JP2002526079A - ヒトインターロイキン−ｂ５０、治療的使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳動物由来のサイトカインをコードする精製された遺伝子、それらに関連する試薬（精製されたタンパク質、特異的抗体、およびこの分子をコードする核酸を含む）が提供される。上記の試薬を使用する方法およびキットもまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本出願は、米国特許出願第０９／１５７，７４９号（１９９８年９月２１日出
願）、および米国特許出願第６０／１３１，２９８号（１９９９年４月２７日出
願）に対する優先権を主張するＰＣＴ出願である。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、哺乳動物の細胞（例えば、哺乳動物の免疫系の細胞）の生物学およ
び生理学を制御する際に機能するタンパク質に関連する組成物に関する。特に、
本発明は、精製された遺伝子、タンパク質、抗体、ならびに例えば、種々の細胞
型（造血細胞を含む）の活性化、発生、分化、および機能を調節するために有用
な関連する試薬を提供する。

【０００３】 （発明の背景） 組換えＤＮＡ技術は、一般的に、引き続くプロセシング（例えば、宿主中への
導入を通じる）のために、ドナー供給源からの遺伝情報をベクター中に組み込み
、それによりこの移入された遺伝情報が新しい環境中でコピーおよび／または発
現される技術をいう。一般的には、この遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコ
ードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に由来する相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ
）の形態で存在する。キャリアは、しばしば、宿主中でのより遅い複製のために
ｃＤＮＡを組み込む能力を有し、そしていくつかの場合、このｃＤＮＡの発現を
実際に制御し、それによって宿主中で、このコードされた産物の合成を指向する
能力を有するプラスミドである。

【０００４】 長い間、哺乳動物の免疫応答は、「免疫ネットワーク」と呼ばれる、一連の複
雑な細胞性相互作用に基づくことが公知である。最近の研究は、このネットワー
クの内部での働きに新しい洞察を提供した。実際に、多くの応答がリンパ球、マ
クロファージ、顆粒球、および他の細胞のネットワーク様相互作用の周囲を駆け
巡ることが明らかなままであるが、免疫学者らは、現在、一般的に、可溶性タン
パク質（リンホカイン、サイトカイン、またはモノカインとして既知）が、これ
らの細胞性相互作用を制御する際に重要な役割を果たすという見解を保持してい
る。

【０００５】 従って、細胞調節因子の単離、特徴付け、および作用の機構に対してかなりお
関心が存在し、それらの理解は、多数の医学的異常（例えば、免疫系障害）の診
断および治療において重大な進歩を生じる。これらの因子のうちのいくつかは、
造血増殖因子および／または造血分化因子（例えば、幹細胞因子（ＳＣＦ）およ
びＩＬ−７）である。例えば、Ｍｉｒｅ−ＳｌｕｉｓおよびＴｈｏｒｐｅ（１９
９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ；Ｔｈｏｍｓｏｎ（１９９８年版）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏ
ｏｋ（第３版）Ａｃａｃｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；Ｍｅｔｃ
ａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ
Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔ
ｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌを参照のこと。

【０００６】 リンホカインは、明らかに、種々の様式で細胞活性を媒介する。これらは、多
能性造血幹細胞の非常に多くの前駆体（複雑な免疫応答を構成する多様な細胞系
列を含む）への増殖、成長、および分化を支持することが示されている。細胞成
分の間での適切かつ釣り合いの取れた相互作用は、健常な免疫応答に必要とされ
る。異なる細胞系列は、しばしば、リンホカインが他の薬剤と組み合せて投与さ
れる場合に、異なる様式にて応答する。

【０００７】 免疫応答に特に重要な細胞系列は、２つのクラスのリンパ球を含む：免疫グロ
ブリン（外来物質を認識し、そしてそれに結合して、その除去をもたらす能力を
有するタンパク質）を産生しかつ分泌し得るＢ細胞、ならびにリンホカインを分
泌し、そして免疫ネットワークを構成するＢ細胞および種々の他の細胞（他のＴ
細胞を含む）を誘導または抑制する、種々のサブセットのＴ細胞。これらのリン
パ球は、多数の他の細胞型と相互作用する。

【０００８】 別の重要な細胞系列は、肥満細胞（これは、全ての哺乳動物種において明確に
同定されていない）であり、これは、身体全体の毛細管に近接して位置する、顆
粒含有結合組織細胞である。これらの細胞は、肺、皮膚、ならびに胃腸管および
尿生殖器管において特に高濃度で見出される。肥満細胞は、アレルギー関連障害
、特に以下のようなアナフィラキシーにおいて中心的な役割を果たす：選択され
た抗原が、肥満細胞表面上のレセプターに結合した、１つのクラスの免疫グロブ
リンとクロストークする場合に、この肥満細胞は、脱顆粒し、そしてアレルギー
反応（例えば、アナフィラキシ−）を引き起こすメディエーター（例えば、ヒス
タミン、セロトニン、ヘパリンおよびプロスタグランジン）を放出する。

【０００９】 種々の免疫障害をより良く理解し、そして処置するための研究が、一般的に、
インビトロで免疫系の細胞を維持し得ないことによって妨害されている。免疫学
者らは、これらの細胞を培養することが、種々の増殖因子（多くのリンホカイン
を含む）を含むＴ細胞および他の細胞の上清の使用を通じて達成され得ることを
発見した。

【００１０】 前述から、新しいリンホカイン（例えば、ＩＬ−７に関連するリンホカイン）
の発見および開発が、免疫系および／または造血細胞に直接的または間接的に関
与する、広範な範囲の変性状態または異常状態についての新しい治療に寄与し得
ることが明らかである。特に、既知のリンホカインの有益な活性を増強または増
大させるリンホカインの発見および開発が、非常に有利である。本発明は、新し
いインターロイキン組成物および関連化合物、ならびにそれらの使用方法を提供
する。

【００１１】 （発明の要旨） 本発明は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、イヌ、ネコ、霊長類）のインターロ
イキン−Ｂ５０（ＩＬ−Ｂ５０）およびその生物学的活性に関する。本発明は、
ポリペプチド自体をコードする核酸、ならびにそれらの産生および使用のための
方法を含む。本発明の核酸は、本明細書中で添付されたクローニングされた相補
性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列に対するそれらの相同性によって、および／またはこ
れらの核酸によって代表的にコードされるポリペプチドに適用される、増殖因子
様活性もしくはサイトカイン様活性（例えば、ＩＬ−７）（Ｍａｅｕｒｅｒら（
１９９８）Ｔｈｏｍｓｏｎ（編）（Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏ
ｋ ３版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；Ｎａｍｉｅｎ
およびＭｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ（１９９８）Ｍｉｒｅ−ＳｌｕｉｓおよびＴｈｏｒ
ｐｅ（編）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ；ならびにＥｄｉｎｇｔｏｎおよびＬｏｔｚｅ（１９９４）Ｔｈｏｍｓｏ
ｎ（編）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ２版、Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏを参照のこと）についての機能的アッセイ
によって、部分的に特徴付けられる。増殖因子に依存する生理または免疫応答の
制御において調節または介入する方法が、提供される。

【００１２】 本発明は、部分的に、ＩＬ−７に対してかなりの配列類似性および構造類似性
を示す、新しいサイトカイン配列の発見に基づく。特に、本発明は、霊長類（例
えば、ヒト）の配列を提供する。かなりの配列相同性を示す機能的等価物は、他
の哺乳動物（例えば、ウシ、ウマ、およびラット、マウス、および非哺乳動物種
）から入手可能である。

【００１３】 種々のタンパク質の実施態様において、本発明は、配列番号２または４に対し
て少なくとも約１２アミノ酸の長さにわたって同一性を示す、実質的に純粋なＩ
Ｌ−Ｂ５０ポリペプチドまたは組換えＩＬ−Ｂ５０ポリペプチド；配列番号２ま
たは４の天然のＩＬ−Ｂ５０配列；ならびにＩＬ−Ｂ５０配列を含む融合タンパ
ク質を提供する。特定の実施態様において、同一性のセグメントは、少なくとも
約１４、１７、または１９のアミノ酸である。他の実施態様において、ＩＬ−Ｂ
５０は、表１からの配列を含む成熟配列を含むか；天然ＩＬ−Ｂ５０とは異なる
翻訳後修飾パターンを示すか；またはポリペプチドであるか；哺乳動物（霊長類
を含む）から選択される温血動物由来であるか；配列番号２もしくは４の少なく
とも１つのポリペプチドセグメントを含むか；複数のフラグメントを示すか；Ｉ
Ｌ−Ｂ５０の天然対立遺伝子改変体であるか；少なくとも約３０アミノ酸の長さ
を有するか；霊長類ＩＬ−Ｂ５０に特異的な、少なくとも２つの非重複エピトー
プを示すか；霊長類ＩＬ−Ｂ５０に対して、少なくとも約２０アミノ酸の長さに
わたって配列同一性を示すか；グリコシル化されているか；天然グリコシル化を
有する少なくとも１０ｋＤの分子量を有するか；合成ポリペプチドであるか；固
体基板に付着されているか；別の化学部分と結合体化しているか；天然配列から
の５倍以下の置換であるか；あるいは天然配列からの欠失改変体もしくは挿入改
変体である。好ましい実施態様は、以下を含む組成物を含む：無菌性ＩＬ−Ｂ５
０ポリペプチド；またはＩＬ−Ｂ５０ポリペプチドおよびキャリアであって、こ
こでキャリアは、水性化合物（水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む）
であり；ならびに／あるいは経口、直腸、鼻腔、局所、または非経口投与のため
に処方される。融合タンパク質の実施態様では、このタンパク質は、表１からの
成熟ポリペプチド配列；検出タグまたは精製タグ（ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ６またはＩ
ｇ配列を含む）；ならびに／あるいは別のサイトカインまたはケモカイン（ＩＬ
−７を含む）の配列を有し得る。

【００１４】 キットの実施態様は、ＩＬ−Ｂ５０ポリペプチド、ならびに：このポリペプチ
ドを含む区画；および／またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄のための
使用説明書を備えるキットを含む。

【００１５】 結合化合物の実施態様では、この化合物は、天然ＩＬ−Ｂ５０ポリペプチドに
特異的に結合する、抗体由来の抗原結合部位を有し得、ここで：このＩＬ−Ｂ５
０は、霊長類タンパク質であり；この結合化合物は、Ｆｖ、Ｆａｂ、もしくはＦ
ａｂ２フラグメントであり；この結合化合物は、別の化学部分に結合体化されて
おり；またはこの抗体は：表１の成熟ポリペプチド部分のペプチド配列に惹起さ
れているか；成熟ＩＬ−Ｂ５０に対して惹起されているか；精製された霊長類Ｉ
Ｌ−Ｂ５０に対して惹起されているか；免疫選択されているか；ポリクローナル
抗体であるか；変性ＩＬ−Ｂ５０に結合するか；少なくとも３０μＭのＫｄを示
すか；固体基板（ビーズもしくはプラスチック膜を含む）に付着されているか；
無菌組成物中にあるか；または検出可能に標識（放射性標識もしくは蛍光標識を
含む）されている。結合化合物を含むキットは：結合化合物を含む区画：および
／またはこのキット中の試薬の使用もしくは廃棄のための使用説明書を備えるキ
ットを含む。しばしば、このキットは、定性的または定量的な分析を行い得る。
好ましい組成物は：無菌の結合化合物；または結合化合物およびキャリアを含み
、ここでこのキャリアは：水性化合物（水、生理食塩水、および／または緩衝液
を含む）；ならびに／あるいは経口、直腸、鼻腔、局所、または非経口投与のた
めに処方される。

【００１６】 核酸の実施態様は、ＩＬ−Ｂ５０ポリペプチドまたは融合タンパク質をコード
する単離された核酸または組換え核酸を含み、ここで：ＩＬ−Ｂ５０は、霊長類
由来であり；および／または核酸は：表１の抗原性ペプチド配列をコードするか
；表１の複数の抗原性ペプチド配列をコードするか；セグメントをコードする天
然ｃＤＮＡに対して同一性を示すか；発現ベクターであるか；複製起点をさらに
含むか；天然供給源由来であるか；検出可能な標識を含むか；合成ヌクレオチド
配列を含むか；６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか；霊長類（ヒトを含
む）に由来するか；天然の全長コード配列を含むか；ＩＬ−Ｂ５０をコードする
遺伝子に対するハイブリダイゼーションプローブであるか；またはＰＣＲプライ
マー、ＰＣＲ産物、もしくは変異誘発プライマーである。本発明はまた、このよ
うな組換え核酸を含む、細胞、組織、または器官を提供し、そして好ましくは、
この細胞は：原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺
乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞である。

【００１７】 キットの実施態様は、このような核酸、ならびに：この核酸を含む区画；ＩＬ
−Ｂ５０タンパク質もしくはポリペプチドをさらに含む区画；および／またはこ
のキット中の試薬の使用もしくは廃棄のための使用説明書を備えるキットを含む
。代表的には、このキットは、定性的または定量的な分析を行い得る。

【００１８】 特定の実施態様では、この核酸は：配列番号１または３に、３０℃および２Ｍ
未満の塩、または４５℃および／もしくは５００ｍＭの塩、あるいは５５℃およ
び／もしくは１５０ｍＭの塩の洗浄条件下でハイブリダイズするか；あるいは、
霊長類ＩＬ−Ｂ５０に対して、少なくとも約３０、５５、または７５ヌクレオチ
ドのストレッチにわたって同一性を示す。

【００１９】 本発明は、細胞または組織培養細胞の生理または発達を調節する方法を包含し
、この方法は、細胞と、霊長類ＩＬ−Ｂ５０のアゴニストもしくはアンタゴニス
トとを接触させる工程を包含する。この方法は、以下であり得る：上記の接触さ
せる工程が、ＩＬ−７のアゴニストもしくはアンタゴニストとの組合せにおいて
であるか；あるいは上記の接触させる工程は、アンタゴニスト（ＩＬ−Ｂ５０に
特異的に結合する抗体結合部位を含む結合組成物を含む）を用いてである。

【００２０】 （好ましい実施態様の詳細な説明） 本明細書中に引用される全ての参考文献は、各々の個々の出版物または特許出
願が参考として援用されることが具体的かつ個別に示されるのと同程度、参考と
して本明細書中に援用される。

【００２１】 概略 Ｉ．概論 ＩＩ．精製ＩＬ−Ｂ５０ Ａ．物理的特性 Ｂ．生物学的特性 ＩＩＩ．物理的改変体 Ａ．配列改変体、フラグメント Ｂ．翻訳後改変体 １．グリコシル化 ２．他 ＩＶ．機能的改変体 Ａ．アナログ、フラグメント １．アゴニスト ２．アンタゴニスト Ｂ．模倣物 １．タンパク質 ２．化学物質 Ｃ．種改変体 Ｖ．抗体 Ａ．ポリクローナル Ｂ．モノクローナル Ｃ．フラグメント、結合組成物 ＶＩ．核酸 Ａ．天然単離物；方法 Ｂ．合成遺伝子 Ｃ．単離方法 ＶＩＩ．ＩＬ−Ｂ５０、模倣物の作製 Ａ．組換え方法 Ｂ．合成方法 Ｃ．天然精製 ＶＩＩＩ．使用 Ａ．診断 Ｂ．治療 ＩＸ．キット Ａ．核酸試薬 Ｂ．タンパク質試薬 Ｃ．抗体試薬 Ｘ．ＩＬ−Ｂ５０に対するレセプターの単離。

【００２２】 （Ｉ．概論） 本発明は、サイトカインである（例えば、免疫細胞または他の細胞との間のシ
グナルを媒介し得る分泌地分子である）種々の哺乳動物タンパク質をコードする
アミノ酸配列およびＤＮＡ配列を提供する。例えば、Ｐａｕｌ（１９９７）Ｆｕ
ｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎ．Ｙ．を参照のこと。全長サイトカイン、およびフラグメント、またはアンタ
ゴニストは、レセプターを発現している細胞の生理学的調節に有用である。ＩＬ
−Ｂ５０は、造血細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細
胞、マクロファージ、樹状細胞、造血前駆体などのようなリンパ細胞）に対して
、刺激効果または阻害効果のいずれかを有するようである。これらのタンパク質
はまた、タンパク質上の種々のエピトープ（線状エピトープおよび高次構造エピ
トープの両方）に対する抗体を惹起するために、抗原（例えば、免疫原）として
有用である。

【００２３】 ＩＬ−Ｂ５０をコードするｃＤＮＡは、ヒトｃＤＮＡ配列から同定された。例
えば、登録番号ＡＡ８８９５８１を参照のこと。この分子は、ｈｕＩＬ−Ｂ５０
と命名された。

【００２４】 ヒト遺伝子は、約１７５アミノ酸の小さな可溶性のサイトカイン様タンパク質
をコードする。このシグナル配列は、おそらく約３３残基であり、そしてｍｅｔ
からおよそｔｈｒに範囲が及ぶ。表１ならびに配列番号１および２を参照のこと
；補助的な配列は、配列番号３および４を提供する。ＩＬ−Ｂ５０は、短鎖のサ
イトカインのメンバーに特徴的である、構造モチーフを示す。例えば、ＩＬ−Ｂ
５０およびＩＬ−７（ＧｅｎＢａｎｋから入手可能な配列）を比較すること。表
２もまた参照のこと。 表１：霊長類（例えば、ヒト）由来のＩＬ−Ｂ５０をコードする核酸（配列番号
１）。翻訳されたアミノ酸配列は、配列番号２である。

【００２５】

【表１】 表２：ＩＬ−Ｂ５０と比較した、種々のＩＬ−７の実施態様の比較。ヒツジ由来
のＩＬ−７は、配列番号５であり；ウシ由来のＩＬ−７は、配列番号６であり；
ヒト由来のＩＬ−７は、配列番号７であり；マウス由来のＩＬ−７は、配列番号
８であり；およびラット由来のＩＬ−７は、配列番号９である。ＧｅｎＢａｎｋ
もまた参照のこと。

【００２６】

【表２】 Ｃは太字、推定グリコシル化Ｎに下線を付す、ＩＬ−Ｂ５０については第２のＡ
ＴＧを使用する、^*＝ヒトＩＬ−７と同一。 配列の比較はまた、進化ツリーを提供する。これは、例えば、ＴｒｅｅＶｉｅｗ
プログラムをＣｌｕｓｔａｌＸ分析ソフトウェアプログラムと組み合せて使用し
て作製され得る。Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：４
８７６〜４８８２；およびＴｒｅｅＶｉｅｗ、Ｐａｇｅ、ＩＢＬＳ、Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｌａｓｇｏｗ、ｅ−ｍａｉｌ ｒｐａｇｅ＠ｂｉｏ．ｇｌ
ａ．ａｃ．ｕｋ；ｈｔｔｐ：／／ｔａｘｏｎｏｍｙ．ｚｏｏｌｏｇｙ．ｇｌａ．
ａｃ．ｕｋ．ｒｏｄ．ｔｒｅｅｖｉｅｗ．ｈｔｍｌ。

【００２７】 関連サイトカインタンパク質に対するＩＬ−Ｂ５０の構造相同性は、この分子
の関連した機能を示唆する。ＩＬ−Ｂ５０は、ＩＬ−７に配列類似性を示す、短
鎖のサイトカインである。

【００２８】 ＩＬ−７の生物学の多くの局面は、十分に認識されている。例えば、Ｂａｕｅ
ｒら（１９９８）「Ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ−ｌｉｋｅ ｈｏｍｅｏｔ
ｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｌｋ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｓｔｒｏｍａｌ−ｃｅ
ｌｌ−ｐｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ、ｓｔｒｏｍａｌ ｃ
ｅｌｌ ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄ ｐｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ ｉｎｔｅ
ｒｌｅｕｋｉｎ−７ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ」Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ
．１８：５２４７〜５２５５；Ｍａｅｕｒｅｒら（１９９８）「Ｉｎｔｅｒｌｕ
ｅｕｋｉｎ−７（ＩＬ−７）ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ．Ｉｍｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ ｆｏｒ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｎｄ ｏｒｇａｎ−ｓｐｅｃ
ｉｆｉｃ ｉｍｍｕｎｉｔｙ」Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３０９〜
３２２；Ｍｅｒｔｓｃｈｉｎｇら（１９９８）「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７，
ａ ｎｏｎ−ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｐｏｔｅｎｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｗｈｏｓ
ｅ ｏｖｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐｅｒｔｕｒｂｓ
Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ」Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：
２８５〜３０８；Ｍａｉｎｉら（１９９７）「Ｎｅｗ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｓ ｉｎ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ
ｔｈｅｒａｐｙ」Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：３８０３〜３８０８
；Ｍｕｒｒａｙ（１９９６）「Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｉ
ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−４，ａｎｄ ｉｎｔｅｒ
ｌｅｕｋｉｎ−７」Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：２３０〜２３４
；Ｔａｋａｔｓｕ（１９９７）「Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ
Ｂ−ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｉ
ｔｅｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ」Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．
２１５：１２１〜１３３；Ｃａｎｄｅｉａｓら（１９９７）「ＩＬ−７ ｒｅｃ
ｅｐｔｏｒ ａｎｄ ＶＤＪ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ：ｔｒｏｐｈｉｃ
ｖｅｒｓｕｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ
６：５０１〜５０８；Ｌａｃｈｍａｎら（１９９６）「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｃｏ
ｎｔａｉｎｉｎｇ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｓ ｖａｃｃｉｎｅ ａｄｊｕｖａ
ｎｔｓ」Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．７：６９３〜６９８；Ｔａｋａ
ｓｈｉｍａら（１９９６）「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｍｍｕ
ｎｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ
ｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ
Ｔ ｃｅｌｌｓ」Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：３３３〜３３９；ならびに
Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（１９９６）「Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ＩＬ−２ ａｎ
ｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ：ＪＡＫｓ、ＳＴＡＴｓ、ａｎｄ ｒ
ｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ」Ｊ．Ｌｅ
ｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６０：４４１〜４５２。ＩＬ−Ｂ５０の生物学は、類似す
るようである。例えば、Ｆｒｉｅｎｄら（１９９４）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．
２２：３２１〜３２８を参照のこと。

【００２９】 ＩＬ−Ｂ５０アゴニスト、またはアンタゴニストはまた、例えば、そのそれぞ
れのレセプターに結合するかまたは反対の作用を媒介するＩＬ−７をブロックす
る、機能的アンタゴニストまたはレセプターアンタゴニストとして作用し得る。
従って、ＩＬ−Ｂ５０、またはそのアンタゴニストは、異常な医学的状態（免疫
障害（例えば、Ｔ細胞免疫不全、慢性炎症、または組織拒絶）、あるいは心臓血
管状態または神経生理学的状態を含む）の処置に有用であり得る。ＩＬ−Ｂ５０
およびＩＬ−７に関連する試薬を含む組成物が、しばしば、使用される。

【００３０】 天然の抗原は、標的細胞における生物学的または生理学的な応答を導く、種々
の生化学的応答を媒介し得る。本明細書中に特徴付けられる好ましい実施態様は
、ヒト由来であるが、他の霊長類、または他の種の対応物が、天然に存在する。
他の哺乳動物種（例えば、霊長類、イヌ、ネコ、およびげっ歯類）におけるタン
パク質についてのさらなる配列もまた、利用可能であるはずである。以下を参照
のこと。以下の記述は、例示の目的のために、ヒトＩＬ−Ｂ５０に関するが、他
の種由来の関連する実施態様に同様に適用可能である。

【００３１】 （ＩＩ．精製ＩＬ−Ｂ５０） 霊長類（例えば、ヒト）のＩＬ−Ｂ５０アミノ酸配列は、配列番号２または４
内の１つの実施態様として示される。このタンパク質をコードする、他の天然に
存在する核酸は、提供された配列を使用する標準的な手順（例えば、ＰＣＲ技術
）によって、またはハイブリダイゼーションによって単離され得る。アミノから
カルボキシに提供される、これらのアミノ酸配列は、このタンパク質の抗原を他
のタンパク質から識別することを可能にする、サイトカインについての配列情報
を提供する際および多くの改変体を例示する際に重要である。さらに、このペプ
チド配列は、このようなセグメントを認識する抗体を作製するためのペプチドの
調製を可能にし、そしてヌクレオチド配列は、オリゴヌクレオチドプローブの調
製を可能にし、これらの両方は、このような配列をコードする遺伝子の検出また
は単離（例えば、クローニング）のためのストラテジーである。

【００３２】 本明細書中で使用される場合、用語「ヒト可溶性ＩＬ−Ｂ５０」は、タンパク
質の状況で使用される場合には、配列番号２または４に示される可溶性ポリペプ
チドに対応するアミノ酸配列を有するタンパク質、またはその重要なフラグメン
トを包含する。好ましい実施態様は、特定の長さの複数の異なる（例えば、非重
複性）セグメントを含む。代表的には、複数は、少なくとも２、より通常には少
なくとも３、および好ましくは５、７、またはそれよりも多い。種々のサイズの
最小の長さが提供されるが、種々のサイズのより長い長さ（例えば、長さ７が１
つ、および長さ１２が２つ）が適切であり得る。

【００３３】 結合組成物（例えば、抗体）は、代表的には、高親和性（例えば、少なくとも
約１００ｎＭ、通常約３０ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満、およびより好
ましくは約３ｎＭ未満）でＩＬ−Ｂ５０に結合する。対応タンパク質は、ヒト以
外の哺乳動物種（例えば、他の霊長類、有蹄動物、またはげっ歯類）に見出され
る。非哺乳動物種（例えば、鳥類または両生類）はまた、構造的または機能的に
関連した遺伝子およびタンパク質を保有するはずである。

【００３４】 用語「ポリペプチド」は、本明細書中で使用される場合、重要なフラグメント
またはセグメントを含み、そして少なくとも約８アミノ酸、一般には少なくとも
約１２アミノ酸、代表的には少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは少なくとも
約２０アミノ酸、および特に好ましい実施態様では、少なくとも約３０以上のア
ミノ酸（例えば、３５、４０、４５、５０など）のアミノ酸残基のストレッチを
包含する。このようなフラグメントは、全ての現実的な組合せにおいて、実質的
に全ての位置で開始および／または終止する末端（例えば、残基１、２、３など
での開始、および例えば、１５０、１４９、１４８などでの終止）を有し得る。
特に興味深いペプチドは、構造ドメイン境界（例えば、ヘリックスＡ、Ｂ、Ｃ、
および／またはＤ）に対応する末端を有する。表１および２を参照のこと。

【００３５】 用語「結合組成物」とは、例えば、抗体−抗原相互作用において、ＩＬ−Ｂ５
０に特異的に結合する分子をいう。この特異性は、おおよそ包括的であり得る（
例えば、特定の実施態様に、または関連する実施態様の群（例えば、霊長類、げ
っ歯類など）に特異的）。これはまた、ＩＬ−Ｂ５０と特異的に結合する化合物
（例えば、タンパク質）を含む。これには、共有結合または非共有結合のいずれ
かで、天然の生理学的に関連するタンパク質間相互作用が含まれる。この分子は
、ポリマー、または化学的な試薬であり得る。機能的なアナログは、構造的な改
変を有するタンパク質であるか、またはこれは、適切な結合決定基（ｂｉｎｄｉ
ｎｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）と相互作用する分子形状を有する分子であり得
る。これらの化合物は、レセプター結合相互作用のアゴニストまたはアンタゴニ
ストとして働き得る。例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら（編）Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌ
ｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔ
ｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（現行版）Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓを参照のこと
。

【００３６】 例えば、タンパク質の状況において、実質的に純粋は、代表的には、このタン
パク質が他の夾雑タンパク質、核酸、または本来の供給源の生物に由来する他の
生物学的なものを含まないことを意味する。純度は、標準的な方法、代表的には
、重量によってアッセイされ得、そして通常、少なくとも約４０％純粋、一般に
は少なくとも約５０％純粋、しばしば少なくとも約６０％純粋、代表的には少な
くとも約８０％純粋、好ましくは少なくとも約９０％純粋、および最も好ましい
実施態様では、少なくとも約９５％純粋である。キャリアまたは賦形剤が、しば
しば添加される。

【００３７】 ポリペプチドまたはフラグメントの溶解度は、環境およびこのポリペプチドに
依存する。多くのパラメーターが、ポリペプチドの溶解度に影響し、これには、
温度、電解質環境、ポリペプチドのサイズおよび分子の特徴、ならびに溶媒の性
質が挙げられる。代表的には、ポリペプチドが使用される温度は、約４℃〜約６
５℃の範囲である。通常は、使用の際の温度は約１８℃より高い。診断目的のた
めに、温度は、通常、ほぼ室温かまたはそれより温かいが、このアッセイにおけ
る成分の変性温度未満である。治療目的のために、温度は、通常、体温（代表的
にはヒトおよびマウスでは３７℃）であるが、特定の状況下では、温度は、イン
サイチュまたはインビトロで、上昇または下降され得る。

【００３８】 このポリペプチドのサイズおよび構造は、一般に、実質的に安定な状態になる
べきであり、そして通常、変性状態にはない。このポリペプチドは、例えば、溶
解性を付与するために、四次構造において他のポリペプチドと結合され得るか、
または脂質もしくは界面活性剤と結合され得る。

【００３９】 溶媒および電解質は、通常、生物学的活性の保存のために使用される型の生物
学的に適合性の緩衝液であり、そして通常、生理学的な水性溶媒に類似する。通
常、この溶媒は、中性ｐＨ、代表的には約５と１０との間、および好ましくは約
７．５を有する。いくつかの場合には、１以上の界面活性剤（代表的には穏やか
な非変性界面活性剤（例えば、ＣＨＳ（コレステリルヘミスクシネート）または
ＣＨＡＰＳ（３−［３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プ
ロパンスルホネート）））が添加されるか、あるいはこのタンパク質の構造特性
または生理学的特性の有意な破壊を回避するために十分に低い濃度で添加される
。他の例では、強力な界面活性剤が、有意な変性をもたらすために使用される。

【００４０】 （ＩＩＩ．物理的改変体） 本発明はまた、ＩＬ−Ｂ５０抗原のアミノ酸配列と実質的にアミノ酸配列同一
性を有するタンパク質またはペプチドを含む。これらの改変体は、種改変体、多
型改変体、または対立遺伝子改変体を含む。

【００４１】 アミノ酸配列相同性、または配列同一性は、必要な場合、必要とされるギャッ
プを導入することによって、残基の一致を最適化することによって決定される。
Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５
３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ、Ｓｔｒｉｎｇ Ｅｄ
ｉｔｓ、ａｎｄ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎ
ｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎの第一
章、Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ、Ｒｅａｄｉｎｇ、ＭＡ；およびＩｎｔｅｌ
ｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡからのソフトウェア
パッケージ；ならびにｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉ
ｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ
もまた参照のこと。保存的置換を一致とみなす場合に、配列同一性が変化する。
保存的置換は、代表的に、以下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリ
ン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、
グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニ
ン、チロシン。保存は、生物学的特性、機能的特性、または構造的特性に適用し
得る。相同なアミノ酸配列は、代表的には、タンパク質配列の天然の多型改変体
または対立遺伝子改変体および種間の改変体を含むことが意図される。代表的に
は、相同なタンパク質またはペプチドは、ＩＬ−Ｂ５０のアミノ酸配列と、２５
〜１００％の同一性（ギャップが導入され得る場合）から５０〜１００％の同一
性（保存的置換が含まれる場合）を有する。同一性の尺度は、少なくとも約３５
％、一般には少なくとも約４０％、しばしば少なくとも約５０％、代表的には少
なくとも約６０％、通常少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、
およびより好ましくは少なくとも約９０％である。

【００４２】 単離されたＩＬ−Ｂ５０のＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、
ヌクレオチド挿入および短いヌクレオチドストレッチの反転によって容易に改変
され得る。これらの改変は、新規なＤＮＡ配列を生じ、この配列は、これらの抗
原、その誘導体または類似の生理的、免疫原的、抗原的または他の機能的な活性
を有するタンパク質をコードする。これらの改変された配列を用いて、変異体抗
原を生成し得るか、または発現を増強し得る。増強された発現は、遺伝子発現の
増加、転写の増加、翻訳の増加および他の機構を包含し得る。「変異体ＩＬ−Ｂ
５０」は、そうでなければ、上記のＩＬ−Ｂ５０の配列同一性の定義内に入るが
、天然に通常見出されるようなＩＬ−Ｂ５０のものとは、欠失、置換または挿入
のいずれかによって異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを包含する。これ
は、一般に、配列番号２または４の配列を有するタンパク質と有意な同一性を有
し、かつ、それらの配列と種々の生物学的活性（例えば、抗原性もしくは免疫原
性）を共有するタンパク質を包含し、そして好ましい実施態様において開示され
た全長の天然の配列の殆どを含む。全長配列が代表的には好ましいが、短縮バー
ジョンもまた同様に有用であり、同様に、天然供給源から見出される遺伝子また
はタンパク質が代表的に最も所望される。同様の着想は、異なるＩＬ−Ｂ５０タ
ンパク質に適用され、特に、種々の温血動物（例えば、哺乳動物および鳥類）に
おいて見出されるものに適用される。これらの記載は、一般に、多くのＩＬ−Ｂ
５０タンパク質を包含することを意味し、具体的に記載された特定の霊長類実施
態様には限定されない。

【００４３】 ＩＬ−Ｂ５０変異誘発はまた、アミノ酸挿入もしくは欠失を作製することによ
って行われ得る。置換、欠失、挿入または任意の組合せを生成して、最終の構築
物を完成し得る。挿入は、アミノ末端またはカルボキシ末端の融合（物）を包含
する。ランダムな変異誘発は、標的コドンにおいて行われ得、次いで発現された
変異体は、所望の活性についてスクリーニングされ得る。公知配列を有するＤＮ
Ａにおいて所定部位における置換変異を作製するための方法は、当該分野におい
て周知であり、例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発またはポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）技術による。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；Ａｕｓｕｂ
ｅｌら（１９８７および補遺）；ならびにＫｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２を参照のこと。好まし
い実施態様としては、例えば、１倍、２倍、３倍、５倍、７倍などのヌクレオチ
ドもしくはアミノ酸レベルでの好ましい保存的置換が挙げられる。好ましくは、
この置換は、保存的システインから離れており、そしてしばしば、ヘリックス構
造ドメインから離れた領域である。そのような改変体は、特定の抗体を生成する
に有用であり、そしてしばしば多くのもしくは全ての生物学的特性を共有する。

【００４４】 本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらのタンパク質由来のセグメ
ントを用いる異種融合タンパク質）を提供する。異種融合タンパク質は、通常天
然には通常同様の様式で融合しないタンパク質またはセグメントの融合物である
。同様の着想は、異種核酸配列に適用される。

【００４５】 さらに、新たな構築物は、他のタンパク質からの類似の機能ドメインを組み合
わせることから作製され得る。例えば、標的結合または他のセグメントは、異な
る新たな融合ポリペプチドまたはフラグメントの間で「スワッピング」され得る
。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３
３０−１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６３：１５９８５−１５９９２を参照のこと。

【００４６】 ＢｅａｃｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌ
ｅｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホルアミダイト方
法は、適切な合成ＤＮＡフラグメントを生成する。二本鎖フラグメントは、しば
しば、相補的な鎖を合成することおよび適切な条件下で一緒にその鎖をアニール
することまたは適切なプライマー配列を用いてＤＮＡポリメラーゼを用いて相補
鎖を加えること（例えば、ＰＣＲ技術）によるかのいずれかで得られ得る。

【００４７】 ＩＬ−７ファミリーのサイトカインとの比較で、構造分析がこの遺伝子に適用
され得る。ＩＬ−７ファミリーの他のメンバーとヒトＩＬ−Ｂ５０配列の整列は
、構造的特徴の定義を可能にする。特に、βシートおよびαヘリックス残基は、
例えば、ＲＡＳＭＯＬプログラムを用いて決定され得る（Ｂａｚａｎら、（１９
９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２６３：１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（
１９９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；およびＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら、
（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：２６３−２６９を
参照のこと。置換について好ましい残基としては、レセプターと相互作用するこ
とが予想される表面露出残基が挙げられる。機能を保存する他の残基（特に、表
面露出残基から遠い位置での）は、保存的置換である。 （ＩＶ．機能的改変体） ＩＬ−Ｂ５０に対する生理的応答のブロックは、リガンドのそのレセプターへ
の結合の競合的阻害から生じる。

【００４８】 本発明のインビトロアッセイは、しばしば、単離されたタンパク質、これらの
タンパク質のレセプター結合セグメントを含む可溶性フラグメント、または固相
基板に付着したフラグメントを使用する。これらのアッセイはまた、結合セグメ
ント変異および改変、またはサイトカイン変異および改変（例えば、ＩＬ−Ｂ５
０アナログ）のいずれかの効果の診断判定を可能にする。

【００４９】 本発明はまた、競合的薬物スクリーニングアッセイの使用を意図する（例えば
、サイトカインに対する中和抗体または試験化合物と競合するレセプター結合フ
ラグメントの場合）。

【００５０】 ＩＬ−Ｂ５０抗原の「誘導体」は、天然に生じる形態からのアミノ酸配列変異
体、グリコシル化改変体、および他の化学部分との共有結合体または凝集結合体
を含む。共有結合的誘導体は、例えば標準的な手段によって、ＩＬ−Ｂ５０アミ
ノ酸側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端において見出される基に官能性を連結する
ことによって調製され得る。例えば、ＬｕｎｄｂｌａｄおよびＮｏｙｅｓ（１９
８８）Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ、第１〜２巻、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ Ｒ
ａｔｏｎ、ＦＬ；Ｈｕｇｌｉ（１９８９版）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，ＣＡ；およびＷｏｎｇ（１９９１）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ Ｌｉｎｋｉｎｇ、
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬを参照のこと。

【００５１】 特に、グリコシル化改変は、例えば、その合成および処理の間ポリペプチドの
グリコシル化パターンを改変することによるか、またはさらなる処理工程におい
て含まれる。例えば、Ｅｌｂｅｉｎ（１９８７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．５６：４９７−５３４を参照のこと。また、リン酸化アミノ酸残基（例えば
、ホスホチロシン、ホスホセリンまたはホスホスレオニン）を含む他のマイナー
な改変を有する同じ一次アミノ酸配列を伴うバージョンのペプチドもまた包含さ
れる。

【００５２】 ＩＬ−Ｂ５０と他の相同または異種のタンパク質との間の融合ポリペプチドも
また提供される。多くのサイトカインレセプターまたは他の表面タンパク質はマ
ルチマー（例えば、ホモダイマー実体）であり、そして反復構築物は、種々の利
点（タンパク質分解に対する感受性の減少を含む）を有し得る。代表的な例は、
タンパク質のセグメントまたはドメイン（例えば、レセプター結合セグメント）
とレポーターポリペプチド（例えば、ルシフェラーゼ）との融合物である。その
結果、融合リガンドの存在または位置が容易に決定され得る。例えば、Ｄｕｌｌ
ら、米国特許第４，８５９，６０９号を参照のこと。他の遺伝子融合物パートナ
ーとしては、細菌βガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、βラクタマー
ゼ、αアミラーゼ、アルコールデヒロドゲナーゼ、酵母α接合因子、および検出
タグまたは精製タグ（例えば、ＦＬＡＧ配列またはＨｉｓ６配列）が挙げられる
。例えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−
８１６を参照のこと。

【００５３】 融合ペプチドは、代表的に、組換え核酸方法または合成ポリペプチド方法のい
ずれかによってなされる。核酸操作および発現のための技術は、一般的にＳａｍ
ｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、第１〜３巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（１９９
３版）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹに記載されている。ポリ
ペプチドの合成のための技術が記載されている（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ
（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍ
ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７；Ａ
ｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；およびＧｒａｎｔ（１９９２）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ、Ｎ
Ｙ）。再折り畳み方法は、合成タンパク質に適用可能であり得る。

【００５４】 本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化におけるバリエーション以外
のＩＬ−Ｂ５０タンパク質の誘導体の使用を意図する。そのような誘導体は、化
学部分またはタンパク質キャリアとの共有結合的または凝集的会合を含み得る。
共有結合的または凝集的な誘導体は、免疫原として、免疫アッセイにおける試薬
として、または結合パートナー（例えば、他の抗原）の親和性精製のような精製
方法において有用である。ＩＬ−Ｂ５０は、抗ＩＬ−Ｂ５０抗体もしくは代替の
結合組成物のアッセイもしくは精製における使用のために、当該分野で周知の方
法により臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥのような固体支持体に対する共有
結合によって固定され得るか、またはポリオレフィン表面に吸着され得る（グル
タルアルデヒド架橋を伴うかまたは伴わない）。ＩＬ−Ｂ５０タンパク質はまた
、検出可能な基を用いて、例えば、診断アッセイにおける使用のために標識され
得る。ＩＬ−Ｂ５０の精製は、固定された抗体または相補的結合パートナー（例
えば、レセプターの結合部分）によって行われ得る。

【００５５】 本発明の可溶化したＩＬ−Ｂ５０またはフラグメントは、結合について特異的
な抗血清もしくは抗体の生成のための免疫原として使用され得る。精製された抗
原を使用して、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメント（これは、天然
の抗体の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）₂など
）を含む）をスクリーニングし得る。精製されたＩＬ−Ｂ５０抗原はまた、試薬
として用いて、サイトカインのレベルの上昇の存在に応答して生成された抗体を
検出し得る。このサイトカインのレベルの上昇は、異常または特定の生理学的状
態もしくは疾患状態の診断指標であり得る。本発明は、配列番号１または３に示
すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、あるいはそれを含むタ
ンパク質のフラグメントに対して惹起された抗体を意図する。特に、本発明は、
特定のドメイン（例えば、ヘリックスＡ、Ｂ、ＣまたはＤ）に対する結合親和性
を有するか、またはそれに対して惹起される抗体を意図する。

【００５６】 本発明は、さらなる、密接に関連した種改変体の単離を意図する。サザンブロ
ット分析およびノーザンブロット分析は、類似の遺伝的実体が他の哺乳動物にお
いて存在することを確立する。ＩＬ−Ｂ５０は、種改変体（例えば、齧歯類、ウ
サギ目、肉食動物、偶蹄目、奇蹄目および霊長類）において広汎に存在するよう
である。

【００５７】 本発明はまた、構造、発現および機能において相違点および類似点の両方を示
す関連する抗原の群を単離するための手段を提供する。その分子の多くの生理学
的効果の解明は、それらのさらなる異なる種または多型性改変体の単離および特
徴付けによって大いに加速される。特に、本発明は、異なる種におけるさらなる
相同的な遺伝子実体を同定するための有用なプローブを提供する。

【００５８】 単離された遺伝子は、ＩＬ−Ｂ５０の発現を欠く細胞（例えば、対応するタン
パク質を欠き、そして陰性バックグラウンド活性を示す種型または細胞のいずれ
か）の形質転換を可能にする。これは、形質転換されていないコントロール細胞
に比較して、ＩＬ−Ｂ５０の機能の分析を可能にする。

【００５９】 これらの抗原を通じて媒介される種々の生理学的機能を実行する重要な構造的
要素の分離は、現代の分子生物学（特に、関連するクラスのメンバーを比較する
において）を用いて可能である。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３９−１３３６において記載されるホモログスキ
ャニング変異誘発技術；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２；およびＬｅｃｈｌｅｉｔｅｒら（１９
９０）ＥＭＢＯ Ｊ．９：４３８１−４３９０において用いられるアプローチを
参照のこと。

【００６０】 細胞内機能は、おそらく、レセプターシグナル伝達を含む。しかし、タンパク
質インターナリゼーションが特定の環境下で生じ得、そして細胞内成分とサイト
カインとの間の相互作用が生じ得る。ＩＬ−Ｂ５０の相互作用成分との相互作用
の特定のセグメントは、変異誘発または直接の生化学的手段によって同定され得
る（例えば、架橋方法または親和性方法）。結晶構造解析または他の物理学的方
法による構造分析もまた、適用可能であり得る。シグナル伝達の機構のさらなる
調査としては、親和性方法によるか、または遺伝的手段（例えば、変異体の補完
的分析）によって単離可能であり得る会合成分の研究を含む。

【００６１】 ＩＬ−Ｂ５０の発現および制御のさらなる研究が追跡される。この抗原に会合
する制御エレメントは、異なる生理学的、発生学的、組織特異的または他の発現
パターンを示す。上流または下流の遺伝子領域（例えば、制御エレメント）が興
味深い。

【００６２】 ＩＬ−Ｂ５０抗原の構造的研究は、新たな抗原、特に、その分子に対してアゴ
ニストもしくはアンタゴニストの特性を示すアナログの設計をもたらす。これは
、所望されるスペクトルの活性を示す抗原を単離するために、以前に記載される
スクリーニング方法と組み合わせられ得る。

【００６３】 （Ｖ．抗体） 抗体は、ＩＬ−Ｂ５０タンパク質の種々のエピトープ（種、多型性、または対
立遺伝子の改変体およびそのフラグメントを含む）（その天然に存在する形態お
よびその組換え形態の両方において）に対して誘発され得る。さらに、抗体は、
その活性形態またはその不活性形態のいずれかにおいてＩＬ−Ｂ５０（これは、
ネイティブもしくは変性されたバージョンを含む）に対して誘発され得る。抗イ
ディオタイプ抗体もまた意図される。

【００６４】 抗原の所定のフラグメントに対する抗体（結合フラグメントおよび単鎖バージ
ョンを含む）は、免疫原性タンパク質とフラグメントとの結合体を用いた動物の
免疫によって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞
から調製される。これらの抗体は、正常または欠損のＩＬ−Ｂ５０に対する結合
についてスクリーニングされ得るか、またはアゴニスト作用またはアンタゴニス
ト作用について、例えば、レセプターを介することによって、スクリーニングさ
れ得る。抗体は、例えば、レセプターに対する結合を立体的にブロックすること
によってアゴニスト性またはアンタゴニスト性であり得る。これらのモノクロー
ナル抗体は、通常、少なくとも約１ｍＭのＫ_Dで、より通常には、少なくとも約
３００μＭで、代表的には少なくとも約１００μＭで、より代表的には少なくと
も約３０μＭで、好ましくは少なくとも約１０μＭで、そしてより好ましくは少
なくとも３μＭ以下で、結合する。

【００６５】 所定の免疫原（例えば、配列番号２または４のアミノ酸配列からなる免疫原）
に対して生成された抗体に特異的に結合するか、または特異的に免疫反応性であ
るＩＬ−Ｂ５０タンパク質は、代表的に、免疫アッセイにおいて決定される。免
疫アッセイは、代表的に、例えば、配列番号２または４のタンパク質に対して惹
起されたポリクローナル抗血清を使用する。この抗血清は、他のＩＬ−７（例え
ば、ヒトまたは齧歯類のＩＬ−７）、好ましくは同種由来のものに対する低交叉
反応性を有するように選択され、そして任意のそのような交叉反応性は、免疫ア
ッセイにおいて使用する前に、免疫吸着によって除去される。

【００６６】 免疫アッセイにおける使用のための抗血清を生成するために、配列番号２また
は４のタンパク質またはその組合せは、本明細書において記載されるように単離
される。例えば、組換えタンパク質は、哺乳動物細胞株において産生され得る。
適切な宿主（例えば、Ｂａｌｂ／ｃのようなマウスの近交系統）を、選択された
タンパク質で、代表的には標準的なアジュバント（例えば、フロイントアジュバ
ント）および標準的なマウス免疫プロトコル（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ前出
を参照のこと）を用いて免疫する。あるいは、本明細書に開示される配列に由来
し、そしてキャリアタンパク質と結合体化された合成ペプチドを免疫原として使
用し得る。ポリクローナル血清を収集し、そして免疫アッセイ（固体支持体に固
定された免疫原を用いた固相免疫アッセイ）において免疫原タンパク質に対して
力価決定する。１０⁴以上の力価のポリクローナル抗血清が選択され、そして他
のＩＬ−７ファミリーメンバー（例えば、齧歯類ＩＬ−７）に対するその交叉反
応性について、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ前出（５７０〜５７３頁）に記載さ
れるようなもののような競合的結合免疫アッセイを用いて、試験される。好まし
くは、少なくとも１つの他のＩＬ−７ファミリーメンバーをこの決定において、
例えば、霊長類ＩＬ−７とともに使用する。ＩＬ−７ファミリーメンバーは、本
明細書において記載される標準的な分子生物学およびタンパク質化学技術を用い
て組換えタンパク質として生成され得、そして単離され得る。

【００６７】 競合的結合形式における免疫アッセイは、交叉反応性の決定のために使用され
得る。例えば、配列番号４のタンパク質は、固体支持体に固定され得る。アッセ
イに添加されるタンパク質は、固定された抗原に対する抗血清の結合と競合する
。上記のタンパク質が固定されたタンパク質に対する抗血清の結合と競合する能
力は、配列番号４のタンパク質と比較される。上記のタンパク質についての交叉
反応性％は、標準的な計算法を用いて算出される。上記に列挙したタンパク質の
各々と１０％未満の交叉反応性を有する抗血清が選択され、そしてプールされる
。次いで、交叉反応する抗体は、上記に列挙したタンパク質との免疫吸着によっ
てプールされた抗血清から取り出される。

【００６８】 次いで、免疫吸着され、そしてプールされた抗血清を上記の競合的結合免疫ア
ッセイにおいて用いて、免疫原タンパク質（例えば、配列番号２または４のＩＬ
−７様タンパク質）に対する第二のタンパク質と比較する。この比較を行うため
に、この２つのタンパク質を、各々広汎な濃度でアッセイし、そして固定された
タンパク質に対する抗血清の結合の５０％を阻害するに必要な各々のタンパク質
の量を決定する。必要とされる第二のタンパク質の量が、必要とされる選択され
たタンパク質の量の２倍未満である場合、その第二のタンパク質は、その免疫原
に対して生成された抗体に対して特異的に結合しているといわれる。

【００６９】 本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕獲抗体または非
中和抗体の場合、レセプターへの結合を阻害することなく、抗原に結合する能力
について、それらの抗体は、スクリーニングされ得る。中和抗体の場合、それら
は、競合的結合アッセイにおいて有用であり得る。それらはまた、ＩＬ−Ｂ５０
タンパク質またはそのレセプターを検出または定量する工程において有用である
。例えば、Ｃｈａｎ（１９８７編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃ
ａｌ Ｇｕｉｄｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ；Ｐ
ｒｉｃｅおよびＮｅｗｍａｎ（１９９１編）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐ
ｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓａｙ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
、Ｎ．Ｙ．；および Ｎｇｏ（１９８８編）Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｉｍｍｕ
ｎｏａｓｓａｙ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと。交差吸収
、枯渇または他の手段が規定の選択性の標品、例えば、特有の種特異性、または
共有された種特異性を提供する。これらは、種々の群の抗原を同定する試験のた
めの基準であり得る。

【００７０】 さらに、抗原結合フラグメントを含む本発明の抗体は、抗原に結合し、そして
例えば、生物学的応答を誘導し得る、レセプターに対する機能的結合を阻害する
強力なアンタゴニストであり得る。それらは、また非中和抗体として有用であり
得、そして毒素または放射性核種に結合され得、その結果、抗体が抗原に結合す
る場合、その抗原を発現する細胞は、例えば、その表面上で殺傷される。さらに
これらの抗体は、リンカーにより直接かまたは間接的のいずれかで薬物または他
の治療用因子に結合体化され得、そして薬物標的化をもたらし得る。

【００７１】 抗原フラグメントは、免疫原として用いられるポリペプチドに融合されるかま
たは共有結合されるように、他の材料、特にポリペプチドに結合され得る。抗原
およびそのフラグメントは、種々の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモ
シアニン、ウシ血清アルブミン、破傷風毒素など）に融合されるかまたは共有結
合され得る。以下を参照のこと：Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｏｅｂｅｒ Ｍ
ｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ、１９６９；Ｌａ
ｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｒｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第１巻、Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａ
ｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（ポリクローナル抗血清を調製する方法の説明
に関して）。

【００７２】 ある場合には、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒトなどのような種々の哺乳動物
宿主からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このようなモノクロー
ナル抗体を調製するための技術の説明は、例えば、以下に見出される：Ｓｔｉｔ
ｅｓら（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（
第４版）、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ
Ａｌｔｏｓ、ＣＡおよびその文献中の引用文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（
１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、
ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）
、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ならびに、特に、Ｋｏｈ
ｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎのＮａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜４９７（１９
７５）（モノクローナル抗体生成の方法の１つを考察している）。

【００７３】 他の適切な技術は、抗原性ポリペプチドに対する、あるいは、ファージまたは
類似のベクターにおける抗体のライブラリーの選択物に対するリンパ球のインビ
トロの曝露を含む。Ｈｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ Ｐｈａｇｅ Ｌ
ａｍｂｄａ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５〜１２８１；およびＷａｒｄら
（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４〜５４６を参照のこと。本発明のポ
リペプチドおよび抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体を含む改変を伴って、ま
たはこのような改変なしに用いられ得る。このポリペプチドおよび抗体は、頻繁
に、検出可能シグナルを与える物質を共有結合するか、または非共有結合するこ
とにより、標識される。広範な種々の標識および結合体化技術が公知であり、そ
して科学文献および特許文書の両方において広く報告されている。適切な標識と
しては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光
部分、磁気粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許として
は、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９
３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第
４，２７５，１４９号および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組
換え免疫グロブリンまたはキメラ免疫グロブリンが生成され得る（Ｃａｂｉｌｌ
ｙ、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｏｒｅら、米国特許第４，６４２，
３３４号；およびＱｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９〜１００３３を参照のこと）、かまたはトラ
ンスジェニックマウス中で作製され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕ
ｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６〜１５６を参照のこと）。これらの引用
文献は参考として本明細書に援用される。

【００７４】 本発明の抗体はまた、タンパク質の単離において親和性クロマトグラフィーに
用いられ得る。抗体が固体支持体に結合されるカラムが調製され得る。例えば、
Ｗｉｌｃｈｅｋら（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３〜５５を
参照のこと。抗体を精製するためにはこの逆が用いられ得る。

【００７５】 それぞれのＩＬ−Ｂ５０に対して惹起された抗体はまた、抗イディオタイプ抗
体を惹起するために有用である。これらは、それぞれの抗原の発現に関する種々
の免疫学的状態を検出または診断する工程において有用である。

【００７６】 （ＶＩ．核酸） 記載したペプチド配列および関連の試薬は、ＬＢ−５０をコードするＤＮＡク
ローンを、例えば、天然の供給源から、検出、単離、または同定する工程におい
て有用である。代表的には、それは、哺乳動物から遺伝子を単離する工程におい
て有用であり、そして類似の手順が他の種、例えば、鳥類および哺乳動物のよう
な温血動物から遺伝子を単離するために適用される。交差ハイブリダイゼーショ
ンは、同じもの、例えば、多型性改変体、または他の種からのＩＬ−Ｂ５０の単
離を可能にする。多数の異なるアプローチが適切な核酸クローンを首尾良く単離
するために利用可能である。

【００７７】 精製したタンパク質または規定のペプチドは、上記の標準的方法により抗体を
生成するために有用である。合成ペプチドまたは精製タンパク質は、免疫系に提
示され、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を生成し得る。例えば、
Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬ
ａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

【００７８】 例えば、特定の結合組成物が、ＩＬ−Ｂ５０を発現する細胞系統から作製され
た発現ライブラリーのスクリーニングに用いられ得る。細胞内発現のスクリーニ
ングは、種々の染色または免疫蛍光手順により実施され得る。結合組成物は、親
和性精製するためか、または表面融合タンパク質を発現する細胞を分別するため
に用いられ得る。

【００７９】 このペプチドセグメントはまた、ライブラリーをスクリーニングするための適
切なオリゴヌクレオチドを予測するために用いられ得る。この遺伝子コードは、
スクリーニングのためのプローブとして有用な適切なオリゴヌクレオチドを選択
するために用いられ得る。例えば、配列番号１または３を参照のこと。ポリメラ
ーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術と組み合わせて、合成オリゴヌクレオチドは、ライ
ブラリー由来の正しいクローンを選択することにおいて有用である。相補配列は
また、プローブ、プライマーまたはアンチセンス鎖として用いられる。種々のフ
ラグメントは、例えば、固定されたベクターもしくはポリ−Ａ相補的ＰＣＲ技術
と組み合わされて、または他のペプチドの相補的ＤＮＡと組み合わされて、特に
有用であるはずである。

【００８０】 本発明は、ＩＬ−Ｂ５０ポリペプチドに対応するが、特に記載される配列の非
翻訳５’部分をコードする部分を欠如する、生物学的活性をコードする、単離さ
れたＤＮＡまたはフラグメントの使用を意図する。さらに、本発明は、生物学的
に活性なタンパク質またはポリペプチドをコードし、そして本明細書中に記載さ
れるＤＮＡ配列と適切な条件下でハイブリダイズし得る、単離されたＤＮＡまた
は組換えＤＮＡを含む。上記の生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチド
は、インタクトな抗原、またはフラグメントであり得、そして例えば、配列番号
２または４に開示されるアミノ酸配列（特に成熟な分泌ポリペプチド）を有する
。さらに、本発明は、分泌型ＩＬ−Ｂ５０に高い同一性を示すタンパク質をコー
ドする、単離されたＤＮＡまたは組換えＤＮＡ、あるいはそれらのフラグメント
の使用を含む。この単離されたＤＮＡは、５’および３’の近隣にそれぞれの調
節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリＡ付加シグナル、および他
のもの）を有し得る。あるいは、発現は、コードセグメントを、異種プロモータ
ーに作動可能に連結することによって（例えば、内因性遺伝子の上流にプロモー
ターを挿入することによって）もたらされ得る。例えば、Ｔｒｅｃｏら、ＷＯ９
６／２９４１１または米国特許出願第０８／４０６，０３０号を参照のこと。

【００８１】 「単離された」核酸は、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマー
）であり、ネイティブな配列を天然に伴う他の成分（例えば、もともとの種に由
来するリボソーム、ポリメラーゼ、および／または隣接ゲノム配列）から実質的
に分離される。この用語は、その天然に存在する環境から除去されている核酸配
列を含み、そして組換えＤＮＡ単離物またはクローニングされたＤＮＡ単離物、
および化学的に合成されたアナログまたは異種系によって生物学的に合成された
アナログを含む。実質的に純粋な分子は、この分子の単離された形態を含む。一
般に、この核酸は、約５０ｋｂ未満、通常、約３０ｋｂ未満、代表的には約１０
ｋｂ未満、および好ましくは約６ｋｂ未満のベクターまたはフラグメント中にあ
る。

【００８２】 単離された核酸は、一般に、分子の均質な組成物であるが、いくつかの実施態
様では、わずかな不均質性を含む。この不均質性は、代表的には、所望される生
物学的機能または活性に重要ではない、このポリマーの末端または部分にて見出
される。

【００８３】 「組換え」核酸は、その産生方法またはその構造のいずれかによって規定され
る。産生方法（例えば、プロセスにより作製される産物）を参照すると、このプ
ロセスは、組換え核酸技術の使用（例えば、ヌクレオチド配列において、ヒトの
介入、代表的には選択または産生を含む）である。あるいは、これは、天然では
互いに連続していないが、天然産物（例えば、天然に存在する変異体）を除外す
ることを意味する、２つのフラグメントの融合物を含む配列を作成することによ
って作製される核酸であり得る。従って、任意の合成オリゴヌクレオチドプロセ
スを使用することに由来する配列を含む核酸のように、例えば、任意の天然に存
在しないベクターで細胞を形質転換することによって作製される産物が、含まれ
る。このようなものは、しばしば、同じアミノ酸または保存的アミノ酸をコード
するが、代表的には配列認識部位を導入または除去する冗長（ｒｅｄｕｎｄａｎ
ｔ）コドンでコドンを置換するためになされる。

【００８４】 あるいは、通常入手可能な天然形態において見出されない機能の所望される組
合せを含む、単一の遺伝子実体を作製するために、所望の機能の核酸セグメント
を一緒に連結することが行われる。制限酵素認識部位は、しばしば、このような
人工操作の標的であるが、他の部位特異的標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ
複製部位、調節配列、制御配列、または他の有用な特性）が、設計により取り込
まれ得る。同様の概念が、組換え（例えば、融合）ポリペプチドに意図される。
遺伝暗号の冗長性によって、これらの抗原のフラグメントに類似するポリペプチ
ドをコードする合成核酸、および種々の異なる種改変体または多型改変体に由来
する配列の融合物が、特に含まれる。

【００８５】 核酸の状況における有意な「フラグメント」は、少なくとも約１７個のヌクレ
オチド、一般には少なくとも約２２個のヌクレオチド、通常には少なくとも約２
９個のヌクレオチド、よりしばしば少なくとも約３５個のヌクレオチド、代表的
には少なくとも約４１個のヌクレオチド、通常少なくとも約４７個のヌクレオチ
ド、好ましくは少なくとも約５５個のヌクレオチド、および特に好ましい実施態
様では少なくとも約６０個以上のヌクレオチド（例えば、６７個、７３個、８１
個、８９個、９５個など）の連続するセグメントである。

【００８６】 ＩＬ−Ｂ５０タンパク質をコードするＤＮＡは、関連するタンパク質または同
様なタンパク質をコードする遺伝子、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡ種、ならびに異
なる種由来の相同タンパク質をコードするＤＮＡを同定するために特に有用であ
る。他の種（霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、および鳥類を含む）においてホモ
ログが存在する。種々のＩＬ−Ｂ５０タンパク質は、相同であるはずであり、そ
して本明細書中に含まれる。しかし、この抗原に対してより異なる進化関係を有
するタンパク質でさえ、それらが十分に相同である場合には、これらの配列を使
用して、適切な条件下で容易に単離され得る。霊長類ＩＬ−Ｂ５０タンパク質は
、特に興味深い。

【００８７】 ゲノム配列に由来する組換えクローン（例えば、イントロンを含む）は、トラ
ンスジェニック研究（例えば、トランスジェニック細胞および生物を含む）のた
めおよび遺伝子治療のために有用である。例えば、Ｇｏｏｄｎｏｗ（１９９２）
「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ」Ｒｏｉｔｔ（編）Ｅｎｃｙｃｌｏｐ
ｅｄｉａ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ａｃｅｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ、１５０２〜１５０４頁；Ｔｒａｖｉｓ（１９９２）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２５６：１３９２〜１３９４；Ｋｕｈｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５４：７０７〜７１０；Ｃａｐｅｃｃｈｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４
４：１２８８；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ（１９８７年版）Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎ
ｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃ
ｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ；およびＲ
ｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １０
：１８０〜１９９を参照のこと。

【００８８】 核酸配列の比較状況における実質的相同性（例えば、同一性）は、このセグメ
ントまたはそれらの相補鎖のいずれかが比較された場合に、このヌクレオチドの
少なくとも約５０％、一般には少なくとも約５８％、通常少なくとも約６５％、
しばしば少なくとも約７１％、代表的には少なくとも約７７％、通常少なくとも
約８５％、好ましくは少なくとも約９５〜９８％以上、および特に好ましい実施
態様では、このヌクレオチドの約９９％以上の高さにおいて、適切なヌクレオチ
ドの挿入体または欠失体と最適に整列される場合に同一であることを意味する。
あるいは、このセグメントが、代表的には、ＩＬ−Ｂ５０の配列（例えば、配列
番号１または３における）を使用して、選択的なハイブリダイゼーション条件下
で、鎖またはその相補体にハイブリダイズする場合に、実質的な相同性が存在す
る。代表的には、少なくとも約３０個のヌクレオチドのストレッチにわたって少
なくとも約５５％の同一性、好ましくは、約２５個のヌクレオチドのストレッチ
にわたって少なくとも約７５％、および最も好ましくは、少なくとも約２０個の
ヌクレオチドにわたって少なくとも約９０％が存在する場合に、選択的なハイブ
リダイゼーションが生じる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１２：２０３〜２１３を参照のこと。記載されるように、同一性比較
の長さは、より長いストレッチにわたってであり得、そして特定の実施態様では
、少なくとも約１７個のヌクレオチド、通常少なくとも約２８個のヌクレオチド
、代表的には少なくとも約４０個のヌクレオチド、および好ましくは少なくとも
約７５個〜１００個以上のヌクレオチドのストレッチにわたってである。

【００８９】 ハイブリダイゼーションの状況における相同性に関しては、ストリンジェント
な条件は、塩、温度、有機溶媒、および他のパラメーター、代表的には、ハイブ
リダイゼーション反応において制御されるパラメーターの、組み合わされた、ス
トリンジェントな条件である。ストリンジェントな温度条件には、通常、約３０
℃以上、通常約３７℃以上、代表的には約５５℃、６０℃、６５℃以上、または
好ましくは約７０℃以上の温度が挙げられる。ストリンジェントな塩条件は、通
常、約１０００または６００ｍＭ未満、通常約４００ｍＭ未満、代表的には約２
５０ｍＭ未満、好ましくは約１５０ｍＭ未満（約１００ｍＭ、５０ｍＭまたは２
０ｍＭさえも含む）である。しかし、パラメーターの組合せは、任意の単一のパ
ラメーターの尺度よりもはるかに重要である。例えば、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａ
ｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１：３４９〜３７０を参照
のこと。ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、バックグラ
ンドに対して少なくとも約２倍、好ましくは少なくとも３〜５以上のバックグラ
ンドを生じるべきである。

【００９０】 配列比較については、代表的には、１つの配列は、試験配列が比較される参照
配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参
照配列は、コンピューターに入力され、続いて、必要な場合に座標が指定され、
そして配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。次いで、配列比
較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメーターに基づいて、参照配列に
対する試験配列についての配列同一性パーセントを算定する。

【００９１】 比較のための配列の最適な整列が、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａ
ｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の局所相同性アルゴリ
ズムによってか、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性整列アルゴリズムによってか、Ｐｅａｒｓ
ｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性方法の検索によってか、これらのアルゴリズ
ムのコンピューターでの実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆ
ｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕ
ｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、
ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によってか、または視覚検
査（一般に、Ａｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）によって、実施され得る。

【００９２】 有用なアルゴリズムの１例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、関係お
よび配列同一性パーセントを示す進歩的な対をなす整列を使用して、関連配列の
群から複数の配列の整列を作成する。これはまた、整列を作成するために使用さ
える断片化した関係を示すツリーまたは系統樹をプロットする。ＰＩＬＥＵＰは
、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５
：３５１〜３６０の進歩的な整列方法の単純化を使用する。使用される方法は、
ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１〜１５
３により記載される方法に類似する。このプログラムは、３００個まで整列し得
る（各々、５，０００ヌクレオチドまたはアミノ酸の各々の配列の最大の長さ）
。この複数の整列手順は、２つの最も類似する配列の対をなす整列で開始し、こ
れにより２つの整列された配列のクラスターを生成する。次いで、このクラスタ
ーは、次に最も関連する配列または整列された配列のクラスターに対して整列さ
れる。配列の２つのクラスターは、２つの個々の配列の対をなす整列の単純な伸
長によって整列される。最終的な整列は、一連の進歩的な対をなす整列によって
達成される。このプログラムは、特定の配列、および配列比較の領域についてそ
れらのアミノ酸またはヌクレオチドの座標を指定することによって、ならびにこ
のプログラムパラメーターを指定することによって実行され得る。例えば、参照
配列は、以下のパラメーターを使用して、配列同一性パーセントの関係を決定す
るために、他の試験配列と比較される：ｄｅｆａｕｌｔ ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ
（３．００）、ｄｅｆａｕｌｔ ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ（０．１
０）、およびｗｅｉｇｈｔｅｄ ｅｎｄ ｇａｐｓ。

【００９３】 配列同一性パーセントおよび配列類似性パーセントを決定するために適切であ
るアルゴリズムの別の例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。これは、Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０に記載
される。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じて公的に入
手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと
整列される場合に、一致するかまたはいくらかの正の値となる閾値スコアＴを満
たすかのいずれかである、問合せ配列中の長さＷの短いワードを同定することに
よって、高いスコア付け配列対（ＨＳＰ）をまず同定することを包含する。Ｔは
、隣接ワードスコア閾値（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄ ｗｏｒｄ ｓｃｏｒｅ
ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）といわれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）。これらの最初
の隣接ワードヒットは、それらを含む、より長いＨＳＰを見出す検索を開始する
ためのシードとして作用する。次いで、このワードヒットは、累積的な整列スコ
アが増大され得る限り、各々の配列に沿って両方の方向に伸長される。各々の方
向におけるこのワードヒットの伸長は、以下の場合に停止される：累積的整列ス
コアがその最大に達成された値から量Ｘだけ落ち込むか；累積的スコアが、１以
上の負のスコアとなる残基の整列の蓄積に起因して０以下になるか；または、い
ずれかの配列の末端に達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ
、およびＸは、整列の感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、デ
フォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコア付けマ
トリクス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５）整列（Ｂ）、１０の
期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、ならびに両方の鎖の比較を使用する。

【００９４】 配列同一性割合の計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムもまた、２つの配列
間の類似性の統計分析を実施する（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕ
ｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８
７３−５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供された類似
性の一つの測定は最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、確率の指標を提供
し、これにより２つのヌクレオチド配列または２つのアミノ酸配列の間の一致が
偶然に生じる。例えば、試験核酸と参照核酸との比較おける最小合計確率が、約
０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、そして最も好ましくは約０．００
１未満である場合、核酸は参照配列と類似していると考えられる。

【００９５】 下記のように、ポリペプチドの２つの核酸配列が実質的に同一であるというさ
らなる指標は、第１の核酸によりコードされるポリペプチドが、第２の核酸によ
りコードされるポリペプチドと免疫学的に交叉反応性であるということである。
従って、例えば、２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、代表的
に、ポリペプチドは、第２のポリペプチドと実質的に同一である。下記のように
、２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、この２つの分子は、ストリ
ンジェントな条件下でお互いにハイブリダイズするということである。

【００９６】 他の哺乳動物種由来のＩＬ−Ｂ５０がクローン化され得、そして近縁種の交叉
種ハイブリダイゼーションにより単離され得る。相同性は、遠縁種間では比較的
低くなり得、従って、比較的近縁な種のハイブリダイゼーションが、得策である
。あるいは、低い種特異性を示す抗体調製物の調製は、発現クローニングアプロ
ーチにおいて有用であり得る。

【００９７】 （ＶＩＩ．ＩＬ−Ｂ５０、模倣物の作製） ＩＬ−Ｂ５０またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤ
ＮＡライブラリーをスクリーニングすること、または広範に種々の細胞株または
組織試料より調製されたゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより得
られ得る。例えば、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２：１６１−１７０；ＧｕｂｌｅｒおよびＨｏｆｍａｎ（１９８
３）Ｇｅｎｅ２５：２６３−２６９；およびＧｌｏｖｅｒ（編。１９８４）ＤＮ
Ａ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。あるいは、本明細書中に提供される配列
は、有用なＰＣＲプライマーを提供するか、または、ＩＬ−Ｂ５０をコードする
適切な遺伝子の合成または他の調製を可能にする（天然に存在する実施態様を含
む）。

【００９８】 このＤＮＡは、代りに、例えばポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体
を産生するために使用され得る全長ＩＬ−Ｂ５０またはフラグメントの合成のた
め；結合研究のため；改変された分子の構築および発現のため；および構造／機
能研究のために広範に種々の宿主細胞内で発現され得る。

【００９９】 本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリ
オファージ、組み込み可能なＤＮＡフラグメント、およびＤＮＡフラグメントを
宿主のゲノム内に組み込むことを可能にする他のビヒクルを含む。例えば、Ｐｏ
ｕｗｅｌｓ、ら（１９８５および補遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．；およびＲ
ｏｄｒｉｇｕｅｚ、ら（編。１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏ
ｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉ
ｒ Ｕｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡを参照のこと。

【０１００】 本発明の目的のために、ＤＮＡ配列が機能的にお互いに関連する場合、それら
は作動可能に連結される。例えば、ＤＮＡが前タンパク質として発現されるか、
またはポリペプチドの細胞膜への方向づけ、もしくはそのポリペプチドの分泌に
関与する場合、前配列または分泌性リーダーのＤＮＡが、ポリペプチドに作動可
能に連結される。プロモーターがそのポリペプチドの転写を制御する場合、プロ
モーターはコード配列に作動可能に連結される；リボソーム結合部位が翻訳を可
能にするために配置された場合、リボソーム結合部位はコード配列に作動可能に
連結される。通常、作動可能に連結されるとは、連続することおよびリーディン
グフレーム内にあることを意味するが、特定の遺伝子エレメント（例えば、リプ
レッサー遺伝子）は連続的に連結されていないが、代りに発現を制御するオペレ
ーター配列にさらに結合する。例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ、ら、Ｃｈａｐｔｅ
ｒ １０、２０５〜２３６頁；ＢａｌｂａｓおよびＢｏｌｉｖａｒ（１９９０）
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５：１４〜３７；およびＡ
ｕｓｕｂｅｌ、ら（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｉｌｅｙ、ＮＹを参
照のこと。

【０１０１】 適切な発現ベクターの代表的な例としては、ｐＣＤＤＮＡ１が挙げられる；ｐ
ＣＤ、Ｏｋａｙａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１１３
６〜１１４２を参照のこと；ｐＭＣ１ｎｅｏ Ｐｏｌｙ−Ａ、Ｔｏｍａｓら、（
１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３〜５１２を参照のこと；およびバキュロウイ
ルスベクター（例えば、ｐＡＣ ３７３またはｐＡＣ ６１０）。例えば、Ｍｉ
ｌｌｅｒ（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１７７〜１
９９を参照のこと。

【０１０２】 特定のグリコシル化パターンまたは限定されたグリコシル化パターンを提供す
る系において、ＩＬ−Ｂ５０ポリペプチドを発現することがしばしば所望される
。例えば、ＬｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ ６：４７〜５５；およびＫａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅ
ｎｚｙｍｏｌ．１８５：４８７〜５１１を参照のこと。

【０１０３】 ＩＬ−Ｂ５０、またはそのフラグメントは、細胞膜と連結されるホスファチジ
ルイノシトール（ＰＩ）になるように設計され得るが、ホスファチジルイノシト
ール切断酵素（例えば、ホスファチジルイノシトールホスホリパーゼ−Ｃ）を用
いる処理により膜から除去され得る。これは、生物学的に活性な形態で抗原を放
出し、そしてタンパク質化学の標準的な手順による精製を可能にする。例えば、
Ｌｏｗ（１９８９）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９８８：４２
７〜４５４；Ｔｓｅら、（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１００３〜１０
８；およびＢｒｕｎｎｅｒら、（１９９１）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．１１４：１
２７５〜１２８３を参照のこと。

【０１０４】 ＩＬ−Ｂ５０が特徴づけされた以上は、フラグメントまたはその誘導体が、ペ
プチドを合成するために従来のプロセスにより調製され得る。これらとしては、
ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、Ｒｏ
ｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４
）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１９
８４）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＶｉｌｌａｆ
ｒａｎｃａ（編。１９９１）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ
、Ｃａに記載されるようなプロセスが挙げられる。

【０１０５】 （ＶＩＩＩ．使用） 本発明は、本明細書中の他の場所に記載されるように（例えば、ＩＬ−Ｂ５０
媒介性条件内、または下記の診断用のキットの説明書内）、診断的的適用におけ
る使用を見出す試薬を提供する。この遺伝子は、法医科学（例えば、ヒトとげっ
歯動物を区別すること、または差次的発現もしくは改変パターンを示す異なる細
胞間を区別するためのマーカーとして）において有用であり得る。

【０１０６】 本発明はまた、有意な商業上および／または治療上の可能性を有する試薬を提
供する。ＩＬ−Ｂ５０に対する結合親和性を有するものとして同定された化合物
に加えて、ＩＬ−Ｂ５０（天然に存在するか、または組換え体）、そのフラグメ
ントおよびそれに対する抗体は、分子生物学、免疫学、または生理学の教示技術
のための試薬として有用であるはずである。適切なキットが、例えば、タンパク
質、抗体、クローニング方法、組織学などの産生または使用における実際の研究
室での演習において、この試薬とともに調製され得る。

【０１０７】 この試薬はまた、炎症状態を含む異常な生理または発生に関連する状態の処置
において有用である。この試薬は、相互作用する成分の存在および非存在につい
てのインビトロ試験において有用であり得、その成分は特定の処置ストラテジー
の成功に関連し得る。特に、種々の細胞（例えば、造血性細胞またはリンパ球）
の生理の改変は、本明細書中に提供される組成物を使用する処置についての適切
な方法によって達成される。例えば、Ｔｈｏｍｏｎ（編。１９９８）Ｔｈｅ Ｃ
ｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第３版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ
Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃ
ｔｏｒｓ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；およびＡ
ｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂを参照のこと。

【０１０８】 例えば、異常な発現またはＩＬ−Ｂ５０による異常な情報伝達に関連する疾患
または障害は、アゴニストまたはアンタゴニストの標的のようである。新しいサ
イトカインが、造血性細胞（例えば、リンパ球）の調節および発達において役割
を果たすはずであり、これは免疫学的応答（例えば、炎症および／または自己免
疫障害）に影響を及ぼす。あるいは、それは血管生理学もしくは血管発生、また
は神経細胞効果に影響を及ぼし得る。

【０１０９】 特に、種々の状況において、サイトカインは、細胞、増殖などによりサイトカ
イン合成を媒介するはずである。ＩＬ−Ｂ５０のアンタゴニスト（例えば、天然
に存在するＩＬ−Ｂ５０の形態のムテイン改変体またはブロック抗体）は、例え
ば、炎症または自己免疫応答のような状況において、免疫応答をブロックする選
択的かつ強力な方法を提供し得る。Ｓａｍｔｅｒら、（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｄｉｓｓｅａｓｅｓ 第１および２巻、Ｌｉｔｔｌｅ、Ｂｒｏｗｎお
よびＣｏ．を参照のこと。

【０１１０】 種々の異常な状態が、ＩＬ−Ｂ５０を産生する（例えば、ノーザンブロット分
析によるｍＲＮＡ発現により評価されるように、）異なる細胞型において公知で
ある。Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇ
ｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎ
．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎ、ら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ
Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎ．Ｙ．；
およびＷｅａｔｈｅｒａｌｌ、ら（編）Ｏｘｆｏｒｄ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘ
ｆｏｒｄを参照のこと。多くの他の医学的条件および疾患が、マクロファージま
たは単球による活性化に関し、そしてこれらの多くは、本明細書中に提供される
アゴニストまたはアンタゴニストによる処置に対して応答性である。例えば、Ｓ
ｔｉｔｅｓおよびＴｅｒｒ（編；１９９１）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｉｎｉｃａ
ｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ＡｐｐｌｅｔｏｎおよびＬａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌ
ｋ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ；およびＳａｍｔｅｒ、ら（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｌｉｔｔｌｅ、ＢｒｏｗｎおよびＣｏ．を参照
のこと。これらの問題は、本明細書中に提供される組成物を使用する予防または
処置に対して感受性であるはずである。

【０１１１】 ＩＬ−Ｂ５０、アンタゴニスト、抗体、などが精製され得、次いで、患者、獣
医またはヒトに投与され得る。これらの試薬は、例えば、従来の薬学的に受容可
能なキャリアまたは希釈剤（例えば、生理学的に無害な安定化剤、賦形剤、また
は保存剤に加えて、免疫原性アジュバンド）における治療的使用について付加的
な活性成分または不活性成分と併用され得る。これらの組み合わせは、ろ過滅菌
され得、そして投薬量バイアル中での凍結乾燥、または安定化された水性調製物
中での貯蔵により投薬量形態の中に置かれる。本発明はまた、補体結合ではない
形態を含み、抗体またはそれの結合フラグメントの使用を意図する。

【０１１２】 ＩＬ−Ｂ５０またはそのフラグメントを使用した薬物スクリーニングは、関連
する成分の単離を含む、ＩＬ−Ｂ５０の機能に対する結合親和性または他の関連
する生物学的効果を有する化合物を同定するために実施され得る。次いで、その
化合物が内因性の刺激活性を有するか否か、それゆえ、その化合物がサイトカイ
ンの活性をブロックするという点でその化合物がブロッカーまたはアンタゴニス
トであるか否かを決定するために後の生物学的アッセイが利用され得る。同様に
、内因性の刺激活性を有する化合物はシグナル経路を活性化し得、従って、それ
はＩＬ−Ｂ５０の活性を刺激するという点でアゴニストである。本発明はさらに
、アンタゴニストとしてのＩＬ−Ｂ５０に対するブロック抗体およびアゴニスト
としての刺激性抗体の治療的使用を意図する。このアプローチは、他のＩＬ−Ｂ
５０種改変体とともに特に有用であるはずである。

【０１１３】 有効な治療のために必要な試薬の量は、投与の手段、標的部位、患者の生理学
的状態、および投与された他の医薬（ｍｅｄｉｃａｎｔ）を含む、多くの異なる
要因に依存する。従って、安全性および効果を最適化するために、処置投薬量は
滴定されるべきである。代表的に、インビトロにおいて使用される投薬量は、こ
れらの試薬のインサイチュでの投与に有用な量における有用なガイダンスを提供
し得る。特定の障害の処置のための効果的な用量の動物実験は、ヒト投薬量の予
測的な指標をさらに提供する。種々の意図が記載される。例えば、Ｇｉｌｍａｎ
ら、（編）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、最新版、
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、最新版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ。投与の方法は、そこで、および下記にお
いて議論されている（例えば、経口投与、静脈内投与、腹膜内投与または筋肉内
投与、経皮拡散、など）。薬学的に受容可能なキャリアには、水、生理食塩水、
緩衝液および，例えば、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｒａｈ
ｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙに記載される他の化合物が挙げられる。投薬量の
範囲は、適切なキャリアとともに、通常１ｍＭ濃度よりも低い量が予想され、代
表的には約１０μＭ濃度未満であり、通常は約１００ｎＭ未満であり、好ましく
は、約１０ｐＭ（ピコモル濃度）未満であり、および最も好ましくは約１ｆＭ（
フェムトモル濃度）未満である。遅い放出の処方物または遅い放出の装置は、連
続的な、または長期の投与に対してしばしば利用される。例えば、Ｌａｎｇｅｒ
（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３を参照のこと。

【０１１４】 ＩＬ−Ｂ５０、そのフラグメント、およびそれに対する抗体またはそのフラグ
メント、アンタゴニスト、およびアゴニストが宿主に直接投与されて処理され得
るか、化合物のサイズに依存して、投与する前に化合物をキャリアタンパク質（
例えば、オボアルブミンまたは血清アルブミン）に結合体化することが所望され
得る。治療的処方物が、多くの従来の投薬量処方物において投与され得る。活性
成分が単独で投与されることは可能であるが、一方、薬学的な処方物として存在
することが好ましい。代表的に、処方物は、その１つ以上の受容可能なキャリア
とともに少なくとも１つの活性成分（上記に定義されるように）を含む。各キャ
リアは、他の成分と適合し、かつ患者に無害であるという意味において薬学的お
よび生理学的の両方で受容可能であるべきである。処方物は、経口、直腸、経鼻
、局所的、または非経口的投与（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）に
ついての適切な処方物を含む。処方物は、単一投薬量形態内に都合良く存在し得
、そして薬学分野において周知の任意の方法によって調製され得る。例えば、Ｇ
ｉｌｍａｎ、ら（編 １９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：
Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０
）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ；Ａｖ
ｉｓら、（編 １９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏ
ｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編 １９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ；およびＬｉｅｂｅｒｍａｎら、（編 １９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍ、
Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。本発明の治療法は、他の薬剤（
例えば、ＩＬ−７を含む他のサイトカイン、またはそのアンタゴニスト）と併用
され得るか、または他の薬剤（例えば、ＩＬ−７を含む他のサイトカイン、また
はそのアンタゴニスト）と関連して使用され得る。

【０１１５】 本発明のＩＬ−Ｂ５０の天然に存在する形態および組換え形態の両方が、タン
パク質に対する結合活性について化合物をスクリーニングし得るキットおよびア
ッセイ方法において特に有用である。自動アッセイのいくつかの方法が、何万と
いう化合物を短期間でスクリーニングするために近年開発されてきた。例えば、
Ｆｏｄｏｒら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７〜７７３を参照の
こと（これは、固形基板上で合成された複数の限定されたポリマーによる結合親
和性を試験するための手段を記載している。適切なアッセイの開発が、本発明に
より提供される、大量の精製された可溶性ＩＬ−Ｂ５０のアベイラビリティーに
より大いに促進され得る。

【０１１６】 他の方法が、ＩＬ−Ｂ５０−ＩＬ−Ｂ５０レセプター相互作用における重大な
残基を決定するために使用され得る。変異分析（例えば、Ｓｏｍｏｚａら、（１
９９３）Ｊ．Ｅｘｐｔｌ．Ｍｅｄ．１７８：５４９〜５５８を参照のこと）が、
相互作用および／またはシグナル伝達において重大な特定の残基を決定するため
に実施され得る。ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ １９：５５〜７２）およびＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ
（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８〜２３１０）は、α−ヘリ
ックス（Ｈ）、β−ストランド（Ｅ）、またはコイル（Ｌ）の二次構造の予測を
提供する。ヘリックスＤがより重要な領域であるとともに、ヘリックスＡおよび
Ｄは、レセプター相互作用において最も重要である。ヘリックスＡは、ヒトにお
いてほぼｌｙｓ１０〜ｔｙｒ２６にまでおよび（配列番号４）、ヘリックスＢは
、ほぼｈｉｓ４６〜ａｓｎ５７にまでおよび；ヘリックスＣは、ほぼｇｌｕ６８
〜ｔｒｐ８１にまでおよび；そしてヘリックスＤは、ほぼａｓｎ１０７〜ほぼｌ
ｅｕ１２７位にまでおよぶ。表面が曝露される残基はレセプター結合に影響を及
ぼし、一方で、包埋した残基は一般的な構造に影響を及ぼす。

【０１１７】 例えば、通常、アンタゴニストが一旦見出されると、抗原が構造的に定義され
る（例えば、三次構造データにより）。潜在的に相互作用するアナログの試験が
、精製されたＩＬ−Ｂ５０を使用する高度に自動化されたアッセイ方法の開発上
、今は可能である。特に、新しいアゴニストおよびアンタゴニストが、本明細書
中に記載されるスクリーニング技術を使用することにより発見される。ＩＬ−Ｂ
５０分子のスペクトルについて組み合わされた結合親和性を有することを見出さ
れた化合物が特に重要である（例えば、ＩＬ−Ｂ５０の種改変体に対するアンタ
ゴニストとして作用し得る化合物）。

【０１１８】 薬物スクリーニングの１つの方法は、ＩＬ−Ｂ５０を発現する組換えＤＮＡ分
子で安定に形質転換される真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利用する
。他の分子からの単離の際、ＩＬ−Ｂ５０を発現する細胞が単離され得る。その
ような細胞は、生存可能な形態かまたは固定化された形態のいずれかであり、標
準結合パートナー結合アッセイのために使用され得る。Ｐａｒｃｅら、（１９８
９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３〜２４７；およびＯｗｉｃｋｉ、ら（１９
９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７〜４
０１１もまた参照のこと（これは細胞性応答を検出するための敏感な方法を記載
する）。

【０１１９】 薬物スクリーニングについての別の技術は、ＩＬ−Ｂ５０に対して適切な結合
親和性を有する化合物についてのハイスループットスクリーニングを提供するア
プローチを包含し、そしてＧｅｙｓｅｎ、欧州特許出願８４／０３５６４（１９
８４年９月１３日公開）に詳細に記載されている。まず、多数の異なる低分子ペ
プチド試験化合物を固体基板（例えば、プラスチックピンまたはいくつかの他の
適切な表面（Ｆｏｄｏｒら（１９９１）を参照のこと））上で合成する。次いで
、すべてのピンを、可溶化未精製ＩＬ−Ｂ５０または可溶化精製ＩＬ−Ｂ５０と
反応させ、そして洗浄する。次の工程は、結合したＩＬ−Ｂ５０を検出する工程
を包含する。

【０１２０】 合理的な薬物設計はまた、ＩＬ−Ｂ５０および他のエフェクターまたはアナロ
グの分子形状の構造的研究に基づき得る。エフェクターは、結合に応答して他の
機能を媒介する他のタンパク質であり得るか、またはＩＬ−Ｂ５０と通常相互作
用する他のタンパク質（例えば、レセプター）であり得る。どの部位が特定の他
のタンパク質と相互作用するかを決定するための１つの手段は、物理的構造決定
（例えば、Ｘ線結晶学または２次元ＮＭＲ技術）である。これらは、例えば、他
のサイトカインレセプターモデルに対してモデル化される場合に、どのアミノ酸
残基が分子接触領域を形成するかに関する指針を提供する。タンパク質の構造決
定の詳細な説明については、例えば、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（
１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。

【０１２１】 （ＩＸ．キット） 本発明はまた、種々の診断用キットにおけるＩＬ−Ｂ５０タンパク質、そのフ
ラグメント、ペプチド、およびそれらの融合産物の使用、ならびに別のＩＬ−Ｂ
５０または結合パートナーの存在を検出するための方法を意図する。代表的には
、このキットは、規定されたＩＬ−Ｂ５０ペプチドもしくは遺伝子セグメント、
または１つもしくは他のもの（例えば、ＩＬ−Ｂ５０フラグメントまたは抗体）
を認識する試薬のいずれかを含む区画を備える。

【０１２２】 ＩＬ−Ｂ５０に対する試験化合物の結合親和性を決定するためのキットは、代
表的に、以下を備える；試験化合物；標識された化合物（例えば、ＩＬ−Ｂ５０
に対して既知の結合親和性を有する結合パートナーまたは抗体）；ＩＬ−Ｂ５０
の供給源（天然に存在するかまたは組換え）；および遊離の標識された化合物か
ら結合化合物を分離させるための手段（例えば、分子を固定するための固相）。
一旦、化合物がスクリーニングされると、抗原に対して適切な結合親和性を有す
る化合物は、それらがＩＬ−Ｂ５０シグナル伝達経路に対するアゴニストまたは
アンタゴニストとして作用するか否かを決定するために、当該分野において周知
のような適切な生物学的アッセイで評価され得る。組換えＩＬ−Ｂ５０ポリペプ
チドが利用可能であることはまた、このようなアッセイを較正するための十分に
規定された標準物を提供する。

【０１２３】 サンプルにおける例えば、ＩＬ−Ｂ５０の濃度を決定するための好ましいキッ
トは、代表的に、以下を備える；抗原に対して既知の結合親和性を有する、標識
された化合物（例えば、結合パートナー又は抗体）、サイトカインの供給源（天
然に存在するかまたは組換え）、および遊離の標識された化合物からその結合化
合物を分離させるための手段（例えば、ＩＬ−Ｂ５０を固定するための固相）。
試薬を含む区画および使用説明書が、通常提供される。

【０１２４】 ＩＬ−Ｂ５０またはフラグメントに特異的な抗体（抗原結合フラグメントを含
む）は、ＩＬ−Ｂ５０および／またはそのフラグメントの上昇レベルの存在を検
出するための診断的適用において有用である。このような診断的アッセイは、溶
解産物、生存細胞、固定細胞、免疫蛍光検査法、細胞培養、体液を使用し得、そ
してさらに、血清中の抗原に関連する抗原の検出などを包含し得る。診断的アッ
セイは、均質性（遊離試薬と抗原結合パートナーの複合体の間の分離工程を伴わ
ない）または異質性（分離工程を伴う）であり得る。種々の市販のアッセイが存
在する（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベント
検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫検定法（ＥＩＡ）、酵素増幅免疫測定法（ＥＭ
ＩＴ）、基質標識蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦＩＡ）など）。例えば、Ｖａｎ
Ｖｕｎａｋｉｓら（１９８０）、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０：１−５２５
；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８０）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＨＳ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；およびＣｏｌｉ
ｇａｎら（１９９３年版）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ、ＮＹを参照のこと。

【０１２５】 抗イディオタイプ抗体は、種々の異常な状態に関して診断的であり得るような
、ＩＬ−Ｂ５０に対する抗体の存在を診断するために、類似の用途を有し得る。
例えば、ＩＬ−Ｂ５０の過剰産生は、特に増殖的な細胞状態（例えば、癌または
異常な活性化もしくは分化）において、異常な生理学的状態に関して診断的であ
り得る種々の免疫学的反応の生成を生じ得る。さらに、利用可能な分布パターン
は、サイトカインがランゲルハンス島において発現されるという情報を提供し、
これは、サイトカインがその器官の機能（例えば、糖尿病に関連する医学的状態
）に関与し得るという可能性を示唆する。

【０１２６】 頻繁には、診断的アッセイのための試薬は、アッセイの感度を最適化するよう
にキット内に供給される。本発明について、アッセイの性質に依存して、プロト
コール、および標識、標識されているかまたは標識されていない抗体または結合
パートナーのいずれか、あるいは標識されたＩＬ−Ｂ５０が提供される。これを
、通常、他の添加物（例えば、緩衝液、安定剤、シグナル生成に必要な物質（例
えば、酵素のための基質）など）と組み合わせる。好ましくは、このキットはま
た、適切な使用および使用後の内容物の処分についての使用説明書を備える。代
表的には、このキットは、各々の有用な試薬についての区画を備える。望ましく
は、この試薬は、乾燥した凍結乾燥粉末として提供され、ここで試薬は、水性媒
体中で再構成され得、アッセイを実施するために適切な試薬濃度を提供する。

【０１２７】 多くの上述の薬物スクリーニングおよび診断的アッセイの構成要素は、改変を
伴わずに使用され得るか、または種々の手段で改変され得る。例えば、標識化は
、検出可能なシグナルを直接的または間接的に提供する部分を共有結合または非
共有結合することによって達成され得る。これらのアッセイのいずれにおいても
、結合パートナー、試験化合物、ＩＬ−Ｂ５０、またはそれらに対する抗体は、
直接的または間接的のいずれかで標識され得る。直接的標識化のための可能性と
しては、標識基：放射標識（例えば、¹²⁵Ｉ）、酵素（米国特許第３，６４５，
０９０号）（例えば、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼ）、なら
びに蛍光強度、波長の変化、または蛍光の偏光における変化をモニタリングし得
る蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）が挙げられる。間接的標識化の
ための可能性としては、１つの構成要素のビオチン化、次ぐ上記の標識基のうち
の１つに連結されたアビジンへの結合が挙げられる。

【０１２８】 遊離ＩＬ−Ｂ５０から結合ＩＬ−Ｂ５０を、あるいは遊離試験化合物から結合
化合物を分離する多数の方法もまた存在する。ＩＬ−Ｂ５０は、種々のマトリク
ス上に固定され得、次いで洗浄される。適切なマトリクスとしては、プラスチッ
ク（例えば、ＥＬＩＳＡプレート）、フィルター、およびビーズが挙げられる。
例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９３年版）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１巻、第２節、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ
Ｗｉｌｅｙ、ＮＹを参照のこと。他の適切な分離技術としては、Ｒａｔｔｌｅら
（１９８４）、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０：１４５７−１４６１に記載されるフ
ルオレセイン抗体磁化可能粒子方法、および米国特許第４，６５９，６７８号に
記載のような二重抗体磁気粒子分離が挙げられるが、これらに限定されない。

【０１２９】 種々の標識にタンパク質またはそれらのフラグメントを連結する方法は、文献
に広範に報告されており、本明細書中で詳細に考察する必要はない。多くの技術
は、ペプチド結合を形成するためのカルボジイミドまたは活性エステルの使用、
連結のための活性化ハロゲン（クロロアセチル）または活性化オレフィン（例え
ば、マレイミド）とメルカプト基の反応によるチオエーテルの形成、などのいず
れかを介した活性化カルボキシル基の使用を包含する。融合タンパク質はまた、
これらの適用において用途を見出す。

【０１３０】 本発明の別の診断的局面は、ＩＬ−Ｂ５０の配列から取得されるオリゴヌクレ
オチド配列またはポリヌクレオチド配列の使用に関する。これらの配列は、異常
な状態（例えば、炎症または自己免疫）を有することが疑われる患者由来のサン
プルにおいて、ＩＬ−Ｂ５０メッセージのレベルを検出するためのプローブとし
て使用され得る。サイトカインは、活性化についてのマーカーまたはメディエー
ターであり得るので、例えば、その効果が顕著になり進行する前に予防様式で、
例えば、いつさらなる治療が要求され得るかを決定するために、活性化細胞の数
を決定することが有用であり得る。ＲＮＡおよびＤＮＡの両方のヌクレオチド配
列の調製、配列の標識化、ならびに配列の好ましいサイズは、文献で十分な説明
および考察が受け取られる。例えば、Ｌａｎｇｅｒ−Ｓａｆｅｒら、（１９８２
）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７９：４３８１−４３８５；Ｃａ
ｓｋｅｙ（１９８７）、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３６：９６２−９６７；およびＷｉ
ｌｃｈｅｋら（１９８８）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７１：１−３２を参
照のこと。

【０１３１】 他の分子の定性的または定量的発現についても試験する診断用キットもまた意
図される。診断または予後は、マーカーとして使用される複数の指標の組み合わ
せに依存し得る。従って、キットは、マーカーの組み合わせについて試験し得る
。例えば、Ｖｉａｌｌｅｔら（１９８９）、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒｏｗ
ｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．１：８９−９７を参照のこと。他のキットが、他
の細胞のサブセットを評価するために使用され得る。

【０１３２】 （Ｘ．ＩＬ−Ｂ５０に対するレセプターの単離） 特異的なリガンド−レセプター相互作用についてのリガンドが単離されたので
、このレセプターを単離するための方法が存在する。Ｇｅａｒｉｎｇら（１９８
９）ＥＭＢＯ Ｊ．８：３６６７−３６７６を参照のこと。例えば、そのレセプ
ターへの結合を妨害することなくＩＬ−Ｂ５０サイトカインを標識するための手
段が決定され得る。例えば、親和性標識を、リガンドのアミノ末端またはカルボ
キシル末端のいずれかに融合し得る。このような標識は、ＦＬＡＧエピトープタ
グ、または例えば、ＩｇもしくはＦｃドメインであり得る。発現ライブラリーを
、例えば、セルソーティングまたはこのような結合成分を発現する部分集団を検
出するための他のスクリーニングによって、サイトカインの特異的結合について
スクリーニングし得る。例えば、Ｈｏら（１９９３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１２６７−１１２７１；およびＬｉｕら（
１９９４）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１８２１−２９を参照のこと。ある
いは、パニング方法を使用し得る。例えば、ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ（１９
８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３３６５−３
３６９を参照のこと。

【０１３３】 標識とのタンパク質架橋技術を、ＩＬ−Ｂ５０サイトカインの結合パートナー
を単離するために適用し得る。これは、例えば、リガンド−レセプター様の様式
で、このサイトカインと特異的に相互作用するタンパク質の同定を可能にする。
ＩＬ−Ｂ５０がＩＬ−７Ｒαサブユニットに結合することが予期されるが、これ
はＩＬ−Ｂ５０のβサブユニットであるようである。従って、別のサブユニット
が、ＩＬ−Ｂ５０についてのαレセプターサブユニットとして作用する。

【０１３４】 初期の実験は、予期されるように、既知のＩＬ−７レセプター成分がＩＬ−Ｂ
５０への応答に関与するか否かを決定するために実施されている。これらの機能
的レセプター複合体が、特異的レセプターサブユニットまたは付属レセプターサ
ブユニットのいずれかで、ＩＬ−Ｂ５０レセプター複合体と多くまたはすべての
成分を共有し得ることもまた、かなり可能性がある。

【０１３５】 本発明の多くの改変およびバリエーションが、当業者に明らかなように、本発
明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書中に記載の特定
の実施態様は例示のみの目的で提供され、そして本発明は、添付の特許請求の範
囲の用語によってのみ、そのような特許請求の範囲が権利を与えられる等価物の
完全な範囲に沿って限定されるべきである。

【０１３６】 （実施例） （Ｉ．一般的方法） 多くの以下の標準的方法が、例えば、以下において記載または参照される：

【０１３７】

【表３】 タンパク質精製の方法としては、硫安沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳
動、遠心分離法、結晶化などのような方法が挙げられる。例えば、以下：

【０１３８】

【表４】 ；およびタンパク質精製生成物の使用についての製造業者の文献（例えば、Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、またはＢｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃ
ｈｍｏｎｄ，ＣＡ）を参照のこと。組換え技術との組み合わせは、例えば、プロ
テアーゼで除去可能な配列を介した、適切なセグメント（エピトープタグ）への
（例えば、ＦＬＡＧ配列または融合され得る等価物への）融合を可能にする。例
えば、以下を参照のこと。

【０１３９】

【表５】 標準的な免疫学的技術は、以下に記載されている。

【０１４０】

【表６】 サイトカインアッセイは、例えば、以下に記載されている。

【０１４１】

【表７】 血管の生物学的活性についてのアッセイは、当該分野において周知である。こ
れらは、腫瘍または他の組織における脈管形成活性および脈管静的（ａｎｇｉｏ
ｓｔａｔｉｃ）活性、例えば、動脈平滑筋の増殖（例えば、Ｋｏｙａｍａら、（
１９９６）Ｃｅｌｌ ８７：１０６９−１０７８を参照のこと）、血管上皮への
単球接着（ＭｃＥｖｏｙら（１９９７）、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６
９−２０７７を参照のこと）などを包含する。また、

【０１４２】

【表８】 を参照のこと。

【０１４３】 神経細胞の生物学的活性についてのアッセイは、例えば、以下に記載されてい
る：

【０１４４】

【表９】 発生系の方法論は、例えば、以下に記載されている。

【０１４５】

【表１０】 ＦＡＣＳ分析は、以下に記載されている。

【０１４６】

【表１１】 （ＩＩ．ヒトＩＬ−Ｂ５０のクローニング） この遺伝子の配列を、表１に提供する。この配列は、精巣から作製されたｃＤ
ＮＡライブラリー由来である。この配列は、かなり稀であり、入手可能な配列デ
ータベースにおいて頻繁に見出されない。この配列は、この遺伝子の細胞分布を
決定するための、ＰＣＲプライマーまたはプローブの調製を可能にする。この配
列は、このメッセージをコードするゲノムＤＮＡの単離を可能にする。

【０１４７】 このプローブまたはＰＣＲプライマーを用いて、種々の組織型または細胞型が
、細胞分布を決定するために探査される。ＰＣＲ産物を、例えば、ＴＡクローニ
ングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、クローン化する。得られたｃＤ
ＮＡプラスミドを、自動化シークエンサー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ）で、両方の末端から配列決定する。

【０１４８】 （ＩＩＩ．ＩＬ−Ｂ５０の細胞発現） 霊長類ＩＬ−Ｂ５０をコードするｃＤＮＡに特異的な、適切なプローブまたは
プライマーを調製する。代表的には、例えば、ランダムプライミングによって、
このプローブを標識する。

【０１４９】 サザン分析：霊長類の増幅されたｃＤＮＡライブラリー由来のＤＮＡ（５μｇ
）を、挿入物を放出するために適切な制限酵素を用いて消化し、１％アガロース
ゲルで泳動し、そしてナイロンメンブレン（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓ
ｃｈｕｅｌｌ、Ｋｅｅｎｅ、ＮＨ）に転写した。

【０１５０】 ヒトｍＲＮＡ単離のサンプルとしては、以下が挙げられ得る：休止している、
末梢血単核細胞（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）（Ｔ１００）；プ
ールされ、２時間、６時間、１２時間、抗ＣＤ−３で活性化された、末梢血単核
球細胞（Ｔ１０１）；休止しているＴ細胞であるＴＨ０クローン Ｍｏｔ ７２
（Ｔ１０２）；プールされ、３時間、６時間、１２時間、抗ＣＤ−２８および抗
ＣＤ−３で活性化された、Ｔ細胞であるＴＨ０クローンＭｏｔ ７２（Ｔ１０３
）；プールされ、２時間、７時間、１２時間、特定のペプチドでアネルギー処理
されたＴ細胞である、ＴＨ０クローンＭｏｔ ７２（Ｔ１０４）；プールされ、
３時間、６時間、１２時間、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で活性化されたＴ細胞で
あるＴＨ１クローンＨＹ０６（Ｔ１０８）；プールされ、２時間、６時間、１２
時間、特定のペプチドでアネルギー処理されたＴ細胞であるＴＨ１クローンＨＹ
０６（Ｔ１０９）；休止しているＴ細胞であるＴＨ２クローンＨＹ９３５（Ｔ１
１０）；プールされ、２時間、７時間、１２時間、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で
活性化されたＴ細胞である、ＴＨ２クローンＨＹ９３５（Ｔ１１１）；休止して
いるＴ細胞腫瘍株ＪｕｒｋａｔおよびＨｕｔ７８（Ｔ１１７）；プールされ、休
止している、Ｔ細胞クローンである、ＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ
７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９（Ｔ１１８）；休止してい
る、Ｔ細胞であるランダムなγδＴ細胞クローン（Ｔ１１９）；ＣＤ２８−Ｔ細
胞クローン；休止している、脾臓細胞（Ｂ１００）；抗ＣＤ４０およびＩＬ−４
で活性化された、脾臓細胞（Ｂ１０１）；プールされ、休止している、Ｂ細胞Ｅ
ＢＶ株、ＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１．２２１、ＲＭ３、ＨＳＹ
（Ｂ１０２）；プールされ、１時間、６時間、ＰＭＡおよびイオノマイシンで活
性化されたＢ細胞株ＪＹ（Ｂ１０３）；プールされ、休止している、ＮＫ２０ク
ローン（Ｋ１００）；プールされ、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化
された、ＮＫ２０クローン（Ｋ１０１）；ＩＬ−２処置した、ＬＧＬ白血病患者
の末梢血から誘導されたＮＫＬクローン（Ｋ１０６）；プールされ、１時間、６
時間、ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化された造血前駆細胞株ＴＦ１（Ｃ１
００）；休止している、Ｕ９３７前単球株（Ｍ１００）；プールされ、１時間、
６時間、ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化された、Ｕ９３７前単球株（Ｍ１
０１）；プールされ、１時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間、ＬＰＳ、
ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で活性化された溶出単球（Ｍ１０２）；プールされ、１
時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で
活性化された溶出単球（Ｍ１０３）；プールされ、４時間、１６時間ＬＰＳ、Ｉ
ＦＮγ、抗ＩＬ−１０で活性化された溶出単球（Ｍ１０６）；プールされ、４時
間、１６時間、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で活性化された溶出単球（Ｍ１０
７）；１時間ＬＰＳで活性化された溶出単球（Ｍ１０８）；６時間ＬＰＳで活性
化された、溶出単球（Ｍ１０９）；休止している、ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、
ＴＮＦα １２日目由来のＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋（Ｄ１０１）；１時間、ＰＭ
Ａおよびイオノマイシンで活性化された、ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα
１２日目由来の、ＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋（Ｄ１０２）；６時間、ＰＭＡおよ
びイオノマイシンで活性化された、ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα １２
日目由来の、ＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋（Ｄ１０３）；プールされ、１時間、６時
間、ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化されたＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、Ｔ
ＮＦα １２日目（ＦＡＣＳ分類）由来のＤＣ９５％ ＣＤ１ａ＋（Ｄ１０４）
；プールされ、１時間、６時間、ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化された、
ＤＣ９５％ ＣＤ１４＋１（前の ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα １２
日（ＦＡＣＳ分類）（Ｄ１０５）；プールされ、１時間、６時間、ＰＭＡおよび
イオノマイシンで活性化されたＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日目（
ＦＡＣＳ分類）由来のＤＣ ＣＤ１ａ＋ ＣＤ８６＋（Ｄ１０６）；休止してい
る、単球 ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目、由来のＤＣ（Ｄ１０７）；休止し
ている単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目、由来のＤＣ（Ｄ１０８）；プール
され、４時間、１６時間、ＬＰＳ活性化された、単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４
５日目、由来のＤＣ（Ｄ１０９）；プールされ、４時間、１６時間、単球ＧＭ−
ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日目、活性化ＴＮＦα、単球上清由来のＤＣ（Ｄ１１０）
；未刺激の上皮細胞；ＩＬ−１β活性化上皮細胞；プールされ、１時間、６時間
、ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化された肺繊維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５（Ｃ
１０１）；プールされ、１時間、６時間、ＰＭＡおよびイノマイシンで活性化さ
れた、腎臓上皮癌腫細胞株ＣＨＡ（Ｃ１０２）。

【０１５１】 マウス対応物が、同定され、そしてその分布は同様に評価される。マウスｍＲ
ＮＡ単離のためのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：休止しているマウス
線維芽Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセプターへのＢ
ｒａｆ融合）トランスフェクト細胞、コントロール（Ｃ２０１）；休止している
、脾臓由来Ｍｅ１１４＋ナイーブＴ細胞（Ｔ２０９）；プールされ、６時間、１
２時間、２４時間、ＩＦＮγおよびＩＬ−４に暴露され、ＴＨ１細胞に分極する
ように、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４で刺激された、脾臓由来のＭ
ｅ１１４＋ナイーブＴ細胞（Ｔ２１０）；プールされ、６時間、１３時間、２４
時間、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγに暴露され、Ｔｈ２細胞に分極するように、Ｉ
Ｌ−４および抗ＩＦＮγで刺激された、脾臓由来のＭｅ１１４＋ナイーブＴ細胞
（Ｔ２１１）；ＴＨ１分極されたＴ細胞（ＩＦＮ−γおよび抗ＩＬ−４で、７日
間分極された、脾臓由来の、Ｍａｌ１４明、ＣＤ４＋細胞；Ｔ２００）；ＴＨ２
分極されたＴ細胞（ＩＬ−４および抗ＩＦＮ−γで、７日間分極された、脾臓由
来の、Ｍａｌ１４明、ＣＤ４＋細胞；Ｔ２０１）；トランスジェニックＢａｌｂ
／Ｃから３×（倍）高度にＴＨ１分極されたＴ細胞（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９
９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７〜１３６７を参照のこと；プール
され、２時間、６時間、２４時間、抗ＣＤ３で活性化された；Ｔ２０２）；トラ
ンスジェニックＢａｌｂ／Ｃから３×（倍）高度にＴＨ２分極されたＴ細胞（プ
ールされ、２時間、６時間、２４時間、抗ＣＤ３で活性化された（Ｔ２０３）；
トランスジェニックＣ５７ ｂｌ／６から３×（倍）高度にＴＨ１分極されたＴ
細胞（プールされ、２時間、６時間、２４時間、抗ＣＤ３で活性化された；Ｔ２
１２）；トランスジェニックＣ５７ ｂｌ／６から３×（倍）高度にＴＨ２分極
されたＴ細胞（プールされ、２時間、６時間、２４時間、抗ＣＤ３で活性化され
た；Ｔ２１３）；高度にＴＨ１分極したＴ細胞（ＩＦＮγ、ＩＬ−１２および抗
−ＩＬ−４で３×（倍）分極された、トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来のナ
イーブＣＤ４＋Ｔ細胞；プールされ、ＩＧＩＦ、ＩＬ−１２および抗ＩＬ−４を
用いて６時間、１２時間、２４時間刺激された）；胸腺から分類されたＣＤ４４
−ＣＤ２５＋前Ｔ細胞（Ｔ２０４）；抗原での最終刺激後、３週間休止している
、ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１．１（Ｔ２０５）；１５時間１０μｇ／ｍｌ Ｃ
ｏｎＡ刺激したＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１．１（Ｔ２０６）；抗原での最終刺
激後、３週間休止する、ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（Ｔ２０７）；１５
時間１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡで刺激したＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（
Ｔ２０８）；非刺激Ｂ細胞株ＣＨ１２（Ｂ２０１）；非刺激成熟Ｂ細胞白血病細
胞株Ａ２０（Ｂ２００）；脾臓由来の非刺激ラージＢ細胞（Ｂ２０２）；ＬＰＳ
活性化、総脾臓由来Ｂ細胞（Ｂ２０３）；休止している、脾臓由来のメトリザマ
イド富化樹状細胞（Ｄ２００）；休止している、骨髄由来樹状細胞（Ｄ２０１）
；ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中において培養された、抗Ｂ２２０、抗ＣＤ３、
および抗クラスＩＩで枯渇した、未刺激の骨髄由来樹状細胞（Ｄ２０２）；プー
ルされ、１日、５日間、抗ＣＤ４０で刺激した、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中
において培養された、抗Ｂ２２０、抗ＣＤ３、および抗クラスＩＩで枯渇した、
骨髄由来樹状細胞（Ｄ２０３）；ＬＰＳで４時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ
２６４．７（Ｍ２００）；ＧＭおよびＭ−ＣＳＦで誘導された骨髄マクロファー
ジ（Ｍ２０１）；２４時間、ＬＰＳ、ＩＦＮγ、およびＩＬ−１０で刺激された
、ＧＭ−ＣＳＦで誘導された骨髄マクロファージ（Ｍ２０５）；２４時間ＬＰＳ
、ＩＦＮγおよび抗ＩＬ−１０で刺激した、ＧＭ−ＣＳＦで誘導された骨髄マク
ロファージ（Ｍ２０６）；腹膜マクロファージ（Ｍ２０７）；休止している、マ
クロファージ細胞株Ｊ７７４（Ｍ２０２）；０．５時間、１時間、３時間、６時
間、１２時間でプールした、マクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−
１０（Ｍ２０３）；０．５時間、１時間、３時間、５時間、１２時間でプールさ
れた、マクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１０（Ｍ２０４）；未
刺激肥満細胞株ＭＣ−９およびＭＣＰ−１２（Ｍ２０８）；未刺激の、脳微小血
管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株（Ｅ２００）；ＴＮＦαで一晩刺激した、脳
微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株（Ｅ２０１）；ＴＮＦαで一晩刺激し
た、脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株（Ｅ２０２）；ＴＮＦαおよび
ＩＬ−１０で一晩刺激した、脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株（Ｅ２
０３）；ｗｔ Ｃ５７ ｂｌ／６マウス由来の全大動脈；５ケ月ＡｐｏＥ ＫＯ
マウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；１２ヶ月のＡｐｏＥ ＫＯマウス由来の全
大動脈（Ｘ２０７）；ｗｔ胸腺（Ｏ２１４）；全胸腺、ｒａｇ−１（Ｏ２０８）
；全腎臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０９）；全腎臓、ＮＺ Ｂ／Ｗマウス；および全心
臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０２）。以下の中で高いシグナルを検出した：ＬＰＳで４
時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ ２６４．７（Ｍ２００）；トランスジェニッ
クＣ５７ｂｌ／６から３×（倍）高度にＴＨ１分極したＴ細胞（プールされ、２
時間、６時間、２４時間プールされ、抗ＣＤ３で活性化された；Ｔ２１２）；お
よび高度にＴＨ１分極されたＴ細胞（ＩＦＮγ、ＩＬ−１２および抗ＩＬ−４で
３×（倍）分極したトランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来のナイーブＣＤ４＋Ｔ
細胞；プールされ、６時間、１２時間、２４時間、ＩＧＩＦ、ＩＬ−１２および
抗ＩＬ−４で刺激された）。

【０１５２】 （ＩＶ．ＩＬ−Ｂ５０の染色体マッピング） ＩＬ−Ｂ５０をコードする単離されたｃＤＮＡを用いる。染色体マッピングは
標準的技術である。例えば、ＢＩＯＳ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｎｅｗ Ｈ
ａｖｅｎ，ＣＴ）およびＰＣＲとともにマウス体細胞ハイブリッドパネルを用い
る方法を参照のこと。

【０１５３】 （Ｖ．ＩＬ−Ｂ５０タンパク質の精製） 複数のトランスフェクトされた細胞株を、他の細胞と比較して高いレベルでサ
イトカインを発現する細胞についてスクリーニングする。種々の細胞株を、取り
扱いについて有利な細胞の特性について、スクリーニングし、そして選択する。
天然のＩＬ−Ｂ５０は、天然の供給源から単離され得るか、または適切な発現ベ
クターを用いる形質転換細胞からの発現により得る。より高い有効性の分泌が、
異種のシグナル配列の使用により達成された。発現されたタンパク質の精製は、
標準的手順により達成されるか、または細胞溶解物または上清からの高い効率で
の有効な精製のための操作手段と併用され得る。ＦＬＡＧまたはＨｉｓ₆セグメ
ントは、このような精製特徴のために用いられ得る。あるいは、親和性クロマト
グラフィーは、特定の抗体とともに用いられ得る。以下を参照のこと。

【０１５４】 タンパク質は、所望の場合、ｃｏｌｉ、昆虫細胞、または哺乳動物発現系にお
いて産生される。

【０１５５】 （ＶＩ．相同性ＩＬ−Ｂ５０遺伝子の単離） ＩＬ−Ｂ５０ ｃＤＮＡ、または他の種の対応する配列は、所望の供給源由来
のライブラリー、例えば、霊長類細胞ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングす
るためのハイブリダイゼーションプローブとして用いられ得る。多数の異なる種
が、簡易なハイブリダイゼーションに必要なストリンジェンシーについて、およ
びプローブを用いる存在についての両方のためにスクリーニングされ得る。交差
ハイブリダイゼーションの特異性を示すクローンについて選択するために、適切
なハイブリダイゼーション条件が用いられる。

【０１５６】 ペプチド配列に基づいた縮重プローブを用いるハイブリダイゼーションによる
スクリーニングはまた、適切なクローンの単離を可能にする。あるいは、ＰＣＲ
スクリーニングのために適切なプライマーの使用は、適切な核酸クローンの富化
を生じる。

【０１５７】 類似の方法が、種改変体、多形性改変体、対立遺伝子改変体のいずれかを単離
するために適用可能である。種改変体は、プローブとしての１つの種からの全長
単離体またはフラグメントの単離に基づき、種間ハイブリダイゼーション技術を
用いて単離される。

【０１５８】 あるいは、ヒトＩＬ−Ｂ５０に対して惹起される抗体は、適切な、例えば、ｃ
ＤＮＡライブラリーから交差反応性タンパク質を発現する細胞についてスクリー
ニングするために用いられる。精製したタンパク質または規定されたペプチドは
、上記のように、標準的方法により抗体を生成するために有用である。合成ペプ
チドまたは精製したタンパク質は、免疫系に提示され、モノクローナル抗体また
はポリクローナル抗体を生成する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇ
ｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。得られた抗体を、記載したように、ス
クリーニング、精製、または診断のために用いる。

【０１５９】 （ＶＩＩ．ＩＬ−Ｂ５０に特異的な抗体の調製） 合成ペプチドまたは精製タンパク質は、免疫系に提示され、モノクローナル抗
体またはポリクローナル抗体を生成する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅ
ｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。ポリクローナル血清またはハイ
ブリドーマが調製され得る。適切な状況では、結合試薬は、上記のように（例え
ば、蛍光、またはその他の方法）標識されるか、またはパニング方法のための基
板に固定されるかのいずれかである。免疫選択、吸収、枯渇、および関連技術が
、選択試薬（例えば、結合のための選択性の所望のスペクトルを示す）を調製す
るために利用可能である。

【０１６０】 （ＶＩＩＩ．生物学的機能の大きさの評価） ＩＬ−Ｂ５０の生物学的活性を、部分的には、ＩＬ−Ｂ５０とＩＬ−７との間
の配列および構造の相同性に基づいて試験する。最初に、ＩＬ−７の生物学的活
性を示すアッセイを調べる。

【０１６１】 （Ａ．前駆細胞の増殖／分化への効果） 種々の細胞型の増殖および分化への効果は、種々の濃度のサイトカインで評価
する。特定の場合、関連するサイトカインＩＬ−７および／または幹細胞因子と
組み合わせて、用量応答分析が実行される。

【０１６２】 詳細には、ＩＬ−７は、リンパ球産生の発生および分化に対して強力な効果を
示す。ＩＬ−Ｂ５０が、臍帯血細胞から誘導される初期前駆細胞の増殖または分
化に効果を有するか否かを確認するために臍帯血細胞で試験される。好ましくは
、この細胞は、初期前駆細胞、例えば、幹細胞（例えば、臍帯血、骨髄、胸腺、
脾臓、またはＣＤ３４＋前駆細胞に起源する）である。例えば、Ｅｄｄｉｎｇｔ
ｏｎおよびＬｏｔｚｅ（１９９８）を参照のこと。

【０１６３】 （Ｂ．ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖へのＩＬ−Ｂ５０の効果） 記載のように（Ｂｏｙｕｍら）、フィコール−ハイパークを通して遠心分離に
より、正常な健常ドナーの軟膜から、全ＰＢＭＣを単離する。ＩＬ−Ｂ５０の非
存在下または存在下で、９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ，Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄ
ｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＮＪ）中の、１％ヒトＡＢ血清を含有する、２００μｌのＹ
ｓｓｅｌ’ｓ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｌａｂａｓａ
ｓ，ＣＡ）中でＰＢＭＣを培養する。細胞を、培地単独中で、または１００Ｕ／
ｍｌ ＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と培地の組み合わせ中で、１２０時
間培養する。３Ｈ−チミジン（０．１ｍＣｉ）を、培養の最後の６時間に添加し
、そして液体シンチレーション計数により３Ｈ−チミジンの取り込みを測定する
。

【０１６４】 ネイティブなタンパク質、組換えタンパク質および融合タンパク質を、多数の
他の生物学的アッセイ系において（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ、マクロファ
ージ、樹状細胞、造血前駆細胞、などで）、アゴニスト活性およびアンタゴニス
ト活性について試験する。

【０１６５】 ＩＬ−Ｂ５０を、ＩＬ−７レセプターを発現するトランスフェクトされた細胞
およびコントロールにおいて、アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性につい
て評価する。

【０１６６】 ＩＬ−Ｂ５０を、マクロファージ／樹状細胞活性化および抗原提示アッセイ、
抗原または同種刺激に応答するＴ細胞サイトカインの産生および増殖における効
果について評価する。例えば、ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔら（１９９１）
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１２０９〜１２２０；ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅ
ｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：９１５〜９２４；Ｆｉｏｒ
ｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７、３８１５〜３８２２
；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：３４４４
〜３４５１；およびＧｒｏｕｘら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１
９〜２９を参照のこと。

【０１６７】 ＩＬ−Ｂ５０をまた、ＮＫ細胞刺激に対する効果について評価する。アッセイ
は、例えば、Ｈｓｕら（１９９２）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５
６３〜５６９；およびＳｃｈｗａｒｚら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ
．１６：９５〜１０４に基づき得る。他のアッセイが、細胞傷害性Ｔ細胞および
ＬＡＫ細胞への効果を評価するために適用される。例えば、Ｎａｍｉｅｎおよび
Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ（１９９８）を参照のこと。

【０１６８】 Ｂ細胞の増殖および分化の効果は、例えば、Ｄｅｆｒａｎｃｅら（１９９２）
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：６７１〜６８２；Ｒｏｕｓｓｅｔら（１９９２）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８９０〜１８９３
に記載の方法論により分析される。この方法論には、ＩｇＧ２およびＩｇＡ２ス
イッチ因子アッセイ（ｓｗｉｔｃｈ ｆａｃｔｏｒ ａｓｓａｙ）が挙げられる
。ＣＯＳ７上清と異なり、ＮＩＨ３Ｔ３およびＣＯＰ上清は、ヒトＢ細胞アッセ
イを見かけ上は妨害しないことに留意のこと。

【０１６９】 （Ｃ．ヒト単球上の細胞表面分子の発現への効果） 単球は、正常な健常ドナーの末梢血単核細胞からネガティブ選択により精製さ
れ得る。手短には、３×１０⁸のフィコールの帯状単核細胞を、例えば、２００
μｌのαＣＤ２（Ｌｅｕ−５Ａ）、２００μｌのαＣＤ３（Ｌｅｕ−４）、１０
０μｌのαＣＤ８（Ｌｅｕ２ａ）、１００μｌのαＣＤ１９（Ｌｅｕ−１２）、
１００μｌのαＣＤ２０（Ｌｅｕ−１６）、１００μｌのαＣＤ５６（Ｌｅｕ−
１９）、１００μｌのαＣＤ６７（ＩＯＭ６７；Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｗｅｓ
ｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ）、および抗−グリコホリン抗体（１０Ｆ７ＭＮ、ＡＴＣＣ
、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）からなる、モノクローナル抗体の反応混合液（Ｂ
ｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）ととも
に氷上でインキュベートする。抗体結合細胞を洗浄し、次いで、２０：１のビー
ズ対細胞比で、ヒツジ抗マウスＩｇＧ結合磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ、
Ｎｏｒｗａｙ）とともにインキュベートする。抗体結合細胞を、磁場の適用によ
り単球から分離する。続いて、ヒト単球を、ＩＬ−Ｂ５０、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳ
Ｆ、または組み合わせの非存在下または存在下で、１％ヒトＡＢ血清を含む、Ｙ
ｓｓｅｌ’ｓ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌａｂａｓａ
ｓ、ＣＡ）中で培養する。

【０１７０】 細胞表面分子の発現の分析は、直接的免疫蛍光検査により実行し得る。例えば
、２×１０⁵の精製したヒト単球を、１％ヒト血清を含有する、リン酸緩衝化生
理食塩水（ＰＢＳ）中で、氷上で２０分間インキュベートする。細胞を２００×
ｇでペレット化させる。２０ｍｌのＰＥまたはＦＩＴＣ標識したｍＡｂ中で、細
胞を再懸濁する。氷上でのさらに２０分間のインキュベーション後、細胞を、１
％ヒト血清含有ＰＢＳ中で洗浄し、続いて、ＰＢＳのみで２回洗浄する。細胞を
１％パラホルムアルデヒド含有ＰＢＳ中で固定し、そしてＦＡＣＳｃａｎフロー
サイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉ
ｅｗ、ＣＡ）で分析する。例示的なｍＡｂは、以下を用いる：例えば、ＣＤ１１
ｂ（抗−ｍａｃ１）、ＣＤ１１ｃ（ａ ｇｐ１５０／９５）、ＣＤ１４（Ｌｅｕ
−Ｍ３）、ＣＤ５４（Ｌｅｕ ５４）、ＣＤ８０（抗−ＢＢ１／Ｂ７）、ＨＬＡ
−ＤＲ（Ｌ２４３）（以上、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎから）およびＣ
Ｄ８６（ＦＵＮ １；Ｐｈａｒｍｉｎｏｇｅｎ）、ＣＤ６４（３２．２；Ｍｅｄ
ａｒｅｘ）、ＣＤ４０（ｍＡｂ８９；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｆｒａ
ｎｃｅ）。

【０１７１】 （Ｄ．ヒト単球によるサイトカイン産生へのＩＬ−Ｂ５０の効果） ヒト単球を記載のように単離し、そしてＩＬ−Ｂ５０（１／１００希釈バキュ
ロウイルスが発現した物質）の非存在下または存在下で、１％ヒトＡＢ血清を含
む、Ｙｓｓｅｌ’ｓ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌａｂ
ａｓａｓ、ＣＡ）中で培養する。さらに、単球を、ＩＬ−Ｂ５０の非存在下また
は存在下でＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）で刺激し、そ
してＥＬＩＳＡにより、細胞培養上清中のサイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６
、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１０）の濃度を、決定した。

【０１７２】 サイトカインについての細胞質内染色のために、単球を、ＩＬ−Ｂ５０および
ＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）ならびに１０ｍｇ／ｍｌ
Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）の非存在下、または存在下に、Ｙｓｓｅｌ’ｓ培地中に
て１２時間、培養する（百万／ｍｌ）。細胞をＰＢＳ中で洗浄し、そして２％ホ
ルムアルデヒド／ＰＢＳ溶液中で、２０分間、室温でインキュベートする。続い
て、細胞を洗浄し、透過化緩衝液（ＰＢＳ／ＢＳＡ（０．５％）／Ａｚｉｄｅ（
１ｍＭ）中の０．５％サポニン（Ｓｉｇｍａ））中で再懸濁し、そして室温で２
０分間インキュベートする。細胞（２×１０⁵）を遠心分離し、そして、透過化
緩衝液中で１：１０希釈した、２０ｍｌの直接結合体化した抗サイトカインｍＡ
ｂ中で、２０分間、室温で再懸濁する。以下の抗体が用いられ得る：ＩＬ−１α
−ＰＥ（３６４−３Ｂ３−１４）；ＩＬ−６−ＰＥ（ＭＱ２−１３Ａ５）；ＴＮ
Ｆα−ＰＥ（ＭＡｂ１１）；ＧＭ−ＣＳＦ−ＰＥ（ＢＶＤ２−２１Ｃ１１）；お
よびＩＬ−１２−ＰＥ（Ｃ１１．５．１４；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，ＣＡ）。続いて、細胞を透過化緩衝液中で２回、そしてＰＢＳ／ＢＳ
Ａ／Ａｚｉｄｅ中で１回洗浄し、そしてＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（
Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）で分
析する。

【０１７３】 （ＩＸ．遺伝的に改変した動物の作製および分析） トランスジェニックマウスは、標準的な方法により生成され得る。このような
動物は、特定の組織における、または完全に生物体全体にわたる、遺伝子の欠失
の効果を決定するために有用である。これは、種々の段階における動物または特
定の組織の発生への興味深い洞察を提供し得る。さらに、生物学的ストレスへの
種々の応答への効果を評価し得る。例えば、Ｈｏｇａｎら（１９９５）Ｍａｎｉ
ｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第二版）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

【０１７４】 本明細書において引用される全ての参考文献は、各個々の刊行物または特許出
願が全ての目的においてその全体が参考として援用されるように、詳細に、そし
て個々に示されるのと同じ程度に、本明細書において参考として援用される。

【０１７５】 本発明の多くの改変および変更は、当業者に明白なように、その精神および範
囲から逸脱することなくなされ得る。本明細書において記載される特定の実施態
様は、単に例として提供され、そして、本発明は、上記の特許請求の範囲が権利
を与えられる等価物の全範囲とともに、このような請求項の用語のみにより限定
されるべきである。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/54 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｋ ４Ｃ０８５ 16/28 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/10 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｅ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ， ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，Ｙ Ｕ，ＺＡ (71)出願人 2000 Ｇａｌｌｏｐｉｎｇ Ｈｉｌｌ Ｒ ｏａｄ， Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ， Ｎｅ ｗ Ｊｅｒｓｅｙ 07033−0530， Ｕ． Ｓ．Ａ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA26 HA06 HA14 4B063 QA01 QQ43 QR56 QR62 QS03 QS25 QS34 QX02 QX07 4B064 AG03 CA19 CE12 DA01 4B065 AA93X AA93Y AB06 BD39 CA24 CA44 4C084 AA02 AA06 AA07 AA20 BA01 BA02 BA08 BA18 BA44 DA12 NA14 ZB071 ZB211 4C085 AA13 AA14 BB11 CC03 DD21 DD61 DD62 EE03 4H045 AA11 AA30 BA10 CA40 DA02 DA75 DA86 EA28 FA71 FA74

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２または配列番号４の成熟ポリペプチドの少なくと
   も１７個の連続するアミノ酸を含む抗原性ポリペプチドをコードする、単離され
   たポリヌクレオチドまたは組換えポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 配列番号２または配列番号４の成熟ポリペプチドをコードす
   る、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 配列番号１または配列番号３のコード部分に対して、５５℃
   、５００ｍＭ未満の塩、および５０％ホルムアミドでハイブリダイズする、請求
   項１に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１または配列番号３のコード部分の少なくとも３５
   個の連続するヌクレオチドを含む、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 請求項１に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
6. 【請求項６】 真核生物細胞を含む、請求項５に記載の発現ベクターを含む
   、宿主細胞。
7. 【請求項７】 請求項１に記載の組換えポリヌクレオチドを発現させる工程
   を包含する、抗原性ポリペプチドを作製する方法。
8. 【請求項８】 請求項１に記載のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するため
   の方法であって、該ポリヌクレオチドと、配列番号１または３のコード部分の少
   なくとも２５個の連続するヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリ
   ダイズするプローブとを接触させ、それにより該二重鎖を形成する工程を包含す
   る、方法。
9. 【請求項９】 請求項１に記載のポリヌクレオチドの検出のためのキットで
   あって、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、請求項１に記載
   のポリヌクレオチドの少なくとも１７個の連続するヌクレオチドにハイブリダイ
   ズするポリヌクレオチドを含む、キット。
10. 【請求項１０】 前記プローブが検出可能に標識されている、請求項９に記
    載のキット。
11. 【請求項１１】 配列番号２または配列番号４の少なくとも１７個の連続す
    るアミノ酸に特異的に結合する抗体結合部位を含む、結合化合物。
12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の結合化合物であって、ここで： ａ）前記抗体結合部位が： １）配列番号２もしくは配列番号４のポリペプチドと特異的に免疫反応性で
    あるか； ２）精製されたヒトＩＬ−Ｂ５０タンパク質もしくは組換え産生されたヒト
    ＩＬ−Ｂ５０タンパク質に対して惹起されたか；または ３）モノクローナル抗体、Ｆａｂ、もしくはＦ（ａｂ）２中にあるか；ある
    いは ｂ）該結合化合物が： １）抗体分子であるか； ２）ポリクローナル抗血清であるか； ３）検出可能に標識されているか； ４）無菌性であるか；または ５）緩衝化組成物中にある、 結合化合物。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載の結合化合物を使用する方法であって、
    該結合化合物と、抗原を含む生物学的サンプルとを接触させる工程であって、該
    接触させる工程が結合化合物：抗原の複合体の形成を生じる、工程、を包含する
    方法。
14. 【請求項１４】 前記生物学的サンプルがヒト由来であり、そして前記結合
    化合物が抗体である、請求項１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 検出キットであって、請求項１２に記載の結合化合物、お
    よび： ａ）該検出のための該結合化合物の使用についての使用説明書；または ｂ）該結合化合物の分離を提供する区画、 を含む、検出キット。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載の結合組成物に結合し、そしてさらに配
    列番号２または配列番号４の少なくとも１７個の連続するアミノ酸を含む、実質
    的に純粋な抗原性ポリペプチドまたは単離された抗原性ポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載のポリペプチドであって： ａ）霊長類ＩＬ−Ｂ５０タンパク質に由来する、少なくとも２５個の連続する
    アミノ酸残基の少なくとも１つのフラグメントを含むか； ｂ）可溶性ポリペプチドであるか； ｃ）検出可能に標識されているか； ｄ）無菌性組成物中にあるか； ｅ）緩衝化組成物中にあるか； ｆ）細胞表面レセプターに結合するか； ｇ）組換え産生されるか；または ｈ）天然に存在するポリペプチド配列を有する、 ポリペプチド。
18. 【請求項１８】 配列番号２または配列番号４の少なくとも１７個の連続す
    るアミノ酸を含む、請求項１７に記載のポリペプチド。
19. 【請求項１９】 細胞または組織培養細胞の生理または発達を調節する方法
    であって、該細胞と霊長類ＩＬ−Ｂ５０のアゴニストまたはアンタゴニストとを
    接触させる工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、ここで： ａ）前記接触させる工程が、ＩＬ−７のアゴニストまたはアンタゴニストとの
    組み合せにおいてであるか；あるいは ｂ）該接触させる工程が、アンタゴニストとであり、ＩＬ−Ｂ５０を特異的に
    結合する抗体結合部位を含む結合組成物を含む、 方法。