtgaggaa 2040
ggaggcgacc gatgggagct gagacgccgg cccggcgaac ccgcacagct cgcgaagtgg 2100
cggaacgaat cggtgcgtcc ccacgcacgg tgcggcgcat catcgcggag cctcgagctt 2160
catacgaagc tcgagcagct gaacgtcgaa agcaagtact cgaactccgt gcgagcggga 2220
tgaagctgcg tgagatcgcg gcggaggtag gtatgtcggt cggtggagta gggacgatcc 2280
tgcatcacgc ccgtaagacc gagcagtcta aggctgaagg agctatggca tgaacgacgc 2340
catatcggcc cgcatcactg caatgcaggc ccaactgacg gctgtacata ccgagctacg 2400
tgctctagcg gagctggtgg acatgcttga tgccgacgct ctcgatgctg agaccgaaga 2460
ttcagtgcgc gaagtgatcg actccctggc agacgctggg cgagctctag ctggcgccga 2520
cgagccgctc caggccgcaa ttcatcacgc ccggcgactg ccttagtcag cttctgtccg 2580
at 2582
<210> 2
<211> 2582
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 2
cgatggcaag ccaccgcgaa gcggtggcgc ggcagaacct cgttttgccc ctgaggaggt 60
gacgcgaatg catgaagcat gtcgcacttg cgcgccttgt cctgttatct gtaagatcga 120
cccctggtgt acctcgtgca cccaaaatca ggcccggtgg ttcctttgga cccgggcctt 180
cgttatttcc acgccagccc gagctccgcc cgctcgtgca agcgtcatgc tcttcgtccg 240
tgatcaagac ctccgaacct atggccggcc aaccccctcg ggttgcgtcg gcctgacccg 300
ttctagggcg tctacgcggc cgctttccca ctccgtccat accaaccccc gcaccaaagg 360
tccgggggtt ttttcatgcc cggattcggt cgcggctgcg cctcgacggt ctccggttgc 420
ccaaggaggc acccatgact tgctccacct gctcctcgcc tgcccccgaa ccgcgaccgt 480
cgcgcaaaga ggcggtccag caactcgcga tccgatcgct ggcgttcttg tttcgccact 540
gcacacgaat cgccctgaac gaagtggtcc aagaactgat ccgcatcaag ttcggcggtt 600
gaccgcggac gtgcacctgt agagcgggtt gcagcgagac accgatgaac cactctccgc 660
tgcctaggcg acccggttct ggaaagatca tcaccgagtg tccggcccca ccccctgcgg 720
gccggacact catctgtatg gcagcgtgcc tcccttcctg cccttcccac tgatcgtttc 780
ctcctgccaa aaatcgggac acacctcttg cagaagttct gacacccggg aaaggccggc 840
cgaaaggggg cgctcaccga ccactctgat cgagaagttc tgccgcaccc accagccgta 900
cccggccaac cttccgcagt cccagccgta cgaaacggtc tcgtgccact ccaccggccc 960
tggtgtcgat cgactacaaa ccaagatccc cacacacctc atgcactaaa gctgcgacca 1020
cgaagaacaa ggtggtccgg gtaagacgga agggagtttt cccaggaggg tcgccgaaac 1080
atctgacttg gttggcgtgt cctacataaa aaaattgatc ttgcgtgtga gggtgtcacg 1140
catggatatg agcgggggat ctctcagtgg ggactgggag cagttgtggc tgcctctgtg 1200
gccgctcgca acggacgatt tgttgcttgg ggtctaccgg atgcctcgcc aggatgcgct 1260
cgatcggcgc taccttgagg ccaatccgca ggcgctgagc aatctcctcg tcgtcgatgt 1320
cgatcatcca gacgcggcac tgcgggctct gtctgccgcc ggcaaccatc ccttgccgaa 1380
cgcgatcgtg gaaaacccgc gcaatggaca cgcacatgcg gtgtgggcat tgaccgaacc 1440
tttcacgcgc accgagtacg ccagacgtaa gccactcgct tatgccgcag cggtaaacga 1500
ggggctgcgt cgagctgtcg atggcgatgc cgcctattcg gggttgatga cgaagaaccc 1560
gactcactca gcctgggaca cacactggat ccacgccgag actcgatcgc tggcagatct 1620
cgaacatgac ctcggaaagc atatgccgcc accccggtgg cgacagagca aacgtcgtcg 1680
cgaagaccca gtcggactcg gacgtaattg catgctcttc gagacggcac gcacttgggc 1740
ataccgcgaa ttgcgttgcc attggggaga tcccgaaggt ttagggaaag caattcaggt 1800
cgaagccgca gaccttaacg ctgccttctc tgagcctttg ccggtaagcg aagtacgagc 1860
tatcgcagcc agcattcacc gctggatcgt caccaagtcc cgcatgtggg ccgatggccc 1920
tgcggtttac gaagccacct tcgtcgctat ccaatccgct cgcggacgca agatgacgga 1980
gaagaagcgc gaggccaatc gtcgccgtgc aacgaagtac gaccgcgacc tcgtgaggaa 2040
ggaggcgacc gatgggagct gagacgccgg cccggcgaac ccgcacagct cgcgaagtgg 2100
cggaacgaat cggtgcgtcc ccacgcacgg tgcggcgcat catcgcggag cctcgagctt 2160
catacgaagc tcgagcagct gaacgtcgaa agcaagtact cgaactccgt gcgagcggga 2220
tgaagctgcg tgagatcgcg gcggaggtag gtatgtcggt ctgtggagta gggacgatcc 2280
tgcatcacgc ccgtaagacc gagcagtcta aggctgaagg agctatggca tgaacgacgc 2340
catatcggcc cgcatcactg caatgcaggc ccaactgacg gctgtacata ccgagctacg 2400
tgctctagcg gagctggtgg acatgcttga tgccgacgct ctcgatgctg agaccgaaga 2460
ttcagtgcgc gaagtgatcg actccctggc agacgctggg cgagctctag ctggcgccga 2520
cgagccgctc caggccgcaa ttcatcacgc ccggcgactg ccttagtcag cttctgtccg 2580
at 2582
<210> 3
<211> 1581
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 3
cgtacgaaac ggtctcgtgc cactccaccg gccctggtgt cgatcgacta caaaccaaga 60
tccccacaca cctcatgcac taaagctgcg accacgaaga acaaggtggt ccgggtaaga 120
cggaagggag ttttcccagg agggtcgccg aaacatctga cttggttggc gtgtcctaca 180
taaaaaaatt gatcttgcgt gtgagggtgt cacgcatgga tatgagcggg ggatctctca 240
gtggggactg ggagcagttg tggctgcctc tgtggccgct cgcaacggac gatttgttgc 300
ttggggtcta ccggatgcct cgccaggatg cgctcgatcg gcgctacctt gaggccaatc 360
cgcaggcgct gagcaatctc ctcgtcgtcg atgtcgatca tccagacgcg gcactgcggg 420
ctctgtctgc cgccggcaac catcccttgc cgaacgcgat cgtggaaaac ccgcgcaatg 480
gacacgcaca tgcggtgtgg gcattgaccg aacctttcac gcgcaccgag tacgccagac 540
gtaagccact cgcttatgcc gcagcggtaa acgaggggct gcgtcgagct gtcgatggcg 600
atgccgccta ttcggggttg atgacgaaga acccgactca ctcagcctgg gacacacact 660
ggatccacgc cgagactcga tcgctggcag atctcgaaca tgacctcgga aagcatatgc 720
cgccaccccg gtggcgacag agcaaacgtc gtcgcgaaga cccagtcgga ctcggacgta 780
attgcatgct cttcgagacg gcacgcactt gggcataccg cgaattgcgt tgccattggg 840
gagatcccga aggtttaggg aaagcaattc aggtcgaagc cgcagacctt aacgctgcct 900
tctctgagcc tttgccggta agcgaagtac gagctatcgc agccagcatt caccgctgga 960
tcgtcaccaa gtcccgcatg tgggccgatg gccctgcggt ttacgaagcc accttcgtcg 1020
ctatccaatc cgctcgcgga cgcaagatga cggagaagaa gcgcgaggcc aatcgtcgcc 1080
gtgcaacgaa gtacgaccgc gacctcgtga ggaaggaggc gaccgatggg agctgagacg 1140
ccggcccggc gaacccgcac agctcgcgaa gtggcggaac gaatcggtgc gtccccacgc 1200
acggtgcggc gcatcatcgc ggagcctcga gcttcatacg aagctcgagc agctgaacgt 1260
cgaaagcaag tactcgaact ccgtgcgagc gggatgaagc tgcgtgagat cgcggcggag 1320
gtaggtatgt cggtcggtgg agtagggacg atcctgcatc acgcccgtaa gaccgagcag 1380
tctaaggctg aaggagctat ggcatgaacg acgccatatc ggcccgcatc actgcaatgc 1440
aggcccaact gacggctgta cataccgagc tacgtgctct agcggagctg gtggacatgc 1500
ttgatgccga cgctctcgat gctgagaccg aagattcagt gcgcgaagtg atcgactccc 1560
tggcagacgc tgggcgagct c 1581
<210> 4
<211> 1581
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 4
cgtacgaaac ggtctcgtgc cactccaccg gccctggtgt cgatcgacta caaaccaaga 60
tccccacaca cctcatgcac taaagctgcg accacgaaga acaaggtggt ccgggtaaga 120
cggaagggag ttttcccagg agggtcgccg aaacatctga cttggttggc gtgtcctaca 180
taaaaaaatt gatcttgcgt gtgagggtgt cacgcatgga tatgagcggg ggatctctca 240
gtggggactg ggagcagttg tggctgcctc tgtggccgct cgcaacggac gatttgttgc 300
ttggggtcta ccggatgcct cgccaggatg cgctcgatcg gcgctacctt gaggccaatc 360
cgcaggcgct gagcaatctc ctcgtcgtcg atgtcgatca tccagacgcg gcactgcggg 420
ctctgtctgc cgccggcaac catcccttgc cgaacgcgat cgtggaaaac ccgcgcaatg 480
gacacgcaca tgcggtgtgg gcattgaccg aacctttcac gcgcaccgag tacgccagac 540
gtaagccact cgcttatgcc gcagcggtaa acgaggggct gcgtcgagct gtcgatggcg 600
atgccgccta ttcggggttg atgacgaaga acccgactca ctcagcctgg gacacacact 660
ggatccacgc cgagactcga tcgctggcag atctcgaaca tgacctcgga aagcatatgc 720
cgccaccccg gtggcgacag agcaaacgtc gtcgcgaaga cccagtcgga ctcggacgta 780
attgcatgct cttcgagacg gcacgcactt gggcataccg cgaattgcgt tgccattggg 840
gagatcccga aggtttaggg aaagcaattc aggtcgaagc cgcagacctt aacgctgcct 900
tctctgagcc tttgccggta agcgaagtac gagctatcgc agccagcatt caccgctgga 960
tcgtcaccaa gtcccgcatg tgggccgatg gccctgcggt ttacgaagcc accttcgtcg 1020
ctatccaatc cgctcgcgga cgcaagatga cggagaagaa gcgcgaggcc aatcgtcgcc 1080
gtgcaacgaa gtacgaccgc gacctcgtga ggaaggaggc gaccgatggg agctgagacg 1140
ccggcccggc gaacccgcac agctcgcgaa gtggcggaac gaatcggtgc gtccccacgc 1200
acggtgcggc gcatcatcgc ggagcctcga gcttcatacg aagctcgagc agctgaacgt 1260
cgaaagcaag tactcgaact ccgtgcgagc gggatgaagc tgcgtgagat cgcggcggag 1320
gtaggtatgt cggtctgtgg agtagggacg atcctgcatc acgcccgtaa gaccgagcag 1380
tctaaggctg aaggagctat ggcatgaacg acgccatatc ggcccgcatc actgcaatgc 1440
aggcccaact gacggctgta cataccgagc tacgtgctct agcggagctg gtggacatgc 1500
ttgatgccga cgctctcgat gctgagaccg aagattcagt gcgcgaagtg atcgactccc 1560
tggcagacgc tgggcgagct c 1581
<210> 5
<211> 921
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 5
atggatatga gcgggggatc tctcagtggg gactgggagc agttgtggct gcctctgtgg 60
ccgctcgcaa cggacgattt gttgcttggg gtctaccgga tgcctcgcca ggatgcgctc 120
gatcggcgct accttgaggc caatccgcag gcgctgagca atctcctcgt cgtcgatgtc 180
gatcatccag acgcggcact gcgggctctg tctgccgccg gcaaccatcc cttgccgaac 240
gcgatcgtgg aaaacccgcg caatggacac gcacatgcgg tgtgggcatt gaccgaacct 300
ttcacgcgca ccgagtacgc cagacgtaag ccactcgctt atgccgcagc ggtaaacgag 360
gggctgcgtc gagctgtcga tggcgatgcc gcctattcgg ggttgatgac gaagaacccg 420
actcactcag cctgggacac acactggatc cacgccgaga ctcgatcgct ggcagatctc 480
gaacatgacc tcggaaagca tatgccgcca ccccggtggc gacagagcaa acgtcgtcgc 540
gaagacccag tcggactcgg acgtaattgc atgctcttcg agacggcacg cacttgggca 600
taccgcgaat tgcgttgcca ttggggagat cccgaaggtt tagggaaagc aattcaggtc 660
gaagccgcag accttaacgc tgccttctct gagcctttgc cggtaagcga agtacgagct 720
atcgcagcca gcattcaccg ctggatcgtc accaagtccc gcatgtgggc cgatggccct 780
gcggtttacg aagccacctt cgtcgctatc caatccgctc gcggacgcaa gatgacggag 840
aagaagcgcg aggccaatcg tcgccgtgca acgaagtacg accgcgacct cgtgaggaag 900
gaggcgaccg atgggagctg a 921
<210> 6
<211> 306
<212> PRT
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 6
Met Asp Met Ser Gly Gly Ser Leu Ser Gly Asp Trp Glu Gln Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Leu Trp Pro Leu Ala Thr Asp Asp Leu Leu Leu Gly Val Tyr
20 25 30
Arg Met Pro Arg Gln Asp Ala Leu Asp Arg Arg Tyr Leu Glu Ala Asn
35 40 45
Pro Gln Ala Leu Ser Asn Leu Leu Val Val Asp Val Asp His Pro Asp
50 55 60
Ala Ala Leu Arg Ala Leu Ser Ala Ala Gly Asn His Pro Leu Pro Asn
65 70 75 80
Ala Ile Val Glu Asn Pro Arg Asn Gly His Ala His Ala Val Trp Ala
85 90 95
Leu Thr Glu Pro Phe Thr Arg Thr Glu Tyr Ala Arg Arg Lys Pro Leu
100 105 110
Ala Tyr Ala Ala Ala Val Asn Glu Gly Leu Arg Arg Ala Val Asp Gly
115 120 125
Asp Ala Ala Tyr Ser Gly Leu Met Thr Lys Asn Pro Thr His Ser Ala
130 135 140
Trp Asp Thr His Trp Ile His Ala Glu Thr Arg Ser Leu Ala Asp Leu
145 150 155 160
Glu His Asp Leu Gly Lys His Met Pro Pro Pro Arg Trp Arg Gln Ser
165 170 175
Lys Arg Arg Arg Glu Asp Pro Val Gly Leu Gly Arg Asn Cys Met Leu
180 185 190
Phe Glu Thr Ala Arg Thr Trp Ala Tyr Arg Glu Leu Arg Cys His Trp
195 200 205
Gly Asp Pro Glu Gly Leu Gly Lys Ala Ile Gln Val Glu Ala Ala Asp
210 215 220
Leu Asn Ala Ala Phe Ser Glu Pro Leu Pro Val Ser Glu Val Arg Ala
225 230 235 240
Ile Ala Ala Ser Ile His Arg Trp Ile Val Thr Lys Ser Arg Met Trp
245 250 255
Ala Asp Gly Pro Ala Val Tyr Glu Ala Thr Phe Val Ala Ile Gln Ser
260 265 270
Ala Arg Gly Arg Lys Met Thr Glu Lys Lys Arg Glu Ala Asn Arg Arg
275 280 285
Arg Ala Thr Lys Tyr Asp Arg Asp Leu Val Arg Lys Glu Ala Thr Asp
290 295 300
Gly Ser
305
<210> 7
<211> 282
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 7
atgggagctg agacgccggc ccggcgaacc cgcacagctc gcgaagtggc ggaacgaatc 60
ggtgcgtccc cacgcacggt gcggcgcatc atcgcggagc ctcgagcttc atacgaagct 120
cgagcagctg aacgtcgaaa gcaagtactc gaactccgtg cgagcgggat gaagctgcgt 180
gagatcgcgg cggaggtagg tatgtcggtc ggtggagtag ggacgatcct gcatcacgcc 240
cgtaagaccg agcagtctaa ggctgaagga gctatggcat ga 282
<210> 8
<211> 93
<212> PRT
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 8
Met Gly Ala Glu Thr Pro Ala Arg Arg Thr Arg Thr Ala Arg Glu Val
1 5 10 15
Ala Glu Arg Ile Gly Ala Ser Pro Arg Thr Val Arg Arg Ile Ile Ala
20 25 30
Glu Pro Arg Ala Ser Tyr Glu Ala Arg Ala Ala Glu Arg Arg Lys Gln
35 40 45
Val Leu Glu Leu Arg Ala Ser Gly Met Lys Leu Arg Glu Ile Ala Ala
50 55 60
Glu Val Gly Met Ser Val Gly Gly Val Gly Thr Ile Leu His His Ala
65 70 75 80
Arg Lys Thr Glu Gln Ser Lys Ala Glu Gly Ala Met Ala
85 90
<210> 9
<211> 282
<212> DNA
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 9
atgggagctg agacgccggc ccggcgaacc cgcacagctc gcgaagtggc ggaacgaatc 60
ggtgcgtccc cacgcacggt gcggcgcatc atcgcggagc ctcgagcttc atacgaagct 120
cgagcagctg aacgtcgaaa gcaagtactc gaactccgtg cgagcgggat gaagctgcgt 180
gagatcgcgg cggaggtagg tatgtcggtc tgtggagtag ggacgatcct gcatcacgcc 240
cgtaagaccg agcagtctaa ggctgaagga gctatggcat ga 282
<210> 10
<211> 93
<212> PRT
<213> Rhodococcus rhodochrous
<400> 10
Met Gly Ala Glu Thr Pro Ala Arg Arg Thr Arg Thr Ala Arg Glu Val
1 5 10 15
Ala Glu Arg Ile Gly Ala Ser Pro Arg Thr Val Arg Arg Ile Ile Ala
20 25 30
Glu Pro Arg Ala Ser Tyr Glu Ala Arg Ala Ala Glu Arg Arg Lys Gln
35 40 45
Val Leu Glu Leu Arg Ala Ser Gly Met Lys Leu Arg Glu Ile Ala Ala
50 55 60
Glu Val Gly Met Ser Val Ser Gly Val Gly Thr Ile Leu His His Ala
65 70 75 80
Arg Lys Thr Glu Gln Ser Lys Ala Glu Gly Ala Met Ala
85 90
【図１】 プラスミドpRC001、pRC002、pRC003、pRC004
の制限酵素断片地図を示す図である。
の制限酵素断片地図を示す図である。
Claims (14)
- 【請求項１】 プラスミドpRC001、pRC002、pRC003およ
びpRC004から選ばれるプラスミドに由来し、ロドコッカ
ス（Rhodococcus）属細菌内でプラスミドの自律増殖に
関する機能を有する遺伝子を含むDNA断片。 - 【請求項２】 大きさが1.6kbであり、制限酵素SplIお
よびSacI切断点を末端に有する請求項１に記載のDNA断
片。 - 【請求項３】 大きさが1.7kbであり、制限酵素SmaIお
よびSacI切断点を末端に有する請求項１に記載のDNA断
片。 - 【請求項４】 大きさが1.9kbであり、制限酵素SmaI切
断点を両末端に有する請求項１に記載のDNA断片。 - 【請求項５】 大きさが2.3kbであり、制限酵素SacI切
断点を両末端に有する請求項１に記載のDNA断片。 - 【請求項６】 pRC004に含まれ、ロドコッカス属細菌内
でプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含む、配列番号１の塩基配列からなる請求項１に記載の
DNA断片。 - 【請求項７】 pRC004に含まれ、ロドコッカス属細菌内
でプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含む、配列番号3の塩基配列からなる請求項1に記載のDNA
断片。 - 【請求項８】 pRC004に含まれ、ロドコッカス属細菌内
でプラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を
含む、配列番号７の塩基配列からなる請求項１に記載の
DNA断片。 - 【請求項９】 プラスミドのコピー数を増加させうる変
異点が少なくとも1カ所に存在する請求項１〜８のいず
れか1項に記載のDNA断片。 - 【請求項１０】 プラスミドのコピー数を増加させうる
変異点が1カ所に存在する、配列番号２の塩基配列から
なる請求項９に記載のDNA断片。 - 【請求項１１】 プラスミドのコピー数を増加させうる
変異点が1カ所に存在する、配列番号４の塩基配列から
なる請求項９に記載のDNA断片。 - 【請求項１２】 プラスミドのコピー数を増加させうる
変異点が1カ所に存在する、配列番号９の塩基配列から
なる請求項９に記載のDNA断片。 - 【請求項１３】 請求項９〜１２のいずれか1項に記載
のDNA断片を保有する、ロドコッカス属細菌内で自立増
殖し多コピー数存在し得るプラスミド。 - 【請求項１４】 請求項１１に記載のDNA断片を保有す
る、ロドコッカス属細菌内で自律増殖し多コピー数存在
し得るプラスミドpLK006。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001204628A JP4733298B2 (ja) | 2001-07-05 | 2001-07-05 | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 |
| EP02743796A EP1411121B1 (en) | 2001-07-05 | 2002-07-03 | Dna fragments containing gene having function relating to autonomous proliferation of plasmid |
| CNB2006101154233A CN100529082C (zh) | 2001-07-05 | 2002-07-03 | 含有具有与质粒自主增殖相关功能的基因的dna片段 |
| US10/482,156 US7557202B2 (en) | 2001-07-05 | 2002-07-03 | DNA fragments containing gene having function relating to autonomous proliferation of plasmid |
| PCT/JP2002/006732 WO2003004639A1 (fr) | 2001-07-05 | 2002-07-03 | Fragments d'adn contenant un gene qui possede une fonction associee a la proliferation autonome d'un plasmide |
| CNB028173147A CN100503823C (zh) | 2001-07-05 | 2002-07-03 | 含有具有与质粒自主增殖相关功能的基因的dna片段 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001204628A JP4733298B2 (ja) | 2001-07-05 | 2001-07-05 | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003009863A true JP2003009863A (ja) | 2003-01-14 |
| JP4733298B2 JP4733298B2 (ja) | 2011-07-27 |
Family
ID=19041064
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001204628A Expired - Fee Related JP4733298B2 (ja) | 2001-07-05 | 2001-07-05 | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7557202B2 (ja) |
| EP (1) | EP1411121B1 (ja) |
| JP (1) | JP4733298B2 (ja) |
| CN (2) | CN100529082C (ja) |
| WO (1) | WO2003004639A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006050967A (ja) * | 2004-08-12 | 2006-02-23 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌由来のプラスミドおよびその誘導体、並びに大腸菌−ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌シャトルベクター |
| US8389685B2 (en) | 2008-03-25 | 2013-03-05 | Kao Corporation | Vector encoding a plasmid replication protein and use thereof |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4920054A (en) * | 1986-07-25 | 1990-04-24 | Allelix, Inc. | Shuttle vectors from rhodococcus equi |
| US4952500A (en) | 1988-02-01 | 1990-08-28 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Cloning systems for Rhodococcus and related bacteria |
| JP2983602B2 (ja) * | 1990-10-11 | 1999-11-29 | 三菱レイヨン株式会社 | 環状プラスミド |
| JP3142349B2 (ja) * | 1991-03-04 | 2001-03-07 | 輝彦 別府 | 複合プラスミドベクターおよび形質転換微生物 |
| JP3142348B2 (ja) * | 1991-03-04 | 2001-03-07 | 輝彦 別府 | ニトリル分解酵素系の遺伝子を有する組換え体プラスミド、形質転換微生物、ならびに該形質転換微生物によるアミドおよび酸の製造法 |
| DE69231939T2 (de) * | 1991-03-04 | 2002-04-04 | Mitsubishi Rayon Co | Hybrid-Plasmid-Vektoren, die für Nitril-abbauende Enzyme kodierende Gene enthalten und Verfahren zur Herstellung von Amiden und Säuren |
| FR2678947B1 (fr) * | 1991-07-12 | 1993-11-05 | Institut Recherche Agronomique | Origine de replication plasmidique augmentant le nombre de copies du plasmide comprenant ladite origine. |
| US6949362B2 (en) | 2000-12-12 | 2005-09-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Rhodococcus cloning and expression vectors |
-
2001
- 2001-07-05 JP JP2001204628A patent/JP4733298B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-07-03 EP EP02743796A patent/EP1411121B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-03 CN CNB2006101154233A patent/CN100529082C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-03 CN CNB028173147A patent/CN100503823C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-03 US US10/482,156 patent/US7557202B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-03 WO PCT/JP2002/006732 patent/WO2003004639A1/ja active IP Right Grant
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006050967A (ja) * | 2004-08-12 | 2006-02-23 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌由来のプラスミドおよびその誘導体、並びに大腸菌−ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌シャトルベクター |
| JP4570075B2 (ja) * | 2004-08-12 | 2010-10-27 | 三菱レイヨン株式会社 | ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌由来のプラスミドおよびその誘導体、並びに大腸菌−ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌シャトルベクター |
| US8389685B2 (en) | 2008-03-25 | 2013-03-05 | Kao Corporation | Vector encoding a plasmid replication protein and use thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100503823C (zh) | 2009-06-24 |
| WO2003004639A1 (fr) | 2003-01-16 |
| US7557202B2 (en) | 2009-07-07 |
| CN1944653A (zh) | 2007-04-11 |
| EP1411121B1 (en) | 2006-01-04 |
| JP4733298B2 (ja) | 2011-07-27 |
| EP1411121A4 (en) | 2004-08-04 |
| US20040248119A1 (en) | 2004-12-09 |
| EP1411121A1 (en) | 2004-04-21 |
| CN100529082C (zh) | 2009-08-19 |
| CN1551915A (zh) | 2004-12-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Beck et al. | Nucleotide sequence and exact localization of the neomycin phosphotransferase gene from transposon Tn5 | |
| Ostroff et al. | Molecular comparison of a nonhemolytic and a hemolytic phospholipase C from Pseudomonas aeruginosa | |
| Hani et al. | Expression and characterization of Campylobacter jejuni benzoylglycine amidohydrolase (hippuricase) gene in Escherichia coli | |
| KR20190082318A (ko) | Crispr/cpf1 시스템 및 방법 | |
| Kodaira et al. | The dnaX gene encodes the DNA polymerase III holoenzyme τ subunit, precursor of the γ subunit, the dnaZ gene product | |
| Bott et al. | The Bradyrhizobium japonicum cycM gene encodes a membrane-anchored homolog of mitochondrial cytochrome c | |
| Bittinger et al. | rosR, a determinant of nodulation competitiveness in Rhizobium etli | |
| KR20030052242A (ko) | 로도콕쿠스 클로닝 및 발현 벡터 | |
| CN115161303B (zh) | 一种磷脂酶突变体及其合成甘油磷脂的方法 | |
| KR100358532B1 (ko) | 니트릴라제유전자프로모터를활성화하는조절인자및그것을코딩하는dna | |
| Redaschi et al. | Posttranscriptional Regulation ofEcoP1I andEcoP15I Restriction Activity | |
| JPH0838184A (ja) | ロドコッカス属細菌由来カナマイシン耐性遺伝子 | |
| AU781788B2 (en) | Insertion sequence element derived from Ralstonia solanacearum | |
| JP2003009863A (ja) | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 | |
| US5679540A (en) | Cloning and identification of a two component signal transducing regulatory system from bacteroides fragilis | |
| Shih et al. | The hexY genes of Erwinia carotovora ssp. carotovora and ssp. atroseptica encode novel proteins that regulate virulence and motility co‐ordinately | |
| Ding et al. | Stability of plasmid pA387 derivatives in Amylcolatopsis mediterranei producing rifamycin | |
| EP2025755A1 (en) | Research method for promoters in micro-organisms like rhodococcus | |
| KR100961720B1 (ko) | ＣｏｌＥ1-타입 플라스미드의 복제수를 증가시키는Ｎ-Ｒｎｅ 변이체(Ｎ-Ｒｎｅ-Ｑ36Ｒ) 및 이를 코딩하는ＤＮＡ | |
| WO1995013366A1 (en) | Ectoine synthetase gene | |
| JP3550766B2 (ja) | 自律複製配列を有するｄｎａ断片、その塩基配列、及びその利用 | |
| JPH05153979A (ja) | ｓｅｃＹタンパク質遺伝子 | |
| Maekawa et al. | Identification of the region that determines the specificity of binding of the transposases encoded by Tn3 and γδ to the terminal inverted repeat sequences | |
| WO2021096391A1 (ru) | Применение cas9 бежа из бактерии pasteurella pneumotropica | |
| KR100860083B1 (ko) | 갯벌 메타게놈 유래 신규 리파제 유전자 및 이로부터코딩되는 리파제 단백질 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080623 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110208 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110323 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110419 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110422 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140428 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140428 Year of fee payment: 3 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140428 Year of fee payment: 3 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140428 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |