JP2002518101A - ヒアルロン酸誘導体を含んでいる三次元人工器官及びそれらの調製工程 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 三次元人工器官が、本質的に繊維質又は多孔質構造を有しており且つヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っている人体部分の形状で記述され、前記三次元基質の少なくとも二つを含む前記人工器官では、該三次元基質の第一が第二及び可能なそれ以上の基質を包含する又はこれに接着されており、前記三次元基質は必要に応じて二次元的に孔のあいた基質を包含する及び／又は接着されており且つヒアルロン酸誘導体を含有している。この人工器官は、人体又は動物体の部分の再形成に使用される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明は、三次元人工器官とそれらの調製工程を記述する。

【０００２】 本発明の三次元人工器官は、単独で又は薬学的又は生物学的な活性物質と共同
して使用することが出来る、そしてそれ自体として使用でき又は細胞培養のため
の足場として作用できる。前記三次元人工器官は、人体又は動物体の部位の再形
成のため、外科又は神経外科に有用である。

【０００３】 （背景技術） 移植を目的とした人工器官は、通常、合成物質又は天然の、処理された物質で
作られる。

【０００４】 外傷の程度のせいで自己組織による回復が不可能な腹壁のような体壁の損傷は
、例えば合成網目により治療される。

【０００５】 実際、外傷を受けた腹壁を補強又は回復させる人工器官に通常使用される物質
は、タンタルガーゼ、ステンレス鋼の網目、ポリプロピレンの薄織物、微孔性ｅ
−ＰＴＦＥ、ポリガラクチン９１０、ポリエステル、ポリグリコール酸、架橋さ
れた牛の心膜である。

【０００６】 然し、合成重合体又は金属から作られた心臓血管又は骨の人工器官のような代
用の人工器官を移植することにより損傷した組織又は損なわれた器官の満足のゆ
く回復を得る日付を推定することは不可能であった。

【０００７】 事実、これらのタイプの人工器官は、宿主に炎症性反応を誘発する傾向があり
、これらは希に容易に周囲の微小環境と結合するし、これらは繊維組織形成の原
因となり又これらは機械的な摩滅や裂け目を受けがちであり、それで定期検診を
必要とする。

【０００８】 一つの代るべき方法は、自己の組織又は器官、又はより屡々同種又は異種のそ
れでさえ移植することである。この解決法は、免疫性反応、感染及び提供者の死
のような様々な欠点を持っている。

【０００９】 最近、組織工学として知られる新しい生体医学的診療が基盤を得てきた。この
手法により、生体のそれらに類似の組織が小さな生検により細胞を取り出して、
生分解性足場上でそれらを培養して増殖しそれらを拡張して得ることができる。
例えば、皮膚、軟骨及び骨のような組織は、試験管内で創出されそこで患者に移
植される（ＥＰ０４６２４２６，ＷＯ９７／１８８４２）。

【００１０】 再形成技術の改良研究が進行中の他の組織は、耳、鼻、乳首、唇及び胸のよう
な人体の見える部分又は付属物のそれである。

【００１１】 大きさ、形又は位置の何れの非対称も即座に目立つ、耳の解剖学的位置と連係
した難しさのせいで耳介を再形成し、日付を決めることは特に難しいことが判っ
てきた。その上、皮膚で覆われた不規則な形状の軟骨の複雑な形態を再生させる
ことは困難である。

【００１２】 外傷の重症度に従って、様々な技術が耳の再形成に用いられている。

【００１３】 耳のほんの一部が切断された場合、同じ耳の一部又は周りの組織が損傷した部
分を再形成するのに使用される、又は肋間軟骨の部分が患部に移植されて近辺の
皮膚の細片で覆われる、そうして移植は血管を新生することが出来る。

【００１４】 耳介が殆ど完全に切断された時には、合成耳介人工器官が使用できる。然し、
これらは毎日の介護の必要性、人工器官と直接接触するせいと患部でそれらを固
定するのに必要とされる強力接着剤のせいの両方による周囲の皮膚の損傷のよう
な、数多くの不利な点を有する。然し、或種の人工器官は、直接骨の中に移植さ
れる。

【００１５】 もう一つの再形成法は、増量剤により未だ利用可能な組織の量を増やすことよ
り成る。

【００１６】 最後に、数ヶ月の治療後にだけ許容できる結果を与える、数段階に分けて別々
の時に行われる非常に複雑な外科的技術が時々使用される。

【００１７】 略言すると、この技術は患者から肋間軟骨の一部を取り出してそれを外耳に似
た形に形成することより成る。軟骨は、通常、最初それに血管が新生するために
前腕又は背中の皮下に移植され、再調のために数回切除される。

【００１８】 移植組織が十分な成熟段階に達した時、それは耳の患部に移植されて近辺の皮
膚の細片で覆われる。

【００１９】 最後に、患者は移植組織の美容性を改良するために更なる手術を受けねばなら
ない。

【００２０】 患者にそうした多くの色々な手術を行わねばならない欠点に加えて、この技術
は、そのより少ない弾性のような耳のそれとは違った特性を持つ肋間軟骨の使用
を含んでいる。

【００２１】 不幸にも、これらの人工器官は屡々効果が無くて汎發性壊死及び移植不全の点
まで退化する、又はより希には、軟骨が骨の組織に変換し得る（石灰化）。

【００２２】 それ故、斯かる人工器官用の理想的物質は、化学的に不活性で、非発癌性、機
械的ストレスに耐えることが出来て且つ望みの形態に形成でき、滅菌可能、組織
液による物理的変異を起しにくいものであり、これらは炎症性、免疫学的、アレ
ルギー又は過敏症反応を誘発してはならない又これらは内臓の癒着を促してはな
らない（Ｊｅｎｋｉｎｓ Ｓ．Ｄ． ほか、Ｓｕｒｇｅｒｙ９４（２）；３９２
−３９８，１９８３）。

【００２３】 （発明の開示） 本発明は、本質的に繊維質又は多孔質構造を有しており且つ少なくとも一つの
ヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っている人
体部分の形状をとる三次元人工器官を記述し、前記三次元基質の少なくとも二つ
を含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び可能なそれ以上の
基質を包含する又はこれに接着されており、前記三次元基質が必要に応じて二次
元的に孔のあいた基質を包含する及び／又は接着されており且つヒアルロン酸誘
導体を含有している上記三次元人工器官。

【００２４】 前記三次元人工器官は、更に、自己又は内生の成熟又は間葉細胞、又は間葉と
成熟細胞型の別の型との複合システムからなる群より選ばれた細胞より成ってい
る。

【００２５】 （発明を実施するための最良の形態） 好ましい実施例に従って、本発明の人工器官は： Ａ１．本質的に繊維質構造を有している三次元基質、 Ａ２．本質的に多孔質構造を有している三次元基質、 Ａ３．二次元的に孔のあいた基質、 からなる群より選ばれた基質（Ａ）より成っており、前記基質（Ａ）が： Ｂ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ３）である場合に本質的に多孔質構造を有してい
る三次元基質、 Ｃ．（Ａ）が（Ａ２）又は（Ａ３）である場合に本質的に繊維質構造を有してい
る三次元基質、 Ｄ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ２）である場合に二次元的に孔のあいた基質、 からなる群より選ばれた基質を包含している及び／又は接着されていて、前記基
質（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）は少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体より
成っている。

【００２６】 本発明に従う三次元人工器官の調製に使用されるヒアルロン酸誘導体のうち、
次のものは選択範囲の一つである： カルボキシ機能基の一部又は全部が脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式、
複素環式系列のアルコール類（ＥＰ０２１６４５３Ｂ１参照によって完全に取込
まれている）と、特にベンジルアルコールと、エステル化されたヒアルロン酸の
エステル類； カルボキシ基の一部又は全部が同じ多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基（ＥＰ
０３４１７４５Ｂ１参照によって完全に取込まれている）とエステル化されたヒ
アルロン酸の架橋エステル； カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、
芳香族、アリール脂肪族、脂環式、複素環式系列のポリアルコール類とエステル
化されたヒアルロン酸の架橋化合物（ＥＰ０２６５１１６Ｂ１参照によって完全
に取込まれている）； ヒアルロン酸と又はヒアルロン酸の部分的又は全エステルと琥珀酸のヘミエステ
ル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩（ＷＯ９６／３５７２０７参照によって
完全に取込まれている）； Ｏ−硫酸処理した誘導体（ＷＯ９５／２５７５１参照によって完全に取込まれて
いる）又はＮ−硫酸処理した誘導体（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３参照によっ
て完全に取込まれている）； ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン
酸、ヒアルロン酸及び必要に応じて部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルか
らなる群より選ばれたヒアルロン酸誘導体の、テトラブチルアンモニウム及びフ
ェニルトリメチルアンモニウムとの塩のような、第４級アンモニウム塩。

【００２７】 本発明に従う人工器官に含まれる本質的に繊維質構造を有している基質（Ａ１
）と（Ｃ）は、不織薄布の形態又は網目の形態であるのが好ましい。

【００２８】 ヒアルロン酸誘導体を含んでいる不織薄布は、我々がここで完全に参照に取り
入れている米国特許ＵＳ５５２０９１６に記されているように調製される。

【００２９】 斯かる人工器官はどんなに複雑であっても、どんな形にも容易に作られる利点
を持つ、そして更に使用されるヒアルロン酸誘導体の化学構造に従って且つエス
テル化の程度に従って、再形成されるべき領域の必要条件に従って調整できる引
張り強度と劣化時間を所有する利点を持つ。

【００３０】 前記人工器官は、天然、半合成及び合成重合体の結合を含んでもよい。

【００３１】 使用できる天然重合体は、例えば、コラーゲン、コラーゲンとグリコサミノグ
リカンの共沈殿物、セルロース、キチンのようなゲル形態の多糖類、キトサン、
ペクチン又はペクチン酸、寒天、アガロース、キサンタン、ゲラン、アルギン酸
又はアルギン酸塩、ポリマンナン又はポリグリカン、澱粉、天然ゴムである。

【００３２】 半合成重合体は、例えば、アルデヒド類又は同じくそれらの前駆体のような薬
剤と架橋したコラーゲン、ジカルボン酸又はそれらのハロゲン化物、ジアミン類
、セルロースの誘導体、ヒアルロン酸、キチン、キトサン、ゲラン、キサンタン
、ペクチン又はペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース、
天然ゴム、グリコサミノグリカンからなる群より選ぶことが出来る。

【００３３】 最後に、使用できる合成重合体の例は、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸
又は同共重合体又はそれらの誘導体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリ
スルホン酸樹脂、ポリウレタン、ＰＴＦＥである。

【００３４】 本発明に従う人工器官は、ヒアルロン酸誘導体により構成されているので、そ
れらはそれらの表面上で組織の再生と細胞の成長を刺激することが出来る。

【００３５】 実に、前記人工器官は損傷を受けた又は外傷に伴って損失した又は先天性欠陥
の結果としての人体又は動物体の部位の再形成のための細胞培養用そのもの又は
足場として使用できる。

【００３６】 前者の場合、内生細胞は生体内で人工器官に転移増殖する、一方後者の場合自
己細胞は組織移植の前に人工器官の上で培養される。

【００３７】 それは又望まれる細胞株の中で分化させられ得る成熟又は間葉細胞を培養する
ことも可能である；様々な細胞型の複雑システムも培養できる。

【００３８】 本発明に従う人工器官は、抗炎症剤、抗生物質、成長因子、抗有糸分裂剤、抗
菌剤及び抗ウイルス剤のような、薬学的又は生物学的活性物質を含んでもよい。

【００３９】 単独で又は細胞培養を含んでいる前記製品は、一般、内科、耳鼻咽喉科、形成
、美容、腫瘍学、整形外科、心臓血管、婦人科及び腹部外科と神経外科で使用で
きる。

【００４０】 人工器官によって再形成できる人体の部位は、例えば、耳介、鼻、鼻中隔、咽
頭、喉頭、気管、指関節のような関節、顎関節、骨格構造及び、更に、眼窩、心
臓弁、血管、乳頭、臍、内臓とそれらの部分及び二次生殖器官である。

【００４１】 耳介のような複雑な形態を持つ人体部位の再形成の場合には、製品は以下の必
要条件に合致せねばならない： それは再形成されるべき部分と同じ解剖学的形状であって、且つ患者用に正確な
サイズであらねばならない； それは細胞が人工器官の形態にそれら自身で適合しながら増殖できる表面を持た
ねばならない； それらは生分解性であって且つ同時に足場の構造はそれが形成されるべき新組織
を取得するまでの間は同じに留まることを保証せねばならない。

【００４２】 体液又は細胞培養溶液に接触した時に急速に分解しないで且つ上記必要条件に
合致する、少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体により構成される複雑な形態を
持つ工業的レベルの人工器官を生産するためには、ヒアルロン酸誘導体の分子間
の化学物理的相互作用を確立することにより、従って人工器官が望みの形にしっ
かりと定着する、革新的作業工程を案出することが必要であった。

【００４３】 特に、基質ＡがＡ１であって且つ前記基質が基質Ｂを包含する時、本発明の工
程は以下の段階より成る： −ａ）ヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布の層で型を内張りする、 −ｂ）前記型の中の不織薄布にヒアルロン酸又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸
又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸のようなヒアルロン酸誘導体の第４級アンモ
ニウム塩、琥珀酸及び必要に応じてそれらの重金属塩とヒアルロン酸とのヘミエ
ステルの水溶液を含浸させる、 −ｃ）例えば、ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩又はヒアルロン酸の
フェニルトリメチルアンモニウム塩、又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸又はＮ
−硫酸処理したヒアルロン酸のようなヒアルロン酸誘導体のアンモニウム塩、琥
珀酸及び必要に応じてそれらの重金属塩とヒアルロン酸とのヘミエステルより成
っている基質Ｂを包含している基質Ａ１を有している人工器官を得るために型の
中身を凍結乾燥させる、 −ｄ）段階（ｃ）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を脂肪族、芳香
族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアルロン酸の
部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖鎖又
は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、
カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、
芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステ
ル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステルと
琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理され
た又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれたヒ
アルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、 −ｅ）（ｃ）から出来た製品を必要に応じて凍結乾燥させる；

【００４４】 基質ＡがＡ２又は前述の工程の上に規定された段階ｃ又はｄから得られた製品
であって且つ基質Ｃに接着される時、工程は以下の段階より成る： −ａ’）ヒアルロン酸又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸（ＷＯ９５／２５７５
１）又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３）、琥
珀酸及び必要に応じてその重金属塩とヒアルロン酸のヘミエステル（ＷＯ９６／
３５７２０７）から選ばれた誘導体の第４級アンモニウム塩の水溶液の薄い層を
同一か又は異なる凍結乾燥した第４級アンモニウム塩に塗布する、 −ｂ’）段階（ａ’）から出来た混合物にヒアルロン酸誘導体より成っている不
織薄布の層を接着する、 −ｃ’）基質ＡがＡ２であって且つ基質Ｃに接着しているヒアルロン酸又はＯ−
硫酸処理したヒアルロン酸（ＷＯ９５／２５７５１）又はＮ−硫酸処理したヒア
ルロン酸（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３）のような未だエステル化されてない
それの誘導体、琥珀酸及び必要に応じてにその重金属塩とヒアルロン酸のヘミエ
ステル（ＷＯ９６／３５７２０７）の第４級アンモニウム塩のようなアンモニウ
ムから成る人工器官を得るために段階（ｂ’）から出来た混合物を凍結乾燥させ
る、 −ｄ’）段階（ｃ’）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を脂肪族、
芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアルロン
酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖
鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステ
ル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪
族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエ
ステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステ
ルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理
された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれ
たヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、 −ｅ’）（ｄ’）から出来た製品を必要に応じて凍結乾燥させる；

【００４５】 また、基質ＡがＡ２又は最初の工程から来ている上記に規定された段階ｃ又は
ｄから得られた製品であって且つ基質Ｃに接着される時、工程は以下の段階より
成る： −ａ”）適当な水又はＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）のような有機溶媒中の
ヒアルロン酸誘導体の溶液の薄い層を塗布する、前記ヒアルロン酸誘導体は脂肪
族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコールとヒアルロ
ン酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多
糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エス
テル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂
肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類と
エステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エス
テルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処
理された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ば
れている、 −ｂ”）段階（ａ”）から出来た凍結乾燥された製品にヒアルロン酸誘導体より
成っている不織薄布を貼り付ける、 −ｃ”）段階（ｂ”）から出来た製品を凍結乾燥させる。

【００４６】 本発明に従う人工器官がヒアルロン酸誘導体より成っている少なくとも一つの
多孔性基質を含む場合には、工程は以下の段階より成る： ａ”’）再形成されるべき人体部位の形状を有している型の中にヒアルロン酸の
又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｎ−硫酸処理したヒアルロン酸、及び琥珀
酸と必要に応じてその重金属塩とヒアルロン酸のヘミエステルから選ばれた誘導
体の第４級アンモニウム塩の水溶液を注入する、 ｂ”’）型の中の水溶液を凍結乾燥させる、 ｃ”’）凍結乾燥した製品を型から分離して凍結乾燥したアンモニウム塩を脂肪
族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアル
ロン酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる
多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エ
ステル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している
脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類
とエステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エ
ステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸
処理された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選
ばれた少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体に変換する、 ｄ”’）型の中の前述の段階から出来た製品を凍結乾燥させる。

【００４７】 （発明を実施するための最良の形態） 実施例１ ヒアルロン酸のフェニルトリメチルアンモニウム塩の調製法 ６９グラムのヒアルロン酸ナトリウムが４ｌの水に溶解させられて予めテトラ
ブチルアンモニウム中にドウェックス樹脂（Ｄｏｗｅｘ Ｒｅｓｉｎ）Ｍ１５を
充たしたカラムを通過させられる。これは凍結乾燥させられ、その後１００ｇの
ヒアルロン酸テトラブチルアンモニウム塩が得られる。

【００４８】 １５０グラムのヒアルロン酸テトラブチルアンモニウム塩（ＨＡＴＢＡ）と２
２５ｇの塩化フェニルトリメチルアンモニウムが、２ｌの水と３ｌのアセトンに
より構成された混合液（４０／６０混合液）に溶解させられる。

【００４９】 １５リットルのアセトンが添加され、そしてヒアルロン酸フェニルトリメチル
アンモニウム塩の沈殿物が得られる。

【００５０】 沈殿物はアセトンで数回洗浄されて、約３５℃の温度で７２時間乾燥させられ
る（収量：１２５ｇ）。

【００５１】 実施例２ ヒアルロン酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成され
た耳介の再形成用人工器官の調製法 中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失わ
れた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構
築される。

【００５２】 型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡ
ＦＦ１１の層で内張りされる。

【００５３】 不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でフェニルトリメチルアンモニウムとのヒ
アルロン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられ
る。

【００５４】 登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、フェニルトリメチルアンモニウム
とヒアルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外さ
れて不均質相中のエステル化反応に曝される。

【００５５】 素材は、中間製品のグラム当たりアセトン０．３リットルの中に入れられ、そ
こに４グラムの臭化テトラブチルアンモニウムと３ｍｌの臭化ベンジルが添加さ
れる。混合液は、１２時間沸点に保たれる。

【００５６】 製品は、１：１の比率のエタノールと水及び３％の塩化ナトリウムを含んでい
る溶液で繰返し洗浄され、その後、水で洗浄される。

【００５７】 最後に、製品は型の中に戻されて凍結乾燥させられる。

【００５８】 実施例３ ヒアルロン酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成され
た耳介の再形成用人工器官の調製法 中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失わ
れた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構
築される。

【００５９】 型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡ
ＦＦ１１の層で内張りされる。

【００６０】 不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとのヒアルロ
ン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。

【００６１】 登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、テトラブチルアンモニウムとヒア
ルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不
均質相中のエステル化反応に曝される。

【００６２】 素材は、中間製品のグラム当たりアセトン０．０６リットルの中に入れられ、
そこに４．２グラムの臭化テトラブチルアンモニウムと１．４ｍｌの臭化ベンジ
ルが添加される。

【００６３】 混合液は、１２時間沸点に保たれる。

【００６４】 製品は、１：１の比率のエタノールと水及び３％の塩化ナトリウムを含んでい
る溶液で繰返し洗浄され、その後、水で洗浄される。

【００６５】 最後に、製品は型の中に戻されて凍結乾燥させられる。

【００６６】 実施例４ ヒアルロン酸の全ドデシルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成され
た耳介の再形成用人工器官の調製法 中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失わ
れた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構
築される。

【００６７】 型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡ
ＦＦ１１の層で内張りされる。

【００６８】 不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとのヒアルロ
ン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。

【００６９】 登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、テトラブチルアンモニウムとヒア
ルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不
均質相中のエステル化反応に曝される。

【００７０】 素材は、中間製品のグラム当たりアセトン０．０６リットルの中に入れられそ
こに４．２グラムの臭化テトラブチルアンモニウムと１．４ｍｌの臭化ドデシル
が添加される。

【００７１】 混合液は、１２時間沸点に保たれる。

【００７２】 製品は１：１の比率のエタノールと水及び３％の塩化ナトリウムを含んでいる
溶液で繰返し洗浄され、その後、水で洗浄される。

【００７３】 最後に、製品は型の中に戻されて凍結乾燥させられる。

【００７４】 実施例５ 不織布の形で自己架橋ヒアルロン酸に包含されたヒアルロン酸の全ベンジルエス
テル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された耳介の再形成用人工器官の調
製法 中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失わ
れた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構
築される。

【００７５】 型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡ
ＦＦ１１の層で内張りされる。

【００７６】 不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとのヒアルロ
ン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。

【００７７】 登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、テトラブチルアンモニウムとヒア
ルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不
均質相中のエステル化反応に曝される。

【００７８】 素材は、中間製品の１０グラム当たりアセトン１．５リットルの中に入れられ
、そこに７０グラムの分子篩と１０ｇの２−クロロ−１−メチル沃化ピリジニウ
ムが添加される。

【００７９】 混合液は、８時間沸点に保たれる。

【００８０】 製品は、最初アセトンでそれから３％の塩化ナトリウムを含んでいる水溶液で
洗浄され、そして最後に水で洗浄される。

【００８１】 実施例６ その表面に接着された不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）を持つヒアルロン
酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された三次元人
工器官の調製法 方法１ エステル化の前の製品に不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）の接着 約７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとヒアルロン酸の水溶液
の薄い層が、テトラブチルアンモニウム又はフェニルトリメチルアンモニウムと
ヒアルロン酸により構成され凍結乾燥された製品の表面上に塗布され、そうして
不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）が当てられる。製品は型の中に戻され、
−４０℃の温度に止められて凍結乾燥される。そこで製品は前述の諸例のように
、エステル化反応に曝される。

【００８２】 方法１Ａ 方法１で述べたのと同じ成分で同じ方法が不織布の層を添加せずに
繰返される。

【００８３】 方法２ エステル化した製品に不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）の接着 約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の登録商標
ＨＹＡＦＦ１１の溶液の薄い層が、登録商標ＨＹＡＦＦ１１により構成された製
品の表面に塗布され、その後、不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）が当てら
れる。そこで製品は、少なくとも３０分間エチルアルコールに浸される。そうし
てそれはエタノールで繰返し、それから水で洗浄される。製品は、型に置かれて
凍結乾燥させられる。

【００８４】 耳介人工器官上での細胞培養 鼻の軟骨の生検が標準の手順で行われる。

【００８５】 軟骨の検体は、５％の炭酸ガスと共に３７℃で１５分間培養され、０．２５％
のトリプシンと０．０２％のＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）による酵素消
化によって、続いて０．１％コラゲナーゼの溶液での第二期酵素消化によって分
解される。

【００８６】 検体は攪拌されて約１６時間３７℃で培養される。

【００８７】 続いて、残った組織のどんなかけらも遠心分離によって分離させられて上澄み
液は取除かれる。

【００８８】 酵素反応は、１０％の牛の胎児の血清（ＦＢＳ）で又は１０％ＦＢＳで強化し
たダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）の最小不可欠培養基（ＤＭＥＭ）で強化した
培養基の添加によって中断される。

【００８９】 近似的に１×１０⁶／ｃｍ²の細胞が成長因子を含んでいる培養基に再懸濁され
、そして直径１００ｍｍの培養皿中の生体用材料の上に播種される。

【００９０】 ３７℃で３時間の培養後、成長因子を含んでいる１０ｍｌの培養基が添加され
る。培養は、保温されて新鮮な培養基が播種後４８時間、そしてそれから４８−
７２時間毎に添加される。

【００９１】 ここまで述べてきた本発明において、これらの方法が様々な方法で修正できる
ことは明らかである。前記修正は本発明の趣旨や目的との相異と見なされるべき
ではなく、本分野の専門家には明があろうどんな修正も本発明の請求項の範囲に
収まる。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年７月１３日（２０００．７．１３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項２６

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４３】 特に、基質ＡがＡ１であって且つ前記基質が基質Ｂを包含する時、本発明の工
程は以下の段階より成る： −ａ）ヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布の層で型を内張りする、 −ｂ）前記型の中の不織薄布にヒアルロン酸又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸
又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸のようなヒアルロン酸誘導体の第４級アンモ
ニウム塩、琥珀酸及び必要に応じてそれらの重金属塩とヒアルロン酸とのヘミエ
ステルの水溶液を含浸させる、 −ｃ）例えば、ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩又はヒアルロン酸の
フェニルトリメチルアンモニウム塩、又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸又はＮ
−硫酸処理したヒアルロン酸のようなヒアルロン酸誘導体のアンモニウム塩、琥
珀酸及び必要に応じてそれらの重金属塩とヒアルロン酸とのヘミエステルより成
っている基質Ｂを包含している基質Ａ１を有している人工器官を得るために型の
中身を凍結乾燥させる、 −ｄ）段階（ｃ）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を脂肪族、芳香
族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアルロン酸の
部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖鎖又
は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、
カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、
芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステ
ル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステルと
琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理され
た又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれたヒ
アルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、 −ｅ）（ｄ）から出来た製品を必要に応じて凍結乾燥させる；

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 カッレガロ・ランフランコ イタリア国、36013 シエネ、ヴィア モ ンテ グラッパ ６ Ｆターム(参考） 4B065 AA90X BC42 BC46 CA44 4C081 AA14 AB05 AB11 AB12 AB13 AB15 AB17 AB18 AB36 AB37 AB38 AC03 BA13 CA132 CA152 CA172 CA182 CA212 CA282 CC05 CD012 CD022 CD042 CD052 CD081 CD082 CD092 CD122 CD34 CE01 CE02 DA01 DA05 DA06 DB03 DC12 EA02 EA03

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 本質的に繊維質又は多孔質構造を有しており且つ少なくとも
   一つのヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成って
   いる人体部分の形状をとる三次元人工器官において、前記三次元基質の少なくと
   も二つを含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び可能なそれ
   以上の基質を包含する及び／又はこれに接着されており、前記三次元基質が必要
   に応じて二次元的に孔のあいた基質を包含する及び／又は接着されており且つヒ
   アルロン酸誘導体を含有している、上記三次元人工器官。
2. 【請求項２】 Ａ１．本質的に繊維質構造を有している三次元基質、 Ａ２．本質的に多孔質構造を有している三次元基質、 Ａ３．二次元的に孔のあいた基質、 からなる群より選ばれた基質（Ａ）より成っており、前記基質（Ａ）が： Ｂ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ３）である場合に本質的に多孔質構造を有してい
   る三次元基質、 Ｃ．（Ａ）が（Ａ２）又は（Ａ３）である場合に本質的に繊維質構造を有してい
   る三次元基質、 Ｄ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ２）である場合に二次元的に孔のあいた基質、 からなる群より選ばれた基質を包含するか又は接着されていて、前記基質（Ａ）
   、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）が少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体より成ってい
   る、請求項１に記載の三次元人工器官。
3. 【請求項３】 更に、自己又は内生の成熟又は間葉細胞、又は間葉と成熟細
   胞型とは別の型との複合システムからなる群より選ばれた細胞より成っている、
   請求項１−２に記載の三次元人工器官。
4. 【請求項４】 更に、天然、半合成及び合成重合体より成っている、請求項
   １−３の何れかに記載の三次元人工器官。
5. 【請求項５】 天然重合体が、コラーゲン、コラーゲンとグリコサミノグリ
   カンの共沈殿物、セルロース、キチンのようなゲル形態の多糖類、キトサン、ペ
   クチン又はペクチン酸、寒天、アガロース、キサンタン、ゲラン、アルギン酸又
   はアルギン酸塩、ポリマンナン又はポリグリカン、澱粉、天然ゴムからなる群よ
   り選ばれる、請求項４に記載の三次元人工器官。
6. 【請求項６】 半合成重合体が、アルデヒド類又は同じくそれらの前駆体の
   ような薬剤と架橋したコラーゲン、ジカルボン酸又はそれらのハロゲン化物、ジ
   アミン類、セルロースの誘導体、ヒアルロン酸、キチン又はキトサン、ゲラン、
   キサンタン、ペクチン又はペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、ア
   ガロース、天然ゴム及びグリコサミノグリカンからなる群より選ばれる、請求項
   ４に記載の三次元人工器官。
7. 【請求項７】 合成重合体が、ポリ乳酸、ポリグリコール酸又は同共重合体
   又はそれらの誘導体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリスルホン酸樹脂
   、ポリウレタン、ＰＴＦＥからなる群より選ばれる、請求項４に記載の三次元人
   工器官。
8. 【請求項８】 前記基質（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）及び（Ｄ）の少なくとも一
   つが少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体より成っている、請求項１−７の何れ
   か一つに記載の三次元人工器官。
9. 【請求項９】 前記基質Ａ１とＣが網目又は不織薄布からなる群より選ばれ
   る、請求項２に記載の三次元人工器官。
10. 【請求項１０】 基質（Ａ２）と（Ｂ）が凍結乾燥工程により得られる、請
    求項１−９の何れかに記載の三次元人工器官。
11. 【請求項１１】 前記二次元的に孔のあいた基質が連続構造を有している二
    次元膜を穿孔することにより得られる、請求項１に記載の三次元人工器官。
12. 【請求項１２】 前記ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ機能基の一部又は
    全部が脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール
    類とエステル化されたヒアルロン酸のエステル類からなる群より選ばれる、請求
    項１−１１の何れかに記載の三次元人工器官。
13. 【請求項１３】 前記ヒアルロン酸エステルがベンジルエステルである、請
    求項１２に記載の三次元人工器官。
14. 【請求項１４】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部又は全部が同
    じ又は異なった多糖鎖又はその他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒ
    アルロン酸の架橋エステルからなる群より選ばれる、請求項１−１１の何れかに
    記載の三次元人工器官。
15. 【請求項１５】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部又は全部がス
    ペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式
    又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋化
    合物からなる群より選ばれる、請求項１−１１の何れかに記載の三次元人工器官
    。
16. 【請求項１６】 ヒアルロン酸誘導体が、ヒアルロン酸の一部又は全エステ
    ルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩からなる群より
    選ばれる、請求項１−１１の何れかに記載の三次元人工器官。
17. 【請求項１７】 ヒアルロン酸誘導体が、Ｏ−硫酸処理又はＮ−硫酸処理し
    た誘導体の部分的又は全エステルからなる群より選ばれる、請求項１−１１の何
    れかに記載の三次元人工器官。
18. 【請求項１８】 ヒアルロン酸誘導体が、ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理し
    たヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン酸、ヒアルロン酸及び必要に応じ
    て部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルからなる群より選ばれたヒアルロン
    酸誘導体の第４級アンモニウム塩である、請求項１−１１の何れかに記載の三次
    元人工器官。
19. 【請求項１９】 薬学的又は生物学的な活性物質と関連する請求項１−１８
    の何れかに記載の三次元人工器官。
20. 【請求項２０】 薬学的又は生物学的な活性物質が、抗炎症剤、抗生物質、
    成長因子、抗有糸分裂剤、抗菌剤、抗ウイルス剤からなる群より選ばれる、請求
    項１９に記載の三次元人工器官。
21. 【請求項２１】 人体又は動物体の部位の再形成のための請求項１−２０の
    何れかに記載の三次元人工器官。
22. 【請求項２２】 人体の部位が、耳介、鼻、鼻中隔、咽頭、喉頭、気管、関
    節、骨格構造、眼窩、心臓弁、血管、乳頭、臍、内臓とそれらの部分、二次生殖
    器官である請求項２１に記載の三次元人工器官。
23. 【請求項２３】 前記人体の部位が耳介である、請求項２１−２２に記載の
    三次元人工器官。
24. 【請求項２４】 前記人体の部位が指骨関節又は顎関節である、請求項２１
    −２２に記載の三次元人工器官。
25. 【請求項２５】 一般、内科、耳鼻咽喉科、形成、美容、腫瘍学、整形外科
    、心臓血管、婦人科及び腹部外科と神経外科で使用する請求項１−２４の何れか
    に記載の三次元人工器官。
26. 【請求項２６】 基質ＡがＡ１であって且つ前記基質が基質Ｂを包含してい
    て、以下の段階： −ａ）型をヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布で内張りする、 −ｂ）型の中の前記不織薄布にヒアルロン酸の第４級アンモニウム塩又は請求項
    １８で規定されたようなヒアルロン酸誘導体の水溶液を含浸させる、 −ｃ）それにより請求項１８で規定されたようなアンモニウム塩より成っている
    基質Ｂを包含した基質Ａ１を有している人工器官を得るのに型の中身を凍結乾燥
    させる、 −ｄ）段階（ｃ）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を請求項１２−
    １７で規定されたものから選ばれたヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換する
    、 −ｅ）（ｃ）から出来た製品を凍結乾燥させる、 より成っている、請求項２に記載の三次元人工器官を調製する工程。
27. 【請求項２７】 基質ＡがＡ２であるか又はそれが請求項２６に記載の工程
    の段階（ｃ）又は（ｄ）の製品であって且つ基質Ｃに接着されており、以下の段
    階： −ａ’）請求項１８で規定されたのと同一か又は異なった凍結乾燥された第４級
    アンモニウム塩に請求項１８で規定されたような第４級アンモニウム塩の水溶液
    の薄層を塗布する、 −ｂ’）段階（ａ’）から出来た混合物にヒアルロン酸誘導体より成っている不
    織薄布の層を接着する、 −ｃ’）それにより基質ＡがＡ２であって且つ基質Ｃを接着している請求項１８
    で規定されたようなアンモニウム塩より成る人工器官を得るのに段階（ｂ’）か
    ら出来た混合物を凍結乾燥する、 −ｄ’）段階（ｃ’）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を請求項１
    ２−１７で規定されたものから選ばれたヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換
    する、 −ｅ’）（ｄ’）から出来た製品を凍結乾燥させる、 より成っている、請求項２に記載の三次元人工器官を調製する工程。
28. 【請求項２８】 基質ＡがＡ２であるか又はそれが請求項２６に記載の工程
    の段階（ｃ）又は（ｄ）の製品であって且つ基質Ｃに接着されており、以下の段
    階： −ａ”）請求項１２−１７で規定されたものから選ばれている前記ヒアルロン酸
    誘導体に、適当な水性又は有機溶媒中のヒアルロン酸誘導体の溶液の薄層を塗布
    する、 −ｂ”）段階（ａ”）から出来た凍結乾燥した製品にヒアルロン酸誘導体より成
    っている不織薄布を当てる、 −ｃ”）（ｂ”）から出来た製品を凍結乾燥させる、 より成っている、請求項２に記載の三次元人工器官を調製する工程。
29. 【請求項２９】 ヒアルロン酸誘導体より成っている少なくとも一つの多孔
    質基質を含んでいて、以下の段階： ａ”’）再生されるべき人体部位の形状を有している型の中に請求項１８で規定
    されたような第４級アンモニウム塩の水溶液を注入する、 ｂ”’）型の中の水溶液を凍結乾燥させる、 ｃ”’）型から凍結乾燥した製品を分離して凍結乾燥したアンモニウム塩を請求
    項１２−１７で規定したようなものから選ばれた少なくとも一つのヒアルロン酸
    誘導体に変換する。 ｄ”’）型の中で前述の段階から出来た製品を凍結乾燥させる、 より成っている、請求項１に記載の三次元人工器官を調製する工程。