JP2002528060A - 副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）および副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）の生物活性ペプチドおよびペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 生物学的に活性である、新規の副甲状腺ホルモンペプチド（ＰＴＨ）および副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）またはそれらの誘導体、ならびに上記のペプチドを含む薬学的組成物、ならびに上記のペプチドを産生するための合成方法および組換え方法が、開示される。上記のペプチドを含む治療的に有効な薬学的組成物を使用して、骨質量における減少によって特徴付けられる哺乳動物の状態を処置するための方法もまた、開示される。副甲状腺ホルモンレセプター作用に対するアンタゴニスト効果またはアゴニスト効果について、本発明の候補化合物をスクリーニングするための方法もまた、開示される。上記化合物の診断方法および治療方法もまた、開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （連邦政府の援助による研究および開発の下でなされた発明に対する権利の陳
述） 本発明の開発中に行われた研究の一部は、米国政府基金を利用した。米国政府
は、本発明において特定の権利を有する。

【０００２】 （発明の背景） （発明の分野） 本発明は、新規な副甲状腺ホルモンペプチド（ＰＨＴ）誘導体および新規な副
甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）誘導体に関する。特に、本発明は、
生物学的活性をなお保持する、ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰ最小ペプチド、ならびに
それらの誘導体に関する。

【０００３】 （関連技術の説明） 副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）は、主要な標的細胞が骨および腎臓中に生じるカ
ルシウムホメオスタシスの主要なレギュレーターである。カルシウム濃度の調節
は、胃腸系、骨格系、神経系、神経筋系、および心血管系の正常な機能に必要と
される。ＰＴＨの合成および放出は、血清カルシウムレベルによって主に制御さ
れ；低レベルは、ホルモンの合成および放出の両方を刺激し、そして高レベルは
、ホルモンの合成および放出の両方を抑制する。次いで、ＰＴＨは、カルシウム
交換の３つの部位（腸、骨、および腎臓）にて、血液中へのカルシウムの進入を
直接的または間接的に促進することによって、血清カルシウムレベルを維持する
。ＰＴＨは、ビタミンＤの活性形態の腎臓での合成をもたらすことによって、カ
ルシウムの正味の胃腸吸収に寄与する。ＰＴＨは、骨吸収細胞である破骨細胞の
分化を刺激することによって、間接的に、骨からのカルシウム再吸収を促進する
。これはまた、腎臓に対する少なくとも３つの主要な効果（尿細管カルシウム吸
収の刺激、リン酸クリアランスの増強、およびビタミンＤの活性形態の合成を完
了する酵素における増加の促進）を媒介する。ＰＴＨは、主に、アデニル酸シク
ラーゼおよびホスホリパーゼＣのレセプター媒介性活性化を通して、これらの効
果を発揮する。

【０００４】 カルシウムホメオスタシスの破壊は、多くの臨床的な障害（例えば、重篤な骨
疾患、貧血、腎臓障害、潰瘍、ミオパシー、および神経障害）を生じ得、そして
通常、副甲状腺ホルモンのレベルにおける変化を生じる状態から生じる。高カル
シウム血症は、血清カルシウムレベルにおける上昇によって特徴付けられる状態
である。これは、しばしば、過剰なＰＴＨ産生が上皮小体の病変（例えば、腺腫
、過形成、または癌腫）の結果として生じる原発性上皮小体機能亢進症と関連す
る。別の型の高カルシウム血症である、悪性の液性高カルシウム血症（ＨＨＭ）
は、最も一般的な腫瘍随伴性症候群である。これは、ＰＴＨとアミノ酸相同性を
共有するタンパク質ホルモンのクラスの腫瘍（例えば、扁平癌、腎臓癌、卵巣癌
、または膀胱癌）による産生からのほとんどの例を生じるようである。これらの
ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）は、ＰＴＨの特定の腎臓作用および骨格作
用を模倣するようであり、そしてこれらの組織においてＰＴＨレセプターと相互
作用すると考えられる。ＰＴＨｒＰは、通常、多くの組織（ケラチノサイト、脳
、下垂体、上皮小体、副腎皮質、髄質、胎児肝臓、骨芽細胞様細胞、および乳汁
分泌性乳房組織を含む）中で低レベルで見出される。多くのＨＨＭ悪性疾患にお
いて、ＰＴＨｒＰは、循環系において高レベルで見出され、それによってＨＨＭ
と関連するカルシウムレベルの上昇を生じる。

【０００５】 ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰの薬理学的プロフィールは、ほとんどのインビトロで
のアッセイ系においてほぼ同一であり、そして上昇した血液レベルのＰＴＨ（す
なわち、原発性上皮小体機能亢進症）またはＰＨＴｒＰ（すなわち、ＨＨＭ）は
、ミネラルイオンのホメオスタシスに対して匹敵する効果を有する（Ｂｒｏａｄ
ｕｓ，Ａ．Ｅ．およびＳｔｅｗａｒｔ，Ａ．Ｆ．「Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈ
ｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｒｏ
ｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎｓ」Ｂａ
ｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ、Ｂｉｌｚｉｋｉａｎ，
Ｊ．Ｐ．ら編、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）、２５
９〜２９４頁；Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｈ．Ｍ．ら、「Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ
ｈｏｒｍｏｎｅ：Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ，ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ａｎｄ ａｃｔｉｏｎ」Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍ
ｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｍｕｎｄｙ，Ｇ．Ｒ．およびＭａｒｔ
ｉｎ，Ｔ．Ｊ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（
１９９３）、１８５〜２０１頁）。この２つのリガンドの生物学的活性における
類似性は、骨および腎臓において豊富に発現される共通のレセプターであるＰＴ
Ｈ／ＰＴＨｒＰレセプターとのそれらの相互作用によって説明され得る（Ｕｒｅ
ｎａ，Ｐ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３４：４５１〜４５６（１９９
４））。

【０００６】 ネイティブなヒト副甲状腺ホルモンは、８４アミノ酸の非改変ポリペプチドで
ある。これは、低い血液カルシウムレベルに応答して、上皮小体から分泌され、
そして骨における骨芽細胞（骨構築細胞）、および腎臓の尿細管上皮細胞に作用
する。このホルモンは、骨芽細胞および腎尿細管細胞の両方によって発現される
細胞表面レセプター分子（ＰＴＨ−１レセプターまたはＰＴＨ／ＰＴＨｒＰレセ
プターと呼ばれる）と相互作用する。ＰＴＨｒＰ（悪性の液性高カルシウム血症
の主要な原因）はまた、発生における役割を含む正常な機能を有する。ＰＴＨｒ
Ｐは、１４１アミノ酸を有するが、選択的遺伝子スプライシング機構から生じる
改変体もまた、生じる。ＰＴＨｒＰは、ＰＴＨ−１レセプターへの結合もまた含
むプロセスを通じる骨格の形成における重要な役割を果たす（Ｋａｒａｐｌｉｓ
，Ａ．Ｃ．ら、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖ．８：２７７〜２８９（１９９４）
およびＬａｎｓｋｅ，Ｂ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７３：６６３〜６６６（１９
９６））。

【０００７】 ＰＴＨ−１レセプターは、ペプチドホルモン（例えば、セクレチン（Ｉｓｈｉ
ｈａｒａ，Ｔ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：１６３５〜１６４１（１９９１））、
カルシトニン（Ｌｉｎ，Ｈ．Ｙ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１０２２〜１０
２４（１９９１）およびグルカゴン（Ｊｅｌｉｎｅｋ，Ｌ．Ｊ．ら、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２５９：１６１４〜１６１６（１９９３））を結合する他のレセプターの
メンバーに対して、一次構造において相同であり；ともに、これらのレセプター
は、レセプターファミリーＢと呼ばれる異なるファミリーを形成する（Ｋｏｌａ
ｋｏｗｓｋｉ，Ｌ．Ｆ．、Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｃｈａｎｎｅｌｓ ２
：１〜７（１９９４））。このファミリー内では、ＰＴＨ−１レセプターは、そ
れが２つのペプチドリガンドに結合し、それによって２つの別々の生物学的プロ
セスを調節するという点で独特である。最近同定されたＰＴＨレセプターサブタ
イプ（ＰＴＨ−２レセプターと呼ばれる）は、ＰＴＨを結合するが、ＰＴＨｒＰ
を結合しない（Ｕｓｄｉｎ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１５４
５５〜１５４５８（１９９５））。この観察は、ＰＴＨリガンドおよびＰＴＨｒ
Ｐリガンドにおける構造的差異が、ＰＴＨ−２レセプターとの相互作用について
の選択性を決定することを暗示した。このＰＴＨ−２レセプターは、脳、膵臓、
および血管系において、ＲＮＡ法によって検出されているが、その生物学的機能
は、決定されていない（Ｕｓｄｉｎ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０
：１５４５５〜１５４５８（１９９５））。ファミリーＢレセプターは、それら
自体の同属ペプチドホルモンを係合する、共通の分子機構を使用すると仮定され
ている（Ｂｅｒｇｗｉｔｚ，Ｃ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２６４
６９〜２６４７２（１９９６））。

【０００８】 放射性標識したＰＴＨ（１〜３４）またはＰＴＨｒＰ（１〜３６）のいずれか
のＰＴＨ−１レセプターへの結合は、いずれかの非標識リガンドによって競合的
に阻害される（Ｊｕｐｐｎｅｒ，Ｈ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：８
５５７〜８５６０（１９８８）；Ｎｉｓｓｅｎｓｏｎ，Ｒ．Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１２８６６〜１２８７１（１９８８））。従って、ＰＴ
Ｈ−１レセプターの２つのリガンドに対する認識部位は、おそらく重複する。Ｐ
ＴＨおよびＰＴＨｒＰの両方において、１５〜３４の領域は、ＰＴＨ−１レセプ
ターへの結合に対する主要な決定基（ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）を含む。これら
の領域は、最小の配列相同性（３アミノ酸のみの同一性）を示すが、各々の１５
〜３４ペプチドは、ＰＴＨ（１〜３４）またはＰＴＨｒＰ（１〜３４）のいずれ
かのＰＴＨ−１レセプターへの結合をブロックし得る（Ｎｕｓｓｂａｕｍ，Ｓ．
Ｒ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：１０１８３〜１０１８７（１９８０
）；Ｃａｕｌｆｉｅｌｄ，Ｍ．Ｐ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２７：
８３〜８７（１９９０）；Ａｂｏｕ−Ｓａｍｒａ，Ａ．−Ｂ．ら、Ｅｎｄｏｃｒ
ｉｎｏｌｏｇｙ １２５：２２１５〜２２１７（１９８９））。さらに、各リガ
ンドのアミノ酸末端部分は、生物活性のために必要とされ、そしてこれらは、お
そらく、類似の様式にてＰＴＨ−１レセプターと相互作用する。なぜなら、これ
らの残基の１３のうちの８は、ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰにおいて同一であるから
である。

【０００９】 ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰの両方は、ｎＭ範囲の親和性で、ＰＴＨ−１レセプタ
ーに結合し；リガンド−占有レセプターは、中間にヘテロ三量体ＧＴＰ結合タン
パク質（Ｇタンパク質）を含む機構を通じて、細胞内エフェクター酵素へと細胞
膜を横切って「シグナル」を伝達する。ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰに応答してＰＴ
Ｈ−１レセプターによって活性化される一次性細胞内エフェクター酵素は、アデ
ニル酸シクラーゼ（ＡＣ）である。従って、ＰＴＨは、骨リモデリング（骨形成
および骨吸収の両方のプロセス）に関与する、弱く特徴付けられた「下流」の細
胞プロセスを調節し続ける、「セカンドメッセンジャー」分子であるサイクリッ
クアデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）における強い増大を誘導する。特定の細胞ベ
ースのアッセイ系において、ＰＴＨは、イノシトール三リン酸（ＩＰ₃）、ジア
シルグリセロール（ＤＡＧ）、および細胞内カルシウム（ｉＣａ²⁺）の産生を生
じる、ＡＣ以外のエフェクター酵素（ホルホリパーゼＣ（ＰＬＣ）を含む）を刺
激し得る。骨代謝におけるこれらの非ｃＡＭＰセカンドメッセンジャー分子の役
割は、現在未知である。

【００１０】 骨粗しょう症は、高齢集団の実質的な部分において、妊娠女性において、およ
び若年においてさえも観察される潜在的な損傷性（ｃｒｉｐｐｌｉｎｇ）骨格疾
患である。この疾患は、骨質量の減少、骨ミネラル密度（ＢＭＤ）の減少、骨強
度の減少および骨折の危険性の増大によって特徴付けられる。現在、エストロゲ
ン、カルシトニンおよびビスホスホネート、エチドロン酸塩およびアレンドロン
ン酸塩（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）が、骨吸収を減少させるそれらの作用を通し
て、種々のレベルの成功で、骨粗しょう症を処置するために使用されるが、この
疾患についての有効な治療は存在しない。副甲状腺ホルモンは、断続的に投与さ
れる場合、血液カルシウムおよびリン酸レベルを調節し、そして動物における骨
格に対する強力な同化（骨形成）効果（Ｓｈｅｎ，Ｖ．ら、Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉ
ｓｓｕｅ Ｉｎｔ．５０：２１４〜２２０（１９９２）；Ｗｈｉｔｅｆｉｌｄ，
Ｊ．Ｆ．ら、Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．５６：２２７〜２３１（１
９９５）およびＷｈｉｔｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕ
ｅ Ｉｎｔ．６０：２６〜２９（１９９７）、およびヒトにおける骨格に対する
強力な同化（骨形成）効果（Ｓｌｏｖｉｋ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎ
ｅｒ．Ｒｅｓ．１：３３７〜３８１（１９８６）；Ｄｅｍｐｓｔｅｒ，Ｄ．Ｗ．
ら、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１４：６９０〜７０９（１９９３）およびＤｅｍｐ
ｓｔｅｒ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１５：２６１（１９９４））を
有するので、ＰＴＨまたはＰＴＨ誘導体は、骨粗しょう症についての新規かつ効
果的な治療のための一番の候補である。

【００１１】 短縮型ＰＴＨ誘導体（例えば、ＰＴＨ（１〜３４）およびＰＴＨ（１〜３１）
）は、ほとんどのアッセイ系において活性であり、そして骨形成を促進する（Ｗ
ｈｉｔｅｆｉｌｄ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．５６：
２２７〜２３１（１９９５）；Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｃａｌｃｉｆ
．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．６０：２６〜２９（１９９７）；Ｓｌｏｖｉｋ，Ｄ．
Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１：３３７〜３８１（１９８６）
；Ｔｒｅｇｅａｒ，Ｇ．Ｗ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ９３：１３４９
〜１３５３（１９７３）；Ｒｉｘｏｎ，Ｒ．Ｈ．ら、Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ
．Ｒｅｓ．９：１１７９〜１１８９（１９９４）；Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｆ
．およびＭｏｒｌｅｙ，Ｐ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１
６：３７２〜３８６（１９９５）ならびにＷｈｉｔｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｃ
ａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．５８：８１〜８７（１９９６））。しかし
、これらのペプチドは、効率的な非経口送達のためにはなお大きすぎ、かつ低コ
ストである。ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰのさらにより小さな「最小化された」バー
ジョンの発見は、骨粗しょう症のための新しい処置を開発する試みにいて重要な
前進である。

【００１２】 １〜１４の領域において、アミノ酸の置換または欠失を有する、ＰＴＨ誘導体
およびＰＴＨｒＰ誘導体は、通常、活性の減少を示す（Ｔｒｅｇｅａｒ，Ｇ．Ｗ
．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ９３：１３４９〜１３５３（１９７３）；
Ｇｏｌｔｚｍａｎ，Ｄ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５０：３１９９〜３２
０３（１９７５）；Ｈｏｒｉｕｃｈｉ，Ｎ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：１０
５３〜１０５５（１９８３）およびＧａｒｄｅｌｌａ，Ｔ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１３１４１〜１３１４６（１９９１））。

【００１３】 いくつかの短いＮＨ₂末端ＰＴＨペプチドまたはＰＴＨｒＰペプチドは、以前
に調査されているが、活性は、全く検出されなかった。例えば、ｂＰＴＨ（１〜
１２）は、ラット腎臓膜において行われたアデニリルシクラーゼアッセイにおい
て不活性であり（Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ，Ｍ．、「Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ Ｈ
ｏｕｍｏｎｅ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖ
ｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓ」Ｐａｔｈｏｂｉｌｏｇｙ Ａｎｎｕａｌ，Ｉｏａ
ｃｈｉｍ，Ｈ．Ｌ．編、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８１
）、５３〜８４頁）、そしてＰＴＨｒＰ（１〜１６）は、クローニングされたラ
ットＰＴＨ−１レセプターを発現しているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ
）細胞において行われたＡＣアッセイにおいて不活性であった（Ａｚｕｒａｎｉ
，Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１４９３１〜１４９３６（１９９
６））。ＰＴＨの１５〜３４のドメインにおける残基が、レセプター結合親和性
に重要に寄与することが既知である。なぜなら、ＰＴＨ（１５〜３４）フラグメ
ントは、このレセプターに弱く結合するが、このペプチドは、ＡＣを活性化しな
いからである（Ｎａｕｓｓｂａｕｍ，Ｓ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
５５：１０１８３〜１０１８７（１９８０）およびＧａｒｄｅｌｌａ，Ｔ．Ｊ．
ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３２：２０２４〜２０３０（１９９３））
。

【００１４】 （発明の要旨） 比較的大きなサイズのネイティブなＰＴＨまたはＰＴＨｒＰは、骨粗しょう症
のための処置として、これらのペプチドの使用に対するチャレンジを提示する。
一般に、このサイズのタンパク質は、薬物としての使用に適切ではない。なぜな
ら、これは、単純な方法（例えば、鼻通気法）によって効果的に送達され得ない
からである。代わりに、注射が必要とされ、そしてＰＴＨの場合には、毎日また
はほぼ毎日の注射が、骨形成速度における増加を達成するために最も必要とされ
るようである。さらに、より大きなペプチドは、従来の合成化学法によって調製
するには技術的に困難であり、かつ高価である。組換えＤＮＡおよび細胞ベース
の発現系を用いる代替方法もまた、高価であり、外来タンパク質による混入に対
して潜在的に無防備であり、そして送達の問題を回避しない。

【００１５】 従って、当業者が、より大きなペプチドに基づき、そしてさらになお所望の生
物学的活性を保持する低分子アナログ（ペプチドまたは非ペプチドのいずれか）
を同定し得ることは有利である。活性は、インタクトなペプチドに対して初めは
弱くあり得るが、さらなる最適化は、効力および強度の増強を導き得る。

【００１６】 本発明は、ＰＴＨ（１−１４）／ＰＴＨｒＰ（１−１４）ペプチドおよびそれ
らの誘導体に関する。ＰＴＨ（１−１４）／ＰＴＨｒＰ（１−１４）ペプチド、
それらのフラグメント、それらの誘導体、それらの薬学的に受容可能な塩および
それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体を含む、本発明の化合物は、本明細書中以
降で、集合的に、「配列番号１の化合物およびその誘導体」といわれる。

【００１７】 詳細には、本発明は、ＰＴＨ（１−１４）およびＰＴＨｒＰ（１−１４）の合
成および／または組換えの生物学的に活性なペプチド誘導体を提供する。１つの
特定の実施形態では、本発明は、以下の式： （ａ）

【００１８】

【化１６】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体； から本質的になるペプチドに少なくとも８５％同一である、生物学的に活性なペ
プチドであって、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し上記のペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、生物学的に活性なペ
プチドを提供する。

【００１９】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明はまた、以下： （ａ）以下の式：

【００２０】

【化１７】 から本質的になるペプチドに少なくとも８５％同一の生物学的に活性なペプチド
； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；ならびに薬学的に受容可能なキ
ャリアを含む、薬学的組成物を提供する。

【００２１】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明はまた、以下： （ａ）以下の式：

【００２２】

【化１８】 から本質的になるペプチドに少なくとも８５％同一の生物学的に活性なペプチド
； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；ならびに薬学的に受容可能なキ
ャリアを含む、薬学的組成物を提供する。

【００２３】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明は、以下： （ａ）

【００２４】

【化１９】 あるいは （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
、そのフラグメント； からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する生物学的に活性なペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドから本質的になる核酸分子であって、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し上記のペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、核酸分子を提供する
。

【００２５】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明は、（２）生物学的に活性なペプ
チドをコードするポリヌクレオチド配列と作動可能に連結されている、(1)発現
制御領域を含む組換えＤＮＡ分子であって、ここで上記ペプチドは、以下： （ａ）

【００２６】

【化２０】 あるいは （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
、そのフラグメント； からなる群より選択され、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し上記のペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、組換えＤＮＡ分子を
提供する。

【００２７】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明は、骨質量における減少によって
特徴付けられる哺乳動物の状態を処置するための方法であって、この方法は、該
処置を必要とする被験体に、骨質量増加に有効な量の生物学的に活性なペプチド
ならびに薬学的に受容可能なキャリアを投与する工程を包含し、ここで上記ペプ
チドが、以下の式： （ａ）

【００２８】

【化２１】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体； から本質的になる群から選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
配列を含み、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し上記ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、方法を提供する。

【００２９】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明は、生物学的に活性なペプチドを
必要とする患者の処置のための方法であって、治療的に有効量のペプチドならび
に薬学的に受容可能なキャリアを投与する工程を包含し、ここで該ペプチドは、
以下： （ａ）以下の式：

【００３０】

【化２２】 から本質的になる、生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
、そのフラグメント； （ｃ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；あるいは （ｄ）それらの薬学的に受容可能な塩； から本質的になる群より選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
配列を含む、方法を提供する。

【００３１】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明は、生物学的に活性なペプチドの
必要性を有する患者の処置のための方法であって、治療的有効量のペプチドなら
びに薬学的に受容可能なキャリアを投与する工程を包含し、ここで上記ペプチド
は、以下： （ａ）以下の式：

【００３２】

【化２３】 から本質的になる、生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
む、そのフラグメント； （ｃ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；あるいは （ｄ）それらの薬学的に受容可能な塩、 から本質的になる群より選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
配列を含む、方法を提供する。

【００３３】 本発明のなおさらなる局面に従って、ＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターの変
更したかまたは過剰な作用から生じる医学的障害を処置するための方法であって
、患者のＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターの活性化を阻害するに十分な治療的
有効量の生物学的に活性なペプチドならびに薬学的に受容可能なキャリアを患者
に投与する工程を包含し、ここで上記のペプチドが、以下： （ａ）

【００３４】

【化２４】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体 から本質的になる群より選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
を含み、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し上記ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、方法が提供される。

【００３５】 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明はまた、骨再形成、骨吸収、およ
び／または骨リモデリングの速度を決定するための方法であって、有効量の、配
列番号１の標識ペプチドまたはその誘導体を、患者に投与する工程、および上記
の患者の骨中への上記ペプチドの取り込みを決定する工程を包含する方法を提供
する。このペプチドは、放射性標識、蛍光標識、生物発光標識、または化学発光
標識からなる群より選択される標識で標識され得る。適切な放射性標識の例は、 ^99m Ｔｃである。

【００３６】 本発明のなおさらなる局面に従って、１位〜９位での任意のアミノ酸の置換、
およびより特には、（当業者に公知のアッセイおよび以下に記載のアッセイによ
って決定されるように）ＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターをアンタゴナイズま
たはアゴナイズする、ＰＴＨ（１−１４）／ＰＴＨｒＰ（１−１４）ペプチドア
ナログの生物学的活性を破壊しない、アミノ酸の１０位、１１位、１２位、１３
位、および／または１４位でのアミノ酸の置換もまた、本発明の範囲内に含まれ
る。

【００３７】 （好ましい実施形態の詳細な説明） （定義） 以下の説明では、組換えＤＮＡ技術およびペプチド合成において用いられる多
数の用語を広範に利用する。明細書および特許請求の範囲（このような用語によ
って与えられるべき範囲を含む）の明瞭かつ一貫した理解を提供するために、以
下の定義を提供する。

【００３８】 クローニングベクター：宿主細胞において自律的に複製し得、かつ１または少
数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位によって特徴付けられる、プラスミドもし
くはファージのＤＮＡまたは他のＤＮＡ配列であって、この部位によって、この
ようなＤＮＡ配列は、ベクターの本質的な生物学的機能を失うことなく、決定可
能な様式で切断され得、そしてこの部位に、ＤＮＡフラグメントがスプライスさ
れて、その制限処理およびクローニングをもたらし得る。このクローニングベク
ターは、このクローニングベクターで形質転換された細胞の同定における使用に
適切なマーカーをさらに含み得る。例えば、マーカーは、テトラサイクリン耐性
またはアンピシリン耐性を提供する。

【００３９】 発現ベクター：クローニングベクターに類似するが、宿主中に形質転換された
後にベクター中にクローニングされた遺伝子の発現を増強し得るベクター。クロ
ーニングされた遺伝子は通常、プロモーター配列のような特定の制御配列の制御
下に置かれる（すなわち、作動可能に連結される）。プロモーター配列は、構成
性または誘導性のいずれかであり得る。

【００４０】 組換え宿主：本発明によれば、組換え宿主は、発現ベクターまたはクローニン
グベクター上の所望のクローニングされた遺伝子を含む、任意の原核生物宿主細
胞または真核生物細胞であり得る。この用語はまた、所望の遺伝子をその生物の
染色体またはゲノム中に含むように遺伝子操作された、原核生物細胞または真核
生物細胞を含むことを意味する。このような宿主の例については、Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９
）を参照のこと。好ましい組換え宿主は、本発明のＤＮＡ構築物で形質転換され
た真核生物細胞である。より詳細には、哺乳動物細胞が好ましい。

【００４１】 プロモーター：一般的に、開始コドンの近位に位置する、遺伝子の５’領域と
記載されるＤＮＡ配列。隣接遺伝子の転写は、プロモーター領域で開始される。
プロモーターが誘導性プロモーターである場合、転写速度は、誘導剤に応答して
増大する。対照的に、転写速度は、プロモーターが構成性プロモーターである場
合、誘導剤によって調節されない。プロモーターの例としては、ＣＭＶプロモー
ター（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＳＶ４０、ＭＭＴ
ＶおよびｈＭＴＩＩａプロモーター（米国特許第５，４５７，０３４号）、ＨＳ
Ｖ−１ ４／５プロモーター（米国特許第５，５０１，９７９号）ならびに前初
期ＨＣＭＶプロモーター（ＷＯ９２／１７５８１）が挙げられる。また、組織特
異的エンハンサーエレメントは、用いられ得る。さらに、このようなプロモータ
ーは、生物の組織特異的プロモーターおよび細胞特異的プロモーターを含み得る
。

【００４２】 ポリヌクレオチド：この用語は一般に、未改変のＲＮＡもしくはＤＮＡまたは
改変されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る、任意のポリリボヌクレオチドまた
はポリデオキシリボヌクレオチド（ｐｏｌｙｄｅｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉ
ｄｅ）を言及し得る。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖および二本鎖のＤ
ＮＡ、一本鎖領域および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖
のＲＮＡ、ならびに一本鎖領域および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖
であり得るか、より代表的には二本鎖または一本鎖領域および二本鎖領域の混合
物であり得る、ＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられるがこれ
らに限定されない。さらに、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡもしくはＤＮＡま
たはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域をいう。用語ポリヌクレオチド
はまた、１以上の改変された塩基を含むＤＮＡもしくはＲＮＡ、および安定性に
関してまたは他の理由について改善された骨格を有するＤＮＡもしくはＲＮＡを
含む。「改変された」塩基としては、例えば、トリチル化塩基およびイノシンの
ような普通でない塩基が挙げられる。種々の改変がＤＮＡおよびＲＮＡに行われ
ている；従って、「ポリヌクレオチド」は、天然に代表的に見出されるような、
化学的に、酵素的にまたは代謝的に改変された形態のポリヌクレオチド、ならび
にウイルスおよび細胞に特有の化学的形態のＤＮＡおよびＲＮＡを含む。「ポリ
ヌクレオチド」はまた、比較的短いポリヌクレオチド（しばしば、オリゴヌクレ
オチドと呼ばれる）を含む。

【００４３】 ポリペプチド：この用語は、ペプチド結合または改変されたペプチド結合（例
えば、ペプチド同配体）によって互いに連結された２以上のアミノ酸を含む任意
のペプチドまたはタンパク質を言及する。「ポリペプチド」は、短鎖（通常、ペ
プチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと呼ばれる）およびより長い鎖（一般
にタンパク質と呼ばれる）の両方を言及する。ポリペプチドは、遺伝子にコード
される２０種のアミノ酸以外のアミノ酸を含み得る。「ポリペプチド」は、自然
のプロセス（例えば、翻訳後プロセシング）または当該分野で周知である化学的
改変技術のいずれかによって改変されたアミノ酸配列を含む。このような改変は
、基本的教科書に十分に記載されており、そして単行本および調査文献に、より
詳細に記載されている。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端
またはカルボキシル末端を含むポリペプチドにおいてどこでも生じ得る。同じ型
の改変が所定のポリペプチドにおいて同じまたは種々の程度でいくつかの部位に
存在し得ることが認識される。また、所定のポリペプチドは、多くの型の改変を
含み得る。

【００４４】 ポリペプチドは分枝されてもよいし、そして分枝を伴ってまたは伴わずに環状
化されてもよい。環状の分枝したポリペプチドおよび分枝した環状ポリペプチド
は、翻訳後に天然プロセスから生じてもよいし、または合成方法によって作製さ
れてもよい。改変としては以下が挙げられる：アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−
リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチ
ドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホ
スファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環状化、ジスルフィド結合形成、
脱メチル化、共有架橋の形成、シスチの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミ
ル化、γカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨード
化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニ
ル化、ラセミ化、セレノイレーション（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化
、タンパク質へのトランスファーＲＮＡ媒介アミノ酸付加（例えば、アルギニル
化）、およびユビキチン結合。例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，第２版、Ｔ．Ｅ．Ｃｒ
ｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，１９９３およびＷｏｌｄ，Ｆ．，Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａ
ｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ
ａｎｄ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，１〜１２頁、Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ
ａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ、１９８３；Ｓｅｉｆｔｅｒら、「Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅ
ｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｆａ
ｃｔｏｒｓ」Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６〜６４６
（１９９０）ならびにＲａｔｔａｎら「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：
Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ
Ａｇｉｎｇ」Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３：４８〜６２（１９９２
）を参照のこと。

【００４５】 相同性／非相同性： ２つの核酸分子は、ＨＡＳＨ−コーディングアルゴリズム（Ｗｉｌｂｅｒ，Ｗ．
Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８
０：７２６〜７３０（１９８３））によって決定される場合、それらのヌクレオ
チド配列が４０％より大きい類似性を共有する場合、「相同性（ｈｏｍｏｌｏｇ
ｏｕｓ）」であると考えられる。２つの核酸分子は、それらのヌクレオチド配列
が、４０％未満の類似性を共有する場合、「非相同性」であると考えられる。

【００４６】 単離した（単離された）（Ｉｓｏｌａｔｅｄ）： 天然状態から「ヒトの手によって」変化したことを意味する用語。天然に「単
離した」組成物または物質が生じる場合、それはその元来の環境から変化したか
もしくは取り出されたかまたはその両方ともである。例えば、生存する動物にお
いて天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていな
いが、その天然状態の共存する物質から分離された同じポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、その用語が本明細書において使用されるとおり「単離されてい
る」。従って、組換え宿主細胞内で生成されるおよび／または組換え宿主細胞内
に含まれるポリペチドまたはポリヌクレオチドは、本発明の目的のために単離さ
れたとみなされる。また、「単離されたポリペプチド」または「単離されたポリ
ヌクレオチド」と意図されるのは、部分的にまたは実質的に、組換え型宿主細胞
から、またはネイティブな供給源から精製されたポリペチドまたはポリヌクレオ
チドである。例えば、配列番号１の化合物の組換え的に生成されたバージョンお
よびそれの誘導体は、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ（Ｇｅｎｅ ６７：３１
−４０（１９８８）に記載されている一段法（ｏｎｅ−ｓｔｅｐ ｍｅｔｈｏｄ
）によって、実質的に精製され得る。

【００４７】 「単離された（単離した）（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、ＤＮＡが、本発明の
ＤＮＡが誘導される生物の天然に存在するゲノム（もしあれば）において、本発
明のＤＮＡをコードしている遺伝子にすぐ隣接するそれらの遺伝子のコード配列
を含まないことを意味する。単離したＤＮＡは、一本鎖であっても二本鎖であっ
てもよく、そしてゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え型ハイブリッドＤＮＡまたは
合成ＤＮＡであってもよい。それは、配列番号１の化合物をコードしているネイ
ティブなＤＮＡの塩基配列およびその誘導体と同一でもよく、または一つ以上の
ヌクレオチドの欠失、付加または置換によってこのような配列と異ってもよい。
本発明の一本鎖ＤＮＡは一般に少なくとも８つのヌクレオチド長（好ましくは少
なくとも１８ヌクレオチド長、そしてより好ましくは、少なくとも３０ヌクレオ
チド長）である。これは、配列番号１の化合物をコードするＤＮＡ分子およびそ
れらの誘導体の全長（すなわち、４２ヌクレオチド）にわたる；それらは、好ま
しくは、ハイブリダイゼーションプローブとしての用途のために検出可能に標識
され、そしてアンチセンスであってもよい。

【００４８】 高ストリンジェンシー： 例えば、「高ストリンジェンシー」は、ｃＤＮＡの単離のために記載されるよう
な条件を意味するいる（また、本明細書において参考として援用されるＭｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ（１９８９）のＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓを参照のこと）。本発
明のＤＮＡは、本発明のペプチドをコードしているＤＮＡ配列（例えば、配列番
号１の化合物、およびその誘導体）を含むベクター［それは、精製された調製物
（例えば、ライブラリを作製するベクターの混合物から分離されるベクター）と
して提供され得る］およびベクター（または上記の単離したＤＮＡ）を含む細胞
または本質的に同質の細胞の集団（例えば、原核細胞または哺乳動物細胞のよう
な真核細胞）に組み込まれ得る。

【００４９】 同一性： この用語は、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の指標をいう。一
般に、最高の大きさのマッチが得られるように、配列は整列される。「同一性」
とは、本来、当該分野で認識された意味を有し、そして公表された技術を用いて
算出され得る。（例えば、以下を参照のこと：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ、Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍ
ｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃ
ｔｓ、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｗ．編 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ Ｄａｔａ．Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ
，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４；
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７
；ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋ
ｏｖ，Ｍ．および Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１）。２つのポリヌクレオチド配列またはポリ
ペチド配列の間の同一性を測定するための多くの方法が存在するが、用語「同一
性」は、当業者に周知である（Ｃａｒｉｌｌｏ、Ｈ．およびＬｉｐｔｏｎ，Ｄ．
ＳＩＡＭＪ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３ （１９８８））。２
つの配列の間の同一性または類似性を決定するために通常用いられる方法として
は、「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｈｕｇｅ Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ」Ｍａｒｔｉｎ Ｊ．
Ｂｉｓｈｏｐ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、１９９
４およびＣａｒｉｌｌｏ，ＨおよびＬｉｐｔｏｎ，Ｄ．、ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８）に開示される方法が挙げられ
るがこれらに限定されない。同一性および類似性を決定するための方法は、コン
ピュータープログラムにおいて確認される。２つの配列の間の同一性および類似
性を決定するための好ましいコンピュータープログラム方法としては、ＧＣＧプ
ログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２（ｉ）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡ
ＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．Ｆ．ら、Ｊ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉｏｌ
２１５：４０３（１９９０））が挙げられるがこれらに限定されない。

【００５０】 従って、本明細書において用いられる場合、用語「同一性」は、試験ポリペプ
チドと参照ポリペプチドとの間の比較を示す。より詳細には、参照試験ポリペプ
チドは、参照ポリペプチドに８５％以上同一である任意のポリペプチドと規定さ
れる。本明細書において用いる場合、用語少なくとも８５％同一とは、参照ポリ
ペプチドに対して８５〜９９．９９％同一であることをいう。８５％以上のレベ
ルの同一性とは、１００アミノ酸の試験ポリヌクレオチド長および参照ポリヌク
レオチド長の例示目的と仮定した場合、試験ポリペプチドにおける１５％未満（
すなわち、１００のうち１５）のアミノ酸が参照ポリペプチドのアミノ酸と異な
るという事実を示す。このような差異は、本発明のアミノ酸配列の全長にわたっ
て無作為に分布された点変異として示され得るかまたは、最大許容数２／１４ア
ミノ酸相違数（約８５％同一性）まで長さを変化させる１つ以上の位置において
クラスター化され得る。差異はアミノ酸置換または欠失として規定される。

【００５１】 フラグメント： 配列番号１の化合物またはその誘導体のような分子の「フラグメント」とは、
これらの分子の任意のポリペプチドサブセットをいうことを意味する。

【００５２】 機能的誘導体： 用語「誘導体」とは、分子の「改変体（ｖａｒｉａｎｔ）」「誘導体（ｄｅｒ
ｉｖａｔｉｖｅｓ）」または「化学的誘導体（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｒｉｖａ
ｔｉｖｅｓ）」を含むことを意図する。配列番号１の化合物またはそれの誘導体
のような分子の「改変体」とは、分子全体またはそれのフラグメントのいずれか
に実質的に類似の分子をいうことを意味する。配列番号１の化合物またはそれら
の誘導体のような分子の「アナログ（ａｎａｌｏｇ）」は、配列番号１の分子ま
たはそれらのフラグメントのいずれかに実質的に類似の非天然の分子をいうこと
を意味する。

【００５３】 分子が別の分子と「実質的に類似である」といわれるのは、両方の分子のアミ
ノ酸の配列が、実質的に同じものである場合、および両方の分子が、類似した生
物学的活性度を所有する場合である。従って、２つの分子が類似した活性を所有
するという条件では、分子のうちの１つが他方で見出されないさらなるアミノ酸
残基を含むか、またはアミノ酸残基の配列が同一でない場合でさえも、その語が
本願明細書において使われる場合、それらは改変体、誘導体またはアナログ（類
似体）と考えられる。

【００５４】 本明細書中で用いられる場合、分子は、それが通常は、分子の一部ではない、
さらなる化学部分を含む場合に、別の分子の「化学誘導体」であると言われる。
このような部分は、分子の溶解性、吸着、生物学的半減期などを改善し得る。こ
の部分は、代替的に、分子の毒性を減少させ得るか、分子の任意の望まれない副
作用などを排除し得るか、または減弱し得る。このような効果を媒介し得る部分
の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ（１９８０）に開示され、そして当業者に明らかである。

【００５５】 （タンパク質の生物学的活性）：この表現は、配列番号１の化合物またはその
誘導体の代謝機能または生理学的機能（同様の活性、もしくは改善された活性、
または低下した望まれない副作用を有するそれらの活性を含む）をいう。配列番
号１の化合物またはその誘導体の、抗原性活性および免疫原性活性もまた含まれ
る。

【００５６】 （融合タンパク質）：用語「融合タンパク質」によって、そのＮ末端に連結し
た「選択的切断部位」を有するかまたは有さないかのいずれかの、配列番号１の
化合物、またはその誘導体を含む、融合タンパク質が意図される。この選択的切
断部位は、次いで、さらなるアミノ酸リーダーポリペプチド配列に連結される。

【００５７】 （選択的切断部位）：用語「選択的切断部位」とは、予想可能な様式で、化学
薬品または酵素のいずれかを用いて、選択的に切断され得るアミノ酸残基をいう
。選択的な酵素切断部位とは、タンパク質分解酵素によって認識されかつ加水分
解されるアミノ酸またはペプチドの配列である。このような部位の例としては、
制限なしに、トリプシン切断部位またはキモトリプシン切断部位が挙げられる。

【００５８】 （リーダー配列）：用語「リーダー配列」によって、配列番号１の化合物に連
結し、かつ選択的切断部位および配列番号１の化合物に融合した融合タンパク質
として宿主細胞において発現される、ポリヌクレオチド配列を意図される。用語
「リーダーポリペプチド」は、融合タンパク質において得られるような、「リー
ダー配列」の発現された形態を記載する。

【００５９】 融合タンパク質（これは、それが過剰発現される場合に、しばしば、不溶性で
あり、かつ封入体において見出される）は、当該分野において周知の方法によっ
て、他の細菌タンパク質から精製される。好ましい実施形態において、不溶性融
合タンパク質は、細胞溶解後に遠心分離および洗浄され、そしてグアニジンＨＣ
ｌを用いて再溶解される。それは、透析による変性剤の除去後に可溶性のままで
あり得る。（屈折タンパク質の精製については、Ｊｏｎｅｓ、米国特許第４，５
１２，９２２号；Ｏｌｓｏｎ、米国特許第４，５１８，５２６号；ならびにＢｕ
ｉｌｄｅｒら、米国特許第４，５１１，５０２号および同第４，６２０，９４８
を参照のこと）。

【００６０】 配列番号１の組換え産生された化合物、またはその誘導体は、種々の方法論の
いずれかの使用を通じて、可溶化された融合タンパク質から、天然の夾雑物を実
質的に含まないように精製され得る。本明細書中で用いられる場合、化合物は、
それが、細菌宿主細胞または真核生物宿主細胞における発現の後に、共に見出さ
れる物質から実質的に精製されている場合に、「天然の夾雑物を実質的に含まな
い」といわれる。配列番号１の化合物またはその誘導体は、標準的なクロマトグ
ラフィー分離技術の適用を通じて精製され得る。

【００６１】 あるいは、このペプチドは、免疫アフィニティークロマトグラフィーを用いて
精製され得る（Ｒｏｔｍａｎ，Ａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ
ａ ６４１：１１４−１２１（１９８１）；Ｓａｉｒａｍ，Ｍ．Ｒ．Ｊ．Ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇ ２１５：１４３−１５２（１９８１）；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｌ．Ｓ
．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１：６４１０−６４１５（１９８２）；Ｖ
ｏｃｋｌｅｙ，Ｊ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２１７：５３５−５４２（１９８
４）；Ｐａｕｃｈａ，Ｅ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５１：６７０−６８１（１９８
４）；およびＣｈａｎｇ，Ｐ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈ．１０：２６１−
２６８（１９８５））。

【００６２】 部分的精製または実質的精製の後、融合タンパク質は、切断部位に対応する酵
素を用いて酵素的に処理される。あるいは、そのより不純な状態において融合タ
ンパク質は、たとえ屈折形態であっても、酵素を用いて処理され得る。必要とさ
れる場合、得られた配列番号１の成熟化合物、またはその誘導体は、さらに精製
され得る。酵素処理の条件は、当業者に公知である。

【００６３】 （遺伝子治療）：治療の手段は、生物の遺伝子発現の正常なパターンを変化さ
せることに関する。一般に、組換えポリヌクレオチドは、生物の細胞または組織
に導入されて、遺伝子発現の変化をもたらす。

【００６４】 （宿主動物）：トランスジェニック動物、これらの生殖細胞および体細胞の全
ては、本発明のＤＮＡ構築物を含む。このようなトランスジェニック動物は、一
般に脊椎動物である。好ましい宿主動物は、哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類動
物、マウス、ヒツジ、ブタ、ウシ、ヤギ、モルモット、げっ歯類動物（例えば、
ラット）など）である。用語、宿主動物はまた、胚段階および胎仔段階を含む、
発生の全ての段階における動物を含む。

【００６５】 （Ｉ．配列番号１の化合物およびその誘導体−構造的特徴ならびに機能的特徴
） 本発明者らは、生物活性を保持し、かつ簡便な非注射法により送達され得るの
に十分に小さい、ＰＴＨの新規の「最小型」改変体を本明細書中に記載する。新
規のペプチドは、ネイティブのＰＴＨの１〜１４配列、またはそのより短い改変
体に対応し、従って、２，０００ダルトン未満の分子量を有する。本発明は、ネ
イティブＰＴＨ（１〜１４）ペプチド、ＰＴＨ関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）の１
〜１４配列、およびアミノ酸組成またはアミノ酸鎖長における改変により、これ
らのペプチドから誘導されるペプチド誘導体に関する。

【００６６】 ネイティブＰＴＨ（１〜１４）ペプチドの１次アミノ酸配列（Ｎ末端〜Ｃ末端
）は、ＳｅｒＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｎＬｅｕＭｅｔＨｉｓＡｓｎＬｅｕ
ＧｌｙＬｙｓＨｉｓ（配列番号３）であるが、ネイティブＰＴＨｒＰ（１〜１４
）ペプチドの１次アミノ酸配列（Ｎ末端〜Ｃ末端）は、ＡｌａＶａｌＳｅｒＧｌ
ｕＨｉｓＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓＡｓｐＬｙｓＧｌｙＬｙｓＳｅｒ（配列番号
４）である。従って、配列番号３と４との間に共通するペプチド配列は、以下の
一般式からなる： Ｘ₀₁ＶａｌＳｅｒＧｌｕＸ₀₂ＧｌｎＬｅｕＸ₀₃ＨｉｓＸ₀₄Ｘ₀₅ＧｌｙＬｙｓＸ ₀₆ （配列番号１） ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａ； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓ； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、またはＮｌｅ； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐ； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓ；および Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒ； ただし、このペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１〜１４）ではない。

【００６７】 従って、上記の一般式に基づいて、本発明は、配列番号１の生物学的に活性な
化合物およびその誘導体を提供する。１つの実施形態において、本発明は、以下
の式から本質的になるペプチドに、少なくとも８５％同一の生物学的に活性なペ
プチドを提供する： （ａ） Ｘ₀₁ＶａｌＳｅｒＧｌｕＸ₀₂ＧｌｎＬｅｕＸ₀₃ＨｉｓＸ₀₄Ｘ₀₅Ｇｌｙ
ＬｙｓＸ₀₆（配列番号１）； （ｂ） アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を
含むそのフラグメント； （ｃ） その薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ） そのＮ−誘導体またはＣ誘導体 ここで、 Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａ； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓ； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、またはＮｌｅ； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐ； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓ；および Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒ、 ただし、このペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１〜１４）ではない。

【００６８】 タンパク質産物の場合、本発明の配列番号１の化合物またはその誘導体は、液
相ペプチド合成または固相ペプチド合成の技術による産生に従う。固相ペプチド
合成技術は、特に、ヒトＰＴＨの産生に首尾良く適用されており、そして本発明
の配列番号１の化合物またはその誘導体の産生のために有用であり得る（ガイダ
ンスについては、Ｋｉｍｕｒａら、前出、を参照のこと、およびＦａｉｒｗｅｌ
ｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：２６９１（１９８３）を参照のこと）。比較的大
きな規模のヒトＰＴＨを産生することの成功は、Ｇｏｕｄら、Ｊ．Ｂｏｎｅ．Ｍ
ｉｎ．Ｒｅｓ．６（８）：７８１（１９９１）（本明細書中で参考として援用さ
れる）により報告されている。合成ペプチド合成アプローチは、一般的に、自動
合成機および固相として適切な樹脂の使用を必要とする。この樹脂は、配列番号
１の所望の化合物またはその誘導体のＣ末端アミノ酸に付着される。次いで、Ｎ
末端方向での、ペプチドの伸長は、代表的には、ＦＭＯＣ−またはＢＯＣ−のい
ずれかに基づく化学プロトコルを用いて、合成が完了するまで、適切に保護され
た形態の次に所望されるアミノ酸を、連続的にカップリングすることにより達成
される。次いで、保護基は、通常、樹脂からのペプチドの切断と同時に、ペプチ
ドから切断され、次いでこのペプチドは、従来技術（例えば、溶媒としてアセト
ニトリルおよびイオン対形成剤（ｉｏｎ−ｐａｉｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）として
トリフルオロ酢酸を用いる逆相ＨＰＬＣによる）を用いて単離され、そして精製
される。このような手順は、一般に多数の刊行物に記載されており、そして例え
ば、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ，「Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ（１９８４）を、参照されても良い。ペプ
チド合成アプローチが、遺伝的にコードされないアミノ酸を組み込む、配列番号
１およびその誘導体の改変体の生成のために必要とされる。

【００６９】 本発明のさらなる局面では、１〜９位の任意のアミノ酸置換、そしてより詳細
には、アミノ酸１０位、１１位、１２位、１３位、および／または１４位でのこ
れらのアミノ酸置換であって、ＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターをアンタゴナ
イズまたはアゴナイズする（当業者に公知のアッセイおよび以下に考察されるア
ッセイにより決定されるような）ために、ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰペプチドアナログ
の生物学的活性を破壊しない置換もまた、本発明の範囲内に含まれる。

【００７０】 ウシＰＴＨの合成アナログ、ＰＴＨ（３−３４）は、インビトロにおける強力
なＰＴＨアンタゴニストとして認識されている。Ｎ末端アミノ酸１〜２および１
〜７を欠くＰＴＨの改変体は、アゴニスト活性を欠き、そしてアンタゴニスト活
性の能力があることが示された（Ｂｏｒｎ，Ｗ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２
３：１８４８−１８５３（１９８８））。本発明の配列番号１の好ましい強力な
アンタゴニスト改変体は、Ｎ末端で短縮化（ｔｒｕｎｃａｔｅ）された改変体で
ある。

【００７１】 改変体が、Ｎ末端で１つのアミノ酸により短縮化される場合、それはアミノ酸
残基＃１を欠くが、アミノ酸残基＃２〜１４を含むという点で、ＰＴＨまたはＰ
ＴＨｒＰ（２−１４）と称される。改変体がＣ末端で１つのアミノ酸により短縮
化される場合、それはアミノ酸残基＃１４を欠くが、アミノ酸残基＃１〜１３を
含むという点で、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰ（１−１３）と称される。

【００７２】 本発明の別の局面に従って、置換基は、当該分野において公知の標準的方法に
よって、配列番号１の化合物またはその誘導体のＮ末端アミノ酸の遊離アミンに
付加され得る。例えば、アルキル基（例えば、Ｃ_1-12アルキル）は、還元的アル
キル化を使用して付加され得る。ヒドロキシアルキル基（例えば、Ｃ_1-12ヒドロ
キシアルキル）もまた、還元的アルキル化を使用して付加され得、ここでは遊離
ヒドロキシ基をｔ−ブチルエステルで保護する。アシル基（例えば、ＣＯＥ₁）
は、遊離酸（例えば、Ｅ₁ＣＯＯＨ）をＮ末端アミノ酸の遊離アミン（ａｍｉｎ
ｏ）にカップリングすることにより、付加され得る。配列番号１の化合物もしく
はその誘導体の二次構造または三次構造、または安定性を変更し、なお生物学的
活性を保持する、配列番号１のそれらの化合物およびその誘導体もまた、本発明
の範囲内と意図される。このような誘導体は、ラクタム環化、ジスルフィド結合
、または当業者に公知の他の手段を通して達成され得る。

【００７３】 なかでも好ましい実施形態は、ＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターのアゴニス
トとして作用し得るそれらの化合物である。特に、好ましい実施形態は、Ｘ₀₁が
Ａｌａであり；Ｘ₀₂がＩｌｅであり；Ｘ₀₃がＭｅｔであり；Ｘ₀₄がＡｓｎであり
；Ｘ₀₅がＬｅｕであり；そしてＸ₀₆がＨｉｓであるそれらの化合物である。従っ
て、この好ましい実施形態のアミノ酸配列は、ＡｌａＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅ
ＧｌｎＬｅｕＭｅｔＨｉｓＡｓｎＬｅｕＧｌｙＬｙｓＨｉｓ（配列番号５）また
はその誘導体である。

【００７４】 好ましい実施形態の別のセットは、配列番号１のカルボキシ末端で５つのアミ
ノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、ここでＸ₀₁はＡｌａであり；Ｘ₀₂は
Ｉｌｅであり；そしてＸ₀₃はＭｅｔである。従って、この好ましい実施形態のア
ミノ酸配列は、ＡｌａＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｎＬｅｕＭｅｔＨｉｓ（配
列番号６）またはその誘導体である。

【００７５】 好ましい実施形態の別のセットは、Ｘ₀₁がＡｌａであり；Ｘ₀₂がＩｌｅであり
；Ｘ₀₃がＬｅｕであり；Ｘ₀₄がＡｓｐであり；Ｘ₀₅がＬｙｓであり；そしてＸ₀₆ がＳｅｒであるそれらの化合物である。従って、この好ましい実施形態のアミノ
酸配列は、ＡｌａＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓＡｓｐＬ
ｙｓＧｌｙＬｙｓＳｅｒ（配列番号２）またはその誘導体である。

【００７６】 好ましい実施形態の別のセットは、配列番号１のカルボキシ末端で５つのアミ
ノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、ここでＸ₀₁はＡｌａであり；Ｘ₀₂は
Ｉｌｅであり；そしてＸ₀₃はＬｅｕである。従って、この好ましい実施形態のア
ミノ酸配列は、ＡｌａＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓ（配
列番号７）またはその誘導体である。

【００７７】 好ましい実施形態の別のセットは、配列番号１のカルボキシ末端で５つのアミ
ノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、ここでＸ₀₁はＡｌａであり；Ｘ₀₂は
Ｈｉｓであり；そしてＸ₀₃はＬｅｕである。従って、この好ましい実施形態のア
ミノ酸配列は、ＡｌａＶａｌＳｅｒＧｌｕＨｉｓＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓ（配
列番号８）またはその誘導体である。

【００７８】 好ましい実施形態の別のセットは、Ｘ₀₁がＳｅｒであり；Ｘ₀₂がＨｉｓであり
；Ｘ₀₃がＬｅｕであり；Ｘ₀₄がＡｓｐであり；Ｘ₀₅がＬｙｓであり；そしてＸ₀₆ がＳｅｒであるそれらの化合物である。従って、この好ましい実施形態のアミノ
酸配列は、ＳｅｒＶａｌＳｅｒＧｌｕＨｉｓＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓＡｓｐＬ
ｙｓＧｌｙＬｙｓＳｅｒ（配列番号９）またはその誘導体である。

【００７９】 好ましい実施形態の別のセットは、配列番号１のカルボキシ末端で５つのアミ
ノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、ここでＸ₀₁はＳｅｒであり；Ｘ₀₂は
Ｈｉｓであり；そしてＸ₀₃はＬｅｕである。従って、この好ましい実施形態のア
ミノ酸配列は、ＳｅｒＶａｌＳｅｒＧｌｕＨｉｓＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓ（配
列番号１０）またはその誘導体である。

【００８０】 なかでも好ましい実施形態は、ＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターのアンタゴ
ニストとして作用し得るそれらの化合物である。特に、好ましい実施形態は、配
列番号１のアミノ末端で単一のアミノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、
ここでＸ₀₂はＩｌｅであり；Ｘ₀₃はＭｅｔであり；Ｘ₀₄はＡｓｎであり；Ｘ₀₅は
Ｌｅｕであり；そしてＸ₀₆はＨｉｓである。従って、この好ましい実施形態のア
ミノ酸配列は、ＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｎＬｅｕＭｅｔＨｉｓＡｓｎＬｅ
ｕＧｌｙＬｙｓＨｉｓ（配列番号１１）またはその誘導体である。

【００８１】 好ましいアンタゴニストの実施形態のさらに別のセットは、配列番号１のアミ
ノ末端で単一のアミノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、ここでＸ₀₂はＩ
ｌｅであり；Ｘ₀₃はＬｅｕであり；Ｘ₀₄はＡｓｐであり；Ｘ₀₅はＬｙｓであり；
そしてＸ₀₆はＳｅｒである。従って、この好ましい実施形態のアミノ酸配列は、
ＶａｌＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓＡｓｐＬｙｓＧｌｙＬｙｓ
Ｓｅｒ（配列番号１２）またはその誘導体である。

【００８２】 好ましいアンタゴニストの実施形態のさらに別のセットは、配列番号１のアミ
ノ末端で単一のアミノ酸の欠失を有するそれらの化合物であり、ここでＸ₀₂はＨ
ｉｓであり；Ｘ₀₃はＬｅｕであり；Ｘ₀₄はＡｓｐであり；Ｘ₀₅はＬｙｓであり；
そしてＸ₀₆はＳｅｒである。従って、この好ましい実施形態のアミノ酸配列は、
ＶａｌＳｅｒＧｌｕＨｉｓＧｌｎＬｅｕＬｅｕＨｉｓＡｓｐＬｙｓＧｌｙＬｙｓ
Ｓｅｒ（配列番号１３）またはその誘導体である。

【００８３】 （配列番号１の化合物およびその誘導体の生物学的特徴付け） 配列番号１の化合物およびその誘導体の生物学的特性の機能的特徴付けを、リ
ガンドに刺激されるｃＡＭＰ蓄積を測定するバイオアッセイにより実施した。

【００８４】 （Ａ．配列番号１の化合物またはその誘導体によるサイクリックＡＭＰ蓄積の
刺激） 細胞内ｃＡＭＰ蓄積を、以前に記載されたように（Ａｂｏｕ−Ｓａｍｒａら、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：１１２９、１９８６）測定した。２４ウェル
プレート中の細胞を、０．１％ＢＳＡおよび２ｍＭ ＩＢＭＸを含有する培養培
地でリンスした。次いで、細胞を、配列番号１の化合物またはその誘導体と共に
、２１℃で６０分間インキュベートした。この上清を取り除き、そしてプレート
全体をドライアイス粉末内に配置することにより、細胞を迅速に凍結した。１ｍ
ｌの５０ｍＭ ＨＣｌ中で細胞を解凍することによって細胞内ｃＡＭＰを抽出し
、そして抗ｃＡＭＰ抗体（例えば、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）を使
用する特異的ラジオイムノアッセイによって、分析した。ｃＡＭＰについてのト
レーサーとして使用されたｃＡＭＰアナログ（２’−Ｏ−モノスクシニル−アデ
ノシン ３’：５’−サイクリックモノホスフェートチロシルメチルエステル（
Ｓｉｇｍａから得られた））は、クロラミンＴ方法によりヨウ素化された。遊離
ヨウ素を、Ｃ１８ Ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒ
ｄ、Ｍａｓｓ．）上にヨウ素化ｃＡＭＰアナログを吸着させることによって、除
去した。ｄＨ₂Ｏでの洗浄後、ヨウ素化ｃＡＭＰアナログを、４０％アセトニト
リル（ＡＣＮ）および０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）でＳｅｐ−ｐａｋカ
ートリッジから溶出した。ヨウ素化ｃＡＭＰアナログを凍結乾燥し、１ｍｌの０
．１％ ＴＦＡ中で再構成させ、そしてＣ１８逆相ＨＰＬＣカラム（Ｗａｔｅｒ
ｓ）内に注入した。このカラムを０．１％ ＴＦＡ中において１０％ ＡＣＮで
平衡化し、そして０．１％ ＴＦＡ中での１０〜３０％のＡＣＮの勾配で溶出し
た。これは、非ヨウ素化ｃＡＭＰアナログからの、モノヨウ素化ｃＡＭＰアナロ
グの分離を可能にする。トレーサーは、−２０℃で保存された場合に４ヶ月間ま
で安定である。アッセイに使用される標準であるアデノシン３’：５’−サイク
リックモノホスフェートを、Ｓｉｇｍａから購入した。サンプル（ＨＣｌ抽出物
の１−１０ ８２ １）または標準（０．０４〜１００ ｆｍｏｌ／チューブ）
を、５０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中に希釈し、そしてトリエチルア
ミンおよび無水酢酸（２：１ 容量：容量）の混合物１０μｌでアセチル化した
。アセチル化の後、ｃＡＭＰ抗血清（１００μｌ）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）、
５ｍＭ ＥＤＴＡおよび１％正常ウサギ血清中に作製されたストック溶液（１：
４０００）から添加した。トレーサーを、０．１％ ＢＳＡを有するＰＢＳ（ｐ
Ｈ７．４）中に希釈し、そして添加した（２０，０００ｃｐｍ／チューブ）。ア
ッセイを、４℃で一晩インキュベートした。結合したトレーサーを、１００μｌ
のヤギ抗ウサギ抗血清（ＰＢＳ中で１：２０）および１ｍｌの７％ポリエチレン
グリコール（ＭＷ ５０００〜６０００）を添加すること、２０００ｒｐｍで３
０分間４℃にて遠心分離することにより沈殿させた。上清を取り出し、そして結
合した放射能を、γ線計数器（Ｍｉｃｒｏｍｅｄｉｃ）で計数した。ｃＡＭＰデ
ータを計算するために、エクセルのスプレッドシートでロジット計算を実施した
。代表的に、アッセイ感度は、０．１ ｆｍｏｌ／チューブであり、そしてトレ
ーサーの５０％が置き換わる標準濃度は、５ ｆｍｏｌ／チューブである。

【００８５】 （Ｂ．ＣＯＳ細胞上で発現されるクローン化されたレセプターへの配列番号１
の化合物またはその誘導体の結合） 以下に記載されたｃＡＭＰ蓄積アッセイに加えて、配列番号１の化合物または
その誘導体はまたヨウ素化され得、そして一過的にトランスフェクトしたＣＯＳ
細胞におけるラジオレセプターに基づくアッセイにおいて使用され得る。ＣＯＳ
−７細胞を、１５ｃｍプレートにおいて、ＤＭＥＭ、１０％熱非働化ＦＢＳ、１
０ｍｇ／Ｌゲンタマイシン中で、８０〜９０％コンフルエントまで増殖させる。
ＤＥＡＥ／デキストラン方法（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出）による、１〜２μｇ
のプラスミドＤＮＡでのトランスフェクションの２４時間後に、細胞をトリプシ
ン処理し、そして５×１０⁴細胞／ｃｍ²の細胞濃度でマルチウェルプラスチック
ディッシュ（１６または３５ｍｍ直径、Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍ
ａｓｓ．）に配置した。細胞数は、トランスフェクション後にわずかにのみ増加
した。さらなる４８時間の連続した培養の後、ラジオレセプターアッセイを実施
する。研究を開始する直前に、培養培地を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
７．７）、１００ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ₂、５ｍＭ ＫＣＬ、０．
５％熱非働化ウシ胎仔血清（ＧＩＢＣＯ）、および５％熱非働化ウシ血清（ＫＣ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、Ｌｅｎｅｘａ、Ｋａｎｓ．）を含有する緩
衝液と置換した。他に示さない限り、４×１０⁵ｃｐｍ／ｍｌ（９．６×１０^-11 Ｍ）の¹²⁵Ｉ標識化［Ａｌａ¹］ＰＴＨ（１−１４）アミドまたは¹²⁵Ｉ標識化［
Ｎｌｅ⁸］ＰＴＨ（１−１４）と共に、この緩衝液中で１５℃で４時間インキュ
ベートした細胞を用いて、研究を実施した。

【００８６】 （ＩＩＩ．ベクター、宿主細胞、および組換え発現） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、および本発明のベ
クターで遺伝子操作された宿主細胞、ならびに組換え技術による本発明のポリペ
プチドの産生に関する。細胞を含まない翻訳系もまた、本発明のＤＮＡ構築物由
来のＲＮＡを使用して、このようなタンパク質を産生するために使用され得る。

【００８７】 組換え産生のために、宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドについての発現
系またはその部分を組込むように遺伝子操作され得る。宿主細胞へのポリヌクレ
オチドの導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキスト
ラン媒介性トランスフェクション、トランスベクション（ｔｒａｎｓｖｅｃｔｉ
ｏｎ）、微量注入、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポ
レーション、形質導入、切屑負荷（ｓｃｒａｐｅ ｌｏａｄｉｎｇ）、弾道的導
入、または感染のような、多くの標準的実験室マニュアル（例えば、Ｄａｖｉｓ
ら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
（１９８６）およびＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））に記載される方法によって、もたらさ
れ得る。

【００８８】 適切な宿主の代表的な例としては、細菌細胞（例えば、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｉ細胞、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ細胞、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ細胞およびＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞）；真菌細胞
（例えば、酵母細胞およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ細胞）；昆虫細胞（例えば、
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞）；
動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｃ１２７細胞、３
Ｔ３細胞、ＢＨＫ細胞、２９３細胞およびＢｏｗｅｓ黒色腫細胞）；ならびに植
物細胞が挙げられる。

【００８９】 非常に種々の発現系が、使用され得る。このような系としては、特に、染色体
由来の系、エピソーム由来の系およびウイルス由来の系（例えば、細菌性プラス
ミド由来のベクター、バクテリオファージ由来のベクター、トランスポゾン由来
のベクター、酵母エピソーム由来のベクター、挿入エレメント由来のベクター、
酵母染色体エレメント由来のベクター、ウイルス（例えば、バキュロウイルス、
パポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、
家禽ポックスウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス）由来のベク
ター、ならびにそれらの組合せ由来のベクター（例えば、プラスミドおよびバク
テリオファージ遺伝的エレメント（例えば、コスミドおよびファージミド）由来
のベクター）が挙げられる。発現系は、発現を調節しならびに発現を生じる制御
領域を含み得る。一般に、宿主においてポリペプチドを産生するためにポリヌク
レオチドを維持、増殖または発現するために適切な任意の系またはベクターが、
使用され得る。適切なヌクレオチド配列は、任意の種々の周知および慣用的な技
術（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（前出）に示される技術）によって、発現
系へ挿入され得る。

【００９０】 ＲＮＡベクターはまた、本発明に開示される配列番号１の化合物またはその誘
導体をコードする核酸の発現のために利用され得る。これらのベクターは、広範
な種々の真核生物細胞において天然に複製される、＋（プラス）鎖または−（マ
イナス）鎖のＲＮＡウイルスに基づく（Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋ，Ｐ．Ｊ．および
Ｒｉｃｅ，Ｃ．Ｍ．、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３：２９７−３１０、１９９２）。レ
トロウイルスとは異なり、これらのウイルスは、ＲＮＡ形態において完全に存在
する、中間のＤＮＡライフサイクル相を欠如する。例えば、αウイルスは、外来
タンパク質のための発現ベクターとして使用される。なぜなら、これらは、広範
囲の宿主細胞において利用され得、そして高レベルの発現を提供し得るからであ
る；この型のウイルスの例としては、シンドビスウイルスおよびセムリキ森林ウ
イルスが挙げられる（Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ，Ｓ．、ＴＩＢＴＥＣＨ １１：
１８−２２、１９９３；Ｆｒｏｌｏｖ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９３：１１３７１−１１３７７、１９９６）。Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎのシンビス発現系によって例示されるように、研究者らは、簡便に、
研究室でＤＮＡ形態（ｐＳｉｎｒｅｐ５プラスミド）において組換え分子を維持
し得るが、ＲＮＡ形態における増殖も同様に可能である。発現のために使用され
る宿主細胞において、目的の遺伝子を含むベクターは、完全にＲＮＡ形態で存在
し、そして所望であれば、この状態において連続的に増殖され得る。

【００９１】 翻訳されたタンパク質の、小胞体の管腔への分泌、ペリプラズム空間への分泌
または細胞外環境への分泌について、適切な分泌シグナルは、所望のポリペプチ
ドへ組み込まれ得る。これらのシグナルは、ポリペプチドに対して内因性であり
得るか、またはこれらは、外因性シグナルであり得る。

【００９２】 ＤＮＡ配列の発現は、そのＤＮＡ配列が転写調節情報および翻訳調節情報を含
むＤＮＡ配列に「作動可能に連結される」必要がある。作動可能な連結は、制御
ＤＮＡ配列または調節ＤＮＡ配列および発現されようとしているＤＮＡ配列が、
遺伝子発現を許容するような方法で連結される、連結である。遺伝子発現のため
に必要な「制御領域」の正確な性質は、生物間で変化し得るが、一般に、プロモ
ーター領域（原核生物細胞において、プロモーター（これは、ＲＮＡ転写の開始
を指向する）ならびにＤＮＡ配列（ＲＮＡへ転写される場合に、タンパク質合成
の開始をシグナル伝達する）の両方を含む）を含む。真核生物細胞における調節
領域は、一般に、ＲＮＡ合成の開始を指向するに十分なプロモーター領域を含む
。

【００９３】 ２つのＤＮＡ配列は、その２つのＤＮＡ配列間の連結の性質が、（１）フレー
ムシフト変異の導入を生じない場合、（２）プロモーター領域配列が融合タンパ
ク質をコードする配列の転写を指向する能力を妨害しない場合または（３）融合
タンパク質をコードする配列がプロモーター領域配列によって転写される能力を
妨害しない場合に、作動可能に連結されているといわれる。従って、プロモータ
ー領域は、このプロモーター領域がＤＮＡ配列を転写し得た場合に、そのＤＮＡ
配列に作動可能に連結される。

【００９４】 本発明の発現ベクターを生成するための、種々のＤＮＡフラグメントの結合は
、従来の技術に従い、連結のために平滑末端または付着末端、適切な末端を提供
するための制限酵素消化、適切な粘着末端の充填、望まない結合を回避するため
のアルカリおよびホスファターゼ処理、ならびに適切な連結物との連結を使用し
て、実施される。融合タンパク質の場合において、遺伝的構築物は、この融合タ
ンパク質の５’遺伝子配列に作動可能に連結された誘導性プロモーターをコード
して、この融合タンパク質の効率的な発現を可能にする。

【００９５】 原核生物細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓなどのような）において、配列番号１の
化合物またはその誘導体を発現するために、配列番号１をコードするＤＮＡ配列
を機能性原核生物プロモーターに作動可能に連結する必要がある。このようなプ
ロモーターは、構成性であり得るか、またはより好ましくは、調節性（すなわち
、誘導性または抑制解除性（ｄｅｐｒｅｓｓｉｂｌｅ））であり得る。構成性プ
ロモーターの例としては、バクテリオファージλのｉｎｔプロモーター、ｐＢＲ
３２２のβラクタマーゼ遺伝子のｂｌａプロモーター、およびｐＢＲ３２５のク
ロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のＣＡＴプロモーターな
どが挙げられる。誘導性原核生物プロモーターの例としては、バクテリオファー
ジλの主要な（ｍａｊｏｒ）右鎖プロモーターおよび左鎖プロモーター（ＰＬお
よびＰＲ）、Ｅ．ｃｏｌｉのｔｒｐ、ｒｅｃＡ、ｌａｃＺ、ｌａｃＩおよびｇａ
ｌプロモーター、α−アミラーゼ（Ｕｌｍａｎｅｎ，Ｉ．ら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ．１６２：１７６−１８２（１９８５））、およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ
のσ−２８−特異的プロモーター（Ｇｉｌｍａｎ，Ｍ．Ｚ．ら、Ｇｅｎｅ ３２
：１１−２０（１９８４））、Ｂａｃｉｌｌｉｕｓのバクテリオファージのプロ
モーター（Ｇｒｙｃｚａｎ，Ｔ．Ｊ．：Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｉ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎ
ｃ．，ＮＹ（１９８２））、ならびにＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓのプロモーター
（Ｗａｒｄ，Ｊ：Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２０３：４６８−４７
８（１９８６））が挙げられる。原核生物プロモーターは、Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ
．、Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１：２７７−２８２（１９８７）；Ｃｅ
ｎａｔｉｅｍｐｏ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ ６８：５０５−５１６（１９８
６））；およびＧｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｓ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１８
：４１５−４４２（１９８４）によって総説されている。

【００９６】 本発明のために好ましい原核生物プロモーターは、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔｒｐプロ
モーターであり、これは、インドールアクリル酸に対して誘導性である。

【００９７】 発現が真核生物細胞（例えば、酵母、真菌、哺乳動物細胞、または植物細胞）
において所望される場合、このような真核生物宿主において転写を指向し得るプ
ロモーターを使用することが必要である。好ましい真核生物プロモーターとして
は、マウスメタロチオネインＩ遺伝子のプロモーター（Ｈａｍｅｒ，Ｄ．ら、Ｊ
．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．１：２７３−２８８ （１９８２））；ヘルペス
ウイルスのＴＫプロモーター（ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｓ．、Ｃｅｌｌ ３１：３５
５−３６５（１９８２））；ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔ，Ｃ．
ら、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）２９０：３０４−３１０（１９８１））；な
らびに酵母ｇａｌ４遺伝子プロモーター（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｓ．Ａ．ら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９：６９７１−６９７５（１
９８２）；Ｓｉｌｖｅｒ，Ｐ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．（ＵＳＡ）８１：５９５１−５９５５（１９８４））が挙げられる。

【００９８】 好ましくは、導入される遺伝子配列は、レシピエント宿主において自立的に複
製し得るプラスミドまたはウイルスベクターに組み込まれる。任意の広範な種々
のベクターが、この目的のために使用され得る。特定のプラスミドまたはウイル
スベクターを選択する際に重要な因子としては、以下が挙げられる：ベクターを
含むレシピエント細胞が、ベクターを含まないレシピエント細胞を認識し得、そ
してその細胞から選択され得る、容易性；特定の宿主において所望されるベクタ
ーのコピー数；および異なる種の宿主細胞間でベクターを「往復（ｓｈｕｔｔｌ
ｅ）」し得ることが望ましいか否か。

【００９９】 好ましい原核生物ベクターとしては、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて複製可能なプラス
ミド（例えば、ｐＢＲ３２２、ＣｏｌＥｌ、ｐＳＣ１０１、ｐＡＣＹＣ １８４
、πＶＸのような）が挙げられる。このようなプラスミドは、例えば、Ｍａｎｉ
ａｔｉｓ，Ｔ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８２）によって開示される
。好ましいプラスミド発現ベクターとしては、ｐＧＦＰ−１プラスミド（Ｇａｒ
ｄｅｌｌａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１５８５４−１５８５９（１
９８９）に記載される）；またはｐＥＴベクターの１つに基づく改変プラスミド
（ＳｔｕｄｉｅｒおよびＤｕｎｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ １８５：６０−８９（１９９０）に記載される）が挙げられる。Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓプラスミドとしては、ｐＣ１９４、ｐＣ２２１、ｐＴ１２７などが挙げら
れる。このようなプラスミドは、Ｇｒｙｃｚａｎ，Ｔ．：Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｉ，Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ、３０７−３２９頁（１９８２）によって開示される。適切な
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓプラスミドとしては、ｐＩＪＩＯＩ（Ｋｅｎｄａｌｌ
，Ｋ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：４１７７−４１８３（１９８
７））、およびｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓバクテリオファージ（例えば、φＣ３
１（Ｃｈａｔｅｒ，Ｋ．Ｆ．ら：Ｓｉｘｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓ
ｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋａｉｄｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇａｒｙ、４５−
５４頁（１９８６））が挙げられる。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓプラスミドは、Ｊ
ｏｈｎ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．８：６９３−７０４（１
９８６）、およびＩｚａｋｉ，Ｋ．、Ｊｏｎ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．３３：
７２９−７４２（１９７８）によって総説される。

【０１００】 好ましい真核生物発現ベクターとしては、限定はしないが、ＢＰＶ、ワクシニ
ア、２−ミクロンサークル（２−ｍｉｃｒｏｎ ｃｉｒｃｌｅ）などが挙げられ
る。このような発現ベクターは、当該分野において周知である（Ｂｏｔｓｔｅｉ
ｎ，Ｄ．ら、Ｍｉａｍｉ Ｗｎｔｒ．Ｓｙｍｐ．１９：２６５−２７４（１９８
２）；Ｂｒｏａｃｈ，Ｊ．Ｒ．：Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ｙｅａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ：Ｌｉｆｅ Ｃｙｃ
ｌｅ ａｎｄ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、４
４５−４７０頁（１９８１）；Ｂｒｏａｃｈ，Ｊ．Ｒ．、Ｃｅｌｌ ２８：２０
３−２０４（１９８２）；Ｂｏｌｌｏｎ，Ｄ．Ｐ．ら、Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｈｅｍａ
ｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１０：３９−４８（１９８０）；Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．
：Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｔｒｅａｔｉ
ｓｅ、第３巻、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ，ＮＹ、５６３−６０８頁（１９８０））。

【０１０１】 微生物に加えて、多細胞生物由来の細胞の培養物もまた、宿主として使用され
得る。原理的に、任意のこのような細胞培養物は、脊椎動物細胞供給源または無
脊椎動物細胞供給源のいずれかから実行可能である。しかし、脊椎動物供給源由
来の細胞を用いるものが、大いに興味深い。有用な脊椎動物宿主細胞株の例は、
ＶＥＲＯ細胞株およびＨｅＬａ細胞株、チャイニーズハムスター（ＣＨＯ）細胞
株、ＷＩ３８細胞株、ＢＨＫ細胞株、ＣＯＳ−７細胞株、およびＭＤＣＫ細胞株
である。このような細胞のための発現ベクターは、通常（必要であれば）、任意
の必要なリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位およ
び転写終結部位とともに、複製起点、発現される遺伝子の前またはその上流に位
置するプロモーターを含む。

【０１０２】 哺乳動物細胞における使用に関しては、発現ベクターの制御機能は、しばしば
、ウイルス物質により提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、
ポリオーマ、アデノウイルス２、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）およびサイ
トメガロウイルス由来である。ＳＶ４０ウイルスの初期プロモーターおよび後期
プロモーターは、特に有用である。なぜなら、両方とも、ＳＶ４０ウイルスの複
製起点もまた含むフラグメントとしてこのウイルスから容易に得られるからであ
る（Ｆｉｅｒｓら，Ｎａｔｕｒｅ ２７３：１１３（１９７８））。

【０１０３】 複製起点は、ベクターの構築により以下のいずれかを提供されて、外因性の起
点（ＳＶ４０または他のウイルス（例えば、ポリオーマ、アデノ、ＶＳＶ、ＢＰ
Ｖ）の供給源由来であってもよく、宿主細胞染色体複製機構により提供されても
よい）を含み得る。ベクターが宿主染色体に組み込まれる場合、後者はしばしば
充分である。

【０１０４】 多くの（ｆｏｒｍｉｄａｂｌｅ）細胞膜障壁のない細胞が宿主細胞として使用
される場合、トランスフェクションは、ＧｒａｈａｍおよびＶａｎ ｄｅｒ Ｅ
ｒｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：５４６（１９７８）に記載されるように、リン
酸カルシウム沈澱法により行われる。しかし、細胞にＤＮＡを導入するための他
の方法（例えば、核注入によるか、またはプロトプラスト融合による）もまた使
用され得る。遺伝子治療の場合では、トランスフェクション促進剤（例えば、リ
ポソームが挙げられるが、これに限定されない）の有無に拘わらず、裸のプラス
ミドまたはウイルスＤＮＡの直接注入法が、哺乳動物細胞のインビボまたはイン
ビトロのトランスフェクションという現在の方法に対する代替アプローチを提供
する。実質的な細胞壁構築物を備える原核生物細胞が使用される場合、好ましい
トランスフェクション法は、Ｃｏｈｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ６９：２１１０（１９７２）に記載のように、塩化カルシウムを
用いたカルシウム処理である。

【０１０５】 （ＩＶ．配列番号１の化合物またはその誘導体の有用性および投与） 本発明の、配列番号１の化合物またはその誘導体は、骨質量の喪失により現れ
た種々の哺乳動物の状態を予防および処置するために有用である。特に、本発明
の化合物は、ヒトにおける骨粗鬆症およびオステオペニアの予防処置および治療
処置に関して記載される。さらに、本発明の化合物は、他の骨疾患の予防処置お
よび治療処置に関して記載される。本発明の化合物は、上皮小体低下症の予防処
置および治療処置に関して記載される。最終的に、本発明の化合物は、骨折修復
のためのアゴニストとしての使用、および高カルシウム血症のためのアンタゴニ
ストとしての使用に関して記載される。

【０１０６】 一般に、本発明の、配列番号１の化合物またはその誘導体、またはそれらの塩
は、１日あたり約０．０１〜１μｇ／ｋｇ体重の間、好ましくは、１日あたり約
０．０７〜約０．２μｇ／ｋｇ体重の間の量で投与される。５０ｋｇのヒト女性
被験体に関しては、配列番号１の生物学的に活性な化合物またはその誘導体は、
約０．５〜約５０μｇ、好ましくは、約３．５μｇ〜約１０μｇである。他の哺
乳動物（例えば、ウマ、イヌ、およびウシ）においては、より高い用量が必要で
あり得る。この用量は、最も有効な結果を達成するために必要とされるように、
１回の投与により、複数回の適用により、または徐放により、好ましくは、１日
１回以上の注射により、従来の薬学的組成物中で送達され得る。例えば、この投
薬量は、鼻通気法により、従来の薬学的組成物中で送達され得る。

【０１０７】 正確な用量および組成物ならびに最も適切な送達レジメの選択は、特に、選択
された配列番号１の化合物またはその誘導体の薬理学的特性、処置される状態の
性質および重篤度、ならびにレシピエントの物理的状態および精神的明瞭度によ
り影響される。

【０１０８】 代表的な好ましい送達レジメとしては、経口、非経口（皮下、経皮、筋肉内お
よび静脈内を含む）、直腸、口内（舌下を含む）、経皮、および鼻通気法が挙げ
られるが、これらに限定されない。

【０１０９】 薬学的に受容可能な塩は、有毒な副作用なく、配列番号１の化合物およびその
誘導体の所望される生物学的活性を保持する。このような塩の例としては、（ａ
）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）と形成された
酸付加塩；有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、
フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タン
ニン酸、パモ酸（ｐａｍｏｉｃ ａｃｉｄ）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、
ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸など）と
形成された酸付加塩；（ｂ）多価金属カチオン（例えば、亜鉛、カルシウム、ビ
スマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カ
ドミウムなど）と形成された塩基付加塩；またはＮ’，Ｎ’−ジベンジルエチレ
ンジアミンまたはエチレンジアミンから形成された有機カチオンと形成された塩
基付加塩；または（Ｃ）（ａ）および（ｂ）の組み合わせ（例えば、亜鉛のタン
ニン酸塩など）である。

【０１１０】 本発明のさらなる局面は、薬学的に受容可能な非毒性キャリアとの混合物中に
、活性成分として、本発明の配列番号１の化合物またはそれらの誘導体、または
薬学的に受容可能なそれらの塩を含む薬学的組成物に関する。上記のように、こ
のような組成物は、非経口（皮下、経皮、筋肉内または静脈内）投与のために、
特に、液体溶液または懸濁液の形態で；経口または口内投与のために、特に錠剤
またはカプセル剤の形態で；直腸、経皮投与のために、特に散剤、経鼻小滴また
はエアロゾルの形態で調製され得る。

【０１１１】 この組成物は、単位投薬形態で簡便に投与され得、そして薬学分野において周
知の任意の方法（例えば、本明細書中に参考として援用される、Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，Ｍａ
ｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，（１９
８５）に記載）によって調製され得る。非経口投与のための処方物は、賦形剤（
滅菌水または生理食塩水、アルキレングリコール（例えば、プロピレングリコー
ル）、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）、植物起
源の油、硬化ナフタレンなど）を含み得る。経口投与に関しては、この処方物は
、胆汁酸塩またはアシルカルニチンの付加により増強され得る。経鼻投与のため
の処方物は、固体であってもよく、そして賦形剤（例えば、ラクトースまたはデ
キストラン）を含み得、経鼻ドロップまたは用量測定スプレーの形態で使用する
ための水溶液または油溶液であってもよい。口内投与に関しては、代表的な賦形
剤として、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、予めゼラ
チン様にしたデンプンなどが挙げられる。

【０１１２】 最も好ましい投与経路である経鼻投与のために処方される場合、鼻粘膜を通る
吸収は、界面活性剤の酸（例えば、グリココール酸、コール酸、タウロコール酸
、エトコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デヒドロコール酸
、グリコデオキシコール酸、シクロデキストリンなど）を約０．２〜１５重量％
、好ましくは、約０．５〜４重量％、最も好ましくは、約２重量％の範囲の量に
より増強され得る。

【０１１３】 本発明の化合物を長期間（例えば、１週間から１年）にわたり被験体に送達す
ることは、所望の放出期間にわたり充分活性な成分を含む徐放系の１回の投与に
より達成され得る。種々の徐放系（例えば、モノリシックまたはリザーバ型マイ
クロカプセル、デポー（ｄｅｐｏｔ）インプラント、浸透圧ポンプ、小胞、ミセ
ル、リポソーム、経皮パッチ、イオン浸透デバイスおよび代替的な注射可能投薬
形態）がこの目的のために利用され得る。活性成分の送達が所望される部位にお
ける局在化は、特定の障害の処置において利益があることが証明され得るいくつ
かの徐放デバイスのさらなる特徴である。

【０１１４】 徐放性処方物の１つの形態は、ゆっくりと分解され、非毒性で、非抗原性のポ
リマー（例えば、Ｋｅｎｔ，Ｌｅｗｉｓ，Ｓａｎｄｅｒｓ，およびＴｉｃｅ，米
国特許第４，６７５，１８９号（本明細書中に参考として援用される）の先駆的
研究において記載される、コポリ（乳酸／グリコール酸））中に分散されるか、
またはカプセル化される、ポリペプチドまたはその塩を含む。この化合物、また
は好ましくはそれらの比較的不溶性の塩もまた、コレステロールもしくは他の脂
質マトリクスペレット、またはシラストマー（ｓｉｌａｓｔｏｍｅｒ）マトリク
スインプラント中に処方され得る。さらなる遅延型放出、デポーインプラントま
たは注射可能処方物は当業者に明らかである。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａ
ｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，
Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８，およびＲ．Ｗ．Ｂａｋｅｒ，Ｃｏｎｔ
ｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ Ａｃｔｉｖ
ｅ Ａｇｅｎｔｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９
８７（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。

【０１１５】 ＰＴＨと同様に、ＰＴＨ改変体は、所定の臨床状態を処置する際に有用な他の
薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、骨粗鬆症および他の骨関連障害を処
置する場合、ＰＴＨ改変体は、カルシウム補助食品またはビタミンＤアナログと
ともに投与され得る（米国特許第４，６９８，３２８号を参照のこと）。あるい
は、ＰＴＨ改変体は、例えば、米国特許第４，７６１，４０６号に記載の二リン
酸と組み合わせて、またはカルシトニンおよびエストロゲン（限定はされない）
のような１つ以上の骨治療剤と組み合わせて、好ましくは、循環的治療レジメを
用いて投与され得る。

【０１１６】 （Ｖ．配列番号１の化合物またはその誘導体のレセプターシグナル伝達活性） ホルモン作用の発現における重大な工程は、ホルモンと、標的細胞の原形質膜
表面のレセプターとの相互作用である。ホルモン−レセプター複合体の形成は、
細胞への細胞外シグナルの伝達を可能にし、種々の生物学的応答を誘発する。

【０１１７】 （ＰＴＨ−１レセプターアンタゴニストおよびアゴニストについてのスクリー
ニング） 本発明のポリペプチドは、ｃＡＭＰ蓄積アッセイを使用して、それらのアゴニ
ストまたはアンタゴニストの特性についてスクリーニングされ得る。その細胞表
面上にＰＴＨ−１レセプターを発現する細胞を、２ｍＭ ＩＢＭＸ（３−イソブ
チル−１−メチル−キサンチン、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の存在
下、ネイティブＰＴＨ（１〜８４）と共に５〜６０分間、３７℃でインキュベー
トする。サイクリックＡＭＰ蓄積を、上記のように、特異的放射免疫アッセイに
よって測定する。ＰＴＨ−１レセプターへの結合についてネイティブＰＴＨ（１
〜８４）と競合し、そしてｃＡＭＰ蓄積に対するネイティブＰＴＨ（１〜８４）
の効果を阻害する、配列番号１の化合物またはその誘導体を、競合的アンタゴニ
ストとみなす。このような化合物は、高カルシウム血症を処置するために有用で
ある。

【０１１８】 反対に、ＰＴＨ−１レセプターへの結合についてネイティブＰＴＨ（１〜８４
）と競合しないが、なおｃＡＭＰ蓄積のネイティブＰＴＨ（１〜８４）活性化を
妨げる（おそらく、レセプター活性化部位をブロックすることによる）、配列番
号１の化合物またはその誘導体を、非競合的アンタゴニストとみなす。このよう
な化合物は、高カルシウム血症を処置するために有用である。

【０１１９】 ＰＴＨ−１レセプターへの結合についてネイティブＰＴＨ（１〜８４）と競合
し、そしてネイティブＰＴＨ（１〜８４）の存在下または非存在下でｃＡＭＰ蓄
積を刺激する、配列番号１の化合物またはその誘導体は、競合的アゴニストであ
る。ＰＴＨ−１レセプターへの結合についてネイティブＰＴＨ（１〜８４）と競
合しないが、ネイティブＰＴＨ（１〜８４）の存在下または非存在下で、なおｃ
ＡＭＰ蓄積を刺激し得るか、あるいは配列番号１の化合物またはその誘導体単独
で観察されるよりも、より高いｃＡＭＰ蓄積を刺激する、配列番号１の化合物ま
たはその誘導体を、非競合的アゴニストとみなす。

【０１２０】 （ＶＩ．配列番号１の化合物またはその誘導体の治療的使用） 高カルシウム血症および低カルシウム血症のいくつかの形態は、ＰＴＨおよび
ＰＴＨｒＰと、ＰＴＨ−１レセプターおよびＰＴＨ−２レセプターとの間の相互
作用に関連する。高カルシウム血症は、血清カルシウムレベルの異常な上昇が存
在する状態であり；これは、しばしば、以下を含む他の疾患に関連する：上皮小
体機能亢進症、骨粗しょう症、乳房、肺および前立腺の癌腫、頭部および頸部、
ならびに食道の類表皮癌、多発性骨髄腫、および副腎腫。低カルシウム血症は、
血清カルシウムレベルが、異常に低い状態であり、効果的ＰＴＨの欠損（例えば
、甲状腺手術後の）から生じ得る。

【０１２１】 配列番号１の化合物またはその誘導体をコードする本発明の核酸をまた、選択
された組織特異的プロモーターおよび／またはエンハンサーに連結し得、そして
得られたハイブリッド遺伝子を、標準的な方法（例えば、Ｌｅｄｅｒら、米国特
許第４，７３６，８６６号（本明細書中に参考として援用される）に記載のよう
な）によって初期発生段階（例えば、受精卵母細胞段階）の動物胚に導入し、選
択された組織において上昇したレベルの配列番号１の化合物またはその誘導体を
発現するトランスジェニック動物を生成し得る（例えば、骨についてのオステオ
カルシンプロモーター）。このようなプロモーターを使用して、このトランスジ
ェニック動物における配列番号１の化合物またはその誘導体の組織特異的発現を
指向する。

【０１２２】 さらに、ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰアナログがＰＴＨ−１／ＰＴＨ−２レセプターを
拮抗または作動する能力（当業者に公知のアッセイによって決定され、そして以
下に議論されるような）を破壊しない、天然の任意の他のアミノ酸置換が、本発
明の範囲に含まれる。

【０１２３】 「アゴニスト」によって、ＰＴＨ−１レセプターによって媒介される細胞性応
答を増強または強化し得るリガンドが意図される。「アンタゴニスト」によって
、ＰＴＨ−１レセプターによって媒介される細胞性応答を阻害し得るリガンドが
意図される。本発明の任意の候補「アゴニスト」または「アンタゴニスト」が、
このような細胞性応答を増強または阻害し得るか否かは、当該分野で公知のタン
パク質リガンド／レセプターの細胞性応答アッセイまたは結合アッセイ（本出願
の他の箇所に記載されるアッセイを含む）を使用して決定され得る。

【０１２４】 本発明のさらなる局面に従って、ＰＴＨ−１レセプターの変化した作用または
過剰な作用から生じる医学的障害を処置するための方法が提供され、この方法は
、患者のＰＴＨ−１レセプターの活性化を阻害するのに十分な、治療有効量の配
列番号１の化合物またはその誘導体を、その患者に投与する工程を包含する。

【０１２５】 この実施形態において、ＰＴＨ−１レセプターの変化された作用から生じる障
害を有することが疑われる患者は、ＰＴＨ−１レセプターの選択的アンタゴニス
トである、本発明の配列番号１の化合物またはその誘導体を使用して処置され得
る。このようなアンタゴニストとしては、ＰＴＨ−１レセプター媒介細胞活性化
を干渉することが決定されている（本明細書中に記載のアッセイによって）、本
発明の配列番号１の化合物またはその誘導体、あるいは類似の特性を有する他の
誘導体が挙げられる。

【０１２６】 アンタゴニストを投与するために、適切な配列番号１の化合物またはその誘導
体を、一般的に、適切なキャリアまたは賦形剤（例えば、生理学的生理食塩水）
中に処方することによって、医薬の製造において使用して、そして好ましくは、
ＰＴＨ−１レセプターに対する配列番号１の化合物またはその誘導体の結合の十
分な阻害を提供する投薬量で、静脈内、筋内、皮下、経口または鼻内投与する。
代表的な投薬量は、１ｎｇ〜１０ｍｇのペプチド／ｋｇ体重／日である。

【０１２７】 好ましい実施形態において、この方法において使用される配列番号１の化合物
またはその誘導体は、そのアミノ末端で単一のアミノ酸欠失を有する。この好ま
しい実施形態において、ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰアナログは、ＰＴＨ（２〜１４）／
ＰＴＨｒＰ（２〜１４）である。なお別の好ましい実施形態において、この方法
において使用される配列番号１の化合物またはその誘導体は、そのアミノ末端で
２つのアミノ酸欠失を有する。この好ましい実施形態において、ＰＴＨ／ＰＴＨ
ｒＰアナログは、ＰＴＨ（３〜１４）／ＰＴＨｒＰ（３〜１４）である。

【０１２８】 本発明のなおさらなる局面に従って、骨粗しょう症を処置するための方法が提
供され、この方法は、患者のＰＴＨ−１レセプターを活性化するのに十分な、治
療有効量の配列番号１の化合物またはその誘導体を、その患者に投与する工程を
包含する。ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰアンタゴニストについて上記されたような同様の
投薬量および投与が、例えば、骨粗しょう症、他の代謝性骨障害、ならびに上皮
小体機能低下症および関連する障害のような状態の処置のための、ＰＴＨ／ＰＴ
ＨｒＰアゴニストの投与に使用され得る。

【０１２９】 好ましい実施形態において、この方法において使用される配列番号１の化合物
またはその誘導体は、配列番号１の化合物のアミノ酸１位で、セリンのアラニン
でのアミノ酸置換を有する。この特定の実施形態において、ＰＴＨ誘導体は、［
Ａｌａ¹］ＰＴＨ（１〜１４）（配列番号５）である。別の好ましい実施形態に
おいて、この方法において使用される配列番号１の化合物またはその誘導体は、
配列番号１のアミノ酸５位で、イソロイシンのヒスチジンでのアミノ酸置換を有
する。この特定の実施形態において、ＰＴＨｒＰ誘導体は、［Ｉｌｅ⁵］ＰＴＨ
ｒＰ（１〜１４）（配列番号２）である。

【０１３０】 本発明が、本発明またはその任意の実施形態の精神または範囲を逸脱すること
なく、組成、濃度、投与形態および状態の広範な等価のパラメーターの範囲内で
実施され得ることが、当業者に理解される。

【０１３１】 本発明をここで十分に記載しているが、本発明が、特定の実施例を参照するこ
とによって、より容易に理解される。本明細書中に明記されない限り、これらの
特定の実施例は、例示目的で提供され、そして本発明を限定することが意図され
ない。

【０１３２】 （実施例１） ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰの生物活性に必要とされる最小の長さを同定すること
を開始するために、本発明者らは、ネイティブヒトＰＴＨの最初の１４アミノ酸
に基づく合成ペプチドを構築した。最適化に対する最初の工程として、本発明者
らは、１位のセリンをアラニンによって置換し；この置換は、ラットおよびウシ
のＰＴＨ、ならびに現在までに報告されている全てのＰＴＨｒＰ分子（ヒト、ウ
シ、イヌ、ラット、マウス、ニワトリ）における１位に見出されるアミノ酸に対
応し、ネイティブＰＴＨ（１〜１４）ペプチドの生物活性のバックグラウンドレ
ベルを超える、生物活性の測定可能な増加を生じる。この新規ペプチド（本明細
書中で［Ａｌａ¹］ＰＴＨ（１〜１４）と呼ばれる）のＣ末端残基を、アミド化
する。

【０１３３】 ［Ａｌａ¹］ＰＴＨ（１〜１４）が、クローン化されたヒトＰＴＨ−１レセプ
ターを発現するＣＯＳ−７細胞においてｃＡＭＰ形成を刺激する能力を、図１に
示す。小さいｃＡＭＰ応答は、より短いペプチド［Ａｌａ¹］ＰＴＨ（１〜９）
を用いてでさえ見出され得る。予期されたように、このカルボキシ末端フラグメ
ントＰＴＨ（１５〜３１）は、不活性であった（図１）。これらのペプチドの各
々は、ＰＴＨ−１レセプター遺伝子を欠失するＤＮＡベクターでトランスフェク
トしたコントロールＣＯＳ−７細胞において、不活性であった。

【０１３４】 ＰＴＨ（１〜１４）の特異性を実証するために、それが、ラットセクレチンレ
セプター（ｒＳＲ）（ＰＴＨに結合も応答もしない関連ファミリーＢレセプター
）でトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞においてｃＡＭＰ産生を刺激する能力
を、試験した。図６に示されるように、ＰＴＨ（１〜１４）は、ｒＳＲを発現す
る細胞において不活性である。従って、ＣＯＳ−７細胞におけるＰＴＨ（１〜１
４）に対する応答は、ＰＴＨ−１レセプター発現に依存性である。ＰＴＨ（１〜
１４）の特異性もまた、ブタ腎臓細胞株ＬＬＣ−ＰＫ１（ヒトＰＴＨ−１レセプ
ターでトランスフェクトしていないか、または安定にトランスフェクトしたかの
いずれか）、ＬＬＣ−Ｂ７細胞株を使用して試験した。図４は、これらの細胞に
おけるＰＴＨ（１〜１４）応答が、ＰＴＨ−１レセプター発現に依存性であるこ
とを示す。

【０１３５】 （実施例２） 上記の実施例１に示されるように、Ｓｅｒ１→Ａｌａの置換を含んでもなお、
［Ａｌａ¹］ＰＴＨ（１〜１４）ペプチドは、ネイティブＰＴＨ（１〜３４）よ
り弱い（図１）。従って、能力および効力を改善するための［Ａｌａ¹］ＰＴＨ
（１〜１４）の配列のさらなる最適化を、実施した。この最適化プロセスの一部
として、ネイティブＰＴＨ（１〜１４）配列のアラニンスキャニングを、実施し
た。この研究において、各々１４アミノ酸長で、かつ１つのネイティブアミノ酸
がアラニンで置換されることによって互いに異なる、１４の異なるペプチドを合
成した。このアラニンスキャニングは、このネイティブの１〜１４配列における
各々の個々の残基の、機能に重要であるか（不耐性）、または機能に重要でない
か（耐性）のいずれかとしての分類を可能にする。耐性残基は、Ａｓｎ−１０か
らＨｉｓ−１４までに及ぶ、１つの良好に規定されたカルボキシ末端セグメント
に存在し、一方、不耐性残基は、全て、Ａｌａ−１〜Ｈｉｓ９セグメントにある
（図２）。１位が、ネイティブのラットおよびウシの配列においてアラニンであ
り、そして３位でのＳｅｒ→Ａｌａが、保存的置換であることから、Ａｌａ−１
およびＳｅｒ−３は、この研究において十分に試験しなかったことに留意された
い。例えば、アラニンスキャニングの結果から予測されるように、［Ａｌａ¹］
ＰＴＨ（１〜９）フラグメント（全ての不耐性残基を含む）は、いくらか生物活
性を示す（図１）。

【０１３６】 （実施例３） この分析を、ＰＴＨｒＰ（１〜１４）配列に、同様に広げる。本発明者らは、
ＰＴＨｒＰ（１〜１４）における重要な５位で、ヒスチジンをイソロイシンで置
換する、１つの一置換を見出した。従って、この特定の実施形態において、ｐＴ
ＨｒＰアナログは、［Ｉｌｅ⁵］ＰＴＨｒＰ（１〜１４）である。図７は、［Ｉ
ｌｅ⁵］ＰＴＨ（１〜１４）を用いて得られたｃＡＭＰ活性の結果を示す。ＬＬ
Ｃ−Ｂ７細胞を、その示したペプチドリガンド（各１００μＭ）で処理し、次い
で、細胞内ｃＡＭＰレベルを測定した。ＰＴＨｒＰの重要な５位での、イソロイ
シンのヒスチジンでの置換は、ネイティブＰＴＨｒＰ（１〜１４）と比較して、
増強された能力を有する新規アナログを生じる。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＰＴＨ（１〜３４）のアミノ末端フラグメントおよびカルボキシ末端フラグメ
ントの生物活性。副甲状腺ホルモンのフラグメントを、化学的方法によって合成
し、そして逆相ＨＰＬＣによって精製した。ペプチドを、クローニングされたヒ
トＰＴＨ−１レセプターを発現するＣＯＳ−７細胞におけるｃＡＭＰ蓄積を刺激
する能力について試験した。ＰＴＨ（１〜３４）を、１μＭの用量で試験し、他
のペプチドを６７μＭで試験した。ペプチドを、２連で（±ｓ．ｅ．ｍ．）６７
μＭの用量で試験した。コントロールの未処理細胞におけるｃＡＭＰを、Ｂｓｌ
によって示す。細胞を、２１℃にて３０分間処理する。

【図２】 ＰＴＨ（１〜１４）のアラニン走査。１４個の異なるＰＴＨ（１〜１４）誘導
体の生物活性を示し、各々、アラニンによって置換された、ネイティブな配列の
異なるアミノ酸（図の下に示す）を有する。ペプチドを化学的に合成し、精製し
、そしてクローニングされたヒトＰＴＨ−１レセプターを発現するＣＯＳ−７細
胞におけるｃＡＭＰ形成を刺激する能力について試験した。ペプチドを、２連で
（±ｓ．ｅ．ｍ．）６７μＭの用量で試験した。コントロールとして、基礎（ｂ
ａｓａｌ）によって示される未処理細胞を測定した。１位にアラニンを含むＰＴ
Ｈ（１〜１４）を、野生型参照として用いた。細胞を、２１℃にて３０分間刺激
する。

【図３】 ヒトＰＴＨ−１レセプターによって安定にトランスフェクトされたＬＬＣ−Ｐ
Ｋ１細胞（ＬＬＣ−Ｂ７細胞）における短いアミノ末端ＰＴＨアナログのｃＡＭ
Ｐ用量応答曲線。２４プレートにおけるＬＬＣ−Ｂ７細胞を、示したペプチドで
２１℃にて６０分間処理し、次いで細胞内ｃＡＭＰレベルを測定した。示した全
てのＰＴＨペプチドは、ラットＰＴＨ配列に基づき、そしてカルボキシ末端がア
ミド化されている。理解され得るように、ＰＴＨ（１〜１４）ペプチドを残基１
５まで伸ばした場合、活性の獲得は存在しない；そしてＰＴＨ（１〜１３）また
はより短いアナログは、非常弱い活性しか示さない。

【図４】 ＬＬＣ−Ｂ７細胞およびトランスフェクトしていないＬＬＣ−ＰＫ１細胞にお
けるＰＴＨ（１〜１４）のｃＡＭＰ用量応答曲線。ＰＴＨ（１〜１４）およびＰ
ＴＨ（１〜３４）のコントロールペプチドを、図３におけるように試験した。理
解され得るように、これらの細胞におけるＰＴＨ（１〜１４）に対する応答は、
ＰＴＨ−１レセプターの存在に完全に依存する。

【図５】 ＬＬＣ−Ｂ７細胞におけるＰＴＨ（１〜１４）のアラニン走査。各々のＰＴＨ
（１〜１４）を、２連で１００μＭの用量で試験した。２４プレートにおけるＬ
ＬＣ−Ｂ７細胞を、示したペプチドで２１℃にて６０分間処理し、次いで細胞内
ｃＡＭＰレベルを測定した。

【図６】 ＰＴＨ（１〜１４）の特異性。アナログＰＴＨ（１〜１４）を、ラットセクレ
チンレセプターでトランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞において試験した。この
ＣＯＳ−７細胞は、コントロールのネイティブセクレチン（１〜２７）に十分に
応答する。ＰＴＨ（１〜１４）は、これらの細胞におけるｃＡＭＰを刺激しない
。従って、ＰＴＨ（１〜１４）に対する応答は、ＰＴＨ−１レセプターの存在に
依存する。

【図７】 ［Ｉｌｅ５］ＰＴＨｒＰ（１〜１４）のｃＡＭＰ活性。ＬＬＣ−Ｂ７細胞を、
各々１００μＭの、示したペプチドリガンドで処理し、次いで細胞内ｃＡＭＰレ
ベルを測定した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 5/18 Ａ６１Ｐ 35/00 ４Ｈ０４５ 19/00 Ｃ０７Ｋ 14/635 19/10 Ｃ１２Ｎ 1/15 35/00 1/19 Ｃ０７Ｋ 14/635 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 1/21 5/00 Ａ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/24 Ｃ１２Ｐ 21/02 43/00 49/02 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 クローネンバーグ， ヘンリー エム． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02178， ベルモント， ヘイスティング ス ロード 48 (72)発明者 ポッツ， ジョン ティー． ジュニア． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02165， ニュートン， チェスナット ストリート 129 (72)発明者 ジュプナー， ハラルド アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02116， ボストン， ナンバー２， ホ ルヨーク ストリート 38 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA01 CA02 DA02 DA05 DA12 FA02 GA11 HA17 4B064 AG15 CA02 CA06 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA01X AA72X AA90X AA90Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA43 CA44 4C084 AA01 AA02 AA06 AA07 AA12 AA13 BA17 BA18 BA42 CA53 DB32 MA13 MA17 MA35 MA37 MA43 MA52 MA55 MA57 MA59 MA60 MA63 MA66 NA14 ZA962 ZA972 ZB262 ZC082 4C085 HH03 HH11 HH13 4H045 AA10 AA20 AA30 BA16 BA70 BA71 CA40 DA30 EA05 EA20 FA72 FA73 FA74

Claims (34)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 生物学的に活性なペプチドであって、以下の式： （ａ） 【化１】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
   む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体； から本質的になるペプチドに少なくとも８５％同一であり、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し該ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、 生物学的に活性なペプチド。
2. 【請求項２】 生物学的に活性なペプチドであって、以下の式： （ａ） 【化２】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
   む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体； から本質的になり、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し該ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、 生物学的に活性なペプチド。
3. 【請求項３】 以下： 【化３】 である、請求項１に記載のペプチド。
4. 【請求項４】 前記ペプチドが、放射性標識、蛍光標識、生物発光標識、ま
   たは化学発光標識からなる群より選択される標識で標識される、請求項１に記載
   のペプチド。
5. 【請求項５】 前記放射性標識が^99mＴｃである、請求項４に記載のペプチ
   ド。
6. 【請求項６】 薬学的組成物であって、以下： （ａ）以下の式： 【化４】 から本質的になるペプチドに少なくとも８５％同一の生物学的に活性なペプチド
   ； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
   、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；ならびに薬学的に受容可能なキ
   ャリア、 を含む、薬学的組成物。
7. 【請求項７】 薬学的組成物であって、以下： （ａ）以下の式： 【化５】 から本質的になる生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
   、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；ならびに薬学的に受容可能なキ
   ャリア、 を含む、薬学的組成物。
8. 【請求項８】 薬学的組成物であって、以下： （ａ）以下の式： 【化６】 から本質的になるペプチドに少なくとも８５％同一の生物学的に活性なペプチド
   ； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
   、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；ならびに薬学的に受容可能なキ
   ャリア、 を含む、薬学的組成物。
9. 【請求項９】 薬学的組成物であって、以下： （ａ）以下の式： 【化７】 から本質的になる生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
   、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；ならびに薬学的に受容可能なキ
   ャリア、 を含む、薬学的組成物。
10. 【請求項１０】 核酸分子であって、以下： （ａ） 【化８】 あるいは （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
    、そのフラグメント； からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する生物学的に活性なペプチドをコ
    ードするポリヌクレオチドから本質的になり、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し該ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、 核酸分子。
11. 【請求項１１】 組換えＤＮＡ分子であって、（２）生物学的に活性なペプ
    チドをコードするポリヌクレオチド配列、と作動可能に連結されている、(1)発
    現制御領域を含み、ここで該ペプチドは、以下： （ａ） 【化９】 あるいは （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
    、そのフラグメント； からなる群より選択され、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し該ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、 組換えＤＮＡ分子。
12. 【請求項１２】 生物学的に活性なペプチドを調製する方法であって、請求
    項１１に記載の組換えＤＮＡ分子を、宿主中に導入する工程、および該分子の発
    現を引き起こす工程を包含する、方法。
13. 【請求項１３】 組換えベクターを作製するための方法であって、請求項１
    ０に記載の核酸分子をベクター中に挿入する工程を包含する、方法。
14. 【請求項１４】 前記制御領域が細菌プロモーター、ウイルスプロモーター
    、真菌プロモーターまたは哺乳動物プロモーターを含む、請求項１１に記載の組
    換えＤＮＡ分子。
15. 【請求項１５】 請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子を含む、宿主細胞。
16. 【請求項１６】 原核生物である、請求項１５に記載の細胞。
17. 【請求項１７】 細菌である、請求項１６に記載の細胞。
18. 【請求項１８】 真核生物である、請求項１５に記載の細胞。
19. 【請求項１９】 酵母細胞または哺乳動物細胞である、請求項１８に記載の
    細胞。
20. 【請求項２０】 骨質量における減少によって特徴付けられる哺乳動物の状
    態を処置するための方法であって、該方法は、該処置を必要とする被験体に、骨
    質量増加に有効な量の生物学的に活性なペプチドならびに薬学的に受容可能なキ
    ャリアを投与する工程を包含し、ここで該ペプチドが、以下の式： （ａ） 【化１０】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
    む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体； から本質的になる群から選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
    配列を含み、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、 但し該ペプチドは、ＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、方法。
21. 【請求項２１】 骨質量における減少によって特徴付けられる哺乳動物の状
    態を処置するための方法であって、該方法は、該処置を必要とする被験体に、以
    下の式： （ａ） 【化１１】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
    む、そのフラグメント； （ｃ）それらの薬学的に受容可能な塩；あるいは （ｄ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体； から本質的になり、ここで： Ｘ₀₁は、ＳｅｒまたはＡｌａであり； Ｘ₀₂は、ＩｌｅまたはＨｉｓであり； Ｘ₀₃は、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＮｌｅであり； Ｘ₀₄は、ＡｓｎまたはＡｓｐであり； Ｘ₀₅は、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；そして Ｘ₀₆は、ＨｉｓまたはＳｅｒであり、但しＰＴＨｒＰ（１−１４）ではない、
    骨質量増加に有効な量の生物学的に活性なペプチド ；ならびに薬学的に受容可能なキャリアを投与する工程を包含する、 方法。
22. 【請求項２２】 生物学的に活性なペプチドを必要とする患者の処置のため
    の方法であって、治療的に有効量のペプチドならびに薬学的に受容可能なキャリ
    アを投与する工程を包含し、ここで該ペプチドは、以下： （ａ）以下の式： 【化１２】 から本質的になる、生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
    、そのフラグメント； （ｃ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；あるいは （ｄ）それらの薬学的に受容可能な塩； から本質的になる群より選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
    配列を含む、方法。
23. 【請求項２３】 骨質量における減少によって特徴付けられる哺乳動物の状
    態を処置するための方法であって、該方法は、該処置を必要とする被験体に、以
    下： （ａ）以下の式： 【化１３】 から本質的になる、生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２または１〜１３を含む
    、そのフラグメント； （ｃ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；あるいは （ｄ）それらの薬学的に受容可能な塩、 から本質的になる、骨質量増加に有効な量の生物学的に活性なペプチド；ならび
    に薬学的に受容可能なキャリアを投与する工程を包含する、方法。
24. 【請求項２４】 生物学的に活性なペプチドの必要性を有する患者の処置の
    ための方法であって、治療的有効量のペプチドならびに薬学的に受容可能なキャ
    リアを投与する工程を包含し、ここで該ペプチドは、以下： （ａ）以下の式： 【化１４】 から本質的になる、生物学的に活性なペプチド； （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
    む、そのフラグメント； （ｃ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；あるいは （ｄ）それらの薬学的に受容可能な塩、 から本質的になる群より選択されるメンバーに少なくとも８５％同一なアミノ酸
    配列を含む、方法。
25. 【請求項２５】 骨質量における減少によって特徴付けられる哺乳動物の状
    態を処置するための方法であって、該方法は、該処置を必要とする患者に、以下
    ： （ａ） 【化１５】 （ｂ）アミノ酸１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、または１〜１３を含
    む、それらのフラグメント； （ｃ）それらのＮ−誘導体またはＣ−誘導体；あるいは （ｄ）それらの薬学的に受容可能な塩； から本質的になる、骨質量増加に有効な量の生物学的に活性なペプチド；ならび
    に薬学的に受容可能なキャリアを投与する工程を包含する、方法。
26. 【請求項２６】 骨の再形成、骨吸収および／または骨リモデリングの速度
    を決定するための方法であって、請求項４に記載のペプチドの有効量を患者に投
    与する工程、ならびに該患者の骨への該ペプチドの取り込みを決定する工程を包
    含する、方法。
27. 【請求項２７】 前記骨質量増加に有効な量の前記ペプチドが、該ペプチド
    をコードするＤＮＡを前記患者に提供し、そしてインビボで該ペプチドを発現さ
    せることによって投与される、請求項２０に記載の方法。
28. 【請求項２８】 処置されるべき前記状態が骨粗しょう症である、請求項２
    ０に記載の方法。
29. 【請求項２９】 前記骨粗しょう症が老齢骨粗しょう症である、請求項２０
    に記載の方法。
30. 【請求項３０】 前記骨粗しょう症が閉経後骨粗しょう症である、請求項２
    ０に記載の方法。
31. 【請求項３１】 骨質量を増加させるための、有効量の前記ペプチドが、一
    日あたり約０．０１μｇ／ｋｇ〜一日あたり約１．０μｇ／ｋｇである、請求項
    ２０に記載の方法。
32. 【請求項３２】 投与方法が非経口である、請求項２０に記載の方法。
33. 【請求項３３】 投与方法が皮下である、請求項２０に記載の方法。
34. 【請求項３４】 投与方法が鼻通気法である、請求項２０に記載の方法。