JP2002540113A - ボロン酸含有試薬およびオリゴヌクレオチド - Google Patents

ボロン酸含有試薬およびオリゴヌクレオチド

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、修飾オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドへの取り込みに有用なアリールボロニック酸試薬を提供する。こうして生成した修飾オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドは、巨大分子の固定化と精製のための生物結合反応に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 関連出願への相互参照 本出願は、現在米国特許第６，０３１，１１７号となっている米国特許出願第
０９／２７２，９７８号（１９９９年３月１９日出願）、および現在米国特許第
６，０１３，７８３号となっている米国特許出願第０９／２７２，８３４号（１
９９９年３月１９日出願）の優先権を主張する（これらはその全体が、参照する
ことにより本明細書に組み込まれる）。 発明の分野 本発明は、核酸固定化、精製および検出の分野、さらに詳しくは修飾オリゴヌ
クレオチドおよびポリヌクレオチドへのボロニック酸（boronic acid）の導入の
ための試薬に関する。 発明の背景 アリールボロニック酸（例えば、フェニルボロニック酸）は、ある必要な官能
基を有する広範な極性分子と相互作用することが知られている。安定性の異なる
複合体（１，２−ジオール、１，３−ジオール、１，２−ヒドロキシ酸、１，３
−ヒドロキシ酸、１，２−ヒドロキシルアミン、１，３−ヒドロキシルアミン、
１，２−ジケトンおよび１，３−ジケトン）が、中性のフェニルボロニック酸ま
たはフェニルボロネート陰イオンとの間で存在することが知られている。固定化
されたフェニルボロニック酸は、多様な生物学的試料から、必要な官能基を有す
る分子種を選択的に保持するためのクロマトグラフィー支持体として使用されて
いる。特に限定されないが、炭水化物、カテコールアミン、プロスタグランジン
、リボヌクレオチド、およびステムを含む多くの重要な生物学的分子は、必要な
官能基を含有し、この方法で解析または精製されている。生物学的分子の単離と
分離のためのフェニルボロニック酸クロマトグラフィー媒体の使用は、いくつか
の総説に記載されている（Singhal, R.P.とDeSilva, S.S.M. (1992) Adv. Chrom
atog., 31:293-335; Mazzeo, J.R.とKrull, I.S. (1989) BioChromatog., 4, 12
4-130;およびBergold, A.とScouten, W.H. (1983)、Solid Phase Biochemistry
(Scouten, W.H.編）pp. 149-187, ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（John Wi
ley & Sons）、ニューヨークを参照）。
【０００２】 ｃｉｓまたはコアクシャル１，２−ジオールおよび１，３−ジオール官能基を
有する分子種（そして特に炭水化物）は、フェニルボロネート陰イオンを有する
固定化化合物と複合体を形成して、アルカリ性水溶液条件下で環状エステルを形
成することが知られている（例えば、Lorand, J.P.とEdwards, J.O. (1959) J.
Org. Chem., 24, 769を参照）。さらにアリールボロニック酸残基に結合する炭
水化物は、アリールボロニック酸とアリールボロニック酸内に含有されるアミン
官能基との電子的相互作用を増強して、蛍光性変化を誘導することが知られてい
る（T.D. Jamesら、(1994) J. Chem. Soc. Chem. Comm., 477-478を参照）。
【０００３】 生物学的分子（例えば生物学的巨大分子）と複合体を形成する能力を考慮する
と、アリールボロニック酸から得られる試薬は、固定化、精製および検出を含む
多様な生物結合への応用に有用である。生物結合とは、化学的または生物学的手
段により２つまたはそれ超の異なる分子種（そのうち少なくとも１つは、生物学
的巨大分子である）の結合のための説明用語である。生物結合には、特に限定さ
れないが、タンパク質、ペプチド、多糖、ホルモン、核酸、リポソームおよび細
胞の、互いの結合または任意の他の分子種との結合があり、これは有用な性質を
付与する。生物学的巨大分子の固定化はまた、生物結合の場合の特殊なケースと
考えられ、ここで巨大分子は、可逆的または不可逆的に不溶性支持体に結合して
いる。生物結合は、生化学的、免疫化学的および分子生物学的研究に広く使用さ
れている。生物結合の主要な応用には、特に限定されないが、遺伝子プローブの
検出、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、モノクローナル抗体薬剤ターゲ
ティングおよび医用イメージングがある。
【０００４】 多くの例において、生物結合は、２つの結合パートナーの間の結合対を形成す
る既知の反応に基づく。生物結合反応の１つの例は、第１の結合パートナー（例
えば、オルト置換アセトアミドフェニルボロニック酸）と第２の結合パートナー
（例えば、糖タンパク質に結合した炭水化物残基の隣接ジオール残基）が関与す
る（Cai, S.X.とKeana, J.F.W. (1991) Bioconjugate Chem. 2, 317-322を参照
）。
【０００５】 さらに、３−イソチオシアネートフェニルボロニック酸由来のフェニルボロニ
ック酸生物接合体は、医用イメージングで使用するために、放射性テクネチウム
ジオキシム複合体をモノクローナル抗体に付加するのにうまく使用されている（
Linder, K.E., Wen, M.D., Novotnik, D.P., Malley, M.F., Gougoutas, J.Z.,
Nunn, A.D.とEckelman, W.C. (1991) Bioconjugate Chem., 2, 160-170; Linder
, K.E., Wen, M.D., Novotnik, D.P., Ramalingam, K., Sharkey, R.M., Yost,
F., Narra, R.K.とEckelman, W.C. (1991) Bioconjugate Chem., 2, 407-414を
参照）。
【０００６】 さらにボロニック酸試薬は、サリチルヒドロキサム酸（ＳＨＡ）および２，６
−ジヒドロキシベンゾヒドロキサム酸（ＤＨＢＨＡ）から得られる、新に開発さ
れたボロニック酸複合体形成試薬とともに使用する時、生物結合試薬として広い
有用性を示している。ボロニック酸試薬、ボロニック酸複合体形成試薬、これら
の接合体と生物接合体、ならびにその調製法と使用は、米国特許第５，５９４，
１１１号、５，６２３，０５５号、５，６６８，２５８号、５，６４８，４７０
号、５，５９４，１５１号、５，６６８，２５７号、５，６７７，４３１号、５
，６８８，９２８号、５，７４４，６２７号、５，７７７，１４８号、５，８３
１，０４５号および５，８３１，０４６号に開示されている。
【０００７】 生物結合反応におけるアリールボロニック酸の有用性を考慮すると、当該分野
で必要なものは、例えば自動固相合成中に合成オリゴヌクレオチドに取り込みや
すいボロニック酸化合物である。こうして産生されるボロニック酸修飾オリゴヌ
クレオチドは、生物結合反応（例えば巨大分子の固定化、精製および検出）に有
用であろう。本発明は、これらおよび他のニーズを満足する。 発明の要約 アリールボロニック酸から得られる試薬は、生物学的巨大分子と複合体を形成
する能力の結果として、種々の生物結合反応への応用に有用である。本発明は、
入手できるボロニック酸試薬を包含し、ボロニック酸修飾合成オリゴヌクレオチ
ドの調製に有用である。従って１つの態様において本発明は、式Ｉの一般的構造
を有する化合物に関する。
【０００８】
【化７】
【０００９】 式Ｉにおいて、Ｒ1は、特に限定されないが、アリールボロニック酸エステル
残基（例えば、フェニルボロニック酸エステル）を含む官能基である。式Ｉ中の
Ｙは、特に限定されないが、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単
結合（ここで、ｍは約１〜約５の範囲の値を有する整数である）を含む官能基で
ある。本明細書において、Ｙが炭素−炭素単結合である時、Ｒ1は、カルボニル
基に直接結合している。式Ｉ中のＺは、特に限定されないが、１〜１６個の炭素
原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキレンアミドアルキレンおよ
びアルキレンアミドアルキレンアミドを含む官能基である。式Ｉ中のＸは、特に
限定されないが、メチレン基と炭素−炭素単結合を含む官能基である。Ｘが炭素
−炭素単結合である時、式Ｉ中のメチン炭素は、ＯＲ3に直接結合している。式
Ｉ中のＲ2は、特に限定されないが、水素、トリチル、モノメトキシトリチルお
よびジメトキシトリチルを含む官能基である。式Ｉ中のＲ3は、特に限定されな
いが、水素または活性化リン残基を含む官能基である。
【００１０】 式Ｉのアリールボロニック酸化合物は、自動固相合成中のオリゴヌクレオチド
の合成に有用である。こうして生成したオリゴヌクレオチドは、種々の生物結合
反応（例えば、核酸の固定化、精製、および検出）に有用である。オリゴヌクレ
オチドは、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの３’末端または５’末
端に付加した式Ｉの化合物を用いて合成することができる。
【００１１】 従って他の態様において本発明は、修飾５’を有しかつ以下の一般式を有する
オリゴヌクレオチドを提供する。
【００１２】
【化８】
【００１３】 式IIにおいてＲは、特に限定されないが、アリールボロニック酸残基（例えば
、フェニルボロニック酸）を含む官能基である。式II中のＹは、特に限定されな
いが、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは約
１〜約５の範囲の値を有する整数である）を含む官能基である。式II中のＺは、
特に限定されないが、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンア
ミド、アルキレンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドを
含む官能基である。式II中のＸは、特に限定されないが、メチレン基と炭素−炭
素単結合を含む官能基である。式II中のＲ6は、特に限定されないが、水素およ
びヒドロキシルを含む官能基である。式II中のＲ7は、特に限定されないが、ヒ
ドロキシルとモノリン酸エステルを含む官能基である。式II中の指数ｎは、約０
〜約１０の範囲の整数である。式II中の指数ｎ’は、約１０〜約１００００の範
囲の整数である。式II中のＮｕ’とＮｕ''は、特に限定されないが、アデニン、
グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよびヌクレオチド類似体を含む独立に
選択されるヌクレオチド塩基である。変数Ｒ、ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー
値について同じかまたは異なっていてもよい。変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ5のあるモ
ノマー値について同じかまたは異なっていてもよい。
【００１４】 さらに別の態様において本発明は、修飾３’と以下の一般式を有するオリゴヌ
クレオチドを提供する。
【００１５】
【化９】
【００１６】 式IIIにおいてＲは、特に限定されないが、アリールボロニック酸残基（例え
ば、フェニルボロニック酸）を含む官能基である。式III中のＹは、特に限定さ
れないが、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍ
は約１〜約５の範囲の値を有する整数である）を含む官能基である。式III中の
Ｚは、特に限定されないが、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキ
レンアミド、アルキレンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンア
ミドを含む官能基である。式III中のＸは、特に限定されないが、メチレン基と
炭素−炭素単結合を含む官能基である。式III中のＲ6は、特に限定されないが、
水素とヒドロキシルを含む官能基である。式III中のＲ7は、特に限定されないが
、ヒドロキシルとモノリン酸エステルを含む官能基である。式III中の指数ｎは
、約０〜約１０の範囲の値を有する整数である。式III中の指数ｎ’は、約１０
〜約１００００の範囲の値を有する整数である。式III中のＮｕ’とＮｕ''は、
特に限定されないが、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよび
ヌクレオチド類似体を含む独立に選択されるヌクレオチド塩基である。変数Ｒ、
ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー値について同じかまたは異なっていてもよい。
変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のあるモノマー値について同じかまたは異なっていて
もよい。
【００１７】 本発明のこれらおよび他の態様は、以後の詳細な説明を読むと、より容易に明
らかになるであろう。 発明の詳細な記載及び好適な実施態様 Ｉ．用語解説 本明細書において「アルキル」という用語は、分岐または非分岐炭化水素鎖（
例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−
ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、オクタ−デシルおよび２−メチルフ
ェニル）を意味する。これらの基は、そのようなアルキル基に一般的に結合する
１つまたはそれ超の官能基（例えば、ヒドロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ
、ヨード、メルカプトまたはチオ、シアノ、アルキルチオ、ヘテロシクリル、ア
リール、ヘテロアリール、カルボキシル、カルボアルコイル、アルキル、アルケ
ニル、ニトロ、アミノ、アルコキシル、アミドなど）で随時置換されて、トリフ
ルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピル、２−フルオ
ロエチル、カルボキシメチル、シアノブチルなどのアルキル基を形成する。
【００１８】 「アルキレン」という用語は、１〜２０個の炭素原子および好ましくは約１〜
１６個の炭素原子を有する、上記の２価アルキル基、例えばメチレン（−ＣＨ2
−）、プロピレン（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−）、クロロエチレン（−ＣＨＣｌＣＨ2 −）、２−チオブテン−ＣＨ2ＣＨ（ＳＨ）ＣＨ2ＣＨ2、１−ブロモ−３−ヒド
ロキシル−４−メチルペンテン（−ＣＨＢｒＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ
Ｈ2−）を意味する。
【００１９】 「アルキレンアミド」という用語は、−（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）または−（ＣＨ 2 ）nＣ（Ｏ）Ｎ基（ここで、ｎは、約１〜約２０、好ましくは約１〜１６である
）を意味する。
【００２０】 「アルキレンアミドアルキレン」という用語は、−（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）（Ｃ
Ｈ2）nまたは−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ2）n基（ここで、ｎは、約１〜約２
０、好ましくは約１〜１６である）を意味する。
【００２１】 「アルキレンアミドアルキレンアミド」という用語は、−（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ
）（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）または−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎま
たは（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎまたは−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ
（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）（ここで、ｎは、約１〜約２０、好ましくは約１〜１６で
ある）を意味する。
【００２２】 「アリール」という用語は、好ましくは約６〜１４個の炭素原子を有する少な
くとも１つの芳香環（例えば、フェニル、ナフチル）を形成するか、またはその
ようなアリール基に一般的に結合する１つまたはそれ超の官能基（例えば、ヒド
ロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード、メルカプトまたはチオ、シアノ
、シアノアミド、アルキルチオ、複素環、アリール、ヘテロアリール、カルボキ
シル、カルボアルコイル、アルキル、アルケニル、ニトロ、アミノ、アルコキシ
ル、アミドなど）で、随時置換されて、ビフェニル、ヨードビフェニル、メトキ
シビフェニル、アントリル、ブロモフェニル、ヨードフェニル、クロロフェニル
、ヒドロキシフェニル、メトキシフェニル、ホルミルフェニル、アセチルフェニ
ル、トリフルオロメチルチオフェニル、トリフルオロメトキシフェニル、アルキ
ルチオフェニル、トリアルキルアンモニウムフェニル、アミドフェニル、チアゾ
リルフェニル、オキサゾリルフェニル、イミダゾリルフェニル、イミダゾリルメ
チルフェニルなどのアリール基を形成する、炭素原子の鎖を意味する。
【００２３】 「アシル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ基を意味し、ここでＲは、上記で定義
したアルキルまたはアリール（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ま
たはブチリル）である。
【００２４】 「アルコキシ」という用語は、−ＯＲを意味し、ここでＲはアルキルである。
【００２５】 「アミド」という用語は、アミド結合を−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−を意味し、ここでＲ
は水素またはアルキルである。
【００２６】 「アミノ」という用語は、アミン結合−ＮＲ−を意味し、ここでＲは水素また
はアルキルである。
【００２７】 本明細書において「ヌクレオチドモノマー」という用語は、「標準的」ヌクレ
オチド、すなわちアデノシン、グアノシン、シチジン、チミジン、およびウラシ
ル、およびこれらのヌクレオチドの誘導体を意味する。そのような誘導体には、
特に限定されないが、イノシン、５−ブロモデオキシシチジン、５−ブロモ−デ
オキシウリジン、Ｎ６−メチル−デオキシアデノシン、５−メチル−デオキシシ
チジンなどがある。
【００２８】 本明細書において「保護基」という用語は、分子上の反応性基（例えば、ヒド
ロキシルまたはアミン）が結合されているかまたは置換されている基を意味する
。保護基は、１つまたはそれ超の化学反応工程中に、特定の基の反応を防止する
ように選択される。一般に具体的な保護基は、分子中に存在する他の反応性基を
変化させることなく反応性基を回復できるように、後で除去できるように選択さ
れる。保護基の選択は、保護すべき特定の基の官能基と、それと接触する化合物
である。保護基の選択は、当業者に公知である。例えば、Greeneら、Protective
Groups in Organic Synthesis、第２版、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社
（John Wiley and Sons, Inc.）（Somerset, N.J.）（1991）を参照されたい。
II．化合物 ある態様において本発明は、生物結合反応で有用なポリヌクレオチドやオリゴ
ヌクレオチドの合成の試薬として有用な、新規なアリールボロニック酸誘導体を
提供する。オリゴヌクレオチドへのこれらのアリールボロニック酸試薬の取り込
みは、オリゴヌクレオチドが生物結合反応（これは、特に限定されないが、タン
パク質、ペプチド、多糖、ホルモン、核酸、リポソームおよび細胞のような生物
学的分子の結合を含む）に参加することを可能にする。
【００２９】 従って１つの態様において本発明は、式Ｉ：
【００３０】
【化１０】
【００３１】 （式中、Ｒ1、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｒ2およびＲ3は、上記で定義した）の一般的構造を
有する化合物に関する。
【００３２】 式Ｉの化合物は、例えば高い繰り返し効率で自動固相オリゴヌクレオチド合成
をするのに有用である。ある好適な実施態様において、反応性の高い活性化リン
残基および容易に除去可能な保護基が使用される。ある好適な実施態様において
Ｒ1は、フェニルボロニック酸エステルである。いくつかの好適なフェニルボロ
ニック酸エステル残基には、特に限定されないが、以下の残基がある：
【００３３】
【化１１】
【００３４】 式中、Ｒ4とＲ5は、特に限定されないが、水素、メチルおよびフェニルを含む
官能基である。Ｑは、特に限定されないが、メチレン基および炭素−炭素単結合
を含む官能基である。本明細書において、Ｑが炭素−炭素単結合である時、Ｑの
両端の炭素原子は、直接結合される。
【００３５】 Ｒ3は、特に限定されないが、水素と活性化リン残基（特に限定されないが、
ホスホラミダイト、Ｈ−ホスホネート、メチルホスホネート、ホスホロチオエー
ト、ホスホトリエステル、ヘミスクシネート、固相支持体に共有結合したヘミス
クシネート、シクロヘキシルカルボジイミド、および固相支持体に共有結合した
シクロヘキシルカルボジイミド）を含む官能基である。好ましくはＲ3は、ホス
ホラミダイトである。
【００３６】 Ｚは、随時アミド基で中断される約１〜約１６個の炭素原子を有するスペーサ
ー基である。さらにＺは、アミド基で始まりかつ終わることができる。好ましく
はＺは、Ｃ1−Ｃ5アルキレン基またはＣ1−Ｃ5アルキレンアミド基である。
【００３７】 ある好適な実施態様において、Ｘはメチレン基であり、Ｒ2はジメトキシトリ
チル基、例えばＯ−（４，４’−ジメトキシトリチル）である。Ｒ3は、好まし
くはホスホラミダイト基、例えばＯ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプ
ロピルアミノホスホラミダイト基である。式Ｉの好適な化合物は、１−Ｏ−（４
，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−［（４−ジヒドロキシボリル（ベンゾ
ピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β−アラニル）］セリノール３−Ｏ−
（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホラミダイトである
。
【００３８】 本発明の化合物は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチド合成の
両方で、合成オリゴヌクレオチドの任意の位置に、アリールボロニック酸残基（
例えばフェニルボロニック酸またはフェニルジボロニック酸残基）を導入するの
に有用である。好適な実施態様において、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレ
オチドの５’末端または３’末端が修飾される。好適な実施態様において式Ｉの
化合物は、合成オリゴヌクレオチドの５’末端にフェニルボロニック酸またはフ
ェニルジボロニック酸残基を導入するのに使用される。
【００３９】 従って、他の実施態様において本発明は、式IIの一般的構造を有する化合物に
関する：
【００４０】
【化１２】
【００４１】 式中、Ｒ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｒ6、Ｒ7、ｎ、ｎ’、Ｎｕ’およびＮｕ''は、上記で
定義した。さらに変数Ｒ、ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー値に対して同じかま
たは異なってよい。さらに変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のあるモノマー値に対して
同じかまたは異なってよい。
【００４２】 ある好適な実施態様において式IIのＲは、フェニルボロニック酸残基である。
適当なフェニルボロニック酸残基には、特に限定されないが、以下がある：
【００４３】
【化１３】
【００４４】 いくつかの他の態様において式Ｉの化合物は、合成オリゴヌクレオチドまたは
ポリヌクレオチドの３’末端にアリールボロニック酸（例えば、フェニルボロニ
ック酸またはフェニルジボロニック酸残基）を導入するのに使用される。従って
他の実施態様において本発明は、式IIIの一般的構造を有する化合物に関する：
【００４５】
【化１４】
【００４６】 式中、Ｒ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｒ6、Ｒ7、ｎ、ｎ’、Ｎｕ’およびＮｕ''は、上記で
定義した。さらに変数Ｒ、ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー値に対して同じかま
たは異なってよい。さらに変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のあるモノマー値に対して
同じかまたは異なってよい。式IIIのＲは、好ましくはフェニルボロニック酸残
基である。好適なフェニルボロニック酸残基は、式IIについて上記したものであ
る。 III．合成 式Ｉの種々の化合物の合成に関する詳細は、図１〜７に示し、さらに後述の実
施例１〜３に詳述する。一般的合成方策は以下の通りである。図１〜２または３
〜５において、脂肪族アミノ基を含有する保護１，２−または１，３−ジオール
は、それぞれ保護アリールボロニック酸（例えば、フェニルボロニック酸）のカ
ルボン酸誘導体の活性化型（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステルまた
はイミダゾリド）と反応させられる。１，２−または１，３−アミン含有ジオー
ルは、１−ヒドロキシルで酸不安定性残基（例えば、４，４’−ジメトキシトリ
チル）で保護される。フェニルボロニック酸は、別の１，２−または１，３−ジ
オール（例えば、１，３−プロパンジオール、ピナコール、またはベンゾピナコ
ール）を使用して保護されて、環状ジエチルを生成する。生じる生成物を、次に
活性化ホスフィン（例えば、２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノク
ロロホスフィン）と反応させて、オリゴヌクレオチド合成に有用な最終活性化物
質を生成する。
【００４７】 式Ｉの化合物の調製のための合成中間体として有用なアリールボロニック酸（
例えばフェニルボロニック酸）は通常、ハロゲン化アリールからアリールマグネ
シウムまたはアリールリチウムを生成し、次にトリアルコキシボレートでトラン
スメタレーションすることにより、in situで合成される（Todd, M.H.ら、(1997
) Tetrahedron Lett., 38, 6781-6784; Crisofoli, W.A.ら、(1991) Tetrahedro
n Lett., 32, 5881-5884; Sharp, M.J.ら、(1987) Tetrahedron Lett., 28, 509
3-5096;およびLarson, R.D.ら、(1994) J. Org. Chem., 59, 6391-6394を参照）
。
【００４８】 さらに、ハロゲン化アリールとアルコキシジボロン（Ishiyama, T.ら、(1995)
Org. Chem., 60, 7508-7510; Giroux, A.ら、(1997) Tetrahedron Lett., 38,
3841-3844を参照）またはジアルコキシヒドロボラン（Murata, M.ら、J. Org. C
hem. 1997, 62, 6458-6459を参照）から、触媒としてＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）を
使用して、フェニルボロニック酸を生成するために、遷移金属触媒交差結合反応
が開発されている。式Ｉの化合物の調製のための合成中間体として有用なフェニ
ルボロニック酸は、同時係属出願第０９／１３８，１０５号（１９９８年８月２
１日出願）の主題である。
【００４９】 いったん産生されると式Ｉの化合物は、式IIおよび式IIIの化合物を生成する
ために使用することができ、これらは、当業者に公知の自動固相合成法を使用し
て調製することができる。例えば自動固相オリゴヌクレオチド合成（式Ｉの化合
物により提供されたような、１つまたはそれ超の非天然の修飾を含有するオリゴ
ヌクレオチドを含む）の化学は、以下の総説論文や参考書に記載されている：Cr
ockett, G.C. (1983) "The Chemical Synthesis of DNA", Aldrichimica Acta 1
6(3), 47-55; Engels, J.W.およびUhlmann, E. (1989) "Gene Synthesis", Ange
w Chem. Int. Ed. Engl. 28, 716-734; Goodchild, J. (1990) "Conjugates of
Oligonucleotides and Modified Oligonucleotides: A Review of Their Synthe
sis and Properties", Bioconjugate Chem. 1(3), 165-187; Oligonucleotide S
ynthesis: A Practical Approach (1984) M.J. Gait編(IRL Press Limited: Oxf
ord, England), 217 pp。
【００５０】 固相状態合成では、式Ｉの化合物を供給するタイミングとその濃度は、市販の
ＤＮＡ合成機で使用される非修飾の市販のホスホラミダイトに典型的なプロトコ
ールと差は無い。市販の合成機（例えば、モデル３９４、アプライドバイオシス
テムズ（Applied Biosystems）、フォスターシティ、カリホルニア州、アメリカ
合衆国）上の余分のホスホラミダイト用に設けられたポート上の容器に、式Ｉの
化合物を含有する溶液を加えればよいだけである。しかし式Ｉの特定化合物の結
合効率が他のホスホラミダイトより実質的に低い場合、式Ｉの化合物の供給のタ
イミングまたはその濃度を変更して合成を最適化することが必要かも知れない。
低い結合効率を補正するためのオリゴヌクレオチド合成プロトコールの最適化手
段は、当業者に公知である。一般的には、供給する試薬の濃度または量を上げて
、高結合効率を達成するだけである。結合効率を測定する手段もまた、公知であ
る。例えばＲ2がジメトキシトリチル（ＤＭＴ）の場合、結合効率は、酸工程（
これはＤＭＴ基を除去する）中のＤＭＴ陽イオン濃度を測定することにより決定
することができる。ＤＭＴ陽イオン濃度は、通常酸洗浄液を分光光度計でモニタ
ーして測定される。酸／ＤＭＴ溶液は、明るい橙色である。あるいは、結合が失
敗した場合、キャッピングはオリゴヌクレオチドのさらなる伸長を防止するため
、例えば毛細管電気泳動またはＨＰＬＣを使用して、末端切断型と完全長オリゴ
ヌクレオチドの比率を比較することにより、結合効率を推定することができる。
【００５１】 固相オリゴヌクレオチド合成は、多くの固層支持体を使用して実施することが
できる。好適な支持体は、合成されたオリゴヌクレオチド中で３’末端塩基とな
る保護されたモノマーが結合するための官能基を提供するものである。この支持
体は、特定の合成化学で使用される試薬に対して不活性でなければならない。適
切な支持体は、当業者に公知である。固層支持体材料には、特に限定されないが
、ポリアクロイルモルホリド、シリカ、制御多孔性ガラス（ＣＰＧ）、ポリスチ
レン、ポリスチレン／ラテックス、およびカルボキシル修飾テフロン（登録商標 ）がある。好適な支持体は、アミノ官能基化制御多孔性ガラスとカルボキシル官 能基化テフロンである。
【００５２】 固相オリゴヌクレオチド合成は、出発点として、固層支持体に結合した完全に
保護されたモノマー（例えば、保護されたヌクレオチド）を必要とする。この結
合は典型的には、リンカーに共有結合した３’−ヒドロキシル（結合している時
はオキソ）を介し、これは次に、固層支持体に共有結合する。次に最初の合成サ
イクルは、その３’−ホスフェートを介して、縮合反応により結合ヌクレオチド
の５’−ヒドロキシルにヌクレオチドモノマーを結合させ、これは３’−５’ホ
スホジエステル結合を形成する。次の合成サイクルでは、最後に結合したヌクレ
オチドの５’−ヒドロキシルにヌクレオチドモノマーを付加する。こうしてオリ
ゴヌクレオチドが３’から５’方向に合成され、その３’が固層支持体に結合し
た「増殖する」オリゴヌクレオチドが生成される。
【００５３】 当業者は、ヌクレオシドモノマーを固層支持体に結合させる無数の手段を知っ
ているが、スクシネートまたはヘミスクシネートを介して制御多孔性ガラスに共
有結合したモノマーが一般的に好ましい。制御多孔性ガラスにヘミスクシネート
を介して結合した従来の保護されたヌクレオチドは、多くの異なる供給源（例え
ば、Glen Research, スターリング、バーモント州、アメリカ合衆国）；アプラ
イドバイオシステムズ（Applied Biosystems）、フォスターシティ、カリホルニ
ア州、アメリカ合衆国；ファルマシアエルケービー（Pharmacia LKB）、 ピスカ
タウェイ、ニュージャージー州、アメリカ合衆国）から市販されている。
【００５４】 オリゴヌクレオチドの３’末端に式Ｉの化合物を配置することは、固層支持体
に結合した式Ｉの完全にブロックされた化合物を用いて、オリゴヌクレオチド合
成を開始する必要がある。多くの異なる反応性基で官能基化した制御多孔性ガラ
スは、市販されている（例えば、シグマケミカル（Sigma Chemical）、セントル
イス、ミズーリ州、アメリカ合衆国）。結合スキームは、Atkinsonら、第３章、
Gait編、Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, アイアールエル
プレス（IRL Press）、ワシントン・ディー・シー（１９８４）に記載されてい
る。塩化トリイソプロピルベンゼンスルホニル、イミダゾリド、トリアゾリド、
またはテトラゾリドはまた、縮合剤として使用することができる。ジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣ）と構造類似体はまた、適当なリンカーである。他
のリンカーと適当な縮合基は、当業者に公知である。
【００５５】 完全長オリゴヌクレオチドがいったん合成されると、保護基が除去され（オリ
ゴヌクレオチドが脱保護される）、次にオリゴヌクレオチドは、使用前に固層支
持体から切断される。切断と脱保護は、同時にまたは順に起きても良い。２つの
操作は、互いに割り込んで、一部の基がオリゴヌクレオチドから除去されてから
固層支持体から切断され、他の基は溶液中の切断されたオリゴヌクレオチドから
脱保護されてよい。このイベントの順序は、存在する特定のブロッキング基、固
層支持体への具体的な結合、および合成を行う個人の好みに依存する。脱保護が
切断に先行する場合、保護基は、オリゴヌクレオチドから洗浄除去され、オリゴ
ヌクレオチドは固層支持体に結合して残る。逆に脱保護が切断の後の場合、除去
された保護基はオリゴヌクレオチドとともに溶液中に残るであろう。オリゴヌク
レオチドは、使用前にこれらの保護基から単離する必要がしばしばある。
【００５６】 本発明のオリゴヌクレオチドは、短い１本鎖配列に限定されない。当業者は、
オリゴヌクレオチド合成は典型的には、約１，０００塩基、好ましくは約１００
塩基の上限があり、多くのオリゴヌクレオチドは一緒に結合して、長い配列を生
成することは理解されるであろう。さらに、相補的配列を有するオリゴヌクレオ
チドは、一緒にハイブリダイズされて２本鎖分子を形成する。オリゴヌクレオチ
ドをハイブリダイズまたは連結させてより長い２本鎖分子を形成する方法は、当
業者に公知である（例えば、サムブルーク（Sambrook）ら、モレキュラークロー
ニング、実験室マニュアル、Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Har
bor, ニューヨーク、１９８５年）。 IV．生物接合体 上記したように式Ｉのアリールボロニック酸は、自動固相合成法を使用して合
成オリゴヌクレオチド中に取り込み、式IIと式IIIの化合物を生成しやすい。こ
うして生成した修飾オリゴヌクレオチドは、特に限定されないが、巨大分子（例
えば、核酸）の固定化、精製、および検出を含む生物結合反応に有用である。
【００５７】 ２つまたはそれ超の分子種を化学的または生物学的手段で結合させると、生物
結合が起きる。多くの例において、生物結合は、２つの結合パートナーの間の結
合対を形成する既知の反応に基づく。例えば生物結合反応は、抗原と結合タンパ
ク質（例えば抗体）との間で起きる。生物結合反応には、特に限定されないが、
タンパク質、ペプチド、多糖、ホルモン、核酸、リポソーム、および細胞、また
は他の生物学的分子の、互いの結合または任意の他の分子種との結合があり、こ
れは有用な性質を付与する。本発明の修飾オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレ
オチドは、第１の結合パートナーとして特に有用であり、第２のパートナーとし
ての核酸の固定化、精製、および検出に関して生物結合を生成する。
【００５８】 速記法を使用して生物結合を例示するために、第１の結合パートナーは式IIま
たはIIIの化合物であり、これは以下の図で示される：
【００５９】
【化１５】
【００６０】 この図では、「オリゴヌクレオチド」という用語は、長さが約１０〜約１０，
０００塩基であり、３’末端または５’末端のいずれかに約１〜約１０個のアリ
ールボロニック酸残基を有する（ここでＢ’は、ＨまたはＢ（ＯＨ）2基である
）式IIまたはIIIのオリゴヌクレオチドを示す。
【００６１】 この例では、第２の結合パートナーは、そこに接合体が結合した２−ヒドロキ
シベンゾヒドロキサム酸（サリチルヒドロキサム酸）から得られる分子である。
適当な接合体には、特に限定されないが、タンパク質、ペプチド、多糖、ホルモ
ン、核酸、リポソーム、細胞、および蛍光性標識物がある。第２の結合パートナ
ーは、以下で示される：
【００６２】
【化１６】
【００６３】 式IVにおいて、Ｘは、特に限定されないが、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＲ’、ＮＨＯ
Ｈ、およびＮＨＯＲ’があり、Ｒ’は特に限定されないが、ＣＨ3、ＣＨ2ＣＨ3
、ＣＨ2ＣＮ、ＣＨ2ＣＯＯＨ、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、およびＣＨ2ＯＣＨ3を含む基で
ある。Ｙは特に限定されないが、Ｏ、ＳおよびＮＨを含む基であり、好ましくは
Ｏである。
【００６４】 式IVの化合物およびその調製法は、米国特許第５，５９４，１１１号、５，５
９４，１５１号、５，６２３，０５５号、５，６４８，４７０号、５，６６８，
２５７号、５，６６８，２５８号、５，６７７，４３１号、５，６８８，９２８
号、５，７４４，６２７号、ならびに同時係属出願：米国特許出願第０８／４８
８，１９３号（１９９５年６月７日）；米国特許出願第０８／５７７，０６８号
（１９９５年６月２２日出願）；米国特許出願第０８／６８９，３４１号（１９
９７年８月７日出願）；米国特許出願第０８／９５６，１９５号（１９９７年１
０月２２日出願）；および米国特許出願第０８／９５６，２０４号（１９９７年
１０月２２日出願）に開示されている。
【００６５】 本発明のある実施態様において、第１の結合パートナーとしての式IIまたは式
IIIのオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと、第２の結合パートナーと
しての式IVの接合体との生物結合は、以下の式Ｖの生物接合体を生成する：
【００６６】
【化１７】
【００６７】 式中、Ｘ2は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＲ’、ＮＯＨ、およびＮＯＲ’であり、Ｒ’
は上記で定義したものである。
【００６８】 第１の結合パートナーとしての式IIまたはIIIの化合物と第２の結合パートナ
ーとしての式VIの化合物を使用する生物接合体を作成することもできる。
【００６９】
【化１８】
【００７０】 式VIの化合物とその調製は、米国特許第５，７７７，１４８号と５，８３７，
８７８号、ならびに同時係属出願：米国特許出願第０８／９５６，１９４号（１
９９７年１０月２２日出願）；米国特許出願第０８／９５６，１９６号（１９９
７年１０月２２日出願）（これらは参照することにより本明細書に組み込まれる
）に開示されている。こうして生成した生物接合体は、以下の式VIIで示される
：
【００７１】
【化１９】
【００７２】 式VIとVIIの生物接合体は、緩衝化水溶液または有機溶液中で調製される。生
物接合体は、数分以内に約４℃〜約７０℃の温度範囲で生成される。あるｐＨの
水溶液中の生物接合体の安定性は、基Ｘ2とＹにより大きな影響を受ける。例え
ば、式VIの生物接合体（ここでＸはＮＯＨであり、ＹはＯである）は、ｐＨが４
．５より大きく１２．５未満の水溶液中で安定である。しかし式VIIの生物接合
体（ここでＸはＮＯＨであり、ＹはＯである）は、ほぼｐＨが２．５より大きく
１２．５未満の水溶液中で安定である。従って、低ｐＨの緩衝化水溶液中で作業
する時は、式VIIの生物接合体が好ましい。
【００７３】 各結合パートナー間の生物結合反応（ボロニック酸複合体形成）は、イオン強
度の大きな変化、有機溶媒の存在、界面活性剤の存在、カオトロピック剤（タン
パク質変性剤）の存在に対して非感受性であり、これらは先行技術の間接的標識
系に適合せず、生物学的巨大分子の構造は、必要な結合性を保存するように維持
しなければならない。多くの例において、本明細書に記載の系により、生物接合
体の形成を支配する制約は、生物活性分子種の活性（未変性のコンフォメーショ
ン）を維持するのに必要な条件により付加されるものに限定される。
【００７４】 本発明を具体例により詳細に説明する。以下の例は例示目的であり、決して本
発明を限定するものではない。当業者は、同じ結果を得るために種々の重要では
ないパラメータを変化させ修飾することができることを、容易に理解するであろ
う。 Ｖ．実施例 実施例１ 本例は、１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒ
ドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）］アミノ−１
，３−オクタンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ルアミノホスホラミダイトの調製を例示する。
【００７５】
【化２０】
【００７６】 Ａ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸の合成 ４−カルボキシフェニルボロニック酸（１０．０ｇ、６０．２mmol）を熱無水
１，４−ジオキサン（１５０ml）に溶解し、少量の活性炭で処理し、まだ熱いう
ちに０．５μｍガラスフィルターでろ過した。ろ液を加熱還流し、ベンゾピナコ
ール（２２．１ｇ、６０．３mmol）を加えた。溶液を１時間還流し、室温まで冷
却した。次にロータリーエバポレーターで溶媒を除去して白色の固体を得て、こ
れを−２０℃で酢酸エチル／ヘキサンから一晩結晶化した。固体をろ過し、真空
下で乾燥して２３．３ｇ（収率７８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈ
と13Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルおよび高速液体クロマトグラフィーで確
認した。
【００７７】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 13.23（ブロードシングレット、1Ｈ, ＣO2H)
、8.19（ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 8.13 (ダブレット、2H, ArH), 7.1
0 (マルチプレット、20H, ArH [ベンゾピナコール])。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-
d6);δ 167.4, 141.9, 135.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.3。
【００７８】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．９±０．１分。 Ｂ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸ＮＨＳ
エステルの合成 ４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸（１７．
４ｇ、３５．０mmol）を、無水テトラヒドロフラン（１００ml）中に溶解した。
Ｎ−ヒドロキシスクシニミド（４．０ｇ、３４．８mmol）を加え、次に１，３−
ジシクロヘキシルカルボジイミド（７．２ｇ、３４．６mmol）を加えた。反応物
を室温で一晩攪拌し、この間１，３−ジシクロヘキシル尿素の白色の沈殿物が生
成した。固体をろ過して除去し、少量のテトラヒドロフランで洗浄した。一緒に
したろ液を、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固してオフホワイトの固体を得
た。この固体をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、溶液をろ過し、ヘキ
サン（３００ml）を加えた。−２０℃で一晩結晶化させた。固体をろ過し、真空
下で乾燥して１８．４ｇ（収率８９％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈ
および13Ｃ ＮＭＲで確認した。
【００７９】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.31（ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 8
.25 (ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 7.15 (マルチプレット、20H, ArH [ベ
ンゾピナコール]), 2.91 (シングレット、4H, ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO
-d6);δ 170.4, 161.9, 141.7, 136.0, 129.7, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 9
6.5, 25.5。 Ｃ．８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−３−オキソオクタン酸
メチルの合成 ６−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］安息香酸（２５．０ｇ、９
４．０mmol）と２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（１３
．６ｇ、９４．０mmol）を無水ジクロロメタン（５００ml）に溶解した。トリエ
チルアミン（３５ml、２５５mmol）を加え、反応混合物を乾燥窒素下で室温で攪
拌した。ジエチルシアノホスホネート（１５．４ml、９４．０mmol）を加えると
、溶液は急速に黄色になる。一晩攪拌後、溶液を注意深く１Ｍ塩酸（２００ml、
２回）、水（２００ml、３回）、および塩化ナトリウム飽和水溶液（２００ml、
１回）で洗浄した。溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ロータリー
エバポレーターで濃縮して、粘性の橙色のシロップを得た。この物質を無水メタ
ノール（５００ml）に溶解し、乾燥窒素下で４時間還流した。溶液を冷却し、ロ
ータリーエバポレーターで溶媒を除去した。残渣を酢酸エチル：ヘキサン（１：
１、v/v、５０ml）に溶解し、１０mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters Pr
epLC 2000システム）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラ
ムで精製した。流速は５０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した：５０
：５０（v/v）酢酸エチル：ヘキサンで２２分、次に１００％酢酸エチルで１８
分、次に１００％メタノールで２０分。溶出液を、２７０nmの吸収でモニターし
た；生成物は最初の大きなピークに溶出する。生成物の画分をプールし、ロータ
リーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な淡黄色のシロップを得て、これは４
℃に保存すると固化して、２７．７ｇ（収率９２％）の生成物を与える。生成物
の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００８０】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.33 (マルチプレット、5H, ArH), 7.23 (ト
リプレット、 1Ｈ, NH), 5.00 (シングレット、2H, ArＣＨ2O), 3.60 (シングレ
ット、3Ｈ, OＣＨ3), 3.58 (シングレット、2H, [C=O]CH2[C=O]), 2.97 (カルテ
ット、2Ｈ, NHＣＨ2ＣＨ2), 2.49 (トリプレット、2H, ＣＨ2ＣＨ2[C=O]), 1.40
(マルチプレット、4H, NHＣＨ2ＣＨ2およびCＨ2ＣＨ2[C=O]), 1.20 (マルチプ
レット、2H, ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2). 13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ203.6, 168.0,
156.3, 137.5, 128.4, 127.8, 65.2, 51.7, 48.5, 42.1, 40.1, 29.2, 25.6, 2
2.5。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．
１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配
、１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター
）：保持時間＝１３．０±０．１分。 Ｃ．８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−１，３−オクタンジオ
ールの合成 ８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−３−オキソオクタン酸メ
チル（２６．０ｇ、８０．９mmol）を無水テトラヒドロフラン（１２５ml）に溶
解した。この溶液を、乾燥窒素下で無水テトラヒドロフラン（２５０ml）中の水
素化ホウ素リチウム（６．１ｇ、２７９．８mmol）の冷却（氷浴）溶液にゆっく
り滴下して加えた。添加が完了後、反応混合物を室温まで暖め、一晩攪拌した。
次に混合物を氷浴で冷却し、１Ｍの塩酸（３００ml）を静かに滴下して加えた。
添加が完了後そして発泡が停止後、混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し
て、ほとんどのテトラヒドロフランを除去した。残渣（水＋生成物）にクロロホ
ルム（２５０ml）を加え、混合物をよく振盪し、層を分離した。水層を追加のク
ロロホルム（２５０ml）で抽出した。クロロホルム抽出物を塩化ナトリウム飽和
水溶液（１００ml、１回）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。
ろ液を蒸発乾固して、粘性の清澄な無色のシロップを得た。このシロップをメタ
ノール（１００ml、５回）で同時蒸発させ、残渣をエチルエーテルとヘキサンか
ら−２０℃で一晩結晶化した。白色の固体をろ過し、真空下で乾燥して２３．５
ｇ（収率９８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲな
らびにＨＰＬＣで確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.33 (マルチプレ
ット、5H, ArH), 7.22 (トリプレット、1Ｈ, NH), 5.00 (シングレット、2H, Ar
ＣＨ2O), 4.33 (トリプレット、1Ｈ, ＣＨ2OH), 4.29 (ダブレット、1Ｈ, ＣHOH
), 3.50 (マルチプレット、3H, CH[OH]ＣＨ2ＣＨ2OH), 2.98 (トリプレットのダ
ブレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 1.52-1.23 (マルチプレット、10H, NHＣＨ2ＣＨ 2 ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2ＣＨ2OH). 13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ156.4,
137.6, 128.5, 127.9, 67.4, 65.2, 58.4, 40.4, 40.2, 37.5, 29.5, 26.4, 25
.0。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．
１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配
、１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター
）：保持時間＝１１．０±０．１分。 Ｄ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−（ベンジルオキシカ
ルボニル）アミノ−１，３−オクタンジオールの合成 メチル８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−１，３−オクタン
ジオール（８．３ｇ、２８．０mmol）を無水ピリジン（５０ml、１回）で同時蒸
発させた。得られたシロップを無水ピリジン（５０ml）に溶解し、塩化４，４’
−ジメトキシトリチル（１０．０ｇ、２９．５mmol）を加えた。橙色の溶液を水
分の無いところで室温で一晩攪拌した。次にメタノール（１０ml）を加え、溶液
を室温でさらに１時間攪拌した。ｔ−ブチルメチルエーテル（２００ml）を加え
、混合物をよく攪拌し、懸濁液を−２０℃で２時間放置した。混合物をろ過し、
固体をｔ−ブチルメチルエーテル（１００ml）で洗浄し、一緒にしたろ液をロー
タリーエバポレーターで濃縮して粘性の黄色のシロップを得た。シロップを酢酸
エチル（２０ml）とヘキサン（２０ml）＋トリエチルアミン（１ml）に溶解し、
この溶液の５mlのアリコートを、分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム
）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製した。流
速は５０ml/分の３９：６０：１（v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルア
ミンであった。溶出液を、２８０nmの吸収でモニターした。生成物の画分をプー
ルし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な淡黄色のシロップを得
た。このシロップを真空下で水酸化カリウムペレット上で乾燥して１２．９ｇ（
収率７７％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならび
にＨＰＬＣで確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, アセトニトリル-d3):δ7.45-7.27 (
マルチプレット、14H, ArH [DMT, Cbz]), 7.22 (トリプレット、1Ｈ, NH), 6.86
(ダブレット、4H, ArH [DMT]), 5.62 (ブロードシングレット、1Ｈ, ＣHOH), 5
.04 (シングレット、2H, ArＣＨ2O), 3.75 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.
63 (ダブレット、1Ｈ, ＣHOH), 3.20-3.00 (マルチプレット、4H, NHＣＨ2ＣＨ2 およびＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.72-1.23 (マルチプレット、10H, NHＣＨ2ＣＨ2ＣＨ 2 -ＣＨ2ＣＨ2CH[OH]-ＣＨ2ＣＨ2O-DMT)。13Ｃ NMR (75 MHz, クロロホルム-d):
δ 158.9, 156.8, 145.1, 137.0, 136.3, 130.3, 128.8, 128.3, 128.2, 127.1,
113.5, 87.0, 71.5, 66.7, 62.7, 55.4, 41.2, 37.4, 36.9, 30.1, 26.8, 25.3
。 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１７．２±０．１分。 Ｅ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−アミノ−１，３−オクタ
ンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−（ベンジルオキシカル
ボニル）アミノ−１，３−オクタンジオール（１２．９ｇ、２１．６mmol）をメ
タノール（２５０ml）に溶解した。この溶液を１リットルのParr水素化容器に入
れ、容器に窒素を５分間パージした。酢酸エチル（２０ml）でスラリーにしたパ
ラジウム担持活性炭触媒（１．０ｇ、１０％Ｐｄ／Ｃ）を加え、溶液をParrシェ
ーカーに固定した。容器を再度窒素でパージし、排気して、３５psiの圧力で水
素を導入した。容器を室温で６時間攪拌し、次に真空にし、窒素を充填し、シェ
ーカーから取り出した。内容物を０．５μｍのガラスファイバーでろ過し、ろ液
をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロップを得た。シ
ロップをさらに水酸化カリウムで真空下で乾燥して、１０．１ｇ（収率１００％
）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣ
で確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ7.38-7.16 (マルチプレット、9H,
ArH), 6.86 (ダブレット、4H, ArH), 3.71 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.
63 (マルチプレット、4H, CHOHとＣＨ2ＮＨ2), 3.04 (トリプレット、2H, ＮＨ2 ＣＨ2ＣＨ2), 2.53 (トリプレット、2H, ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.61-1.17 (マルチ
プレット、10H, ＮＨ2ＣＨ2ＣＨ2-ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2ＣＨ2O-DMT)。13 Ｃ NMR (75 MHz, クロロホルム-d6):δ 158.2, 145.6, 136.4, 128.9, 129.1, 1
27.9, 126.7, 113.2, 85.4, 67.3, 60.7, 55.0, 41.1, 37.5, 32.3, 26.5, 25.1
。 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１２．７±０．１分。 Ｆ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル］アミノ−１，３−オク
タンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−アミノ−１，３−オクタン
ジオール（１０．０ｇ、２１．６mmol）を無水テトラヒドロフラン（１００ml）
に溶解し、４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸
Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステル（１２．８ｇ、２１．６mmol）を加えた。
清澄な溶液を、室温で乾燥窒素下で一晩攪拌した。次に反応混合物をロータリー
エバポレーターで濃縮して粘性のシロップとした。残渣を、トリエチルアミン（
１０ml）を含有する酢酸エチル（１００ml）に溶解し、溶液を４℃で数時間冷却
した。冷混合物をろ過して、一部の沈殿固体を除去し、ろ液をロータリーエバポ
レーターで濃縮して粘性のシロップとした。残渣を酢酸エチル（２５ml）とトリ
エチルアミン（１ml）を含有するヘキサン（２５ml）に溶解し、この溶液の５ml
のアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム）によりPorasil
シリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５０ml/分の
３９：６０：１（v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミンであった。
溶出液を、２８０nmの吸収でモニターした。生成物の画分をプールし、ロータリ
ーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な淡褐色のシロップをを得た。このシロ
ップをさらに、水酸化カリウムペレットで真空下で乾燥して１４．９ｇ（収率７
３％）の淡い茶色のガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ
ＮＭＲならびに勾配および定組成ＨＰＬＣで確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO
-d6):δ8.61 (トリプレット、1Ｈ, NH), 8.14 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 8
.00 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.39-7.09 (マルチプレット、30H, ArH [DM
T, ベンゾピナコール]), 6.86 (ダブレット、4H, ArH [DMT]), 4.27 (ダブレッ
ト、1Ｈ, ＣHOH), 3.70 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.57 (ブロードシン
グレット、1Ｈ, ＣHOH), 3.29 (トリプレットのダブレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2)
, 3.07 (トリプレット、2H, ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.70-1.23 (マルチプレット、1
0H, NHＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH-[OH]ＣＨ2ＣＨ2O-DMT)。13Ｃ NMR (75 MHz
, DMSO-d6):δ 166.0, 158.1, 145.4, 141.9, 138.4, 136.3, 135.1, 129.7, 12
8.1, 127.8, 127.5, 127.2, 127.0, 126.5, 113.1, 96.1, 85.3, 67.2, 60.5, 5
5.9, 38.1, 37.4, 29.1, 26.6, 24.9。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ
４カラム、流速１．０ml/分、０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．
５）中のアセトニトリルの線形勾配、１５分で０〜１００％アセトニトリル、２
６０nmの吸光度を検出器でモニター）：保持時間＝１９．４±０．１分。ＨＰＬ
Ｃ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％ ０．１Ｍ
酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを使用する
定組成溶離）：保持時間＝６．２±０．１分。 Ｇ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル］−アミノ−１，３−
オクタンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノホスホラミダイトの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒドロキシ
ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル］−アミノ−１，３−オク
タンジオール（３．５ｇ、３．７mmol）を、無水ジクロロメタン（５０ml、塩基
性アルミナでろ過した）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２
．６ml、１４．９mmol）を加え、溶液を乾燥窒素下で室温で攪拌した。２−シア
ノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノクロロホスフィン（１．２ml、５．
４mmol）を滴下して加え、溶液を１時間攪拌した。次に反応混合物をロータリー
エバポレーターで約２０mlに濃縮し、酢酸エチル（１５０ml、１００mlの重炭酸
ナトリウム飽和水溶液であらかじめ洗浄した）を加えた。有機溶媒を重炭酸ナト
リウム水溶液で洗浄（５０ml、１回）し、次に塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄
（５０ml、１回）し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液をロータ
リーエバポレーターで蒸発乾固して、淡黄色のシロップを得た。この物質を、酢
酸エチル（２５ml）とトリエチルアミン（１ml）を含有するヘキサン（２５ml）
に溶解した。この溶液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣによりPorasilシリ
カ（４０mm×１００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５０ml/分の１９
：８０：１（v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミンであった。溶出
液を、２７０nmの吸収でモニターした：生成物は大きなピーク中であった。生成
物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色の
ガラス様泡状物を得て、これをさらに無水炭酸カリウムで真空下で乾燥して２．
７ｇ（収率７８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1ＨとＨＰＬＣで確認し
た。1Ｈ NMR (300 MHz, アセトニトリル−ｄ3）:δ 8.14 (ダブレット、2H, ArH
[PBA]), 7.89 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.43-7.08 (マルチプレット、31
Ｈ, ArH [DMT, ベンゾピナコール] およびNH), 6.86-6.82（２つのダブレット、
4H, ArH [DMT]), 3.95 (マルチプレット、1Ｈ, ＣHO-P), 3.74-3.734 (２つのシ
ングレット、6H, Ar-OＣＨ3）、3.50 (マルチプレット、4H, OＣＨ2ＣＨ2CNとNC
H(ＣＨ3)2）、3.34 (マルチプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 3.12 (マルチプレッ
ト、2H, ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 2.58-2.46 (トリプレットのダブレット、2H, OＣＨ 2 ＣＨ2CN), 1.80-1.30 (マルチプレット、10H, NHＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH
[OH]ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.12-1.01 (ダブレットの２つのダブレット、12H, NCH(
ＣＨ3)2)。1Ｈ ＮＭＲスペクトルは、部分的に分離したジアステレオ異性体の
存在のために複雑であったことに注意されたい。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１０
０mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％ ０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニ
ウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを使用する定組成溶離）：保持時間
＝１１．７と１２．８±０．１分（ジアステレオ異性体）。 実施例２ 本例は、１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−［（４−ジヒ
ドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニ
ル）］アミノ−１，２−プロパンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホラミダイトの調製を例示する。
【００８１】
【化２１】
【００８２】 Ａ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸の合成 図４と５に関して、４−カルボキシフェニルボロニック酸（１０．０ｇ、６０
．２mmol）を熱無水１，４−ジオキサン（１５０ml）に溶解し、少量の活性炭で
処理し、まだ熱いうちに０．５μｍガラスフィルターでろ過した。ろ液を加熱還
流し、ベンゾピナコール（２２．１ｇ、６０．３mmol）を加えた。溶液を１時間
還流し、室温まで冷却した。次に溶媒を、ロータリーエバポレーターで除去して
、白色の固体を得て、これを−２０℃でエチルエーテル／ヘキサンから一晩結晶
化した。固体をろ過し、真空下で乾燥して２３．３ｇ（収率７８％）の生成物を
得た。生成物の純度を、1Ｈと13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００８３】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 13.23（ブロードシングレット、1Ｈ, ＣO2H)
、8.19（ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 8.13 (ダブレット、2H, ArH), 7.1
0 (マルチプレット、20H, ArH [ベンゾピナコール])。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-
d6);δ 167.4, 141.9, 135.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.3。
【００８４】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．９±０．１分。 Ｂ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸ＮＨＳ
エステルの合成 ４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸（１７．
４ｇ、３５．０mmol）を、無水テトラヒドロフラン（１００ml）中に溶解した。
Ｎ−ヒドロキシスクシニミド（４．０ｇ、３４．８mmol）を加え、次に１，３−
ジシクロヘキシルカルボジイミド（７．２ｇ、３４．６mmol）を加えた。反応物
を室温で一晩攪拌し、この間１，３−ジシクロヘキシル尿素の白色の沈殿物が生
成した。固体をろ過して除去し、少量のテトラヒドロフランで洗浄した。一緒に
したろ液を、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固してオフホワイトの固体を得
た。この固体をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、溶液をろ過し、ヘキ
サン（３００ml）を加えた。−２０℃で一晩結晶化させた。固体をろ過し、真空
下で乾燥して１８．４ｇ（収率８９％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈ
および13Ｃ ＮＭＲで確認した。
【００８５】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.31（ダブレット、ArH [安息香酸]), 8.25
(ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 7.15 (マルチプレット、20H, ArH [ベンゾ
ピナコール]), 2.91 (シングレット、4H, ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6)
;δ 170.4, 161.9, 141.7, 136.0, 129.7, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.5,
25.5。 Ｃ．３−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プ
ロパンジオールの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニンＮ−ヒドロキシスクシニミドエ
ステル（１６．０ｇ、５０．０mmol）を５０mlの２−プロパノールに溶解（静か
に加熱しながら）し、３−アミノ−１，２−プロパンジオール（４．６ｇ、５０
．４mmol）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。白色の沈殿物が生成した。
次にロータリーエバポレーターで溶媒を除去して、白色の固体を得て、これを水
（２００ml）に溶解した。陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８［ＯＨ-型］、５０
ｇ湿重量；バイオラッド（Bio-Rad））を加え、スラリーを１時間攪拌した。樹
脂をろ過して除去し、水（１００ml、１回）とメタノール（１００ml、２回）で
洗浄した。一緒にしたろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して白色の固
体を得た。この固体をトルエン（１００ml、１回）と同時蒸発させ、次に真空下
で充分乾燥して１４．１ｇ（収率９６％）の生成物を得た。生成物の純度を、1
Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００８６】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.85（トリプレット、1Ｈ, NH [アミノプロ
パンジオール), 7.37-7.26 (マルチプレット、5H, ArH), 7.21 (トリプレット、
1Ｈ, NH [β−アラニン]), 4.99 (シングレット、2H, ArＣＨ2O), 4.64 (ブロー
ドシングレット、2H, OH), 3.48 (ペンテット、1Ｈ, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2OH), 3.2
7 (ダブレットのダブレット, 2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2OH), 3.18 (カルテット、2H
, NHＣＨ2ＣＨ2), 3.08 (マルチプレットのダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O
H), 2.28 (トリプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6);δ
171.0, 156.3, 137.4, 128.5, 127.9, 70.5, 65.3, 63.8, 42.2, 37.2, 35.7。
【００８７】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝９．４±０．１分。 Ｄ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プロパンジオールの合成 ３−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プロ
パンジオール（５．０ｇ、１６．９mmol）を、無水ピリジン（５０ml）に溶解し
、塩化４，４’−ジメトキシトリチル（５．７ｇ、１６．９mmol）を加えた。黄
色の溶液を、乾燥窒素下で室温で一晩攪拌した。次にメタノール（１０ml）を加
え、溶液をさらに１時間攪拌した。溶媒をロータリーエバポレーターで＜４０℃
の浴温度で除去して、粘性の黄色のシロップを得た。シロップを酢酸エチル（２
００ml）と５％（w/v）炭酸ナトリウム水溶液（１００ml）とで分配した。層を
分離し、酢酸エチル層を塩化ナトリウム飽和水溶液（１５０ml、１回）で洗浄し
た。酢酸エチル溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ロータリーエバ
ポレーターで濃縮して黄色のガムを得た。ガムを、酢酸エチル：トリエチルアミ
ン（１ml）を含有するヘキサン（１：１ v/v、３０ml）で溶解し、ろ過し、この
溶液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム）によ
りPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５
０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した：７４：２５：１（v/v/v）酢酸
エチル：ヘキサン：トリエチルアミンで１０分溶出して、いくつかの小さな混入
物質を溶出しし、次に９４：５：１（v/v/v）酢酸エチル：メタノール：トリエ
チルアミンで２０分溶出して、所望の生成物を溶出した。溶出液を、２７０nmの
吸収でモニターした。生成物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸
発乾固して、清澄な淡黄色のシロップを得た。シロップを真空下で水酸化カリウ
ムペレットでさらに乾燥して、５．４ｇ（収率５４％）のパリパリのガラス様泡
状物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認
した。
【００８８】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.80 (トリプレット、1H, NH[アミノプロパ
ンジオール]), 7.41-7.18 (マルチプレット、15Ｈ, ArH [DMT, Cbz]およびNH[β
−アラニン]), 6.88 (ダブレット、4H, ArH [DMT]), 5.00 (シングレット、2H,
ArCH2O), 4.97 (ダブレット、1H, CH[OH]), 3.72 (シングレット、6H, ArOCH3),
3.68 (マルチプレット、1H, CH2CH[OH]CH2O-DMT), 3.19 (カルテット、2H, NHC
H2CH2), 3.14 (マルチプレットのダブレット、2H, CH2CH[OH]CH2O-DMT), 2.85 (
マルチプレット、2H, CH2CH[OH]CH2O-DMT), 2.24 (トリプレット、2H, NHCH2CH2 )。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 170.5, 158.1, 156.0, 145.0, 137.2, 135.9
, 129.7, 128.2, 127.8, 127.6, 127.5, 126.5, 113.1, 85.2, 68.7, 65.7, 65.
1, 54.9, 42.6, 37.1, 35.5。
【００８９】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１５．３±０．１分。 Ｅ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（β−アラニル）アミノ
−１，２−プロパンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プロパンジオール（５．４ｇ、９．０
mmol）を無水メタノール（１５０ml）に溶解した。この溶液を１リットルのParr
水素化容器に入れ、容器に窒素を５分間パージした。酢酸エチル（２０ml）でス
ラリーにしたパラジウム担持活性炭触媒（１．０ｇ、１０％Ｐｄ／Ｃ）を加え、
溶液をParrシェーカーに固定した。容器を再度窒素でパージし、排気して、３５
psiの圧力で水素を導入した。容器を室温で６時間攪拌し、次に真空にし、窒素
を充填し、シェーカーから取り出した。内容物を０．５μｍのガラスファイバー
でろ過し、ろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロ
ップを得た。シロップをさらに水酸化カリウムペレットで真空下で乾燥して、４
．０ｇ（収率９６％）のパリパリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1
Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００９０】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.86 (トリプレット、1H, NH[アミノプロパ
ンジオール]), 7.40-7.18 (マルチプレット、9Ｈ, ArH), 6.87 (ダブレット、4H
, ArH), 3.72 (シングレット、6H, ArOＣＨ3), 3.68 (マルチプレット、1Ｈ, Ｃ
Ｈ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.21 (マルチプレットのダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]
ＣＨ2O-DMT), 3.10 (ブロードシングレット、3H, ＮＨ2およびOH), 2.90 (マル
チプレット、ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 2.68 (トリプレット、2H, ＮＨ2ＣＨ2Ｃ
Ｈ2), 2.24 (トリプレット、2H, ＮＨ2ＣＨ2ＣＨ2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6 ): δ 171.7, 158.1, 145.1, 136.0, 129.7, 127.8, 127.7, 126.5, 113.1, 85.
2, 68.7, 65.7, 54.9, 42.5, 38.7, 38.1。
【００９１】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１１．９±０．１分。 Ｆ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）］
アミノ−１，２−プロパンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（β−アラニル）アミノ−
１，２−プロパンジオール（４．０ｇ、８．６mmol）を無水ジクロロメタン（１
００ml）に乾燥窒素下で溶解した。４−ジヒドロキシボリル−（ベンゾピナコー
ル環状エステル）安息香酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（８．５ｇ、
１４．４mmol）を加えると、溶液は淡黄色になった。反応混合物を室温で６時間
攪拌し、次に重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１００ml、１回）次に塩化ナトリウ
ム飽和水溶液（１００ml、１回）で洗浄した。溶液を無水硫酸マグネシウムで乾
燥し、ろ過し、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去して黄色のシロップを得
た。シロップを、トリエチルアミン（１ml）を含有する酢酸エチル（２５ml）に
溶解し、この溶液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000シ
ステム）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製し
た。流速は５０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した：９９：１（v/v/v
）酢酸エチル：トリエチルアミンで１０分溶出して、いくつかの小さい混入物質
を溶出し、次に７９：２０：１（v/v/v）酢酸エチル：メタノール：トリエチル
アミンで２０分溶出して所望の生成物を溶出した。溶出液を、２７０nmの吸収で
モニターした。生成物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固
して、清澄な淡黄色のシロップを得た。シロップを真空下で水酸化カリウムペレ
ットでさらに乾燥して、３．９ｇ（収率４８％）のパリパリのガラス様の泡状物
を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびに勾配および定組成Ｈ
ＰＬＣで確認した。
【００９２】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.64 (トリプレット、1Ｈ, NH [β−アラニ
ン］), 8.11 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.97 (ダブレット、2H, ArH [PBA]
), 7.86 (トリプレット、1Ｈ, NH[アミノプロパンジオール]), 7.41-7.08 (マル
チプレット、30H, ArH [DMT, ベンゾピナコール]), 6.86 (ダブレット、4H, ArH
[DMT]), 4.97 (ダブレット、1Ｈ, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.72 (シングレッ
ト、6H, ArOＣＨ3), 3.70 (マルチプレット、1Ｈ, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.
46 (カルテット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 3.16 (マルチプレットのダブレット、2H,
ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 2.89 (マルチプレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT
), 2.38 (トリプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ
170.8, 166.2, 158.3, 145.2, 142.0, 138.3, 136.1, 135.1, 129.9, 128.2, 12
8.0, 127.8, 127.5, 127.3, 127.1, 126.7, 113.3, 96.3, 85.4, 68.9, 65.9, 5
5.1, 42.9, 36.3, 35.3。
【００９３】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１８．７±０．１分。
【００９４】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝２．５±０．１分。 Ｇ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）］
アミノ−１，２−プロパンジオール２−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジ
イソプロピルアミノホスホラミダイトの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−［（４−ジヒドロキシ
ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）］ア
ミノ−１，２−プロパンジオール（３．９ｇ、４．１mmol）を、無水ジクロロメ
タン（１００ml、塩基性アルミナでろ過した）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロ
ピルエチルアミン（３．６ml、２０．７mmol）を加え、溶液を乾燥窒素下で室温
で攪拌した。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィ
ン（１．１ml、５．０mmol）を滴下して加え、溶液を１時間攪拌した。次に反応
混合物をジクロロメタン（１００ml）で希釈し、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（
５０ml、１回）、次に塩化ナトリウム飽和水溶液（５０ml、１回）で洗浄し、無
水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液をロータリーエバポレーターで蒸
発乾固して、淡黄色のガラス様泡状物を得た。この物質を酢酸エチル（１５ml）
とトリエチルアミン（１ml）を含有するヘキサン（１０ml）に溶解した。この溶
液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム）により
Porasilシリカ（４０mm×１００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５０m
l/分とした。以下のステップ勾配を使用した：５０：４９：１（v/v/v）酢酸エ
チル：ヘキサン：トリエチルアミンで１０分溶出して、次に９９：１ 酢酸エチ
ル：トリエチルアミンで５分溶出し、次に４９：５０：１の酢酸エチル：メタノ
ール：トリエチルアミンで５分溶出した。溶出液を、２７０nmの吸収でモニター
した；生成物は９９：１（v/v）酢酸エチル：トリエチルアミンで溶出する。生
成物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色
のシロップを得た。シロップを真空下で水酸化カリウムペレットでさらに乾燥し
て、３．６ｇ（収率７６％）のパリパリのガラス様の泡状物を得た。生成物の純
度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００９５】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.65 (トリプレットのダブレット、1Ｈ, NH
[β−アラニン］), 8.15 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.99 (ダブレット、2H
, ArH [PBA]), 7.84 (トリプレットのダブレット、1Ｈ, NH[アミノプロパンジオ
ール]), 7.43-7.10 (マルチプレット、30H, ArH [DMT, ベンゾピナコール]), 6.
87 (ダブレットのダブレット、4H, ArH [DMT]), 4.06 (マルチプレット、1Ｈ,
ＣH), 3.71 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.80-3.35 (マルチプレット、8H,
OＣＨ2ＣＨ2CＮ, NCH(ＣＨ3)2, CHＣＨ2OおよびNHＣＨ2ＣＨ2), 3.18 (マルチ
プレットのダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.03 (マルチプレットの
ダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 2.69 (トリプレットのダブレット、
2H, ＯＣＨ2ＣＨ2CN), 2.40 (マルチプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 1.02 (ダブ
レットのダブレット、12H, NCH(ＣＨ3)2)。1Ｈ ＮＭＲスペクトルは、部分的に
分離したジアステレオ異性体の存在のために複雑であったことに注意されたい。 31 P NMR (121 MHz, DMSO-d6):δ 149.1, 148.4 (ジアステレオ異性体)。
【００９６】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝４．１と４．８±０．１分（ジアステレオ異
性体）。 実施例３ 本例は、１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [（４−ジヒ
ドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニ
ル）］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノホスホラミダイトの合成を例示する。
【００９７】
【化２２】
【００９８】 Ａ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸の合成 図６と７を参照して、４−カルボキシフェニルボロニック酸（１０．０ｇ、６
０．２mmol）を熱無水１，４−ジオキサン（１５０ml）に溶解し、少量の活性炭
で処理して、熱いうちに０．５μmガラスファイバーフィルターでろ過した。ろ
液を加熱還流して、ベンゾピナコール（２２．１ｇ、６０．３mmol）を加えた。
この溶液を１時間還流し、次に室温まで冷却した。次に溶媒をロータリーエバポ
レーターで除去して白色の固体を得て、これをエチルエーテル／ヘキサンから−
２０℃で一晩結晶化した。固体をろ過して、真空下で乾燥して、２３．３ｇ（収
率７８％）の生成物を得た。この生成物の純度を、1Ｈ ＮＭＲおよびＨＰＬＣ
により確認した。
【００９９】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 13.23 (ブロードシングレット, 1H, CO2H), 8
.19 (ダブレット, 2H, ArH [安息香酸]), 8.13 (ダブレット, 2H, ArH), 7.10 (
マルチプレット, 2OH, ArH [ベンゾピナコール])。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):
δ 167.4, 141.9, 135.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.3。
【０１００】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．９±０．１分。 Ｂ．４−ジヒドロキシボリル (ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸ＮＨＳ
エステルの合成 ４−ジヒドロキシボリル (ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸 (１７．
４ｇ、３５．０mmol）を無水テトラヒドロフラン (１００ml）に溶解した。Ｎ−
ヒドロキシスクシニミド (４．０ｇ、３４．８mmol）を加え、続いて１，３−ジ
シクロヘキシルカルボジイミド (７．２ｇ、３４．６mmol）を加えた。反応物を
一晩室温で撹拌すると、１，３−ジシクロヘキシル尿素の白色の沈殿物が生成し
た。この固体をろ過して除去し、少量のテトラヒドロフランで洗浄した。一緒に
したろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、オフホワイト色の固体を
得た。固体をテトラヒドロフラン (１００ml）に溶解し、この溶液をろ過し、ヘ
キサン (３００ml）を加えた。−２０℃で一晩結晶化させた。固体をろ過して、
真空下で乾燥して、１８．４ｇ (収率８９％）の生成物を得た。生成物の純度を
、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲにより確認した。
【０１０１】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.31 (ダブレット, 2H, ArH [安息香酸]), 8.
25 (ダブレット, 2H, ArH [安息香酸]), 7.15 (マルチプレット, 2OH, ArH [ベ
ンゾピナコール]), 2.91 (シングレット, 4H, CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6 ):δ 170.4, 161.9, 141.7, 136.0, 129.7, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.5
, 25.5。 Ｃ．ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニルセリンメチルエステルの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニンＮ−ヒドロキシスクシニミドエ
ステル (１４．１ｇ、４４．０mmol；バッケム (Bachem））を１００mlの無水Ｎ
，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解して、セリンメチルエステル塩酸塩 (５．２
ｇ、４３．６mmol）を加えた。混合物を室温で撹拌し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル
エチルアミン (１０ml、５７．４mmol）を加えた。反応物を一晩撹拌した。次に
溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、清澄な無色のシロップを得た。こ
の物質を酢酸エチル (２５０ml）と水 (２５０ml）とに分配した。層を分離し、
酢酸エチル層を、順に重硫酸カリウム半飽和水溶液 (２００ml、１回）、重炭酸
ナトリウム飽和水溶液 (２００ml、２回）および塩化ナトリウム飽和水溶液 (２
００ml、１回）で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、
ろ過し、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去して、清澄な無色のシロップを
得た。このシロップを真空で十分に乾燥して、１０．４ｇ (収率７４％）の無定
形の白色の固体を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰ
ＬＣにより確認した。
【０１０２】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.21 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.33
(マルチプレット, 5H, ArH), 7.18 (トリプレット, 1H, NH [β−アラニン]), 5
.00 (トリプレット, 1H, OH), 4.99 (シングレット, 2H, Ar-CH2O), 4.32 (マル
チプレット, 1H, CH), 3.62 (マルチプレット, 2H, CH2OH), 3.60 (シングレッ
ト, 3H, CH3), 3.18 (カルテット, 2H, NHCH2CH2), 2.33 (トリプレット, 2H, N
HCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 171.0, 170.5, 155.9, 137.2, 128.2
, 127.6, 127.5, 65.1, 61.1, 54.5, 51.5, 36.9, 35.2。
【０１０３】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝９．９±０．１分。 Ｄ．３−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ル−β−アラニルセリンメチルエステルの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニルセリンメチルエステル (１０．
０ｇ、３０．８mmol）を無水ピリジン (１００ml）に溶解して、塩化４，４’−
ジメトキシトリチル (１１．０ｇ、３２．５mmol）を加えた。この黄色の溶液を
乾燥窒素下で室温で一晩撹拌した。次にメタノール (１０ml）を加えて、この溶
液をさらに１時間撹拌した。溶媒を＜４０℃の浴温でロータリーエバポレーター
で除去して、粘性の黄色のシロップを得た。このシロップを酢酸エチル (３００
ml）と重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (１５０ml）とに分配した。層を分離して、
酢酸エチル層を順に重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (１５０ml、１回）および塩化
ナトリウム飽和水溶液 (１５０ml、１回）で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して、ロータリーエバポレーターで濃縮して、黄
色のシロップを得た。このシロップを酢酸エチル (１００ml）に溶解して室温で
撹拌した。ヘキサン (２００ml）をゆっくり滴下して加えると、ほぼ白色の固体
が沈殿した。固体を−２０℃で一晩回収し、ろ過し、酢酸エチルとヘキサンとの
混合物 (１：１、v/v） (１００ml）で洗浄し、真空下で乾燥して、１７．０ｇ
(収率８８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならび
にＨＰＬＣにより確認した。
【０１０４】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.51 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.39-
7.21 (マルチプレット, 15H, ArH [DMT, Cbz]およびNH [β−アラニン]), 6.90
(ダブレット, 4H, ArH [DMT]), 5.02 (シングレット, 2H, Ar-CH2O), 4.60 (マ
ルチプレット, 1H, CH), 3.73 (シングレット, 6H, Ar-OCH3), 3.64 (シングレ
ット, 3H, CO2CH3), 3.23 (マルチプレット, 4H, NHCH2CH2およびCHCH2O), 2.43
(トリプレット, 2H, NHCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 171.0, 170.7
, 158.4, 156.2, 144.8, 137.3, 135.5, 135.4, 129.9, 128.5, 127.9, 127.8,
126.9, 113.2, 85.5, 65.3, 63.0, 55.0, 52.3, 51.9, 37.0, 35.2。
【０１０５】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１５．９±０．１分。 Ｅ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ル−β−アラニルセリノールの合成 ３−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
−β−アラニルセリンメチルエステル (１０．０ｇ、１６．０mmol）を無水テト
ラヒドロフラン (１００ml）に溶解した。この溶液を乾燥窒素下で、無水テトラ
ヒドロフラン (１００ml）中の水素化ホウ素リチウム (１．０ｇ、４５．９mmol
）の撹拌溶液に滴下して加えた。この清澄な無色の溶液を室温で乾燥窒素下で６
時間撹拌した。次に水 (５０ml）を加えて、混合物をさらに４時間撹拌した。テ
トラヒドロフラン (２００ml）を加えると、白色の固体が沈殿した。混合物をろ
過し、固体を少量のテトラヒドロフランで洗浄して、ろ液をロータリーエバポレ
ーターで約５０mlに濃縮した。酢酸エチル (２５０ml）を加えて、層を分離した
。酢酸エチル溶液を、順に重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (１００ml、１回）およ
び塩化ナトリウム飽和水溶液 (１００ml、１回）で洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥して、ろ過した。ろ液からロータリーエバポレーターで溶媒を留去して
、清澄なシロップを得て、これをさらに真空で水酸化カリウムペレットで乾燥し
て、９．３ｇ (収率９７％）のパリパリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度
を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣにより確認した。
【０１０６】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.80 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.40-
7.19 (マルチプレット, 15H, ArH [DMT, Cbz]およびNH [β−アラニン]), 6.88
(ダブレット, 4H, ArH [DMT]), 5.00 (シングレット, 2H, Ar-CH2O), 4.63 (ト
リプレット, 1H, CH2OH), 4.01 (マルチプレット, 1H, CH), 3.72 (シングレッ
ト, 6H, Ar-OCH3), 3.45 (トリプレット, 2H, CHCH2OH), 3.20 (カルテット, 2H
, NHCH2CH2), 2.98 (マルチプレットのダブレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.32 (ト
リプレット, 2H, NHCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 170.2, 158.2, 15
6.2, 145.3, 137.3, 136.0, 129.9, 129.1, 128.5, 127.9, 127.6, 126.7, 113.
2, 85.2, 65.2, 62.6, 60.8, 55.0, 50.9, 37.2, 35.8。
【０１０７】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．８±０．１分。 Ｆ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−β−アラニルセリノールの合
成 １−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
−β−アラニルセリノール (９．３ｇ、１５．５mmol）を無水メタノール (２０
０ml）に溶解した。この溶液を１リットルのParr水素化容器に入れて、この溶液
を窒素で５分間パージした。酢酸エチル (２０ml）でスラリー化したパラジウム
担持活性炭触媒 (１．０ｇ、１０％ Ｐｄ／Ｃ）を加えて、この容器をParrのシ
ェーカーに装着した。容器を再度窒素でパージし、排気して、水素を３５psiの
圧力まで導入した。容器を室温で６時間振盪し、次に排気し、窒素を充填してシ
ェーカーから取りだした。内容物を０．５μmガラスファイバーフィルターでろ
過して、ろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロッ
プを得た。このシロップをさらに真空で水酸化カリウムペレットで乾燥して、７
．１ｇ (収率９３％）のパリパリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1
Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣにより確認した。
【０１０８】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.87 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.38-
7.20 (マルチプレット, 9H, ArH), 6.88 (ダブレット, 4H, ArH), 3.97 (マルチ
プレット, 1H, CH), 3.72 (シングレット, 6H, Ar-OCH3), 3.45 (ダブレット, 2
H, CHCH2OH), 3.26 (ブロードシングレット, 3H, NH2およびOH), 2.95 (マルチ
プレットのダブレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.73 (トリプレットのダブレット, 2
H, NH2CH2CH2), 2.19 (トリプレット, 2H, NHCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-
d6):δ 171.3, 158.3, 145.4, 136.1, 130.0, 128.0, 127.9, 126.7, 113.3, 85
.3, 62.7, 60.9, 55.0, 51.0, 37.8, 37.7。
【０１０９】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１１．０±０．１分。 Ｇ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [ (４−ジヒドロキ
シボリル− (ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）
］セリノールの合成 １−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−β−アラニルセリノール (７．
１ｇ、１４．４mmol）を無水テトラヒドロフラン (１００ml）に乾燥窒素下で溶
解した。トリエチルアミン (２．０ml、１４．４mmol）を加え、続いて４−ジヒ
ドロキシボリル (ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸Ｎ−ヒドロキシ−ス
クシンイミドエステル (８．５ｇ、１４．４mmol）を加えた。反応混合物を室温
で２４時間撹拌し、ろ過して、ろ液をロータリーエバポレーターで粘性のシロッ
プ状になるまで濃縮した。このシロップを酢酸エチル (２５０ml）に溶解して、
溶液を、順に重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (２００ml、２回）、次いで塩化ナト
リウム飽和水溶液 (２００ml、１回）で洗浄した。溶液を無水硫酸マグネシウム
で乾燥し、ろ過して、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去して、黄色のシロ
ップを得た。シロップを、トリエチルアミン (１ml）を含有する酢酸エチル (６
０ml）に溶解して、この溶液の１０mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters P
repLC 2000システム）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカ
ラムにより精製した。流速は５０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した
：６６：３３：１ (v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミンで１０分
間いくつかの少数混入物質を溶出し、次に９８：１：１ (v/v/v）酢酸エチル：
メタノール：トリエチルアミンで２０分間所望の生成物を溶出した。溶出液は、
２７０nmの吸光度によりモニターした。生成物画分をプールして、ロータリーエ
バポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロップを得た。このシロップをさ
らに真空で水酸化カリウムペレットで乾燥して、７．１ｇ (収率９３％）のパリ
パリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲにより
、さらには勾配および定組成ＨＰＬＣで確認した。
【０１１０】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.64 (トリプレット, 1H, NH [β−アラニン]
), 8.09 (ダブレット, 2H, ArH [PBA]), 7.95 (ダブレット, 2H, ArH [PBA]), 7
.83 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.38-7.09 (マルチプレット, 3OH, Ar [D
MT, ベンゾピナコール]), 6.85 (ダブレット, 4H, ArH [DMT]), 4.68 (トリプレ
ット, 1H, CHCH2OH), 4.05 (マルチプレット, 1H, CH), 3.70 (シングレット, 6
H, Ar-OCH3), 3.49 (ダブレット, 4H, CHCH2OHおよびNHCH2CH2), 2.98 (マルチ
プレットのダブレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.46 (トリプレット, 2H, NHCH2CH2)
。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 166.3, 158.2, 145.3, 142.0, 141.9, 138.1,
136.0, 135.2, 129.9, 128.2, 127.9, 127.6, 127.4, 127.1, 126.7, 113.2, 9
6.3, 85.2, 62.6, 60.9, 55.1, 50.9, 36.3, 35.4。
【０１１１】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１８．６±０．１分。
【０１１２】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝２．４±０．１分。 Ｈ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [ (４−ジヒドロキ
シボリル− (ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）
］セリノール３−Ｏ− (２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホ
スホラミダイトの合成 １−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [ (４−ジヒドロキシ
ボリル (ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β−アラニル）］セリ
ノール (７．２ｇ、７．６mmol）を無水ジクロロメタン (２５０ml、塩基性アル
ミナでろ過）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン (５．５ml、３
１．６mmol）を加えて、溶液を乾燥窒素下で室温で撹拌した。２−シアノエチル
−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノクロロホスフィン (２．５ml、１０．５mmol
）を滴下して加え、溶液を１時間撹拌した。次に反応混合物をロータリーエバポ
レーターで約５０mlまで濃縮し、酢酸エチル (３００ml、１００mlの重炭酸ナト
リウム飽和水溶液で前もって洗浄した）を加えた。この有機溶液を重炭酸ナトリ
ウム飽和水溶液 (１００ml、１回）および次に塩化ナトリウム飽和水溶液 (１０
０ml、１回）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液をロー
タリーエバポレーターで蒸発乾固して、淡黄色のガラス様泡状物を得た。この物
質を酢酸エチル (２５ml）およびトリエチルアミン (１ml）を含むヘキサン (１
５ml）に溶解した。この溶液の５mlアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepL
C 2000システム）によりPorasilシリカ（４０mm×１００mm；Waters）のカラム
により精製した。流速は５０ml/分とした。以下の多相線形勾配を使用した：５
０：４９：１ (v/v/v）〜７９：２０：１ (v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリ
エチルアミンで１０分間、９９：１ (v/v）酢酸エチル：トリエチルアミンで５
分間、７９：２０：１酢酸エチル：メタノール：トリエチルアミンで２分間、そ
してこの組成で３分間保持。溶出液は、２６０nmの吸光度でモニターした；生成
物は最初の大きなピークで溶出した。生成物画分をプールし、ロータリーエバポ
レーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロップを得た。このシロップを酢酸エ
チル (３０ml）＋トリエチルアミン (２ml）に溶解して、この溶液を、急速撹拌
氷冷ヘキサン (３００ml）に滴下して加えることによって、白色の沈殿物が生成
した。沈殿物を−２０℃で一晩回収し、ろ過し、冷ヘキサンで十分に洗浄し、真
空下で無水炭酸カリウムで乾燥して、７．９ｇ (収率９１％）の生成物を得た。
生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣにより確認した。
【０１１３】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.64 (トリプレットのダブレット, 1H, NH [
β−アラニン]), 8.11 (ダブレット, 2H, ArH [PBA]), 7.97 (ダブレット, 2H,
ArH [PBA]), 7.95 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.38-7.09 (マルチプレッ
ト, 3OH, Ar [DMT, ベンゾピナコール]), 6.85 (ダブレット, 4H, ArH [DMT]),
4.22 (マルチプレット, 1H, CH), 3.70 (シングレット, 6H, Ar-OCH3), 3.70-3.
40 (マルチプレット, 8H, OCH2CH2CN, NCH (CH3)2, CHCH2OPおよびNHCH2CH2), 3
.02 (マルチプレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.68 (トリプレットのダブレット, 2H
, OCH2CH2CN), 2.48 (マルチプレット, 2H, NHCH2CH2), 1.02 (ダブレットのダ
ブレット, 12H, NCH (CH3)2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 170.5, 166.2, 1
58.3, 145.2, 142.1, 142.0, 138.1, 135.9, 135.2, 129.9, 128.2, 127.9, 127
.6, 127.4, 127.1, 126.8, 119.0, 113.3, 96.3, 85.4, 62.3 (ブロード), 58.5
, 58.4, 58.3, 58.2, 42.6, 42.4, 36.3, 35.4, 31.0, 24.4, 24.3, 22.1, 19.9
, 19.8。 31P NMR (121 MHz, DMSO-d6):δ 147.4, 147.1 (ジアステレオマー異
性体). ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝４．４±０．１分。 実施例４ 本例は、ボロニック酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドの自動固相合成を
例示する。
【０１１４】 オリゴデオキシリボヌクレオチドＰＸ００１ (配列：5'-CGC CAG GGT TTT CCC
AGT CAC GAC-3'）を、標準的自動ホスホラミダイト化学 (モデル３９４自動Ｄ
ＮＡ合成機、パーキンエルマー／アプライドバイオシステムズ (Perkin Elmer/A
pplied Biosystems） [フォスターシティー、カリホルニア州］製、および添付
されるウルトラファスト (UltraFast）ＤＮＡ合成試薬、グレン・リサーチ (Gle
n Research） [スターリング、バージニア州］製）をトリチルＯＮ (Trityl ON
）モードで用いて１μmolスケールで合成した。完成したオリゴデオキシリボヌ
クレオチドは、支持体に保持した。適切な量の所望のフェニルボロニック酸 (Ｐ
ＢＡ）含有ホスホラミダイトを、無水アセトニトリル (１−Ｏ− (４，４’−ジ
メトキシトリチル）−８−Ｎ− [４−ジヒドロキシボリル− (ベンゾピナコール
環状エステル）ベンゾイル）］アミノ−１，３−オクタンジオール３−Ｏ− (２
−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノホスホラミダイトおよび１
−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ− [ (４−ジヒドロキシボリ
ル (ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β−アラニル）］アミノ−
１，２−プロパンジオール３−Ｏ− (２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロ
ピル−アミノホスホラミダイト）、または７５：２５ (v/v）無水アセトニトリ
ル：無水テトラヒドロフラン (１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２
−Ｎ− [ (４−ジヒドロキシボリル− (ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾ
イル）−β−アラニル）］セリノール３−Ｏ− (２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−
ジイソプロピルアミノホスホラミダイト）のいずれかに溶解して、０．１Ｍの最
終濃度を得た。この溶液をＤＮＡ合成機に、特別のホスホラミダイトの瓶の位置
の１つに入れた。次に１つ以上のＰＢＡ残基をオリゴデオキシリボヌクレオチド
の５’末端に、結合反応の「待ち時間」を１５分に延長した、標準的結合サイク
ルの変法を用いて付加した。再び、合成は、トリチルＯＮモードで行った。オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドへのＰＢＡアミジトの付加の結合収率は、各サイク
ルの回収トリチル溶液およびこれに続く分析ＨＰＬＣから＞９５％であると推定
された。
【０１１５】 完成したトリチル化ＰＢＡ修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドは、次に製造
業者のプロトコールにしたがって、装置上の濃水酸化アンモニウムにより支持体
から切断した。ヌクレオ塩基上の保護基とボロニック酸は、加熱ブロック中の水
酸化アンモニウム溶液を６０℃で１時間加熱することにより、同時に除去した。
次にこの溶液を冷蔵庫で４℃に冷却して、スピードバック (SpeedVac）真空濃縮
器 (サヴァント・インスツルメンツ (Savant Instruments） [ファーミングデー
ル (Farmingdale）、ニューヨーク州］）で約１mlまで濃縮した。粗ＰＢＡ修飾
オリゴデオキシリボヌクレオチドを含む溶液を４℃で貯蔵して、後に高速液体ク
ロマトグラフィーにより精製できた。 実施例５ 本実施例は、ボロニック酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドの精製を例示
する。
【０１１６】 粗トリチル化ボロニック酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドを、合成オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドを精製するのに一般的に利用される方法の変法を用
いて、逆相ＨＰＬＣにより精製した。しかしトリチル化未修飾オリゴデオキシリ
ボヌクレオチドおよび標識オリゴデオキシリボヌクレオチドを精製するために一
般に使用されるＣ１８およびＣ８相は、トリチル化ボロニック酸修飾オリゴデオ
キシリボヌクレオチドには不十分にしか機能しなかった。所望の生成物に関連す
るピークは、非常にブロードであり、テーリングがひどく、不純物からの分離が
不十分であった。Ｃ４相がよく機能し、満足な結果を与えることが見い出された
。
【０１１７】 粗トリチル化ボロニック酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドの上記溶液の
アリコート (１０〜１００μl）を、ヒューレット・パッカード・シリーズ (Hew
lett Packard Series）１０５０液体クロマトグラフィーに結合した４．６mm×
１５０mm Ｃ４カラム (イナートシル (Inertsil）５μm、メタケム・テクノロ
ジーズ (MetaChem Technologies） [トーランス、カリホルニア州］）に注入し
た。０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ６．５ (成分Ａ）中のアセトニ
トリル (成分Ｂ）の二相性線形勾配を使用して、クロマトグラムを展開した。勾
配は以下のとおりとした：９５：５ (v/v）Ａ：Ｂ〜６５：３５ (v/v）Ａ：Ｂを
２１分間で、次に１０：９０ (v/v）Ａ：Ｂを３分間で。流速は１．０ml/分とし
、２８０nmのＵＶ検出を用いて分離を観測した。生成物のオリゴデオキシリボヌ
クレオチドは、１８〜２２分でカラムから溶出したが、ＰＢＡ残基の数が多いほ
ど対応して保持時間が長い。生成物を回収して、スピードバックで蒸発乾固して
、油状ペレットを得た。このペレットを１mlの８０：２０ (v/v）氷酢酸：水に
溶解して、室温で１時間放置することによりトリチル基を除去した。再び溶液を
スピードバックで蒸発乾固して、油状ペレットを得た。ペレットを０．５mlの水
に溶解して凍結保存した。１０μlのアリコートを、上記カラムおよび勾配を用
いてＨＰＬＣにより分析した。この手順により得られたボロニック酸修飾オリゴ
デオキシリボヌクレオチドの純度は、一般に＞９０％であった (下記図８を参照
）。
【０１１８】 本明細書に言及される全ての刊行物、特許および特許出願は、参照することに
より、全ての目的のためにその全体を本明細書の一部とした。本発明は、好まし
い実施態様およびその実施例を参照して説明したが、本発明の範囲は、これらの
記述される実施態様だけに限定されるものではない。当業者には明らかであるよ
うに、添付される請求の範囲により定義および限局される本発明の精神と範囲か
ら逸脱することなく、上述の発明には修飾および変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（β
−アラニル）アミノ−１，２−プロパンジオールを調製するための合成法を要約
する。
【図２】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−
［（４−ジヒドロキシ−ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）
−β−アラニル］アミノ−１，２−プロパンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチ
ル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法
を要約する。
【図３】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−β−アラ
ニルセリノールを調製するための合成法を要約する。
【図４】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−
［（４−ジヒドロキシ−ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）
−β−アラニル］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプ
ロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法を要約する。
【図５】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−
［（３，５−ビス−ジ−ヒドロキシボリル（ピナコール環状エステル）ベンゾイ
ル）−β−アラニル］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイ
ソ−プロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法を要約する。
【図６】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−アミ
ノ−１，３−オクタン−ジオールを調製するための合成法を要約する。
【図７】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−
［（４−ジヒドロキシ−ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル］
アミノ−１，３−オクタンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジ
イソ−プロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法を要約する。
【図８】 ５’末端に１、２、３および４つのアリールボロニック酸残基を有する、自動
合成により調製される４つのボロニック酸修飾オリゴヌクレオチドの高速液体ク
ロマトグラフィー精製を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成１４年３月１２日（２００２．３．１２）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】 ボロン酸含有試薬およびオリゴヌクレオチド
【特許請求の範囲】
【化１】 （式中、 Ｒ1は、アリールボロン酸エステル残基であり； Ｙは、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは
１〜５の整数である）よりなる群から選択されるメンバーであり； Ｚは、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキ
レンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドよりなる群から
選択されるメンバーであり； Ｘは、メチレン基および炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバー
であり； Ｒ2は、水素、トリチル、モノメトキシトリチルおよびジメトキシトリチルよ
りなる群から選択されるメンバーであり； Ｒ3は、水素および活性化リン残基よりなる群から選択されるメンバーである
） の化合物。
【化２】 （式中、 Ｒ4とＲ5は、水素、メチルおよびフェニルよりなる群から独立に選択されるメ
ンバーであり； Ｑは、メチレン基および炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバー
である） よりなる群から選択されるメンバーである請求項２に記載の化合物。
【化３】 （式中、 Ｒは、アリールボロン酸残基であり； Ｙは、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは
１〜５の整数である）よりなる群から選択されるメンバーであり； Ｚは、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキ
レンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドよりなる群から
選択されるメンバーであり； Ｘは、メチレン基および炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバー
であり； Ｒ6は、水素およびヒドロキシルよりなる群から選択されるメンバーであり； Ｒ7は、ヒドロキシルおよびモノリン酸エステルよりなる群から選択されるメ
ンバーであり； ｎは、約０〜約１０の整数であり； ｎ’は、約１０〜約１０００の整数であり；そして Ｎｕ’とＮｕ''は、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよび
ヌクレオチド類似体よりなる群から独立に選択されるメンバーであり； ここで、 Ｒ、Ｙ、およびＸは、ｎのいずれか所定のモノマー値に対して同じかまたは異
なってもよく；Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のいずれか所定のモノマー値に対して同じ
かまたは異なってもよい） の化合物。
【化４】 よりなる群から選択されるメンバーである、請求項１６に記載の化合物。
【化５】 （式中、 Ｒは、アリールボロン酸残基であり； Ｙは、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは
１〜５の整数である）よりなる群から選択されるメンバーであり； Ｚは、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキ
レンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドよりなる群から
選択されるメンバーであり； Ｘは、メチレンおよび炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバーで
あり； Ｒ6は、水素およびヒドロキシルよりなる群から選択されるメンバーであり； Ｒ7は、ヒドロキシルおよびモノリン酸エステルよりなる群から選択されるメ
ンバーであり； ｎは、約０〜１０の整数であり； ｎ’は、約１０〜１０００の整数であり；そして Ｎｕ’とＮｕ''は、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよび
ヌクレオチド類似体よりなる群から独立に選択されるメンバーであり； ここで、 Ｒ、Ｙ、ＸおよびＸは、ｎのいずれか所定のモノマー値に対して同じかまたは
異なってもよく；Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のいずれか所定のモノマー値に対して同
じかまたは異なってもよい） の化合物。
【化６】 よりなる群から選択されるメンバーである、請求項２７に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】 関連出願への相互参照 本出願は、現在米国特許第６，０３１，１１７号となっている米国特許出願第
０９／２７２，９７８号（１９９９年３月１９日出願）、および現在米国特許第
６，０１３，７８３号となっている米国特許出願第０９／２７２，８３４号（１
９９９年３月１９日出願）の優先権を主張する（これらはその全体が、参照する
ことにより本明細書に組み込まれる）。 発明の分野 本発明は、核酸固定化、精製および検出の分野、さらに詳しくは修飾オリゴヌ
クレオチドおよびポリヌクレオチドへのボロン酸（boronic acid）の導入のため
の試薬に関する。 発明の背景 アリールボロン酸（例えば、フェニルボロン酸）は、ある必要な官能基を有す
る広範な極性分子と相互作用することが知られている。安定性の異なる複合体（
１，２−ジオール、１，３−ジオール、１，２−ヒドロキシ酸、１，３−ヒドロ
キシ酸、１，２−ヒドロキシルアミン、１，３−ヒドロキシルアミン、１，２−
ジケトンおよび１，３−ジケトン）が、中性のフェニルボロン酸またはフェニル
ボロネート陰イオンとの間で存在することが知られている。固定化されたフェニ
ルボロン酸は、多様な生物学的試料から、必要な官能基を有する分子種を選択的
に保持するためのクロマトグラフィー支持体として使用されている。特に限定さ
れないが、炭水化物、カテコールアミン、プロスタグランジン、リボヌクレオチ
ド、およびステムを含む多くの重要な生物学的分子は、必要な官能基を含有し、
この方法で解析または精製されている。生物学的分子の単離と分離のためのフェ
ニルボロン酸クロマトグラフィー媒体の使用は、いくつかの総説に記載されてい
る（Singhal, R.P.とDeSilva, S.S.M. (1992) Adv. Chromatog., 31:293-335; M
azzeo, J.R.とKrull, I.S. (1989) BioChromatog., 4, 124-130;およびBergold,
A.とScouten, W.H. (1983)、Solid Phase Biochemistry (Scouten, W.H.編）pp
. 149-187, ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（John Wiley & Sons）、ニュー
ヨークを参照）。
【０００２】 ｃｉｓまたはコアクシャル１，２−ジオールおよび１，３−ジオール官能基を
有する分子種（そして特に炭水化物）は、フェニルボロネート陰イオンを有する
固定化化合物と複合体を形成して、アルカリ性水溶液条件下で環状エステルを形
成することが知られている（例えば、Lorand, J.P.とEdwards, J.O. (1959) J.
Org. Chem., 24, 769を参照）。さらにアリールボロン酸残基に結合する炭水化
物は、アリールボロン酸とアリールボロン酸内に含有されるアミン官能基との電
子的相互作用を増強して、蛍光性変化を誘導することが知られている（T.D. Jam
esら、(1994) J. Chem. Soc. Chem. Comm., 477-478を参照）。
【０００３】 生物学的分子（例えば生物学的巨大分子）と複合体を形成する能力を考慮する
と、アリールボロン酸から得られる試薬は、固定化、精製および検出を含む多様
な生物結合への応用に有用である。生物結合とは、化学的または生物学的手段に
より２つまたはそれ超の異なる分子種（そのうち少なくとも１つは、生物学的巨
大分子である）の結合のための説明用語である。生物結合には、特に限定されな
いが、タンパク質、ペプチド、多糖、ホルモン、核酸、リポソームおよび細胞の
、互いの結合または任意の他の分子種との結合があり、これは有用な性質を付与
する。生物学的巨大分子の固定化はまた、生物結合の場合の特殊なケースと考え
られ、ここで巨大分子は、可逆的または不可逆的に不溶性支持体に結合している
。生物結合は、生化学的、免疫化学的および分子生物学的研究に広く使用されて
いる。生物結合の主要な応用には、特に限定されないが、遺伝子プローブの検出
、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、モノクローナル抗体薬剤ターゲティ
ングおよび医用イメージングがある。
【０００４】 多くの例において、生物結合は、２つの結合パートナーの間の結合対を形成す
る既知の反応に基づく。生物結合反応の１つの例は、第１の結合パートナー（例
えば、オルト置換アセトアミドフェニルボロン酸）と第２の結合パートナー（例
えば、糖タンパク質に結合した炭水化物残基の隣接ジオール残基）が関与する（
Cai, S.X.とKeana, J.F.W. (1991) Bioconjugate Chem. 2, 317-322を参照）。
【０００５】 さらに、３−イソチオシアネートフェニルボロン酸由来のフェニルボロニック
酸生物接合体は、医用イメージングで使用するために、放射性テクネチウムジオ
キシム複合体をモノクローナル抗体に付加するのにうまく使用されている（Lind
er, K.E., Wen, M.D., Novotnik, D.P., Malley, M.F., Gougoutas, J.Z., Nunn
, A.D.とEckelman, W.C. (1991) Bioconjugate Chem., 2, 160-170; Linder, K.
E., Wen, M.D., Novotnik, D.P., Ramalingam, K., Sharkey, R.M., Yost, F.,
Narra, R.K.とEckelman, W.C. (1991) Bioconjugate Chem., 2, 407-414を参照
）。
【０００６】 さらにボロン酸試薬は、サリチルヒドロキサム酸（ＳＨＡ）および２，６−ジ
ヒドロキシベンゾヒドロキサム酸（ＤＨＢＨＡ）から得られる、新に開発された
ボロン酸複合体形成試薬とともに使用する時、生物結合試薬として広い有用性を
示している。ボロン酸試薬、ボロン酸複合体形成試薬、これらの接合体と生物接
合体、ならびにその調製法と使用は、米国特許第５，５９４，１１１号、５，６
２３，０５５号、５，６６８，２５８号、５，６４８，４７０号、５，５９４，
１５１号、５，６６８，２５７号、５，６７７，４３１号、５，６８８，９２８
号、５，７４４，６２７号、５，７７７，１４８号、５，８３１，０４５号およ
び５，８３１，０４６号に開示されている。
【０００７】 生物結合反応におけるアリールボロン酸の有用性を考慮すると、当該分野で必
要なものは、例えば自動固相合成中に合成オリゴヌクレオチドに取り込みやすい
ボロン酸化合物である。こうして産生されるボロン酸修飾オリゴヌクレオチドは
、生物結合反応（例えば巨大分子の固定化、精製および検出）に有用であろう。
本発明は、これらおよび他のニーズを満足する。 発明の要約 アリールボロン酸から得られる試薬は、生物学的巨大分子と複合体を形成する
能力の結果として、種々の生物結合反応への応用に有用である。本発明は、入手
できるボロン酸試薬を包含し、ボロン酸修飾合成オリゴヌクレオチドの調製に有
用である。従って１つの態様において本発明は、式Ｉの一般的構造を有する化合
物に関する。
【０００８】
【化７】
【０００９】 式Ｉにおいて、Ｒ1は、特に限定されないが、アリールボロン酸エステル残基
（例えば、フェニルボロン酸エステル）を含む官能基である。式Ｉ中のＹは、特
に限定されないが、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（こ
こで、ｍは約１〜約５の範囲の値を有する整数である）を含む官能基である。本
明細書において、Ｙが炭素−炭素単結合である時、Ｒ1は、カルボニル基に直接
結合している。式Ｉ中のＺは、特に限定されないが、１〜１６個の炭素原子を有
するアルキレン、アルキレンアミド、アルキレンアミドアルキレンおよびアルキ
レンアミドアルキレンアミドを含む官能基である。式Ｉ中のＸは、特に限定され
ないが、メチレン基と炭素−炭素単結合を含む官能基である。Ｘが炭素−炭素単
結合である時、式Ｉ中のメチン炭素は、ＯＲ3に直接結合している。式Ｉ中のＲ2 は、特に限定されないが、水素、トリチル、モノメトキシトリチルおよびジメト
キシトリチルを含む官能基である。式Ｉ中のＲ3は、特に限定されないが、水素
または活性化リン残基を含む官能基である。
【００１０】 式Ｉのアリールボロン酸化合物は、自動固相合成中のオリゴヌクレオチドの合
成に有用である。こうして生成したオリゴヌクレオチドは、種々の生物結合反応
（例えば、核酸の固定化、精製、および検出）に有用である。オリゴヌクレオチ
ドは、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの３’末端または５’末端に
付加した式Ｉの化合物を用いて合成することができる。
【００１１】 従って他の態様において本発明は、修飾５’を有しかつ以下の一般式を有する
オリゴヌクレオチドを提供する。
【００１２】
【化８】
【００１３】 式IIにおいてＲは、特に限定されないが、アリールボロン酸残基（例えば、フ
ェニルボロン酸）を含む官能基である。式II中のＹは、特に限定されないが、Ｏ
（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは約１〜約５
の範囲の値を有する整数である）を含む官能基である。式II中のＺは、特に限定
されないが、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、ア
ルキレンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドを含む官能
基である。式II中のＸは、特に限定されないが、メチレン基と炭素−炭素単結合
を含む官能基である。式II中のＲ6は、特に限定されないが、水素およびヒドロ
キシルを含む官能基である。式II中のＲ7は、特に限定されないが、ヒドロキシ
ルとモノリン酸エステルを含む官能基である。式II中の指数ｎは、約０〜約１０
の範囲の整数である。式II中の指数ｎ’は、約１０〜約１００００の範囲の整数
である。式II中のＮｕ’とＮｕ''は、特に限定されないが、アデニン、グアニン
、チミン、シトシン、ウラシルおよびヌクレオチド類似体を含む独立に選択され
るヌクレオチド塩基である。変数Ｒ、ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー値につい
て同じかまたは異なっていてもよい。変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ5のあるモノマー値
について同じかまたは異なっていてもよい。
【００１４】 さらに別の態様において本発明は、修飾３’と以下の一般式を有するオリゴヌ
クレオチドを提供する。
【００１５】
【化９】
【００１６】 式IIIにおいてＲは、特に限定されないが、アリールボロン酸残基（例えば、
フェニルボロン酸）を含む官能基である。式III中のＹは、特に限定されないが
、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは約１〜
約５の範囲の値を有する整数である）を含む官能基である。式III中のＺは、特
に限定されないが、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミ
ド、アルキレンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドを含
む官能基である。式III中のＸは、特に限定されないが、メチレン基と炭素−炭
素単結合を含む官能基である。式III中のＲ6は、特に限定されないが、水素とヒ
ドロキシルを含む官能基である。式III中のＲ7は、特に限定されないが、ヒドロ
キシルとモノリン酸エステルを含む官能基である。式III中の指数ｎは、約０〜
約１０の範囲の値を有する整数である。式III中の指数ｎ’は、約１０〜約１０
０００の範囲の値を有する整数である。式III中のＮｕ’とＮｕ''は、特に限定
されないが、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよびヌクレオ
チド類似体を含む独立に選択されるヌクレオチド塩基である。変数Ｒ、Ｙおよび
Ｘは、ｎのあるモノマー値について同じかまたは異なっていてもよい。変数Ｒ6
とＮｕ’は、ｎ’のあるモノマー値について同じかまたは異なっていてもよい。
【００１７】 本発明のこれらおよび他の態様は、以後の詳細な説明を読むと、より容易に明
らかになるであろう。 発明の詳細な記載及び好適な実施態様 Ｉ．用語解説 本明細書において「アルキル」という用語は、分岐または非分岐炭化水素鎖（
例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−
ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、オクタ−デシルおよび２−メチルフ
ェニル）を意味する。これらの基は、そのようなアルキル基に一般的に結合する
１つまたはそれ超の官能基（例えば、ヒドロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ
、ヨード、メルカプトまたはチオ、シアノ、アルキルチオ、ヘテロシクリル、ア
リール、ヘテロアリール、カルボキシル、カルボアルコイル、アルキル、アルケ
ニル、ニトロ、アミノ、アルコキシル、アミドなど）で随時置換されて、トリフ
ルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピル、２−フルオ
ロエチル、カルボキシメチル、シアノブチルなどのアルキル基を形成する。
【００１８】 「アルキレン」という用語は、１〜２０個の炭素原子および好ましくは約１〜
１６個の炭素原子を有する、上記の２価アルキル基、例えばメチレン（−ＣＨ2
−）、プロピレン（−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−）、クロロエチレン（−ＣＨＣｌＣＨ2 −）、２−チオブテン−ＣＨ2ＣＨ（ＳＨ）ＣＨ2ＣＨ2、１−ブロモ−３−ヒド
ロキシル−４−メチルペンテン（−ＣＨＢｒＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ
Ｈ2−）を意味する。
【００１９】 「アルキレンアミド」という用語は、−（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）または−（ＣＨ 2 ）nＣ（Ｏ）Ｎ基（ここで、ｎは、約１〜約２０、好ましくは約１〜１６である
）を意味する。
【００２０】 「アルキレンアミドアルキレン」という用語は、−（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）（Ｃ
Ｈ2）nまたは−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ2）n基（ここで、ｎは、約１〜約２
０、好ましくは約１〜１６である）を意味する。
【００２１】 「アルキレンアミドアルキレンアミド」という用語は、−（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ
）（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）または−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎま
たは（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎまたは−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ
（ＣＨ2）nＮＣ（Ｏ）（ここで、ｎは、約１〜約２０、好ましくは約１〜１６で
ある）を意味する。
【００２２】 「アリール」という用語は、好ましくは約６〜１４個の炭素原子を有する少な
くとも１つの芳香環（例えば、フェニル、ナフチル）を形成するか、またはその
ようなアリール基に一般的に結合する１つまたはそれ超の官能基（例えば、ヒド
ロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード、メルカプトまたはチオ、シアノ
、シアノアミド、アルキルチオ、複素環、アリール、ヘテロアリール、カルボキ
シル、カルボアルコイル、アルキル、アルケニル、ニトロ、アミノ、アルコキシ
ル、アミドなど）で、随時置換されて、ビフェニル、ヨードビフェニル、メトキ
シビフェニル、アントリル、ブロモフェニル、ヨードフェニル、クロロフェニル
、ヒドロキシフェニル、メトキシフェニル、ホルミルフェニル、アセチルフェニ
ル、トリフルオロメチルチオフェニル、トリフルオロメトキシフェニル、アルキ
ルチオフェニル、トリアルキルアンモニウムフェニル、アミドフェニル、チアゾ
リルフェニル、オキサゾリルフェニル、イミダゾリルフェニル、イミダゾリルメ
チルフェニルなどのアリール基を形成する、炭素原子の鎖を意味する。
【００２３】 「アシル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ基を意味し、ここでＲは、上記で定義
したアルキルまたはアリール（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ま
たはブチリル）である。
【００２４】 「アルコキシ」という用語は、−ＯＲを意味し、ここでＲはアルキルである。
【００２５】 「アミド」という用語は、アミド結合を−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−を意味し、ここでＲ
は水素またはアルキルである。
【００２６】 「アミノ」という用語は、アミン結合−ＮＲ−を意味し、ここでＲは水素また
はアルキルである。
【００２７】 本明細書において「ヌクレオチドモノマー」という用語は、「標準的」ヌクレ
オチド、すなわちアデノシン、グアノシン、シチジン、チミジン、およびウラシ
ル、およびこれらのヌクレオチドの誘導体を意味する。そのような誘導体には、
特に限定されないが、イノシン、５−ブロモデオキシシチジン、５−ブロモ−デ
オキシウリジン、Ｎ６−メチル−デオキシアデノシン、５−メチル−デオキシシ
チジンなどがある。
【００２８】 本明細書において「保護基」という用語は、分子上の反応性基（例えば、ヒド
ロキシルまたはアミン）が結合されているかまたは置換されている基を意味する
。保護基は、１つまたはそれ超の化学反応工程中に、特定の基の反応を防止する
ように選択される。一般に具体的な保護基は、分子中に存在する他の反応性基を
変化させることなく反応性基を回復できるように、後で除去できるように選択さ
れる。保護基の選択は、保護すべき特定の基の官能基と、それと接触する化合物
である。保護基の選択は、当業者に公知である。例えば、Greeneら、Protective
Groups in Organic Synthesis、第２版、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社
（John Wiley and Sons, Inc.）（Somerset, N.J.）（1991）を参照されたい。
II．化合物 ある態様において本発明は、生物結合反応で有用なポリヌクレオチドやオリゴ
ヌクレオチドの合成の試薬として有用な、新規なアリールボロン酸誘導体を提供
する。オリゴヌクレオチドへのこれらのアリールボロン酸試薬の取り込みは、オ
リゴヌクレオチドが生物結合反応（これは、特に限定されないが、タンパク質、
ペプチド、多糖、ホルモン、核酸、リポソームおよび細胞のような生物学的分子
の結合を含む）に参加することを可能にする。
【００２９】 従って１つの態様において本発明は、式Ｉ：
【００３０】
【化１０】
【００３１】 （式中、Ｒ1、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｒ2およびＲ3は、上記で定義した）の一般的構造を
有する化合物に関する。
【００３２】 式Ｉの化合物は、例えば高い繰り返し効率で自動固相オリゴヌクレオチド合成
をするのに有用である。ある好適な実施態様において、反応性の高い活性化リン
残基および容易に除去可能な保護基が使用される。ある好適な実施態様において
Ｒ1は、フェニルボロン酸エステルである。いくつかの好適なフェニルボロニッ
ク酸エステル残基には、特に限定されないが、以下の残基がある：
【００３３】
【化１１】
【００３４】 式中、Ｒ4とＲ5は、特に限定されないが、水素、メチルおよびフェニルを含む
官能基である。Ｑは、特に限定されないが、メチレン基および炭素−炭素単結合
を含む官能基である。本明細書において、Ｑが炭素−炭素単結合である時、Ｑの
両端の炭素原子は、直接結合される。
【００３５】 Ｒ3は、特に限定されないが、水素と活性化リン残基（特に限定されないが、
ホスホラミダイト、Ｈ−ホスホネート、メチルホスホネート、ホスホロチオエー
ト、ホスホトリエステル、ヘミスクシネート、固相支持体に共有結合したヘミス
クシネート、シクロヘキシルカルボジイミド、および固相支持体に共有結合した
シクロヘキシルカルボジイミド）を含む官能基である。好ましくはＲ3は、ホス
ホラミダイトである。
【００３６】 Ｚは、随時アミド基で中断される約１〜約１６個の炭素原子を有するスペーサ
ー基である。さらにＺは、アミド基で始まりかつ終わることができる。好ましく
はＺは、Ｃ1−Ｃ5アルキレン基またはＣ1−Ｃ5アルキレンアミド基である。
【００３７】 ある好適な実施態様において、Ｘはメチレン基であり、Ｒ2はジメトキシトリ
チル基、例えばＯ−（４，４’−ジメトキシトリチル）である。Ｒ3は、好まし
くはホスホラミダイト基、例えばＯ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプ
ロピルアミノホスホラミダイト基である。式Ｉの好適な化合物は、１−Ｏ−（４
，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−［（４−ジヒドロキシボリル（ベンゾ
ピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β−アラニル）］セリノール３−Ｏ−
（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホラミダイトである
。
【００３８】 本発明の化合物は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチド合成の
両方で、合成オリゴヌクレオチドの任意の位置に、アリールボロン酸残基（例え
ばフェニルボロン酸またはフェニルジボロン酸残基）を導入するのに有用である
。好適な実施態様において、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの５’
末端または３’末端が修飾される。好適な実施態様において式Ｉの化合物は、合
成オリゴヌクレオチドの５’末端にフェニルボロン酸またはフェニルジボロン酸
残基を導入するのに使用される。
【００３９】 従って、他の実施態様において本発明は、式IIの一般的構造を有する化合物に
関する：
【００４０】
【化１２】
【００４１】 式中、Ｒ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｒ6、Ｒ7、ｎ、ｎ’、Ｎｕ’およびＮｕ''は、上記で
定義した。さらに変数Ｒ、ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー値に対して同じかま
たは異なってよい。さらに変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のあるモノマー値に対して
同じかまたは異なってよい。
【００４２】 ある好適な実施態様において式IIのＲは、フェニルボロン酸残基である。適当
なフェニルボロン酸残基には、特に限定されないが、以下がある：
【００４３】
【化１３】
【００４４】 いくつかの他の態様において式Ｉの化合物は、合成オリゴヌクレオチドまたは
ポリヌクレオチドの３’末端にアリールボロン酸（例えば、フェニルボロニック
酸またはフェニルジボロン酸残基）を導入するのに使用される。従って他の実施
態様において本発明は、式IIIの一般的構造を有する化合物に関する：
【００４５】
【化１４】
【００４６】 式中、Ｒ、Ｙ、Ｚ、Ｘ、Ｒ6、Ｒ7、ｎ、ｎ’、Ｎｕ’およびＮｕ''は、上記で
定義した。さらに変数Ｒ、ＹおよびＸは、ｎのあるモノマー値に対して同じかま
たは異なってよい。さらに変数Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のあるモノマー値に対して
同じかまたは異なってよい。式IIIのＲは、好ましくはフェニルボロン酸残基で
ある。好適なフェニルボロン酸残基は、式IIについて上記したものである。 III．合成 式Ｉの種々の化合物の合成に関する詳細は、図１〜７に示し、さらに後述の実
施例１〜３に詳述する。一般的合成方策は以下の通りである。図１〜２または３
〜５において、脂肪族アミノ基を含有する保護１，２−または１，３−ジオール
は、それぞれ保護アリールボロン酸（例えば、フェニルボロン酸）のカルボン酸
誘導体の活性化型（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステルまたはイミダ
ゾリド）と反応させられる。１，２−または１，３−アミン含有ジオールは、１
−ヒドロキシルで酸不安定性残基（例えば、４，４’−ジメトキシトリチル）で
保護される。フェニルボロン酸は、別の１，２−または１，３−ジオール（例え
ば、１，３−プロパンジオール、ピナコール、またはベンゾピナコール）を使用
して保護されて、環状ジエチルを生成する。生じる生成物を、次に活性化ホスフ
ィン（例えば、２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィ
ン）と反応させて、オリゴヌクレオチド合成に有用な最終活性化物質を生成する
。
【００４７】 式Ｉの化合物の調製のための合成中間体として有用なアリールボロン酸（例え
ばフェニルボロン酸）は通常、ハロゲン化アリールからアリールマグネシウムま
たはアリールリチウムを生成し、次にトリアルコキシボレートでトランスメタレ
ーションすることにより、in situで合成される（Todd, M.H.ら、(1997) Tetrah
edron Lett., 38, 6781-6784; Crisofoli, W.A.ら、(1991) Tetrahedron Lett.,
32, 5881-5884; Sharp, M.J.ら、(1987) Tetrahedron Lett., 28, 5093-5096;
およびLarson, R.D.ら、(1994) J. Org. Chem., 59, 6391-6394を参照）。
【００４８】 さらに、ハロゲン化アリールとアルコキシジボロン（Ishiyama, T.ら、(1995)
Org. Chem., 60, 7508-7510; Giroux, A.ら、(1997) Tetrahedron Lett., 38,
3841-3844を参照）またはジアルコキシヒドロボラン（Murata, M.ら、J. Org. C
hem. 1997, 62, 6458-6459を参照）から、触媒としてＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）を
使用して、フェニルボロン酸を生成するために、遷移金属触媒交差結合反応が開
発されている。式Ｉの化合物の調製のための合成中間体として有用なフェニルボ
ロン酸は、同時係属出願第０９／１３８，１０５号（１９９８年８月２１日出願
）の主題である。
【００４９】 いったん産生されると式Ｉの化合物は、式IIおよび式IIIの化合物を生成する
ために使用することができ、これらは、当業者に公知の自動固相合成法を使用し
て調製することができる。例えば自動固相オリゴヌクレオチド合成（式Ｉの化合
物により提供されたような、１つまたはそれ超の非天然の修飾を含有するオリゴ
ヌクレオチドを含む）の化学は、以下の総説論文や参考書に記載されている：Cr
ockett, G.C. (1983) "The Chemical Synthesis of DNA", Aldrichimica Acta 1
6(3), 47-55; Engels, J.W.およびUhlmann, E. (1989) "Gene Synthesis", Ange
w Chem. Int. Ed. Engl. 28, 716-734; Goodchild, J. (1990) "Conjugates of
Oligonucleotides and Modified Oligonucleotides: A Review of Their Synthe
sis and Properties", Bioconjugate Chem. 1(3), 165-187; Oligonucleotide S
ynthesis: A Practical Approach (1984) M.J. Gait編(IRL Press Limited: Oxf
ord, England), 217 pp。
【００５０】 固相状態合成では、式Ｉの化合物を供給するタイミングとその濃度は、市販の
ＤＮＡ合成機で使用される非修飾の市販のホスホラミダイトに典型的なプロトコ
ールと差は無い。市販の合成機（例えば、モデル３９４、アプライドバイオシス
テムズ（Applied Biosystems）、フォスターシティ、カリホルニア州、アメリカ
合衆国）上の余分のホスホラミダイト用に設けられたポート上の容器に、式Ｉの
化合物を含有する溶液を加えればよいだけである。しかし式Ｉの特定化合物の結
合効率が他のホスホラミダイトより実質的に低い場合、式Ｉの化合物の供給のタ
イミングまたはその濃度を変更して合成を最適化することが必要かも知れない。
低い結合効率を補正するためのオリゴヌクレオチド合成プロトコールの最適化手
段は、当業者に公知である。一般的には、供給する試薬の濃度または量を上げて
、高結合効率を達成するだけである。結合効率を測定する手段もまた、公知であ
る。例えばＲ2がジメトキシトリチル（ＤＭＴ）の場合、結合効率は、酸工程（
これはＤＭＴ基を除去する）中のＤＭＴ陽イオン濃度を測定することにより決定
することができる。ＤＭＴ陽イオン濃度は、通常酸洗浄液を分光光度計でモニタ
ーして測定される。酸／ＤＭＴ溶液は、明るい橙色である。あるいは、結合が失
敗した場合、キャッピングはオリゴヌクレオチドのさらなる伸長を防止するため
、例えば毛細管電気泳動またはＨＰＬＣを使用して、末端切断型と完全長オリゴ
ヌクレオチドの比率を比較することにより、結合効率を推定することができる。
【００５１】 固相オリゴヌクレオチド合成は、多くの固層支持体を使用して実施することが
できる。好適な支持体は、合成されたオリゴヌクレオチド中で３’末端塩基とな
る保護されたモノマーが結合するための官能基を提供するものである。この支持
体は、特定の合成化学で使用される試薬に対して不活性でなければならない。適
切な支持体は、当業者に公知である。固層支持体材料には、特に限定されないが
、ポリアクロイルモルホリド、シリカ、制御多孔性ガラス（ＣＰＧ）、ポリスチ
レン、ポリスチレン／ラテックス、およびカルボキシル修飾テフロンがある。好
適な支持体は、アミノ官能基化制御多孔性ガラスとカルボキシル官能基化テフロ
ンである。
【００５２】 固相オリゴヌクレオチド合成は、出発点として、固層支持体に結合した完全に
保護されたモノマー（例えば、保護されたヌクレオチド）を必要とする。この結
合は典型的には、リンカーに共有結合した３’−ヒドロキシル（結合している時
はオキソ）を介し、これは次に、固層支持体に共有結合する。次に最初の合成サ
イクルは、その３’−ホスフェートを介して、縮合反応により結合ヌクレオチド
の５’−ヒドロキシルにヌクレオチドモノマーを結合させ、これは３’−５’ホ
スホジエステル結合を形成する。次の合成サイクルでは、最後に結合したヌクレ
オチドの５’−ヒドロキシルにヌクレオチドモノマーを付加する。こうしてオリ
ゴヌクレオチドが３’から５’方向に合成され、その３’が固層支持体に結合し
た「増殖する」オリゴヌクレオチドが生成される。
【００５３】 当業者は、ヌクレオシドモノマーを固層支持体に結合させる無数の手段を知っ
ているが、スクシネートまたはヘミスクシネートを介して制御多孔性ガラスに共
有結合したモノマーが一般的に好ましい。制御多孔性ガラスにヘミスクシネート
を介して結合した従来の保護されたヌクレオチドは、多くの異なる供給源（例え
ば、Glen Research, スターリング、バーモント州、アメリカ合衆国）；アプラ
イドバイオシステムズ（Applied Biosystems）、フォスターシティ、カリホルニ
ア州、アメリカ合衆国；ファルマシアエルケービー（Pharmacia LKB）、 ピスカ
タウェイ、ニュージャージー州、アメリカ合衆国）から市販されている。
【００５４】 オリゴヌクレオチドの３’末端に式Ｉの化合物を配置することは、固層支持体
に結合した式Ｉの完全にブロックされた化合物を用いて、オリゴヌクレオチド合
成を開始する必要がある。多くの異なる反応性基で官能基化した制御多孔性ガラ
スは、市販されている（例えば、シグマケミカル（Sigma Chemical）、セントル
イス、ミズーリ州、アメリカ合衆国）。結合スキームは、Atkinsonら、第３章、
Gait編、Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, アイアールエル
プレス（IRL Press）、ワシントン・ディー・シー（１９８４）に記載されてい
る。塩化トリイソプロピルベンゼンスルホニル、イミダゾリド、トリアゾリド、
またはテトラゾリドはまた、縮合剤として使用することができる。ジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣ）と構造類似体はまた、適当なリンカーである。他
のリンカーと適当な縮合基は、当業者に公知である。
【００５５】 完全長オリゴヌクレオチドがいったん合成されると、保護基が除去され（オリ
ゴヌクレオチドが脱保護される）、次にオリゴヌクレオチドは、使用前に固層支
持体から切断される。切断と脱保護は、同時にまたは順に起きても良い。２つの
操作は、互いに割り込んで、一部の基がオリゴヌクレオチドから除去されてから
固層支持体から切断され、他の基は溶液中の切断されたオリゴヌクレオチドから
脱保護されてよい。このイベントの順序は、存在する特定のブロッキング基、固
層支持体への具体的な結合、および合成を行う個人の好みに依存する。脱保護が
切断に先行する場合、保護基は、オリゴヌクレオチドから洗浄除去され、オリゴ
ヌクレオチドは固層支持体に結合して残る。逆に脱保護が切断の後の場合、除去
された保護基はオリゴヌクレオチドとともに溶液中に残るであろう。オリゴヌク
レオチドは、使用前にこれらの保護基から単離する必要がしばしばある。
【００５６】 本発明のオリゴヌクレオチドは、短い１本鎖配列に限定されない。当業者は、
オリゴヌクレオチド合成は典型的には、約１，０００塩基、好ましくは約１００
塩基の上限があり、多くのオリゴヌクレオチドは一緒に結合して、長い配列を生
成することは理解されるであろう。さらに、相補的配列を有するオリゴヌクレオ
チドは、一緒にハイブリダイズされて２本鎖分子を形成する。オリゴヌクレオチ
ドをハイブリダイズまたは連結させてより長い２本鎖分子を形成する方法は、当
業者に公知である（例えば、サムブルーク（Sambrook）ら、モレキュラークロー
ニング、実験室マニュアル、Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Har
bor, ニューヨーク、１９８５年）。 IV．生物接合体 上記したように式Ｉのアリールボロン酸は、自動固相合成法を使用して合成オ
リゴヌクレオチド中に取り込み、式IIと式IIIの化合物を生成しやすい。こうし
て生成した修飾オリゴヌクレオチドは、特に限定されないが、巨大分子（例えば
、核酸）の固定化、精製、および検出を含む生物結合反応に有用である。
【００５７】 ２つまたはそれ超の分子種を化学的または生物学的手段で結合させると、生物
結合が起きる。多くの例において、生物結合は、２つの結合パートナーの間の結
合対を形成する既知の反応に基づく。例えば生物結合反応は、抗原と結合タンパ
ク質（例えば抗体）との間で起きる。生物結合反応には、特に限定されないが、
タンパク質、ペプチド、多糖、ホルモン、核酸、リポソーム、および細胞、また
は他の生物学的分子の、互いの結合または任意の他の分子種との結合があり、こ
れは有用な性質を付与する。本発明の修飾オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレ
オチドは、第１の結合パートナーとして特に有用であり、第２のパートナーとし
ての核酸の固定化、精製、および検出に関して生物結合を生成する。
【００５８】 速記法を使用して生物結合を例示するために、第１の結合パートナーは式IIま
たはIIIの化合物であり、これは以下の図で示される：
【００５９】
【化１５】
【００６０】 この図では、「オリゴヌクレオチド」という用語は、長さが約１０〜約１０，
０００塩基であり、３’末端または５’末端のいずれかに約１〜約１０個のアリ
ールボロン酸残基を有する（ここでＢ’は、ＨまたはＢ（ＯＨ）2基である）式I
IまたはIIIのオリゴヌクレオチドを示す。
【００６１】 この例では、第２の結合パートナーは、そこに接合体が結合した２−ヒドロキ
シベンゾヒドロキサム酸（サリチルヒドロキサム酸）から得られる分子である。
適当な接合体には、特に限定されないが、タンパク質、ペプチド、多糖、ホルモ
ン、核酸、リポソーム、細胞、および蛍光性標識物がある。第２の結合パートナ
ーは、以下で示される：
【００６２】
【化１６】
【００６３】 式IVにおいて、Ｘは、特に限定されないが、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＲ’、ＮＨＯ
Ｈ、およびＮＨＯＲ’があり、Ｒ’は特に限定されないが、ＣＨ3、ＣＨ2ＣＨ3
、ＣＨ2ＣＮ、ＣＨ2ＣＯＯＨ、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、およびＣＨ2ＯＣＨ3を含む基で
ある。Ｙは特に限定されないが、Ｏ、ＳおよびＮＨを含む基であり、好ましくは
Ｏである。
【００６４】 式IVの化合物およびその調製法は、米国特許第５，５９４，１１１号、５，５
９４，１５１号、５，６２３，０５５号、５，６４８，４７０号、５，６６８，
２５７号、５，６６８，２５８号、５，６７７，４３１号、５，６８８，９２８
号、５，７４４，６２７号、ならびに同時係属出願：米国特許出願第０８／４８
８，１９３号（１９９５年６月７日）；米国特許出願第０８／５７７，０６８号
（１９９５年６月２２日出願）；米国特許出願第０８／６８９，３４１号（１９
９７年８月７日出願）；米国特許出願第０８／９５６，１９５号（１９９７年１
０月２２日出願）；および米国特許出願第０８／９５６，２０４号（１９９７年
１０月２２日出願）に開示されている。
【００６５】 本発明のある実施態様において、第１の結合パートナーとしての式IIまたは式
IIIのオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと、第２の結合パートナーと
しての式IVの接合体との生物結合は、以下の式Ｖの生物接合体を生成する：
【００６６】
【化１７】
【００６７】 式中、Ｘ2は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＲ’、ＮＯＨ、およびＮＯＲ’であり、Ｒ’
は上記で定義したものである。
【００６８】 第１の結合パートナーとしての式IIまたはIIIの化合物と第２の結合パートナ
ーとしての式VIの化合物を使用する生物接合体を作成することもできる。
【００６９】
【化１８】
【００７０】 式VIの化合物とその調製は、米国特許第５，７７７，１４８号と５，８３７，
８７８号、ならびに同時係属出願：米国特許出願第０８／９５６，１９４号（１
９９７年１０月２２日出願）；米国特許出願第０８／９５６，１９６号（１９９
７年１０月２２日出願）（これらは参照することにより本明細書に組み込まれる
）に開示されている。こうして生成した生物接合体は、以下の式VIIで示される
：
【００７１】
【化１９】
【００７２】 式VIとVIIの生物接合体は、緩衝化水溶液または有機溶液中で調製される。生
物接合体は、数分以内に約４℃〜約７０℃の温度範囲で生成される。あるｐＨの
水溶液中の生物接合体の安定性は、基Ｘ2とＹにより大きな影響を受ける。例え
ば、式VIの生物接合体（ここでＸはＮＯＨであり、ＹはＯである）は、ｐＨが４
．５より大きく１２．５未満の水溶液中で安定である。しかし式VIIの生物接合
体（ここでＸはＮＯＨであり、ＹはＯである）は、ほぼｐＨが２．５より大きく
１２．５未満の水溶液中で安定である。従って、低ｐＨの緩衝化水溶液中で作業
する時は、式VIIの生物接合体が好ましい。
【００７３】 各結合パートナー間の生物結合反応（ボロン酸複合体形成）は、イオン強度の
大きな変化、有機溶媒の存在、界面活性剤の存在、カオトロピック剤（タンパク
質変性剤）の存在に対して非感受性であり、これらは先行技術の間接的標識系に
適合せず、生物学的巨大分子の構造は、必要な結合性を保存するように維持しな
ければならない。多くの例において、本明細書に記載の系により、生物接合体の
形成を支配する制約は、生物活性分子種の活性（未変性のコンフォメーション）
を維持するのに必要な条件により付加されるものに限定される。
【００７４】 本発明を具体例により詳細に説明する。以下の例は例示目的であり、決して本
発明を限定するものではない。当業者は、同じ結果を得るために種々の重要では
ないパラメータを変化させ修飾することができることを、容易に理解するであろ
う。 Ｖ．実施例 実施例１ 本例は、１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒ
ドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）］アミノ−１
，３−オクタンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ルアミノホスホラミダイトの調製を例示する。
【００７５】
【化２０】
【００７６】 Ａ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸の合成 ４−カルボキシフェニルボロン酸（１０．０ｇ、６０．２mmol）を熱無水１，
４−ジオキサン（１５０ml）に溶解し、少量の活性炭で処理し、まだ熱いうちに
０．５μｍガラスフィルターでろ過した。ろ液を加熱還流し、ベンゾピナコール
（２２．１ｇ、６０．３mmol）を加えた。溶液を１時間還流し、室温まで冷却し
た。次にロータリーエバポレーターで溶媒を除去して白色の固体を得て、これを
−２０℃で酢酸エチル／ヘキサンから一晩結晶化した。固体をろ過し、真空下で
乾燥して２３．３ｇ（収率７８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈと13
Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルおよび高速液体クロマトグラフィーで確認し
た。
【００７７】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 13.23（ブロードシングレット、1Ｈ, ＣO2H)
、8.19（ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 8.13 (ダブレット、2H, ArH), 7.1
0 (マルチプレット、20H, ArH [ベンゾピナコール])。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-
d6);δ 167.4, 141.9, 135.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.3。
【００７８】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．９±０．１分。 Ｂ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸ＮＨＳ
エステルの合成 ４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸（１７．
４ｇ、３５．０mmol）を、無水テトラヒドロフラン（１００ml）中に溶解した。
Ｎ−ヒドロキシスクシニミド（４．０ｇ、３４．８mmol）を加え、次に１，３−
ジシクロヘキシルカルボジイミド（７．２ｇ、３４．６mmol）を加えた。反応物
を室温で一晩攪拌し、この間１，３−ジシクロヘキシル尿素の白色の沈殿物が生
成した。固体をろ過して除去し、少量のテトラヒドロフランで洗浄した。一緒に
したろ液を、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固してオフホワイトの固体を得
た。この固体をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、溶液をろ過し、ヘキ
サン（３００ml）を加えた。−２０℃で一晩結晶化させた。固体をろ過し、真空
下で乾燥して１８．４ｇ（収率８９％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈ
および13Ｃ ＮＭＲで確認した。
【００７９】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.31（ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 8
.25 (ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 7.15 (マルチプレット、20H, ArH [ベ
ンゾピナコール]), 2.91 (シングレット、4H, ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO
-d6);δ 170.4, 161.9, 141.7, 136.0, 129.7, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 9
6.5, 25.5。 Ｃ．８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−３−オキソオクタン酸
メチルの合成 ６−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］安息香酸（２５．０ｇ、９
４．０mmol）と２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（１３
．６ｇ、９４．０mmol）を無水ジクロロメタン（５００ml）に溶解した。トリエ
チルアミン（３５ml、２５５mmol）を加え、反応混合物を乾燥窒素下で室温で攪
拌した。ジエチルシアノホスホネート（１５．４ml、９４．０mmol）を加えると
、溶液は急速に黄色になる。一晩攪拌後、溶液を注意深く１Ｍ塩酸（２００ml、
２回）、水（２００ml、３回）、および塩化ナトリウム飽和水溶液（２００ml、
１回）で洗浄した。溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ロータリー
エバポレーターで濃縮して、粘性の橙色のシロップを得た。この物質を無水メタ
ノール（５００ml）に溶解し、乾燥窒素下で４時間還流した。溶液を冷却し、ロ
ータリーエバポレーターで溶媒を除去した。残渣を酢酸エチル：ヘキサン（１：
１、v/v、５０ml）に溶解し、１０mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters Pr
epLC 2000システム）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラ
ムで精製した。流速は５０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した：５０
：５０（v/v）酢酸エチル：ヘキサンで２２分、次に１００％酢酸エチルで１８
分、次に１００％メタノールで２０分。溶出液を、２７０nmの吸収でモニターし
た；生成物は最初の大きなピークに溶出する。生成物の画分をプールし、ロータ
リーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な淡黄色のシロップを得て、これは４
℃に保存すると固化して、２７．７ｇ（収率９２％）の生成物を与える。生成物
の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００８０】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.33 (マルチプレット、5H, ArH), 7.23 (ト
リプレット、 1Ｈ, NH), 5.00 (シングレット、2H, ArＣＨ2O), 3.60 (シングレ
ット、3Ｈ, OＣＨ3), 3.58 (シングレット、2H, [C=O]CH2[C=O]), 2.97 (カルテ
ット、2Ｈ, NHＣＨ2ＣＨ2), 2.49 (トリプレット、2H, ＣＨ2ＣＨ2[C=O]), 1.40
(マルチプレット、4H, NHＣＨ2ＣＨ2およびCＨ2ＣＨ2[C=O]), 1.20 (マルチプ
レット、2H, ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2). 13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ203.6, 168.0,
156.3, 137.5, 128.4, 127.8, 65.2, 51.7, 48.5, 42.1, 40.1, 29.2, 25.6, 2
2.5。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．
１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配
、１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター
）：保持時間＝１３．０±０．１分。 Ｃ．８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−１，３−オクタンジオ
ールの合成 ８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−３−オキソオクタン酸メ
チル（２６．０ｇ、８０．９mmol）を無水テトラヒドロフラン（１２５ml）に溶
解した。この溶液を、乾燥窒素下で無水テトラヒドロフラン（２５０ml）中の水
素化ホウ素リチウム（６．１ｇ、２７９．８mmol）の冷却（氷浴）溶液にゆっく
り滴下して加えた。添加が完了後、反応混合物を室温まで暖め、一晩攪拌した。
次に混合物を氷浴で冷却し、１Ｍの塩酸（３００ml）を静かに滴下して加えた。
添加が完了後そして発泡が停止後、混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し
て、ほとんどのテトラヒドロフランを除去した。残渣（水＋生成物）にクロロホ
ルム（２５０ml）を加え、混合物をよく振盪し、層を分離した。水層を追加のク
ロロホルム（２５０ml）で抽出した。クロロホルム抽出物を塩化ナトリウム飽和
水溶液（１００ml、１回）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。
ろ液を蒸発乾固して、粘性の清澄な無色のシロップを得た。このシロップをメタ
ノール（１００ml、５回）で同時蒸発させ、残渣をエチルエーテルとヘキサンか
ら−２０℃で一晩結晶化した。白色の固体をろ過し、真空下で乾燥して２３．５
ｇ（収率９８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲな
らびにＨＰＬＣで確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.33 (マルチプレ
ット、5H, ArH), 7.22 (トリプレット、1Ｈ, NH), 5.00 (シングレット、2H, Ar
ＣＨ2O), 4.33 (トリプレット、1Ｈ, ＣＨ2OH), 4.29 (ダブレット、1Ｈ, ＣHOH
), 3.50 (マルチプレット、3H, CH[OH]ＣＨ2ＣＨ2OH), 2.98 (トリプレットのダ
ブレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 1.52-1.23 (マルチプレット、10H, NHＣＨ2ＣＨ 2 ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2ＣＨ2OH). 13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ156.4,
137.6, 128.5, 127.9, 67.4, 65.2, 58.4, 40.4, 40.2, 37.5, 29.5, 26.4, 25
.0。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．
１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配
、１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター
）：保持時間＝１１．０±０．１分。 Ｄ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−（ベンジルオキシカ
ルボニル）アミノ−１，３−オクタンジオールの合成 メチル８−［Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］−１，３−オクタン
ジオール（８．３ｇ、２８．０mmol）を無水ピリジン（５０ml、１回）で同時蒸
発させた。得られたシロップを無水ピリジン（５０ml）に溶解し、塩化４，４’
−ジメトキシトリチル（１０．０ｇ、２９．５mmol）を加えた。橙色の溶液を水
分の無いところで室温で一晩攪拌した。次にメタノール（１０ml）を加え、溶液
を室温でさらに１時間攪拌した。ｔ−ブチルメチルエーテル（２００ml）を加え
、混合物をよく攪拌し、懸濁液を−２０℃で２時間放置した。混合物をろ過し、
固体をｔ−ブチルメチルエーテル（１００ml）で洗浄し、一緒にしたろ液をロー
タリーエバポレーターで濃縮して粘性の黄色のシロップを得た。シロップを酢酸
エチル（２０ml）とヘキサン（２０ml）＋トリエチルアミン（１ml）に溶解し、
この溶液の５mlのアリコートを、分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム
）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製した。流
速は５０ml/分の３９：６０：１（v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルア
ミンであった。溶出液を、２８０nmの吸収でモニターした。生成物の画分をプー
ルし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な淡黄色のシロップを得
た。このシロップを真空下で水酸化カリウムペレット上で乾燥して１２．９ｇ（
収率７７％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならび
にＨＰＬＣで確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, アセトニトリル-d3):δ7.45-7.27 (
マルチプレット、14H, ArH [DMT, Cbz]), 7.22 (トリプレット、1Ｈ, NH), 6.86
(ダブレット、4H, ArH [DMT]), 5.62 (ブロードシングレット、1Ｈ, ＣHOH), 5
.04 (シングレット、2H, ArＣＨ2O), 3.75 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.
63 (ダブレット、1Ｈ, ＣHOH), 3.20-3.00 (マルチプレット、4H, NHＣＨ2ＣＨ2 およびＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.72-1.23 (マルチプレット、10H, NHＣＨ2ＣＨ2ＣＨ 2 -ＣＨ2ＣＨ2CH[OH]-ＣＨ2ＣＨ2O-DMT)。13Ｃ NMR (75 MHz, クロロホルム-d):
δ 158.9, 156.8, 145.1, 137.0, 136.3, 130.3, 128.8, 128.3, 128.2, 127.1,
113.5, 87.0, 71.5, 66.7, 62.7, 55.4, 41.2, 37.4, 36.9, 30.1, 26.8, 25.3
。 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１７．２±０．１分。 Ｅ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−アミノ−１，３−オクタ
ンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−（ベンジルオキシカル
ボニル）アミノ−１，３−オクタンジオール（１２．９ｇ、２１．６mmol）をメ
タノール（２５０ml）に溶解した。この溶液を１リットルのParr水素化容器に入
れ、容器に窒素を５分間パージした。酢酸エチル（２０ml）でスラリーにしたパ
ラジウム担持活性炭触媒（１．０ｇ、１０％Ｐｄ／Ｃ）を加え、溶液をParrシェ
ーカーに固定した。容器を再度窒素でパージし、排気して、３５psiの圧力で水
素を導入した。容器を室温で６時間攪拌し、次に真空にし、窒素を充填し、シェ
ーカーから取り出した。内容物を０．５μｍのガラスファイバーでろ過し、ろ液
をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロップを得た。シ
ロップをさらに水酸化カリウムで真空下で乾燥して、１０．１ｇ（収率１００％
）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣ
で確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ7.38-7.16 (マルチプレット、9H,
ArH), 6.86 (ダブレット、4H, ArH), 3.71 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.
63 (マルチプレット、4H, CHOHとＣＨ2ＮＨ2), 3.04 (トリプレット、2H, ＮＨ2 ＣＨ2ＣＨ2), 2.53 (トリプレット、2H, ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.61-1.17 (マルチ
プレット、10H, ＮＨ2ＣＨ2ＣＨ2-ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2ＣＨ2O-DMT)。13 Ｃ NMR (75 MHz, クロロホルム-d6):δ 158.2, 145.6, 136.4, 128.9, 129.1, 1
27.9, 126.7, 113.2, 85.4, 67.3, 60.7, 55.0, 41.1, 37.5, 32.3, 26.5, 25.1
。 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１２．７±０．１分。 Ｆ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル］アミノ−１，３−オク
タンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−アミノ−１，３−オクタン
ジオール（１０．０ｇ、２１．６mmol）を無水テトラヒドロフラン（１００ml）
に溶解し、４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸
Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステル（１２．８ｇ、２１．６mmol）を加えた。
清澄な溶液を、室温で乾燥窒素下で一晩攪拌した。次に反応混合物をロータリー
エバポレーターで濃縮して粘性のシロップとした。残渣を、トリエチルアミン（
１０ml）を含有する酢酸エチル（１００ml）に溶解し、溶液を４℃で数時間冷却
した。冷混合物をろ過して、一部の沈殿固体を除去し、ろ液をロータリーエバポ
レーターで濃縮して粘性のシロップとした。残渣を酢酸エチル（２５ml）とトリ
エチルアミン（１ml）を含有するヘキサン（２５ml）に溶解し、この溶液の５ml
のアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム）によりPorasil
シリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５０ml/分の
３９：６０：１（v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミンであった。
溶出液を、２８０nmの吸収でモニターした。生成物の画分をプールし、ロータリ
ーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な淡褐色のシロップをを得た。このシロ
ップをさらに、水酸化カリウムペレットで真空下で乾燥して１４．９ｇ（収率７
３％）の淡い茶色のガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ
ＮＭＲならびに勾配および定組成ＨＰＬＣで確認した。1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO
-d6):δ8.61 (トリプレット、1Ｈ, NH), 8.14 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 8
.00 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.39-7.09 (マルチプレット、30H, ArH [DM
T, ベンゾピナコール]), 6.86 (ダブレット、4H, ArH [DMT]), 4.27 (ダブレッ
ト、1Ｈ, ＣHOH), 3.70 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.57 (ブロードシン
グレット、1Ｈ, ＣHOH), 3.29 (トリプレットのダブレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2)
, 3.07 (トリプレット、2H, ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.70-1.23 (マルチプレット、1
0H, NHＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH-[OH]ＣＨ2ＣＨ2O-DMT)。13Ｃ NMR (75 MHz
, DMSO-d6):δ 166.0, 158.1, 145.4, 141.9, 138.4, 136.3, 135.1, 129.7, 12
8.1, 127.8, 127.5, 127.2, 127.0, 126.5, 113.1, 96.1, 85.3, 67.2, 60.5, 5
5.9, 38.1, 37.4, 29.1, 26.6, 24.9。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ
４カラム、流速１．０ml/分、０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．
５）中のアセトニトリルの線形勾配、１５分で０〜１００％アセトニトリル、２
６０nmの吸光度を検出器でモニター）：保持時間＝１９．４±０．１分。ＨＰＬ
Ｃ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％ ０．１Ｍ
酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを使用する
定組成溶離）：保持時間＝６．２±０．１分。 Ｇ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル］−アミノ−１，３−
オクタンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノホスホラミダイトの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−［（４−ジヒドロキシ
ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル］−アミノ−１，３−オク
タンジオール（３．５ｇ、３．７mmol）を、無水ジクロロメタン（５０ml、塩基
性アルミナでろ過した）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２
．６ml、１４．９mmol）を加え、溶液を乾燥窒素下で室温で攪拌した。２−シア
ノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノクロロホスフィン（１．２ml、５．
４mmol）を滴下して加え、溶液を１時間攪拌した。次に反応混合物をロータリー
エバポレーターで約２０mlに濃縮し、酢酸エチル（１５０ml、１００mlの重炭酸
ナトリウム飽和水溶液であらかじめ洗浄した）を加えた。有機溶媒を重炭酸ナト
リウム水溶液で洗浄（５０ml、１回）し、次に塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄
（５０ml、１回）し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液をロータ
リーエバポレーターで蒸発乾固して、淡黄色のシロップを得た。この物質を、酢
酸エチル（２５ml）とトリエチルアミン（１ml）を含有するヘキサン（２５ml）
に溶解した。この溶液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣによりPorasilシリ
カ（４０mm×１００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５０ml/分の１９
：８０：１（v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミンであった。溶出
液を、２７０nmの吸収でモニターした：生成物は大きなピーク中であった。生成
物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色の
ガラス様泡状物を得て、これをさらに無水炭酸カリウムで真空下で乾燥して２．
７ｇ（収率７８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1ＨとＨＰＬＣで確認し
た。1Ｈ NMR (300 MHz, アセトニトリル−ｄ3）:δ 8.14 (ダブレット、2H, ArH
[PBA]), 7.89 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.43-7.08 (マルチプレット、31
Ｈ, ArH [DMT, ベンゾピナコール] およびNH), 6.86-6.82（２つのダブレット、
4H, ArH [DMT]), 3.95 (マルチプレット、1Ｈ, ＣHO-P), 3.74-3.734 (２つのシ
ングレット、6H, Ar-OＣＨ3）、3.50 (マルチプレット、4H, OＣＨ2ＣＨ2CNとNC
H(ＣＨ3)2）、3.34 (マルチプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 3.12 (マルチプレッ
ト、2H, ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 2.58-2.46 (トリプレットのダブレット、2H, OＣＨ 2 ＣＨ2CN), 1.80-1.30 (マルチプレット、10H, NHＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2CH
[OH]ＣＨ2ＣＨ2O-DMT), 1.12-1.01 (ダブレットの２つのダブレット、12H, NCH(
ＣＨ3)2)。1Ｈ ＮＭＲスペクトルは、部分的に分離したジアステレオ異性体の
存在のために複雑であったことに注意されたい。ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１０
０mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％ ０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニ
ウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを使用する定組成溶離）：保持時間
＝１１．７と１２．８±０．１分（ジアステレオ異性体）。 実施例２ 本例は、１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−［（４−ジヒ
ドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニ
ル）］アミノ−１，２−プロパンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホラミダイトの調製を例示する。
【００８１】
【化２１】
【００８２】 Ａ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸の合成 図４と５に関して、４−カルボキシフェニルボロン酸（１０．０ｇ、６０．２
mmol）を熱無水１，４−ジオキサン（１５０ml）に溶解し、少量の活性炭で処理
し、まだ熱いうちに０．５μｍガラスフィルターでろ過した。ろ液を加熱還流し
、ベンゾピナコール（２２．１ｇ、６０．３mmol）を加えた。溶液を１時間還流
し、室温まで冷却した。次に溶媒を、ロータリーエバポレーターで除去して、白
色の固体を得て、これを−２０℃でエチルエーテル／ヘキサンから一晩結晶化し
た。固体をろ過し、真空下で乾燥して２３．３ｇ（収率７８％）の生成物を得た
。生成物の純度を、1Ｈと13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００８３】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 13.23（ブロードシングレット、1Ｈ, ＣO2H)
、8.19（ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 8.13 (ダブレット、2H, ArH), 7.1
0 (マルチプレット、20H, ArH [ベンゾピナコール])。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-
d6);δ 167.4, 141.9, 135.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.3。
【００８４】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．９±０．１分。 Ｂ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸ＮＨＳ
エステルの合成 ４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸（１７．
４ｇ、３５．０mmol）を、無水テトラヒドロフラン（１００ml）中に溶解した。
Ｎ−ヒドロキシスクシニミド（４．０ｇ、３４．８mmol）を加え、次に１，３−
ジシクロヘキシルカルボジイミド（７．２ｇ、３４．６mmol）を加えた。反応物
を室温で一晩攪拌し、この間１，３−ジシクロヘキシル尿素の白色の沈殿物が生
成した。固体をろ過して除去し、少量のテトラヒドロフランで洗浄した。一緒に
したろ液を、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固してオフホワイトの固体を得
た。この固体をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、溶液をろ過し、ヘキ
サン（３００ml）を加えた。−２０℃で一晩結晶化させた。固体をろ過し、真空
下で乾燥して１８．４ｇ（収率８９％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈ
および13Ｃ ＮＭＲで確認した。
【００８５】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.31（ダブレット、ArH [安息香酸]), 8.25
(ダブレット、2H, ArH [安息香酸]), 7.15 (マルチプレット、20H, ArH [ベンゾ
ピナコール]), 2.91 (シングレット、4H, ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6)
;δ 170.4, 161.9, 141.7, 136.0, 129.7, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.5,
25.5。 Ｃ．３−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プ
ロパンジオールの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニンＮ−ヒドロキシスクシニミドエ
ステル（１６．０ｇ、５０．０mmol）を５０mlの２−プロパノールに溶解（静か
に加熱しながら）し、３−アミノ−１，２−プロパンジオール（４．６ｇ、５０
．４mmol）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。白色の沈殿物が生成した。
次にロータリーエバポレーターで溶媒を除去して、白色の固体を得て、これを水
（２００ml）に溶解した。陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８［ＯＨ-型］、５０
ｇ湿重量；バイオラッド（Bio-Rad））を加え、スラリーを１時間攪拌した。樹
脂をろ過して除去し、水（１００ml、１回）とメタノール（１００ml、２回）で
洗浄した。一緒にしたろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して白色の固
体を得た。この固体をトルエン（１００ml、１回）と同時蒸発させ、次に真空下
で充分乾燥して１４．１ｇ（収率９６％）の生成物を得た。生成物の純度を、1
Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００８６】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.85（トリプレット、1Ｈ, NH [アミノプロ
パンジオール), 7.37-7.26 (マルチプレット、5H, ArH), 7.21 (トリプレット、
1Ｈ, NH [β−アラニン]), 4.99 (シングレット、2H, ArＣＨ2O), 4.64 (ブロー
ドシングレット、2H, OH), 3.48 (ペンテット、1Ｈ, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2OH), 3.2
7 (ダブレットのダブレット, 2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2OH), 3.18 (カルテット、2H
, NHＣＨ2ＣＨ2), 3.08 (マルチプレットのダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O
H), 2.28 (トリプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6);δ
171.0, 156.3, 137.4, 128.5, 127.9, 70.5, 65.3, 63.8, 42.2, 37.2, 35.7。
【００８７】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝９．４±０．１分。 Ｄ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プロパンジオールの合成 ３−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プロ
パンジオール（５．０ｇ、１６．９mmol）を、無水ピリジン（５０ml）に溶解し
、塩化４，４’−ジメトキシトリチル（５．７ｇ、１６．９mmol）を加えた。黄
色の溶液を、乾燥窒素下で室温で一晩攪拌した。次にメタノール（１０ml）を加
え、溶液をさらに１時間攪拌した。溶媒をロータリーエバポレーターで＜４０℃
の浴温度で除去して、粘性の黄色のシロップを得た。シロップを酢酸エチル（２
００ml）と５％（w/v）炭酸ナトリウム水溶液（１００ml）とで分配した。層を
分離し、酢酸エチル層を塩化ナトリウム飽和水溶液（１５０ml、１回）で洗浄し
た。酢酸エチル溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ロータリーエバ
ポレーターで濃縮して黄色のガムを得た。ガムを、酢酸エチル：トリエチルアミ
ン（１ml）を含有するヘキサン（１：１ v/v、３０ml）で溶解し、ろ過し、この
溶液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム）によ
りPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５
０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した：７４：２５：１（v/v/v）酢酸
エチル：ヘキサン：トリエチルアミンで１０分溶出して、いくつかの小さな混入
物質を溶出しし、次に９４：５：１（v/v/v）酢酸エチル：メタノール：トリエ
チルアミンで２０分溶出して、所望の生成物を溶出した。溶出液を、２７０nmの
吸収でモニターした。生成物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸
発乾固して、清澄な淡黄色のシロップを得た。シロップを真空下で水酸化カリウ
ムペレットでさらに乾燥して、５．４ｇ（収率５４％）のパリパリのガラス様泡
状物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認
した。
【００８８】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.80 (トリプレット、1H, NH[アミノプロパ
ンジオール]), 7.41-7.18 (マルチプレット、15Ｈ, ArH [DMT, Cbz]およびNH[β
−アラニン]), 6.88 (ダブレット、4H, ArH [DMT]), 5.00 (シングレット、2H,
ArCH2O), 4.97 (ダブレット、1H, CH[OH]), 3.72 (シングレット、6H, ArOCH3),
3.68 (マルチプレット、1H, CH2CH[OH]CH2O-DMT), 3.19 (カルテット、2H, NHC
H2CH2), 3.14 (マルチプレットのダブレット、2H, CH2CH[OH]CH2O-DMT), 2.85 (
マルチプレット、2H, CH2CH[OH]CH2O-DMT), 2.24 (トリプレット、2H, NHCH2CH2 )。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 170.5, 158.1, 156.0, 145.0, 137.2, 135.9
, 129.7, 128.2, 127.8, 127.6, 127.5, 126.5, 113.1, 85.2, 68.7, 65.7, 65.
1, 54.9, 42.6, 37.1, 35.5。
【００８９】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１５．３±０．１分。 Ｅ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（β−アラニル）アミノ
−１，２−プロパンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニル−β−アラニル）アミノ−１，２−プロパンジオール（５．４ｇ、９．０
mmol）を無水メタノール（１５０ml）に溶解した。この溶液を１リットルのParr
水素化容器に入れ、容器に窒素を５分間パージした。酢酸エチル（２０ml）でス
ラリーにしたパラジウム担持活性炭触媒（１．０ｇ、１０％Ｐｄ／Ｃ）を加え、
溶液をParrシェーカーに固定した。容器を再度窒素でパージし、排気して、３５
psiの圧力で水素を導入した。容器を室温で６時間攪拌し、次に真空にし、窒素
を充填し、シェーカーから取り出した。内容物を０．５μｍのガラスファイバー
でろ過し、ろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロ
ップを得た。シロップをさらに水酸化カリウムペレットで真空下で乾燥して、４
．０ｇ（収率９６％）のパリパリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1
Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００９０】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.86 (トリプレット、1H, NH[アミノプロパ
ンジオール]), 7.40-7.18 (マルチプレット、9Ｈ, ArH), 6.87 (ダブレット、4H
, ArH), 3.72 (シングレット、6H, ArOＣＨ3), 3.68 (マルチプレット、1Ｈ, Ｃ
Ｈ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.21 (マルチプレットのダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]
ＣＨ2O-DMT), 3.10 (ブロードシングレット、3H, ＮＨ2およびOH), 2.90 (マル
チプレット、ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 2.68 (トリプレット、2H, ＮＨ2ＣＨ2Ｃ
Ｈ2), 2.24 (トリプレット、2H, ＮＨ2ＣＨ2ＣＨ2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6 ): δ 171.7, 158.1, 145.1, 136.0, 129.7, 127.8, 127.7, 126.5, 113.1, 85.
2, 68.7, 65.7, 54.9, 42.5, 38.7, 38.1。
【００９１】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１１．９±０．１分。 Ｆ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）］
アミノ−１，２−プロパンジオールの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（β−アラニル）アミノ−
１，２−プロパンジオール（４．０ｇ、８．６mmol）を無水ジクロロメタン（１
００ml）に乾燥窒素下で溶解した。４−ジヒドロキシボリル−（ベンゾピナコー
ル環状エステル）安息香酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（８．５ｇ、
１４．４mmol）を加えると、溶液は淡黄色になった。反応混合物を室温で６時間
攪拌し、次に重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１００ml、１回）次に塩化ナトリウ
ム飽和水溶液（１００ml、１回）で洗浄した。溶液を無水硫酸マグネシウムで乾
燥し、ろ過し、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去して黄色のシロップを得
た。シロップを、トリエチルアミン（１ml）を含有する酢酸エチル（２５ml）に
溶解し、この溶液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000シ
ステム）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカラムで精製し
た。流速は５０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した：９９：１（v/v/v
）酢酸エチル：トリエチルアミンで１０分溶出して、いくつかの小さい混入物質
を溶出し、次に７９：２０：１（v/v/v）酢酸エチル：メタノール：トリエチル
アミンで２０分溶出して所望の生成物を溶出した。溶出液を、２７０nmの吸収で
モニターした。生成物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固
して、清澄な淡黄色のシロップを得た。シロップを真空下で水酸化カリウムペレ
ットでさらに乾燥して、３．９ｇ（収率４８％）のパリパリのガラス様の泡状物
を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびに勾配および定組成Ｈ
ＰＬＣで確認した。
【００９２】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.64 (トリプレット、1Ｈ, NH [β−アラニ
ン］), 8.11 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.97 (ダブレット、2H, ArH [PBA]
), 7.86 (トリプレット、1Ｈ, NH[アミノプロパンジオール]), 7.41-7.08 (マル
チプレット、30H, ArH [DMT, ベンゾピナコール]), 6.86 (ダブレット、4H, ArH
[DMT]), 4.97 (ダブレット、1Ｈ, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.72 (シングレッ
ト、6H, ArOＣＨ3), 3.70 (マルチプレット、1Ｈ, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.
46 (カルテット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 3.16 (マルチプレットのダブレット、2H,
ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 2.89 (マルチプレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT
), 2.38 (トリプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2)。13Ｃ NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ
170.8, 166.2, 158.3, 145.2, 142.0, 138.3, 136.1, 135.1, 129.9, 128.2, 12
8.0, 127.8, 127.5, 127.3, 127.1, 126.7, 113.3, 96.3, 85.4, 68.9, 65.9, 5
5.1, 42.9, 36.3, 35.3。
【００９３】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１８．７±０．１分。
【００９４】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝２．５±０．１分。 Ｇ．１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−［（４−ジヒドロキ
シボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）］
アミノ−１，２−プロパンジオール２−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジ
イソプロピルアミノホスホラミダイトの合成 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−［（４−ジヒドロキシ
ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）］ア
ミノ−１，２−プロパンジオール（３．９ｇ、４．１mmol）を、無水ジクロロメ
タン（１００ml、塩基性アルミナでろ過した）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロ
ピルエチルアミン（３．６ml、２０．７mmol）を加え、溶液を乾燥窒素下で室温
で攪拌した。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィ
ン（１．１ml、５．０mmol）を滴下して加え、溶液を１時間攪拌した。次に反応
混合物をジクロロメタン（１００ml）で希釈し、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（
５０ml、１回）、次に塩化ナトリウム飽和水溶液（５０ml、１回）で洗浄し、無
水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液をロータリーエバポレーターで蒸
発乾固して、淡黄色のガラス様泡状物を得た。この物質を酢酸エチル（１５ml）
とトリエチルアミン（１ml）を含有するヘキサン（１０ml）に溶解した。この溶
液の５mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepLC 2000システム）により
Porasilシリカ（４０mm×１００mm；Waters）のカラムで精製した。流速は５０m
l/分とした。以下のステップ勾配を使用した：５０：４９：１（v/v/v）酢酸エ
チル：ヘキサン：トリエチルアミンで１０分溶出して、次に９９：１ 酢酸エチ
ル：トリエチルアミンで５分溶出し、次に４９：５０：１の酢酸エチル：メタノ
ール：トリエチルアミンで５分溶出した。溶出液を、２７０nmの吸収でモニター
した；生成物は９９：１（v/v）酢酸エチル：トリエチルアミンで溶出する。生
成物の画分をプールし、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色
のシロップを得た。シロップを真空下で水酸化カリウムペレットでさらに乾燥し
て、３．６ｇ（収率７６％）のパリパリのガラス様の泡状物を得た。生成物の純
度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣで確認した。
【００９５】 1Ｈ NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.65 (トリプレットのダブレット、1Ｈ, NH
[β−アラニン］), 8.15 (ダブレット、2H, ArH [PBA]), 7.99 (ダブレット、2H
, ArH [PBA]), 7.84 (トリプレットのダブレット、1Ｈ, NH[アミノプロパンジオ
ール]), 7.43-7.10 (マルチプレット、30H, ArH [DMT, ベンゾピナコール]), 6.
87 (ダブレットのダブレット、4H, ArH [DMT]), 4.06 (マルチプレット、1Ｈ,
ＣH), 3.71 (シングレット、6H, Ar-OＣＨ3), 3.80-3.35 (マルチプレット、8H,
OＣＨ2ＣＨ2CＮ, NCH(ＣＨ3)2, CHＣＨ2OおよびNHＣＨ2ＣＨ2), 3.18 (マルチ
プレットのダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 3.03 (マルチプレットの
ダブレット、2H, ＣＨ2CH[OH]ＣＨ2O-DMT), 2.69 (トリプレットのダブレット、
2H, ＯＣＨ2ＣＨ2CN), 2.40 (マルチプレット、2H, NHＣＨ2ＣＨ2), 1.02 (ダブ
レットのダブレット、12H, NCH(ＣＨ3)2)。1Ｈ ＮＭＲスペクトルは、部分的に
分離したジアステレオ異性体の存在のために複雑であったことに注意されたい。 31 P NMR (121 MHz, DMSO-d6):δ 149.1, 148.4 (ジアステレオ異性体)。
【００９６】 ＨＰＬＣ（逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝４．１と４．８±０．１分（ジアステレオ異
性体）。 実施例３ 本例は、１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [（４−ジヒ
ドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニ
ル）］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノホスホラミダイトの合成を例示する。
【００９７】
【化２２】
【００９８】 Ａ．４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸の合成 図６と７を参照して、４−カルボキシフェニルボロン酸（１０．０ｇ、６０．
２mmol）を熱無水１，４−ジオキサン（１５０ml）に溶解し、少量の活性炭で処
理して、熱いうちに０．５μmガラスファイバーフィルターでろ過した。ろ液を
加熱還流して、ベンゾピナコール（２２．１ｇ、６０．３mmol）を加えた。この
溶液を１時間還流し、次に室温まで冷却した。次に溶媒をロータリーエバポレー
ターで除去して白色の固体を得て、これをエチルエーテル／ヘキサンから−２０
℃で一晩結晶化した。固体をろ過して、真空下で乾燥して、２３．３ｇ（収率７
８％）の生成物を得た。この生成物の純度を、1Ｈ ＮＭＲおよびＨＰＬＣによ
り確認した。
【００９９】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 13.23 (ブロードシングレット, 1H, CO2H), 8
.19 (ダブレット, 2H, ArH [安息香酸]), 8.13 (ダブレット, 2H, ArH), 7.10 (
マルチプレット, 2OH, ArH [ベンゾピナコール])。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):
δ 167.4, 141.9, 135.4, 129.2, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.3。
【０１００】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．９±０．１分。 Ｂ．４−ジヒドロキシボリル (ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸ＮＨＳ
エステルの合成 ４−ジヒドロキシボリル (ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸 (１７．
４ｇ、３５．０mmol）を無水テトラヒドロフラン (１００ml）に溶解した。Ｎ−
ヒドロキシスクシニミド (４．０ｇ、３４．８mmol）を加え、続いて１，３−ジ
シクロヘキシルカルボジイミド (７．２ｇ、３４．６mmol）を加えた。反応物を
一晩室温で撹拌すると、１，３−ジシクロヘキシル尿素の白色の沈殿物が生成し
た。この固体をろ過して除去し、少量のテトラヒドロフランで洗浄した。一緒に
したろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、オフホワイト色の固体を
得た。固体をテトラヒドロフラン (１００ml）に溶解し、この溶液をろ過し、ヘ
キサン (３００ml）を加えた。−２０℃で一晩結晶化させた。固体をろ過して、
真空下で乾燥して、１８．４ｇ (収率８９％）の生成物を得た。生成物の純度を
、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲにより確認した。
【０１０１】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.31 (ダブレット, 2H, ArH [安息香酸]), 8.
25 (ダブレット, 2H, ArH [安息香酸]), 7.15 (マルチプレット, 2OH, ArH [ベ
ンゾピナコール]), 2.91 (シングレット, 4H, CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6 ):δ 170.4, 161.9, 141.7, 136.0, 129.7, 128.2, 127.6, 127.4, 126.2, 96.5
, 25.5。 Ｃ．ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニルセリンメチルエステルの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニンＮ−ヒドロキシスクシニミドエ
ステル (１４．１ｇ、４４．０mmol；バッケム (Bachem））を１００mlの無水Ｎ
，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解して、セリンメチルエステル塩酸塩 (５．２
ｇ、４３．６mmol）を加えた。混合物を室温で撹拌し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル
エチルアミン (１０ml、５７．４mmol）を加えた。反応物を一晩撹拌した。次に
溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、清澄な無色のシロップを得た。こ
の物質を酢酸エチル (２５０ml）と水 (２５０ml）とに分配した。層を分離し、
酢酸エチル層を、順に重硫酸カリウム半飽和水溶液 (２００ml、１回）、重炭酸
ナトリウム飽和水溶液 (２００ml、２回）および塩化ナトリウム飽和水溶液 (２
００ml、１回）で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、
ろ過し、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去して、清澄な無色のシロップを
得た。このシロップを真空で十分に乾燥して、１０．４ｇ (収率７４％）の無定
形の白色の固体を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰ
ＬＣにより確認した。
【０１０２】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.21 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.33
(マルチプレット, 5H, ArH), 7.18 (トリプレット, 1H, NH [β−アラニン]), 5
.00 (トリプレット, 1H, OH), 4.99 (シングレット, 2H, Ar-CH2O), 4.32 (マル
チプレット, 1H, CH), 3.62 (マルチプレット, 2H, CH2OH), 3.60 (シングレッ
ト, 3H, CH3), 3.18 (カルテット, 2H, NHCH2CH2), 2.33 (トリプレット, 2H, N
HCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 171.0, 170.5, 155.9, 137.2, 128.2
, 127.6, 127.5, 65.1, 61.1, 54.5, 51.5, 36.9, 35.2。
【０１０３】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝９．９±０．１分。 Ｄ．３−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ル−β−アラニルセリンメチルエステルの合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−アラニルセリンメチルエステル (１０．
０ｇ、３０．８mmol）を無水ピリジン (１００ml）に溶解して、塩化４，４’−
ジメトキシトリチル (１１．０ｇ、３２．５mmol）を加えた。この黄色の溶液を
乾燥窒素下で室温で一晩撹拌した。次にメタノール (１０ml）を加えて、この溶
液をさらに１時間撹拌した。溶媒を＜４０℃の浴温でロータリーエバポレーター
で除去して、粘性の黄色のシロップを得た。このシロップを酢酸エチル (３００
ml）と重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (１５０ml）とに分配した。層を分離して、
酢酸エチル層を順に重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (１５０ml、１回）および塩化
ナトリウム飽和水溶液 (１５０ml、１回）で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して、ロータリーエバポレーターで濃縮して、黄
色のシロップを得た。このシロップを酢酸エチル (１００ml）に溶解して室温で
撹拌した。ヘキサン (２００ml）をゆっくり滴下して加えると、ほぼ白色の固体
が沈殿した。固体を−２０℃で一晩回収し、ろ過し、酢酸エチルとヘキサンとの
混合物 (１：１、v/v） (１００ml）で洗浄し、真空下で乾燥して、１７．０ｇ
(収率８８％）の生成物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならび
にＨＰＬＣにより確認した。
【０１０４】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.51 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.39-
7.21 (マルチプレット, 15H, ArH [DMT, Cbz]およびNH [β−アラニン]), 6.90
(ダブレット, 4H, ArH [DMT]), 5.02 (シングレット, 2H, Ar-CH2O), 4.60 (マ
ルチプレット, 1H, CH), 3.73 (シングレット, 6H, Ar-OCH3), 3.64 (シングレ
ット, 3H, CO2CH3), 3.23 (マルチプレット, 4H, NHCH2CH2およびCHCH2O), 2.43
(トリプレット, 2H, NHCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 171.0, 170.7
, 158.4, 156.2, 144.8, 137.3, 135.5, 135.4, 129.9, 128.5, 127.9, 127.8,
126.9, 113.2, 85.5, 65.3, 63.0, 55.0, 52.3, 51.9, 37.0, 35.2。
【０１０５】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１５．９±０．１分。 Ｅ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ル−β−アラニルセリノールの合成 ３−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
−β−アラニルセリンメチルエステル (１０．０ｇ、１６．０mmol）を無水テト
ラヒドロフラン (１００ml）に溶解した。この溶液を乾燥窒素下で、無水テトラ
ヒドロフラン (１００ml）中の水素化ホウ素リチウム (１．０ｇ、４５．９mmol
）の撹拌溶液に滴下して加えた。この清澄な無色の溶液を室温で乾燥窒素下で６
時間撹拌した。次に水 (５０ml）を加えて、混合物をさらに４時間撹拌した。テ
トラヒドロフラン (２００ml）を加えると、白色の固体が沈殿した。混合物をろ
過し、固体を少量のテトラヒドロフランで洗浄して、ろ液をロータリーエバポレ
ーターで約５０mlに濃縮した。酢酸エチル (２５０ml）を加えて、層を分離した
。酢酸エチル溶液を、順に重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (１００ml、１回）およ
び塩化ナトリウム飽和水溶液 (１００ml、１回）で洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥して、ろ過した。ろ液からロータリーエバポレーターで溶媒を留去して
、清澄なシロップを得て、これをさらに真空で水酸化カリウムペレットで乾燥し
て、９．３ｇ (収率９７％）のパリパリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度
を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣにより確認した。
【０１０６】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.80 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.40-
7.19 (マルチプレット, 15H, ArH [DMT, Cbz]およびNH [β−アラニン]), 6.88
(ダブレット, 4H, ArH [DMT]), 5.00 (シングレット, 2H, Ar-CH2O), 4.63 (ト
リプレット, 1H, CH2OH), 4.01 (マルチプレット, 1H, CH), 3.72 (シングレッ
ト, 6H, Ar-OCH3), 3.45 (トリプレット, 2H, CHCH2OH), 3.20 (カルテット, 2H
, NHCH2CH2), 2.98 (マルチプレットのダブレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.32 (ト
リプレット, 2H, NHCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 170.2, 158.2, 15
6.2, 145.3, 137.3, 136.0, 129.9, 129.1, 128.5, 127.9, 127.6, 126.7, 113.
2, 85.2, 65.2, 62.6, 60.8, 55.0, 50.9, 37.2, 35.8。
【０１０７】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１４．８±０．１分。 Ｆ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−β−アラニルセリノールの合
成 １−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
−β−アラニルセリノール (９．３ｇ、１５．５mmol）を無水メタノール (２０
０ml）に溶解した。この溶液を１リットルのParr水素化容器に入れて、この溶液
を窒素で５分間パージした。酢酸エチル (２０ml）でスラリー化したパラジウム
担持活性炭触媒 (１．０ｇ、１０％ Ｐｄ／Ｃ）を加えて、この容器をParrのシ
ェーカーに装着した。容器を再度窒素でパージし、排気して、水素を３５psiの
圧力まで導入した。容器を室温で６時間振盪し、次に排気し、窒素を充填してシ
ェーカーから取りだした。内容物を０．５μmガラスファイバーフィルターでろ
過して、ろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロッ
プを得た。このシロップをさらに真空で水酸化カリウムペレットで乾燥して、７
．１ｇ (収率９３％）のパリパリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1
Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣにより確認した。
【０１０８】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7.87 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.38-
7.20 (マルチプレット, 9H, ArH), 6.88 (ダブレット, 4H, ArH), 3.97 (マルチ
プレット, 1H, CH), 3.72 (シングレット, 6H, Ar-OCH3), 3.45 (ダブレット, 2
H, CHCH2OH), 3.26 (ブロードシングレット, 3H, NH2およびOH), 2.95 (マルチ
プレットのダブレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.73 (トリプレットのダブレット, 2
H, NH2CH2CH2), 2.19 (トリプレット, 2H, NHCH2CH2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-
d6):δ 171.3, 158.3, 145.4, 136.1, 130.0, 128.0, 127.9, 126.7, 113.3, 85
.3, 62.7, 60.9, 55.0, 51.0, 37.8, 37.7。
【０１０９】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１１．０±０．１分。 Ｇ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [ (４−ジヒドロキ
シボリル− (ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）
］セリノールの合成 １−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−β−アラニルセリノール (７．
１ｇ、１４．４mmol）を無水テトラヒドロフラン (１００ml）に乾燥窒素下で溶
解した。トリエチルアミン (２．０ml、１４．４mmol）を加え、続いて４−ジヒ
ドロキシボリル (ベンゾピナコール環状エステル）安息香酸Ｎ−ヒドロキシ−ス
クシンイミドエステル (８．５ｇ、１４．４mmol）を加えた。反応混合物を室温
で２４時間撹拌し、ろ過して、ろ液をロータリーエバポレーターで粘性のシロッ
プ状になるまで濃縮した。このシロップを酢酸エチル (２５０ml）に溶解して、
溶液を、順に重炭酸ナトリウム飽和水溶液 (２００ml、２回）、次いで塩化ナト
リウム飽和水溶液 (２００ml、１回）で洗浄した。溶液を無水硫酸マグネシウム
で乾燥し、ろ過して、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去して、黄色のシロ
ップを得た。シロップを、トリエチルアミン (１ml）を含有する酢酸エチル (６
０ml）に溶解して、この溶液の１０mlのアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters P
repLC 2000システム）によりPorasilシリカ（４７mm×３００mm；Waters）のカ
ラムにより精製した。流速は５０ml/分とした。以下のステップ勾配を使用した
：６６：３３：１ (v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミンで１０分
間いくつかの少数混入物質を溶出し、次に９８：１：１ (v/v/v）酢酸エチル：
メタノール：トリエチルアミンで２０分間所望の生成物を溶出した。溶出液は、
２７０nmの吸光度によりモニターした。生成物画分をプールして、ロータリーエ
バポレーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロップを得た。このシロップをさ
らに真空で水酸化カリウムペレットで乾燥して、７．１ｇ (収率９３％）のパリ
パリのガラス様泡状物を得た。生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲにより
、さらには勾配および定組成ＨＰＬＣで確認した。
【０１１０】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.64 (トリプレット, 1H, NH [β−アラニン]
), 8.09 (ダブレット, 2H, ArH [PBA]), 7.95 (ダブレット, 2H, ArH [PBA]), 7
.83 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.38-7.09 (マルチプレット, 3OH, Ar [D
MT, ベンゾピナコール]), 6.85 (ダブレット, 4H, ArH [DMT]), 4.68 (トリプレ
ット, 1H, CHCH2OH), 4.05 (マルチプレット, 1H, CH), 3.70 (シングレット, 6
H, Ar-OCH3), 3.49 (ダブレット, 4H, CHCH2OHおよびNHCH2CH2), 2.98 (マルチ
プレットのダブレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.46 (トリプレット, 2H, NHCH2CH2)
。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 166.3, 158.2, 145.3, 142.0, 141.9, 138.1,
136.0, 135.2, 129.9, 128.2, 127.9, 127.6, 127.4, 127.1, 126.7, 113.2, 9
6.3, 85.2, 62.6, 60.9, 55.1, 50.9, 36.3, 35.4。
【０１１１】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、０．１
Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）中のアセトニトリルの線形勾配、
１５分で０〜１００％アセトニトリル、２６０nmの吸光度を検出器でモニター）
：保持時間＝１８．６±０．１分。
【０１１２】 ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝２．４±０．１分。 Ｈ．１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [ (４−ジヒドロキ
シボリル− (ベンゾピナコール環状エステル）−ベンゾイル）−β−アラニル）
］セリノール３−Ｏ− (２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホ
スホラミダイトの合成 １−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ− [ (４−ジヒドロキシ
ボリル (ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β−アラニル）］セリ
ノール (７．２ｇ、７．６mmol）を無水ジクロロメタン (２５０ml、塩基性アル
ミナでろ過）に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン (５．５ml、３
１．６mmol）を加えて、溶液を乾燥窒素下で室温で撹拌した。２−シアノエチル
−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノクロロホスフィン (２．５ml、１０．５mmol
）を滴下して加え、溶液を１時間撹拌した。次に反応混合物をロータリーエバポ
レーターで約５０mlまで濃縮し、酢酸エチル (３００ml、１００mlの重炭酸ナト
リウム飽和水溶液で前もって洗浄した）を加えた。この有機溶液を重炭酸ナトリ
ウム飽和水溶液 (１００ml、１回）および次に塩化ナトリウム飽和水溶液 (１０
０ml、１回）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液をロー
タリーエバポレーターで蒸発乾固して、淡黄色のガラス様泡状物を得た。この物
質を酢酸エチル (２５ml）およびトリエチルアミン (１ml）を含むヘキサン (１
５ml）に溶解した。この溶液の５mlアリコートを分取用ＨＰＬＣ（Waters PrepL
C 2000システム）によりPorasilシリカ（４０mm×１００mm；Waters）のカラム
により精製した。流速は５０ml/分とした。以下の多相線形勾配を使用した：５
０：４９：１ (v/v/v）〜７９：２０：１ (v/v/v）酢酸エチル：ヘキサン：トリ
エチルアミンで１０分間、９９：１ (v/v）酢酸エチル：トリエチルアミンで５
分間、７９：２０：１酢酸エチル：メタノール：トリエチルアミンで２分間、そ
してこの組成で３分間保持。溶出液は、２６０nmの吸光度でモニターした；生成
物は最初の大きなピークで溶出した。生成物画分をプールし、ロータリーエバポ
レーターで蒸発乾固して、清澄な無色のシロップを得た。このシロップを酢酸エ
チル (３０ml）＋トリエチルアミン (２ml）に溶解して、この溶液を、急速撹拌
氷冷ヘキサン (３００ml）に滴下して加えることによって、白色の沈殿物が生成
した。沈殿物を−２０℃で一晩回収し、ろ過し、冷ヘキサンで十分に洗浄し、真
空下で無水炭酸カリウムで乾燥して、７．９ｇ (収率９１％）の生成物を得た。
生成物の純度を、1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲならびにＨＰＬＣにより確認した。
【０１１３】 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.64 (トリプレットのダブレット, 1H, NH [
β−アラニン]), 8.11 (ダブレット, 2H, ArH [PBA]), 7.97 (ダブレット, 2H,
ArH [PBA]), 7.95 (ダブレット, 1H, NH [セリン]), 7.38-7.09 (マルチプレッ
ト, 3OH, Ar [DMT, ベンゾピナコール]), 6.85 (ダブレット, 4H, ArH [DMT]),
4.22 (マルチプレット, 1H, CH), 3.70 (シングレット, 6H, Ar-OCH3), 3.70-3.
40 (マルチプレット, 8H, OCH2CH2CN, NCH (CH3)2, CHCH2OPおよびNHCH2CH2), 3
.02 (マルチプレット, 2H, CHCH2O-DMT), 2.68 (トリプレットのダブレット, 2H
, OCH2CH2CN), 2.48 (マルチプレット, 2H, NHCH2CH2), 1.02 (ダブレットのダ
ブレット, 12H, NCH (CH3)2)。13C NMR (75 MHz, DMSO-d6):δ 170.5, 166.2, 1
58.3, 145.2, 142.1, 142.0, 138.1, 135.9, 135.2, 129.9, 128.2, 127.9, 127
.6, 127.4, 127.1, 126.8, 119.0, 113.3, 96.3, 85.4, 62.3 (ブロード), 58.5
, 58.4, 58.3, 58.2, 42.6, 42.4, 36.3, 35.4, 31.0, 24.4, 24.3, 22.1, 19.9
, 19.8。 31P NMR (121 MHz, DMSO-d6):δ 147.4, 147.1 (ジアステレオマー異
性体). ＨＰＬＣ (逆相、４．６×１００mm Ｃ４カラム、流速１．０ml/分、７％
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ６．５）：９３％アセトニトリルを
使用する定組成溶離）：保持時間＝４．４±０．１分。 実施例４ 本例は、ボロン酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドの自動固相合成を例示
する。
【０１１４】 オリゴデオキシリボヌクレオチドＰＸ００１ (配列：5'-CGC CAG GGT TTT CCC
AGT CAC GAC-3'）を、標準的自動ホスホラミダイト化学 (モデル３９４自動Ｄ
ＮＡ合成機、パーキンエルマー／アプライドバイオシステムズ (Perkin Elmer/A
pplied Biosystems） [フォスターシティー、カリホルニア州］製、および添付
されるウルトラファスト (UltraFast）ＤＮＡ合成試薬、グレン・リサーチ (Gle
n Research） [スターリング、バージニア州］製）をトリチルＯＮ (Trityl ON
）モードで用いて１μmolスケールで合成した。完成したオリゴデオキシリボヌ
クレオチドは、支持体に保持した。適切な量の所望のフェニルボロン酸 (ＰＢＡ
）含有ホスホラミダイトを、無水アセトニトリル (１−Ｏ− (４，４’−ジメト
キシトリチル）−８−Ｎ− [４−ジヒドロキシボリル− (ベンゾピナコール環状
エステル）ベンゾイル）］アミノ−１，３−オクタンジオール３−Ｏ− (２−シ
アノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノホスホラミダイトおよび１−Ｏ
− (４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ− [ (４−ジヒドロキシボリル (
ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β−アラニル）］アミノ−１，
２−プロパンジオール３−Ｏ− (２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル
−アミノホスホラミダイト）、または７５：２５ (v/v）無水アセトニトリル：
無水テトラヒドロフラン (１−Ｏ− (４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ
− [ (４−ジヒドロキシボリル− (ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル
）−β−アラニル）］セリノール３−Ｏ− (２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイ
ソプロピルアミノホスホラミダイト）のいずれかに溶解して、０．１Ｍの最終濃
度を得た。この溶液をＤＮＡ合成機に、特別のホスホラミダイトの瓶の位置の１
つに入れた。次に１つ以上のＰＢＡ残基をオリゴデオキシリボヌクレオチドの５
’末端に、結合反応の「待ち時間」を１５分に延長した、標準的結合サイクルの
変法を用いて付加した。再び、合成は、トリチルＯＮモードで行った。オリゴデ
オキシリボヌクレオチドへのＰＢＡアミジトの付加の結合収率は、各サイクルの
回収トリチル溶液およびこれに続く分析ＨＰＬＣから＞９５％であると推定され
た。
【０１１５】 完成したトリチル化ＰＢＡ修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドは、次に製造
業者のプロトコールにしたがって、装置上の濃水酸化アンモニウムにより支持体
から切断した。ヌクレオ塩基上の保護基とボロン酸は、加熱ブロック中の水酸化
アンモニウム溶液を６０℃で１時間加熱することにより、同時に除去した。次に
この溶液を冷蔵庫で４℃に冷却して、スピードバック (SpeedVac）真空濃縮器 (
サヴァント・インスツルメンツ (Savant Instruments） [ファーミングデール (
Farmingdale）、ニューヨーク州］）で約１mlまで濃縮した。粗ＰＢＡ修飾オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドを含む溶液を４℃で貯蔵して、後に高速液体クロマ
トグラフィーにより精製できた。 実施例５ 本実施例は、ボロン酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドの精製を例示する
。
【０１１６】 粗トリチル化ボロン酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドを、合成オリゴデ
オキシリボヌクレオチドを精製するのに一般的に利用される方法の変法を用いて
、逆相ＨＰＬＣにより精製した。しかしトリチル化未修飾オリゴデオキシリボヌ
クレオチドおよび標識オリゴデオキシリボヌクレオチドを精製するために一般に
使用されるＣ１８およびＣ８相は、トリチル化ボロン酸修飾オリゴデオキシリボ
ヌクレオチドには不十分にしか機能しなかった。所望の生成物に関連するピーク
は、非常にブロードであり、テーリングがひどく、不純物からの分離が不十分で
あった。Ｃ４相がよく機能し、満足な結果を与えることが見い出された。
【０１１７】 粗トリチル化ボロン酸修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドの上記溶液のアリ
コート (１０〜１００μl）を、ヒューレット・パッカード・シリーズ (Hewlett
Packard Series）１０５０液体クロマトグラフィーに結合した４．６mm×１５
０mm Ｃ４カラム (イナートシル (Inertsil）５μm、メタケム・テクノロジー
ズ (MetaChem Technologies） [トーランス、カリホルニア州］）に注入した。
０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ６．５ (成分Ａ）中のアセトニトリ
ル (成分Ｂ）の二相性線形勾配を使用して、クロマトグラムを展開した。勾配は
以下のとおりとした：９５：５ (v/v）Ａ：Ｂ〜６５：３５ (v/v）Ａ：Ｂを２１
分間で、次に１０：９０ (v/v）Ａ：Ｂを３分間で。流速は１．０ml/分とし、２
８０nmのＵＶ検出を用いて分離を観測した。生成物のオリゴデオキシリボヌクレ
オチドは、１８〜２２分でカラムから溶出したが、ＰＢＡ残基の数が多いほど対
応して保持時間が長い。生成物を回収して、スピードバックで蒸発乾固して、油
状ペレットを得た。このペレットを１mlの８０：２０ (v/v）氷酢酸：水に溶解
して、室温で１時間放置することによりトリチル基を除去した。再び溶液をスピ
ードバックで蒸発乾固して、油状ペレットを得た。ペレットを０．５mlの水に溶
解して凍結保存した。１０μlのアリコートを、上記カラムおよび勾配を用いて
ＨＰＬＣにより分析した。この手順により得られたボロン酸修飾オリゴデオキシ
リボヌクレオチドの純度は、一般に＞９０％であった (下記図８を参照）。
【０１１８】 本明細書に言及される全ての刊行物、特許および特許出願は、参照することに
より、全ての目的のためにその全体を本明細書の一部とした。本発明は、好まし
い実施態様およびその実施例を参照して説明したが、本発明の範囲は、これらの
記述される実施態様だけに限定されるものではない。当業者には明らかであるよ
うに、添付される請求の範囲により定義および限局される本発明の精神と範囲か
ら逸脱することなく、上述の発明には修飾および変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−（β
−アラニル）アミノ−１，２−プロパンジオールを調製するための合成法を要約
する。
【図２】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３−Ｎ−
［（４−ジヒドロキシ−ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）
−β−アラニル］アミノ−１，２−プロパンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチ
ル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法
を要約する。
【図３】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−β−アラ
ニルセリノールを調製するための合成法を要約する。
【図４】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−
［（４−ジヒドロキシ−ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）
−β−アラニル］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプ
ロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法を要約する。
【図５】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−
［（３，５−ビス−ジ−ヒドロキシボリル（ピナコール環状エステル）ベンゾイ
ル）−β−アラニル］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイ
ソ−プロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法を要約する。
【図６】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−アミ
ノ−１，３−オクタン−ジオールを調製するための合成法を要約する。
【図７】 本発明の化合物である１−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−８−Ｎ−
［（４−ジヒドロキシ−ボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル］
アミノ−１，３−オクタンジオール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジ
イソ−プロピルアミノホスホラミダイトを調製するための合成法を要約する。
【図８】 ５’末端に１、２、３および４つのアリールボロン酸残基を有する、自動合成
により調製される４つのボロン酸修飾オリゴヌクレオチドの高速液体クロマトグ
ラフィー精製を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ストロウィッツ，マーク エル． アメリカ合衆国，ワシントン 98072，ウ ッディンビル，トゥーハンドレッドセブン ティーンス プレイス ノースイースト 13818 Ｆターム(参考） 4C057 GG10 4H048 AA01 AB80 AB81 VA20 VA30 VA45 VA77 4H050 AB81

Claims (36)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式： 【化１】 （式中、 Ｒ1は、アリールボロニック酸エステル残基であり； Ｙは、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは
    １〜５の整数である）よりなる群から選択されるメンバーであり； Ｚは、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキ
    レンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドよりなる群から
    選択されるメンバーであり； Ｘは、メチレン基および炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバー
    であり； Ｒ2は、水素、トリチル、モノメトキシトリチルおよびジメトキシトリチルよ
    りなる群から選択されるメンバーであり； Ｒ3は、水素および活性化リン残基よりなる群から選択されるメンバーである
    ） の化合物。
  2. 【請求項２】 Ｒ1は、フェニルボロニック酸エステル残基である、請求項
    １に記載の化合物。
  3. 【請求項３】 前記フェニルボロニック酸エステル残基は、 【化２】 （式中、 Ｒ4とＲ5は、水素、メチルおよびフェニルよりなる群から独立に選択されるメ
    ンバーであり； Ｑは、メチレン基および炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバー
    である） よりなる群から選択されるメンバーである請求項２に記載の化合物。
  4. 【請求項４】 Ｙは炭素−炭素単結合である、請求項１に記載の化合物。
  5. 【請求項５】 ＹはＯ（ＣＨ2）mであり、ｍは１である、請求項１に記載の
    化合物。
  6. 【請求項６】 ＹはＳ（ＣＨ2）mであり、ｍは１である、請求項１に記載の
    化合物。
  7. 【請求項７】 ＺはＣ1−Ｃ5アルキレンである、請求項１に記載の化合物。
  8. 【請求項８】 ＺはＣ1−Ｃ2アルキレンアミドである、請求項１に記載の化
    合物。
  9. 【請求項９】 Ｘはメチレン基である、請求項１に記載の化合物。
  10. 【請求項１０】 Ｘは炭素−炭素単結合である、請求項１に記載の化合物。
  11. 【請求項１１】 Ｒ2はジメトキシトリチルであり、 Ｒ3はホスホラミダイトである、請求項３に記載の化合物。
  12. 【請求項１２】 Ｑはメチレン基である、請求項３に記載の化合物。
  13. 【請求項１３】 ホスホラミダイトは、β−シアノエチル−Ｎ−ジイソプロ
    ピルアミノホスホラミダイトである、請求項１１に記載の化合物。
  14. 【請求項１４】 １−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２−Ｎ−［
    （４−ジヒドロキシボリル（ベンゾピナコール環状エステル）ベンゾイル）−β
    −アラニル）］セリノール３−Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロ
    ピルアミノホスホラミダイトである、請求項１３に記載の化合物。
  15. 【請求項１５】 式： 【化３】 （式中、 Ｒは、アリールボロニック酸残基であり； Ｙは、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは
    １〜５の整数である）よりなる群から選択されるメンバーであり； Ｚは、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキ
    レンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドよりなる群から
    選択されるメンバーであり； Ｘは、メチレン基および炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバー
    であり； Ｒ6は、水素およびヒドロキシルよりなる群から選択されるメンバーであり； Ｒ7は、ヒドロキシルおよびモノリン酸エステルよりなる群から選択されるメ
    ンバーであり； ｎは、約０〜約１０の整数であり； ｎ’は、約１０〜約１０００の整数であり；そして Ｎｕ’とＮｕ''は、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよび
    ヌクレオチド類似体よりなる群から独立に選択されるメンバーであり； ここで、 Ｒ、Ｙ、およびＸは、ｎのいずれか所定のモノマー値に対して同じかまたは異
    なってもよく；Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のいずれか所定のモノマー値に対して同じ
    かまたは異なってもよい） の化合物。
  16. 【請求項１６】 Ｒはフェニルボロニック酸残基である、請求項１５に記載
    の化合物。
  17. 【請求項１７】 前記フェニルボロニック酸残基は、 【化４】 よりなる群から選択されるメンバーである、請求項１６に記載の化合物。
  18. 【請求項１８】 ＺはＣ1−Ｃ5アルキレンである、請求項１５に記載の化合
    物。
  19. 【請求項１９】 ＺはＣ1−Ｃ2アルキレンアミドである、請求項１５に記載
    の化合物。
  20. 【請求項２０】 Ｘはメチレン基である、請求項１５に記載の化合物。
  21. 【請求項２１】 Ｒ6は水素である、請求項１５に記載の化合物。
  22. 【請求項２２】 Ｘは炭素−炭素単結合である、請求項１５に記載の化合物
    。
  23. 【請求項２３】 ｎ’は約１０〜８００の整数である、請求項１５に記載の
    化合物。
  24. 【請求項２４】 ｎ’は約１０〜４００の整数である、請求項２３に記載の
    化合物。
  25. 【請求項２５】 ｎ’は約１０〜１００の整数である、請求項２４に記載の
    化合物。
  26. 【請求項２６】 式： 【化５】 （式中、 Ｒは、アリールボロニック酸残基であり； Ｙは、Ｏ（ＣＨ2）m、Ｓ（ＣＨ2）m、および炭素−炭素単結合（ここで、ｍは
    １〜５の整数である）よりなる群から選択されるメンバーであり； Ｚは、１〜１６個の炭素原子を有するアルキレン、アルキレンアミド、アルキ
    レンアミドアルキレンおよびアルキレンアミドアルキレンアミドよりなる群から
    選択されるメンバーであり； Ｘは、メチレンおよび炭素−炭素単結合よりなる群から選択されるメンバーで
    あり； Ｒ6は、水素およびヒドロキシルよりなる群から選択されるメンバーであり； Ｒ7は、ヒドロキシルおよびモノリン酸エステルよりなる群から選択されるメ
    ンバーであり； ｎは、約０〜１０の整数であり； ｎ’は、約１０〜１０００の整数であり；そして Ｎｕ’とＮｕ''は、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルおよび
    ヌクレオチド類似体よりなる群から独立に選択されるメンバーであり； ここで、 Ｒ、Ｙ、ＸおよびＸは、ｎのいずれか所定のモノマー値に対して同じかまたは
    異なってもよく；Ｒ6とＮｕ’は、ｎ’のいずれか所定のモノマー値に対して同
    じかまたは異なってもよい） の化合物。
  27. 【請求項２７】 Ｒ1はフェニルボロニック酸残基である、請求項２６に記
    載の化合物。
  28. 【請求項２８】 前記フェニルボロニック酸残基は、 【化６】 よりなる群から選択されるメンバーである、請求項２７に記載の化合物。
  29. 【請求項２９】 ＺはＣ1−Ｃ5アルキレンである、請求項２６に記載の化合
    物。
  30. 【請求項３０】 ＺはＣ1−Ｃ2アルキレンアミドである、請求項２６に記載
    の化合物。
  31. 【請求項３１】 Ｘはメチレン基である、請求項２６に記載の化合物。
  32. 【請求項３２】 Ｒ6は水素である、請求項２６に記載の化合物。
  33. 【請求項３３】 Ｘは炭素−炭素単結合である、請求項２６に記載の化合物
    。
  34. 【請求項３４】 ｎ’は約１０〜８００の整数である、請求項２６に記載の
    化合物。
  35. 【請求項３５】 ｎ’は約１０〜４００の整数である、請求項３４に記載の
    化合物。
  36. 【請求項３６】 ｎ’は約１０〜１００の整数である、請求項３５に記載の
    化合物。
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