JP2002519331A - 等張性塩水溶液の使用、同調製方法及び前記溶液をベースとする医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヒト気道において炎症現象を引き起こす原因であるケミカルメディエーターの放出を予防又は制限する治療のための薬剤を得るための、等張性塩水溶液、特に海水から得られたもの、の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、等張性の塩水溶液をベースとする医薬に関する。この医薬は、気道
、特に鼻窩（nasal fossae）及び気管支内のレベル、における炎症現象を引き起
こす原因であるケミカルメディエーターの放出を予防し且つ制限するための治療
を意図される。鼻窩のある疾患の場合、周囲の空気によって運ばれるしばしば刺
激性である物質によって引き起こされる攻撃に対して、その場で防御反応が発生
し、この防御反応が粘液及び膿状粘液である分泌物の蓄積を引き起こす。

【０００２】 前記分泌物は鼻窩の閉塞を引き起こす。

【０００３】

【従来の技術】

等張の海水で鼻窩を洗浄することによってこのタイプの閉塞に対処することが
既に知られている。

【０００４】 その点に関して素晴らしい結果が得られている製品は、PHYSIOMERの商標で市
販されている等張性の海水からなる。

【０００５】 さらに、炎症は気道粘膜のレベルで発生し；これらの炎症は、鼻を通しての呼
吸を不可能にする閉塞現象を順次引き起こす鼻窩の粘膜のレベルでの浮腫、ある
いは、気管支肺炎タイプの病態を引き起こすおそらく気管支粘膜のレベルでの浮
腫を引き起こし得る。

【０００６】 これらの炎症は、吸入される空気によって運ばれるウイルス及び細菌によって
、そしてまた、前記の空気によって運ばれる、大気汚染の原因である、その他の
あらゆる刺激性且つアレルギー性の成分によって、生体、特に気道、が攻撃され
た結果である。

【０００７】 鬱血を緩和し且つ血管収斂作用を有する薬剤の適用によってこのタイプの病態
に対処することが既に知られている。

【０００８】 この点で、コルチコステロイドをベースとする薬剤の使用も既知である。

【０００９】 鬱血緩和剤及びコルチコステロイドによって得られる結果は満足できるもので
あるが、前記薬剤は、時に厄介である副作用を示す。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】

したがって、本発明の主題は、特に、先行技術の欠点を克服すること、及び、
考慮下の病態の治療のために、副作用のない医薬を提供することである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】

そして、ヒト呼吸器の上皮腺細胞（the human epithelial, grandular breath
ing cells）が、例えば１μｇ／ｍｌの濃度で使用される、緑膿菌（P. Aerugino
sa）のリポポリサッカライド、あるいはＬＰＳ、セロタイプ（serotype）１０の
ような、細菌由来の特定の炎症促進剤の作用下で、炎症現象を順次引き起こすイ
ンターロイキン８等のケミカルメディエーターを放出することを知る出願人は、
かなりの調査の後に、等張性塩水、特に等張性海水、の使用によって得られる医
薬を用いることにより、前記目的が達成され得ることを見出したというメリット
を有しており、前記医薬は、細菌由来の物質だけでなく、ウイルス、細菌、及び
、吸入される空気によって運ばれる、他のあらゆる刺激性且つアレルギー性であ
る成分を含む炎症促進剤の影響下において、ヒト気道粘膜の炎症現象を開始させ
る原因である、ケミカルメディエーターの遊離又は解放を予防又は制限するのに
適合した治療のためのものである。

【００１２】 問題となっている前記等張性塩水溶液は： −７．８から８．３のｐＨ −１．００８から１．０１の密度 −１から２重量％の乾燥物質含有量 −３０５から３１５ｍＯｓ／ｋｇの浸透度、及び −その主成分に関する限り、以下の表Ａから得られる化学組成： によって特徴づけられる。

【表２】

【００１３】 結果として、本発明は、ヒト気道粘膜の炎症現象を開始させる原因であるケミ
カルメディエーターの放出又は解放を制限する治療のための医薬を得るための、
特に海水から得られる、等張性塩水溶液の使用にある。

【００１４】

【発明の実施の形態】

上述の等張性塩水溶液の調製は、以下のように進めることができる。

【００１５】 用いられる原材料は、例えば流れが強く移動している領域において５から１０
メーターの深さで採取された海水であり、前記原材料は３２ｇ／ｌよりも高い塩
含量によって特徴づけられる。

【００１６】 前記水は、分析され、デカントされ、それから、 −前記水を等張、すなわちリッター当たり塩化ナトリウム約９グラム当量、にす
るために、電気透析技術を用いてそのナトリウムを取り除かれ、 −濾過され、 −無菌状態で、特にステンレススチール製の容器内に、貯蔵される。

【００１７】 それから、 −無菌性、及び −等張性（生理学的） をチェックするために再び分析される。

【００１８】 それから、好ましくは特別に処理された室内の制御された雰囲気の下で、調整
される。

【００１９】

【実施例】

本発明に基づく研究には、本発明で用いられる等張性塩水が周知の２つの参照
製品、すなわち生理的血清及びＰＢＳバッファー、よりも毒性が少なく、その一
方で、炎症性薬剤の影響下で気道粘膜の炎症現象を開始させる原因であるケミカ
ルメディエーターの放出を防止し且つ制限する能力に関してこれら２つの物質よ
りも優れていることを示す実験が含まれている。

【００２０】 本発明で用いられる等張性塩水、生理的血清及びＰＢＳバッファーのそれぞれ
の毒性は、前記３つの物質の存在下での、ヒト呼吸器細胞、つまり前記呼吸器粘
膜で発生する細胞、の生存能（viability）の比較研究を用いて測定されている
。

【００２１】 この研究を実施するために、ヒト気管支から採取されたヒト呼吸器の腺細胞が
用いられている。

【００２２】 前記の呼吸器上皮細胞が、１２のホールを有する培養プレートに同じ細胞密度
で植え付けられた。

【００２３】 前記細胞は、一方はULTROSER Gの商標で市販されている製品からなる栄養素２
％で、もう一方は細菌汚染を避けるのに十分な量の抗生物質で補充されている、
ＤＭＥＭ／Ｆ１２という名称の培養培地中で４８時間良好に培養され；その結果
、均一な、集密状態の（confluent）単層培養物、すなわち４８時間の培養後に
１ホール当たり３１０，０００細胞、が得られた。

【００２４】 集密状態（confluence）に達したとき、細胞は生理的溶液（ＰＢＳ／Ｃａ²⁺、
ｐＨ７．４）を用いて洗浄され、そして、本発明で用いられる等張性塩水、生理
的血清、ＰＢＳバッファー、及び、参照の役割を果たす、ＤＭＥＭ／Ｆ１２の名
称で知られる培養培地からなる細胞培養培地と一緒に置かれる。

【００２５】 数回のインキュベーション；これは細胞の接触を意味し、すなわち、４時間、
８時間、１６時間、２４時間；の後、上述した４つの培地の存在下で、細胞生存
能が評価されている。

【００２６】 前記細胞生存能は、培養培地ＤＭＥＭ／Ｆ１２内での生育可能な細胞数に対す
る、本発明で用いられる等張性塩水溶液内、生理的血清内及びＰＢＳバッファー
内でのそれぞれのインキュベーション期間の最後における成育可能な細胞のパー
センテージによって決められる。

【００２７】 前記細胞生存能は０．４％溶液の「トリパンブルー（Trypan blue）」と称さ
れる排除試験を用いて評価されており、前記試験に引き続いて、マラセー細胞（
Malassez cell）を用いたナンバリング又は計数が行われる。

【００２８】 前期試験によって、トリプシンを用いる培養支持体から細胞が除去され；生存
している細胞がトリパンブルーの０．４％水性溶液中で計数され；実際、トリパ
ンブルーは生存細胞内に浸透しない細胞染料であり；成育可能でない細胞にのみ
トリパンブルーの浸透が可能である。

【００２９】 培養培地ＤＭＥＭ／Ｆ１２内での生存細胞数は、定義によって１００であると
みなされており、他の培地内での細胞の生存能は、その培養培地に対するパーセ
ンテージの方法によって決定することができる。

【００３０】 研究結果は、より長い時間のインキュベーション、すなわち２４時間までの接
触の間、本発明で用いられる等張性塩水溶液がより良好な細胞生存能を保証する
ことを示す。

【００３１】 記録された細胞生存能のパーセンテージ、すなわち５８％、は生理的血清につ
いて記録されたもの、すなわち４８％、よりも高く、また、ＰＢＳバッファーに
ついて記録されたものよりもかなり高いものであり；後者のパーセンテージはゼ
ロに等しく、ＰＢＳバッファー内での細胞生存能のパーセンテージは結果的には
ゼロである。

【００３２】 以下の表Ｂでは、４、８、１６及び２４時間のインキュベーション時間に対し
、上記実験と関連して記録される細胞生存能のパーセンテージがまとめられてい
る。

【表３】

【００３３】 表Ｂに記録されたデータから、前記等張性塩水溶液が生理的血清及びＰＢＳバ
ッファーよりも明らかに毒性が低いことが、はっきりと現れている。

【００３４】 炎症促進剤の影響下でヒト気道粘膜の炎症現象を開始させる原因となるケミカ
ルメディエーターの遊離又は放出を予防又は制限するために本発明で用いられる
等張性塩水溶液の能力を示すために、それに対応する細胞培養物が、炎症促進剤
による刺激の後に、本発明で用いられる等張性塩水溶液中でインキュベートされ
る。

【００３５】 出願人によって行われた実験は、ヒト気管支粘膜下の分泌性腺細胞の培養物で
実施された。

【００３６】 それに関連して、前記細胞は培養培地、例えば２％のULTROSER G培地で補充さ
れたRPMI1640培養培地、で培養され、それから、その培養培地は、９０％集密状
態（confluence）に達した後、そして、１μｇ／ｍｌの濃度で使用される、緑膿
菌（P. Aeruginosa）のリポポリサッカライド、あるいはＬＰＳ、セロタイプ１
０、からなる炎症促進剤の導入後に、回収される。

【００３７】 上述のように処理された細胞を洗浄した後、それらは； −対照培地の役割を果たす、同じRPMI1640培養培地内、 −生理的血清（参照としての、０．９％ＮａＣｌ溶液）内、 −本発明で用いられる等張性塩水溶液内 において、再びインキュベートされる。

【００３８】 ＬＰＳからなる炎症促進剤存在下での、上皮腺細胞（glandular epithelial c
ells）による、炎症現象を開始させる原因となる、インターロイキン−８からな
るケミカルメディエーターの生成は、上述した３つの培地の上澄み内での１時間
の接触期間の後、滴定方法ＥＬＩＳＡ（商標MEDGENIX DIAGNOSTIC, Belgiumで市
販されている滴定キットを使用）によって評価される。

【００３９】 上記３つの培地に関して記録された結果は、インターロイキン−８の生成が： −RPMI1640培地の場合は１時間当たり１２１ｐｇ／ｍｌ、 −生理的血清の場合は１時間当たり６５ｐｇ／ｍｌ、 −本発明の等張性塩水溶液の場合は４８ｐｇ／ｍｌ であることを示しており、これは、気道粘膜の炎症現象を開始させる原因である
ケミカルメディエーターの、炎症促進剤存在下における遊離又は放出を予防又は
制限する能力の観点から見て、最後の１つが優れていることを示している。

【００４０】 これらの結果は、呼吸器表面上皮の細胞系列（呼吸器系列（respiratory line
）１６−ＨＢＥ）の培養物で実施された実験によって確認されている。

【００４１】 実施において、本発明の等張性塩水溶液は、エアロゾル又は噴霧剤の形で、あ
るいは、ドロップの形態での点滴注入によって、投与される（すなわち患者に与
えられる）。

【００４２】 この医薬は、鼻咽頭及び肺の疾患を生じるヒト気道粘膜の炎症現象を開始させ
る原因であるケミカルメディエーターの遊離又は放出を制限する治療を意図した
ものである。

【００４３】 本発明で用いられる等張性塩水溶液は、ヒトの気道、特に鼻窩及び気管支のレ
ベルでの粘膜に作用する局所作用のために、鼻（nasal）又は頬面窩洞の（bucca
l）エアロゾルの形態で存在することができる。

【００４４】 通常の薬量は、患者の状態及び年齢に応じた、口からの吸入の方法によって１
日当たり２から３回繰り返される、互いに約３０秒隔てた２回の噴霧（puff）で
あってよい。

【００４５】 鼻吸入の場合、患者の状態及び年齢に応じて１日当たり３から４回、通常１又
は２回の噴霧がそれぞれの外鼻孔に投与される。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年７月２５日（２０００．７．２５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【表１】 によって特徴づけられる等張性にされた海水の、請求項１記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 29/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ジャッキー・ジャクォット フランス・Ｆ−51100・ラムス・リュ・ド ゥ・マグヌー・31 (72)発明者 エディス・プシェル フランス・Ｆ−51100・ラムス・リュ・ニ コラ・エンリオット・21 Ｆターム(参考） 4C076 AA12 BB21 BB25 CC10 CC15 CC29 DD21 FF14 4C086 AA01 AA02 HA02 HA24 MA01 MA04 MA17 MA56 MA59 NA14 ZA59 ZC02 4C087 AA01 AA05 BA06 MA01 MA17 MA56 MA59 NA14 ZA59 ZC02

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 細菌由来の物質、ウイルス、細菌、及び、その他の、吸入さ
   れる空気によって運ばれるあらゆる炎症性及びアレルギー性の成分を含む炎症促
   進剤の影響下において、ヒト気道粘膜の炎症現象を開始させる原因であるケミカ
   ルメディエーターの遊離又は放出を、予防及び制限するための治療を意図される
   医薬を得るための、等張性塩水溶液、特に海水から得られる等張性塩水溶液、の
   使用。
2. 【請求項２】 ヒト気道、特に鼻窩及び気管支のレベル、の粘膜の炎症現象
   を開始させる原因であるケミカルメディエーターの放出を、予防及び制限するた
   めの治療を意図される、等張性塩水溶液をベースとする医薬。
3. 【請求項３】 −７．８から８．３のｐＨ −１．００８から１．０１の密度 −１から２重量％の乾燥物質含有量 −３０５から３１５ｍＯｓ／ｋｇの浸透度、及び −その主成分に関する限り、以下の表Ａから得られる化学組成： 【表１】 によって特徴づけられる等張性塩水溶液の、請求項１記載の使用。
4. 【請求項４】 連続的に、 −３２ｇ／ｌよりも高い塩含量を有する海水が、流れの強い海流の領域において
   ５から１０メーターの深さで採取され、 −この水が、分析され、デカントされ、 −この水が、等張に達するまで、すなわちリッター当たり塩化ナトリウム約９グ
   ラム当量になるまで、電気透析技術を用いてそのナトリウムを取り除かれ、 −濾過され、 −得られた製品がステンレススチール容器の中に無菌状態で貯蔵される という事実によって特徴づけられる、請求項１及び３記載の等張性塩水の調製方
   法。