JP2002536993A5 - - Google Patents
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Description
【特許請求の範囲】
【請求項1】 オキサロ酢酸ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離された核酸配列であって:
(a)SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜341と少なくとも65%の同一性を有するアミノ酸配列をもつポリペプチドをコードする核酸配列;
(b)SEQ ID NO:1のヌクレオチド1157〜1411、1504〜1651及び1764〜2383から構成されるヌクレオチド配列と少なくとも65%の相同性を有する核酸配列;
(c)中ストリンジェンシー条件下で(i)SEQ ID NO:1の核酸配列、(ii)SEQ ID NO:1のcDNA配列、(iii)少なくとも100ヌクレオチドの(i)もしくは(ii)のサブ配列、又は(iv)(i)、(ii)もしくは(iii)の相補鎖とハイブリダイズする核酸配列;
(d)(a)、(b)又は(c)のアレル変異体;
(e)(a)、(b)、(c)又は(d)のサブ配列、ここで当該サブ配列はオキサロ酢酸ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドフラグメントをコードするものである;
から成る群から選ばれる核酸配列。
【請求項2】 SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含んで成るポリペプチドをコードする、又は
SEQ ID NO:1の核酸配列と少なくとも65%の相同性を有する、又は
SEQ ID NO:1の核酸配列を有する、又は
大腸菌株DSM12660に収容されたプラスミドpHP1の中に含まれている、
請求項1記載の核酸配列。
【請求項3】 単離された核酸配列であって、(a)DNAを中ストリンジェンシー条件下で(i)SEQ ID NO:1の核酸配列、(ii)SEQ ID NO:1のcDNA、(iii)少なくとも100ヌクレオチドの(i)もしくは(ii)のサブ配列、又は(iv)(i)、(ii)もしくは(iii)の相補鎖とハイブリダイゼーションさせ;そして(b)当該核酸配列を単離することにより生産された核酸配列。
【請求項4】 適当な発現宿主内での前記ポリペプチドの産生を指令する1又は複数のコントロール配列に作用可能式に連結された請求項1〜3のいずれか1項記載の核酸配列を含んで成る核酸構築体。
【請求項5】 請求項4記載の核酸構築体、プロモーター、並びに転写及び翻訳停止シグナルを含んで成る組換発現ベクター。
【請求項6】 請求項4記載の核酸構築体を含んで成る組換宿主細胞。
【請求項7】 オキサロ酢酸ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを生産するための方法であって、(a)請求項6記載の宿主細胞を当該ポリペプチドの産生に適した条件下で培養し、そして(b)当該ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
【請求項8】 糸状菌細胞の突然変異細胞を生産するための方法であって、請求項1〜3のいずれか1項記載の核酸又はそのコントロール配列を中断又は欠失させ、もとの細胞よりも少ない量のオキサロ酢酸ヒドロラーゼを産生する突然変異体を生み出すことを含んで成る方法。
【請求項9】 (a)親糸状菌細胞に、オキサロ酢酸デヒドロラーゼの産生を司る少なくとも一の遺伝子の修飾を含んで成る核酸配列を導入し;そして
(b)同一条件下で親細胞よりも少ない量のオキサロ酢酸デヒドロラーゼを産生する工程(a)由来の突然変異細胞を同定する;
ことを含んで成る請求項8記載の方法。
【請求項10】 請求項8又は9記載の方法により生産された突然変異細胞。
【請求項11】 アスペルギルス(Aspergillus)、例えばA.ニガー(A.niger)、アクレモニウム(Acremonium)、オーレオバシジウム(Aureobasidium)、クリプトコッカス(Cryptococcus)、フィリバシジウム(Filibasidium)、フサリウム(Fusarium)、ジッベレラ(Gibberella)、ヒュミコラ(Humicola)、マグナポルテ(Magnaporthe)、ムコール(Mucor)、ミセリオフソラ(Myceliophthora)、ミロセシウム(Myrothecium)、ネオカリマスティックス(Neocallimastix)、ニューロスポラ(Neurospora)、ペシロマイセス(Paecilomyces)、ペニシリウム(penicillium)、ピロマイセス(Piromyces)、シゾフィルム(Schizophyllum)、タラロマイセス(Talaromyces)、サーモアスカス(Thermoascus)、チエラビア(Thielavia)、トリポクラジウム(Tolypocladium)、又はトリコデルマ(Trichoderma)株の細胞である、請求項10記載の突然変異細胞。
【請求項12】 前記突然変異細胞が親細胞よりも、同一条件下で培養したときに少なくとも約25%少ない量のオキサロ酢酸ヒドロラーゼ又はシュウ酸を産生する、請求項10又は11項記載の突然変異細胞。
【請求項13】 前記突然変異細胞が1又は複数の第三の核酸配列の1又は複数の修飾を更に含んで成り、ここで当該修飾は当該1又は複数の第三の核酸配列の発現を抑制又は消失させるものである、請求項10〜12のいずれか1項記載の突然変異細胞。
【請求項14】 前記第三の核酸配列がアミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチターゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、アンノシダーゼ、ムタナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ及びキシラナーゼから成る群から選ばれる酵素をコードする、請求項13記載の突然変異細胞。
【請求項15】 前記突然変異細胞が更にプロテアーゼをコードする1又は複数の遺伝子の修飾を含んで成る、請求項10〜14のいずれか1項記載の突然変異細胞。
【請求項16】 相同産物を生産するための方法であって、(a)請求項10〜15のいずれか1項記載の突然変異細胞を当該産物の産生が誘導される条件下で培養し、そして(b)当該産物を回収することを含んで成る方法。
【請求項17】 前記相同産物がクエン酸である、請求項16記載の方法。
【請求項18】 異種ポリペプチドをコードする核酸配列を更に含んで成る、請求項10〜15のいずれか1項記載の突然変異細胞。
【請求項19】 異種ポリペプチドを生産するための方法であって、(a)請求項18記載の突然変異細胞を当該ポリペプチドの産生が誘導される条件下で培養し、そして(b)当該ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
【請求項20】 前記異種ポリペプチドがホルモン、ホルモン変異体、酵素、例えばオキシドリダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、又はリガーゼ、好ましくはアミノペプチターゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチターゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、アンノシダーゼ、ムタナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ又はキシラナーゼ、レセプター又はその一部、抗体又はその一部、又はリポーターである、請求19記載の方法。
【請求項21】 診断酵素としての請求項1〜3のいずれか1項記載の核酸配列によりコードされるオキサロ酢酸デヒドロラーゼの使用。
【請求項22】 大腸菌株DSM 12260又はDSM 12661の実質的に純粋な培養物。
【請求項1】 オキサロ酢酸ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離された核酸配列であって:
(a)SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜341と少なくとも65%の同一性を有するアミノ酸配列をもつポリペプチドをコードする核酸配列;
(b)SEQ ID NO:1のヌクレオチド1157〜1411、1504〜1651及び1764〜2383から構成されるヌクレオチド配列と少なくとも65%の相同性を有する核酸配列;
(c)中ストリンジェンシー条件下で(i)SEQ ID NO:1の核酸配列、(ii)SEQ ID NO:1のcDNA配列、(iii)少なくとも100ヌクレオチドの(i)もしくは(ii)のサブ配列、又は(iv)(i)、(ii)もしくは(iii)の相補鎖とハイブリダイズする核酸配列;
(d)(a)、(b)又は(c)のアレル変異体;
(e)(a)、(b)、(c)又は(d)のサブ配列、ここで当該サブ配列はオキサロ酢酸ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドフラグメントをコードするものである;
から成る群から選ばれる核酸配列。
【請求項2】 SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含んで成るポリペプチドをコードする、又は
SEQ ID NO:1の核酸配列と少なくとも65%の相同性を有する、又は
SEQ ID NO:1の核酸配列を有する、又は
大腸菌株DSM12660に収容されたプラスミドpHP1の中に含まれている、
請求項1記載の核酸配列。
【請求項3】 単離された核酸配列であって、(a)DNAを中ストリンジェンシー条件下で(i)SEQ ID NO:1の核酸配列、(ii)SEQ ID NO:1のcDNA、(iii)少なくとも100ヌクレオチドの(i)もしくは(ii)のサブ配列、又は(iv)(i)、(ii)もしくは(iii)の相補鎖とハイブリダイゼーションさせ;そして(b)当該核酸配列を単離することにより生産された核酸配列。
【請求項4】 適当な発現宿主内での前記ポリペプチドの産生を指令する1又は複数のコントロール配列に作用可能式に連結された請求項1〜3のいずれか1項記載の核酸配列を含んで成る核酸構築体。
【請求項5】 請求項4記載の核酸構築体、プロモーター、並びに転写及び翻訳停止シグナルを含んで成る組換発現ベクター。
【請求項6】 請求項4記載の核酸構築体を含んで成る組換宿主細胞。
【請求項7】 オキサロ酢酸ヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを生産するための方法であって、(a)請求項6記載の宿主細胞を当該ポリペプチドの産生に適した条件下で培養し、そして(b)当該ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
【請求項8】 糸状菌細胞の突然変異細胞を生産するための方法であって、請求項1〜3のいずれか1項記載の核酸又はそのコントロール配列を中断又は欠失させ、もとの細胞よりも少ない量のオキサロ酢酸ヒドロラーゼを産生する突然変異体を生み出すことを含んで成る方法。
【請求項9】 (a)親糸状菌細胞に、オキサロ酢酸デヒドロラーゼの産生を司る少なくとも一の遺伝子の修飾を含んで成る核酸配列を導入し;そして
(b)同一条件下で親細胞よりも少ない量のオキサロ酢酸デヒドロラーゼを産生する工程(a)由来の突然変異細胞を同定する;
ことを含んで成る請求項8記載の方法。
【請求項10】 請求項8又は9記載の方法により生産された突然変異細胞。
【請求項11】 アスペルギルス(Aspergillus)、例えばA.ニガー(A.niger)、アクレモニウム(Acremonium)、オーレオバシジウム(Aureobasidium)、クリプトコッカス(Cryptococcus)、フィリバシジウム(Filibasidium)、フサリウム(Fusarium)、ジッベレラ(Gibberella)、ヒュミコラ(Humicola)、マグナポルテ(Magnaporthe)、ムコール(Mucor)、ミセリオフソラ(Myceliophthora)、ミロセシウム(Myrothecium)、ネオカリマスティックス(Neocallimastix)、ニューロスポラ(Neurospora)、ペシロマイセス(Paecilomyces)、ペニシリウム(penicillium)、ピロマイセス(Piromyces)、シゾフィルム(Schizophyllum)、タラロマイセス(Talaromyces)、サーモアスカス(Thermoascus)、チエラビア(Thielavia)、トリポクラジウム(Tolypocladium)、又はトリコデルマ(Trichoderma)株の細胞である、請求項10記載の突然変異細胞。
【請求項12】 前記突然変異細胞が親細胞よりも、同一条件下で培養したときに少なくとも約25%少ない量のオキサロ酢酸ヒドロラーゼ又はシュウ酸を産生する、請求項10又は11項記載の突然変異細胞。
【請求項13】 前記突然変異細胞が1又は複数の第三の核酸配列の1又は複数の修飾を更に含んで成り、ここで当該修飾は当該1又は複数の第三の核酸配列の発現を抑制又は消失させるものである、請求項10〜12のいずれか1項記載の突然変異細胞。
【請求項14】 前記第三の核酸配列がアミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチターゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、アンノシダーゼ、ムタナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ及びキシラナーゼから成る群から選ばれる酵素をコードする、請求項13記載の突然変異細胞。
【請求項15】 前記突然変異細胞が更にプロテアーゼをコードする1又は複数の遺伝子の修飾を含んで成る、請求項10〜14のいずれか1項記載の突然変異細胞。
【請求項16】 相同産物を生産するための方法であって、(a)請求項10〜15のいずれか1項記載の突然変異細胞を当該産物の産生が誘導される条件下で培養し、そして(b)当該産物を回収することを含んで成る方法。
【請求項17】 前記相同産物がクエン酸である、請求項16記載の方法。
【請求項18】 異種ポリペプチドをコードする核酸配列を更に含んで成る、請求項10〜15のいずれか1項記載の突然変異細胞。
【請求項19】 異種ポリペプチドを生産するための方法であって、(a)請求項18記載の突然変異細胞を当該ポリペプチドの産生が誘導される条件下で培養し、そして(b)当該ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
【請求項20】 前記異種ポリペプチドがホルモン、ホルモン変異体、酵素、例えばオキシドリダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、又はリガーゼ、好ましくはアミノペプチターゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチターゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、アルファ−グルコシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、アンノシダーゼ、ムタナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ又はキシラナーゼ、レセプター又はその一部、抗体又はその一部、又はリポーターである、請求19記載の方法。
【請求項21】 診断酵素としての請求項1〜3のいずれか1項記載の核酸配列によりコードされるオキサロ酢酸デヒドロラーゼの使用。
【請求項22】 大腸菌株DSM 12260又はDSM 12661の実質的に純粋な培養物。
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