JP2002516293A - ニコチン免疫原 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、式（ａ）［式中、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H 10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - であり、但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、そしてＺが-CO-である場合、Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2) n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - であり、そしてＹが-(CH2)k - である場合、Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、Ｚは-CO-である。］で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質化合物及びニコチン免疫原に関する。この化合物は好ましくは薬学的調合物の形で薬剤として使用することができる。さらに、本発明は、害の減少を達成するためにタバコ製品によるニコチン依存症を予防及び( 又は) 治療する免疫学的処置法に関する。
Description
【０００１】 本発明は、ニコチン免疫原、５−又は６−ニコチニル−リンカー蛋白質及びこ
れを薬剤として使用する方法及び５−又は６−ニコチニル−リンカー蛋白質を含
有する薬学的調合物、及び害の減少（harm reduction) を達成するためにタバコ
製品によるニコン依存症を予防及び( 又は) 治療する免疫学的処置法に関する。
れを薬剤として使用する方法及び５−又は６−ニコチニル−リンカー蛋白質を含
有する薬学的調合物、及び害の減少（harm reduction) を達成するためにタバコ
製品によるニコン依存症を予防及び( 又は) 治療する免疫学的処置法に関する。
【０００２】 発明の背景 タバコ依存から免れたい、世界中の膨大な数のタバコ使用者／喫煙者のために
、彼らが彼らの目標に到達するのを助けるか又は少なくとも害の減少をもたらす
のを助ける製品に多大な需要がある。
、彼らが彼らの目標に到達するのを助けるか又は少なくとも害の減少をもたらす
のを助ける製品に多大な需要がある。
【０００３】 １つの研究は、投与された／吸い込まれたニコチンに強く結合し、ニコチンの
作用を遮断する抗体を、ニコチンが中枢神経系に到達する前に個体（individual
) において誘発することができるワクチン／免疫原を開発することである。この
考えは、個体がニコチン投与／喫煙の期待される刺激効果を体験することができ
なければ、タバコ製品を投与する興味、たとえばかぎタバコをかぐ（moist snuf
f)、又は紙巻タバコに火をつける興味がなくなる（消失／阻止）であろうことに
ある。
作用を遮断する抗体を、ニコチンが中枢神経系に到達する前に個体（individual
) において誘発することができるワクチン／免疫原を開発することである。この
考えは、個体がニコチン投与／喫煙の期待される刺激効果を体験することができ
なければ、タバコ製品を投与する興味、たとえばかぎタバコをかぐ（moist snuf
f)、又は紙巻タバコに火をつける興味がなくなる（消失／阻止）であろうことに
ある。
【０００４】 相補的な研究は、投与された／吸い込まれたニコチンに穏やかに又は弱く結合
し、中枢神経系でニコチンの作用を増加／延長させる抗体を個体において誘発す
ることができる免疫原を開発することにある。この考えは、個体が延長された期
間、ニコチン投与／喫煙の期待される刺激効果を体験するならば、タバコ製品を
あらためて投与する興味、たとえばかぎタバコをかぐ、又は紙巻タバコに火をつ
ける興味が後に延ばされるであろうし、そしてタバコ製品が消費されることによ
る医学的重要性が減少するであろうことにある。
し、中枢神経系でニコチンの作用を増加／延長させる抗体を個体において誘発す
ることができる免疫原を開発することにある。この考えは、個体が延長された期
間、ニコチン投与／喫煙の期待される刺激効果を体験するならば、タバコ製品を
あらためて投与する興味、たとえばかぎタバコをかぐ、又は紙巻タバコに火をつ
ける興味が後に延ばされるであろうし、そしてタバコ製品が消費されることによ
る医学的重要性が減少するであろうことにある。
【０００５】 上記の２つの研究では、害の減少を導く免疫応答を個体において誘発する免疫
原が使用される。
原が使用される。
【０００６】 先行技術において、ニコチンに対する抗体を用いる免疫検定法を開示する文献
があるが、このような抗体はその医学用途に関して何ら示唆されていなかった（
たとえばＣａｓｔｒｏＡ．及びＭｏｎｊｉＮ．，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．Ｐａｔｈ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８６，５１，３９３−４０４参照）。
があるが、このような抗体はその医学用途に関して何ら示唆されていなかった（
たとえばＣａｓｔｒｏＡ．及びＭｏｎｊｉＮ．，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．Ｐａｔｈ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８６，５１，３９３−４０４参照）。
【０００７】 ニコチン依存症をワクチンで治療する考えは、新しいものではない。というの
は依存を引き起こすであろう薬品に対するワクチンの製造が先行技術に開示され
ていたからである（たとえばモルフィンによって例示された欧州特許（ＥＰ−Ｂ
１）第０４９６８３９号明細書及びコカインによって例示された国際特許出願公
開（ＷＯ）第９６／３００４９号公報参照）。
は依存を引き起こすであろう薬品に対するワクチンの製造が先行技術に開示され
ていたからである（たとえばモルフィンによって例示された欧州特許（ＥＰ−Ｂ
１）第０４９６８３９号明細書及びコカインによって例示された国際特許出願公
開（ＷＯ）第９６／３００４９号公報参照）。
【０００８】 ニコチン分布を変えるための能動免疫化を開示する文献が、最近出版された（
Ｈｉｅｄａ Ｙ．等、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．及びＥｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１
９９７，２８３，１０７６−１０８１）。実験で使用された免疫原は巻き貝（ke
yhole limpet) ヘモシアニンに結合された（±）−６−（カルボキシメチル−ウ
レイド）−ニコチンである。
Ｈｉｅｄａ Ｙ．等、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．及びＥｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１
９９７，２８３，１０７６−１０８１）。実験で使用された免疫原は巻き貝（ke
yhole limpet) ヘモシアニンに結合された（±）−６−（カルボキシメチル−ウ
レイド）−ニコチンである。
【０００９】 最近、国際特許出願（ＷＯ）第９８／１４２１６号が公開された（１９９８年
９月４日）。この特許出願はニコチン分子を主体とする多数のハプテン−キャリ
ヤー結合体（conjugate)を請求し、そして化合物の通常の構造特徴は、ハプテン
分子のすべてが末端カルボン酸基────これはその後キャリヤーに結合される
────を含有するものであると考えられる。推定されるドラッグ乱用の治療に
関する生体内試験は開示されていなかった。
９月４日）。この特許出願はニコチン分子を主体とする多数のハプテン−キャリ
ヤー結合体（conjugate)を請求し、そして化合物の通常の構造特徴は、ハプテン
分子のすべてが末端カルボン酸基────これはその後キャリヤーに結合される
────を含有するものであると考えられる。推定されるドラッグ乱用の治療に
関する生体内試験は開示されていなかった。
【００１０】 発明の説明 本発明は、式
【００１１】
【化４】
【００１２】 ［式中、 Ｚが-NH-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、 そしてＺが-CO-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 そしてＹが-(CH2)k -(式中、ｋ＝０〜２０）である場合、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｚは-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質を含有する
ニコチン免疫原に関する。
ニコチン免疫原に関する。
【００１３】 本発明の好ましい実施態様において、５−又は６−ニコチニル−リンカー- キ
ャリヤー蛋白質はｋ＝１〜８、ｍ＝０〜３、そしてｎ＝０〜３の化合物から選ば
れる。
ャリヤー蛋白質はｋ＝１〜８、ｍ＝０〜３、そしてｎ＝０〜３の化合物から選ば
れる。
【００１４】 ５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質の別の名称は、５−（
１−メチル−２−ピロリジニル）−２−又は３−ピリジニル−リンカー- キャリ
ヤー蛋白質及び５−（Ｎ−メチル−２−ピロリジニル）−２−又は３−ピリジニ
ル−リンカー- キャリヤー蛋白質である。
１−メチル−２−ピロリジニル）−２−又は３−ピリジニル−リンカー- キャリ
ヤー蛋白質及び５−（Ｎ−メチル−２−ピロリジニル）−２−又は３−ピリジニ
ル−リンカー- キャリヤー蛋白質である。
【００１５】 本発明の５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質のキャリヤー
蛋白質は、ヒトにおける抗体を誘発するのに適するハプテンに結合した、薬学的
に容認された蛋白質から選択することができ、そしてこのキャリヤー蛋白質はた
とえば巻き貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイ
ド、非毒性突然変異ジフテリアトキソイドＣＲＭ197 、髄膜炎菌からの外膜蛋白
複合体（ＯＭＰＣ）、熱に不安定な大腸菌（Escherichia coli) のＢサブユニッ
ト及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa) （ｒＥＰＡ）からの組換えエキソプロ
テインより成る群から選ばれる。
蛋白質は、ヒトにおける抗体を誘発するのに適するハプテンに結合した、薬学的
に容認された蛋白質から選択することができ、そしてこのキャリヤー蛋白質はた
とえば巻き貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイ
ド、非毒性突然変異ジフテリアトキソイドＣＲＭ197 、髄膜炎菌からの外膜蛋白
複合体（ＯＭＰＣ）、熱に不安定な大腸菌（Escherichia coli) のＢサブユニッ
ト及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa) （ｒＥＰＡ）からの組換えエキソプロ
テインより成る群から選ばれる。
【００１６】 さらに本発明は、式
【００１７】
【化５】
【００１８】 ［式中、 Ｚが-NH-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、 そしてＺが-CO-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 そしてＹが-(CH2)k -(式中、ｋ＝０〜２０）である場合、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｚは-CO-である。］ で表わされる５- 又は６- ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質に関する。
【００１９】 また本発明のこの観点において、キャリヤー蛋白質はたとえば巻き貝ヘモシア
ニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、非毒性突然変異ジ
フテリアトキソイドＣＲＭ197 、髄膜炎菌からの外膜蛋白複合体（ＯＭＰＣ）、
熱に不安定な大腸菌（Escherichia coli) のＢサブユニット及び緑膿菌（Pseudo
monas aeruginosa) （ｒＥＰＡ）からの組換えエキソプロテインより成る群から
選ばれてよい。
ニン（ＫＬＨ）、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、非毒性突然変異ジ
フテリアトキソイドＣＲＭ197 、髄膜炎菌からの外膜蛋白複合体（ＯＭＰＣ）、
熱に不安定な大腸菌（Escherichia coli) のＢサブユニット及び緑膿菌（Pseudo
monas aeruginosa) （ｒＥＰＡ）からの組換えエキソプロテインより成る群から
選ばれてよい。
【００２０】 さらに、本発明は薬剤、たとえばワクチン中の免疫成分として使用するための
新規５- 又は６- ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質に関する。
新規５- 又は６- ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質に関する。
【００２１】 本発明の上記式の化合物から除かれる１つの化合物は、ＣａｓｔｒｏＡ．及び
ＭｏｎｊｉＮ．（上記文献）によってすでに開示されている。すなわちキャリヤ
ー蛋白質が牛血清アルブミンであり、リンカーが−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ2 ）5 −
ＮＨ−である６- ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質である。しかしこの
化合物の医学用途は示唆されなかった。
ＭｏｎｊｉＮ．（上記文献）によってすでに開示されている。すなわちキャリヤ
ー蛋白質が牛血清アルブミンであり、リンカーが−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ2 ）5 −
ＮＨ−である６- ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質である。しかしこの
化合物の医学用途は示唆されなかった。
【００２２】 更に、本発明は５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質及び薬
学的に容認された賦形剤を含有する薬学的調合物に関する。
学的に容認された賦形剤を含有する薬学的調合物に関する。
【００２３】 本発明の免疫原性化合物の投与に必要とされる薬学的調合物中の賦形剤は、公
知の薬学的に容認された賦形剤、たとえば生理食塩水又はその他の適当な賦形剤
、たとえば欧州又は米国薬局方に記載されたものから選ぶことができる。 更に、本発明の薬学的調合物はアジュバントを含有していてよく、当然のことな
がらこのアジュバントはヒトに使用することが薬学的に容認されていなければな
らず、たとえばリン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウムである。 さらに、本発明は、個体への害の減少を達成するためにタバコ製品によるニコチ
ン依存症を予防及び( 又は) 治療する免疫学的処置法において、式
知の薬学的に容認された賦形剤、たとえば生理食塩水又はその他の適当な賦形剤
、たとえば欧州又は米国薬局方に記載されたものから選ぶことができる。 更に、本発明の薬学的調合物はアジュバントを含有していてよく、当然のことな
がらこのアジュバントはヒトに使用することが薬学的に容認されていなければな
らず、たとえばリン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウムである。 さらに、本発明は、個体への害の減少を達成するためにタバコ製品によるニコチ
ン依存症を予防及び( 又は) 治療する免疫学的処置法において、式
【００２４】
【化６】
【００２５】 ［式中、 Ｚが-NH-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、 そしてＺが-CO-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 そしてＹが-(CH2)k -(式中、ｋ＝０〜２０）である場合、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｚは-CO-である。］ で表わされる５- 又は６- ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質をニコチン
分子に結合する抗体を誘発する抗体誘発量で上記個体に投与することを特徴とす
る、上記免疫学的処置法に関する。
分子に結合する抗体を誘発する抗体誘発量で上記個体に投与することを特徴とす
る、上記免疫学的処置法に関する。
【００２６】 特定の個体に関して、抗体を誘発する量は試行錯誤試験での刺激効果の主観的
体験によって経験的に見出されるか又は製造業者又は医者によって示唆されるで
あろう。
体験によって経験的に見出されるか又は製造業者又は医者によって示唆されるで
あろう。
【００２７】 本発明のこの観点の好ましい実施態様において、上記個体においてニコチン分
子に結合する抗体の力価を増加させるために、投与を時折繰り返す。
子に結合する抗体の力価を増加させるために、投与を時折繰り返す。
【００２８】 その他の哺乳類が治療されねばならない場合、たとえ本発明が機能したとして
も、この個体はヒトであるのが好ましい。当然のことながら、これは実験動物を
試験目的で使用する場合が例となるであろう。
も、この個体はヒトであるのが好ましい。当然のことながら、これは実験動物を
試験目的で使用する場合が例となるであろう。
【００２９】 本発明は、次の図面の説明、化合物及び免疫原の合成及び本発明の特定の実施
態様を表わす実験を参照することによって一層明らかになるであろう。しかし請
求項に定義された本発明の範囲はこれらによって限定されない。
態様を表わす実験を参照することによって一層明らかになるであろう。しかし請
求項に定義された本発明の範囲はこれらによって限定されない。
【００３０】 図面の簡単な説明 図１：ＧＫ５−ＫＬＨで最初のボーラス免疫処置(bolus immunization)して７
日又は９日後に集められた免疫ラットからの血清でＥｌｉｚａ測定。
日又は９日後に集められた免疫ラットからの血清でＥｌｉｚａ測定。
【００３１】 図２：ＧＫ５−ＫＬＨでブースター（追加抗原）免疫処置(booster immunizat
ion)して１−４日後に集められた免疫ラットからの血清でＥｌｉｚａ測定。
ion)して１−４日後に集められた免疫ラットからの血清でＥｌｉｚａ測定。
【００３２】 図３：免疫ラットからの血清のＥｌｉｚａ力価測定。ＧＫ６０−ＫＬＨで免疫
されたラットからの特異抗体の力価は１：４０００である。その他の免疫原を用
いる免疫は同様な結果を生じる。
されたラットからの特異抗体の力価は１：４０００である。その他の免疫原を用
いる免疫は同様な結果を生じる。
【００３３】 図４：競合Ｅｌｉｚａ。プロトコル２を用いて免疫処置された免疫原ＧＫ８４
−ＫＬＨは、ニコチン及びノルニコチンに対して、その他の使用される競合物に
対するよりも約１００倍特異的である抗体を生じる。
−ＫＬＨは、ニコチン及びノルニコチンに対して、その他の使用される競合物に
対するよりも約１００倍特異的である抗体を生じる。
【００３４】 図５：コントロールラットにおいて、ＶＴＡＤＡニューロンからの電気生理学
的単個細胞記録。ＤＡ細胞は、ニコチン投与後の放電率(firing rate) 及びバー
スト放電(burst firing)の増加をもって応答した。
的単個細胞記録。ＤＡ細胞は、ニコチン投与後の放電率(firing rate) 及びバー
スト放電(burst firing)の増加をもって応答した。
【００３５】 図６：免疫ラットにおいて、ＶＴＡＤＡニューロンからの電気生理学的単個細
胞記録。ＤＡ細胞は、免疫化後ニコチンの活性化効果にあまり敏感性を生じない
。
胞記録。ＤＡ細胞は、免疫化後ニコチンの活性化効果にあまり敏感性を生じない
。
【００３６】 図７ａ：免疫原ＧＫ８４−ＫＬＨを用いる能動免疫は、コントロールに比べて
中隔側坐核中でニコチン誘発されたドパミン放出をほとんど完全に抑制する。
中隔側坐核中でニコチン誘発されたドパミン放出をほとんど完全に抑制する。
【００３７】 図７ｂ：免疫原ＧＫ８０−ＫＬＨを用いる能動免疫は、コントロールに比べて
ニコチン投与後に中隔側坐核中でドパミン流出の著しい増加を生じる。
ニコチン投与後に中隔側坐核中でドパミン流出の著しい増加を生じる。
【００３８】 図７ｃ：ニコチン誘発されたドパミン産出での免疫原ＹＨ６−ＫＬＨを用いる
免疫効果は３週間以上安定である。* p=0.05; **p=0.01; *** p=0.001 。
免疫効果は３週間以上安定である。* p=0.05; **p=0.01; *** p=0.001 。
【００３９】 化合物及び免疫原の合成の説明 ニコチン免疫原を反応式１にしたがって３段階で製造する： Ｉ．（Ｓ）−ニコチンから６−アミノニコチン（１）の製造、 ＩＩ．種々のニコチンリンカー分子の製造、 ＩＩＩ．種々のニコチン免疫原（ニコチン- リンカー- キャリヤー蛋白質）の製
造。 ３段階の詳細な実施は、以下の通りである。 Ｉ．６−アミノニコチン（１）の製造。
造。 ３段階の詳細な実施は、以下の通りである。 Ｉ．６−アミノニコチン（１）の製造。
【００４０】 Tschitschibabin 及びKirssanow Chem.Ber. 1924,57B, 1163-1168 によって報
告された方法にしたがって（Ｓ）−ニコチンから６−アミノニコチン（１）を合
成する。 ＩＩ．種々のニコチンリンカー分子の製造（反応式２−８）。
告された方法にしたがって（Ｓ）−ニコチンから６−アミノニコチン（１）を合
成する。 ＩＩ．種々のニコチンリンカー分子の製造（反応式２−８）。
【００４１】 ６−又は５−アミノニコチンをリンカーとしてのアミン誘導体でカップリング
する一般的方法（反応式２−３）：Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ
、３．０当量）を、ＣＨ2 Ｃｌ2 （１−２ｍｌ／ｍｍｏｌ）中に６−アミノニコ
チン（１．０当量）、アミノ保護されたアミノ酸［７−（ｔ．−ブチルオキシカ
ルボニルアミノ）−ヘプタン酸又はトランス−４−（ベンジル−オキシカルボニ
ルアミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸1 ］（１．０当量）及びトリピロリ
ジノブロモ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒＯＰ，１．０
当量）を有する混合物に添加する。反応混合物を環境温度で２０〜２４時間攪拌
する。混合物を濃縮し、残留物をクロマトグラフィー分離して、６−アセチル化
された６−アミノニコチン誘導体２及び３を３２〜３８％の収率で生じる。1 ＯＫａｎｏ，Ａ．；Inaoka，Ｍ．；Ｆｕｎａｂａｓｈｉ，Ｓ．；Ｉｗａｍｏｔ
ｏ，Ｍ．；Ｉｓｏｄａ，Ｓ．；Ｍｏｒｏｉ，Ｒ．；Ａｂｉｋｏ，Ｙ．；Ｈｉｖａ
ｔａ，Ｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９７２，１５，２４７−２５５。 ７−（ｔ．−ブチルオキシカルボニルアミノ）−Ｎ−［５−（１−メチル−２−
ピロリジニル）−２−ピリジニル］ヘプタンアミド（２）。
する一般的方法（反応式２−３）：Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ
、３．０当量）を、ＣＨ2 Ｃｌ2 （１−２ｍｌ／ｍｍｏｌ）中に６−アミノニコ
チン（１．０当量）、アミノ保護されたアミノ酸［７−（ｔ．−ブチルオキシカ
ルボニルアミノ）−ヘプタン酸又はトランス−４−（ベンジル−オキシカルボニ
ルアミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸1 ］（１．０当量）及びトリピロリ
ジノブロモ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒＯＰ，１．０
当量）を有する混合物に添加する。反応混合物を環境温度で２０〜２４時間攪拌
する。混合物を濃縮し、残留物をクロマトグラフィー分離して、６−アセチル化
された６−アミノニコチン誘導体２及び３を３２〜３８％の収率で生じる。1 ＯＫａｎｏ，Ａ．；Inaoka，Ｍ．；Ｆｕｎａｂａｓｈｉ，Ｓ．；Ｉｗａｍｏｔ
ｏ，Ｍ．；Ｉｓｏｄａ，Ｓ．；Ｍｏｒｏｉ，Ｒ．；Ａｂｉｋｏ，Ｙ．；Ｈｉｖａ
ｔａ，Ｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９７２，１５，２４７−２５５。 ７−（ｔ．−ブチルオキシカルボニルアミノ）−Ｎ−［５−（１−メチル−２−
ピロリジニル）−２−ピリジニル］ヘプタンアミド（２）。
【００４２】 残留物をクロマトグラフィー分離して［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（
３０：１）］、（２）（３２％）が得られる。分析試料は、イソ−ヘキサン／Ｅ
ｔＯＨから結晶化によって得られる；融点（ｍｐ）９２−９３℃；
３０：１）］、（２）（３２％）が得られる。分析試料は、イソ−ヘキサン／Ｅ
ｔＯＨから結晶化によって得られる；融点（ｍｐ）９２−９３℃；
【００４３】
【外１】
【００４４】 トランス−４−（ベンジルオキシカルボニルアミノメチル）−Ｎ−［５−（１−
メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル］シクロヘキサンカルボキシアミ
ド（３） 残留物をクロマトグラフィー分離して［シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（
２０：１）］、（２）（３８％）が得られる。分析試料は、イソ−ヘキサン／Ｅ
ｔＯＨから結晶化によって得られる；
メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル］シクロヘキサンカルボキシアミ
ド（３） 残留物をクロマトグラフィー分離して［シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（
２０：１）］、（２）（３８％）が得られる。分析試料は、イソ−ヘキサン／Ｅ
ｔＯＨから結晶化によって得られる；
【００４５】
【外２】
【００４６】 ７−アミノ−Ｎ−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル］
ヘプタンアミド（４：ＹＨ１５） ＴＦＡ（５ｍｌ）をＣＨ2 Ｃｌ2 （０．１０ｇ，０．２５ｍｍｏｌ）中に（２
）を有する溶液に添加し、混合物を環境温度で２時間攪拌する。この溶液を飽和
Ｋ2 ＣＯ3 水溶液で中和し、ＣＨ2 Ｃｌ2 （３×１５ｍｌ）で抽出する。一緒に
された有機相を水洗し、乾燥し（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、濃縮する。粗生成物
を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（５０：５０：
１）］によって精製し、油状物として（４）０．０６ｇ（７４％）が得られる。
ヘプタンアミド（４：ＹＨ１５） ＴＦＡ（５ｍｌ）をＣＨ2 Ｃｌ2 （０．１０ｇ，０．２５ｍｍｏｌ）中に（２
）を有する溶液に添加し、混合物を環境温度で２時間攪拌する。この溶液を飽和
Ｋ2 ＣＯ3 水溶液で中和し、ＣＨ2 Ｃｌ2 （３×１５ｍｌ）で抽出する。一緒に
された有機相を水洗し、乾燥し（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、濃縮する。粗生成物
を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（５０：５０：
１）］によって精製し、油状物として（４）０．０６ｇ（７４％）が得られる。
【００４７】
【外３】
【００４８】 トランス−４−（アミノメチル）−Ｎ−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル
）−２−ピリジニル］シクロヘキサンカルボキシアミド（５；ＹＨ６） 乾燥アセトニトリル（１０ｍｌ）中に（３）（０．１４ｇ，０．３ｍｍｏｌ）
，Ｍｅ3 ＳｉＣｌ（０．２４ｇ，２．５５ｇ）及びＮａＩ（４．５ｍｇ，２．７
ｍｍｏｌ）を有する混合物を窒素下で３時間環境温度で攪拌する。揮発物を蒸発
させ、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）及びエーテル中にＨＣｌを有する飽和溶液（１ｍｌ）
を添加する。混合物を１５時間攪拌し、ついで濃縮する。残留物を水（５ｍｌ）
で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×７ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相を乾燥し
（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、濃縮する。粗生成物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、Ｃ
ＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（５０：５０：１）］によって（５）０．０３
ｇ（２８％）が得られる；
）−２−ピリジニル］シクロヘキサンカルボキシアミド（５；ＹＨ６） 乾燥アセトニトリル（１０ｍｌ）中に（３）（０．１４ｇ，０．３ｍｍｏｌ）
，Ｍｅ3 ＳｉＣｌ（０．２４ｇ，２．５５ｇ）及びＮａＩ（４．５ｍｇ，２．７
ｍｍｏｌ）を有する混合物を窒素下で３時間環境温度で攪拌する。揮発物を蒸発
させ、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）及びエーテル中にＨＣｌを有する飽和溶液（１ｍｌ）
を添加する。混合物を１５時間攪拌し、ついで濃縮する。残留物を水（５ｍｌ）
で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×７ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相を乾燥し
（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、濃縮する。粗生成物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、Ｃ
ＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（５０：５０：１）］によって（５）０．０３
ｇ（２８％）が得られる；
【００４９】
【外４】
【００５０】 ６−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル］ヘキサンニト
リル（６） 乾燥トルエン（２０ｍｌ）中に６−アミノニコチン（０．６２ｇ，３．５ｍｍ
ｏｌ）及びＮａＨ（８０％鉱油、０．１６ｇ，５．２５ｍｍｏｌ）を有する攪拌
混合物を２時間還流し、ついで室温に冷却する。６−ブロモヘキサンニトリル（
０．６５ｇ，３．７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を還流温度で一晩放置する。
溶剤を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー分離［シリカゲル、ＣＨＣｌ3/Ｍ
ｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（１８：３：０．１）］して、（６）０．４０ｇ（４１％）
が得られる；ＩＲ（フィルム）：２２７０ｃｍ-1；-1Ｈ-
リル（６） 乾燥トルエン（２０ｍｌ）中に６−アミノニコチン（０．６２ｇ，３．５ｍｍ
ｏｌ）及びＮａＨ（８０％鉱油、０．１６ｇ，５．２５ｍｍｏｌ）を有する攪拌
混合物を２時間還流し、ついで室温に冷却する。６−ブロモヘキサンニトリル（
０．６５ｇ，３．７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を還流温度で一晩放置する。
溶剤を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー分離［シリカゲル、ＣＨＣｌ3/Ｍ
ｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（１８：３：０．１）］して、（６）０．４０ｇ（４１％）
が得られる；ＩＲ（フィルム）：２２７０ｃｍ-1；-1Ｈ-
【００５１】
【外５】
【００５２】 ６−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル］ヘキサンアミ
ン（７：ＹＨ７） 化合物６（０．２３ｇ，０．８３ｍｍｏｌ）を乾燥エーテル（８ｍｌ）中にＬ
ｉＡｌＨ4 （０．０７ｇ，２．５ｍｍｏｌ）を有する懸濁液に窒素下で添加する
。この混合物を室温で５時間攪拌し、２０時間還流下で加熱する。飽和Ｎａ2 Ｓ
Ｏ4 水溶液（２ｍｌ）を添加し、固形アルミニウム錯体を濾過し、エーテルで洗
浄する。有機相を乾燥し（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、濃縮する。 粗残留物を分取
ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（３５：３５：２）］
によって精製し、（７）０．１３ｇ（５５％）が得られる；
ン（７：ＹＨ７） 化合物６（０．２３ｇ，０．８３ｍｍｏｌ）を乾燥エーテル（８ｍｌ）中にＬ
ｉＡｌＨ4 （０．０７ｇ，２．５ｍｍｏｌ）を有する懸濁液に窒素下で添加する
。この混合物を室温で５時間攪拌し、２０時間還流下で加熱する。飽和Ｎａ2 Ｓ
Ｏ4 水溶液（２ｍｌ）を添加し、固形アルミニウム錯体を濾過し、エーテルで洗
浄する。有機相を乾燥し（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、濃縮する。 粗残留物を分取
ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（３５：３５：２）］
によって精製し、（７）０．１３ｇ（５５％）が得られる；
【００５３】
【外６】
【００５４】 トランス−ベンジル−４−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリ
ジニルカルバモイル］シクロヘキサンカルボキレート（８） ＤＩＥＡ（０．５１ｍｌ，３ｍｍｏｌ）をＣＨＣｌ3 （２０ｍｌ）中に６−ア
ミノニコチン（０．２７ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、４−（ベンジルオキシカルボニ
ル）シクロヘキサンカルボン酸2 （０．４３ｇ，１．６ｍｍｏｌ）及びＰｙＢｒ
ＯＰ（０．７７ｇ，１．６ｍｍｏｌ）を有する混合物に添加する。反応混合物を
環境温度で５分間攪拌し、ついで２４時間還流下で加熱する。クロロホルムを減
圧蒸発させ、残留物をエーテルで抽出する。一緒にされたエーテル抽出物を水で
ついでブラインで洗浄し、ついで乾燥し（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、減圧で濃縮
する。残留物をクロマトグラフィー分離し［シリカゲル、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯ
Ｈ（９５：５）］、（８）（０．４４ｇ，７０％）が得られる。分析試料はイソ
ヘキサンから結晶化して得られる；
ジニルカルバモイル］シクロヘキサンカルボキレート（８） ＤＩＥＡ（０．５１ｍｌ，３ｍｍｏｌ）をＣＨＣｌ3 （２０ｍｌ）中に６−ア
ミノニコチン（０．２７ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、４−（ベンジルオキシカルボニ
ル）シクロヘキサンカルボン酸2 （０．４３ｇ，１．６ｍｍｏｌ）及びＰｙＢｒ
ＯＰ（０．７７ｇ，１．６ｍｍｏｌ）を有する混合物に添加する。反応混合物を
環境温度で５分間攪拌し、ついで２４時間還流下で加熱する。クロロホルムを減
圧蒸発させ、残留物をエーテルで抽出する。一緒にされたエーテル抽出物を水で
ついでブラインで洗浄し、ついで乾燥し（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、減圧で濃縮
する。残留物をクロマトグラフィー分離し［シリカゲル、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯ
Ｈ（９５：５）］、（８）（０．４４ｇ，７０％）が得られる。分析試料はイソ
ヘキサンから結晶化して得られる；
【００５５】
【外７】
【００５６】2 ＷｅｌｌｍａｒＵ．等，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，
１９９６，１５，１０５９−１０７６。 トランス−４−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニルカル
バモイル］シクロヘキサンカルボン酸（９：ＧＫ５） 炭素上に担持されたパラジウム（１０％、０．０４ｇ）をＥｔＯＨ（７ｍｌ）
中に（８）（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びシクロヘキサン（０．１５ｍ
ｌ）を有する混合物に添加する。攪拌された反応混合物を１５分間還流加熱し、
濾過して、濃縮する。残留物を分取ＴＬＣ（シリカゲル、ＭｅＯＨ）によって精
製し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＥｔＯＨ（９５：５）に溶解し、濾過し、濃縮して、（９
）（０．０９ｇ，７５％）を生じる。
１９９６，１５，１０５９−１０７６。 トランス−４−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニルカル
バモイル］シクロヘキサンカルボン酸（９：ＧＫ５） 炭素上に担持されたパラジウム（１０％、０．０４ｇ）をＥｔＯＨ（７ｍｌ）
中に（８）（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びシクロヘキサン（０．１５ｍ
ｌ）を有する混合物に添加する。攪拌された反応混合物を１５分間還流加熱し、
濾過して、濃縮する。残留物を分取ＴＬＣ（シリカゲル、ＭｅＯＨ）によって精
製し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＥｔＯＨ（９５：５）に溶解し、濾過し、濃縮して、（９
）（０．０９ｇ，７５％）を生じる。
【００５７】
【外８】
【００５８】 ７−（ｔ．−ブチルオキシカルボニルアミノ）−Ｎ−［５−（１−メチル−２−
ピロリジニル）−３−ピリジニル］ヘプタンアミド（ＳＧ１７） ＰｙＢｒＯＰ（０．９ｇ，１．９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．６ｍｌ）を乾
燥ＣＨ2 Ｃｌ2 （５ｍｌ）中に５−アミノニコチン3 （０．３ｇ，１．７ｍｍｏ
ｌ）及び７−（ｔ．−ブチルオキシカルボニルアミノ）ヘプタン酸（０．５ｇ，
２．０ｍｍｏｌ）を有する攪拌された溶液に０℃で添加する。この混合物を０℃
で３０分間、ついで室温で２時間攪拌する。溶剤を蒸発させ、ＥｔＯＡｃを残留
物に添加する。混合物を飽和ＮａＨＣＯ3 水溶液及びブラインで洗浄し、乾燥し
（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をクロマトグラフィー分離
し［ＳｉＯ2 、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ（４：１）］、淡い黄色油状物としてＳ
Ｇ１７ ０．５９ｇ（８７％）が得られる；
ピロリジニル）−３−ピリジニル］ヘプタンアミド（ＳＧ１７） ＰｙＢｒＯＰ（０．９ｇ，１．９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．６ｍｌ）を乾
燥ＣＨ2 Ｃｌ2 （５ｍｌ）中に５−アミノニコチン3 （０．３ｇ，１．７ｍｍｏ
ｌ）及び７−（ｔ．−ブチルオキシカルボニルアミノ）ヘプタン酸（０．５ｇ，
２．０ｍｍｏｌ）を有する攪拌された溶液に０℃で添加する。この混合物を０℃
で３０分間、ついで室温で２時間攪拌する。溶剤を蒸発させ、ＥｔＯＡｃを残留
物に添加する。混合物を飽和ＮａＨＣＯ3 水溶液及びブラインで洗浄し、乾燥し
（Ｋ2 ＣＯ3 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をクロマトグラフィー分離
し［ＳｉＯ2 、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ（４：１）］、淡い黄色油状物としてＳ
Ｇ１７ ０．５９ｇ（８７％）が得られる；
【００５９】
【外９】
【００６０】 ７−アミノ−Ｎ−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル］
ヘプタンアミド（ＳＧ１８） ＴＦＡ（２．０ｍｌ，２６．０ｍｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ2 Ｃｌ2 （３５ｍｌ）
中にＳＧ１７（０．４８ｍｌ，１．２ｍｍｏｌ）を有する攪拌された溶液に０℃
で添加する。攪拌された溶液を室温に到達させ、６時間後この溶液を飽和Ｋ2 Ｃ
Ｏ3 水溶液の添加によってｐＨ〜８にする。混合物を減圧下で完全に蒸発乾固す
る。残留物をクロマトグラフィー分離し［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／Ｎ
Ｈ4 ＯＨ（４：１：０．５）］、黄色油状物としてＳＧ１８ ０．２５ｇ（６９
％）が得られる；
ヘプタンアミド（ＳＧ１８） ＴＦＡ（２．０ｍｌ，２６．０ｍｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ2 Ｃｌ2 （３５ｍｌ）
中にＳＧ１７（０．４８ｍｌ，１．２ｍｍｏｌ）を有する攪拌された溶液に０℃
で添加する。攪拌された溶液を室温に到達させ、６時間後この溶液を飽和Ｋ2 Ｃ
Ｏ3 水溶液の添加によってｐＨ〜８にする。混合物を減圧下で完全に蒸発乾固す
る。残留物をクロマトグラフィー分離し［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／Ｎ
Ｈ4 ＯＨ（４：１：０．５）］、黄色油状物としてＳＧ１８ ０．２５ｇ（６９
％）が得られる；
【００６１】
【外１０】
【００６２】 いくつかのリンカーの製造（反応式４） トランス−（４−プロプ−２−イニルシクロヘキシル）メタノール（ＧＫ９１） リチウムアセチリドエチレンジアミン錯体（７．４ｇ，７２．５ｍｍｏｌ）を
乾燥ＤＭＳＯ４０ｍｌに懸濁させ、ＤＭＳＯ（３０ｍｌ）中にトランス−４−（
ヒドロキシメチル）シクロへキシルメチルトルエン−４−スルホネート（８．０
ｇ，２６．８ｍｍｏｌ）を有する溶液を５℃で添加する。混合物を２時間環境温
度で攪拌し、冷水（２００ｍｌ）で冷却し、セライトのパッドを通して濾過する
。得られた溶液をエーテル（４×５０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相を
水及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4 で乾燥し、濾過して、減圧で濃縮し、ＧＫ
９１３．５ｇ（８６％）が得られる。これを更に精製することなく次の工程に使
用する；
乾燥ＤＭＳＯ４０ｍｌに懸濁させ、ＤＭＳＯ（３０ｍｌ）中にトランス−４−（
ヒドロキシメチル）シクロへキシルメチルトルエン−４−スルホネート（８．０
ｇ，２６．８ｍｍｏｌ）を有する溶液を５℃で添加する。混合物を２時間環境温
度で攪拌し、冷水（２００ｍｌ）で冷却し、セライトのパッドを通して濾過する
。得られた溶液をエーテル（４×５０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相を
水及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4 で乾燥し、濾過して、減圧で濃縮し、ＧＫ
９１３．５ｇ（８６％）が得られる。これを更に精製することなく次の工程に使
用する；
【００６３】
【外１１】
【００６４】 この化合物の一部を３，５−ジニトロベンゾエートに変える。ｍｐ１０６−１０
８℃（イソヘキサンから）；
８℃（イソヘキサンから）；
【００６５】
【外１２】
【００６６】 トランス−４−プロプ−２−イニルシクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ６８） ２ＭＨ2 ＳＯ4 （１０ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）中に三酸化クロム（１．１８ｇ，
１１．８ｍｍｏｌ）を有する溶液を、アセトン（２０ｍｌ）中のＧＫ９１ ０．
９ｇ（〜５．９ｍｍｏｌ）を添加しながら、０℃で保つ。反応混合物を１時間０
℃で、ついで２時間、室温で攪拌する。過剰の酸化剤を固体Ｎａ2 ＳＯ3 （０．
８ｇ，６．３ｍｍｏｌ）で分解する。エーテル（〜１００ｍｌ）を添加し、混合
物をブライン（３×５０ｍｌ）で抽出する。有機相を乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ3 ）、
濾過して、濃縮する。残留物をイソヘキサンから結晶化し、無色の結晶としてＧ
Ｋ６８０．７４ｇ（７５％）が得られる。ｍｐ８４−８６（イソヘキサンから）
；
１１．８ｍｍｏｌ）を有する溶液を、アセトン（２０ｍｌ）中のＧＫ９１ ０．
９ｇ（〜５．９ｍｍｏｌ）を添加しながら、０℃で保つ。反応混合物を１時間０
℃で、ついで２時間、室温で攪拌する。過剰の酸化剤を固体Ｎａ2 ＳＯ3 （０．
８ｇ，６．３ｍｍｏｌ）で分解する。エーテル（〜１００ｍｌ）を添加し、混合
物をブライン（３×５０ｍｌ）で抽出する。有機相を乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ3 ）、
濾過して、濃縮する。残留物をイソヘキサンから結晶化し、無色の結晶としてＧ
Ｋ６８０．７４ｇ（７５％）が得られる。ｍｐ８４−８６（イソヘキサンから）
；
【００６７】
【外１３】
【００６８】 トランス−４−プロプ−２−イニルシクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（
ＧＫ７０） Ｇｋ６８（０．７ｇ，４．２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍｌ）及びオルトギ酸
（１ｍｌ）の混合物に溶解させる。Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ２（０．２ｇ）を添加し
、反応混合物を一晩環境温度で攪拌する。樹脂を濾過し、溶剤を減圧で蒸発させ
る。残留物をバルブツーバルブ（ｂｕｌｂｔｏ ｂｕｌｂ）蒸留（１７５℃、１
３ｍｍ）によって精製し、油状物としてＧＫ７００．７１ｇ（９３％）が得られ
る；
ＧＫ７０） Ｇｋ６８（０．７ｇ，４．２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍｌ）及びオルトギ酸
（１ｍｌ）の混合物に溶解させる。Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ２（０．２ｇ）を添加し
、反応混合物を一晩環境温度で攪拌する。樹脂を濾過し、溶剤を減圧で蒸発させ
る。残留物をバルブツーバルブ（ｂｕｌｂｔｏ ｂｕｌｂ）蒸留（１７５℃、１
３ｍｍ）によって精製し、油状物としてＧＫ７００．７１ｇ（９３％）が得られ
る；
【００６９】
【外１４】
【００７０】 トランス−（４−プロプ−２−イニルシクロヘキシル）メチルトルエン−４−ス
ルホネート（ＧＫ８７） ピリジン（３０ｍｌ）中にＧｋ９１（３．０４ｇ，２０ｍｍｏｌ）を有する溶
液を０℃に冷却し、ｐ−トルエンスルホニルクロライド（４ｇ、２１ｍｍｏｌ）
を添加する。反応混合物を２時間０℃で、ついで一晩環境温度で攪拌する。ピリ
ジンを減圧で蒸発させ、残留物をエーテルに溶解し、１ＭＨＣｌ、Ｈ2 Ｏ、Ｎａ
ＨＣＯ3 及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4 で乾燥し、濾過して、蒸発させる。
固体残留物をイソヘキサンから再結晶させて、ＧＫ８７５．５７ｇ（９１％）が
得られる。
ルホネート（ＧＫ８７） ピリジン（３０ｍｌ）中にＧｋ９１（３．０４ｇ，２０ｍｍｏｌ）を有する溶
液を０℃に冷却し、ｐ−トルエンスルホニルクロライド（４ｇ、２１ｍｍｏｌ）
を添加する。反応混合物を２時間０℃で、ついで一晩環境温度で攪拌する。ピリ
ジンを減圧で蒸発させ、残留物をエーテルに溶解し、１ＭＨＣｌ、Ｈ2 Ｏ、Ｎａ
ＨＣＯ3 及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4 で乾燥し、濾過して、蒸発させる。
固体残留物をイソヘキサンから再結晶させて、ＧＫ８７５．５７ｇ（９１％）が
得られる。
【００７１】
【外１５】
【００７２】 トランス−（４−プロプ−２−イニルシクロヘキシル）メチルアミン（ＧＫ８８
） ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中にＧＫ８７（１．５３ｇ，５ｍｍｏｌ）を有する溶液
を−１５℃でＮＨ3 で飽和し、ついで密閉容器中で１００℃で３時間加熱する。
ＭｅＯＨを減圧で蒸発させる。残留物を１ＭＨＣｌ（５０ｍｌ）に溶解し、ＣＨ 2 Ｃｌ2 （３×２０ｍｌ）で抽出し、ビス（トランス−（４−プロプ−２−イニ
ルシクロヘキシルメチル）アミン塩酸塩を除く。水相を固体ＮａＯＨでｐＨ１２
にアルカリ性化し、エーテル（３×２０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機抽
出物をＫＯＨで乾燥し、濾過し、減圧で濃縮して、ＧＫ８８０．４ｇ（５３％）
が得られる。
） ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中にＧＫ８７（１．５３ｇ，５ｍｍｏｌ）を有する溶液
を−１５℃でＮＨ3 で飽和し、ついで密閉容器中で１００℃で３時間加熱する。
ＭｅＯＨを減圧で蒸発させる。残留物を１ＭＨＣｌ（５０ｍｌ）に溶解し、ＣＨ 2 Ｃｌ2 （３×２０ｍｌ）で抽出し、ビス（トランス−（４−プロプ−２−イニ
ルシクロヘキシルメチル）アミン塩酸塩を除く。水相を固体ＮａＯＨでｐＨ１２
にアルカリ性化し、エーテル（３×２０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機抽
出物をＫＯＨで乾燥し、濾過し、減圧で濃縮して、ＧＫ８８０．４ｇ（５３％）
が得られる。
【００７３】
【外１６】
【００７４】 ６−ブロモヘキシルアンモニウムブロマイド4 （ＳＧ２０） ＨＢｒ４８％（１０５ｍｌ）中に６−アミノ−１−ヘキサノール（４．３ｇ，
３７．０ｍｍｏｌ）を有する混合物を９５℃で１１時間攪拌する。溶液を減圧で
濃縮し、帯褐色の吸湿性粉末としてＳＧ２０８．５ｇ（８９％）（粗製ＳＧ２０
のｍｐ：１２８−１３２℃）が得られる；
３７．０ｍｍｏｌ）を有する混合物を９５℃で１１時間攪拌する。溶液を減圧で
濃縮し、帯褐色の吸湿性粉末としてＳＧ２０８．５ｇ（８９％）（粗製ＳＧ２０
のｍｐ：１２８−１３２℃）が得られる；
【００７５】
【外１７】
【００７６】 ７−オクチンアミン5 （ＳＧ２６） 乾燥ＤＭＳＯ（２ｍｌ）中にＳＧ２０（３．０ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を有す
る溶液を乾燥ＤＭＳＯ（３６ｍｌ）中にリチウムアセチリド及びエチレンジアミ
ン錯体（７．０ｇ，７６．０ｍｍｏｌ）を有する攪拌されたスラリーに４５分間
かけて８℃で滴加する。８℃で３時間後、このスラリーをブラインの冷溶液（約
３００ｍｌ）中に徐々に注ぐ。溶液をヘキサン（３×１５０ｍｌ）で抽出し、一
緒にされた有機相をＮａ2 ＳＯ4 で乾燥し、濾過して、室温で減圧濃縮して、淡
い黄色油状物としてＳＧ２６１０ｇ（６９％）が得られる；ＩＲ（フィルム）Ｖ max ２１１４，３２９６ｃｍ-1；
る溶液を乾燥ＤＭＳＯ（３６ｍｌ）中にリチウムアセチリド及びエチレンジアミ
ン錯体（７．０ｇ，７６．０ｍｍｏｌ）を有する攪拌されたスラリーに４５分間
かけて８℃で滴加する。８℃で３時間後、このスラリーをブラインの冷溶液（約
３００ｍｌ）中に徐々に注ぐ。溶液をヘキサン（３×１５０ｍｌ）で抽出し、一
緒にされた有機相をＮａ2 ＳＯ4 で乾燥し、濾過して、室温で減圧濃縮して、淡
い黄色油状物としてＳＧ２６１０ｇ（６９％）が得られる；ＩＲ（フィルム）Ｖ max ２１１４，３２９６ｃｍ-1；
【００７７】
【外１８】
【００７８】5 ＮｏｖｉｓＳｍｉｔｈ、Ｗ．及びＢｅｕｍｅｌ、Ｏ．Ｆ．Ｓｙｔｈｅｓｉｓ，
１９７４，４４１−４４２。 ６−ブロモニコチン及び５−ブロモニコチンと末端アルキンのカップリングに関
する一般的方法（反応式５） Ｅｔ3 Ｎ５ｍｌ中で６−ブロモニコチン6 （又は５−ブロモニコチン7 ）（０
．２４ｇ，１ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウムジクロ
ライド（０．０１４ｇ，０．０２ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（０．００４ｇ，０．０
２ｍｍｏｌ）を有する混合物をＮ2 で脱酸素化する。アセチレン化合物（１．１
ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１２０℃で４０分間（５−ブロモニコチンに
対しては４時間）密閉容器中で加熱する。Ｅｔ3 Ｎを減圧で蒸発させ、残留物を
ＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3 水溶液で洗浄し、２ＮＨＣｌ２０ｍｌで
抽出する。酸性水相をＥｔＯＡｃ（４×２０ｍｌ）で抽出する。水相を固体Ｎａ
ＨＣＯ3 で飽和させ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出する。有機相をブライ
ンで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をカラ
ムクロマトグラフィーによって精製する。
１９７４，４４１−４４２。 ６−ブロモニコチン及び５−ブロモニコチンと末端アルキンのカップリングに関
する一般的方法（反応式５） Ｅｔ3 Ｎ５ｍｌ中で６−ブロモニコチン6 （又は５−ブロモニコチン7 ）（０
．２４ｇ，１ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウムジクロ
ライド（０．０１４ｇ，０．０２ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（０．００４ｇ，０．０
２ｍｍｏｌ）を有する混合物をＮ2 で脱酸素化する。アセチレン化合物（１．１
ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１２０℃で４０分間（５−ブロモニコチンに
対しては４時間）密閉容器中で加熱する。Ｅｔ3 Ｎを減圧で蒸発させ、残留物を
ＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3 水溶液で洗浄し、２ＮＨＣｌ２０ｍｌで
抽出する。酸性水相をＥｔＯＡｃ（４×２０ｍｌ）で抽出する。水相を固体Ｎａ
ＨＣＯ3 で飽和させ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出する。有機相をブライ
ンで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をカラ
ムクロマトグラフィーによって精製する。
【００７９】
【外１９】
【００８０】 メチル４−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル）エチル
］ベンゾエート（ＧＫ４７） メチル４−エチニルベンゾエートを下記文献８にしたがって製造する。精製：
カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１：２）］
；収率７８％；ｍｐ１０２−１０４℃（イソヘキサン）；
］ベンゾエート（ＧＫ４７） メチル４−エチニルベンゾエートを下記文献８にしたがって製造する。精製：
カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１：２）］
；収率７８％；ｍｐ１０２−１０４℃（イソヘキサン）；
【００８１】
【外２０】
【００８２】 メチル７−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル）ヘプト
−６−イノエート（ＧＫ７９） メチル６−ヘプチノエートを下記文献９にしたがって製造する。精製：カラム
クロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１：２）］；収率
７３％；
−６−イノエート（ＧＫ７９） メチル６−ヘプチノエートを下記文献９にしたがって製造する。精製：カラム
クロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１：２）］；収率
７３％；
【００８３】
【外２１】
【００８４】 メチル７−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）ヘプト
−６−イノエート（ＧＫ７７） メチル６−ヘプチノエートを下記文献９にしたがって製造する。精製：カラム
クロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１：２）］；収率
６０％；
−６−イノエート（ＧＫ７７） メチル６−ヘプチノエートを下記文献９にしたがって製造する。精製：カラム
クロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１：２）］；収率
６０％；
【００８５】
【外２２】
【００８６】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニ
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（ＧＫ７８
） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１
：２）］；収率８７％；
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（ＧＫ７８
） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１
：２）］；収率８７％；
【００８７】
【外２３】
【００８８】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（ＧＫ７５
） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１
：２）］；収率５８％；
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（ＧＫ７５
） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１
：２）］；収率５８％；
【００８９】
【外２４】
【００９０】 ２−（３−ヒドロキシ−３−メイルブト−１−イニル）−５−（１−メチル−２
−ピロリジニル）ピリジン（ＧＫ５５） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１
：１）］；収率９０％；
−ピロリジニル）ピリジン（ＧＫ５５） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、アセトン／イソヘキサン（１
：１）］；収率９０％；
【００９１】
【外２５】
【００９２】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ８９） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ：ＮＨ3 で飽和さ
れたＭｅＯＨ（１５：１）］；収率９０％；
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ８９） 精製：カラムクロマトグラフィー［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ：ＮＨ3 で飽和さ
れたＭｅＯＨ（１５：１）］；収率９０％；
【００９３】
【外２６】
【００９４】 ８−［（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル］オクト−７
−インアミン（ＳＧ２９） 反応混合物を６時間加熱する。精製：カラムクロマトグラフィー［ＳｉＯ3
、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（５：１：０．１）］；収率０．３６％（
８６％）（回収された５−ブロモニコチンに対して）；ＩＲ（フィルム）Ｖmax ２２３２ｃｍ-1；
−インアミン（ＳＧ２９） 反応混合物を６時間加熱する。精製：カラムクロマトグラフィー［ＳｉＯ3
、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（５：１：０．１）］；収率０．３６％（
８６％）（回収された５−ブロモニコチンに対して）；ＩＲ（フィルム）Ｖmax ２２３２ｃｍ-1；
【００９５】
【外２７】
【００９６】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニ
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ９０） Ｅｔ3 Ｎ１５ｍｌ中で６−ブロモニコチン（０．４７ｇ，２ｍｍｏｌ）、トリス
（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム［（ｄｂａ）3 Ｐｄ2 ］（０．０１８
ｇ，０．０２ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（ｄ
ｐｐｐ）（０．０３２ｇ，０．０８ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（０．００８ｇ，０．
０４ｍｍｏｌ）を有する混合物をＮ2 で脱酸素化し、ＧＫ８８（０．３２６ｇ，
２．１６ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１２０℃で６時間、密閉容器中で
加熱する。Ｅｔ3 Ｎを減圧で蒸発させる。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、希Ｎａ
ＨＣＯ3 水溶液で洗浄し、２ＮＨＣｌ４０ｍｌで抽出する。酸性水相をＥｔＯＡ
ｃ（４×２０ｍｌ）で抽出する。水相を固体ＮａＨＣＯ3 でｐＨ１２にアルカリ
性化し、ＥｔＯＡｃ（５×３０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相をブライ
ンで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をカラ
ムクロマトグラフィーによって精製する［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ：ＮＨ3 で飽
和されたＭｅＯＨ（１５：１）］；ＧＫ９００．４３ｇ（７１％）を生じる；
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ９０） Ｅｔ3 Ｎ１５ｍｌ中で６−ブロモニコチン（０．４７ｇ，２ｍｍｏｌ）、トリス
（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム［（ｄｂａ）3 Ｐｄ2 ］（０．０１８
ｇ，０．０２ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（ｄ
ｐｐｐ）（０．０３２ｇ，０．０８ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（０．００８ｇ，０．
０４ｍｍｏｌ）を有する混合物をＮ2 で脱酸素化し、ＧＫ８８（０．３２６ｇ，
２．１６ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１２０℃で６時間、密閉容器中で
加熱する。Ｅｔ3 Ｎを減圧で蒸発させる。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、希Ｎａ
ＨＣＯ3 水溶液で洗浄し、２ＮＨＣｌ４０ｍｌで抽出する。酸性水相をＥｔＯＡ
ｃ（４×２０ｍｌ）で抽出する。水相を固体ＮａＨＣＯ3 でｐＨ１２にアルカリ
性化し、ＥｔＯＡｃ（５×３０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相をブライ
ンで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をカラ
ムクロマトグラフィーによって精製する［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ：ＮＨ3 で飽
和されたＭｅＯＨ（１５：１）］；ＧＫ９００．４３ｇ（７１％）を生じる；
【００９７】
【外２８】
【００９８】 トランス−３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）ア
クリル酸メチルエステル（ＧＫ５９） ＭｅＣＮ５ｍｌ中に５−ブロモニコチン（０．２４１ｇ，１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ
（ＯＡｃ）2 （０．０１１ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、トリ−ｏ−トリルホスフィ
ン（０．０６０ｇ，０．２ｍｍｏｌ）及びＥｔ3 Ｎ（０．１７ｍｌ，１．２５ｍ
ｍｏｌ）を有する混合物をＮ2 で脱酸素化し、メチルアクリレート（０．１１２
ｍｌ，１．２５ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１１０℃で一晩密閉容器中
で加熱する。ＭｅＣＮを減圧で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和Ｎ
ａＨＣＯ3 水溶液で洗浄し、２ＮＨＣｌ２０ｍｌで抽出する。酸性水相をＥｔＯ
Ａｃ（４×２０ｍｌ）で抽出する。水相を固体ＮａＨＣＯ3 で飽和させ、ＥｔＯ
Ａｃ（３×３０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相をブラインで洗浄し、乾
燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をカラムクロマトグラ
フィーによって精製する［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（４０：１）］；
収量０．２ｇ（８０％）；
クリル酸メチルエステル（ＧＫ５９） ＭｅＣＮ５ｍｌ中に５−ブロモニコチン（０．２４１ｇ，１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ
（ＯＡｃ）2 （０．０１１ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、トリ−ｏ−トリルホスフィ
ン（０．０６０ｇ，０．２ｍｍｏｌ）及びＥｔ3 Ｎ（０．１７ｍｌ，１．２５ｍ
ｍｏｌ）を有する混合物をＮ2 で脱酸素化し、メチルアクリレート（０．１１２
ｍｌ，１．２５ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１１０℃で一晩密閉容器中
で加熱する。ＭｅＣＮを減圧で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和Ｎ
ａＨＣＯ3 水溶液で洗浄し、２ＮＨＣｌ２０ｍｌで抽出する。酸性水相をＥｔＯ
Ａｃ（４×２０ｍｌ）で抽出する。水相を固体ＮａＨＣＯ3 で飽和させ、ＥｔＯ
Ａｃ（３×３０ｍｌ）で抽出する。一緒にされた有機相をブラインで洗浄し、乾
燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過して、減圧で濃縮する。残留物をカラムクロマトグラ
フィーによって精製する［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（４０：１）］；
収量０．２ｇ（８０％）；
【００９９】
【外２９】
【０１００】 メチル４−［（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）エチ
ニル］ベンゾエート（ＹＨ１９） ５−ブロモニコチン（０．４４ｇ，１．８２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）2 （
６０ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）、Ｐｈ3 Ｐ（０．１９ｇ，０．７２ｍｍｏｌ）、
ＣｕＩ（３０ｍｇ）及びＥｔ3 Ｎ（３０ｍｌ）を有する混合物を、３０分間室温
で攪拌する。メチル４−エチニルベンソエート8 （０．３２ｇ，２ｍｍｏｌ）を
添加し、混合物を一晩還流する。反応混合物を室温に到達させ、ＣＨ2 Ｃｌ2 （
１２０ｍｌ）で希釈し、Ｈ2 Ｏで洗浄する。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾
過して、濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５０：１）］によって精製して、ＹＨ１９０．３７ｇ（６４％）が
得られる。分析試料をＥｔＯＨ／イソヘキサンから再結晶させる；
ニル］ベンゾエート（ＹＨ１９） ５−ブロモニコチン（０．４４ｇ，１．８２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）2 （
６０ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）、Ｐｈ3 Ｐ（０．１９ｇ，０．７２ｍｍｏｌ）、
ＣｕＩ（３０ｍｇ）及びＥｔ3 Ｎ（３０ｍｌ）を有する混合物を、３０分間室温
で攪拌する。メチル４−エチニルベンソエート8 （０．３２ｇ，２ｍｍｏｌ）を
添加し、混合物を一晩還流する。反応混合物を室温に到達させ、ＣＨ2 Ｃｌ2 （
１２０ｍｌ）で希釈し、Ｈ2 Ｏで洗浄する。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾
過して、濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５０：１）］によって精製して、ＹＨ１９０．３７ｇ（６４％）が
得られる。分析試料をＥｔＯＨ／イソヘキサンから再結晶させる；
【０１０１】
【外３０】
【０１０２】 エステル加水分解に関する一般的方法（反応式６） ４−［（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）エチニル］
安息香酸（ＧＫ４９） ５０％ＭｅＯＨ水溶液（１０ｍｌ）中にＧＫ４７（０．１８５ｇ，０．５８ｍ
ｍｏｌ）及びＫＯＨ（０．０９７ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を有する混合物を３０
分間還流下に加熱する。反応混合物をＨＯＡｃでｐＨ８に酸性化し、溶剤を減圧
で蒸発させる。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する（シリカ
ゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ、ＭｅＯＨ１０％〜５０％の勾配）。溶剤を減圧で
蒸発させる。残留物をＣＨＣｌ3 ／ＥｔＯＨ（９５：５）に溶解し、濾過して、
減圧で蒸発させ、ＧＫ４９０．１７ｇ（９６％）が得られる；
安息香酸（ＧＫ４９） ５０％ＭｅＯＨ水溶液（１０ｍｌ）中にＧＫ４７（０．１８５ｇ，０．５８ｍ
ｍｏｌ）及びＫＯＨ（０．０９７ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を有する混合物を３０
分間還流下に加熱する。反応混合物をＨＯＡｃでｐＨ８に酸性化し、溶剤を減圧
で蒸発させる。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製する（シリカ
ゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ、ＭｅＯＨ１０％〜５０％の勾配）。溶剤を減圧で
蒸発させる。残留物をＣＨＣｌ3 ／ＥｔＯＨ（９５：５）に溶解し、濾過して、
減圧で蒸発させ、ＧＫ４９０．１７ｇ（９６％）が得られる；
【０１０３】
【外３１】
【０１０４】 ７−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル）ヘプト−６−
イノン酸（ＧＫ８１） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］に
よって精製する；収率９３％；
イノン酸（ＧＫ８１） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］に
よって精製する；収率９３％；
【０１０５】
【外３２】
【０１０６】 ７−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）ヘプト−６−
イノン酸（ＧＫ８０） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］に
よって精製する；収率７９％；
イノン酸（ＧＫ８０） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］に
よって精製する；収率７９％；
【０１０７】
【外３３】
【０１０８】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニ
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ８３） この化合物をカラムクロマトグラフィー［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ
（１０：１）］によって精製する；収率８０％；
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ８３） この化合物をカラムクロマトグラフィー［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ
（１０：１）］によって精製する；収率８０％；
【０１０９】
【外３４】
【０１１０】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ８２） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］
によって精製する；収率８５％；
ル）プロプ−２−イニル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ８２） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］
によって精製する；収率８５％；
【０１１１】
【外３５】
【０１１２】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロピル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ９５） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］
によって精製する；収率９３％；
ル）プロピル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ９５） この化合物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］
によって精製する；収率９３％；
【０１１３】
【外３６】
【０１１４】 トランス−３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）ア
クリル酸（ＧＫ６２） この化合物をカラムクロマトグラフィー［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＥｔＯＨ
（１：１）］によって精製する；収率８２％；
クリル酸（ＧＫ６２） この化合物をカラムクロマトグラフィー［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＥｔＯＨ
（１：１）］によって精製する；収率８２％；
【０１１５】
【外３７】
【０１１６】 ４−［（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル）エチニル］
安息香酸（ＹＨ２０） ＫＯＨ（１６８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍｌ）中のＹＨ１９（０．
３２ｇ，１ｍｍｏｌ）に添加する。攪拌された混合物を２時間還流し、ついで室
温に冷却する。ＨＯＡｃを添加してｐＨ８とし、揮発性物を蒸発させる。残留物
をクロマトグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］によって
精製して、ＹＨ２００．１９ｇ（６２％）が得られる。
安息香酸（ＹＨ２０） ＫＯＨ（１６８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍｌ）中のＹＨ１９（０．
３２ｇ，１ｍｍｏｌ）に添加する。攪拌された混合物を２時間還流し、ついで室
温に冷却する。ＨＯＡｃを添加してｐＨ８とし、揮発性物を蒸発させる。残留物
をクロマトグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］によって
精製して、ＹＨ２００．１９ｇ（６２％）が得られる。
【０１１７】
【外３８】
【０１１８】 ４−（３−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）ピリジン−５−イルエチル）安
息香酸（ＹＨ２４） ＫＯＨ（１３０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）をＹＨ２２（０．１２ｇ，０．３７
ｍｍｏｌ）、Ｈ2 Ｏ（３ｍｌ）及び１，４−ジオキサン（３ｍｌ）を有する溶液
に添加する。２時間還流後、混合物のｐＨをＨＯＡＣの添加によって８に調整す
る。揮発性物を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（２：１）］によって精製して、ＹＨ２４７０ｍｇ（６１％）が得ら
れる。
息香酸（ＹＨ２４） ＫＯＨ（１３０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）をＹＨ２２（０．１２ｇ，０．３７
ｍｍｏｌ）、Ｈ2 Ｏ（３ｍｌ）及び１，４−ジオキサン（３ｍｌ）を有する溶液
に添加する。２時間還流後、混合物のｐＨをＨＯＡＣの添加によって８に調整す
る。揮発性物を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（２：１）］によって精製して、ＹＨ２４７０ｍｇ（６１％）が得ら
れる。
【０１１９】
【外３９】
【０１２０】 三重結合の水素化に関する一般的方法（反応式７） トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニ
ル）プロピル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ８４） ＥｔＯＨ４０ｍｌ中のＧＫ８３（０．１５３ｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を１時間
炭素に担持された１０％パラジウム０．１ｇを介して室温で及び大気圧で水素化
する。触媒を濾過して、ＥｔＯＨで洗浄する。溶剤を減圧で蒸発させ、残留物を
分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］によって精製し
、ＧＫ８４０．０７ｇ（４５％）が得られる。
ル）プロピル］シクロヘキサンカルボン酸（ＧＫ８４） ＥｔＯＨ４０ｍｌ中のＧＫ８３（０．１５３ｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を１時間
炭素に担持された１０％パラジウム０．１ｇを介して室温で及び大気圧で水素化
する。触媒を濾過して、ＥｔＯＨで洗浄する。溶剤を減圧で蒸発させ、残留物を
分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］によって精製し
、ＧＫ８４０．０７ｇ（４５％）が得られる。
【０１２１】
【外４０】
【０１２２】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロピル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ９３） 精製：カラムクロマトグラフィー［アルミナ、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ、メタノ
ール１０％〜５０％の勾配］；収率７８％；
ル）プロピル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ９３） 精製：カラムクロマトグラフィー［アルミナ、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ、メタノ
ール１０％〜５０％の勾配］；収率７８％；
【０１２３】
【外４１】
【０１２４】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロピル］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（ＧＫ９４） 精製：カラムクロマトグラフィー［アルミナ、アセトン／イソヘキサン（１：２
）］；収率７９％；
ル）プロピル］シクロヘキサンカルボン酸メチルエステル（ＧＫ９４） 精製：カラムクロマトグラフィー［アルミナ、アセトン／イソヘキサン（１：２
）］；収率７９％；
【０１２５】
【外４２】
【０１２６】 トランス−４−［３−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニ
ル）プロピル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ９６） 精製：分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＮＨ3 で飽和されたＭｅＯＨ（１
５：１）］；収率８１％；
ル）プロピル］シクロヘキシルメチルアミン（ＧＫ９６） 精製：分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＮＨ3 で飽和されたＭｅＯＨ（１
５：１）］；収率８１％；
【０１２７】
【外４３】
【０１２８】 ８−［５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニル］オクタンアミ
ン（ＧＫ３０） ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中にＳＧ２９（０．２ｇ，０．７ｍｍｏｌ）を有する溶
液を室温で及び大気圧で１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）を介して水素化する。１５
分後、触媒を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。揮発性物質を減圧で蒸発させ、残留
物をクロマトグラフィー分離［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（
５：１：０．１）］して、無色油状物としてＳＧ３００．１６ｇ（７６％）が得
られる。
ン（ＧＫ３０） ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中にＳＧ２９（０．２ｇ，０．７ｍｍｏｌ）を有する溶
液を室温で及び大気圧で１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）を介して水素化する。１５
分後、触媒を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。揮発性物質を減圧で蒸発させ、残留
物をクロマトグラフィー分離［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4 ＯＨ（
５：１：０．１）］して、無色油状物としてＳＧ３００．１６ｇ（７６％）が得
られる。
【０１２９】
【外４４】
【０１３０】 ４−［２−（５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニル）エチル
］安息香酸（ＧＫ５４） ＭｅＯＨ２０ｍｌ中のＧＫ４９（０．０９ｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を室温及び
大気圧で炭素上に担持された１０％パラジウム０．０３ｇを介して６時間水素化
する。触媒を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。揮発性物質を減圧で蒸発させ、残留
物をシリカゲルクロマトグラフィー［ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］によっ
て精製して、ＧＫ５４０．０５２ｇ（５７％）が得られる。
］安息香酸（ＧＫ５４） ＭｅＯＨ２０ｍｌ中のＧＫ４９（０．０９ｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を室温及び
大気圧で炭素上に担持された１０％パラジウム０．０３ｇを介して６時間水素化
する。触媒を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。揮発性物質を減圧で蒸発させ、残留
物をシリカゲルクロマトグラフィー［ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（５：１）］によっ
て精製して、ＧＫ５４０．０５２ｇ（５７％）が得られる。
【０１３１】
【外４５】
【０１３２】 メチル４−（３−（Ｎ−メチルピロリジン−２−イル）ピリジン−５−イルエチ
ル］ベンゾエート（ＹＨ２２） ＭｅＯＨ１０ｍｌ中にＹＨ１９（０．１５ｇ，０．４６８ｍｍｏｌ）及びＰｄ
（Ｃ）（１０％、２０ｍｇ）を有する混合物を大気圧及び室温で１日間水素化す
る。触媒をセライトによって濾過して除去し、濾液を濃縮する。残留物をクロマ
トグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（６０：１）］によって精製し
て、ＹＨ２２０．１５ｇ（９５％）が得られる。
ル］ベンゾエート（ＹＨ２２） ＭｅＯＨ１０ｍｌ中にＹＨ１９（０．１５ｇ，０．４６８ｍｍｏｌ）及びＰｄ
（Ｃ）（１０％、２０ｍｇ）を有する混合物を大気圧及び室温で１日間水素化す
る。触媒をセライトによって濾過して除去し、濾液を濃縮する。残留物をクロマ
トグラフィー［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（６０：１）］によって精製し
て、ＹＨ２２０．１５ｇ（９５％）が得られる。
【０１３３】
【外４６】
【０１３４】 ２−エチニル−５−（１−メチル−２−ピロリジニル）ピリジン（ＧＫ５８） ＧＫ５５（０．３ｇ，１．２３ｍｍｏｌ）及び鉱油中の６０％分散液としてＮ
ａＨ（０．０１ｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を乾燥トルレン（５０ｍｌ）に溶解する
。攪拌された溶液を留出物の沸点が１１０℃に達するまで徐々に蒸留する（留出
物約２５ｍｌが集められる）。トルエンの残留物を減圧で蒸発させる。残留物を
クロマトグラフィー分離し［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］、
褐色油状物としてＧＫ５８０．２ｇ（８７％）が得られる。
ａＨ（０．０１ｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を乾燥トルレン（５０ｍｌ）に溶解する
。攪拌された溶液を留出物の沸点が１１０℃に達するまで徐々に蒸留する（留出
物約２５ｍｌが集められる）。トルエンの残留物を減圧で蒸発させる。残留物を
クロマトグラフィー分離し［ＳｉＯ2 、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１０：１）］、
褐色油状物としてＧＫ５８０．２ｇ（８７％）が得られる。
【０１３５】
【外４７】
【０１３６】 ＧＫ５６及びＧＫ６０の合成（反応式８） ５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−２−ピリジニルプロピオール酸（ＧＫ
６０） ＴＨＦ（２０ｍｌ）中にＧＫ５８（０．１７５ｇ，０．９４ｍｍｏｌ）を有す
る溶液を−７８℃に冷却し、ＢｕＬｉ（１．６Ｍヘキサン溶液、０．６２ｍｌ，
０．９４ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を０．５時間−７８℃で攪拌し、つ
いでＣＯ2 ガスを添加する。−７８℃さらに１時間後、反応混合物を室温に加温
すさせる。ＴＨＦを減圧で蒸発させ、残留物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣ
ｌ3 ／ＭｅＯＨ（１：１）］によって精製する；収量０．２０ｇ（９０％）；
６０） ＴＨＦ（２０ｍｌ）中にＧＫ５８（０．１７５ｇ，０．９４ｍｍｏｌ）を有す
る溶液を−７８℃に冷却し、ＢｕＬｉ（１．６Ｍヘキサン溶液、０．６２ｍｌ，
０．９４ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を０．５時間−７８℃で攪拌し、つ
いでＣＯ2 ガスを添加する。−７８℃さらに１時間後、反応混合物を室温に加温
すさせる。ＴＨＦを減圧で蒸発させ、残留物を分取ＴＬＣ［シリカゲル、ＣＨＣ
ｌ3 ／ＭｅＯＨ（１：１）］によって精製する；収量０．２０ｇ（９０％）；
【０１３７】
【外４８】
【０１３８】 ５−（１−メチル−２−ピロリジニル）−３−ピリジニルプロピオール酸（ＧＫ
５６） ＧＫ６０の合成に関して記載した方法にしたがってこの化合物を３−エチニル
−５−（１−メチル−２−ピロリジニル）ピリジン7 から合成し、分取ＴＬＣ［
シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１：１）］によって精製した後ＧＫ５６が
８０％収率で得られる；
５６） ＧＫ６０の合成に関して記載した方法にしたがってこの化合物を３−エチニル
−５−（１−メチル−２−ピロリジニル）ピリジン7 から合成し、分取ＴＬＣ［
シリカゲル、ＣＨＣｌ3 ／ＭｅＯＨ（１：１）］によって精製した後ＧＫ５６が
８０％収率で得られる；
【０１３９】
【外４９】
【０１４０】 ＩＩＩ．種々のニコチン免疫原（ニコチン- リンカー- キャリヤー蛋白質）の調
製（反応式９） 巻き貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）へのカルボン酸のカップリングに関する一般的方
法 １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（Ｅ
ＤＣ）の溶液（９当量）及び蒸留Ｈ2 Ｏ( ５００μＬ）を、蒸留Ｈ2 Ｏ( ５００
μＬ）中に酸（１当量）を有する混合物に添加する。１０分後、蒸留Ｈ2 Ｏ（１
ｍｌ）中にＫＬＨ（酸と同一の量（ｍｇ））を有する混合物を添加する。反応混
合物を０℃で１０分間、ついで環境温度で一晩保つ。反応混合物のｐＨを反応の
間ｐＨ４．５−６で保つ。蛋白質結合体をカラムクロマトグラフィー［Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ、（ＰＤ−１０カラム）、蒸留Ｈ2 Ｏで溶離］によって精
製し、ついで凍結乾燥する。 ＫＬＨへのアミンのカップリングに関する一般的方法 ＫＬＨ（酸と同一の量（ｍｇ））及びＨ2 Ｏ( １ｍｌ）の混合物を、Ｈ2 Ｏ(
５００μＬ）中にアミン（１０ｍｇ）を有する混合物に０℃で添加する。Ｈ2 Ｏ
( ５００μＬ）中にＥＤＣ（９当量）を有する溶液を、反応混合物に添加し、混
合物を０℃で１０分間、ついで環境温度で一晩保つ。反応混合物のｐＨを反応の
間ｐＨ４．５−６で保つ。蛋白質結合体をカラムクロマトグラフィー［Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ、（ＰＤ−１０カラム）、蒸留Ｈ2 Ｏで溶離］によって精
製し、ついで凍結乾燥する。 反応式１．ニコチン免疫原の製造
製（反応式９） 巻き貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）へのカルボン酸のカップリングに関する一般的方
法 １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（Ｅ
ＤＣ）の溶液（９当量）及び蒸留Ｈ2 Ｏ( ５００μＬ）を、蒸留Ｈ2 Ｏ( ５００
μＬ）中に酸（１当量）を有する混合物に添加する。１０分後、蒸留Ｈ2 Ｏ（１
ｍｌ）中にＫＬＨ（酸と同一の量（ｍｇ））を有する混合物を添加する。反応混
合物を０℃で１０分間、ついで環境温度で一晩保つ。反応混合物のｐＨを反応の
間ｐＨ４．５−６で保つ。蛋白質結合体をカラムクロマトグラフィー［Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ、（ＰＤ−１０カラム）、蒸留Ｈ2 Ｏで溶離］によって精
製し、ついで凍結乾燥する。 ＫＬＨへのアミンのカップリングに関する一般的方法 ＫＬＨ（酸と同一の量（ｍｇ））及びＨ2 Ｏ( １ｍｌ）の混合物を、Ｈ2 Ｏ(
５００μＬ）中にアミン（１０ｍｇ）を有する混合物に０℃で添加する。Ｈ2 Ｏ
( ５００μＬ）中にＥＤＣ（９当量）を有する溶液を、反応混合物に添加し、混
合物を０℃で１０分間、ついで環境温度で一晩保つ。反応混合物のｐＨを反応の
間ｐＨ４．５−６で保つ。蛋白質結合体をカラムクロマトグラフィー［Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ、（ＰＤ−１０カラム）、蒸留Ｈ2 Ｏで溶離］によって精
製し、ついで凍結乾燥する。 反応式１．ニコチン免疫原の製造
【０１４１】
【化７】
【０１４２】 反応式２．６−アミノニコチン−リンカー分子の合成
【０１４３】
【化８】
【０１４４】 反応式３．５−アミノニコチン誘導体の合成
【０１４５】
【化９】
【０１４６】 反応式４．いくつかのリンカーの合成
【０１４７】
【化１０】
【０１４８】 反応式５．５−又は６−ブロモニコチンへの不飽和誘導体のパラジウム触媒によ
るカップリング反応
るカップリング反応
【０１４９】
【化１１】
【０１５０】 反応式６．エステルの加水分解
【０１５１】
【化１２】
【０１５２】 反応式７．三重結合の水素化
【０１５３】
【化１３】
【０１５４】 反応式８．ＧＫ５６及びＧＫ６０の合成
【０１５５】
【化１４】
【０１５６】 反応式９．ニコチン−リンカー−ＫＬＨ誘導体（ニコチン免疫原）の合成
【０１５７】
【化１５】
【０１５８】 実験の説明 材料及び方法 動物 雄性ウスター（Ｗｉｓｔｅｒ）ラットを標準実験室条件下で２〜３匹一組で飼
い、食餌及び水に無制限に近づけ１２ｈｒ明暗サイクル（０６００ｈｒでの明る
さ）下で維持される。
い、食餌及び水に無制限に近づけ１２ｈｒ明暗サイクル（０６００ｈｒでの明る
さ）下で維持される。
【０１５９】 免疫処置方法 ３つの免疫処置プロトコルを使用する： １．動物を５日間毎日免疫処置し、２日間休み、ついで再び５日間毎日免疫処置
する。各免疫注射は、生理食塩水０．１ｍｌ中の抗体１０μｇ（ニコチン−リン
カー- ＫＬＨ接合体）を含有し、胴体の背部首領域に皮下投与（ｓ．ｃ．）する
。コントロールには、生理食塩水０．１ｍｌ中のＫＬＨ１０μｇ又は生理食塩水
０．１ｍｌのみを注射する。 ２．動物は、ボラス注射で抗体（ニコチン−リンカー- ＫＬＨ結合体）１００μ
ｇ及びフロインド完全アジュバントを用いて免疫処置され、１１又は１４日目に
抗体（ニコチン−リンカー- ＫＬＨ結合体）１００μｇ及びフロインド不完全ア
ジュバントを含有するブースター注射を行う。これらの注射は０．４ｍｌで腹腔
内に行われる。コントロールにはフロインド完全アジュバント中のＫＬＨ１００
μｇ又はフロインド完全アジュバントのみを注射する。ブースター注射中にフロ
インド不完全アジュバントをフロインド完全アジュバントの代わりに使用する。
３．ニコチン自己管理された動物をボラス注射で抗体（ニコチン−リンカー- Ｋ
ＬＨ結合体）１００μｇ及びフロインド完全アジュバントを用いて免疫処置され
、７又は８日目に抗体（ニコチン−リンカー- ＫＬＨ接合体）１００μｇ及びフ
ロインド不完全アジュバントを含有するブースター注射を行う。これらの注射は
０．４ｍｌで腹腔内に行われる。
する。各免疫注射は、生理食塩水０．１ｍｌ中の抗体１０μｇ（ニコチン−リン
カー- ＫＬＨ接合体）を含有し、胴体の背部首領域に皮下投与（ｓ．ｃ．）する
。コントロールには、生理食塩水０．１ｍｌ中のＫＬＨ１０μｇ又は生理食塩水
０．１ｍｌのみを注射する。 ２．動物は、ボラス注射で抗体（ニコチン−リンカー- ＫＬＨ結合体）１００μ
ｇ及びフロインド完全アジュバントを用いて免疫処置され、１１又は１４日目に
抗体（ニコチン−リンカー- ＫＬＨ結合体）１００μｇ及びフロインド不完全ア
ジュバントを含有するブースター注射を行う。これらの注射は０．４ｍｌで腹腔
内に行われる。コントロールにはフロインド完全アジュバント中のＫＬＨ１００
μｇ又はフロインド完全アジュバントのみを注射する。ブースター注射中にフロ
インド不完全アジュバントをフロインド完全アジュバントの代わりに使用する。
３．ニコチン自己管理された動物をボラス注射で抗体（ニコチン−リンカー- Ｋ
ＬＨ結合体）１００μｇ及びフロインド完全アジュバントを用いて免疫処置され
、７又は８日目に抗体（ニコチン−リンカー- ＫＬＨ接合体）１００μｇ及びフ
ロインド不完全アジュバントを含有するブースター注射を行う。これらの注射は
０．４ｍｌで腹腔内に行われる。
【０１６０】 Ｅｌｉｓａ（エライサ） Ｅｌｉｓａプレート（Ｓｉｇｍａ又はＬａｂｓｙｓｔｅｍｓ）をニコチン−リ
ンカーＢＳＡ結合体で被覆する。必要に応じて、このプレ−トをＰＢＳ中に３％
ＢＳＡを有する溶液を用いて塞ぐ。広範な洗浄後、血清を種々の希釈（１：１〜
１：３９０６２５）で添加し、プレートを３７℃でインキュベートする。プレー
トを再び洗浄し、２番目の抗体、アルカリ性ホスファターゼ接合ヤギ抗- ラット
ＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）の添加後、更に３７℃でインキュベートする。酵素基質ｐ
−ニトロフェニルリン酸塩（ｐ−ＮＰＰ）（Ｓｉｇｍａ）は４０５ｎｍで分光光
度で読み取ることができる着色された最終生成物を産生する。
ンカーＢＳＡ結合体で被覆する。必要に応じて、このプレ−トをＰＢＳ中に３％
ＢＳＡを有する溶液を用いて塞ぐ。広範な洗浄後、血清を種々の希釈（１：１〜
１：３９０６２５）で添加し、プレートを３７℃でインキュベートする。プレー
トを再び洗浄し、２番目の抗体、アルカリ性ホスファターゼ接合ヤギ抗- ラット
ＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）の添加後、更に３７℃でインキュベートする。酵素基質ｐ
−ニトロフェニルリン酸塩（ｐ−ＮＰＰ）（Ｓｉｇｍａ）は４０５ｎｍで分光光
度で読み取ることができる着色された最終生成物を産生する。
【０１６１】 競合Ｅｌｉｓａ 競合Ｅｌｉｓａを血清の一元希釈（１：３１２５）を使用する以外は、通常の
Ｅｌｉｓａのように行われる。ニコチン、コチニン、ノルニコチン、ニコチン−
Ｎ−オキシド及びナイアシンそれぞれを競合物として使用する。 ＶＴＡ中のドパミンニューロンの電気生理学的単一細胞記録 実験の間、外科的な麻酔状態を維持する必要がある場合にさらに投与される薬
用量と共に抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ，腹腔内）を用いてラットを麻酔
する。体温を温度自動調節で調節された加熱パッドを用いて３７℃で保つ。気管
カニューレ及び頸静脈カテーテルを、動物がＤａｖｉｄＫｏｐｆ定位装置中で載
せられる前に挿入する。穴を記録域の上、すなわちラムダから測定されるＡｐ＋
３．０及びＭＬ±０．７ｍｍにあける（Ｐａｘｉｎｏｓ及びＷａｔｓｏｎ、１９
８６）。電極をオメガドットガラスキャピラリーから引き、２Ｍ酢酸ナトリウム
中のＰｏｎｔａｍｉｎｅＳｋｙＢｌｕｅ（２％）で満たす。チップを顕微鏡下で
細分し、１３５Ｈｚで測定された約２．０ＭΩのインピーダンスを生じる。推定
されるＤＡニューロンが前もって組織化学的に同定されたＤＡニューロンの特性
（Ｇｒａｃｅ及びＢｕｎｎｅｙ、１９８３；Ｗａｎｇ、１９８１）、すなわち２
．０ｍｓ以上続く典型的な三相スパイク（triphasic spike)波形及び１〜１０Ｈ
ｚの基礎放電（ｂａｓａｌｆｉｒｉｎｇ）率で脳表面から７．５−８．５ｍｍに
見出される。細胞外作用電位を増幅し、判別し、オシロスコープ及びオーディオ
モニターで記録する。判別されたスパイクをＣａｍｂｒｉｄｇｅＥｌｅｃｔｒｏ
ｎｉｃｓｄｅｓｉｇｎ１４０１ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して、Ｓｐｉｋｅ２ソフ
トウエアーを有するＡＳＴＢｒａｖｏＬＣ４／６６ｄコンピューターに供給する
。ＤＡニューロンの一時の放電パターンの分析を、オフラインで当社の研究所で
開発された慣用の分析スクリプトを用いて行う。バースト放電（ｂｕｒｓｔｆｉ
ｒｉｎｇ）、放電率及び種々の係数を２５０の連続インタースパイク（ｉｎｔｅ
ｒ−ｓｐｉｋｅ）間隔の間で算出する。バーストの開始を、８０ｍｓよりも短い
間隔として及びバースト終了を１６０ｍｓを超える次の間隔で限定する（Ｇｒａ
ｃｅ及びＢｕｎｎｅｙ、１９８４）。バースト放電をバースト中のスパイクとス
パイク総数の間の百分率として定量化する。種々の係数を標準偏差とインタース
パイク間隔の平均値の間の百分率として定義する（Ｗｅｒｎｅｒ及びＭｏｕｎｔ
ｃａｓｔｌｅ、１９６３）。
Ｅｌｉｓａのように行われる。ニコチン、コチニン、ノルニコチン、ニコチン−
Ｎ−オキシド及びナイアシンそれぞれを競合物として使用する。 ＶＴＡ中のドパミンニューロンの電気生理学的単一細胞記録 実験の間、外科的な麻酔状態を維持する必要がある場合にさらに投与される薬
用量と共に抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ，腹腔内）を用いてラットを麻酔
する。体温を温度自動調節で調節された加熱パッドを用いて３７℃で保つ。気管
カニューレ及び頸静脈カテーテルを、動物がＤａｖｉｄＫｏｐｆ定位装置中で載
せられる前に挿入する。穴を記録域の上、すなわちラムダから測定されるＡｐ＋
３．０及びＭＬ±０．７ｍｍにあける（Ｐａｘｉｎｏｓ及びＷａｔｓｏｎ、１９
８６）。電極をオメガドットガラスキャピラリーから引き、２Ｍ酢酸ナトリウム
中のＰｏｎｔａｍｉｎｅＳｋｙＢｌｕｅ（２％）で満たす。チップを顕微鏡下で
細分し、１３５Ｈｚで測定された約２．０ＭΩのインピーダンスを生じる。推定
されるＤＡニューロンが前もって組織化学的に同定されたＤＡニューロンの特性
（Ｇｒａｃｅ及びＢｕｎｎｅｙ、１９８３；Ｗａｎｇ、１９８１）、すなわち２
．０ｍｓ以上続く典型的な三相スパイク（triphasic spike)波形及び１〜１０Ｈ
ｚの基礎放電（ｂａｓａｌｆｉｒｉｎｇ）率で脳表面から７．５−８．５ｍｍに
見出される。細胞外作用電位を増幅し、判別し、オシロスコープ及びオーディオ
モニターで記録する。判別されたスパイクをＣａｍｂｒｉｄｇｅＥｌｅｃｔｒｏ
ｎｉｃｓｄｅｓｉｇｎ１４０１ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して、Ｓｐｉｋｅ２ソフ
トウエアーを有するＡＳＴＢｒａｖｏＬＣ４／６６ｄコンピューターに供給する
。ＤＡニューロンの一時の放電パターンの分析を、オフラインで当社の研究所で
開発された慣用の分析スクリプトを用いて行う。バースト放電（ｂｕｒｓｔｆｉ
ｒｉｎｇ）、放電率及び種々の係数を２５０の連続インタースパイク（ｉｎｔｅ
ｒ−ｓｐｉｋｅ）間隔の間で算出する。バーストの開始を、８０ｍｓよりも短い
間隔として及びバースト終了を１６０ｍｓを超える次の間隔で限定する（Ｇｒａ
ｃｅ及びＢｕｎｎｅｙ、１９８４）。バースト放電をバースト中のスパイクとス
パイク総数の間の百分率として定量化する。種々の係数を標準偏差とインタース
パイク間隔の平均値の間の百分率として定義する（Ｗｅｒｎｅｒ及びＭｏｕｎｔ
ｃａｓｔｌｅ、１９６３）。
【０１６２】 ニコチンを各段階で薬用量を倍にして投薬量範囲３〜１００μｇ／ｋｇ（累積
薬用量）で静脈内に投与する。ニコチン注射を３−５分ごとに行う。各実験の最
後に、５μＡの負電流を電極によって１０分間流し、記録部位を印す（Ｌｏｄｇ
ｅ等、１９７４）。動物を抱水クロラールの過剰投与量で殺害し、脳を２５％シ
ョ糖中の５％ホルムアルデヒド中で保存し、その後厚さ５０μｍの断片にミクロ
トーム上でスライスし、記録部位の組織学的証明にニュートラルレッドで着色す
る。ＶＴＡ内にある記録部位のみがこのプロトコルで容認される。
薬用量）で静脈内に投与する。ニコチン注射を３−５分ごとに行う。各実験の最
後に、５μＡの負電流を電極によって１０分間流し、記録部位を印す（Ｌｏｄｇ
ｅ等、１９７４）。動物を抱水クロラールの過剰投与量で殺害し、脳を２５％シ
ョ糖中の５％ホルムアルデヒド中で保存し、その後厚さ５０μｍの断片にミクロ
トーム上でスライスし、記録部位の組織学的証明にニュートラルレッドで着色す
る。ＶＴＡ内にある記録部位のみがこのプロトコルで容認される。
【０１６３】 電圧電流法 ドパミンの電圧電流測定をパルジリン(pargyline) で前処理されたラットで行
い、抱水クロラール麻酔下で保つ。炭素繊維電極の活性部分は厚さ１２μｍ及び
長さ５００μｍである。電極をＧｏｎｏｎ（１９８８）によって記載されている
ように調製し、処理する。電極をＮＡＣshell に関して座標（ｃｏｏｒｄｉｎａ
ｔｅｓ）：ＡＰ＝＋１．６及びＭＬ＝±０．８に位置づける（Ｐａｘｉｏｎｓ及
びＷａｔｓｏｎ、１９８６）。電極のチップを大脳皮質表面下６．５−７．０ｍ
ｍに置き、示差正常パルス(differential normal puls)電圧電流法を使用して、
前記パラメーターと共に毎分ボルタンモグラムを記録する（Ｇｏｎｏｎ等、１９
８４及びＧｏｎｏｎ、１９８８）。安定なベースラインを観察する場合、動物に
生理食塩水を静脈内注射し、その後ニコチンを増加する量で（６、１２、２４及
び４８μｇ／ｋｇ）を１０分毎に投与する。
い、抱水クロラール麻酔下で保つ。炭素繊維電極の活性部分は厚さ１２μｍ及び
長さ５００μｍである。電極をＧｏｎｏｎ（１９８８）によって記載されている
ように調製し、処理する。電極をＮＡＣshell に関して座標（ｃｏｏｒｄｉｎａ
ｔｅｓ）：ＡＰ＝＋１．６及びＭＬ＝±０．８に位置づける（Ｐａｘｉｏｎｓ及
びＷａｔｓｏｎ、１９８６）。電極のチップを大脳皮質表面下６．５−７．０ｍ
ｍに置き、示差正常パルス(differential normal puls)電圧電流法を使用して、
前記パラメーターと共に毎分ボルタンモグラムを記録する（Ｇｏｎｏｎ等、１９
８４及びＧｏｎｏｎ、１９８８）。安定なベースラインを観察する場合、動物に
生理食塩水を静脈内注射し、その後ニコチンを増加する量で（６、１２、２４及
び４８μｇ／ｋｇ）を１０分毎に投与する。
【０１６４】 例 現在、１６個の異なるニコチン免疫原を試験管内法及び生体内法の双方で免疫
原性に関してテストする。
原性に関してテストする。
【０１６５】 例１ Ｅｌｉｓａ プロトコル２にしたがってＧＫ５−ＫＬＨで免疫処置されたラットを使用する
。Ｅｌｉｓａ試験用血液サンプルを最初のボラス免疫処置７又は９日後に集める
。Ｅｌｉｓａ抗体力価は１：１００〜１：１５０００に及ぶ（図１参照）。血液
サンプルをブースター免疫処置後１〜４日目に再度集める。この第二免疫処置は
１：３０００〜１：１５５００の力価を生じる（図２参照）。
。Ｅｌｉｓａ試験用血液サンプルを最初のボラス免疫処置７又は９日後に集める
。Ｅｌｉｓａ抗体力価は１：１００〜１：１５０００に及ぶ（図１参照）。血液
サンプルをブースター免疫処置後１〜４日目に再度集める。この第二免疫処置は
１：３０００〜１：１５５００の力価を生じる（図２参照）。
【０１６６】 例２ 免疫処置プロトコル２を用いてＧＫ５−ＫＬＨで免疫処置後、実験動物からの
血清を集め、その特異抗体力価は主として１：５００〜１：３０００（Ｅｌｉｓ
ａ法で測定される）である。アドジュバントを含有する免疫処置プロトコル２は
特異抗体のより高い力価、主として１：３０００〜１：１５０００を生じる（図
３参照）。すべてのテストされたニコチン免疫原、たとえばＧＫ５−ＫＬＨ、Ｇ
Ｋ６０−ＫＬＨ、ＹＫ６−ＫＬＨ、ＧＫ８４−ＫＬＨ及びＧＫ８０−ＫＬＨをプ
ロトコル２を用いて免疫処置する。この力価は少なくとも１ヶ月間安定である。
血清を集め、その特異抗体力価は主として１：５００〜１：３０００（Ｅｌｉｓ
ａ法で測定される）である。アドジュバントを含有する免疫処置プロトコル２は
特異抗体のより高い力価、主として１：３０００〜１：１５０００を生じる（図
３参照）。すべてのテストされたニコチン免疫原、たとえばＧＫ５−ＫＬＨ、Ｇ
Ｋ６０−ＫＬＨ、ＹＫ６−ＫＬＨ、ＧＫ８４−ＫＬＨ及びＧＫ８０−ＫＬＨをプ
ロトコル２を用いて免疫処置する。この力価は少なくとも１ヶ月間安定である。
【０１６７】 例３ 競合Ｅｌｉｓａ 競合Ｅｌｉｓａを免疫処置されたラットからの血清サンプルで行う。ニコチン
、代謝産物コチニン、ノルニコチン、ニコチン−Ｎ−オキシド及びナイアシン（
非代謝産物）を競合物として使用する。競合物濃度は６×１０-10 〜６×１０-6 Ｍに及ぶ。プロトコル２を用いて免疫処置後、免疫原はコチニン、ニコチン−Ｎ
−オキシド及びナイアシンに対するよりもニコチンに対して特異的である抗体を
生じる（図４参照）。ほとんどの場合、ニコチン及びノルニコチンに対する特異
性は類似する。コチニンは主要なニコチン代謝産物（８０％）であり（Ｂｅｎｏ
ｗｉｔｚ等、１９９４）、したがってニコチン抗体はコチニンに対するよりもニ
コチンに対して大きい特異性を有することが重要である。一方、ニコチンの０．
４％しかノルニコチンへ代謝されない（Ｂｅｎｏｗｉｔｚ等、１９９４）という
事実からみれば、ニコチン及びノルニコチンに対する特異性での類似性は顕著な
役割を果さないはずである。
、代謝産物コチニン、ノルニコチン、ニコチン−Ｎ−オキシド及びナイアシン（
非代謝産物）を競合物として使用する。競合物濃度は６×１０-10 〜６×１０-6 Ｍに及ぶ。プロトコル２を用いて免疫処置後、免疫原はコチニン、ニコチン−Ｎ
−オキシド及びナイアシンに対するよりもニコチンに対して特異的である抗体を
生じる（図４参照）。ほとんどの場合、ニコチン及びノルニコチンに対する特異
性は類似する。コチニンは主要なニコチン代謝産物（８０％）であり（Ｂｅｎｏ
ｗｉｔｚ等、１９９４）、したがってニコチン抗体はコチニンに対するよりもニ
コチンに対して大きい特異性を有することが重要である。一方、ニコチンの０．
４％しかノルニコチンへ代謝されない（Ｂｅｎｏｗｉｔｚ等、１９９４）という
事実からみれば、ニコチン及びノルニコチンに対する特異性での類似性は顕著な
役割を果さないはずである。
【０１６８】 例４ 電気生理学 ラット腹側被蓋域ドパミンニューロンからの電気生理学的単細胞記録から、ニ
コチンが静脈内投与された場合（３−４８μｇ／ｋｇ）、コントロール（ＫＬＨ
免疫処置された）ラット中のドパミン細胞は変動係数によって評価されるように
平均放電率及びバースト放電（図５参照）における増加及び放電パターンの緩和
（deregularization) で一般に応答する。テストされたラット６匹のうちの５匹
はニコチンに応答する。その変化は６μｇ／ｋｇほど低いニコチン薬用量ですで
に明らかである。ラット６匹のうちの３匹で、活性化は薬剤の投与後直ちにニュ
ーロン性活性の一時の（すなわち＜１分）、しかし顕著な増加を伴う。これらの
他に、ニコチン投与前にバーストを示さない２つの細胞はニコチン投与（６μｇ
／ｋｇ）後に急激なパターンに変わる。
コチンが静脈内投与された場合（３−４８μｇ／ｋｇ）、コントロール（ＫＬＨ
免疫処置された）ラット中のドパミン細胞は変動係数によって評価されるように
平均放電率及びバースト放電（図５参照）における増加及び放電パターンの緩和
（deregularization) で一般に応答する。テストされたラット６匹のうちの５匹
はニコチンに応答する。その変化は６μｇ／ｋｇほど低いニコチン薬用量ですで
に明らかである。ラット６匹のうちの３匹で、活性化は薬剤の投与後直ちにニュ
ーロン性活性の一時の（すなわち＜１分）、しかし顕著な増加を伴う。これらの
他に、ニコチン投与前にバーストを示さない２つの細胞はニコチン投与（６μｇ
／ｋｇ）後に急激なパターンに変わる。
【０１６９】 これとは対照的に、免疫処置プリトコル１を用いてＧＫ５−ＫＬＨで免疫処置
されたラット４匹のうち１のみがドパミンニューロン性活性の増加でニコチンに
応答する。さらに、ニューロン性活性の一時の増加は観察されないず、ニコチン
の極めて高い薬用量を投与したとしても急激でない放電パターンの急激な放電パ
ターンへの変化も観察されない（図６参照）。
されたラット４匹のうち１のみがドパミンニューロン性活性の増加でニコチンに
応答する。さらに、ニューロン性活性の一時の増加は観察されないず、ニコチン
の極めて高い薬用量を投与したとしても急激でない放電パターンの急激な放電パ
ターンへの変化も観察されない（図６参照）。
【０１７０】 一般に、したがって免疫処置されたラットは、腹側被蓋域ドパミンニューロン
活性へのニコチンの活性化作用にあまり敏感性を示さない。特に、免疫処置され
たラットはニコチン様非免疫処置されたラットのように低い薬用量（すなわち＜
１２μｇ／ｋｇ）によって活性化されず、そして細胞はコントロール動物に見ら
れるように、ニコチンの全身(systemic)注射に応じて即座の活性化にも応答しな
い。
活性へのニコチンの活性化作用にあまり敏感性を示さない。特に、免疫処置され
たラットはニコチン様非免疫処置されたラットのように低い薬用量（すなわち＜
１２μｇ／ｋｇ）によって活性化されず、そして細胞はコントロール動物に見ら
れるように、ニコチンの全身(systemic)注射に応じて即座の活性化にも応答しな
い。
【０１７１】 結論として、これらの実験から、タバコ１又は２本を吸うことによって摂取さ
れたヒトと同等の少量のニコチン量を投与した後、使用された免疫原はメソリン
ビック(mesolimbic)ドパミンニューロン中でバースト放電の急性刺激を大いに予
防するのに有効であることが実証される。すべての蓋然性において、たとえば脳
の報償システムへのタバコの一服の急性効果が喫煙において増強単位に相当する
ことから、この化合物はまったく有望であるようにみえる。
れたヒトと同等の少量のニコチン量を投与した後、使用された免疫原はメソリン
ビック(mesolimbic)ドパミンニューロン中でバースト放電の急性刺激を大いに予
防するのに有効であることが実証される。すべての蓋然性において、たとえば脳
の報償システムへのタバコの一服の急性効果が喫煙において増強単位に相当する
ことから、この化合物はまったく有望であるようにみえる。
【０１７２】 例５ 電圧電流法 コントロールで、ニコチン投与は中隔側坐核でＤＡ−産生の薬用量依存増加を
生じる。これに反して、能動免疫は、ＤＡ−流出へのニコチン作用を変化させる
中隔側坐核（図７ａ，ｂ及びｃ）。免疫原、すなわちニコチン性ハプテンの特性
にしたがって、ドパミン産生へのニコチンの作用はベースラインレベルに抑制す
ることができるか（図７ａ）又はそれよりむしろ逆説的にいっても増加させるこ
とができる（図７ｂ）。ニコチンでの急性実験３週間前にすでに免疫が生じる研
究（図７ｃ）で、動物はメソリンビックドパミンシステム、すなわち第一報酬経
路への高い薬用量でさえニコチンの中枢作用にまだ著しい減少を示す。これはニ
コチンの自己抑制及びその依存傾向を決定的に立証する。
生じる。これに反して、能動免疫は、ＤＡ−流出へのニコチン作用を変化させる
中隔側坐核（図７ａ，ｂ及びｃ）。免疫原、すなわちニコチン性ハプテンの特性
にしたがって、ドパミン産生へのニコチンの作用はベースラインレベルに抑制す
ることができるか（図７ａ）又はそれよりむしろ逆説的にいっても増加させるこ
とができる（図７ｂ）。ニコチンでの急性実験３週間前にすでに免疫が生じる研
究（図７ｃ）で、動物はメソリンビックドパミンシステム、すなわち第一報酬経
路への高い薬用量でさえニコチンの中枢作用にまだ著しい減少を示す。これはニ
コチンの自己抑制及びその依存傾向を決定的に立証する。
【０１７３】 実験の説明に開示された文献
【０１７４】
【外５０】
【図１】 図１は、ＥｌｉｚａＧＫ５−ＫＬＨ測定を示す。
【図２】 図２は、ＥｌｉｚａＧＫ５−ＫＬＨ（ブースター（追加抗原）免疫
）測定である。
）測定である。
【図３】 図３は、免疫ラットからの血清のＥｌｉｚａ力価測定である。
【図４】 図４は、競合Ｅｌｉｚａである。
【図５】 図５は、コントロールラットでのＶＴＡＤＡニューロンからの電気
生理学的単個細胞記録である。
生理学的単個細胞記録である。
【図６】 図６は、免疫ラットでのＶＴＡＤＡニューロンからの電気生理学的
単個細胞記録である。
単個細胞記録である。
【図７ａ】図７ａは、免疫原ＧＫ８４−ＫＬＨを用いる能動免疫による中隔側
坐核中でのニコチン誘発されたドパミン放出の効果的抑制を示す。
坐核中でのニコチン誘発されたドパミン放出の効果的抑制を示す。
【図７ｂ】図７ｂは、免疫原ＧＫ８０−ＫＬＨを用いる能動免疫によるニコチ
ン投与後の中隔側坐核中でのドパミン流出の増加を示す。
ン投与後の中隔側坐核中でのドパミン流出の増加を示す。
【図７ｃ】図７ｃは、３週間以上安定な、ニコチン誘発されたドパミン産出で
の免疫原ＹＨ６−ＫＬＨによる免疫効果を示す。
の免疫原ＹＨ６−ＫＬＨによる免疫効果を示す。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年８月２４日（２０００．８．２４）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【化１】 ［式中、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 Ｚは-NH-又は-CO-であるか、あるいは Ｘは-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 Ｚは-NH-又は-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質を含有する
ニコチン免疫原。
ニコチン免疫原。
【化２】 ［式中、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 Ｚは-NH-又は-CO-であるか、あるいは Ｘは-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 Ｚは-NH-又は-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質。
【化３】 ［式中、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 Ｚは-NH-又は-CO-であるか、あるいは Ｘは-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 Ｚは-NH-又は-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質をニコチン
分子に結合する抗体を誘発する抗体誘発量で上記個体に投与することを特徴とす
る、上記免疫学的処置法。
分子に結合する抗体を誘発する抗体誘発量で上記個体に投与することを特徴とす
る、上記免疫学的処置法。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，Ｚ Ｗ Ｆターム(参考） 4C085 AA05 AA38 BA10 BA12 BA19 BA21 BB07 CC07 EE01 EE06 FF03 FF20 GG01 4H045 AA11 BA50 BA51 CA11 CA50 DA86 EA20 FA51
Claims (9)
- 【請求項１】式 【化１】 ［式中、 Ｚが-NH-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、 そしてＺが-CO-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 そしてＹが-(CH2)k -(式中、ｋ＝０〜２０）である場合、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｚは-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質を含有する
ニコチン免疫原。 - 【請求項２】キャリヤー蛋白質が巻き貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風ト
キソイド、ジフテリアトキソイド、非毒性突然変異ジフテリアトキソイドＣＲＭ 197 、髄膜炎菌からの外膜蛋白複合体（ＯＭＰＣ）、熱に不安定な大腸菌（Esch
erichia coli) のＢサブユニット及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa) （ｒＥ
ＰＡ）からの組換えエキソプロテインより成る群から選ばれる、請求項１記載の
ニコチン免疫原。 - 【請求項３】式 【化２】 [ 式中、 Ｚが-NH-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、 そしてＺが-CO-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 そしてＹが-(CH2)k -(式中、ｋ＝０〜２０）である場合、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｚは-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質。
- 【請求項４】キャリヤー蛋白質が巻き貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）、破傷風ト
キソイド、ジフテリアトキソイド、非毒性突然変異ジフテリアトキソイドＣＲＭ 197 、髄膜炎菌からの外膜蛋白複合体（ＯＭＰＣ）、熱に不安定な大腸菌（Esch
erichia coli) のＢサブユニット及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa) （ｒＥ
ＰＡ）からの組換えエキソプロテインより成る群から選ばれる、請求項３記載の
５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質。 - 【請求項５】薬剤として使用するための請求項３又は４記載の５−又は６−
ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質。 - 【請求項６】請求項４又は５記載の５−又は６−ニコチニル−リンカー- キ
ャリヤー蛋白質及び薬学的に容認された賦形剤を含有する薬学的調合物。 - 【請求項７】アジュバントを更に含有する、請求項６記載の薬学的調合物。
- 【請求項８】式 【化３】 [式中、 Ｚが-NH-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-NH-又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)k - 又は-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｋ＝０〜２０、ｍ＝０〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 但し、Ｙが-(CH2)5-であり、Ｚが-NH-である場合、Ｘは-NH-CO- ではない、 そしてＺが-CO-である場合、 Ｘは-NH-CO- 又は-C≡C-又は-C=C- 又は-CH2- であり、 Ｙは-(CH2)m -C6H10-(CH2)n - 又は-(CH2)m -C6H4-(CH2) n - ( 式中、ｍ＝０ 〜６、そしてｎ＝０〜６）であり、 そしてＹが-(CH2)k -(式中、ｋ＝０〜２０）である場合、 Ｘは-C≡C-又は-C=C- であり、 Ｚは-CO-である。］ で表わされる５−又は６−ニコチニル−リンカー- キャリヤー蛋白質をニコチン
分子に結合する抗体を誘発する抗体誘発量で個体に投与することを特徴とする、
個体への害の減少を達成するためにタバコ製品によるニコチン依存症を予防及び
( 又は) 治療する免疫学的処置法。 - 【請求項９】個体においてニコチン分子に結合する抗体の力価を増加させる
ために、投与を時折繰り返す、請求項８記載のニコチン依存症の処置法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9801923A SE9801923D0 (sv) | 1998-05-29 | 1998-05-29 | Nicotine vaccine |
| SE9801923-5 | 1998-05-29 | ||
| PCT/SE1999/000920 WO1999061054A1 (en) | 1998-05-29 | 1999-05-28 | Nicotine immunogen |
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|---|---|
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| CA (1) | CA2333582C (ja) |
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