JP2002529476A - 同種異系造血細胞移植を改良するための方法及び組成物 - Google Patents
同種異系造血細胞移植を改良するための方法及び組成物Info
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Abstract
(57)【要約】
同種異系造血系再構築細胞移植の受容体における対宿主性移植片病を抑制又は予防する方法であって、樹状突起脂肪の数が効果的に減少していることで対宿主性移植片病を抑制又は予防できるようになっている同種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提供する。また、同種異系造血系再構築細胞移植の受容体の生存率を高める方法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少していることで対宿主性移植片病を抑制又は予防できるようになっている同種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提供する。ＣＤ３４+ 細胞選択及び樹状突起前駆細胞の除去を投与する造血系再構築細胞をその移植前に準備するためのカラムを開示する。
Description
【０００１】 発明の分野 本発明の分野は受容体とは遺伝的に相違するドナーからの同種異系造血系再構
築細胞の移植のための改良された方法にあり、その存在が移植受容体の生存率の
低下に関係するそして所定のドナー造血細胞タイプの除去を包含する。
築細胞の移植のための改良された方法にあり、その存在が移植受容体の生存率の
低下に関係するそして所定のドナー造血細胞タイプの除去を包含する。
【０００２】 発明の背景 同種異系骨髄移植は血液及び血液形成細胞の様々な悪性及び遺伝的疾患の好適
な処置方法である。この治療法の幅広い適用は、その患者と遺伝的に関係し、そ
の血液細胞の表層上に同一の移植抗原を共有する適当な骨髄ドナーの獲得により
制約されている。患者の２５％しか遺伝的に合致した有能なドナーである兄弟を
もたない。骨髄移植は、遺伝的に合致した遺伝的に無縁なドナー由来の骨髄（国
家登録を通じて同定）を用いることにより、又は患者の移植抗原とは６種のヒト
白血球抗原のうちの１〜３種が相異する移植抗原をもつ遺伝的に近縁する兄弟又
は親を用いることにより、適当な兄弟ドナーをもたない患者ヘと提供されうる。
しかしながら、抗原的にミスマッチした遺伝的に近縁する親もしくは兄弟、又は
遺伝的に合致した遺伝的に無縁のドナーを利用すると、致命的な対宿主性移植片
病（ＧｖＨＤ）及び／又は移植拒絶反応の傾向は、合致した兄弟ドナーについて
の２０％から、合致はするが無縁のドナー及び患者の家族に由来する合致しない
ドナーの場合の５０％へと高まってしまう。更に、無縁のドナーが６種の主要移
植抗原のうちの一つでしか合致しないと、移植拒絶反応及び／又は致命的なＧｖ
ＨＤの発症率は６０％まで高まる。
な処置方法である。この治療法の幅広い適用は、その患者と遺伝的に関係し、そ
の血液細胞の表層上に同一の移植抗原を共有する適当な骨髄ドナーの獲得により
制約されている。患者の２５％しか遺伝的に合致した有能なドナーである兄弟を
もたない。骨髄移植は、遺伝的に合致した遺伝的に無縁なドナー由来の骨髄（国
家登録を通じて同定）を用いることにより、又は患者の移植抗原とは６種のヒト
白血球抗原のうちの１〜３種が相異する移植抗原をもつ遺伝的に近縁する兄弟又
は親を用いることにより、適当な兄弟ドナーをもたない患者ヘと提供されうる。
しかしながら、抗原的にミスマッチした遺伝的に近縁する親もしくは兄弟、又は
遺伝的に合致した遺伝的に無縁のドナーを利用すると、致命的な対宿主性移植片
病（ＧｖＨＤ）及び／又は移植拒絶反応の傾向は、合致した兄弟ドナーについて
の２０％から、合致はするが無縁のドナー及び患者の家族に由来する合致しない
ドナーの場合の５０％へと高まってしまう。更に、無縁のドナーが６種の主要移
植抗原のうちの一つでしか合致しないと、移植拒絶反応及び／又は致命的なＧｖ
ＨＤの発症率は６０％まで高まる。
【０００３】 ＧｖＨＤは有意な罹病率を有する疾患である。急性ＧｖＨＤを発症する患者は
その皮膚表層のほとんどの覆う水疱、胃腸出血又は激症肝栓及び黄疸が発症する
ことがある。慢性ＧｖＨＤを発症する患者は、関節拘縮及び皮膚潰瘍、脱毛及び
全身るいそう症候群へと結びつく強皮症を発症することがある。急性又は慢性Ｇ
ｖＨＤを有する患者は免疫抑制され、そしてＡＩＤＳ患者で発症されるものと似
かよった生命を脅かす日和見感染症のおそれがある。
その皮膚表層のほとんどの覆う水疱、胃腸出血又は激症肝栓及び黄疸が発症する
ことがある。慢性ＧｖＨＤを発症する患者は、関節拘縮及び皮膚潰瘍、脱毛及び
全身るいそう症候群へと結びつく強皮症を発症することがある。急性又は慢性Ｇ
ｖＨＤを有する患者は免疫抑制され、そしてＡＩＤＳ患者で発症されるものと似
かよった生命を脅かす日和見感染症のおそれがある。
【０００４】 現在、現況の移植技術はＴ細胞の枯褐を包含し、それはかかる細胞の除去が対
宿主性移植片反応の発症率の低下をもたらすことを示す研究に基づく。ドナーの
骨髄内のＴ細胞はいくつかの有用な技術の一つ、例えばＣＤ３+ 細胞の除去、Ｅ
ロゼッティング、及びダイズ凝集素の使用を介して除去される。他方、同種異系
移植の臨床試験は、表層ＣＤ３４マーカーの存在に基づく造血幹細胞についての
陽性選択によるドナー骨髄の富化を利用し、多くのＴ細胞を除去することで実施
されている。この試験において、ＣＤ３４+ 選択の後にＣＤ２+ 細胞を除去し、
Ｔ細胞及びナチュラルキー（ＮＫ）細胞の別の集団を枯褐させる（Clarke, E.,
Potter, M.N., Steward, C.G., Cornish, J.M., Marks, D., Oakhill, A., and
Pamphilon, D.H.1997 Blood 90 (10) Suppl.1；page 37A；Abst.No.1662；“Dou
ble T-cell depletion using sequential +／- immunoaffinity or CD34+ cell
selection followed by campath-M：Effect on CD34+ and progenitor cell rec
overy”；Bunjes, D., M.Wiesneth, S.Von Harsdorf, J.Duyster, T.Shreiner,
C.Duncker, B.Macari, B.Kubanek 1997 1997 Blood 90 (10) Suppl.1；page 103
4；Abst.No.454；“T cell depleted allogeneic PBSC transplants in 30 pati
ents with hematological malignancies：Benefits and Risks”）。現況のＣＤ
３４+ 選別装置では、平均して２〜３log のＴ−細胞枯渇が可能で：例えば、Ｃ
Ｄ３４+ 選択移植片の典型的な移植は受容性の体重１kg当り２〜４×１０6 個の
ＣＤ３４+ 細胞及び０．１〜０．５×１０6 個のＣＤ３+(即ち、Ｔ細胞）を含み
うる。しかしながら、この処置でも、かかる患者はＧｖＨＤ予防を必要とする。
宿主性移植片反応の発症率の低下をもたらすことを示す研究に基づく。ドナーの
骨髄内のＴ細胞はいくつかの有用な技術の一つ、例えばＣＤ３+ 細胞の除去、Ｅ
ロゼッティング、及びダイズ凝集素の使用を介して除去される。他方、同種異系
移植の臨床試験は、表層ＣＤ３４マーカーの存在に基づく造血幹細胞についての
陽性選択によるドナー骨髄の富化を利用し、多くのＴ細胞を除去することで実施
されている。この試験において、ＣＤ３４+ 選択の後にＣＤ２+ 細胞を除去し、
Ｔ細胞及びナチュラルキー（ＮＫ）細胞の別の集団を枯褐させる（Clarke, E.,
Potter, M.N., Steward, C.G., Cornish, J.M., Marks, D., Oakhill, A., and
Pamphilon, D.H.1997 Blood 90 (10) Suppl.1；page 37A；Abst.No.1662；“Dou
ble T-cell depletion using sequential +／- immunoaffinity or CD34+ cell
selection followed by campath-M：Effect on CD34+ and progenitor cell rec
overy”；Bunjes, D., M.Wiesneth, S.Von Harsdorf, J.Duyster, T.Shreiner,
C.Duncker, B.Macari, B.Kubanek 1997 1997 Blood 90 (10) Suppl.1；page 103
4；Abst.No.454；“T cell depleted allogeneic PBSC transplants in 30 pati
ents with hematological malignancies：Benefits and Risks”）。現況のＣＤ
３４+ 選別装置では、平均して２〜３log のＴ−細胞枯渇が可能で：例えば、Ｃ
Ｄ３４+ 選択移植片の典型的な移植は受容性の体重１kg当り２〜４×１０6 個の
ＣＤ３４+ 細胞及び０．１〜０．５×１０6 個のＣＤ３+(即ち、Ｔ細胞）を含み
うる。しかしながら、この処置でも、かかる患者はＧｖＨＤ予防を必要とする。
【０００５】 更に、合致した無縁のドナー又は合致していない兄弟ドナーから移植した骨髄
からのＴ細胞の除去はＧｖＨＤを抑制するが、それはこの患者による同種異系骨
髄移植片の拒絶反応の発生率の上昇にも関係ある。かくして、同種異系骨髄移植
片の中に存在するリンパ球、特にＴ細胞は抗原的及び遺伝的にミスマッチした受
容体内でのエングラフトメントを確実するのに重要である。同種異系移植片の中
に存在するＴ細胞は受容体内の残留癌細胞の排除においても重要な役割を果たす
（「対白血病移植片効果」と称される現象）。
からのＴ細胞の除去はＧｖＨＤを抑制するが、それはこの患者による同種異系骨
髄移植片の拒絶反応の発生率の上昇にも関係ある。かくして、同種異系骨髄移植
片の中に存在するリンパ球、特にＴ細胞は抗原的及び遺伝的にミスマッチした受
容体内でのエングラフトメントを確実するのに重要である。同種異系移植片の中
に存在するＴ細胞は受容体内の残留癌細胞の排除においても重要な役割を果たす
（「対白血病移植片効果」と称される現象）。
【０００６】 Ｔ細胞の投与の不利な効果を最少限にするため、WallerらはＧｖＨＤ応答の不
在下でエングラフトメントを増強する非増殖性Ｔ細胞を投与した（米国特許第５
，８００，５３９号）。別の臨床研究において、Aversaら（New Engl.J.Med.339
：1186-1193）はＴ細胞枯褐され（Ｅ−ロゼッティングを利用して）、その後Ｃ
Ｄ３４+ 選別されたドナー末梢血液単核細胞の更なる投与を骨髄又は末梢血液単
核細胞から成る完全ハロタイプミスマッチドナー移植片を受容する受容体に施し
ている。
在下でエングラフトメントを増強する非増殖性Ｔ細胞を投与した（米国特許第５
，８００，５３９号）。別の臨床研究において、Aversaら（New Engl.J.Med.339
：1186-1193）はＴ細胞枯褐され（Ｅ−ロゼッティングを利用して）、その後Ｃ
Ｄ３４+ 選別されたドナー末梢血液単核細胞の更なる投与を骨髄又は末梢血液単
核細胞から成る完全ハロタイプミスマッチドナー移植片を受容する受容体に施し
ている。
【０００７】 従って、移植技術はヒトへの最初の有効な骨髄移植が行われた３０年前から徐
々に進歩してきてはいるが、同種移植片を受容する患者はその他の合併症に加え
、移植片拒絶反応及び対宿主性移植片病により死亡し続けている。同種異系骨髄
移植のための最適な手順の開発の注目に値するニーズが残っている。
々に進歩してきてはいるが、同種移植片を受容する患者はその他の合併症に加え
、移植片拒絶反応及び対宿主性移植片病により死亡し続けている。同種異系骨髄
移植のための最適な手順の開発の注目に値するニーズが残っている。
【０００８】 本発明は、その存在が移植片生存率の低下に関係するドナー移植片における関
連細胞タイプのファミリーの発見に基づく。１又は複数種のこのような細胞タイ
プ（樹状突起細胞及び樹状突起前駆又は創始細胞（ＤＣＰ）と称する）の除去は
受容体の同種異系移植の生存率を高める。
連細胞タイプのファミリーの発見に基づく。１又は複数種のこのような細胞タイ
プ（樹状突起細胞及び樹状突起前駆又は創始細胞（ＤＣＰ）と称する）の除去は
受容体の同種異系移植の生存率を高める。
【０００９】 発明の概要 本発明は同種異系造血系再構築細胞移植の受容体における対宿主性移植片病を
抑制又は予防する方法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少していること
で対宿主性移植片病を抑制又は予防できるようになっている同種異系造血系再構
築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提供する。また、同種異
系造血系再構築細胞移植の受容体の生存率を高める方法であって、樹状突起細胞
の数が効果的に減少していることで受容体の生存率を高めるようになっている同
種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提供す
る。本発明は更に、同種異系骨髄移植受容体の生存率を高める方法であって、当
該受容体に樹状突起前駆細胞の数が受容体の体重１kg当り０．２５×１０6 個未
満で投与されるように同種異系造血系再構築細胞を投与することを含んで成る方
法を提供する。また、造血系再構築細胞をその移植前に準備するためのカラム系
であって、ＣＤ３４に特異的に結合する抗体の結合した支持体を含む第一カラム
及び樹状突起前駆細胞上で発現される細胞表層マーカーに特異的に結合する抗体
の結合した支持体を含む第二カラムを含んで成り、ここで当該第一カラムは当該
造血系再構築細胞がこの第一カラムに通されるとＣＤ３４+ 細胞の少なくとも３
０％を吸着し、そしてこの第一カラムから遊離した吸着細胞画分を当該第二カラ
ムに通し、そして樹状突起前駆細胞の表層マーカーを発現する細胞が吸着させ、
かくして樹状突起前駆細胞の数を効果的に減少させる、カラム系を提供する。
抑制又は予防する方法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少していること
で対宿主性移植片病を抑制又は予防できるようになっている同種異系造血系再構
築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提供する。また、同種異
系造血系再構築細胞移植の受容体の生存率を高める方法であって、樹状突起細胞
の数が効果的に減少していることで受容体の生存率を高めるようになっている同
種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提供す
る。本発明は更に、同種異系骨髄移植受容体の生存率を高める方法であって、当
該受容体に樹状突起前駆細胞の数が受容体の体重１kg当り０．２５×１０6 個未
満で投与されるように同種異系造血系再構築細胞を投与することを含んで成る方
法を提供する。また、造血系再構築細胞をその移植前に準備するためのカラム系
であって、ＣＤ３４に特異的に結合する抗体の結合した支持体を含む第一カラム
及び樹状突起前駆細胞上で発現される細胞表層マーカーに特異的に結合する抗体
の結合した支持体を含む第二カラムを含んで成り、ここで当該第一カラムは当該
造血系再構築細胞がこの第一カラムに通されるとＣＤ３４+ 細胞の少なくとも３
０％を吸着し、そしてこの第一カラムから遊離した吸着細胞画分を当該第二カラ
ムに通し、そして樹状突起前駆細胞の表層マーカーを発現する細胞が吸着させ、
かくして樹状突起前駆細胞の数を効果的に減少させる、カラム系を提供する。
【００１０】 発明の詳細な説明 本発明は本明細書に含まれている下記の定義、特定の態様の詳細な説明及び実
施例を参照することで一層容易に理解できうる。
施例を参照することで一層容易に理解できうる。
【００１１】 定義 本明細書で用いる単数形は、それを用いる文脈に応じて複数形であることもあ
る。例えば、「細胞」とは１個の細胞又は複数個の細胞を意味しうる。
る。例えば、「細胞」とは１個の細胞又は複数個の細胞を意味しうる。
【００１２】 本明細書でいう「樹状突起細胞」又は「ＤＣ」とは、細胞表層上の下記のマー
カーの１もしくは複数の発現により同定される成熟抗原提示細胞を意味するか、
又は以降に定義する樹状突起前駆細胞を意味するか、又はその両者を意味する：
ＣＤ１ａ，ＣＤ１ｂ及びＣＤ１ｃ，ＣＤ４，ＣＤ１１ｃ，ＣＤ３３，ＣＤ４０，
ＣＤ８０，ＣＤ８６，ＣＤ８３及びＨＬＡ−ＤＲ。
カーの１もしくは複数の発現により同定される成熟抗原提示細胞を意味するか、
又は以降に定義する樹状突起前駆細胞を意味するか、又はその両者を意味する：
ＣＤ１ａ，ＣＤ１ｂ及びＣＤ１ｃ，ＣＤ４，ＣＤ１１ｃ，ＣＤ３３，ＣＤ４０，
ＣＤ８０，ＣＤ８６，ＣＤ８３及びＨＬＡ−ＤＲ。
【００１３】 「樹状突起前駆細胞」、「樹状突起創始細胞」又は「ＤＣＰ」は本明細書で同
義に用い、それは細胞表層上に下記のマーカーの１又は複数を発現することによ
り同定される造血細胞を意味する：ＣＤ１２３，ＣＤ４５ＲＡ，ＣＤ３６及びＣ
Ｄ４。
義に用い、それは細胞表層上に下記のマーカーの１又は複数を発現することによ
り同定される造血細胞を意味する：ＣＤ１２３，ＣＤ４５ＲＡ，ＣＤ３６及びＣ
Ｄ４。
【００１４】 「効果的に減少した」とは、造血系再構築細胞同種移植片内のＤＣ及び／又は
ＤＣＰの数が下記の式を満足するほどに減少していることを意味する： 〔ＣＤ３４+ 細胞の数〕−２×〔ＤＣ／ＤＣＰの数〕≧１．５×１０6 細胞／
受容体体重１kg
ＤＣＰの数が下記の式を満足するほどに減少していることを意味する： 〔ＣＤ３４+ 細胞の数〕−２×〔ＤＣ／ＤＣＰの数〕≧１．５×１０6 細胞／
受容体体重１kg
【００１５】 「造血系再構築細胞」とは、分裂して血液の形成細胞要素の全てを含む子孫を
産生できる能力をもつ細胞、好ましくはヒト細胞の集団を意味する。造血系再構
築細胞の起源には骨髄（胎児及び成人の双方）及び末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ
）が含まれる。
産生できる能力をもつ細胞、好ましくはヒト細胞の集団を意味する。造血系再構
築細胞の起源には骨髄（胎児及び成人の双方）及び末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ
）が含まれる。
【００１６】 「ドナー」又は「ドナー起源」とは、造血系再構築細胞を本来取り出すことの
できる天然資源である動物、好ましくはヒトを意味する。
できる天然資源である動物、好ましくはヒトを意味する。
【００１７】 「受容体」とは、造血系再構築細胞を移植する動物、典型的にはヒトを意味す
る。
る。
【００１８】 「同種異系」とは、その受容体が造血系再構築細胞の取り出された天然資源で
はないことを意味する。
はないことを意味する。
【００１９】 「移植片」及び「同種移植片」は本明細書では同義で用いており、そして受容
体へと移植される造血系再構築細胞を意味する。
体へと移植される造血系再構築細胞を意味する。
【００２０】 詳細な説明 本発明は同種異系造血系再構築細胞移植の受容体の生存率を高める方法であっ
て、樹状突起細胞の数が効果的に減少している同種異系造血系再構築細胞を当該
受容体に投与することを含んで成る方法を提供する。即ち、移植片内のＣＤ３４ + 細胞数、対、ＤＣ数は下記の式に従う： 〔ＣＤ３４+ 細胞数〕−２×〔ＤＣ数〕≧１．５×１０6 細胞／受容体体重１
kg
て、樹状突起細胞の数が効果的に減少している同種異系造血系再構築細胞を当該
受容体に投与することを含んで成る方法を提供する。即ち、移植片内のＣＤ３４ + 細胞数、対、ＤＣ数は下記の式に従う： 〔ＣＤ３４+ 細胞数〕−２×〔ＤＣ数〕≧１．５×１０6 細胞／受容体体重１
kg
【００２１】 一の態様において、同種異系造血系再構築細胞移植の受容体の生存率を高める
方法は、樹状突起細胞の数が効果的に減少している同種異系造血系再構築細胞を
当該受容体に投与することを含んで成る。即ち、移植片内のＣＤ３４+ 細胞数、
対、ＤＣ数は下記の式に従う： 〔ＣＤ３４+ 細胞数〕−２×〔ＤＣＰ数〕≧１．５×１０6 細胞／受容体体重
１kg
方法は、樹状突起細胞の数が効果的に減少している同種異系造血系再構築細胞を
当該受容体に投与することを含んで成る。即ち、移植片内のＣＤ３４+ 細胞数、
対、ＤＣ数は下記の式に従う： 〔ＣＤ３４+ 細胞数〕−２×〔ＤＣＰ数〕≧１．５×１０6 細胞／受容体体重
１kg
【００２２】 効果的に減少した移植片を反映するＣＤ３４+ 細胞及びＤＣＰの代表的な組合
せを表１に示す。
せを表１に示す。
【００２３】 表１．本発明の移植片内の細胞の数 ＣＤ３４+ 細胞数* ＤＣＰ数* ｄｆ値* ４．７３ ０．０２ ４．６９ ４．４ １．４ １．６ ２．７ ０．５ １．６ １．９ ０．１５ １．６ ２．３８ ０．３ １．７７ ３．３４ ０．０４ ３．２７ ──────────────────────────── *x１０6 ／受容体体重１kg（ｄｆ＝差関数）
【００２４】 理論に拘束されるわけではないが、同種移植片からの樹状突起細胞の除去は対
宿主性移植片病を抑制、そしておそらくは予防できると信じられている。従って
、別の態様において、本発明は同種異系造血系再構築細胞移植の受容体における
ＧｖＨＤを抑制又は予防する方法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少し
た同種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提
供する。別の態様において、同種異系造血系再構築細胞移植受容体におけるＧｖ
ＨＤを抑制又は予防する方法は樹状突起前駆細胞（ＤＣＰ）の数が効果的に減少
した同種異系造系血系再構築細胞を投与することを含んで成る。特定の態様にお
いて、本発明は同種異系骨髄移植受容体における対宿主性移植片病を抑制又は予
防する方法であって、当該受容体に樹状突起前駆細胞の数が受容体の体重１kg当
り０．２５×１０6 個未満で投与されるように同種異系造血系再構築細胞を投与
することを含んで成る方法を提供する。
宿主性移植片病を抑制、そしておそらくは予防できると信じられている。従って
、別の態様において、本発明は同種異系造血系再構築細胞移植の受容体における
ＧｖＨＤを抑制又は予防する方法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少し
た同種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法を提
供する。別の態様において、同種異系造血系再構築細胞移植受容体におけるＧｖ
ＨＤを抑制又は予防する方法は樹状突起前駆細胞（ＤＣＰ）の数が効果的に減少
した同種異系造系血系再構築細胞を投与することを含んで成る。特定の態様にお
いて、本発明は同種異系骨髄移植受容体における対宿主性移植片病を抑制又は予
防する方法であって、当該受容体に樹状突起前駆細胞の数が受容体の体重１kg当
り０．２５×１０6 個未満で投与されるように同種異系造血系再構築細胞を投与
することを含んで成る方法を提供する。
【００２５】 一の態様において、移植する造血系再構築細胞はＣＤ３４+ 表現型、即ち、Ｃ
Ｄ３４細胞表層マーカーの発現について陽性的に選択されたものとする。「陽性
的に選択」とは、ＣＤ３４タンパク質を発現する細胞が当業界周知の方法、例え
ば蛍光活性化セルソーティング又は免疫磁性クロマトグラフィーにより集められ
たことを意味し、本明細書における実施例及びその中の引用文献に記載されてい
る。ＣＤ３４+ 造血系再構築細胞の陽性選択は造血系再構築細胞からの樹状突起
細胞の枯渇又は除去の前後に実施してよい。
Ｄ３４細胞表層マーカーの発現について陽性的に選択されたものとする。「陽性
的に選択」とは、ＣＤ３４タンパク質を発現する細胞が当業界周知の方法、例え
ば蛍光活性化セルソーティング又は免疫磁性クロマトグラフィーにより集められ
たことを意味し、本明細書における実施例及びその中の引用文献に記載されてい
る。ＣＤ３４+ 造血系再構築細胞の陽性選択は造血系再構築細胞からの樹状突起
細胞の枯渇又は除去の前後に実施してよい。
【００２６】 本発明の方法は造血系再構築細胞を移植するためのその他の方法及び処理と組
合せて利用してよい。例えば、本明細書において開示する方法はWallerら（米国
特許第５，８００，５３９号）の同種異系造血細胞移植を改善するエングラフメ
ントを増強する非増殖Ｔ細胞の投与を含んで成る方法と組合せて用いてよい。他
方、又は非増殖Ｔ細胞の投与を含んで成るWallerらの方法との更なる組合せにお
いて、本発明の方法は同種異系造血細胞移植を改善するＴ細胞の枯渇した、ＣＤ
３４+ ドナー末梢血液単核細胞の追加の投与を施すことを含んで成るAversaら（
New Engl.J.Med.339：1186-1193）により発表の方法を組合せ用いてよい。
合せて利用してよい。例えば、本明細書において開示する方法はWallerら（米国
特許第５，８００，５３９号）の同種異系造血細胞移植を改善するエングラフメ
ントを増強する非増殖Ｔ細胞の投与を含んで成る方法と組合せて用いてよい。他
方、又は非増殖Ｔ細胞の投与を含んで成るWallerらの方法との更なる組合せにお
いて、本発明の方法は同種異系造血細胞移植を改善するＴ細胞の枯渇した、ＣＤ
３４+ ドナー末梢血液単核細胞の追加の投与を施すことを含んで成るAversaら（
New Engl.J.Med.339：1186-1193）により発表の方法を組合せ用いてよい。
【００２７】 本発明の効果は、本発明の方法に従って造血系再構築細胞の移植された受容体
のグループにおける、このような方法に従わずに造血系再構築細胞の移植された
受容体のグループと比較しての、例えば移植後２又は３年生存した生存者の数の
増大により実証されうる。対宿主性移植片病を抑制又は予防するうえでの本発明
の効果は、臨床医に周知の臨床指数の値、例えば完全エングラフメントまでの時
間、又は移植不良の発生率の低下を測定することにより臨床環境で決定されうる
。
のグループにおける、このような方法に従わずに造血系再構築細胞の移植された
受容体のグループと比較しての、例えば移植後２又は３年生存した生存者の数の
増大により実証されうる。対宿主性移植片病を抑制又は予防するうえでの本発明
の効果は、臨床医に周知の臨床指数の値、例えば完全エングラフメントまでの時
間、又は移植不良の発生率の低下を測定することにより臨床環境で決定されうる
。
【００２８】樹状突起細胞及び樹状突起前駆細胞のマーカー 樹状突起細胞（ＤＣ）は免疫反応の開始において重要な抗原提示細胞である。
in vitro培養及び特性決定に基づき、ＤＣはおそらくは単独家系に由来する関連
細胞タイプのファミリーであると考えられる。ＤＣの前駆細胞（ＤＣＰ）は現在
多くの組織、例えば骨髄及び血液において、所定の細胞表層マーカーの発現に基
づき同定できうる。前駆細胞の１のタイプであるランゲルハンス細胞が表皮にお
いて見い出せる。ランゲルハンス細胞についての研究は、これらの未熟前駆細胞
が抗原取り込みを行うことができるが、成熟ＤＣへと分化するまでＴ細胞を刺激
する有意な能力を発揮しないことを樹立した。
in vitro培養及び特性決定に基づき、ＤＣはおそらくは単独家系に由来する関連
細胞タイプのファミリーであると考えられる。ＤＣの前駆細胞（ＤＣＰ）は現在
多くの組織、例えば骨髄及び血液において、所定の細胞表層マーカーの発現に基
づき同定できうる。前駆細胞の１のタイプであるランゲルハンス細胞が表皮にお
いて見い出せる。ランゲルハンス細胞についての研究は、これらの未熟前駆細胞
が抗原取り込みを行うことができるが、成熟ＤＣへと分化するまでＴ細胞を刺激
する有意な能力を発揮しないことを樹立した。
【００２９】 樹状突起細胞ファミリーの所定の細胞タイプを規定するのに有用な様々なマー
カーが同定されている。例えば、成熟樹状突起細胞の表層上に発現されるマーカ
ーにはＣＤ１ａ，ＣＤｌｌｃ，ＤＥＣ−２０５，ＣＤ４，ＣＤ３３，ＣＤ４０，
ＣＤ８０，ＣＤ８３及びＣＤ８６が挙げられうる。典型的には、下記のマーカー
は成熟樹状突起細胞の表層では認められない：ＣＤ２０，ＣＤ３，ＣＤ１４，Ｃ
Ｄ１６，ＣＤ２，ＣＤ４５ＲＡ，ＣＤ５６及びＣＤ１９。樹状突起前駆細胞上に
存在する細胞表層マーカーにはＣＤ４，ＣＤ４５ＲＡ，ＣＤ３４，ＣＤ１０，Ｃ
Ｄ１２３及びＣＤ３６が挙げられ、一方下記のマーカーは樹状突起前駆細胞の表
層上では認められない：ＣＤ１１ｃ，ＣＤ１ａ，ＣＤ８，ＣＤ４０，ＣＤ８０，
ＣＤ８３及びＣＤ８６（例えばCauxらIntl.immunology 1994 6 (8)：1177-1185
；SteptoeらJ.Immunology 1997 159：5483-5491；Grouardら（J.Exp.Med.1997 1
85 (6)：1101-1111；O'DohertyらImmunology 1994 82：487-493；GalyらJ.immun
otherapy 1998 21 (2)：132-141；StrunkらJ.Exp.Med.1997 185 (6)：1131-1136
；OlweusらProc.Natl.Acad.Sci.USA 1994 94：12551-12556；PrignanoらIntl.J.
Dermatol.1998 37：116-119）を参照のこと。このようなマーカーの適切な利用
により、樹状突起細胞は樹状突起前記細胞と区別できる。
カーが同定されている。例えば、成熟樹状突起細胞の表層上に発現されるマーカ
ーにはＣＤ１ａ，ＣＤｌｌｃ，ＤＥＣ−２０５，ＣＤ４，ＣＤ３３，ＣＤ４０，
ＣＤ８０，ＣＤ８３及びＣＤ８６が挙げられうる。典型的には、下記のマーカー
は成熟樹状突起細胞の表層では認められない：ＣＤ２０，ＣＤ３，ＣＤ１４，Ｃ
Ｄ１６，ＣＤ２，ＣＤ４５ＲＡ，ＣＤ５６及びＣＤ１９。樹状突起前駆細胞上に
存在する細胞表層マーカーにはＣＤ４，ＣＤ４５ＲＡ，ＣＤ３４，ＣＤ１０，Ｃ
Ｄ１２３及びＣＤ３６が挙げられ、一方下記のマーカーは樹状突起前駆細胞の表
層上では認められない：ＣＤ１１ｃ，ＣＤ１ａ，ＣＤ８，ＣＤ４０，ＣＤ８０，
ＣＤ８３及びＣＤ８６（例えばCauxらIntl.immunology 1994 6 (8)：1177-1185
；SteptoeらJ.Immunology 1997 159：5483-5491；Grouardら（J.Exp.Med.1997 1
85 (6)：1101-1111；O'DohertyらImmunology 1994 82：487-493；GalyらJ.immun
otherapy 1998 21 (2)：132-141；StrunkらJ.Exp.Med.1997 185 (6)：1131-1136
；OlweusらProc.Natl.Acad.Sci.USA 1994 94：12551-12556；PrignanoらIntl.J.
Dermatol.1998 37：116-119）を参照のこと。このようなマーカーの適切な利用
により、樹状突起細胞は樹状突起前記細胞と区別できる。
【００３０】造血系再構築細胞におけるＤＣ及び／又はＤＣＰの除去及び／又はその数の減少 のための方法 造血系再構築細胞からの樹状突起細胞及び／又は樹状突起前駆細胞の除去は、
当業界周知の細胞選別及び回収技術（例えば、Olweus, Jら、1997 Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA 94：12551-12556）、例えば限定することなく蛍光活性化セルソーデ
ィング（ＦＡＣＳ）及び免疫磁性クロマトグラフィーを利用する様々なプロトコ
ールにより成し遂げることができる。
当業界周知の細胞選別及び回収技術（例えば、Olweus, Jら、1997 Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA 94：12551-12556）、例えば限定することなく蛍光活性化セルソーデ
ィング（ＦＡＣＳ）及び免疫磁性クロマトグラフィーを利用する様々なプロトコ
ールにより成し遂げることができる。
【００３１】 例えば、造血系再構築細胞からＤＣを除去するには、まず造血系再構築細胞を
成熟樹状突起細胞マーカー、即ち、ＣＤ１ａ，ＣＤ１１ｃ，ＤＥＣ−２０５，Ｃ
Ｄ４，ＣＤ３３，ＣＤ４０，ＣＤ８０，ＣＤ８３及びＣＤ８６のいずれかに特異
的に結合する蛍光ラベル化、例えばＦＩＴＣ−ラベル化抗体と接触させ、次いで
蛍光活性化フローサイトメトリーにかける。四次１０進対数プロット（four dec
ade logarithmic plot）上で第二１０進数（second decade）を超えるＦＩＴＣ
シグナルを示す細胞を除去し、ＣＤ３４+ 細胞等の明るくない細胞を移植に使用
するために回収する。
成熟樹状突起細胞マーカー、即ち、ＣＤ１ａ，ＣＤ１１ｃ，ＤＥＣ−２０５，Ｃ
Ｄ４，ＣＤ３３，ＣＤ４０，ＣＤ８０，ＣＤ８３及びＣＤ８６のいずれかに特異
的に結合する蛍光ラベル化、例えばＦＩＴＣ−ラベル化抗体と接触させ、次いで
蛍光活性化フローサイトメトリーにかける。四次１０進対数プロット（four dec
ade logarithmic plot）上で第二１０進数（second decade）を超えるＦＩＴＣ
シグナルを示す細胞を除去し、ＣＤ３４+ 細胞等の明るくない細胞を移植に使用
するために回収する。
【００３２】 ＤＣＰの除去のために採用するプロトコールの全体的な目標は、典型的な単球
集団よりもＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）において低い横分散（side
-scatter）を有することで更に特性決定されるＣＤ３- ，ＣＤ４+ ，ＣＤ８- 表
現型を有する細胞集団の除去にある。しかしながら、この集団は、下記に詳細な
通り、多種多様な表現型マーカーに基づき同定及び除去できる。
集団よりもＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）において低い横分散（side
-scatter）を有することで更に特性決定されるＣＤ３- ，ＣＤ４+ ，ＣＤ８- 表
現型を有する細胞集団の除去にある。しかしながら、この集団は、下記に詳細な
通り、多種多様な表現型マーカーに基づき同定及び除去できる。
【００３３】 ＤＣＰの数を効果的に減少させる一のプロトコールはＣＤ１２３+ 細胞の除去
にあり、ＣＤ１２３表層タンパク質はインターロイキン３（ＩＬ−３）レセプタ
ー（ＩＬ−３Ｒ−α）のアルファー鎖である。例えば、常磁性ビーズに結合した
ＣＤ１２３（Phar Mingen／Becton-Dickinson, San Diego, CA）に特異的に結合
する抗体を造血系再構築細胞と約５０：１のビーズ、対、標的細胞比で接触させ
、しかる後に磁石又は磁化材料を利用してビーズを造血系再構築細胞から除去す
ることができる。別の態様において、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体を固定
化支持体に結合させ、そして造血系再構築細胞をこの支持体に通し、溶出する細
胞はＤＣＰ枯渇している。別の態様において、ＤＣＰはＩＬ−３Ｒ−α／ＣＤ１
２３タンパク質と蛍光ラベル化モノクローナル抗体との結合により蛍光活性化セ
ルソーティングにより除去できる。このような態様において、移植に利用する得
られる造血系再構築細胞はＣＤ１２３を発現しないが、ＣＤ３４+ 細胞を含む。
にあり、ＣＤ１２３表層タンパク質はインターロイキン３（ＩＬ−３）レセプタ
ー（ＩＬ−３Ｒ−α）のアルファー鎖である。例えば、常磁性ビーズに結合した
ＣＤ１２３（Phar Mingen／Becton-Dickinson, San Diego, CA）に特異的に結合
する抗体を造血系再構築細胞と約５０：１のビーズ、対、標的細胞比で接触させ
、しかる後に磁石又は磁化材料を利用してビーズを造血系再構築細胞から除去す
ることができる。別の態様において、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗体を固定
化支持体に結合させ、そして造血系再構築細胞をこの支持体に通し、溶出する細
胞はＤＣＰ枯渇している。別の態様において、ＤＣＰはＩＬ−３Ｒ−α／ＣＤ１
２３タンパク質と蛍光ラベル化モノクローナル抗体との結合により蛍光活性化セ
ルソーティングにより除去できる。このような態様において、移植に利用する得
られる造血系再構築細胞はＣＤ１２３を発現しないが、ＣＤ３４+ 細胞を含む。
【００３４】 ＤＣＰは細胞表層上のＣＤ４タンパク質の存在に基づき造血系再構築細胞から
除去することもできる。特定の態様において、蛍光ラベル化抗ＣＤ４抗体を造血
系再構築細胞に付加する。この造血系再構築細胞を蛍光活性化フローサイトメト
リーにかけ、そしてＣＤ４シグナルが四次１０進対数プロット上の第二１０進数
を超えている細胞を除去し、ＣＤ４を発現しないＣＤ３４+ 細胞等の細胞を回収
する。
除去することもできる。特定の態様において、蛍光ラベル化抗ＣＤ４抗体を造血
系再構築細胞に付加する。この造血系再構築細胞を蛍光活性化フローサイトメト
リーにかけ、そしてＣＤ４シグナルが四次１０進対数プロット上の第二１０進数
を超えている細胞を除去し、ＣＤ４を発現しないＣＤ３４+ 細胞等の細胞を回収
する。
【００３５】 同様にして、樹状突起細胞及び／又は樹状突起前駆細胞を除去するのに有用な
その他のリガンドを常磁性ビーズに結合させ、それを造血系再構築細胞と接触さ
せ、次いでそのビーズを磁石を介して除去する。リガンドは細胞表層タンパク質
と結合する任意の分子であってよい。例えば、リガンドは抗体、サイトカイン又
はホルモンであってよい。リガンド抗体はポリクローナル又はモノクローナルで
あってよく、そして当業界周知の方法により製造できる。
その他のリガンドを常磁性ビーズに結合させ、それを造血系再構築細胞と接触さ
せ、次いでそのビーズを磁石を介して除去する。リガンドは細胞表層タンパク質
と結合する任意の分子であってよい。例えば、リガンドは抗体、サイトカイン又
はホルモンであってよい。リガンド抗体はポリクローナル又はモノクローナルで
あってよく、そして当業界周知の方法により製造できる。
【００３６】 他方、このリガンドを支持体に結合させ、その上に造血系再構築細胞を通し、
そして未結合の細胞を集めてよい。別の態様において、このリガンドを蛍光ラベ
ルに接合させ、蛍光活性化サイトメトリーによる選別を介して造血系再構築細胞
からラベル化細胞を除去する。このようなプロトコールの全ての結果物はＤＣ／
ＤＣＰ−枯渇造血系再構築細胞である。抗ＣＤ１２３又は抗−ＣＤ４に加え、本
発明においてＤＣＰを除去するのに有用なその他のリガンドはＣＤ４５ＲＡ抗体
及びＣＤ３６抗体である。本発明の任意のリガンドを組合せて、又は単独で使用
して、樹状突起細胞集団の効果的に減少した造血系再構築細胞を獲得することが
できる。
そして未結合の細胞を集めてよい。別の態様において、このリガンドを蛍光ラベ
ルに接合させ、蛍光活性化サイトメトリーによる選別を介して造血系再構築細胞
からラベル化細胞を除去する。このようなプロトコールの全ての結果物はＤＣ／
ＤＣＰ−枯渇造血系再構築細胞である。抗ＣＤ１２３又は抗−ＣＤ４に加え、本
発明においてＤＣＰを除去するのに有用なその他のリガンドはＣＤ４５ＲＡ抗体
及びＣＤ３６抗体である。本発明の任意のリガンドを組合せて、又は単独で使用
して、樹状突起細胞集団の効果的に減少した造血系再構築細胞を獲得することが
できる。
【００３７】 他方、ＣＤ１２３表層タンパク質のリガンドとしてのＩＬ−３はそれ自体造血
系再構築細胞からＤＣＰを除去するために用いることができる。ＩＬ−３を抗体
リガンドについて前述のようにカラムに結合させるか又は常磁性ビーズに結合さ
せ、移植片からＤＣＰを除去することができる。別の態様において、ＩＬ−３を
毒素成分に接合させ、そして造血系再構築細胞とインキュベーションする。ＩＬ
−３毒素成分接合体はＤＣＰの表層上のＩＬ３Ｒ−αと結合し、そして細胞の中
に取り込まれ、細胞はこの毒素成分により殺される。かくして、ＤＣＰは選択細
胞撲滅により造血系再構築細胞から排除される。ヒト細胞にとって毒性であり、
且つＩＬ−３に共有結合させることのできる任意の成分を使用することができる
；毒素成分の例には、限定することなく、ジフテリア毒素、リシン及び百日咳毒
素、並びに当業界公知の任意のその他の毒素が挙げられる。
系再構築細胞からＤＣＰを除去するために用いることができる。ＩＬ−３を抗体
リガンドについて前述のようにカラムに結合させるか又は常磁性ビーズに結合さ
せ、移植片からＤＣＰを除去することができる。別の態様において、ＩＬ−３を
毒素成分に接合させ、そして造血系再構築細胞とインキュベーションする。ＩＬ
−３毒素成分接合体はＤＣＰの表層上のＩＬ３Ｒ−αと結合し、そして細胞の中
に取り込まれ、細胞はこの毒素成分により殺される。かくして、ＤＣＰは選択細
胞撲滅により造血系再構築細胞から排除される。ヒト細胞にとって毒性であり、
且つＩＬ−３に共有結合させることのできる任意の成分を使用することができる
；毒素成分の例には、限定することなく、ジフテリア毒素、リシン及び百日咳毒
素、並びに当業界公知の任意のその他の毒素が挙げられる。
【００３８】 ＤＣ／ＤＣＰの除去のためのこれらの技術の任意の１又は組合せを採用し、造
血系再構築細胞の同種移植片のＤＣ／ＤＣＰの数を効果的に減少させることがで
きる。例えば、同種移植片は上記の１又は複数の技術により処理してＣＤ４+ 及
びＣＤ１２３+ 細胞を除去することができる。他方、同種移植片は下記の組合せ
の任意のいずれかを除去するように処理することができる：ＣＤ１２３+ 及びＣ
Ｄ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ１２３+ 及びＣＤ３６+ 細胞；ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣＤ
３６+ 細胞；ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４+ 及びＣＤ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ１２３+ ，
ＣＤ４+ 及びＣＤ３６+ ；又はＣＤ４+ ，ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣ
Ｄ３６+ 細胞。特定の態様において、同種移植片はまずその表層上でＣＤ３４マ
ーカーを発現する細胞について陽性選択し、そしてかかるＣＤ３４陽性選択細胞
を次に処理して下記の組合せの任意の１つにおける細胞表層タンパク質を発現す
る細胞を除去する：ＣＤ１２３+ 及びＣＤ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ４+ 及びＣＤ１
２３+ 細胞；ＣＤ１２３+ 及びＣＤ３６+ 細胞；ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣＤ３６+
細胞；ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４+ 及びＣＤ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４ + 及びＣＤ３６+ ；又はＣＤ４+ ，ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣＤ３６ + 細胞。
血系再構築細胞の同種移植片のＤＣ／ＤＣＰの数を効果的に減少させることがで
きる。例えば、同種移植片は上記の１又は複数の技術により処理してＣＤ４+ 及
びＣＤ１２３+ 細胞を除去することができる。他方、同種移植片は下記の組合せ
の任意のいずれかを除去するように処理することができる：ＣＤ１２３+ 及びＣ
Ｄ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ１２３+ 及びＣＤ３６+ 細胞；ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣＤ
３６+ 細胞；ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４+ 及びＣＤ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ１２３+ ，
ＣＤ４+ 及びＣＤ３６+ ；又はＣＤ４+ ，ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣ
Ｄ３６+ 細胞。特定の態様において、同種移植片はまずその表層上でＣＤ３４マ
ーカーを発現する細胞について陽性選択し、そしてかかるＣＤ３４陽性選択細胞
を次に処理して下記の組合せの任意の１つにおける細胞表層タンパク質を発現す
る細胞を除去する：ＣＤ１２３+ 及びＣＤ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ４+ 及びＣＤ１
２３+ 細胞；ＣＤ１２３+ 及びＣＤ３６+ 細胞；ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣＤ３６+
細胞；ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４+ 及びＣＤ４５ＲＡ+ 細胞；ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４ + 及びＣＤ３６+ ；又はＣＤ４+ ，ＣＤ１２３+ ，ＣＤ４５ＲＡ+ 及びＣＤ３６ + 細胞。
【００３９】 ＤＣＰ除去のための上記の技術のいずれかを利用し、本発明は樹状突起前駆細
胞の数が効果的に減少した造血系再構築細胞を含んで成る造血系再構築細胞の移
植を必要とする受容体への移植に適当な組成物を提供する。
胞の数が効果的に減少した造血系再構築細胞を含んで成る造血系再構築細胞の移
植を必要とする受容体への移植に適当な組成物を提供する。
【００４０】 本発明は更に、移植片内のＤＣＰの数が効果的に減少した、造血系再構築細胞
をその移植前に準備するためのカラム及びカラム系である。例えば、二重カラム
系を提供する。それはＣＤ３４に特異的に結合する抗体の結合した支持体を含む
第一カラム及び樹状突起前駆細胞上で発現される細胞表層マーカーに特異的に結
合する抗体の結合した支持体を含む第二カラムを含んで成り、ここでこの第一カ
ラムはＣＤ３４+ 細胞の少なくとも３０％を吸着する。この第一カラムから（例
えば撹拌により）遊離した吸着ＣＤ３４+ 細胞を第二カラムに通すが、そのカラ
ムはＤＣＰの表層マーカーを発現する細胞を吸着するのに十分な結合抗体を含ん
でおり、かくして第二カラムの溶出（通過）画分内のＤＣＰの数は効果的に減少
している。特定の態様において、この二重カラム系により処理した後の移植片の
細胞含有物は受容体の体重１kg当り少なくとも２×１０6 個のＣＤ３４+ 細胞及
び０．２５×１０6 個未満のＤＣＰを含む。
をその移植前に準備するためのカラム及びカラム系である。例えば、二重カラム
系を提供する。それはＣＤ３４に特異的に結合する抗体の結合した支持体を含む
第一カラム及び樹状突起前駆細胞上で発現される細胞表層マーカーに特異的に結
合する抗体の結合した支持体を含む第二カラムを含んで成り、ここでこの第一カ
ラムはＣＤ３４+ 細胞の少なくとも３０％を吸着する。この第一カラムから（例
えば撹拌により）遊離した吸着ＣＤ３４+ 細胞を第二カラムに通すが、そのカラ
ムはＤＣＰの表層マーカーを発現する細胞を吸着するのに十分な結合抗体を含ん
でおり、かくして第二カラムの溶出（通過）画分内のＤＣＰの数は効果的に減少
している。特定の態様において、この二重カラム系により処理した後の移植片の
細胞含有物は受容体の体重１kg当り少なくとも２×１０6 個のＣＤ３４+ 細胞及
び０．２５×１０6 個未満のＤＣＰを含む。
【００４１】 別の態様において、ＤＣＰの数が効果的に減少した造血系再構築細胞をその移
植前に準備するためのカラムは、下記の群から成る組合せ群から選ばれた細胞表
層マーカーの組合せに対して特異的に結合する抗体の結合した支持体を含んで成
る：ＣＤ４及びＣＤ１２３；ＣＤ１２３及びＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ１２３及びＣＤ
３６；ＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ３６；ＣＤ１２３，ＣＤ４及びＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ
１２３，ＣＤ４及びＣＤ３６；又はＣＤ４，ＣＤ１２３，ＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ
３６。特定の態様において、このカラムはＤＣＰ上の細胞表層マーカーに対して
十分な抗体を含み、かくして造血系再構築細胞内のＤＣＰの数は受容体の体重１
kg当り０．２５×１０6 ＤＣＰ未満となる。
植前に準備するためのカラムは、下記の群から成る組合せ群から選ばれた細胞表
層マーカーの組合せに対して特異的に結合する抗体の結合した支持体を含んで成
る：ＣＤ４及びＣＤ１２３；ＣＤ１２３及びＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ１２３及びＣＤ
３６；ＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ３６；ＣＤ１２３，ＣＤ４及びＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ
１２３，ＣＤ４及びＣＤ３６；又はＣＤ４，ＣＤ１２３，ＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ
３６。特定の態様において、このカラムはＤＣＰ上の細胞表層マーカーに対して
十分な抗体を含み、かくして造血系再構築細胞内のＤＣＰの数は受容体の体重１
kg当り０．２５×１０6 ＤＣＰ未満となる。
【００４２】 実施例 実施例１．移植患者の調査 ＨＬＡの合致した兄弟ドナー由来の非Ｔ細胞枯渇同種異系骨髄移植を受けた１
０４人の患者の移植片又は同種移植片特性の統計学的調査を実施した。これらの
患者の移植前状況は下記の通りである：ブスルファン系処置（ｎ＝８９）、シク
ロホスファミドによる全身照射（ｎ＝１０）、及びシクロホスファミド（ｎ＝５
）。移植片内の細胞の総数は平均して受容体の体重１kg当り３×１０8 細胞とし
た。ＣＤ３４+ 細胞の数は生存率の向上に相関した（総生存者についてはｐ＝０
．０００４、そして無疾患生存者についてはｐ＝０．００１）。更に、ＣＤ３-
，ＣＤ４+(hi) ，ＣＤ８- 低横散乱を特徴とする移植片内の細胞集団（ここでは
ＤＣＰと称す）を定量し、そして移植片内のかかる細胞の数は全生存率（ＯＳ）
及び無疾患生存率（ＤＦＳ，ｐ＝０．００５）と負の相関を有した。この調査で
、ドナーの年齢及び性別、ＣＦＵ−ＧＭ（体重１kg当り０〜４１×１０4 の範囲
）、総ＣＦＵ（体重１kg当り４〜２８２×１０4 の範囲）、並びにＴ−細胞サブ
セット、ＮＫ細胞、Ｂ−細胞及び単球の相対数は任意の多変数モデルにおける有
意義な変数とはならなかった。
０４人の患者の移植片又は同種移植片特性の統計学的調査を実施した。これらの
患者の移植前状況は下記の通りである：ブスルファン系処置（ｎ＝８９）、シク
ロホスファミドによる全身照射（ｎ＝１０）、及びシクロホスファミド（ｎ＝５
）。移植片内の細胞の総数は平均して受容体の体重１kg当り３×１０8 細胞とし
た。ＣＤ３４+ 細胞の数は生存率の向上に相関した（総生存者についてはｐ＝０
．０００４、そして無疾患生存者についてはｐ＝０．００１）。更に、ＣＤ３-
，ＣＤ４+(hi) ，ＣＤ８- 低横散乱を特徴とする移植片内の細胞集団（ここでは
ＤＣＰと称す）を定量し、そして移植片内のかかる細胞の数は全生存率（ＯＳ）
及び無疾患生存率（ＤＦＳ，ｐ＝０．００５）と負の相関を有した。この調査で
、ドナーの年齢及び性別、ＣＦＵ−ＧＭ（体重１kg当り０〜４１×１０4 の範囲
）、総ＣＦＵ（体重１kg当り４〜２８２×１０4 の範囲）、並びにＴ−細胞サブ
セット、ＮＫ細胞、Ｂ−細胞及び単球の相対数は任意の多変数モデルにおける有
意義な変数とはならなかった。
【００４３】 かくして、ＣＤ３４+ 細胞の数及び移植片内のＤＣＰの数に基づく単純な数学
的関係（差関数、ｄｆ）が下記の通りに記述できる：ｄｆ＝（ＣＤ３４+ 細胞の
数）−２×（ＤＣＰの数）。ｄｆについて受容体体重１kg当り１．５×１０6 の
域値はこれらの患者を２つのグループに分けた：移植片が受容体体重１kg当り１
．５×１０6 以上のｄｆを有する患者は３年目に６７％のＤＦＳを有し、それと
比べｄｆが受容体体重１kg当り１．５×１０6 未満の移植片を有する患者につい
てはＤＦＳは３４％であった。
的関係（差関数、ｄｆ）が下記の通りに記述できる：ｄｆ＝（ＣＤ３４+ 細胞の
数）−２×（ＤＣＰの数）。ｄｆについて受容体体重１kg当り１．５×１０6 の
域値はこれらの患者を２つのグループに分けた：移植片が受容体体重１kg当り１
．５×１０6 以上のｄｆを有する患者は３年目に６７％のＤＦＳを有し、それと
比べｄｆが受容体体重１kg当り１．５×１０6 未満の移植片を有する患者につい
てはＤＦＳは３４％であった。
【００４４】 実施例２．選択した幹細胞の移植 ドナー起源 ：ＨＬＡ合致した又は非ＨＬＡ合致ドナーから回収した骨髄又は末梢
血液幹細胞（ＰＢＳＣ）。
血液幹細胞（ＰＢＳＣ）。
【００４５】ドナーＰＢＳＣの回収 ：ＰＢＳＣを動員させるため、Ｇ−ＣＳＦを白血球搬出が
完了するまで毎日投与する。ドナーに、ドナーの実際の体重に基づきＧ−ＣＳＦ
を１０μｇ／kg／日で皮下受容させる。動員及び白血球搬出の間、ドナーの補助
看護についての制定規準を維持すべきである。ＰＢＳＣを白血球搬出を介して集
める。白血球搬出は制定規準方法に従い、連続フロー分離装置で実施されるであ
ろう。各白血球搬出回収の終点は最少１２リットルの全血の処理又は４時間の白
血球搬出のいずれかであろう。白血球搬出はドナーＧ−ＣＳＦ治療の５+ 目に開
始し、そして受容体の実際の体重のkg当り２×１０6 ＣＤ３４+ 細胞の標的が得
られるまで（処理後）毎日実施する（最大４日の白血球搬出）であろう。アフェ
レーシスを続けるかどうかを決定するためのＣＤ３４+ 細胞数は毎日行うフロー
サイトメトリーアッセイに基づくであろう。
完了するまで毎日投与する。ドナーに、ドナーの実際の体重に基づきＧ−ＣＳＦ
を１０μｇ／kg／日で皮下受容させる。動員及び白血球搬出の間、ドナーの補助
看護についての制定規準を維持すべきである。ＰＢＳＣを白血球搬出を介して集
める。白血球搬出は制定規準方法に従い、連続フロー分離装置で実施されるであ
ろう。各白血球搬出回収の終点は最少１２リットルの全血の処理又は４時間の白
血球搬出のいずれかであろう。白血球搬出はドナーＧ−ＣＳＦ治療の５+ 目に開
始し、そして受容体の実際の体重のkg当り２×１０6 ＣＤ３４+ 細胞の標的が得
られるまで（処理後）毎日実施する（最大４日の白血球搬出）であろう。アフェ
レーシスを続けるかどうかを決定するためのＣＤ３４+ 細胞数は毎日行うフロー
サイトメトリーアッセイに基づくであろう。
【００４６】ドナー細胞の調製 ：骨髄又はＰＢＳＣは免疫磁性吸収細胞分離系、例えばIsolex
300システム（Baxter Immunotherapy, Irvine, CAを用い、公開のプロトコール
（例えばKvalheim G, Pharo A, Holte HらThe use of immunomagnetic beads an
d Isolex 300 gives high purity and yield of CD34+ cells from peripheral
blood progenitor cell products.Bone Marrow Transplant 1996；17 (suppl 1)
：S57；及びCancelas JA, Canais C, Querol SらCD34+ cell transplantation f
rom mobilized peripheral blood by immunomagnetic adsorption in breast ca
ncer patients.Bone Marrow Transplant 1996；17 suppl 1)：S32）に従い選別
するか、又は完全自動操作である次世代Isolex 300iシステムを用い、公開のプ
ロトコール（Report Series 8, Initial Performance of Automated Isolex 300
i System in Multicenter International clinical Trials.I.Purity）に従って
選別する。これらの装置は７７〜９３％の平均純度範囲の最終移植片をもたらし
、選択後の細胞カウント数は１．１〜６．４×１０6 ＣＤ３４+ 細胞１kgである
。移植片の更なるアリコートを適宜更なる点滴のために液体窒素の気相で冷凍保
存する。
300システム（Baxter Immunotherapy, Irvine, CAを用い、公開のプロトコール
（例えばKvalheim G, Pharo A, Holte HらThe use of immunomagnetic beads an
d Isolex 300 gives high purity and yield of CD34+ cells from peripheral
blood progenitor cell products.Bone Marrow Transplant 1996；17 (suppl 1)
：S57；及びCancelas JA, Canais C, Querol SらCD34+ cell transplantation f
rom mobilized peripheral blood by immunomagnetic adsorption in breast ca
ncer patients.Bone Marrow Transplant 1996；17 suppl 1)：S32）に従い選別
するか、又は完全自動操作である次世代Isolex 300iシステムを用い、公開のプ
ロトコール（Report Series 8, Initial Performance of Automated Isolex 300
i System in Multicenter International clinical Trials.I.Purity）に従って
選別する。これらの装置は７７〜９３％の平均純度範囲の最終移植片をもたらし
、選択後の細胞カウント数は１．１〜６．４×１０6 ＣＤ３４+ 細胞１kgである
。移植片の更なるアリコートを適宜更なる点滴のために液体窒素の気相で冷凍保
存する。
【００４７】 ＣＤ３４+ 選択移植片を次に処理してＤＣＰを除去する（下記実施例３参照の
こと）。受容体体重１kg当り少なくとも２×１０6 ＣＤ３４+ 細胞及び０．２５
×１０6 未満のＤＣＰを含む得られるＣＤ３４+ 、ＤＣＰ枯渇移植片を受容体に
点滴する。この移植片の更なるアリコートを適宜更なる点滴のために液体窒素の
気相で冷凍保存する。
こと）。受容体体重１kg当り少なくとも２×１０6 ＣＤ３４+ 細胞及び０．２５
×１０6 未満のＤＣＰを含む得られるＣＤ３４+ 、ＤＣＰ枯渇移植片を受容体に
点滴する。この移植片の更なるアリコートを適宜更なる点滴のために液体窒素の
気相で冷凍保存する。
【００４８】ドナー細胞の移植 ：上記の通りに調製したドナー細胞を中央静脈カテーテル（典
型的には胸部で）を介し、かかる移植を必要とする患者に投与する。かかるドナ
ー細胞を受容した患者はドナー細胞の点滴の１〜２日前にプレコンディショニン
グ処置を受けることがある。かかるプレコンディショニング処置はフルダラビン
、チオテパ、シクロホスファミド及びＴ細胞を枯渇させるための抗体の如き免疫
抑制治療との組合せにおける全身照射又はブスルファンのいずれかであろう。
型的には胸部で）を介し、かかる移植を必要とする患者に投与する。かかるドナ
ー細胞を受容した患者はドナー細胞の点滴の１〜２日前にプレコンディショニン
グ処置を受けることがある。かかるプレコンディショニング処置はフルダラビン
、チオテパ、シクロホスファミド及びＴ細胞を枯渇させるための抗体の如き免疫
抑制治療との組合せにおける全身照射又はブスルファンのいずれかであろう。
【００４９】 実施例３．セルソーティング セルソーティングの一般プロトコール 細胞をＦＩＴＣ接合ＣＤ３４特異的モノクローナル抗体及びＣＤ４，ＣＤ１２
３，ＣＤ３６又はＣＤ４５ＲＡを認識するＰＥ接合モノクローナル抗体（Becton
-Dickinson, San Jose, CA）を用いて染色する。直接接合アイソタイプー合致し
た無縁の抗体をコントロールとして使う。細胞を２％ｖ／ｖの自系ヒト血漿又は
１％のヒト血清アルブミンを含むＨａｎｋ緩衝食塩水養液（HBSS, Mediatech, H
erndon, VA）から成る染色バッファーの中で４℃で３０分かけて染色した。過剰
の抗体は１０容量の染色バッファーによる希釈、しかる後の５００×ｇでの遠心
分離により除去した。染色した細胞を直ちにＦＡＣＳＣＡＮフローサイトメータ
ー（BDIS, San Jose, CA）を利用して分析するか、又はＦＡＣＳＶＡＮＴＡＧＥ
セルソーター（BDIS, San Jose, CA）を用いて無菌選別した。生存者核細胞に適
当な前方及び横散乱ゲートを利用し、List-modeデーターを獲得した。データー
分析はCellQuest（商標）又はLYSIS-IIソフトウェア（BDIS, San Jose, CA）を
用いて実施した。ＣＤ３４+ ＤＣＰ- 細胞は、対角選別ゲートがＣＤ３４発現細
胞を含み（ＦＩＴＣ−陽性事象）、そしてＤＣＰマーカー発現細胞を排除する（
ＰＥ−陽性事象）ように設定し、そしてＣＤ３４+ ＤＣＰ- 細胞と無菌チューブ
の中で回収することにより選別した。
３，ＣＤ３６又はＣＤ４５ＲＡを認識するＰＥ接合モノクローナル抗体（Becton
-Dickinson, San Jose, CA）を用いて染色する。直接接合アイソタイプー合致し
た無縁の抗体をコントロールとして使う。細胞を２％ｖ／ｖの自系ヒト血漿又は
１％のヒト血清アルブミンを含むＨａｎｋ緩衝食塩水養液（HBSS, Mediatech, H
erndon, VA）から成る染色バッファーの中で４℃で３０分かけて染色した。過剰
の抗体は１０容量の染色バッファーによる希釈、しかる後の５００×ｇでの遠心
分離により除去した。染色した細胞を直ちにＦＡＣＳＣＡＮフローサイトメータ
ー（BDIS, San Jose, CA）を利用して分析するか、又はＦＡＣＳＶＡＮＴＡＧＥ
セルソーター（BDIS, San Jose, CA）を用いて無菌選別した。生存者核細胞に適
当な前方及び横散乱ゲートを利用し、List-modeデーターを獲得した。データー
分析はCellQuest（商標）又はLYSIS-IIソフトウェア（BDIS, San Jose, CA）を
用いて実施した。ＣＤ３４+ ＤＣＰ- 細胞は、対角選別ゲートがＣＤ３４発現細
胞を含み（ＦＩＴＣ−陽性事象）、そしてＤＣＰマーカー発現細胞を排除する（
ＰＥ−陽性事象）ように設定し、そしてＣＤ３４+ ＤＣＰ- 細胞と無菌チューブ
の中で回収することにより選別した。
【００５０】 実施例４．単離したＤＣＰの特性決定 樹状突起細胞を磁性カラム分離により、リンパ球、顆粒球又は単球マーカーを
発現する系統陽細胞を吸収（枯渇）させるため、Miltenyi Biotec MACSシステム
を用い、骨髄から単離及び精製して（即ち、系統-)。ＣＤ１２３−ＰＥ及びＣＤ
１１ｃ−ＡＰＣを利用する系統- 集団のその後のセルソーティング（FACS Vanta
ge System、ターボソートオプション付き、第一Enterprise 488アルゴンレーザ
ー及び第二ダイレーザー使用）は、細胞表層上のこれら２種類の抗原の発現パタ
ーンに基づき２通りの樹状突起細胞の集団を示した：ＣＤ１１ｃ+ 及びＣＤ１２
３- であるＤＣ１、並びにＣＤ１２３+ 及びＣＤ１１ｃ- であるＤＣＰ２。これ
らの２種類のサブタイプの更なる分析は、ＤＣＰ２集団が補助刺激分子ＣＤ８０
，ＣＤ８６及びＣＤ４０を発現できず、一方ＤＣＩ集団はこれらのマーカーの発
現を示すことを示した。ここで論ずる通り、これらの３つのマーカーは成熟樹状
突起細胞では発現されるが、樹状突起前駆細胞上では発現されないことが知られ
ている。樹状突起前駆細胞について本明細書で開示する２つの分析方法、即ち、
一の方法としてＣＤ４+ ／ＣＤ３- 横下散乱及び第二の方法としてのＣＤ１１ｃ - ／ＣＤ１２３+ 間の相関を示す散乱プロットは優れた相関を示し（係数＝０．
８２）、これらのマーカーが同じ細胞集団を特定することが確認された。
発現する系統陽細胞を吸収（枯渇）させるため、Miltenyi Biotec MACSシステム
を用い、骨髄から単離及び精製して（即ち、系統-)。ＣＤ１２３−ＰＥ及びＣＤ
１１ｃ−ＡＰＣを利用する系統- 集団のその後のセルソーティング（FACS Vanta
ge System、ターボソートオプション付き、第一Enterprise 488アルゴンレーザ
ー及び第二ダイレーザー使用）は、細胞表層上のこれら２種類の抗原の発現パタ
ーンに基づき２通りの樹状突起細胞の集団を示した：ＣＤ１１ｃ+ 及びＣＤ１２
３- であるＤＣ１、並びにＣＤ１２３+ 及びＣＤ１１ｃ- であるＤＣＰ２。これ
らの２種類のサブタイプの更なる分析は、ＤＣＰ２集団が補助刺激分子ＣＤ８０
，ＣＤ８６及びＣＤ４０を発現できず、一方ＤＣＩ集団はこれらのマーカーの発
現を示すことを示した。ここで論ずる通り、これらの３つのマーカーは成熟樹状
突起細胞では発現されるが、樹状突起前駆細胞上では発現されないことが知られ
ている。樹状突起前駆細胞について本明細書で開示する２つの分析方法、即ち、
一の方法としてＣＤ４+ ／ＣＤ３- 横下散乱及び第二の方法としてのＣＤ１１ｃ - ／ＣＤ１２３+ 間の相関を示す散乱プロットは優れた相関を示し（係数＝０．
８２）、これらのマーカーが同じ細胞集団を特定することが確認された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｒ 1:91） //(Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B029 AA09 BB11 CC01 HA10 4B065 AA93X AC12 AC20 BA24 BD14 CA44 4C087 AA01 AA02 AA04 BB44 CA21 DA07 MA66 NA06 NA07 ZA51 ZB21
Claims (19)
- 【請求項１】 同種異系造血系再構築細胞移植の受容体における対宿主性移
植片病を抑制又は予防する方法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少して
いることで対宿主性移植片病を抑制又は予防できるようになっている同種異系造
血系再構築細胞を当該受容体に投与することを含んで成る方法。 - 【請求項２】 前記樹状突起細胞が樹状突起前駆細胞である、請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】 同種異系造血系再構築細胞移植の受容体の生存率を高める方
法であって、樹状突起細胞の数が効果的に減少していることで受容体の生存率を
高めるようになっている同種異系造血系再構築細胞を当該受容体に投与すること
を含んで成る方法。 - 【請求項４】 前記樹状突起細胞が樹状突起前駆細胞である、請求項３記載
の方法。 - 【請求項５】 同種異系骨髄移植受容体における対宿主移植片病を抑制又は
予防する方法であって、当該受容体に樹状突起前駆細胞の数が受容体の体重１kg
当り０．２５×１０6 個未満で投与されるように同種異系造血再構築細胞を投与
することを含んで成る方法。 - 【請求項６】 同種異系骨髄移植受容体の生存率を高める方法であって、当
該受容体に樹状突起前駆細胞の数が受容体の体重１kg当り０．２５×１０6 個未
満で投与されるように同種異系造血再構築細胞を投与することを含んで成る方法
。 - 【請求項７】 前記樹状突起細胞を蛍光活性化セルソーティングにより除去
する、請求項１又は３記載の方法。 - 【請求項８】 前記樹状突起細胞をａ）前記造血系再構築細胞を当該樹状突
起細胞の表層上のレセプターに特異的に結合するリガンドと接触させ、ここで当
該リガンドは常磁性支持体に結合しており、そしてｂ）当該樹状突起細胞を磁石
により当該造血系再構築細胞から除去する、請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 前記樹状突起細胞をａ）前記造血系再構築細胞を当該樹状突
起細胞の表層上のレセプターに特異的に結合するリガンドと接触させ、ここで当
該リガンドは常磁性支持体に結合しており、そしてｂ）当該樹状突起細胞を磁石
により当該造血系再構築細胞から除去する、請求項３記載の方法。 - 【請求項１０】 前記樹状突起細胞を、前記造血系再構築細胞を樹状突起細
胞の表層上で発現される１又は複数種のタンパク質に結合する１又は複数種のリ
ガンドに結合した支持材料を含む１又は複数のカラムに通すことにより除去する
、請求項１記載の方法。 - 【請求項１１】 前記樹状突起細胞を、前記造血系再構築細胞を樹状突起細
胞の表層上で発現される１又は複数種のタンパク質に結合する１又は複数種のリ
ガンドに結合した支持材料を含む１又は複数のカラムに通すことにより除去する
、請求項３記載の方法。 - 【請求項１２】 前記リガンドがＩＬ３、抗−ＣＤ１２３、抗−ＣＤ４５Ｒ
Ａ、抗−ＣＤ４及び抗−ＣＤ３６から成る群から選ばれる、請求項８記載の方法
。 - 【請求項１３】 前記リガンドがＩＬ３、抗−ＣＤ１２３、抗−ＣＤ４５Ｒ
Ａ、抗−ＣＤ４及び抗−ＣＤ３６から成る群から選ばれる、請求項９記載の方法
。 - 【請求項１４】 前記リガンドがＩＬ３、抗−ＣＤ１２３、抗−ＣＤ４５Ｒ
Ａ、抗−ＣＤ４及び抗−ＣＤ３６から成る群から選ばれる、請求項１０記載の方
法。 - 【請求項１５】 前記リガンドがＩＬ３、抗−ＣＤ１２３、抗−ＣＤ４５Ｒ
Ａ、抗−ＣＤ４及び抗−ＣＤ３６から成る群から選ばれる、請求項１１記載の方
法。 - 【請求項１６】 前記樹状突起前駆細胞を、前記造血系再構築細胞をＩＬ−
３毒素成分接合体と接触させることにより当該樹状突起前駆細胞を当該毒素成分
により破壊することで除去する、請求項２又は４記載の方法。 - 【請求項１７】 前記毒素成分がジフテリア毒素、リシン及び百日咳毒素か
ら成る群から選ばれる、請求項１６記載の方法。 - 【請求項１８】 前記造血系再構築細胞がＣＤ３４+ 表現型に関して陽性選
択されたものである、請求項１又は３記載の方法。 - 【請求項１９】 造血系再構築細胞をその移植前に準備するためのカラム系
であって、ＣＤ３４に特異的に結合する抗体の結合した支持体を含む第一カラム
及び樹状突起前駆細胞上で発現される細胞表層マーカーに特異的に結合する抗体
の結合した支持体を含む第二カラムを含んで成り、ここで当該第一カラムは当該
造血系再構築細胞がこの第一カラムに通されるとＣＤ３４+ 細胞の少なくとも３
０％を吸着し、そしてこの第一カラムから遊離した吸着細胞画分を当該第二カラ
ムに通し、そして樹状突起前駆細胞の表層マーカーを発現する細胞を吸着させ、
かくして樹状突起前駆細胞の数を効果的に減少させる、カラム系。
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|---|---|---|---|
| US18957798A | 1998-11-11 | 1998-11-11 | |
| US09/189,577 | 1998-11-11 | ||
| PCT/US1999/026773 WO2000027998A2 (en) | 1998-11-11 | 1999-11-10 | Method and compositions for improving allogeneic hematopoietic cell transplantation |
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| JP2000581165A Pending JP2002529476A (ja) | 1998-11-11 | 1999-11-10 | 同種異系造血細胞移植を改良するための方法及び組成物 |
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| JP2017140054A (ja) * | 2007-08-31 | 2017-08-17 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | 体細胞を再プログラミングすることにおけるｗｎｔ経路の刺激 |
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|---|---|---|---|---|
| CA2823782C (en) * | 2011-01-10 | 2019-05-07 | Samuel Strober | Enhancement of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation |
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|---|---|---|---|---|
| US5409813A (en) * | 1993-09-30 | 1995-04-25 | Systemix, Inc. | Method for mammalian cell separation from a mixture of cell populations |
-
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- 1999-11-10 KR KR1020017005933A patent/KR20010090008A/ko not_active Application Discontinuation
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2017140054A (ja) * | 2007-08-31 | 2017-08-17 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | 体細胞を再プログラミングすることにおけるｗｎｔ経路の刺激 |
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