JP2002527456A - 植物病原性真菌に対する、ストレプトミセス・テンダイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｅｎｄａｅ）由来の抗真菌タンパク質の利用 - Google Patents

植物病原性真菌に対する、ストレプトミセス・テンダイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｅｎｄａｅ）由来の抗真菌タンパク質の利用

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JP2002527456A JP2000576718A JP2000576718A JP2002527456A JP 2002527456 A JP2002527456 A JP 2002527456A JP 2000576718 A JP2000576718 A JP 2000576718A JP 2000576718 A JP2000576718 A JP 2000576718A JP 2002527456 A JP2002527456 A JP 2002527456A
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アヴェンティス・リサーチ・ウント・テクノロジーズ・ゲーエムベーハー・ウント・コー・カーゲー
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、子嚢菌科の植物病原性真菌に対する、ストレプトミセス・テンダイ由来の分子量およそ１０ ｋＤａを有する抗真菌タンパク質（ＡＦＰ）の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、子嚢菌科（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ ｆａｍｉｌｙ）の植物病原性
真菌に対する、ストレプトミセス・テンダイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｅ
ｎｄａｅ）由来の分子量およそ１０ ｋＤａを有する抗真菌タンパク質（ａｎｔ
ｉｆｕｎｇａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ：ＡＦＰ）の使用に関する。
【０００２】 抗真菌タンパク質は、かなり前から記載されてきており、これらのタンパク質
のいくつかはまた、植物の場合、ＰＲタンパク質（ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅ
ｎｅｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：植物病原関連タンパク質）と
も称されている（Ｂｏｌ， Ｊ．Ｆ． ＆ Ｌｉｎｔｈｏｒｓｔ， Ｈ．Ｊ．Ｍ
．（１９９０）， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．， ２８
， １１３）。これらのタンパク質は、ストレス条件下、例えばウイルスまたは
真菌感染の場合に、植物により形成され、「誘導耐性（ｒｅｄｕｃｅｄ ｒｅｓ
ｉｓｔａｎｃｅ）」と称される植物の能動的防御機構を誘導する（Ｌｉｎｄｈｏ
ｒｓｔ， Ｈ．Ｊ．Ｍ．，（１９９１） Ｃｒｉ． Ｒｅｖ． Ｐｌａｎｔ Ｓ
ｃｉ．， １０（２）， １２３）。これらのタンパク質のいくつかは、例えば
キチナーゼ活性またはβ−１，３−グルカナーゼ活性を有する。
【０００３】 抗真菌活性を有するタンパク質は、すでに微生物からも検出されてきており、
これらのタンパク質のいくつかもまた、キチナーゼ（ｃｈｉｔｉｎａｓｅ）活性
またはβ−１，３−グルカナーゼ活性を示す。対照的に、他のタンパク質は、真
菌細胞壁の相互作用を介して作用する。
【０００４】 例えば、真菌種、パイシロミセス・バリオティ（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ
ｖａｒｒｉｏｔｉｉ）、バイソクラミス・ニベア（Ｂｙｓｓｏｃｌａｍｉｓ ｎ
ｉｖｅａ）、ペニシリウム・プベルルム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｂｅｒ
ｕｌｕｍ）およびユーペニシリウム・テルム（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｔ
ｅｒｒｕｍ）に対し活性である、およそ１０ ｋＤａの大きさを有する抗真菌タ
ンパク質（ＡＦＰ）が、ストレプトミセス・テンダイから単離されてきている。
しかし、該活性はこれらの種に限定された。他の種、例えば、パイシロミセス・
カルネウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｎｅｕｓ）、パイシロミセス・
リラセヌス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｅｎｕｓ）、ペニシリウム
・クリソゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）またはペ
ニシリウム・クラビフォルメ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｌａｖｉｆｏｒｍｅ
）などは阻害されない。さらに、言及された真菌種は植物病原性でないため、Ａ
ＦＰの使用は、商業的にも正当化されない。
【０００５】 したがって、本発明の主題は、植物病原性真菌に対して活性である抗真菌タン
パク質を発見することであった。 驚くべきことに、ストレプトミセス・テンダイ由来のＡＦＰは、子嚢菌科の植
物病原性真菌に対し、活性であることが、現在、見出されてきている。
【０００６】 したがって、本発明の内容は、子嚢菌科の植物病原性真菌に対する、特にボト
リティス・シネラに対する、ストレプトミセス・テンダイ由来の分子量およそ１
０ ｋＤａを有する抗真菌タンパク質（ＡＦＰ）の使用である。
【０００７】 言及した抗真菌タンパク質は、典型的なアミノ末端シグナル配列を含み、すな
わち親水性Ｎ末端に、疎水性膜貫通領域（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｔｒａｎｓ
ｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ）が続き、これが細胞外分泌を引き起こす。さ
らに２つの型、すなわち、分子量およそ９ ８６０ Ｄａの短い型および分子量
およそ１０ ３００ Ｄａの長い型が知られる。
【０００８】 ＡＦＰはストレプトミセス・テンダイにより培地に分泌されるため、例えば、
当業者に知られる方法にしたがい、ストレプトミセス・テンダイ培養ろ過物から
直接単離してもよい。あるいは、ＡＦＰは遺伝子工学により産生してもよく、単
離した遺伝子を、好ましくは、いわゆるマルチコピーベクター（ｍｕｌｔｉｃｏ
ｐｙ ｂｅｃｔｏｒ）、例えばｐｌＪ７０２（Ｈｏｐｗｏｏｄ， Ｄ．Ａ．ら（
１９８５） Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ（ストレプトミセスの遺伝子操作）． Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ（実験室マニュアル）．英国ノリッジ）にクローニングし、そし
て本構築物を用い、適切な株、例えばニッコマイシン（ｎｉｋｋｏｍｙｃｉｎ）
非産生株、ストレプトミセス・テンダイＮＰ９を形質転換してもよい。ＡＦＰコ
ード核酸の例は、配列番号１に示される。この好ましい形質転換体を、例えば２
００ ｍｌの栄養物溶液中で７日間増殖させると、およそ６ ｍｇのＡＦＰが得
られ、これは３０ ｍｇ ＡＦＰ／ｌに相当する。したがって、好ましく調節さ
れた発酵を介した遺伝子工学によるＡＦＰの産生は、特に好ましい。
【０００９】 本発明に従う使用には、ＡＦＰを、例えば、好ましくは少なくとも１つのさら
なる補助剤（ａｕｘｉｌｉａｒｙ）を共に含む処方の形で、直接適用してもよい
。本目的のため、例えば、真菌により攻撃された植物または真菌攻撃により危険
にさらされた植物に、記載される処方（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）をスプレーす
る。該処方のＡＦＰ濃度は、一般的に、およそ１０μｇ／ｍｌからおよそ５００
ｍｇ／ｍｌまでである。適切な補助剤は、例えば、プロテアーゼ阻害剤、グリ
セロール、スクロース、塩、溶媒などの安定化剤または作物保護の分野の一般的
に知られる物質である。
【００１０】 自らＡＦＰを産生することが可能な、いわゆるトランスジェニック植物（ｔｒ
ａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ）は、真菌感染に対し防御を提供する、別の可
能性である。
【００１１】 したがって、別の態様は、本発明にしたがったＡＦＰの使用であり、該ＡＦＰ
はトランスジェニック植物中で形成される。トランスジェニック植物は、好まし
くは、遺伝子設計されたトウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、ワタ（ｃｏｔｔｏｎ）、
ジャガイモ（ｐｏｔａｔｏ）、バナナ（ｂａｎａｎａ）、シロイヌナズナ（Ａｒ
ａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、キャッサバ（ｃａｓａｖａ）、タバコ（ｔｏｂａｃｃｏ
）、アブラナ（カノラ）（ｏｉｌｓｅｅｄ ｒａｐｅ）（カノラ（ｃａｎｏｌａ
））、ジャガイモ、テンサイ（ｓｕｇａｒ ｂｅｅｔ）、穀類、例えばコムギ、
オオムギまたはオートムギ、イチゴ（ｓｔｒａｗｂｅｒｒｉｅｓ）、野菜、例え
ばキャベツ、マメ（ｌｅｇｕｍｅｓ）、例えばエンドウまたは豆、トマト（ｔｏ
ｍａｔｏ）、レタス（ｌｅｔｔｕｃｅ）あるいはメロン（ｍｅｌｏｎ）である。
【００１２】 トランスジェニック植物を生成するため、例えば裸の（ｎａｋｅｄ）ＤＮＡ、
ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡの形の、あるいはプラスミドＤＮＡの形の、ＡＦＰ
をコードする核酸を、植物細胞に導入する。ＡＦＰコード核酸の例は、配列番号
１に示される。しかし、本発明はまた、遺伝暗号の縮重（ｄｅｇｅｎｅｒａｃｙ
）のため、配列番号１の核酸と異なるが、同一のＡＦＰアミノ酸配列をコードす
る核酸も含む。さらに、本発明は、子嚢菌科の植物病原性真菌に対し、特にボト
リティス・シネラに対し活性であるＡＦＰをコードする、配列番号１の核酸の突
然変異体または変異体（ｖａｒｉａｎｔ）を含む。これらには、例えば、他の異
質の（ｆｏｒｅｉｇｎ）タンパク質とＡＦＰタンパク質の融合タンパク質または
Ｎ末端のメチオニンが欠失しているＡＦＰタンパク質が含まれる。変異体の他の
例は、ストリンジェントな（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ）条件下で、配列番号１の核酸
とハイブリダイズする核酸である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｊ．ら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第２版， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９８
９により決定することが可能である。続いて、形質転換植物細胞から、トランス
ジェニック植物を再生する。好ましくは、ＡＦＰコード核酸を、組換えアグロバ
クテリウムにより、エレクトロポレーション（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ
）により、微粒子銃（ｂｏｎｂａｒｄｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｐａｒｔ
ｉｃｌｅｓ）により、および／またはポリエチレングリコールにより、植物細胞
に導入してもよい。
【００１３】 組換えアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）細菌での、双子葉植物細胞の感染は、例えば、Ｋｌ
ｅｅ， Ｈ．ら（１９９７）Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏ
ｌ． ３８， ４６７またはＥＰ−Ｂ２−０１２２７９１に記載される。組換え
アグロバクテリウム・ツメファシエンス細菌での、単子葉植物細胞の感染は、例
えば、トウモロコシ（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）に関し、Ｉｓｈｉｄａ， Ｙ．
ら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． １４， ７４５に記載される
。本目的のため用いられるアグロバクテリウムは、ＡＦＰ発現遺伝子、および適
切な場合、適切なプロモーター、例えば植物ファゼオリン（ｐｌａｎｔ ｐｈａ
ｓｅｏｌｉｎ）・プロモーター（例えばＥＰ−Ｂ２−０１２２７９１を参照され
たい）またはウイルス３５Ｓプロモーター（例えばＩｓｉｄａ， Ｙ．ら（１９
９６）、上記を参照されたい）が挿入されているＴ−ＤＮＡを有する。該Ｔ−Ｄ
ＮＡは、組換えアグロバクテリウムを、問題の植物の未成熟胚と共培養すること
により、植物細胞に導入してもよい（例えばＩｓｈｉｄａ， Ｙ．ら（１９９６
）、上記を参照されたい）。形質転換植物細胞を選択するため、植物細胞におい
て、発現しようとするＡＦＰ遺伝子由来の耐性遺伝子を発現することが可能であ
る、Ｔ−ＤＮＡ構築物を用いるのが好ましい。適切な耐性遺伝子は、例えばフォ
スフィノスリシン・アセチルトランスフェラーゼ（ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉ
ｃｉｎ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）をコードする遺伝子である（例
えばＩｓｈｉｄａ， Ｙ．ら（１９９６）、上記を参照されたい）。したがって
、形質転換に成功した植物細胞は、例えば、対応する抗生物質フォスフィノスリ
シンにより、選択することが可能である。形質転換植物細胞からの植物の再生は
、一般的に知られる（例えば、Ｓａｇｉら（１９９５）， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ， １３， ４８１−４８５、Ｉｓｈｉｄａ， Ｙ．ら（１９９６）
、上記、またはＳｃｈｏｅｐｋｅら（１９９６）， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ， １４， ７３１−７３５を参照されたい）。
【００１４】 形質転換手段としてのアグロバクテリウム・ツメファシエンスの使用に加え、
他の形質転換法が知られ、そして適切であり、例えばエレクトロポレーション、
微粒子銃またはポリエチレングリコールの使用がある（例えば、Ｐｏｔｒｙｋｏ
ｓ，（１９９１） Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｍ
ｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ４２， ２０５； Ｅｓｔｒｕｃｈ， Ｊ．Ｊ．ら（１
９９７）， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， １５， １３７−１４１また
はＤｉｎｇｅｒｍａｎｎ， Ｔ．（１９９５） ＢＩＯｆｏｒｕｍ， １８，
２５２を参照されたい）。例えば、キャッサバ（Ｓｃｈｏｅｐｋｅら（１９９６
）、上記）またはバナナ（Ｓａｇｉら（１９９５）、上記）は、すでにＤＮＡ被
覆粒子で植物細胞を砲撃する（ｂｏｍｂａｒｄｉｎｇ）ことにより、形質転換さ
れている。本方法においてもまた、発現しようとするＡＦＰ遺伝子を、好ましく
は形質転換植物細胞の続く選択を可能にする耐性遺伝子を有する適切なベクター
にクローニングする。組換えベクターを、好ましくはタングステン粒子に適用し
、それを用い、例えば胚性細胞（ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃｅｌｌｓ）の懸濁
物を砲撃する（例えばＳａｇｉら（１９９５）、上記を参照されたい）。こうし
て処理された細胞懸濁物を、続いて、適切な抗生物質、例えばフォスフィノスリ
シンを用い、形質転換植物細胞に関し、選択し、そしてトランスジェニック植物
を、例えばすでに上述したように、そこから再生する。
【００１５】 本発明の重要な利点は、特に１つまたはそれ以上の作物保護剤に対する耐性を
すでに発展させている、子嚢菌科の植物病原性真菌に対し、特にボトリティス・
シネラに対し、ＡＦＰが活性であることである。
【００１６】 続く実施例および図は、いかなる限定も課すことなく、本発明をより詳細に記
載することを意図する。配列の説明 配列番号１は、ストレプトミセス・テンダイ由来の抗真菌（２２３）タンパク
質（ＡＦＰ）をコードする核酸配列を示す。
【００１７】
【実施例】実施例１： 試験プレートを調製するため、５０μｌのボトリティス・シネラ（Ｂｏｔｒｙ
ｔｉｓ ｃｉｎｅｒａｅ）の胞子懸濁物を、１００ ｍｌの試験寒天（２０ ｇ
／ｌ 麦芽抽出物、１０ ｇ／ｌ グルコース、２ ｇ／ｌ 酵母抽出物、０．
５ 硫酸アンモニウム、１５ ｇ／ｌ 寒天、ｐＨ ６．０）に添加した。この
うち２５ ｍｌをペトリ皿中に注いだ。最終胞子濃度は１０5胞子／ｍｌであっ
た。続いて、直径０．５ ｃｍの無菌抗生物質試験ディスク（Ｓｃｈｌｅｉｃｈ
ｅｒ ｕｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、ドイツ・ダッセル（Ｄａｓｓｅｌ））を、試験
プレートに適用した。その後、続いて、ＡＦＰ溶液（１００ ｍｇ／ｍｌ Ｓ．
テンダイ形質転換体の凍結乾燥培養ろ過物）の５、１０、１５および２０μｌを
、試験ディスク上にピペッティングし、そして試験プレートを３０℃で４日間イ
ンキュベーションした。阻害区域の直径は、ＡＦＰ溶液５μｌで０．７ ｃｍ、
１０μｌで直径１ ｃｍ、溶液１５μｌで１．３ ｃｍ、そして２０μｌで１．
９ ｃｍであった。実施例２： 試験プレートを調製するため、５０μｌのボトリティス・シネラ ＺＦ ３６
２９（ＢＣＭ（Ｂｅｎｌａｔ、ＢｅｎｏｍｙｌTM、Ｈｏｅｃｈｓｔ Ｓｃｈｅｒ
ｉｎｇ ＡｇｒＥｖｏ ＧｍｂＨ、フランクフルト、ｃａｒｂｅｎｄａｚｅｍ）
に耐性）の胞子懸濁物を、１００ ｍｌの試験寒天（２０ ｇ／ｌ 麦芽抽出物
、１０ ｇ／ｌ グルコース、２ ｇ／ｌ 酵母抽出物、０．５ 硫酸アンモニ
ウム、１５ ｇ／ｌ 寒天、ｐＨ ６．０）に添加した。このうち２５ ｍｌを
ペトリ皿中に注いだ。最終胞子濃度は１０5胞子／ｍｌであった。続いて、直径
０．５ ｃｍの無菌抗生物質試験ディスク（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ｕｎｄ Ｓ
ｃｈｕｅｌｌ、ドイツ・ダッセル）を、試験プレートに適用した。その後、続い
て、ＡＦＰ溶液（１００ ｍｇ／ｍｌ Ｓ．テンダイ形質転換体の凍結乾燥培養
ろ過物）の５、１０、１５および２０μｌを、試験ディスク上にピペッティング
し、そして試験プレートを３０℃で４日間インキュベーションした。阻害区域の
直径は、ＡＦＰ溶液５μｌで０．９ ｃｍ、１０μｌで直径１．３ ｃｍ、溶液
１５μｌで１．９ ｃｍ、そして２０μｌで２．２ ｃｍであった。実施例３−発酵による産生の改善 ホースを備えたフラスコ中で、１００ ｍｌの前培養培地（１０３ ｇ／ｌ
スクロース、２０ ｇ トリプシン大豆ブロス（Ｔｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ Ｂｒ
ｏｔｈ）（Ｏｘｏｉｄ、ヴェーゼル（Ｗｅｓｅｌ））、１０ ｇ／ｌ ＭｇＣｌ 2 、１０ ｇ／ｌ 酵母抽出物）に、Ｓ．テンダイ株の寒天切片（ａｇａｒ ｓ
ｅｃｔｉｏｎ）を接種した。培養を、軌道震蘯装置（ｏｒｂｉｔａｌ ｓｈａｋ
ｅｒ）上、２８℃、２００ ｒｐｍで５日間増殖させた。
【００１８】 １０ｌ（１０リットル）の産生培地（１０３ ｇ／ｌ スクロース、２０ ｇ
トリプシン大豆ブロス（Ｏｘｏｉｄ、ヴェーゼル）、１０ ｇ／ｌ ＭｇＣｌ 2 、１０ ｇ／ｌ 酵母抽出物、１００μｌ デスモフェン（ｄｅｓｍｏｐｈｅ
ｎ）、ｐＨ ７．５）に、前述の前培養１００ ｍｌを接種した。使用した発酵
槽は、Ｂｉｏｓｔａｔ Ｅ（Ｂｒａｕｍ、メルズンゲン（Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ）
）であった。発酵は、２８℃、７００ ｒｐｍおよび０．５ ｖｖｍの空気で、
４日間行った。その後、発酵を停止し、そして３０００ ｒｐｍおよび４℃での
遠心分離により、培養上清（ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ）を採取
した。続いて、凍結乾燥により、バッチを乾燥させた。該粉末を直接使用するこ
とが可能であった。阻害区域試験において、ボトリティス・シネラに対して、１
５μｌの凍結乾燥物（１００ ｍｇ／ｍｌ）を使用した場合、１．７ ｃｍの阻
害区域が検出され、ボトリティス・シネラ ＺＦ ３６２９に対して使用した場
合、２．３ ｃｍの阻害区域が検出された。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｐ 21/02 5/00 Ｃ Ｆターム(参考） 2B030 AA02 AB03 AD05 CA17 CA19 CB03 CD02 CD07 CD10 4B024 AA08 BA67 BA80 CA03 DA01 GA11 4B064 AG01 BA13 CA04 CA11 CC24 DA11 4B065 AA50Y AA58X AA89X AB01 AC14 BA03 CA24 CA47 CA53 4H011 AA01 BA01 BB21 BC18 DA15 DC05 DD03 DE15 4H045 AA30 BA10 CA11 EA06 FA74 HA05

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 子嚢菌（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）科の植物病原性真菌に
    対する、特にボトリティス・シネラ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒａ）に対す
    る、ストレプトミセス・テンダイ由来の分子量およそ１０ ｋＤａを有する抗真
    菌タンパク質（ＡＦＰ）の使用。
  2. 【請求項２】 ＡＦＰが、好ましくは少なくとも１つの補助剤（ａｕｘｉ
    ｌｉａｒｙ）を共に含む処方の形で用いられる、請求項１に記載の使用。
  3. 【請求項３】 ＡＦＰがトランスジェニック植物中で形成される、請求項
    １に記載の使用。
  4. 【請求項４】 トランスジェニック植物が、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）
    、ワタ（ｃｏｔｔｏｎ）、ジャガイモ（ｐｏｔａｔｏ）、バナナ（ｂａｎａｎａ
    ）、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、キャッサバ（ｃａｓａｖａ）
    、タバコ（ｔｏｂａｃｃｏ）、アブラナ（ｏｉｌｓｅｅｄ ｒａｐｅ）（カノラ
    （ｃａｎｏｌａ））、ジャガイモ、テンサイ（ｓｕｇａｒ ｂｅｅｔ）、穀類、
    イチゴ（ｓｔｒａｗｂｅｒｒｉｅｓ）、野菜、マメ（ｌｅｇｕｍｅｓ）、トマト
    （ｔｏｍａｔｏ）、レタス（ｌｅｔｔｕｃｅ）またはメロン（ｍｅｌｏｎ）中よ
    り選択される、請求項３に記載の使用。
  5. 【請求項５】 穀類がコムギ（ｗｈｅａｔ）、オオムギ（ｂａｒｌｅｙ）
    またはオートムギ（ｏａｔｓ）中より選択され、使用される野菜がキャベツ（ｃ
    ａｂｂａｇｅ）であり、あるいはマメがエンドウ（ｐｅａｓ）または豆（ｂｅａ
    ｎｓ）より選択される、請求項４に記載の使用。
  6. 【請求項６】 トランスジェニック植物が、配列番号１で請求される通り
    の核酸を含む、請求項３−５のいずれか１項に記載の使用であって、配列番号１
    が本請求項の一部である前記使用。
  7. 【請求項７】 指定される植物病原性真菌が１つまたはそれ以上の作物保
    護剤（ｃｒｏｐ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔｓ）に耐性である、請求項
    １−６のいずれか１項に記載の使用。
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