JP2002526753A - 化学構築物およびそれらの使用 - Google Patents

化学構築物およびそれらの使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、基Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒ（上記式中、Ｒは基質またはコードタグであり、基Ｙ１およびＹ２は、それぞれ第一の開裂部位を有する連結基であり、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方は第一の開裂部位および基Ｒの間に配置された第二の開裂部位を有し、第一の開裂部位が第二の開裂部位に対して直交的かつ選択的に開裂可能であり、基Ｙ１およびＹ ２が両方とも第二の開裂部位を有するときには、Ｙ１の第二の開裂部位はＹ２の第二の開裂部位に対して選択的かつ直交的に開裂可能であり、第二の開裂部位は開裂可能であって基質を放出し、第一の開裂部位は選択的に開裂可能であって基質Ｒおよび連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆｒを放出し、(i)化学断片Ｆｒは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片Ｆｒを増感する増感基Ｇを含み、および／または(ii)断片Ｆｒは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む）を連結させた固形支持体Ｑを含んでなる固相合成で用いる化学構築物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の分野 本発明は、固相合成で用いる化学構築物、およびこの構築物を用いる固相合成
の生成物を検出しおよび／または特性決定するための方法に関する。
【０００２】 発明の背景 固相合成は、ペプチド合成の分野で多年に亙り知られており、更に最近は非ペ
プチドの合成にも段々用いられるようになってきた。
【０００３】 固相合成は、特に組合わせ化学(combinatorial chemistry)の分野および薬剤
発見の新たな指標の潜在的供給源としての化学ライブラリーの調製に応用されて
きており、例えば、Anthony W. Czamik, Analytical Chemistry News and Featu
res, June 1, 1998, pp 378A-386A、および組合わせインデックス(The combinat
orial Index), Barry A. Bunin, Academic Press, サンディエゴ, 1998年を参照
されたい。組合わせ化学による方法の特徴は、比較的限定された数の分子構築ブ
ロックから比較的少数の反応で非常に多数の様々な化合物を調製することができ
ることである。組合わせ化学では、固形支持体に束縛された化学的出発材料の懸
濁物をＮ個の部分に分割し、そのそれぞれを異なる試薬と反応させる「スプリッ
ト・アンド・プール(split and pool)」法が用いられる。次に、Ｎ個の反応の生
成物をプールして十分に混合し、生成するプールをＮ′個の部分に分割し、それ
ぞれの部分を異なる試薬と再度反応させるのである。この手順は、反応順序にお
いて段階があるだけの回数を繰返すことができる。従って、三段階反応順序につ
いては、反応混合物をそれぞれの段階で１０個の部分に分割し、プールのそれぞ
れを異なる試薬と反応させた後に他の部分と再度組み合わせると、この方法によ
って形成される化合物の総数は１０３＝１０００となる。従って、スプリット・
アンド・プール法を用いることによって、多数の様々な分子を最小限度の数（上
記の場合には３０）の反応を用いて合成することができることが分かる。
【０００４】 固相支持体（例えば、樹脂ビーズ）のそれぞれは、単一の生成物分子をこれに
繋ぎ止めるので、原則として反応生成物のそれぞれは単にそれぞれの単一固形支
持体を単離し、生成物を支持体から開裂することによって分離して分析し、また
は生物学的試験を行うことができる。しかしながら、組合わせ法によって大きな
ライブラリーで生成した化合物の数は、それぞれの化合物を同定し、特性決定す
ることが実行不可能となる可能性があることを意味している。従って、化合物は
、通常は固形支持体上でまたは支持体から開裂した後に最初に試験し、何らかの
生物活性を示す化合物だけを次に同定する。実施する生物学的試験の数を最小限
にするため、化合物を所定数の化合物を含むプールで試験し、不活性プールを廃
棄し、活性プールについて更に検討を加えることができる。化合物の生物活性は
、短時間に多数の化合物を分析することができる高処理量自動分析法を用いて分
析することができる。
【０００５】 化学者が直面する問題点の一つは、組み合わせライブラリーではそれぞれの化
合物は極めて低濃度だけで含まれ、所定の固形支持体上にある化合物は通常はは
不十分な量であり化合物の生物学的試験および同定を行うことができないので、
このライブラリーでの様々な化合物を同定および特性決定をどのように行うかと
いうことである。この問題は、化合物の同一性を決定することができるコードタ
グ(coding tag)をそれぞれの固形支持体に供給することによって検討されてきた
。例えば、コードタグは、所望の標的化合物の構築と平行して固形支持体上に逐
次的に構築し、コードタグが生成物化合物の合成履歴を反映しかつそれぞれの生
成物化合物について唯一のものとすることができる。コードタグは、通常は生成
物化合物を構築するのに用いられる化学に直交している種類の化学反応を用いる
ことによってコード単位と生成物化合物とが混同されないようにして支持体上に
構築される。生成物化合物を試験してその生物活性を確認したならば、コードタ
グを翻訳して化合物を確認することができる。
【０００６】 生成物化合物に、化合物のプールの一部として予備的な生物学的スクリーニン
グを行い、プールが活性を有することが示された場合には、次により小さな化合
物のプールまたは個々の化合物を検討し、活性化合物を確認する必要がある。多
くの分析系では、生物学的試験を行うために化合物を固形支持体から開裂させる
必要があり、これがプール試験法で問題を生じる可能性がある。従って、試験を
行うために活性化合物を総て固形支持体から開裂し、プールが多数の溶解化合物
の混合物を含むようにすると、更に試験を行うためにそれぞれの個別化合物の回
収では困難な分離の問題が生じる。この問題を解決しまたは回避するために、生
成物化合物、例えば薬剤分子が、数種類の異なるリンカー基であってそれぞれが
異なる化学条件下で直交的かつ選択的に開裂可能であるものによって固形支持体
に連結されているリンカー基によって固形支持体に連結されている「ディファレ
ンシャル放出(differential release)」構築物を作成した。このような構築物（
構築物Ａ）を、下記に図解的に示す。
【化５】
【０００７】 組合わせ合成図によれば、反応生成物をｘ個のプールであってそれぞれがｙ個
の固形支持体を含み、それぞれの固形支持体が異なる生成物薬剤分子を有するも
のに分割することができる。次に、それぞれのプールにリンカーＢを選択的に開
裂するのに適する開裂条件を施し、固形支持体上に存在する総薬剤の一部を解除
することができる。次に、固形支持体を除去し、残留溶液に所望の生物分析を行
うことができる。プールが全体として生物活性を示す場合には、次にこの活性プ
ール中の個々の部分的に開裂した固形支持体を個々の容器に分離し、第二のリン
カーであるリンカーＣを開裂させるのに有効な条件を施すことができる。次いで
、個々の薬剤を、それぞれ生物活性についてスクリーニングすることができる。
【０００８】 生物活性が特定の個々の固形支持体と会合した薬剤について見られたならば、
支持体に、タグコードを翻訳して薬剤化合物の同一性を確立することができる条
件を施す。
【０００９】 「ディファレンシャル放出」の代替法は、「段階放出(tiered release)」であ
る。段階放出系では、構築物は、ディファレンシャル放出構築物でのように２個
の直交開裂部位を用いず、単一の開裂部位のみを用いる。薬剤または試験化合物
の一部を第一の開裂段階で放出して第一の生物学的分析に十分な化合物を提供し
、次いで同一の開裂部位での開裂によって更に薬剤を放出し、他の生物学的分析
を行うことができる。このような段階放出系では、反応が比較的遅くかつ開裂速
度を合理的に良好に制御することができる開裂反応が用いられる。段階放出系で
は、典型的には光化学開裂が用いられる。段階放出系で用いる構築物を、構築物
Ｂとして下記に示す。
【化６】
【００１０】 任意の固相合成法では、組合わせ手順の一部であってもまたはなくても、一連
の段階における所定の反応段階に最適な条件を決定することができることが重要
である。また、反応の進行または経路を観察して、特定の反応が完結したかまた
は実際に特定の反応が少なくとも起こったかどうかを決定することができるよう
にすることも重要である。これは、所定の段階を完結させることができないと、
副生成物が形成されることにより、副生成物が生成しなければ比較的直接的な分
離手順であるものを複雑化する可能性がある多段階固相合成では特に重要である
。
【００１１】 侵襲的および非侵襲的分析法が固相合成の生成物の決定について知られている
が（組合わせインデックス(The Combinatorial Index)、上記引用を参照）、固
相合成に関して認められている問題点の一つは、一般的に反応の進行を観察する
ことは更に困難であることである（例えば、上記のCraznikの文献を参照）。こ
れは、特に組合わせ化学法の生成物に関して真実であり、このような方法によっ
て生成した多数の化合物を分析する迅速高処理法を用いる必要がある。質量スペ
クトル分析法のような手法は、潜在的には高処理量分析を行う手段として理想的
に適しているが、本質的な問題点は、必ずしも総ての化合物が質量スペクトル分
析法の条件下で保証された応答を生じるとは限らないことである。実際に、多く
の化合物は、余り分子の断片化を引起すことなく分子イオンを検出することを目
的とするマトリックス補助レーザー・デソープションイオン化（ＭＡＬＤＩ）お
よび電子スプレー質量スペクトル分析法のような質量スペクトル分析法のいわゆ
る「ソフト」法では「検知されない」のである。この理由の一つは、ＭＡＬＤＩ
および電子スプレー条件下では、多くの化合物、特にペプチドは検出可能な質量
スペクトル応答を生じるほど十分良好にイオン化しないことである。
【００１２】 本発明の目的は、例えば組合わせ合成において、固相支持体上での化学反応の
進行または経路を観察する手段であって、既知の方法に固有の問題点を回避しか
つ質量スペクトル分析法を用いて固相合成法の生成物を検出し同定する手段を提
供するものを提供することである。
【００１３】 従って、第一の態様では、本発明は、 基 Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒ （上記式中、 Ｒは基質またはコードタグであり、基Ｙ１およびＹ２は、それぞれ第一の開裂
部位を有する連結基であり、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方は第一の開裂部位
および基Ｒの間に配置された第二の開裂部位を有し、第一の開裂部位が第二の開
裂部位に対して直交的かつ選択的に開裂可能であり、基Ｙ１およびＹ２が両方と
も第二の開裂部位を有するときには、Ｙ１の第二の開裂部位はＹ２の第二の開裂
部位に対して直交的かつ選択的に開裂可能であり、第二の開裂部位は開裂可能で
あって基質を放出し、第一の開裂部位は選択的に開裂可能であって基質Ｒおよび
連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆｒを放出し、 (i)化学断片Ｆｒは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片
Ｆｒを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆｒは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む）
を連結させた固形支持体Ｑを含んでなる固相合成で用いる化学構築物を提供する
。
【００１４】 好ましくは、少なくとも１個の基Ｒは基質であり、更に好ましくはこの基質は
生物活性を有する薬剤分子または他の分子である。
【００１５】 好ましい態様では、 基 Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒ （上記式中、 Ｒは基質（薬剤分子など）であり、基Ｙ１およびＹ２は、それぞれ直交的かつ
選択的に開裂可能な第一および第二の開裂部位を有する連結基であり、Ｙ１にお
ける第二の開裂部位がＹ２における第二の開裂部位に対して選択的かつ直交的に
開裂可能であり、第二の開裂部位が開裂可能であって基質を放出し、第一の開裂
部位は第二の開裂部位と固相支持体との間の位置に配置され、選択的に開裂可能
であって基質Ｒおよび連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆｒを放出し
、 (i)化学断片Ｆｒは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片
Ｆｒを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆｒは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む）
を連結させた固形支持体Ｑを含んでなる、固相合成で用いる化学構築物が提供さ
れる。
【００１６】 本発明の構築物は、一般式
【化７】 によって示すことができる。
【００１７】 本発明の構築物は、一層容易に分析して、固相支持体上での個々の反応の収支
を決定することができるディファレンシャル放出系を提供する。例えば、構築物
に有効な開裂条件を施して第一の開裂部位のそれぞれで開裂を生じさせることに
よって、「分析レバー」に連結した基質Ｒを含む化学断片を生成させ、化学断片
、従って基質の検出可能性を高める。例えば、第一の開裂部位における開裂を用
いて、特定の基質が形成されたかどうか、すなわち反応図またはライブラリー生
成中に品質管理（ＱＣ）を行う手段として有用でありかつ所定の合成工程段階に
ついての条件を最適化するときに用いることができる分析の手段を提供する柔軟
さを決定することができる。
【００１８】 構築物は、更に基Ｙｎであって、そのそれぞれが他の基Ｙ中の第二の開裂部位
に対して選択的かつ直交的に開裂可能な第二の開裂部位を有するものを含むこと
ができる。例えば、構築物は、基Ｙ３Ｑ（式中、基Ｙ３中の第二の開裂部位はＹ １ ＲおよびＹ２Ｒにおける第二の開裂部位とは異なる化学的条件下で開裂する）
を含むことができる。従って、本発明によれば、二、三、四またはそれ以上の段
階数で生成物である基質分子（例えば、薬剤）をディファレンシャル放出し、こ
れにより大きな組合わせライブラリーの生成物の管理可能な大きさのプールでの
生物学的スクリーニングを補助することができる。
【００１９】 第二の態様では、本発明は、化学ライブラリーを生物活性について分析するデ
ィファレンシャル放出法であって、 (i)上記で定義した通りの基Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒを連結させた固形支持体Ｑを
含んでなる構築物に基Ｙ１Ｒから基質Ｒを放出するのに有効な開裂条件を施し、 (ii)基Ｙ１Ｒから放出された基質Ｒを生物学的分析法で試験し、 (iii)次いで、構築物に基Ｙ２Ｒから基質Ｒを放出するのに有効な開裂条件を
施し、 (iv)基Ｙ２Ｒから放出された基質Ｒを生物学的分析法で試験する ことを含んでなる、方法を提供する。
【００２０】 ライブラリーを分析するディファレンシャル放出法を提供することに加えて、
本発明は、選択的に開裂可能であって基質Ｒおよび連結基Ｙの少なくとも一部を
含んでなる断片Ｆｒを放出し、 (i)化学断片Ｆｒは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片
Ｆｒを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆｒは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む構
築物を用いる段階放出分析の方法も提供する。
【００２１】 従って、もう一つの態様では、本発明は、化学ライブラリーを生物活性につい
て分析する段階放出法であって、 (i)上記で定義した通りの基Ｙ１Ｒを連結させた固形支持体Ｑを含んでなる構
築物に基Ｙ１Ｒから基質Ｒの第一の部分を放出するのに有効な開裂条件を施し、 (ii)基Ｙ１Ｒから放出された基質Ｒの第一の部分を生物学的分析法で試験し、 (iii)構築物に基Ｙ１Ｒから基質Ｒの第二の部分を放出するのに有効な開裂条
件を施し、 (iv)基Ｙ１Ｒから放出された基質Ｒの第二の部分を生物学的分析法で試験する
ことを含んでなる方法を提供する。
【００２２】 本発明の上記ディファレンシャル放出および段階放出法のそれぞれにおいて、
開裂段階(i)は典型的にはそれぞれが異なる基質Ｒを有する固形支持体のプール
で行われ、開裂段階(i)の後に、固形支持体は、典型的には放出された基質Ｒか
ら分離される。生物活性がこの部分で検出されるときには、固形支持体を単離し
、またはより小さなプールに分類した後、開裂段階(iii)を施して、更に基質を
放出して試験し、生物活性を特定の固形支持体または支持体の小さな群に対して
記録することができる。
【００２３】 組合わせ合成図の生成物の同一性の決定を補助するため、それぞれの固形支持
体は構築物の合成履歴の少なくとも一部を示す情報をコードするコードタグまた
はコード配列を含むことができる。コードタグは固形支持体自身に組み入れるこ
とができ、またはコード配列を固形支持体に連結することができる。コード配列
は、好ましくは開裂可能であって固形支持体から断片Ｆａであって、コード配列
と場合によっては連結基Ｙａの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆａを放出する
開裂部位を有する連結基Ｙａによって固形支持体に連結されている。
【００２４】 (i)化学断片Ｆａは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断
片Ｆａを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆａは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含むの
が好ましい。
【００２５】 コードタグは、質量スペクトル分析条件下で断片化し、特に順次断片化して、
基質を同定することができるコードを提供する１個以上の特徴的な質量スペクト
ルピークを提供することができるコード群の基または配列の形態を採ることがで
きる。例えば、コードタグは、異なるアミノ酸、例えば、２、３、または４種類
のアミノ酸の配列を含んでなることができ、アミノ酸の同一性および順序が基質
の同一性を示すコードを形成する。質量スペクトル分析条件下では、コード基（
例えば、アミノ酸）を逐次開裂させて、例えば、１、２個またはそれ以上のアミ
ノ酸がタグから失われたコードタグに関して一連の特徴的な質量スペクトル断片
を与えることができる。断片ピークの質量を親コードタグの質量に関連付けるこ
とによって、個々のコード基（例えば、アミノ酸）およびそれらのコードタグ上
の位置を同定することができ、これによりコードを分解し、基質を同定すること
ができる。増感基Ｇおよび質量スペクトルに特徴的なサインを付与する手段を提
供することによって、本発明は、第一にアミノ酸または他のコード基を十分にイ
オン化して強力な質量スペクトルピークを与えるようにし、第二にコード配列の
断片化から形成した特徴的な質量スペクトル断片のそれぞれを無関係のピークか
ら識別できるようにする手段を提供する。
【００２６】 従って、もう一つの態様では、本発明は、固形支持体Ｑに連結した基質Ｒを質
量スペクトル分析法により確認する方法であって、固形支持体Ｑは開裂可能で固
形支持体から断片Ｆａを放出する開裂部位を有する連結基Ｙａによってコード配
列を結合させ、断片Ｆａはコード配列と連結基Ｙａの少なくとも一部とを含んで
なり、 (i)化学断片Ｆａは、質量スペクトル分析に対して化学断片Ｆａを増感
する増感基Ｇを含み、 (ii)断片Ｆａは、断片の質量スペクトルに特徴的なサインを付与する手段を含
み、 コード配列は、性質および順序が基質Ｒの同一性を示しているコード基の配列
を含んでなり、 連結基Ｙａを開裂して、固形支持体から断片Ｆａを放出させ、断片Ｙａにコー
ド基の質量スペクトルを断片化しかつコード配列からの１個以上のコード基の損
失に相当する質量スペクトル断片を形成するのに有効な条件下で質量スペクトル
分析法を施した後、質量スペクトル断片イオンの質量スペクトルピークを断片Ｙ ａ の分子イオンと相関させて、個々のコード基の配列を同定する ことを含んでなる、方法を提供する。
【００２７】 本発明の方法および構築物において、基質とは化学的に異なるコードタグなど
の代替物としてまたはの他に、基質自身の一部を固形支持体に結合させ、支持体
から基質の残りを除去するのに用いる条件下では支持体から開裂されないように
することができる。従って、残りの基質は、質量スペクトル分析法のような方法
によって同定することができる分析標識として機能することができる。更に具体
的には、構築物中の総基質Ｒの一部を、開裂可能であって固形支持体から基質と
連結基Ｙｂの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆｂを放出する開裂部位を有する
連結基Ｙｂによって固形支持体に連結することができ、連結基Ｙｂは、開裂可能
ではなく、基Ｙ１Ｒ、Ｙ２Ｒおよび（存在する場合には）Ｙｎにおける第二の開
裂部位を開裂するのに有効な条件下で基質Ｒを放出せず、 (i)化学断片Ｆｂは、質量スペクトル分析に対して化学断片Ｆａを増感する増
感基Ｇを含み、 (ii)断片Ｆｂは、断片の質量スペクトルに特徴的なサインを付与する手段を含
む ことを特徴とする。
【００２８】 従って、生物学的試験のために構築物から基質の主要部分を放出した後に、断
片Ｆｂを固形支持体から選択的に開裂させ、質量スペクトル分析法のような方法
によって容易に分析することができる増感した基質を得ることができる。これは
、例えば生物活性が見出された基質の主要部分について生物学的分析法を行った
後に行うことができ、基質の同一性を決定することが必要であった。あるいは、
例えば固相合成の生成物の品質を試験するための品質管理（ＱＣ）手順の一部と
して、最初に固形支持体から他の基質を除去することなく、断片Ｆｂを固形支持
体から開裂させることができる。この後者の手順では、断片Ｆｂを断片Ｆｒおよ
びＦａと共に固形支持体から開裂させることができ、断片Ｆｒ、ＦａおよびＦｂ を分析することによって合成の成果を完全に描写することができる。
【００２９】 基ＹａおよびＹｂの開裂部位は、好ましくは基Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒにおける第
一の開裂部位を開裂するのに必要な条件に相当する条件下で開裂可能である。従
って、生成物または基質含有断片およびコードタグ含有断片を同時に固形支持体
から開裂することによって、それらを同時に（例えば、質量スペクトル分析法に
よって）分析することができる。
【００３０】 化学断片Ｆａは、好ましくは機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して
化学断片Ｆａを増感する増感基Ｇを含む。
【００３１】 本発明の好ましい態様では、構築物は、増感基Ｇがそれぞれ基Ｙ１、Ｙ２、Ｙ ｎ 、ＹａまたはＹｂの（複数の）第一の開裂部位での開裂によって生成すること
を特徴とする。本発明のこの好ましい態様では、増感基Ｇを含む残基は、側鎖の
開裂または保護基の単なる除去とは異なり、構築物の「骨格」の開裂によって（
複数の）第一の開裂部位で形成しまたは導入される。
【００３２】 増感基Ｇは、断片Ｆｒ、ＦａまたはＦｂ、従って基質Ｒに、所定の分析手法、
特に質量スペクトル分析法によって分析に対して一層感受性高いコードタグまた
は基質含有コードタグを与える。従って、増感基は、質量スペクトル分析計、特
に電子スプレー質量スペクトル分析法で見られる条件下で容易にイオン化して強
力なシグナルを与える基であることができる。
【００３３】 イオン化可能な増感基は、断片Ｆｒ、ＦａまたはＦｂが質量スペクトル分析計
で十分にイオン化して強力な応答を生じるようにする働きをする。これにより、
適当なイオン化基が存在せず、高処理量質量スペクトル法による分析に問題が多
い固相法によって合成した多くの分子に固有の問題点が解決される。
【００３４】 イオン化可能な基は、例えば塩基性アミノ基またはカルボキシレート基である
ことができるが、塩基性アミノ基であるのが好ましい。本明細書で用いる「塩基
性アミノ基」という用語は、特に容易にプロトン化されるアミノ基を表すことを
理解されるであろう。
【００３５】 塩基性アミノ基は、第一アミノ基、第二アミノ基、または第三アミノ基である
であることができる。塩基性アミノ基が第三アミノ基である場合には、例えばピ
ペリジノ、ピペラジノ、ピロリジノまたはモルホリノのような環状アミノ基であ
ることができ、ピペリジノまたはピペラジノ（例えば、Ｎ−メチルピペラジノ）
が現在のところ好ましい。
【００３６】 本発明の好ましい態様によれば、塩基性アミノ基のような増感基Ｇを含む残基
が化学断片Ｆｒとして開裂部位に形成されまたは導入され、断片ＦａまたはＦｂ （以後、集合的に分析断片と表す）は固形支持体から開裂する。この方法で増感
基Ｇを形成することの利点は、構築物の化学を妨げる先在するまたは予備形成し
た増感基の潜在的問題点を防止することができることである。
【００３７】 増感基Ｇを作り上げる原子または官能基は、樹脂からの分析断片の開裂前に構
築物中に潜伏形態で存在することができ、開裂条件は単に増感基Ｇの所在を明ら
かにする働きをするだけである。あるいは、増感基Ｇを作り上げるまたは含む原
子または官能基を、開裂反応中に開裂部位に導入することができる。例えば、増
感基が塩基性アミノ基である場合には、アミノ基の窒素原子が開裂前の構築物中
に存在することができ、またはこれを開裂反応中に導入することができる。
【００３８】 増感基Ｇを開裂反応中に外部供給源から導入するときには、これは一層大きな
残基の一部を形成することができる。例えば、基Ｇは、基Ｘ−Ｇ（上記式中、Ｘ
は親核基または親電子基、例えば、窒素を基剤とするまたは硫黄を基剤とする親
核基の残基である）の一部として導入することができる。基Ｘ−Ｇの例としては
、式Ｇ−Ａｌｋ−Ｎｕｃ（上記式中、Ａｌｋはアルキレン基であり、Ｎｕｃは第
二アミノ基（例えば、Ｎ−メチルピペラジンの第二アミノ基）またはチオレート
基のような親核基である）の基が挙げられる。
【００３９】 分析断片は、断片の質量スペクトルに特徴的なサインを付与する手段を含むの
が好ましい。このサインは、断片中に「ピークスプリッティング」同位体標識を
組み入れることによって有利に提供することができる。ピークスプリッティング
同位体標識は、多数の安定同位体の形態で存在する少なくとも１個の原子を含ん
でなる。分析断片中の１個以上の特定の原子を同位体標識して、所定の原子が同
位体の混合物で標識されるようにすることによって、分子イオンの質量スペクト
ルは特徴的なパターンとして現れ、正確なパターンは個々の同位体の相対量によ
って変化する。従って、例えば、断片Ｆｒ中の所定の原子を標識して原子の５０
％が一方の同位体の形態であり、５０％がもう一方の同位体の形態であるように
する場合には、質量スペクトルは、ピークがほぼ同等な高さである特徴的な二重
線として分子イオンを示す。
【００４０】 （複数の）ピークスプリッティング原子の目的は、分析断片Ｆｒおよび／また
はＦａおよび／またはＦｂから生じる質量スペクトルの任意のピークを特性決定
し、これによってこれらのピークを外部材料によるものから識別する特徴的パタ
ーンを提供することである。
【００４１】 分析断片Ｆｒ、ＦａおよびＦｂは同一または異なる標識をすることができるが
、好ましい態様では、それらは異なる標識を行い、異なる特徴的なサインを生成
させる。この方法では、コードタグによる質量スペクトルピークは、基質を含む
断片からの質量スペクトルピークと識別することができる。
【００４２】 同位体ピークスプリッティング標識として用いることができる原子の例として
は、１Ｈ／２Ｈ（Ｄ）、７９Ｂｒ／８１Ｂｒ、１２Ｃ／１３Ｃ、１４Ｎ／１５Ｎ
、および１６Ｏ／１８Ｏが挙げられる。
【００４３】 分析断片Ｆｒ、ＦａおよびＦｂは、それぞれ単一ピークスプリッティング同位
体標識または２種類以上の標識を含むことができる。例えば、同位体標識は単一
の臭素原子であることができ、この場合には固形支持体から開裂後に放出された
分析断片の分子イオンについてのピークは二本線として現れる。第二以後の（複
数の）ピークスプリッティング標識を導入することによって、更に複雑なピーク
パターンが分子イオンについて生成する。
【００４４】 （複数の）同位体ピークスプリッティング標識は、好ましくは基Ｙ１およびＹ ２ の第一および第二の開裂部位の間に配置される。
【００４５】 基Ｙ１の第一および第二の開裂部位は、第一および第二のリンカー基Ｌ１およ
びＬ２によって定義することができ、基Ｙ２の第一および第二の開裂部位は第一
および第二のリンカー基Ｌ１およびＬ３によって定義することができ、基Ｙａの
開裂部位はリンカー基Ｌａによって定義することができ、これは好ましくはＬ１ に相当し、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３は選択的かつ直交的に開裂可能である。「スペ
ーサー基」Ａを第一および第二のリンカー基のそれぞれの対の間、またはリンカ
ー基Ｌａとコードタグとの間に挿入することができ、スペーサー基Ａは典型的に
は同位体ピークスプリッティング標識を含む。
【００４６】 従って、本発明の好ましい態様は、式
【化８】 （上記式中、「Ｔａｇ」はコード配列を表す） によって表すことができる。
【００４７】 もう一つの好ましい態様では、構築物は、リンカーＬ２およびＬ３に対して直
交的に開裂可能であるリンカーＬ１によって固形支持体に連結された基質を含む
分析基Ｒ−Ａを有する。この種の構築物は、式
【化９】 によって表すことができる。
【００４８】 もう一つの好ましい態様では、コード配列は省略され、基質を同定する手段は
、開裂して質量スペクトル分析法による分析について増感した基質を提供するこ
とができる基Ｒ−Ａ−Ｌ１によって提供される。このような構築物は、式
【化１０】 を有する。
【００４９】 もう一つの好ましい態様では、本発明は、上記のようなスクリーニングの段階
放出法で用いる構築物、すなわち増感したコードタグを含む構築物を提供する。
このような構築物は、式Ｔａｇ−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｌ２−Ｒによって表
すことができる。
【００５０】 本発明の他の態様では、構築物は、
【化１１】 （上記式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、ＡおよびＲは上記で定義したとおりであり、「
Ｔａｇ」はコード配列を表す） からなる群から選択される式を有することができる。
【００５１】 リンカーＬ１、Ｌ２およびＬ３は直交的かつ選択的に開裂可能であり、すなわ
ち一つのリンカーの開裂部位で開裂を行うのに用いた条件では、他のリンカーは
開裂されない。広汎な様々な種類の開裂反応を用いることができ、例えば、酸触
媒開裂、塩基触媒開裂、酸化開裂、還元開裂、親核置換、親電子置換、および熱
、光化学および酵素開裂から選択される反応である。
【００５２】 従って、好ましい態様では、上記で定義した通りの化学構築物であって、第一
の開裂部位（例えば、リンカーＬ１によって定義された）が酸条件下での開裂、
塩基触媒開裂、酸化開裂、還元開裂、親核置換、親電子置換、および熱、光化学
および酵素開裂からなる群から選択される１種類の化学によって選択的に開裂可
能であり、第二の開裂部位（例えば、リンカーＬ２によって定義された）の一つ
が上記群から選択される第二の異なる種類の化学によって選択的に開裂可能であ
り、第二の開裂部位（例えば、リンカーＬ３によって定義された）の他方が上記
群から選択される第三の異なる種類の化学によって選択的に開裂可能であるもの
が提供される。
【００５３】 開裂部位／リンカーの任意の１個以上は、「安全装置」の種類のものであるこ
とができ、すなわち開裂部位またはリンカー基は、第二段階で開裂することがで
きる前に第一段階で化学的に修飾しなければならない。このような配置の利点は
、開裂が偶然に起こる可能性が防止されまたは有意に減少することである。「安
全装置」機構の一例は、第一段階での官能基の酸化を伴い、この酸化は官能基を
以後の開裂段階での親核基による置換を一層受けやすくする働きをする。親核基
は、構造がかなり変化する可能性がある。例えば、一態様では、親核基はアミノ
基含有親核基であることができ、アミノ基は親核置換反応に関与し、アミノ基は
開裂部位に直接結合している。あるいは、もう一つの態様では、アミノ基（また
は他の増感基）は、開裂部位に結合する硫黄親核基のようなもう一つの親核基を
含む基（例えば、ジアルキルアミノアルキル−チオレートアニオン）に存在する
ことができる。もう一つの態様では、親核基は、親核基として機能する一つの塩
基性窒素原子と増感基Ｇとして機能するもう一つの塩基性窒素原子を含む残基で
あることができ、このような親核基の一例はＮ−メチルピペラジノである。
【００５４】 酸性条件下で選択的に開裂することができるリンカーの例としては、適当に置
換されたベンジルオキシカルボニル基および置換ジフェニル−メチルアミノ基が
挙げられ、これらはいずれもトリフルオロ酢酸の作用によって開裂することがで
きる。
【００５５】 酸開裂可能なリンカー基の具体例は、組合わせインデックス(The combinatori
al Index), Barry A. Bunin, Academic Press, サンディエゴ, 1998年に記載さ
れており、上記文献の内容は、その開示の一部として本明細書に引用される。「
リンク(Rink)」または「ノール(Knorr)」型のリンカーは、典型的にはＮ−保護
された１−アミノ−１，１−ジフェニルメタン残基を含んでなり、アミノ基は、
脱保護を行うと、基質に結合することができ、フェニル環の一方は例えばジメト
キシ基で置換され、カルボキシアルキルオキシ置換基を有する他方は第二の結合
点を提供する。トリフルオロ酢酸で開裂すると、末端カルボキサミド基を有する
基質化合物を生じる。「ワング(Wang)」型のリンカーは、典型的には置換フェノ
キシアセチル基を含み、アセチル基は一つの結合点を提供し、フェニル環上のベ
ンジル性のヒドロキシル基は第二の結合点を形成する。エステルを基質のカルボ
キシル基とベンジル性のヒドロキシル基との間に形成することができ、このエス
テル基は次にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で開裂して、末端カルボキシレート基
を有する基質化合物を放出する。
【００５６】 光化学条件下で選択的に開裂することができる基の例としては、ｏ−ニトロベ
ンジルオキシカルバメート基のようなカルバメート基が挙げられ、初期の開裂は
ベンジルオキシとカルボニル基との間で起こり、生成する断片から二酸化炭素が
除去されて塩基性アミノ基を生じる。
【００５７】 親核置換によって開裂することができる基の例としては、５−カルボキシ−２
−メルカプトピリミジンのようなメルカプトピリミジンを基剤とする「安全装置
」リンカーが挙げられ、酸化条件下で反応することによって開裂を行ってスルホ
キシドまたはスルホン結合を生成した後、親核アミノ基と反応して２−アミノピ
リミジンを形成することができる。酸化したメルカプトピリミジンを基剤とする
リンカーの開裂を行う目的で用いることができる親核基の具体例としては、ピペ
リジンおよびＮ−置換ピペラジン（例えば、Ｎ−メチルピペラジン）のような環
状アミン、およびアミノ基含有チオレート親核基（例えば、ジメチルアミノエチ
ルチオレート）が挙げられる。酸化条件の例は、過酸、例えばｍ−クロロ過安息
香酸のような過安息香酸、およびモノベルオキシ硫酸カリウムのようなある種の
無機過塩のような酸化剤を生成した条件である。
【００５８】 例えば、直交的に開裂可能な第一および第二のリンカー基Ｌ１およびＬ２、ま
たはＬ１およびＬ３によって定義したように、第一および第二の開裂部位を作成
することによって、単に様々な開裂条件を用いることによって、構築物から分析
断片または基質Ｒを選択的に分離することができる。これは、特定の反応段階に
ついて条件を最適にするように設計した実験中に、化学者が構築物に分析断片を
開裂するのに適当な条件を施すことによって分析を行い、それぞれの試験反応の
収支を測定することができることを意味している。同様に、調製規模の反応（例
えば、スケールアップ反応または商業生産）中に、反応容器から多数の固形支持
体を取り出し、第一の開裂部位で構築物を開裂し、生成する断片を分析して、特
定の反応段階が上手くいったかどうかを見ることによって、品質管理（ＱＣ）を
行うことができる。一方、例えば、第一よりもむしろ第二のリンカー基上の第二
の開裂部位で開裂することにより、反応生成物Ｒが固形支持体から放出される。
従って、本発明の構築物の利点は、それらを特定の加工段階を最適にする目的で
実験室的水準およびリンカー基を修飾することなく調製的水準のいずれにおいて
も用いることができる点である。
【００５９】 本発明の一態様では、断片Ｆｒ、ＦａおよびＦｂ、更に好ましくはスペーサー
基Ａはアルキレン基またはアミノアルコキシ基を含む。アルキレン基の正確な大
きさおよびその置換度は現在のところは重要であるとは考えられていないが、具
体例はエチレンまたはプロピレンジアミンまたはアミノアルコール基であって、
置換または未置換であることができる。アルキレンジアミン基またはアミノアル
コールは、典型的には上記で定義した通りのピークスプリッティング同位体標識
を含む。２個のアミノ基は、それぞれ第一および第二のリンカー基に結合させる
ことができる。スペーサー基Ａの質量を増加させまたはその特性を変化させるた
め、アルキレンジアミン基をアリール基、例えば、Ｎ−ベンジル基のようなＮ−
アリール基によって置換することができ、またはアルキレン鎖を（１個以上のフ
ッ素原子で）置換して（分析断片の揮発性を変化させる）ことができる。Ｎ−ア
リール基は、場合によっては１個以上の置換基で置換することができる。
【００６０】 好ましくは、スペーサー基が１個以上の質量−スペクトルピークスプリッティ
ング同位体標識を含む場合には、これらをアルキレン鎖またはアルキレン鎖に結
合した置換基に配置することができる。例えば、アルキレンジアミンの２個のア
ミノ基の一方に結合したＮ−ベンジル基は、ピークスプリッティング原子重水素
で置換されているメチレン基を有することができる。あるいは、アルキレンジア
ミン上の置換基に含まれるアリール環（例えば、Ｎ−ベンジル基）をピークスプ
リッティング臭素原子で置換することができ、アリール基の具体例はＮ−ｏ−ブ
ロモベンジル基である。
【００６１】 断片Ｆｒ、ＦａまたはＦｂ、特にスペーサー基Ａ、並びに質量スペクトル分析
法を用いる同定の手段は、１種類以上の追加の増感剤を備えて、他の分析法によ
って特性決定を行うこともできる。例えば、スペーサー基は発色団を含み、紫外
（ｕｖ）または蛍光スペクトル分析法によって特性決定することができる。
【００６２】 アルキレンジアミンおよびアミノアルコール基はスペーサー基の特殊例として
挙げられるが、代替スペーサー基を用いることができる。例えば、スペーサー基
は、場合によっては酸素、窒素または硫黄のような１個以上のヘテロ原子を間に
挿入することができる鎖中に３０個以上の炭素原子を含む炭化水素鎖から形成す
ることができる。もう一つの代替法として、スペーサーは、例えば１個以上のア
ミノ酸を含むペプチド鎖であることができる。スペーサーが構築物の化学を妨げ
ないという条件では、スペーサーの正確な性質および長さは現在のところは重要
であるとは考えられない。
【００６３】 固形支持体Ｑは、固相合成で用いるのに適した任意の種類の固形支持体、特に
組合わせ化学であることができる。従って、純粋には、例えば固形支持体はビー
ズ、固形界面活性剤、固形基質、粒子、ペレット、ディスク、毛細管、中空繊維
、針、固形繊維、またはシリカゲルのような有機または無機ゲル、およびフラー
レンから形成した粒子のような不溶性の有機粒子の形態を採ることができる。
【００６４】 ビーズの例は、セルロースビーズまたは樹脂ビーズのようなポリマー性ビーズ
であり、樹脂ビーズを調製することができる材料の具体例としては、ポリスチレ
ン樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、およびジメチルアクリルアミド樹脂のような
官能化ポリマー樹脂が挙げられる。適当な支持体の例は、上記引用の組合わせイ
ンデックス(The Combinatorial Index)、Barry A. Bunin著に挙げられている。
【００６５】 もう一つの態様では、本発明は、上記で定義した構築物の分析法であって、基
Ｙ１およびＹ２、および場合によっては基Ｙａを開裂して、化学断片Ｆｒ（およ
び場合によっては断片ＦａおよびＦｂ）を放出した後、化学断片ＦｒおよびＦａ に質量スペクトル分析法、例えば電子スプレー質量スペクトル分析法を行うこと
を含んでなる方法を提供する。
【００６６】 断片Ｆｒの分析により、構築物の反応履歴についての情報が提供される。従っ
て、質量スペクトル分析により、所望な基質が所定の反応順序で形成されたかど
うかを容易に決定することができる。従って、断片Ｆｒの分析を用いて、固相反
応順序の基質または生成物を特性決定するだけでなく、反応の進行を追跡するこ
ともできる。
【００６７】 もう一つの態様では、本発明は、上記で定義した通りの化学構築物の製造に用
いる中間化学構築物であって、式Ｙ１，−Ｑ−Ｙ２，、ＲＹ１−Ｑ−Ｙ２，およ
びＹ１，−Ｑ−Ｙ２Ｒ（上記式中、Ｙ１，およびＹ２，は基Ｙの反応性または保
護された形態であり、Ｒ、ＱおよびＹは上記で定義した通りである）を有する、
中間構築物を提供する。
【００６８】 更にもう一つの態様では、本発明は、式Ｌ２，−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、
Ｒ−Ｌ２−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、Ｌ３，−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、Ｒ
−Ｌ３−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、Ｒ−Ｌ３−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｌ２ ， 、およびＬ３，−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｌ２−Ｒ（上記式中、Ｌ１，、Ｌ ２， およびＬ３，は上記で定義したリンカー基Ｌ１、Ｌ２およびＬ３，Ｌの反応
性または保護された形態であり、Ａｐはピークスプリッティング同位体標識を含
むスペーサー基Ａの反応性または保護された形態であり、Ｑ、Ｒ、Ａ、Ｌ１、Ｌ ２ およびＬ３は上記で定義した通りである）を有する中間構築物を提供する。特
定の態様では、基Ａｐは式ＮＨ−Ａｌｋ−ＮＸ１（上記式中、Ａｌｋはアルキレ
ン基であり、Ｘ１は水素またはアラールキル基である）を有する。中間構築物は
、好ましくは１Ｈ／２Ｈ（Ｄ）、７９Ｂｒ／８１Ｂｒ、１２Ｃ／１３Ｃ、１４Ｎ
／１５Ｎ、および１６Ｏ／１８Ｏのような原子のピークスプリッティング組合わ
せで同位体標識されている。
【００６９】 上記中間体のそれぞれにおいて、固形支持体は場合によってはコードタグ配列
Ｌ１−Ａ−Ｔａｇおよび／または基質を基剤とするタグ配列Ｒ−Ａ−Ｌ１、およ
びＬ１−Ａｐのようなそれらの前駆体形態を結合させることができる。
【００７０】 本発明を、下記の例を参照することによって例示するが、制限するものではな
い。
【００７１】 例１
【化１２】
【００７２】 スキーム１についての実験 ４−（クロロメチル）安息香酸（０．２７ｇ，１．６ミリモル）、ベンゾトリ
アゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオ
ロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（登録商標）（０．８３ｇ，１．６ミリモル）、
およびジイソプロピルエチルアミン（０．５６ml，３．２ミリモル）をジメチル
ホルムアミド（８ml）に溶解したものを２０分間振盪した後、TentaGel NH2 (Ra
pp Polymere)樹脂１（１ｇ，０．３２ミリモル）に加えた。生成する混合物を５
時間振盪した後、樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジエ
チルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテルで洗浄した。次
に、樹脂(2)を真空乾燥した。
【００７３】 チオ尿素（０．５８ｇ，７．７ミリモル）をジオキサン（４ml）およびエタノ
ール（１ml）中でスラリーとしたものを樹脂２（１ｇ，０．３２ミリモル）に加
え、全量を８０℃で１６時間加熱した。樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド（
×５）、ジクロロメタン（×５）、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および
最後にジエチルエーテルで洗浄し、樹脂３を得た。次に、樹脂を真空乾燥した。
【００７４】 メチル−２−（ジメチルアミノメチレン）−３−オキソブタノエート（０．１
７ｇ，０．９６ミリモル）およびトリエチルアミン（６５ml，０．４８ミリモル
）をジメチルホルムアミド（１０ml）に溶解したものを樹脂３（１ｇ，０．３１
ミリモル）に加え、混合物を８０℃で１６時間加熱した。次に、樹脂を濾過し、
ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、
および最後にジエチルエーテルで洗浄した。洗浄した樹脂(4)を真空乾燥した。
【００７５】 次に、樹脂４（０．５ｇ，０．１５ミリモル）をテトラヒドロフランと２Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液の１：１混合物（４ml）で処理し、２時間振盪した。次に
、樹脂を濾過し、テトラヒドロフラン／Ｈ２Ｏ、１０％酢酸／テトラヒドロフラ
ン、テトラヒドロフラン／Ｈ２Ｏ、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド
、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、ジエチルエーテルで洗
浄した後、真空乾燥して、樹脂５を得た。
【００７６】 ＰｙＢＯＰ（登録商標）（２４mg，０．０４５ミリモル）およびジイソプロピ
ルエチルアミン（１６ml，０．０９ミリモル）をジメチルホルムアミド（１ml）
に溶解したものを樹脂５（５０mg，０．０１５ミリモル）に加えた後、１−第三
−ブトキシカルボニル−１−（ｏ−ブロモベンジル）−ジアミノエタン（１５mg
，０．０４５ミリモル）をジメチルホルムアミド（１ml）に溶解したものを加え
、混合物を３日間振盪した。樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、ジクロロメ
タン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテルで洗
浄した。次に、９５％水性トリフルオロ酢酸をジクロロメタンに溶解したもの（
２０％，１ml）を樹脂に加え、混合物を２時間振盪した。樹脂を濾過し、ジメチ
ルホルムアミド、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタンで洗浄し
た後、１０％ジイソプロピルエチルアミン／ジメチルホルムアミドと共に１０分
間振盪した。樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジエチル
エーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテルで洗浄した。次に、
樹脂(6)を真空乾燥した。
【００７７】 例２ 光分解後の構築物上の残留薬剤を説明するための実験
【化１３】
【００７８】 スキーム２についての実験 ４−［４−（１−（９−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）エチル）−
２−メトキシ−５−ニトリルフェノキシ）酪酸（２３mg，０．０４５ミリモル）
、ジイソプロピルエチルアミン（１６ml，０．０９ミリモル）および２（１Ｈ−
９−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロ
ニウムヘキサフルオロホスフェート（１７mg，０．０４５ミリモル）をジメチル
ホルムアミド（２ml）に溶解したものを樹脂６（５０mg，０．０１５ミリモル）
に加え、全量を３時間振盪した。樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、ジクロ
ロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテル
で洗浄した。次に、樹脂を２０％ピペラジン／ジメチルホルムアミド（３ml）で
処理し、全量を１時間振盪した。次に、樹脂(7)を濾過し、ジメチルホルムアミ
ド、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチ
ルエーテルで洗浄し、真空乾燥した。
【００７９】 安息香酸（１１mg，０．０９ミリモル）、ジイソプロピルエチルアミン（１６
ml，０．０９ミリモル）および２（１Ｈ−９−アザベンゾトリアゾール−１−イ
ル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（
１７mg，０．０４５ミリモル）をジメチルホルムアミド（２ml）に溶解したもの
を樹脂７に加え、混合物を２時間振盪した。次に、樹脂(8)を濾過し、ジメチル
ホルムアミド、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最
後にジエチルエーテルで洗浄した。
【００８０】 合成生成物の分析は、樹脂に結合した構築物をチオピリミジン開裂条件を施し
た後、構築物を質量スペクトル分析法によって分析することによって行った。構
築物の質量スペクトルを、図１に示す。
【００８１】 ０．２％ヒドラジン水和物をジメチルスルホキシドに溶解したもの（０．１ml
）を樹脂９（２mg，０．６ミリモル）に加え、懸濁液に光分解を１６時間行った
。次に、光分解した樹脂(9)を濾過し、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン
、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテルで洗浄し
、真空乾燥した。洗浄した樹脂に（下記の）ピリミジン開裂条件を施し、生成す
る開裂生成物を質量スペクトル分析法によって分析した。質量スペクトルを、図
２に示す。
【００８２】 ピリミジンリンカーによる樹脂の構築物分析の一般的方法 樹脂（約０．５mg）を、０．０１Ｍ ｍ−クロロ過安息香酸（０．５ml）で２
時間処理する。次に、樹脂を濾過し、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、およ
びジクロロメタンで洗浄する。次いで、樹脂を０．０２Ｍ Ｎ−メチルピペラジ
ン／ジメチルホルムアミド（５０ml）で処理し、混合物を１２時間浸透する。次
に、溶液を採取して、質量スペクトル分析法によって分析する。
【００８３】 例３ アミノ酸の増感配列の同定
【化１４】
【００８４】 スキーム３についての実験 樹脂１０を、樹脂７を所望な９−フルオレニルメトキシカルボニルで保護した
アミノ酸で処理した後、脱保護することによって調製した後、次のアミノ酸への
カップリングと脱保護を繰返した（一般的方法を参照）。次に、末端アミノ酸を
、無水酢酸を用いてアシル化した（下記の方法を参照）。
【００８５】 生成する樹脂に（上記の）ピリミジン開裂条件を施した後、質量スペクトル分
析を行った。質量スペクトルを、図３に示す。質量７１６の分子イオンを同定し
、質量スペクトルを更に高電圧で得て、３個のアミノ酸を断片化し、逐次開裂し
た。断片化した構築物の質量スペクトルを、図４に示す。
【００８６】 リンカーへアミノ酸をカップリングするための一般的／典型的方法 ９−フルオレニルメトキシカルボニルで保護したアミノ酸（０．１４ミリモル
，１０当量）、ジイソプロピルカルボジイミド（２２ml，０．１４ミリモル，１
０当量）、およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１９mg，０．１４ミリモ
ル，１０当量）をジメチルホルムアミド（１ml）に溶解したものを、必要とされ
た樹脂７（３０mg，約０．０１４ミリモル）に加えた。次に、混合物を５時間振
盪した。次に、樹脂を濾過し、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジクロ
ロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテル
で洗浄した。次に、樹脂を２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液（２ml
）で処理することによって、９−フルオレニルメトキシカルボニル保護基を除去
し、３０分間振盪した。次に、樹脂を濾過し、ジクロロメタン、ジメチルホルム
アミド、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジ
エチルエーテルで洗浄した。洗浄した樹脂を真空乾燥した。
【００８７】 ジペプチドのアセチル化 無水酢酸（１５ml，０．１４ミリモル）をジクロロメタン（１ml）に溶解したも
のを樹脂（３０mg，約０．０１４ミリモル）に加えた後、４−ジメチルアミノピ
リジン（１mg，０．００８ミリモル）を加え、混合物を２時間振盪した。次いで
、樹脂を濾過し、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジ
エチルエーテル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテルで洗浄した。
洗浄した樹脂を真空乾燥した。
【００８８】 例４ ディファレンシャル放出樹脂１１の調製
【化１５】
【００８９】 スキーム４についての実験 樹脂７（０．１ｇ，０．０３ミリモル）を、９−フルオレニルメトキシカルボ
ニルグリシン（３６mg，０．１２ミリモル）、Ｎ−アリルオキシカルボニルグリ
シン（５．２mg，０．０３ミリモル）、ＰｙＢＯＰ（７８mg，０．１５ミリモル
）およびジイソプロピルエチルアミン（５２ml，０．３ミリモル）をジメチルホ
ルムアミド（１ml）に溶解したもので処理し、生成する混合物を３時間振盪した
。次に、樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジエチルエー
テル、ジクロロメタン、および最後にジエチルエーテルで洗浄し、真空乾燥した
。
【００９０】 このようにして生成した樹脂を２０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド（２
ml）で処理し、３０分間振盪した後、上記のように濾過して、洗浄した。次に、
樹脂を、４−［４−（１−（９−フルオレニルメトキシカルボニルアミノ）エチ
ル）−２−メトキシ−５−ニトリルフェノキシ）酪酸（３９mg，０．０７５ミリ
モル）、ｐ［（Ｒ，Ｓ）−α−［１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキ
シホルムアミド］−２，４−ジメトキシ−ベンジル］−フェノキシ酪酸（４３mg
，０．０７５ミリモル）ＰｙＢＯＰ（７８mg，０．１５ミリモル）、およびジイ
ソプロピルエチルアミン（５２ml，０．３ミリモル）をジメチルホルムアミド（
１ml）に溶解したもので処理し、混合物を３時間振盪した。次に、樹脂を濾過し
、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジクロロメタン
、および最後にジエチルエーテルで洗浄し、真空乾燥した。
【００９１】 次に、この樹脂を２０％ピペラジン／ジメチルホルムアミド（２ml）で処理し
、３０分間振盪した。次に、樹脂を濾過し、上記のように洗浄した。次に、樹脂
を、安息香酸（１８mg，０．１５ミリモル）、２−（１Ｈ−９−アザベンゾトリ
アゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオ
ロホスフェート（５７mg，０．１５ミリモル）およびジイソプロピルエチルアミ
ン（５２ml，０．３ミリモル）をジメチルホルムアミド（１ml）に溶解したもの
で処理し、全量を２時間振盪した。次に、この樹脂を濾過して、上記のように洗
浄した。
【００９２】 生成物樹脂に（上記の）ピリミジン開裂条件を施した後、質量スペクトル分析
を行い、このようにして得られた質量スペクトルを、図４に示す。
【００９３】 上記例に記載の構築物に対して本発明の基礎をなしている原理から離反するこ
となく多くの修飾および変更を行うことができ、これらの総ての修飾および変更
は特許請求の範囲に包含されることが、容易に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】 式Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｌ２−Ｒ（上記式中、Ｒはモデル化合物のベンズアミドであ
り、Ｌ１はチオピリミジンリンカー基であり、ＡはＮ−ブロモベンジル置換エチ
レンジアミン「ピークスプリッティング基」であり、Ｌ２は光化学条件下で開裂
可能なリンカー基である）の構築物の、酸化および親核置換による開裂の生成物
の質量スペクトル。
【図２】 リンカーＬ２の光化学開裂および次のリンカーＬ１における酸化／親核置換の
後の図１の構築物の質量スペクトル。
【図３】 式Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｔａｇ（上記式中、Ｌ１はチオピリミジンリンカー基であり
、Ａは図１の構築物に含まれているのと同一のピークスプリッティング基であり
、Ｔａｇはトリペプチドからなるコード配列である）の構築物の、酸化および親
核置換による開裂の生成物の質量スペクトル。
【図４】 図３の開裂生成物の質量スペクトルであるが、質量スペクトル分析計内の条件
を７１６a.m.u.で分子イオンの断片化を引起し、１個以上のアミノ酸が分子イオ
ンから失われた構築物によるピークを生成するように調節したもの。
【図５】 式
【化１６】 （上記式中、「Ｔａｇ」はアリルオキシグリシンコード基を表し、Ａは図１〜４
の構築物についてと同一であり、Ｌ３はトリフルオロ酢酸によって開裂可能な「
リンク（Rink）」または「ノール（Knorr）」のリンカーである）の構築物の、
酸化および親核置換による開裂の生成物の質量スペクトル。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年１２月１３日（２０００．１２．１３）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【化１】 を有する、請求項１に記載の化学構築物。
【化２】
【化３】
【化４】 （上記式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、ＡおよびＲは請求項１〜２４のいずれか一項で
定義した通りであり、「Ｔａｇ」はコード配列を表す） からなる群から選択される式を有する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の
化学構築物。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｈｏｕｓ ｅ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ Ａｖｅｎｕｅ Ｇ ｒｅｅｎｆｏｒｄ，Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ ＵＢ６ ０ＮＮ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａ ｉｎ (72)発明者 スティーブン、ポール、ワトソン イギリス国ハートフォードシャー、スティ ーブネージ、ガネルズ、ウッド、ロード、 グラクソ、ウェルカム、ピーエルシー内 Ｆターム(参考） 4H045 AA10 AA20 AA30 BA12 BA51 BA55 BA62 EA50 EA65 FA41 FA58

Claims (37)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 基Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒ （上記式中、Ｒは基質またはコードタグであり、基Ｙ１およびＹ２は、それぞれ
    第一の開裂部位を有する連結基であり、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方は第一
    の開裂部位および基Ｒの間に配置された第二の開裂部位を有し、第一の開裂部位
    が第二の開裂部位に対して直交的かつ選択的に開裂可能であり、基Ｙ１およびＹ ２ が両方とも第二の開裂部位を有するときには、Ｙ１の第二の開裂部位はＹ２の
    第二の開裂部位に対して選択的かつ直交的に開裂可能であり、第二の開裂部位は
    開裂可能であって基質を放出し、第一の開裂部位は選択的に開裂可能であって基
    質Ｒおよび連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆｒを放出し、 (i)化学断片Ｆｒは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片
    Ｆｒを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆｒは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む）
    を連結させた固形支持体Ｑを含んでなる固相合成に用いる化学構築物。
  2. 【請求項２】 少なくとも１個の基Ｒが基質である、請求項１に記載の化学構築物。
  3. 【請求項３】 基質が薬剤分子である、請求項２に記載の化学構築物。
  4. 【請求項４】 基Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒ （上記式中、Ｒは基質（薬剤分子など）であり、基Ｙ１およびＹ２は、それぞれ
    直交的かつ選択的に開裂可能な第一および第二の開裂部位を有する連結基であり
    、Ｙ１における第二の開裂部位がＹ２における第二の開裂部位に対して選択的か
    つ直交的に開裂可能であり、第二の開裂部位が開裂可能であって基質を放出し、
    第一の開裂部位は第二の開裂部位と固相支持体との間の位置に配置され、選択的
    に開裂可能であって基質Ｒおよび連結基Ｙの少なくとも一部を含んでなる断片Ｆ
    ｒを放出し、 (i)化学断片Ｆｒは、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片
    Ｆｒを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆｒは、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む）
    を連結させた固形支持体Ｑを含んでなる、請求項１に記載の化学構築物。
  5. 【請求項５】 式 【化１】 を有する、請求項１に記載の化学構築物。
  6. 【請求項６】 それぞれの固形支持体が、構築物の合成履歴の少なくとも一部を示す情報をコ
    ードするコードタグまたはコード配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記
    載の化学構築物。
  7. 【請求項７】 コードタグが固形支持体に連結したコード配列である、請求項６に記載の化学
    構築物。
  8. 【請求項８】 コード配列が、固形支持体から開裂して断片Ｆａを放出する連結基Ｙａによっ
    て固形支持体に連結されており、断片Ｆａがコード配列および場合によっては連
    結基Ｙａの少なくとも一部を含んでなる、請求項７に記載の化学構築物。
  9. 【請求項９】 (i)化学断片Ｆａが、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断
    片Ｆａを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆａが、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む
    、請求項８に記載の化学構築物。
  10. 【請求項１０】 基Ｙａの開裂部位が、基Ｙ１およびＹ２の第一の開裂部位を開裂するのに必要
    な条件に相当する条件下で開裂可能である、請求項８に記載の化学構築物。
  11. 【請求項１１】 化学断片Ｆａが、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断片Ｆ ａ を増感する増感基Ｇを含む、請求項９に記載の化学構築物。
  12. 【請求項１２】 構築物における総基質の一部が、固形支持体から開裂して断片Ｆｂを放出する
    開裂部位を有する連結基Ｙｂによって固形支持体に連結されており、断片Ｆｂは
    基質Ｒおよび連結基Ｙｂの少なくとも一部を含んでなり、連結基Ｙｂは基Ｙ１お
    よびＹ２の第二の開裂部位を開裂するのに有効な条件下で開裂して基質Ｒを放出
    せず、 (i)化学断片Ｆｂが、機器分析、例えば、質量スペクトル分析に対して化学断
    片Ｆｂを増感する増感基Ｇを含み、および／または (ii)断片Ｆｂが、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む
    、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化学構築物。
  13. 【請求項１３】 増感基ＧがＹ１またはＹ２、またはＹａが存在するときにはＹａの第一の開裂
    部位、またはＹｂの上記開裂部位における開裂によって生成する、請求項１〜１
    ２のいずれか一項に記載の化学構築物。
  14. 【請求項１４】 増感基Ｇが塩基性アミノ基またはカルボキシレート基であり、好ましくは塩基
    性アミノ基である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化学構築物。
  15. 【請求項１５】 増感基が第一アミノ基、第二アミノ基、または第三アミノ基である、請求項１
    ４に記載の化学構築物。
  16. 【請求項１６】 増感基が、ピペリジノ、ピペラジノ（例えば、Ｎ−メチルピペラジノ）、ピロ
    リジノ、またはモルホリノ、ピペリジノである、請求項１５に記載の化学構築物
    。
  17. 【請求項１７】 断片Ｆｒおよび（断片Ｆａが存在するときには）場合によっては断片Ｆａおよ
    び（断片Ｆａが存在するときには）場合によっては断片Ｆａが、この断片の質量
    スペクトルに特徴的なサインを付与する手段を含む、請求項１〜１６のいずれか
    一項に記載の構築物。
  18. 【請求項１８】 サインが、多数の安定同位体形態に存在する少なくとも１個の原子を含んでな
    る「ピークスプリッティング(peak splitting)」同位体標識を断片中に組込むこ
    とによって提供される、請求項１７に記載の構築物。
  19. 【請求項１９】 断片ＦｒおよびＦａ、および（Ｆｃが存在するときには）場合によってはＦｃ を別個な方法で標識し、異なる特徴的なサインを生成させる、請求項１８に記載
    の化学構築物。
  20. 【請求項２０】 同位体標識が１Ｈ／２Ｈ（Ｄ）、７９Ｂｒ／８１Ｂｒ、１２Ｃ／１３Ｃ、１４ Ｎ／１５Ｎ、および１６Ｏ／１８Ｏから選択された１個の原子または複数の原子
    を含んでなる、請求項１８または１９に記載の化学構築物。
  21. 【請求項２１】 （複数の）同位体標識が基Ｙ１またはＹ２の第一および第二の開裂部位の間に
    配置される、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の化学構築物。
  22. 【請求項２２】 基Ｙ１の第一および第二の開裂部位が第一および第二のリンカー基Ｌ１および
    Ｌ２によって定義され、基Ｙ２の第一および第二の開裂部位が第一および第二の
    リンカー基Ｌ１およびＬ３によって定義され、（基Ｙａが存在するときには）基
    Ｙａの開裂部位がリンカー基Ｌａによって定義され、（基Ｙｂが存在するときに
    は）基Ｙｂの開裂部位がリンカー基Ｌｂによって定義される、請求項１〜２１の
    いずれか一項に記載の化学構築物。
  23. 【請求項２３】 リンカー基ＬａおよびＬｂがＬ１に相当する、請求項２２に記載の化学構築物
    。
  24. 【請求項２４】 スペーサー基Ａが、第一および第二のリンカー基のそれぞれの対の間、または
    リンカー基Ｌａとコードタグとの間、またはリンカー基Ｌｂと基質Ｒとの間に挿
    入され、スペーサー基Ａは同位体ピークスプリッティング標識を含む、請求項２
    ２または２３に記載の化学構築物。
  25. 【請求項２５】 【化２】 【化３】 【化４】 （上記式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、ＡおよびＲは請求項１〜２４のいずれか一項で
    定義した通りであり、「Ｔａｇ」はコード配列を表す） からなる群から選択される式を有する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の
    化学構築物。
  26. 【請求項２６】 上記のスクリーニングの段階放出法(tiered release method)で用いる構築物
    であって、式 Ｔａｇ−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｌ２−Ｒ （上記式中、Ｔａｇ、Ａ、Ｌ１、Ｑ、Ｌ２およびＲは、請求項１〜２５のいずれ
    か一項で定義した通りである） を有する、上記構築物。
  27. 【請求項２７】 直交開裂可能な開裂部位を、酸触媒開裂、塩基触媒開裂、酸化開裂、還元開裂
    、親核置換、親電子置換、および熱、光化学および酵素開裂から選択される反応
    によって開裂することができる、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の化学構
    築物。
  28. 【請求項２８】 請求項１〜２７のいずれか一項に記載の化学構築物の製造に用いる中間化学構
    築物であって、式Ｙ１，−Ｑ−Ｙ２，、ＲＹ１−Ｑ−Ｙ２，およびＹ１，−Ｑ−
    Ｙ２Ｒ（上記式中、Ｙ１，およびＹ２，は基Ｙの反応性または保護された形態で
    あり、Ｒ、ＱおよびＹは請求項１〜２７のいずれか一項で定義した通りである）
    を有する、中間構築物。
  29. 【請求項２９】 式Ｌ２，−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、Ｒ−Ｌ２−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ 、Ｌ３，−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、Ｒ−Ｌ３−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａｐ、
    Ｒ−Ｌ３−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ１−Ａ−Ｌ２，、およびＬ３，−Ａ−Ｌ１−Ｑ−Ｌ １ −Ａ−Ｌ２−Ｒ（上記式中、Ｌ１，、Ｌ２，およびＬ３，はリンカー基Ｌ１、
    Ｌ２およびＬ３の反応性または保護された形態であり、Ａｐはピークスプリッテ
    ィング同位体標識を含むスペーサー基Ａの反応性または保護された形態であり、
    Ｑ、Ｒ、Ａ、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３は請求項１〜２８のいずれか一項で定義した
    通りである）を有する中間構築物。
  30. 【請求項３０】 基Ａｐが式ＮＨ−Ａｌｋ−ＮＸ１（式中、Ａｌｋはアルキレン基であり、Ｘ１ は水素またはアラールキル基である）を有する、請求項２９に記載の中間構築物
    。
  31. 【請求項３１】 固形支持体が、コードタグ配列Ｌ１−Ａ−Ｔａｇおよび／または配列Ｒ−Ａ−
    Ｌ１−、またはそれらの前駆体形態を結合させている、請求項２９または３０に
    記載の中間構築物。
  32. 【請求項３２】 化学ライブラリーを生物活性について分析するディファレンシャル放出法であ
    って、 (i)請求項１〜３１のいずれか一項に記載の基Ｙ１ＲおよびＹ２Ｒを連結させ
    た固形支持体Ｑを含んでなる構築物に基Ｙ１Ｒから基質Ｒを放出するのに有効な
    開裂条件を施し、 (ii)基Ｙ１Ｒから放出された基質Ｒを生物学的分析法で試験し、 (iii)次いで構築物に、基Ｙ２Ｒから基質Ｒを放出するのに有効な開裂条件を
    施し、 (iv)基Ｙ２Ｒから放出された基質Ｒを生物学的分析法で試験する ことを含んでなる、方法。
  33. 【請求項３３】 化学ライブラリーを生物活性について分析する段階放出法であって、 (i)請求項１〜３２のいずれか一項に記載の基Ｙ１Ｒを連結させた固形支持体
    Ｑを含んでなる構築物に基Ｙ１Ｒから基質Ｒの第一の部分を放出するのに有効な
    開裂条件を施し、 (ii)基Ｙ１Ｒから放出された基質Ｒの第一の部分を生物学的分析法で試験し、 (iii)構築物に、基Ｙ１Ｒから基質Ｒの第二の部分を放出するのに有効な開裂
    条件を施し、 (iv)基Ｙ１Ｒから放出された基質Ｒの第二の部分を生物学的分析法で試験する
    ことを含んでなる、方法。
  34. 【請求項３４】 固形支持体Ｑに連結した基質Ｒを質量スペクトル分析法により確認する方法で
    あって、固形支持体Ｑは開裂可能で固形支持体から断片Ｆａを放出する開裂部位
    を有する連結基Ｙａによってコード配列を結合させ、断片Ｆａはコード配列と連
    結基Ｙａの少なくとも一部とを含んでなり、(i)化学断片Ｆａは、質量スペクト
    ル分析に対して化学断片Ｆａを増感する増感基Ｇを含み、 コード配列は、性質および順序が基質Ｒの同一性を示しているコード基の配列
    を含んでなり、 連結基Ｙａを開裂して、固形支持体から断片Ｆａを放出させ、断片Ｙａにコー
    ド基の質量スペクトルを断片化しかつコード配列からの１個以上のコード基の損
    失に相当する質量スペクトル断片を形成するのに有効な条件下で質量スペクトル
    分析法を施した後、質量スペクトル断片イオンの質量スペクトルピークを断片Ｙ ａ の分子イオンと相関させて、個々のコード基の配列を同定する ことを含んでなる、方法。
  35. 【請求項３５】 断片Ｆａが、断片の質量スペクトルに特徴的サインを付与する手段を含む、請
    求項３４に記載の方法。
  36. 【請求項３６】 請求項１〜３５のいずれか一項に記載の複数の化学構築物を含むライブラリー
    を調製し、このライブラリーに生物学的試験を行い、生物学的に活性な基質を同
    定することを含んでなる、薬学上有用な基質の同定法。
  37. 【請求項３７】 上記の方法で同定した生物学的に活性な基質を薬学上許容可能なキャリヤーと
    処方して医薬組成物を形成する追加段階を包含する、請求項３６に記載の方法。
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