JP2002516111A - ファルネシル向性エンドペプチダーゼに関連する新規核酸及びポリペプチド - Google Patents

ファルネシル向性エンドペプチダーゼに関連する新規核酸及びポリペプチド

Info

Publication number
JP2002516111A
JP2002516111A JP2000551012A JP2000551012A JP2002516111A JP 2002516111 A JP2002516111 A JP 2002516111A JP 2000551012 A JP2000551012 A JP 2000551012A JP 2000551012 A JP2000551012 A JP 2000551012A JP 2002516111 A JP2002516111 A JP 2002516111A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
rce1
nucleic acid
isolated
polypeptide
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2000551012A
Other languages
English (en)
Inventor
チョイ，ユン−ジュン
ケー． ノース，アン
エー． マーティン，ジョージ
ボラッグ，ガイディオン
Original Assignee
オニックス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by オニックス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド filed Critical オニックス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド
Publication of JP2002516111A publication Critical patent/JP2002516111A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Abstract

(57)【要約】 本発明は、哺乳動物ファルネシル血性エンドペプチターゼ、特にヒト又はマウスから得ることができるものに関する。そのポリペプチド及び対応する核酸は、種々の方法において、例えば診断プローブのために、エンドペプチダーゼ活性及びその発現を妨害する剤を同定するためのアッセイにおいて、及びそのポリペプチドが関連する癌及び他の経路を治療するための剤のスクリーニングのために役立つ。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の背景 Ｃ末端ＣＡＡＸモチーフを含む真核生物タンパク質は、成熟した生物学的に活
性なポリペプチドを導くプレニル化、タンパク質分解、及びメチル化に関する一
連の修飾を受けている。Ｒａｓは修飾プレニル化タンパク質の一例である。ファ
ルネシル向性エンドペプチダーゼは、プレニル化タンパク質をプロセッシングす
ることに関連する酵素の１つのクラスである。それらのｒａｓシグナル伝達経路
との関連性のため、ファルネシル向性エンドペプチダーゼは、細胞増殖疾患を含
む種々の細胞過程において根本的な役割を果たす。
【０００２】 発明の記載 本発明は、ファルネシル向性エンドペプチダーゼの全ての態様、特にヒト又は
マウスＲＣＥ１のような哺乳動物ファルネシル向性エンドペプチダーゼに関する
。本発明の一態様は、単離された哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチド又はそのフラグ
メント、哺乳動物ＲＣＥ１をコードする単離された核酸又はそのフラグメント、
並びにこれらポリペプチド及び核酸の誘導体である、関連するペプチド、例えば
哺乳動物ＲＣＥ１核酸とのハイブリダイゼーションにより得ることができる核酸
によりコードされるポリペプチドは別の本発明の特徴である。
【０００３】 本発明は、このようなポリペプチド、核酸又はそれらの誘導体を、例えば治療
、診断において、及び調査道具として、例えば哺乳動物ＲＣＥ１を調節する化合
物を同定するために用いる方法にも関する。本発明は、ＲＣＥ１のリガンド、例
えば抗体、核酸アプタマー（ａｐｔａｍｅｒｓ）、及び基質にも関する。 発明の詳細な記載 本発明によれば、新規ポリペプチド並びに哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチドをコ
ードする核酸が記載される。本明細書に用いる場合、ＲＣＥ１ポリペプチドは、
天然で得ることができ、そして次のうち：エンドプロテアーゼ活性、基質結合活
性、形質転換促進活性、又はＲＣＥ１特異的抗原活性の少くとも１つを有するア
ミノ酸配列を有する。
【０００４】 ＲＣＥ１のエンドプロテアーゼ活性は、例えば、ＲＣＥ１が基質を、内部アミ
ノ酸認識部位で、タンパク質分解又は酵素的に開裂することができることを意味
する。好ましくは、エンドプロテアーゼ活性化、ＣＡＡＸモチーフ（式中、Ａは
いずれかの脂肪族アミノ酸であり、Ｘはいずれかのアミノ酸である）についてで
ある。この場合、基質の完全な開裂は２つのフラグメントを作り出し、この各々
のフラグメントは開裂部位のアミノ酸残基により規定される末端、例えば−Ｃ−
ＣＯＯＨ及び−ＮＨ2 −Ａを有する。好ましくは、エンドプロテアーゼ活性は、
基質（例えばシステイン残基において）、例えばコレステロール中間体、例えば
１５−炭素ファルネシル又は２０−炭素ゲラニルゲラニル成分への脂質への結合
に依存する。
【０００５】 基質結合は、一般に、酵素触媒における最初のステップであると考えられてい
る。なぜならリガンドとして機能する基質は、酵素がその触媒反応を行うことを
可能にするために酵素表面に最初に結合しなければならないからである。この酵
素表面は酵素の活性部位と呼ぶことができる。基質の酵素表面への結合は酵素と
の多重の相互作用、例えば酵素を含む１又は複数のアミノ酸及び／又は官能基と
の化学的結合に関連し得る。本明細書に用いる基質結合活性は、基質が酵素に結
合することを意味する。酵素への結合は、それへの天然の基質を保持する１又は
複数の相互作用により達成することができるが；ポリペプチドはそれが天然の相
互作用の数及び質より少なく基質を保持する場合に基質結合活性を有し得る。基
質結合及び触媒活性は、互いから分離することができる。これにより、本発明に
よるＲＣＥ１ポリペプチドは、基質結合活性を有し得るが、エンドプロテアーゼ
活性を有さない。基質結合は、任意に、基質の触媒を達成するために、活性部位
に競合的に又は非競合的に結合するために、酵素に不可逆的に結合するために、
触媒活性を失わせる（例えばそれが自殺基質である場合）ため等に有効であり得
る。本発明の好ましい態様において、基質はＣＡＡＸモチーフを含む。
【０００６】 用語“形質転換促進活性”は、細胞の形質転換された表現型を作り出す、例え
ば細胞分割を誘導し、足場独立性成長を誘導し、ｒａｓ活性を増加させる等の活
性を意味する。その効果は、部分的又は不完全であり得る。例えば、細胞内での
ＲＣＥ１遺伝子の発現は、形質転換された表現型を引きおこし得るか、又はそれ
は既に形質転換された細胞の表現型を増強し得る。
【０００７】 免疫原活性は、そのポリペプチドがＲＣＥ１に特異的な免疫応答を顕在化する
ことができることを意味する。免疫応答は、体液性（例えば抗体の誘導）、細胞
性、又はそれらの組合せであり得る。 ＲＣＥ１の上述の活性は、例えば以下の例に記載されるように、又は当業者が
知っているであろう方法に従ってアッセイすることができる。例えば、エンドプ
ロテアーゼ活性は、以下の例に記載されるように測定することができる。例えば
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ．２５０：２５１〜２６６，１９
９５；Ｂｏｘａｒｔｃｈｕｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５：１７９６，１９９７
を参照のこと。基質結合活性は、慣用的に測定することができる。例えば、競合
結合アッセイは、例えば、有効な条件下で、検出可能なマーカーを含む基質、Ｒ
ＣＥ１ポリペプチド、又はそのフラグメント、及び基質結合活性についてテスト
すべき化合物を組み合わせることによりポリペプチド又はその誘導体に結合する
基質を同定するために用いることができる。必要に応じて、アッセイは液相で行
うことができ、ここで結合及び遊離基質は膜により分離されるか、又はそれは固
相で行うことができる。固相アッセイは、例えばチップ、フェハー等の上で高ス
ループット手順を用いて行うことができる。
【０００８】 哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチドは、天然ソースから得ることができるアミノ酸
配列を有する哺乳動物ポリペプチドである。それゆえそれは、天然の、正常な、
変異体の、多型等の天然の集団から得ることができるアミノ酸配列を含む。天然
のソースには、例えば肝細胞、例えば組織又は完全な生物、一次及び不死化細胞
系を含む培養細胞系、バイオプシー組織等から得られるものを含む。本発明は、
全長哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチドのフラグメントにも関する。そのフラグメン
トは、好ましくは生物学的に活性である。生物学的に活性とは、そのポリペプチ
ドフラグメントが生きている系内で活性を有するか、生きている系内の成分であ
ることを意味する。生物学的活性は、例えばエンドプロテアーゼ活性、基質結合
活性、形質転換促進活性、及び／又は免疫原活性を含む。フラグメントは、化学
合成、遺伝子工学、開裂産物等を含むいずれかの要求される方法に従って調製す
ることができる。以下を参照のこと。
【０００９】 本発明は、アミノ酸１〜３２９のアミノ酸配列を有するヒトＲＣＥ１、アミノ
酸１〜２３０及び２５２〜３２９；アミノ酸２３１〜２５１：アミノ酸１９〜３
２９を隣接して含む変異体にも関する。図１を参照のこと。３２９アミノ酸ポリ
ペプチドは、約３５．８kDa の予想分子量を有する。 ヒトＲＣＥ１配列に加えて、別の哺乳動物種、マウスからのＲＣＥ１配列はク
ローン化され、同定されている。これらの配列は、ＡＡ０２１８５９，ＡＡ０７
２１９０，ＡＡ１５４６５８，ＡＡ１５４８６４，ＡＡ１６８６１４，ＡＡ２１
８３９６，ＡＡ６１９２８２，ＡＡ７９０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６９６６
，Ｗ１４３４４，Ｗ５７１６２を含む。これにより、本発明は、図２及び図３に
示すような全長マウスＲＣＥ１配列に関する。
【００１０】 哺乳動物及び非哺乳動物からの他の相同体は、種々の方法に従って得ることが
できる。例えば、ＲＣＥ１について選択的であるオリゴヌクレオチド（以下を参
照）とのハイブリダイゼーションは、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，１９８９，Ｃｈａｐｔｅｒ１１に記載されるようにこ
のような相同体を選択するために用いることができる。このような相同体は、Ｒ
ＣＥ１と種々の量のヌクレオチド及びアミノ酸配列同一性及び類似性を有し得る
。非哺乳動物生物は、例えば脊椎動物、無脊椎動物、ゼブラフィッシュ、トリ（
ｃｈｉｃｋｅｎ）、ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）、Ｃ．エレガンス（
Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）、線形動物、原核生物、植物、アラビドプシス（Ａｒａｂ
ｉｄｏｐｓｉｓ）、ウイルス等を含む。
【００１１】 本発明は、ＲＣＥ１特異的又は特有のアミノ酸配列、例えば特定のＲＣＥ配列
内で見い出されるが、別のアミノ酸配列内で見い出されない所定のアミノ酸配列
にも関する。特定のアミノ酸配列は、慣用的に、例えばコンピュータープログラ
ムのＢＬＡＳＴセットを用いて遺伝子１タンパク質データベースを調査すること
により見い出すことができる。このような特定の配列は、例えばヒト及びマウス
でありイーストでないＲＣＥ１；ヒトでありマウス又はイーストでないＲＣＥ１
；マウスであるがヒト又はイーストでないＲＣＥ１を含む。ヒト及びマウスＲＣ
Ｅ１特異的配列には、ＡＡＬＧＧＤ，ＴＧＩＱＰＧＴ，ＭＱＬＳＭＤＣＰＣＤ，
ＤＧＬＫＶＶ，ＡＲＣＬＴＤＭＲＷＬ，ＬＶＦＲＡＣＭ，ＲＦＲＱＳＳＶＧ、及
びＰＫＬＹＧＳがある。
【００１２】 マウス又はヒトＲＣＥ１特異的又は特有アミノ酸配列は、免疫原活性を有する
場合、ＲＣＥに特異的な免疫応答を作り出すために抗原としてペプチドを生産す
るのに役立ち得る。このような免疫化により得られる抗体は、診断又は調査目的
のためのＲＣＥタンパク質のための特異的プローブとして用いることができる。 本発明のポリペプチド、例えば図１及び図３に示すポリペプチド配列を有する
ものは、ポリペプチド内の構造及び／又は機能的ドメインを同定するために利用
できる方法によって分析することができる。例えば、図１に記載のポリペプチド
コーティング配列をヒドロパシー及び親水性分析（例えばＫｙｔｅ及びＤｏｏｌ
ｉｔｔｌｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ，１５７：１０５，１９８２）によって分析す
る場合、予想される膜貫通領域は、Ａ２５−Ｗ５６，Ｆ７２−Ｗ８９；Ｌ１０９
−ＭＴ３６；Ａ１８１−Ｆ２０９，Ｖ２２３−Ｉ２４９；Ｔ２５１−Ｌ２７６、
及びＬ２８４−Ｌ３０２で同定される。その構造を分析し、機能的ドメインを予
測するために、ＥＭＢＬ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｅｄｉｃｔ；Ｒｏｓｔ及びＳａ
ｎｄｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，１９：５５−７２，１９９４を含む種々の他のプ
ログラムを用いることができる。
【００１３】 本発明のポリペプチドは、図１に記載のアミノ酸配列と１００％又はそれ未満
のアミノ酸配列同一性をも有する。以下の議論の目的のために、配列同一性は、
図１、図２又は図４に記載される配列内に見い出されるのと同じヌクレオチド又
はアミノ酸が比較する配列、例えばイーストＲＣＥ１の対応する位置に見い出さ
れることを意味する。図４を参照のこと。図１又は３に記載されるアミノ酸配列
と１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドは、同種アミノ酸置換を含む
天然の配列からの種々の置換を含み得る。同種アミノ酸置換の例については以下
を参照のこと。ＲＣＥ１ポリペプチドを比較する配列中の残基の総数により割っ
た同一及び同種の残基の合計は配列類似性の割合に等しい。配列同一性及び類似
性を計算する目的のために、比較される配列は、例えばＦＡＳＴＡ，ＢＬＡＳＴ
Ａを含む、いずれかの要求される方法、アルゴリズム、コンピュータープログラ
ム等に従ってアラインし、計算することができる。図１のアミノ酸配列と１００
％未満のアミノ酸同一性を有するポリペプチドは、例えば約９９％、９７％、９
５％であるが３５％超の同一性を含み得る。配列同一性の好ましい量はおおよそ
９４％より大きい（例えばヒト及びマウスは９４％の配列同一性を示す）。
【００１４】 ＲＣＥ１ポリペプチド、フラグメント、又は置換化ポリペプチドは、種々の改
変も含み得、ここでこのような改変は、脂質修飾、例えばプレニル化（例えば１
５−炭素ファルネシル、２０−炭素ゲラニルゲラニル）又は他のコレステロール
中間体及び誘導体、メチル化、リン酸化、グリコシル化、共有結合修飾、（例え
ばアミノ酸のＲ基のもの）、アミノ酸置換、アミノ酸欠失、又はアミノ酸付加を
含む。ポリペプチドの修飾は、組換え、合成、化学的等を含む種々の方法に従っ
て行うことができる。
【００１５】 ＲＣＥ１ポリペプチドへの変異性、ＲＣＥ１の生物活性、例えばエンドプロテ
アーゼ活性、基質結合活性、形質転換促進活性、又は免疫原活性を有するなら選
択することができる。このような変異の選択及び調製は以下に議論される。 本発明ポリペプチド（例えばＲＣＥ１、そのフラグメント、その変異体）は、
種々の方法、例えばアッセイにおいて、以下に記載のように抗体のための免疫原
として、生物学的に活性な剤（例えばＲＣＥ１に関連する活性の１又は複数を有
するもの）として、用いることができる。ｒａｓ基質結合活性を有し、任意に他
の生物活性を欠くフラグメントは、ｒａｓプロセッシングをブロックするために
利用することができる。このようなフラグメントは、ＤＮＡとして（例えばベク
ター、ネイクトＤＮＡ等において）投与することができ、又はそれらは、例えば
リポソーム、食細胞化剤にマンジュゲートさせて、細胞に浸透させることができ
る。有用なフラグメントは、ＲＣＥ１の全長のフラグメントのオーバーラップフ
ラグメントがＲＣＥ１活性を阻害する能力をテストすることにより慣用的に同定
することができる。これらの活性の測定は以下及び例に記載される。これらのペ
プチドは、ＥＰ４９６ １６２に記載されるように同定し、調製することができ
る。ペプチドは化学修飾等することができる。
【００１６】 ＲＣＥ１ポリペプチド、その誘導体又はそのフラグメントは、１又は複数の構
造ドメイン、機能ドメイン、検出可能ドメイン、抗原性ドメイン、及び／又は関
心の要求されるポリペプチド と、天然ではおこらない配置、即ち天然でない配
置で、ＲＣＥ１遺伝子、生きている生物、例えば動物、好ましくは哺乳動物、例
えばヒト、マウス、又はそれらの細胞系のゲノムから調製されたゲノムフラグメ
ント内で組み合わせることができる。このような特徴を含むポリペプチドはキメ
ラ又は融合ポリペプチドである。このようなキメラポリペプチドは、化学的、合
成的、準合成、及び／又は組換え法を含む種々の方法に従って調製することがで
きる。キメラポリペプチドをコードするキメラ核酸は、イントロン、スプライス
部位、エンハンサー等を含む、連続した又は中断したオープンリーディングフレ
ーム内に種々のドメイン又は要求されるポリペプチドを含み得る。キメラ核酸は
、種々の方法に従って生産することができる。例えば米国特許第５，４３９，８
１９号を参照のこと。ドメイン又は要求されるポリペプチドは、いずれの要求さ
れる特性も、例えば生物機能、例えば触媒、シグナル伝達、成長促進、細胞ター
ゲッティング（例えばシグナル配列、ターゲッティング配列、例えばエンドソー
ム、リソソーム、ＥＲ、核へのもの）等、構造的機能、例えば疎水性、親水性、
膜貫通等、レセプター−リガンド機能、及び／又は検出可能機能、例えば酵素、
蛍光ポリペプチド、緑色蛍光タンパク質を有し得る（Ｃｈａｌｔｉｅら、１９９
４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６３：８０２：Ｃｈｅｎｇら、１９９６，Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：６０６：Ｌｅｖｙら、１９９６，Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：６１０）等を有し得る。更に、Ｒ
ＣＥ１ポリペプチド又はその一部は、宿生細胞に導入した時に選択マーカーとし
て用いることができる。例えば、本発明によりアミノ酸配列をコードする核酸は
、枠内で要求されるコーディング配列に融合させて、精製、選択、又はマーキン
グ目的のためのタグとして機能することができる。融合の領域は発現、単離、精
製等を容易にするための開裂部位をコードし得る。
【００１７】 本発明によるポリペプチドは、発現システムにおいて、例えば生体内、試験管
内、無細胞、組換え、細胞融合等で、本発明に従って生産することができる。こ
のようなシステムにより与えられるポリペプチドへの修飾は、グリコシル化、ア
ミノ酸置換（例えばコドン作用を変えることによるもの）、ポリペプチドプロセ
ッシング、例えば消化、開裂、エンドペプチダーゼ又はエキソペプチダーゼ活性
、化学成分、例えば脂質（プレニル化）、ホスフェート等の結合を含む。
【００１８】 本発明によるポリペプチドは、天然のソース、形質転換された宿生細胞（培養
培地又は細胞）から、通常の方法、例えば界面活性剤抽出（例えばＣＨＡＰＳＯ
、オクチルグルコシド）、硫酸アンモニウム又はエタノール沈澱、酸抽出、アニ
オン又はカチオン対質クロマトグラフィー、ホスホセルローブクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフ
ィー及びレクチンクロマトグラフィーに従って回収することができる。タンパク
質リホールディングステップは、必要に応じて、成熟タンパク質のコンフィグレ
ーションを完了することにおいて用いることができる。最後に、最後の精製ステ
ップのために高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いることができる
。
【００１９】 哺乳動物ＲＣＥ１核酸又はそのフラグメントは天然のソースから得ることがで
きるが又は哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチドのための天然で得ることができるコー
ディング配列を含むヌクレオチド配列を有する核酸である。上述を参照のこと。
それゆえ、それは、通常、変異体、多型の縮重した配列等、天然から得ることが
できる対立遺伝子を含む。天然のソースは、例えば組織及び完全な生物から得ら
れる生きている細胞、培養細胞系、例えば一次及び不死化細胞系を含む。ヒトＲ
ＣＥ１は、例えば、心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸
腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸、及び末梢血液白血球で発現される。それ
は、種々の癌細胞、例えばＨＬ−６０,Ｈｅｌａ細胞Ｓ３、慢性骨髄性白血病Ｋ
−５６２、リンパ芽球白血病ＭＯＬＴ−４、バーキットリンパ腫Ｒａｊｉ、結腸
直腸腺癌ＳＷ４８０、肝癌Ａ５４９、及び黒色種Ｇ３６１で発現される。
【００２０】 ＲＣＥ１のヒト対立遺伝子の核酸配列を図１に示す。これは、ヌクレオチド位
置３２〜１０２１に３２９アミノ酸のオープンリーディングフレームを含む。こ
のような核酸のスプライス変異体も図１に示し、これは、ヌクレオチド位置３２
〜７２２及び７８６〜１０２１に３０８アミノ酸のオープンリーディングフレー
ムを含む。本発明は、スプライス変異体内で欠失したヌクレオチド７２３〜７８
５（その有用をフラグメント）にも関し、それは、例えばｍＲＮＡ発現を検出す
るためにプローブとして用いることができる。本発明の核酸配列は、アミノ酸１
〜アミノ酸３２９からの完全なコーディング配列、その縮重配列、及びそのフラ
グメントを含み得る。本発明による核酸は、上述及び以下に記載のいずれかのヌ
クレオチド配列に対して１００％相補的であるヌクレオチド配列、例えばアンチ
センスも含み得る。
【００２１】 本発明による核酸は、種々の異なるソースから得ることができる。それは、Ｄ
ＮＡ又はＲＮＡ、例えばポリアデニル化ｍＲＮＡ、例えば組織、細胞、又は完全
な生物から単離されたものから得ることができる。その核酸は、ＤＮＡ又はＲＮ
Ａから又はｃＤＮＡライブラリーから得ることができる。その核酸は、要求され
る遺伝子型、表現型（例えばオンコジーンで形質転換された細胞又は癌細胞）等
を有する発達の特定の段階の細胞から得ることができる。
【００２２】 本発明によるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、ＲＣ
Ｅ１のコーディング配列のみ；ＲＣＥ１のコーディング配列及び更なるコーディ
ング配列（例えばリーダー、分泌、ターゲッティング、酵素、蛍光又は他の診断
ペプチドをコードする配列）；ＲＣＥ１のコーディング配列及び非コーディング
配列、例えば５′又は３′端の又はコーディング配列内に分散した非翻訳配列、
例えばイントロンを含み得る。ＲＣＥ１ポリペプチドのための中断のないヌクレ
オチド配列を含む核酸は、そのヌクレオチド配列が、コーディング配列中に中断
する又は介在する非コーディングヌクレオチドを含まないＲＣＥ１ポリペプチド
のためのアミノ酸コーディング配列、例えばイントロンのないものを含む。この
ようなヌクレオチド配列は、連続（隣接）として記載することができる。ＲＣＥ
１をコードするゲノムＤＮＡは慣用的に得ることができる。
【００２３】 本発明による核酸は、上述のような核酸に作用可能に結合した発現調節配列も
含み得る。“発現調節配列”との句は、作用可能に結合した核酸によりコードさ
れるポリペプチドの発現を制御する核酸配列を意味する。発現はｍＲＮＡ又はポ
リペプチドのレベルで制御することができる。これにより、発現調節配列はｍＲ
ＮＡ関連因子及びタンパク質関連因子を含む。このような因子は、プロモーター
、エンハンサー（ウイルス又は細胞）、リボソーム結合配列、転写ターミネータ
ー等を含む。発現調節配列は、その発現調節配列がコーディング配列の発現を行
うような様式で配置されて、例えば、プロモーターをコーディング配列に対して
５′に結合させた場合、そのコーディング配列の発現は、プロモーターによって
駆動される。発現調節配列は、通常の遺伝子に対して異種でも内在性でもよい。
【００２４】 本発明による核酸は、核酸ハイブリダイゼーションに基づいて選択することが
できる。２つの一本鎖核酸調製物が一緒にハイブリダイズする能力は、それらの
ヌクレオチド配列相補性の基準であり、例えばヌクレオチド間の塩基対形成、例
えばＡ−Ｔ，Ｇ−Ｃ等である。これにより、本発明は図１及び図２に記載のヌク
レオチド配列を含む核酸にハイブリダイズする核酸にも関する。後者の配列にハ
イブリダイズするヌクレオチド配列は、相補核酸鎖を有するであろうし、ポリメ
ラーゼの存在下でそれのためのテンプレートとして機能するであろう（即ち好適
な核酸合成酵素）。本発明は、核酸の両方の鎖、例えばセンス鎖及びアンチセン
ス鎖を含む。
【００２５】 ハイブリダイゼーション条件は、図１又は２に記載のヌクレオチド配列とのヌ
クレオチド相補性の要求される量を有する核酸を選択するために選択される。こ
のような配列にハイブリダイズすることができる核酸は、８５％，９０％、より
好ましくは９５％，９９％又はそれ超の相補性を配列間で有する。本発明と、特
に、ストリンジェント条件下で図１及び図２に記載のヌクレオチド配列にハイブ
リダイズするＤＮＡ配列に関する。本明細書に用いる場合、ストリンジェント条
件は、核酸間に少くとも約８５％、約９４％、好ましくは９７％のヌクレオチド
相補性が存在する場合にハイブリダイゼーションがおこるであろういずれかの条
件を意味する。ストリンジェント条件は、５０％ホルムアミド、６ＸＳＳＣ又は
６ＸＳＳＰＥ、及び任意にブロッキング剤（例えばＤｅｎｈａｒｄｔ’ｓ試薬；
ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性フラグメント化サケ精子ＤＮＡ）を、４２℃（又
はホルムアミドを省略するなら６８℃）で含む、洗浄及びハイブリダイゼーショ
ンは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，１９８９，
Ｃｈａｐｔｅｒ９に記載されるように行うことができる。ハイブリダイゼーショ
ンは、Ｓａｍｂｒｏｏｋらに記載されるように、プローブ及びその標的の間に形
成されたハイブリッドの融点（Ｔｍ）の計算にも基づき得る。好ましくは排除さ
れる核酸は、ＡＡ０２１８５９，ＡＡ０７２１９０，ＡＡ１５４６５８，ＡＡ１
５４８６４，ＡＡ１６８６１４，ＡＡ２１８３９６，ＡＡ６１９２８２，ＡＡ７
９０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６９６６，Ｗ１４３４４，Ｗ５７１６２、イー
ストＲＣＥ１、又はイーストＲＣＥ１のフラグメントである。
【００２６】 本発明によれば、核酸又はポリペプチドは、図１，２又は３に記載のヌクレオ
チド又はアミノ酸配列中に１又は複数の差を含み得る。ヌクレオチド及び／又は
アモノ酸配列への変換又は修飾は、定方向又はランダム突然変異誘発を含むいず
れかの利用できる方法により行うことができる。 本発明によるＲＣＥ１をコードする核酸は、天然のＲＣＥ１遺伝子内にあるヌ
クレオチド、例えば天然の、多型の、通常の又は変異体対立遺伝子（ヌクレオチ
ド又はアミノ酸）、哺乳動物の天然の集団、例えばヒト、サル、ブタ、マウス、
ラット、又はウサギ内で発見される変異を含み得る。天然との用語は、その核酸
が天然のソース、例えば動物組織及び細胞、体液、組織培養細胞、法医学サンプ
ルから得ることができることを意味する。ＲＣＥ１への天然の変異は、ヌクレオ
チド配列の欠失（例えばトランケートされたアミノ−又はカルボキシ末端）、置
換、又は付加を含み得る。これらの遺伝子性、当業者が知っているであろう方法
に従って核酸ハイブリダイゼーションにより検出し、単離することができる。他
のオンコジーンと同様にＲＣＥ１の天然の変異体は、宿生細胞及び生物内の病理
的状態を作り出す欠失、置換及び付加を含むことが認められる。
【００２７】 本発明のＲＣＥ１ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は天然の遺伝子
、転写物、又はｃＤＮＡ内に見い出されるコドン、例えば図１,２、又は３に記
載されるものを含んでも、同じアミノ酸配列をコードする縮重コドンを含んでも
よい。 ＲＣＥ１配列への修飾、例えば突然変異は、遺伝子データバンク、例えばＧｔ
ｎｂａｎｋ，ＥＭＢＬからの相同性調査に基づいて調製することもできる。配列
相同性調査したコンピュータープログラムのＢＬＡＳＴファミリーに記載される
アルゴリズム、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム等を含む種々の方法
を用いて行うことができる。例えば相同アミノ酸は、ヒト及びイーストＲＣＥ１
のような種々の配列間で同定することができ、アミノ酸置換を行うなどの基礎と
して用いることができる。
【００２８】 次に、突然変異したポリペプチド間で保存されたアミノ酸を同定及びアライン
し、保存又は非保存位置でアミノ酸を修飾することによりＲＣＥ１配列に導入す
ることができる。 本発明の核酸及び対応するポリペプチドは、図１又は図２のヌクレオチド酸と
異なるが、表現型としてサイレントである配列を含む。これらの配列修飾は、例
えばアミノ酸配列に影響を与えないヌクレオチド置換（例えば同じアミノ酸のた
めの異なるユドン又は縮重配列）、天然のアミノ酸の、同程アミノ酸での置換、
例えば（側鎖の大きさ及び分極の程度に基づく）小さな非極性：システイン、プ
ロリン、アラニン、トレオニン；小さな極性：セリン、グリシン、アスパラテー
ト、アスパラギン；大きな極性：グルタメート、グルタミン、ソシン、アルギニ
ン；中間の極性：チロシン、ヒスチジン、トリプトファン；大きな非極性：フェ
ニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、バリンを含む。
【００２９】 相同な核酸は、次の通りグループ化することができる：非荷電極性Ｒ基、グリ
シン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン
；酸性アミノ酸（負電荷)アスパラギン酸及びグルタミン酸：塩基性アミノ酸（
正電荷）リシン、アルギニン、ヒスチジン。 相同なアミノ酸は、Ｄａｙｈｏｆｆ（Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ
ｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５（１９７８）及びＡｒｇｏｓ
（ＥＭＤＯ．Ｊ．８，７７９〜７８５（１９８７））により記載されるものも含
む。
【００３０】 核酸は、１又は複数の位置が保存性アミノ酸にヒソ置換されていることを除く
図１又は図３に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列：又は１，５，１０，１５又は２０の置換、例えば３の置換が保存性ア
ミノ酸であるものを有することを除く図１又は３に記載のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み得る。本発明は、このような
核酸によってコードされるポリペプチドにも関する。更に、要求される宿主内で
の発現のために配列を最適化するために配列中のコドンを変化させることが要求
され得る。
【００３１】 本発明による核酸は、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、合成核酸、ペプチド核酸、修飾
ヌクレオチド又は混合物を含み得る。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖であり得る。
核酸を含むヌクレオチドは、種々の周知の結合、例えばエステル、スルファメー
ト、スルファミド、ホスホロチオエート、ホスホルマシテント、メチルホスネー
ト、カルバメート等を介して、要求される目的、例えばヌクレア−ゼ、例えばＲ
Ｎａｓｅ１−１、改良された生体内安定性等に依存して連結させることができる
。例えば米国特許第５，３７８，８２５号を参照のこと。
【００３２】 核酸に種々の改変、例えば検出可能なマーカー（アビジン、ビオチン、放射性
要素）、ハイブリダイゼーション、検出又は安定性を改良する成分の結合を行う
ことができる。核酸は固体与抗体、例えばニトロヤハロース、磁気又は常磁性マ
イクロスクイア（例えば米国特許第５，４１１，８６３；米国特許５，５４３，
２８９に記載、例えば強磁性、超磁性、常磁性、酸化鉄及びポリサップライドを
含むもの）、ナイロン、アガロース、ジアゾ化セルロース、ラテックス個体マイ
クロスフィア、ポロアクリルアミド等に、要求される方法に従って結合させるこ
ともできる。例えば米国特許５，４７０，９６７、５，４７６，９２５、５，４
７８，８９３を参照のこと。
【００３３】 本発明の別の態様は、オリゴヌクレオチド又は核酸プローブに関する。このよ
うなオリゴヌクレオチド又は核酸プローブは、例えばテストサンプルの中のＲＣ
Ｅ１核酸を検出し、定量し、又は単離するために用いることができる）。検出し
た、調査、診断、又は法医学を含む種々の異なる目的のために要求され得る。診
断的のため、組織、細胞、体液等から得られるサンプル中のＲＣＥ１核酸配列の
存在又は量を同定することが要求され得る。好ましい方法において、本発明は、
ＲＣＥ１核酸を検出する方法であって、テストサンプル中の標的核酸を、オリゴ
ヌクレオチドに、その標的及びオリゴヌクレオチドの間のハイブリダイゼーショ
ンを達成するのに有効な条件下で接触させ、そしてハイブリダイゼーションを検
出することを含む方法に関する。本発明によるオリゴヌクレオチドは、合成核酸
増幅、例えばＰＣＲ（例えばＳａｉｋｉ Ｓ；１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４
１：５３：米国特許第４，６８３，２０２号：ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ
Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｔ
ｎｎｉｓｅｔ．ａｌ．ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，１９９０）又はディフェレンシャルディスプレイ（例えばＬｉａｎｇ５，
Ｎａｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２１：３２６９〜３２７５，１９９３；米国特
許５，５９９，６７２；ＷＯ９７／１８４５４を参照のこと）。有用なオリゴヌ
クレオチドには、例えば図１のヌクレオチド７２３〜７８５： ５′ＧＡＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＣＣＴ３′（センス）： ５′ＴＣＣＡＴＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣＡＴＣＡＧＴＧ３′（アンチセンス）： ５′ＣＣＴＣＡＣＡＧＡＣＡＴＧＣＧＴＴＧＧＣＴＧＣＧＧＡＡＣ３′（セン
ス）；及び ５′ＧＧＧＴＧＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＣＧＣＡＡＡＣ３′（アンチセンス）
． を含む。検出した、他の遺伝子、例えばｒａｓのためのオリゴヌクレオチドとの
組合せにおいて行うことができる。方法及びプローブについて例えば米国特許第
５，５９１，５８２号を参照のこと。
【００３４】 本発明の別の態様はＲＣＥ１に特有の（ユニーク）ヌクレオチド配列である。
ＲＣＥ１に特有の配列とは、ＲＣＥ１、例えば図１又は図２のヌクレオチド配列
中にあるが、他の核酸中にまれに又はめったにしか存在しない、特に、動物、好
ましくは哺乳動物、たとえばヒト、ラット、マウス等の核酸中にないヌクレオチ
ドの所定の順番を意味する。本発明による特有の核酸は慣用的に決定することが
できる。ＲＣＥ１の特ユニーク配列を含む核酸は、例えばノーザンブロット上で
、核酸の混合物を含むサンプル中でＲＣＥ１の存在を同定するためのハイブリダ
イゼーションプローブとして用いることができる。ハイブリダイゼーションは、
プローブに対して少くとも９５％の同一性（即ち相補性）を有する核酸を選択す
るためにストリンジェント条件下で行うことができるが、より低いストリンジェ
ント条件も用いることができる。ユニークＲＣＥ１ヌクレオチド配列は、ＲＣＥ
１の他の部分についてのコーディング配列、酵素、ＧＦＰ等、発現調節配列等を
含む本特許全体に言及される種々のヌクレオチド配列に、その５′又は３′編の
いずれかで枠内に融合させることもできる。
【００３５】 ハイブリダイゼーションは、例えばＳａｍｂｒｏｏｋｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ，１９８９に記載されるように、要求される選択性に依存して
異なる条件下で行うことができる。例えば、ＲＣＥ１を特異的に検出するために
、オリゴヌクレオチドは、そのオリゴヌクレオチドがＲＣＥ１にのみハイブリダ
イズする条件下で標的核酸にハイブリダイズさせることができる。ここで例えば
そのオリゴヌクレオチドは標的と１００％の相補性である。１００％未満、少く
とも例えば９９％，９７％，９５％，９０％，７０％，６７％のヌクレオチド相
補性を有する標的核酸を選択することが要求されるなら、異なる条件を用いるこ
とができる。ＲＣＥ１内の突然変異が病気又は病性的状態、例えば癌、良性腫瘍
を引きおこし得るなら、本発明によるオリゴヌクレオチドは診断に用いることが
できる。例えば、癌又はＲａｓシグナル伝達経路（以下を参照）に関連する他の
状態の症状を有する患者は、ｒａｓシグナル伝達経路等、例えばＧＲＢ２，Ｈ−
，Ｋ−及びＮ−ｒａｓ，ｃ−Ｒａｆ，ＭＡＰキナーゼ、ｐ４２，ｐ４４，Ｓｅｒ
／ｔｈｒキナーゼ、Ｅｌｋ−１，ｃ−ｍｙｃ，ｃ−Ｊｕｎ，Ｇタンパク質、Ｆｔ
ａｓｅ，ＰＰＳＥＰ，ＰＰＳＭＴ等においてオンコジーン又は遺伝子に、他のオ
リゴヌクレオチドと組み合わせて、配列が正常であるか否かを同定するためにポ
リメラーゼ鎖反応、次にＤＮＡ配列決定において本発明によるオリゴヌクレオチ
ドを用いることにより、その病気を診断することができる。好ましい方法におい
て、本発明は、癌を診断する方法であって、標的核酸を含むサンプルを、オリゴ
ヌクレオチドに、標的及びオリゴヌクレオチドの間のハイブリダイゼーションを
許容するのに有効な条件下で接触させ、ハイブリダイゼーションを検出し、ここ
でそのオリゴヌクレオチドはＲＣＥ１の配列、好ましくはそのユニーク配列を含
み；そしてそのオリゴヌクレオチドがハイブリダイズする標的核酸のヌクレオチ
ド配列を決定することを含む方法に関する。その配列に、標的核酸又はそのｃＤ
ＮＡを単離し、そして要求される方法に従ってその配列を決定することを含む種
々の方法に従って決定することができる。
【００３６】 本発明によるオリゴヌクレオチド（核酸）は、いずれの要求される大きさのも
のでもあり得、例えば約１０〜２００ヌクレオチド、１２〜１００、好ましくは
１２〜５０，１２〜２５，１４〜１６、少くとも約１５、少くとも約２０ヌクレ
オチド等である。このようなオリゴヌクレオチドは、非天然ヌクレオチド、例え
ばイノシンを有し得る。このようなオリゴヌクレオチドは、図１又は図２の配列
に１００％の同一性又は相補性を有するか、又はそれはミスマッチ又はヌクレオ
チド置換、例えば１，２，３，４又は５の置換を有し得る。本発明によれば、オ
リゴヌクレオチドは、キットを含み得、ここでそのキットは、要求される緩衝液
（例えばホスフェート、トリス等）、検出組成物等を含む。オリゴヌクレオチド
は、当該技術分野で知られている放射性又は非放射性標識で標識されてもされな
くてもよい。
【００３７】 アンチセンス核酸は、本発明による核酸、好ましくは図１，２、又は３のコー
ディング配列に対するアンチセンスから調製することもできる。アンチセンス核
酸は、種々の方法によって、例えばＲＣＥ１の発現を制御又は調節するために、
例えばそれを阻害するために、その発現を検出するために、又はイン・シトゥハ
イブリダイゼーションのために用いることができる。これらのオリゴヌクレオチ
ドは、ｒａｓの阻害を記載する米国特許５，５７６，２０８と同様に用いること
ができる。ＲＣＥ１の発現を制御又は調節する目的のために、アンチセンスオリ
ゴヌクレオチドは発現調節配列に作用可能に連結させることができる。
【００３８】 本発明による核酸は、いずれかの要求される方法に従って標識することができ
る。核酸は、放射性トレーサー、例えば最も一般的に用いられるトレーサーだけ
を示せば32Ｐ，35Ｓ， 125Ｉ，3Ｈ，又は14Ｃを用いて標識することができる。
放射性標識は、例えば放射性標識化ヌクレオチド、ポリヌクレオチドキナーゼ（
ホスファターゼでの脱リン酸化あり又はなし）又はリガーゼ（標識すべき末端に
依存）を用いて３′又は５′での末端標識化のようないずれかの方法に従って行
うことができる。非放射性標識化も、免疫学的特性（抗原、ハプテン）、特定の
試薬に対する特異的アフィニティー（リガンド）、検出可能を酵素反応を完了さ
せることができる特性（酵素もしくは補酵素、酵素基質、又は他の酵素反応に関
連する物質）、又は特徴的な物理特性、例えば蛍光もしくは要求される波長での
先の放射もしくは吸収等を有する残基に本発明の核酸を組み合わせて用いること
ができる。
【００３９】 本発明による核酸、例えばオリゴヌクレオチド、アンチセンス核酸等は、種々
の技術、例えばノーザンブロット、ＰＣＲ、イン・シトゥハイブリダイゼーショ
ン等により、全体の器官、組織、細胞等におけるＲＣＥ１の発現を検出するため
に用いることができる。このような核酸は、特に、発現の乱れ、例えばＲＣＥ１
の細胞特異的及び１又は亜細胞変化を検出するために役立つ。ＲＣＥ１のレベル
は、単独で、又は他の遺伝子産物（Ｒａｓのようなオンコジーン）、転写物等と
組み合わせて決定することができる。
【００４０】 本発明による核酸は、要求される目的に従って、試験管内及び生体内の種々の
異なるシステムで発現させることができる。例えば、核酸化、発現ベクターに挿
入し、要求される宿主に導入し、そしてその核酸によりコードされるポリペプチ
ドの発現を行うために有効な条件下で培養することができる。有効な条件には、
宿主細胞によるポリペプチドの生産を行うために適したいずれかの培養条件、例
えば有効な温度、pH、培地、宿主細胞を培養する培地への添加物（例えば発現を
増幅もしくは誘導する添加物、例えばブチレート、又はコーディング配列がｄｈ
ｆｒ遺伝子に隣接するならメトトレキャート）、シクロヘキサミド、細胞密度、
培養皿等がある。核酸はいずれかの有効な方法、例えばネイクトＤＮＡ、リン酸
カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、インジェクション、ＤＥＡＥ−Ｄｅ
ｘｔｒａｎ媒介トランスフェクション、リポソームとの融合、その細胞への取込
みを増強する剤との会合、ウイルストランスフェクションにより細胞に導入する
ことができる。本発明の核酸が導入されている細胞は、形質転換された宿主細胞
である。核酸は、染色体外でも、宿主細胞の染色体に組み込まれてもよい。それ
は安定であっても一時的であってもよい。発現ベクターは、宿主細胞との適合性
のために選択される。宿主細胞には、哺乳動物細胞、例えばＣＯＳ−７，ＣＨＯ
，ＨｅＬａ，ＬＴＫ，ＮＩＨ３Ｔ３，イースト、昆虫細胞、例えばＳｆ９（Ｓ．
ｆｒｕｇｉｐｅｄａ）、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ Ｃｅｌｌｓ（Ｔｐｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、細菌、例えば大腸菌、ストレプトコッカス、バチ
ルス、イースト、真菌細胞、植物胚幹細胞、（例えば哺乳動物、例えばマウス又
はヒト）、癌又は腫瘍細胞がある。Ｓｆ９は昆虫での発現のために好ましく；発
現は、例えば、Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、Ｂｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ：Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｎａｌ，Ｆｒｅｅ
ｍａｎ，ＮＹ，１９９２に従って行うことができる。ＨＥＫ２９３哺乳動物細胞
は、哺乳細胞過剰発現のために用いることができる。例えばＣｏｌｌｉｎｓら、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１；１７３９３−１７３５３（１９９６）を参照
のこと。発現調節配列は、同様に、宿主適合性及び要求される目的、例えば高コ
ピー数、高い量、誘導、増幅、発現の調節のために選択される。用いることがで
きる他の配列にはエンノーンサー、例えばＳＶ４０，ＣＭＶ，ＲＳＶからのもの
、誘導性プロモーター、細胞型特異的因子、又は選択的もしくは特異的細胞発現
を許容する配列がある。発現を駆動するのに用いることができるプロモーターに
は、例えば内在性プロモーター、ＭＭＴＶ，ＳＶ４０；細菌細胞のためのｔｒｐ
，ｌａｃ，ｔａｃ、又はナクプロモーター；又はイーストのためのα因子、アル
コールオキシダーゼ、又はＰＧＨプロモーターがある。
【００４１】 例えばＲＣＥ１の発現を調節し、ＲＣＥ１機能を解明し、又は関心の遺伝子の
それを解明する目的のために関心の別の遺伝子を同じ宿主に導入することができ
る。関心の遺伝子には、他のオンコジーン、細胞周期に関連する遺伝子等がある
。このような遺伝子は通常の遺伝子又は変異体、例えば突然変異体、キトラ、多
型性等であり得る。
【００４２】 本発明の核酸又はポリペプチドは、核酸又はタンパク質電気泳動、クロマトグ
ラフィー等においてサイズマーカーとして用いることができる。所定の制限フラ
グメントは、制限部位のための配列をスキャンし、大きさを計算し、そして対応
する制限消化を行うことにより決定することができる。ＲＣＥ１ポリペプチドは
、タンパク質ゲルのための３５．８kd分子量マーカーとして用いることもできる
。本明細書に開示されるＲＣＥ１ ＤＮＡは、ＤＮＡゲル上の１４７２bpマーカ
ーとして用いることもできる。
【００４３】 本発明の別の態様は、ＲＣＥ１遺伝子が関連する生物学的経路の制御、特に病
理的状態に関する。例えば、細胞を増殖（例えば癌）、成長制御、形態発生、２
６８：２３３−２３９，１９９５；Ｂｕｓｓｅｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２：２
２５５−２２６，１９９６。例えば、ＲＣＥ１はｒａｓ保存性シグナル伝達カス
ケードに関連する。それは、ｒａｓ成熟化のステップであるｒａｓのＣＯＯＨ末
端プロセッシングの原因である。ｒａｓ（野生型、変異、構成的等のｒａｓ）の
過剰発現はオンコジーン活性を導く。ｒａｓ過剰発現を処理するための１つのア
プローチは、不完全にプロセッシングされた及び不活性なｒａｓが蓄積し、その
オンコジーン効果を除去し又は減少させるように、ｒａｓ成熟化経路を阻害する
ことである。本発明によれば、ｒａｓ成熟化経路は、ＲＣＥ１活性をブロックす
ることにより阻害され得る。このようなブロッキングは、種々の方法で、例えば
ＲＣＥ１抗体又は他のリガンド、ＲＣＥ１ペプチド（特にＣＡＡＸモチーフに結
合するがタンパク質内部分解活性を欠如するもの）、ＲＣＥ１エンドプロテアー
ゼのインヒビター、アンチセンス又は二本鎖ＲＮＡを投与することにより行うこ
とができる（例えばＦｉｖｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３９１：８０６〜８１１，１９
９８）。ブロッキング剤は、本明細書に記載される方法又は当該技術分野で利用
できる方法に従って同定することができる。
【００４４】 本発明の１つの態様は、ＲＣＥ１活性を調節する化合物を同定することに関す
る。その活性は、ＲＣＥ１を増加させ、減少させ、拮抗し、促進し、安定化等す
ることにより調節することができる。本発明の１つの方法において、ＲＣＥ１活
性は、テスト化合物の存在下で、ＣＡＡＸポリペプチドモチーフを含む基質及び
哺乳動物ＲＣＥ１を、哺乳動物ＲＣＥ１がその基質からＡＡＸアミノ酸残基をタ
ンパク質分解により除去し、そして基質のＣｙｓ−ＣＯＯＨ末端を露出するのに
有効な条件下で反応させ；そのＡＡＸ残基のタンパク質分解による除去を検出し
；そしてテスト化合物の存在及び欠如下でＡＡＸ残基のタンパク質分解による除
去の量を比較することによりテスト化合物がＲＣＥ１活性を調節するか否かを同
定することにより測定することができる。
【００４５】 ＲＣＥ１により酵素的に消化され得る、即ちタンパク質分解により除去され得
る基質は、好ましくは、ＣＡＡＸ認識部位を含む。ここでＲＣＥ１はシステイン
及び脂肪族アミノ酸残基プレニル化ＣＡＡＸ含有ペプチド、例えばファルネシル
化又はゲラニルゲラニル化ＣＡＡＸペプチドの間を開裂する。いずれの基質も、
それがＲＣＥ１により作用され得るなら好適である。これにより、基質は、他の
原子、例えばペプチド又は他の結合により連結された更なるアミノ酸残基を含み
得、そしていずれかの要求される方法で改変することができる。例えば、基質は
、例えばラテックス、セファロース、シリカ、アガロース、セファデックス、セ
ルロース、ポリザカライド、ガラス、ポリマー等を含む固体与抗体に固定化する
ことができる。基質は、例えば抗体、アビジン、ビオチン、放射性標識、アプタ
マー、蛍光標識、核酸等で検出可能に標識することもできる。基質は、ホスフェ
ート、メチル基、糖、又は脂質も含み得る。好ましい実施形態において、基質は
、脂質、例えばコレステロール中間体、例えば炭素フルネシルスと２０−炭素ゲ
ラニルゲラニル基を含む。好ましくは、基質はプレニル化される。好ましい実施
形態において、基質はビオチン−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｌ
ｙｓ−（ファルネシル）Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔであり、より一般的に
はそれはゲラニルゲラニル化ＣＡＡＸ含有ペプチドである。テスト化合物は、好
ましくは、ＲＣＥ１が基質を開裂する環境下でＲＣＥ１と反応する。このような
環境は、有効な条件と呼ぶ。これらの条件は、例えばコントロールとしてベース
ライン活性を確立するためにテスト化合物の欠如下で決定することができる。有
効な反応条件は、例えば塩、緩衝液、還元及び１又は酸化剤、pH等を用いて、慣
用的に選択することができる。ＣＡＡＸモチーフを含む基質を利用する場合、有
効な開裂は基質からＡＡＸ残基を除去してＣｙｓ−ＣＯＯＨ末端を露出させる。
【００４６】 基質、テスト化合物、及びＲＣＥ１をタンパク質分解がおこる条件下で反応さ
せるステップの後、次のステップはタンパク質分解がおこったか否かを決定する
ことである。タンパク質分解を検出することは、有効な反応条件の選択と同様、
ＲＣＥ１のためのベースライン活性を確立するためにテスト化合物の欠如下で最
適化することができる。一般に、タンパク質分解検出は、その反応の産物を同定
することに関する。例えば、開裂部位がアミノ酸配列である場合、この基質の完
全をタンパク質分解は新しい３′及び５′末端を有する開裂産物を作り出す。そ
の産物は、例えばクロマトグラフィー、電気泳動、質量分析、イムノアッセイ等
により直接、検出することができ、又はその末端化、例えばその新しい末端の出
現又は特性を測定することにより検出することができる。好ましい実施形態にお
いて基質がＣＡＡＸを含み、開裂がＣｙｓ−ＣＯＯＨ末端を出現させる場合、後
者はメチラーゼ及び標識化メチオニン基質を用いてそれをメチル化することによ
り検出される。より好ましい態様において、メチラーゼはプレニルタンパク質特
異的メチルトランスフェラーゼ（ＰＰＳＭＴ）であり、メチオニン基質は 3Ｈ−
Ｓ−アデノシルメチオニンである。得られた標識化ＲＣＥ１基質は遊離標識から
慣用的に分離することができる。例えば、ＲＣＥ１基質がその５′端でビオチン
で標識されるなら、それは、好ましくはビーズに結合させたアビジンによって捕
獲することができる。更に、ＲＣＥ１基質は、固体表面、磁気ビーズ等に結合さ
せて、慣用的に処理することができる。
【００４７】 メチラーゼは、精製し、富化し、例えば哺乳動物細胞又はイースト細胞等から
細胞抽出物の成分として供することができる。その抽出物又はライゼートは、メ
チラーゼ遺伝子で形質転換された細胞、例えばイーストＳＴＥ１４を含む種々の
細胞から得ることができる。例えば、Ｈｒｙｃｙｎａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２５０：２５１−２６６，１９９５を参照のこと。Ｒ
ＣＥ１成分（即ちポリペプチド又はそのタンパク質内部分解フラグメント）は、
その反応混合物に、種々の形態、例えば実質的に精製された形態で、細胞膜の成
分（例えば小胞体）として、又は可溶性エキスとして加えることができる。各々
の場合において、ＲＣＥ１ポリペプチドは、天然のソース、組換えソースから得
ることができ、又はそれは、合成で作り出すことができる（化学的に又は酵素に
より、例えば全長ＲＣＥ１の開裂で作り出される）。
【００４８】 好ましくは、ＲＣＥ１は、ＲＣＥ１コーディング配列（例えばｃＤＮＡ、遺伝
子、ゲノムフラグメント等）で形質転換された細胞系内で発現される。後者の場
合、ＲＣＥ１は細胞の異種成分として存在し；異種とは、ＲＣＥ１が異なる種の
細胞系内で発現されるだけでなく、それは、例えばトランスフェクション、形質
転換等により細胞に導入されているコーディング配列によりコードされる。好ま
しくは、ＲＣＥ１は細胞内で高レベルで発現される。ヒトＲＣＥ１又はそのフラ
グメントは、好ましいコーディング配列である。図１を参照のこと。ＲＣＥ１の
有用なフラグメントは、エンドプロテアーゼ活性及び基質結合活性、例えばアミ
ノ酸１９〜３２９を含む。
【００４９】 本発明の好ましい態様において、ＲＣＥ１は細胞ライゼートとして供され、例
えばＲＣＥ１で形質転換された細胞は溶解され、得られたライゼートは、即ち粗
ライゼートはアッセイに直接用いられる。組換えＲＣＥ１を含むライゼートは、
ＲＣＥ１について任意に精製し、又は富化することができる。例えば膜画分等を
単離することができる。例えば、ＲＣＥ１を発現する細胞（例えばＨＥＫ２９３
）が収集され、ＰＢＳｔ２０μＭＥＤＴＡ中で洗浄され、低張溶解緩衝液中でダ
ウンシング（ｄｏｕｎｃｉｎｇ）することにより又は窒素キャビテーションを用
いることにより溶解され、低速度スピンにかけて不溶性材料及び細胞デブリシス
（非破壊細胞及び核を含む）が除去され、そして次に膜をペレット化するために
有効な時間、１００，０００ｇで遠心される。
【００５０】 アッセイの目的は、ＲＣＥ１活性を調節する化合物を選択及び同定することで
ある。これにより、タンパク質分解検出は、典型的には、テスト化合物の存在及
び欠如下で行われる。化合物がＲＣＥ１活性を調節するか否かは、慣用的に、例
えばテスト化合物の存在下でより多くの又はより少い加水分解がおこっているか
否かを決定することにより決定することができる。
【００５１】 アッセイは、完全な細胞で行うこともできる。例えば、ＲＣＥ１を過剰発現す
る細胞は形質転換促進活性を有する。過剰発現は、遺伝子操作手段、例えば強力
な（ｒｏｂｕｓｔ）プロモーターに作用可能に連結したＲＣＥ１遺伝子を形質転
換することにより、このような活性等のために細胞系（例えばＨＥＫ２９３）を
選択することにより細胞内で行うことができる。このような細胞に剤を投与して
、例えば細胞形態等をモニターすることによりそれらの形質転換を阻害する能力
についてテストすることができる。例えば米国特許第５，６８８，６５５を参照
のこと。アッセイは、米国特許５，７１０，１７１；５，７６３，２４１；５，
５８５，３５９；５，５５７，７２９；５，５３２，３５９；５，４７０，８３
２；５，４２０，２４５；５，１８５，２４８に記載されるように行うこともで
きる。
【００５２】 これ又は他の様式で同定された化合物は、細胞、組織、完全な生物、イン・シ
トゥ、試験管内（テストチューブ、固体支持体等）、生体内又はいずれかの要求
される環境下でＲＣＥ１活性を調節するために役立ち得る。一般に、このような
試験管内活性を有する化合物は、ＲＣＥ１に関係する生物経験を調節するために
、例えば上述の生物及び細胞活性と関連する病理的状態を治療するために生体内
で役立つであろう。これにより本発明は、ｒａｓ媒介シグナル伝達に関連する病
気及び病理的状態、例えば癌、異常な細胞増殖に関連する病気の治療及び予防に
も関する。例えば、本発明は、癌を治療する方法であって、治療の必要な患者に
、その病気を治療するのに有効な量の化合物を投与することを含む方法に関し、
ここでその化合物はＲＣＥ１遺伝子又はポリペプチド発現のレギュレーターであ
る。病気を治療することは、その始まりを遅らせること、病気の進行を遅らせる
こと、病気の臨床的及び病理的サインを改善し又は遅らせることを意味し得る。
レギュレーター化合物又は化合物の混合物は、合成、天然、又は組合せであり得
る。レギュレーター化合物は、アミノ酸、ヌクレオチド、炭化水素、脂質、ポリ
サッカライド等を含み得る。レギュレーター化合物は好ましくは、ＲＣＥ１のレ
ギュレーター、例えばそのｍＲＮＡ、タンパク質発現、又はプロセッシングを阻
害し又は増加させるものである。発現は、異なる剤、例えばアンチャンス核酸、
リボザイム、アプタマー、合成化合物、又は天然の化合物を用いて調節すること
ができる。その病気を治療するために、化合物又は混合物は、当業者に明らかな
ように医薬として許容される担体及び他の賦形剤を含む、医薬組成物に調剤する
ことができる。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｅｉｇｈｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕ
ｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０を参照のこと。このような組成物
は、特に癌の治療のための有効量の他の化合物を更に含み得る。
【００５３】 本発明は、ＲＣＥ１ポリペプチドを特異的に認識する抗体にも関する。抗体、
例えばポリクローナル、モノクローナル、組換え、キメラ体は、いずれかの要求
される方法に従って調製することができる。例えば、モノクローナル抗体の生産
のために、図１によるポリペプチドは、マウス、ヤギ、又はウサギに、皮下及び
／又は腹腔内で、アジュバントあり又はなしで、免疫応答を誘発するのに有効な
量で投与することができる。その抗体は、一本鎖又はＦａｂであってもよい。そ
の抗体は、ＴｇＧ、サブタイプＴｇＧＺａ，ＴｇＧ１等であり得る。抗体は、ネ
イクトＤＮＡを投与することにより作り出すこともできる。例えば米国特許第５
，７０３，０５５；５，５８９，４６０；５，５０８，８５９を参照のこと。
【００５４】 ＲＣＥ１に特異的な抗体は、その抗体が図１又は図３のＲＣＥ１アミノ酸配列
内の又はそれを含むアミノ酸の所定の配列を認識することを意味する。これによ
り、特定の抗体は、例えばイムノブロットアッセイにより検出及び／又は測定し
て、異なるタンパク質で見い出されるエピトープに対してより、図１又は３に見
出されるアミノ酸、即ちエピトープに対してより高いアフィニティーで結合する
であろう。これにより、ＲＣＥ１のエピトープに特異的な抗体は、サンプル中の
エピトープの存在を検出するのに役立ち、例えばＲＣＥ遺伝子産物を含む組織の
サンプルは、そのエピトープが存在しないサンプルから区別される。このような
抗体は、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃａｔａｌｏｇに記載される通り有用であり、
そしてこれに従って、例えば１００μｇ／mLで調剤することができる。特定の抗
体は、ヒトＲＣＥ１のカルボキシ末端に残基；Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｙ
−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒに対して
生じる。
【００５５】 更に、本発明によるＲＣＥ１ポリペプチド又はその誘導体に結合するリガンド
は、例えば合成ペプチドライブラリー又はアプタマーを用いて調製することもで
きる（例えばＰｉｔｒｕｎｇら、米国特許５，１４３，８５４；Ｇｅｖｓｅｎら
、１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１０２：２５９−２７４；
Ｓｃｏｔｔら、１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：３８６；Ｂｌａｃｋｗｅｌ
ｌら、１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５０：１１０４；Ｔｕｅｒｋら、１９９０
，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：５０５）。
【００５６】 ＲＣＥ１に結合する抗体及び他のリガンドは、治療、診断、及び商業的調製ツ
ールとして、例えば動物、組織、細胞等においてＲＣＥ１ポリペプチドのレベル
を定量するために、ＲＣＥ１の細胞局在化及び／又は分布を同定するために、Ｒ
ＣＥ１又はＲＣＥ１の一部を含む、ポリペプチドを同定するために、ＲＣＥ１の
機能を調製するため等に、種々の方法に用いることができる。ＲＣＥ１又はその
誘導体に対する抗体は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＺＡ、免疫沈降法、ＲＩＡ
等に用いることができる。本発明は、このようなアッセイ、組成物及びそれらを
行うためのキットに関する。同様に、ＲＣＥ１に結合する抗体は、細胞ライゼー
トからＲＣＥ１を免疫沈降させてＲＣＥ１に結合する物質を同定するために用い
ることができる。
【００５７】 本発明による抗体は、組織、細胞、抗体、血液、尿、脳脊髄液を含む種々のサ
ンプル中でＲＣＥ１ポリペプチド又はそのフラグメントを検出するために用いる
ことができる。本発明の方法は、結合を達成するために当該技術分野で周知の有
効を条件下で図１又はそのペプチドに結合するリガンドを接触させ、リガンド及
びペプチドの間の特異的結合を検出することを含む。特異的結合とは、そのリガ
ンドが例えば図１又は図３のアミノ酸配列内の又はそれを含むアミノ酸の所定の
配列に結合することを意味する。抗体又はその誘導体は、ＲＣＥ１又はそのフラ
グメントの発現を阻害するために用いることもできる。ＲＣＥ１ポリペプチドの
レベルは、単独で、又は他の遺伝子産物と組合わせて測定することができる。特
に、ＲＣＥ１の量（例えばその発現レベル）は、同じ又は異なるサンプル中の他
のポリペプチドの量、例えばｒａｓ，Ｆｔａｓｅ等と（例えば比率として）比較
することができる。ＲＣＥ１のためのリガンドは、他の抗体、例えばｒａｓ等を
含む癌の腫瘍学的マーカーを認識する抗体を組み合わせて用いることができる。
一般に、ＲＣＥ１に特異的な試薬は、いずれかの要求される方法に従って、例え
ば米国特許５，３９７，７１２；５，４３４，０５０；５，４２９，９４７の通
り診断及び／又は法医学的研究に用いることができる。
【００５８】 本発明は、例えば米国特許５，４３４，０５０に開示されるような要求される
方法に従って調製された標識化ＲＣＥ１ポリペプチドにも関する。標識化ポリペ
プチドは、例えば結合アッセイにおいて、例えばＲＣＥ１に結合する物質を同定
するために、細胞内のＲＣＥ１の動きを追跡するために、試験管内、生体内、又
はイン・シトゥシステム等において用いることができる。同様にＲＣＥ１に結合
する抗体は、細胞ライゼートからＲＣＥ１を免疫沈降させて、ＲＣＥ１と同時沈
降することができる物質を同定するのに用いることができる。
【００５９】 本発明による核酸、ポリペプチド、抗体、ＲＣＥ１リガンド等は単離すること
ができる。用語“単離”とは、その材料が、それがそのもとの環境下で見い出さ
れない形態であること、例えばより濃縮され、より精製され、成分から分離され
た等の形態を意味する。単離された核酸には、例えば生きている動物から見い出
された染色体ＤＮＡから分離されたＲＣＥ１の配列を有する核酸がある。この核
酸は、ベクターの一部であっても、（特異的遺伝子ターゲッティングにより又は
その通常の位置以外の位置でのランダム組込みにより）染色体に挿入されてもよ
く、なお、その天然の環境に見い出される形態でない点で、単離することができ
る。本発明の核酸又はポリペプチドは、実質的に精製することもできる。実質的
に精製とは、核酸又はポリペプチドが分離され、他の核酸又はポリペプチドを本
質的に含まない、即ち核酸又はポリペプチドが主要な活成成分であることを意味
する。
【００６０】 本発明は、ＲＣＥ１核酸を含むトランスジェニック動物、例えば非ヒト哺乳動
物、例えばマウスにも関する。トランスジェニック動物は、周知の方法に従って
、例えば組換え遺伝子の人細胞胚の前核への前核注入、人工イースト染色体の胚
幹細胞への組込み、遺伝子ターゲッティング法、胚幹細胞法により調製すること
ができる。例えば、米国特許４，７３６，８６６；４，８７３，１９１；４，８
７３，３１６；５，０８２，７７９；５，３０４，４８９；５，１７４，９８６
；５，１７５，３８４；５，１７５，３８５；５，２２１，７７８；Ｇｏｒｄｏ
ｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７７：７３８０−７３８４（
１９８０）；Ｐａｌｍｉｔｅｒら、Ｃｅｌｌ，４１：３４３：３４５（１９８５
）；Ｐａｌｍｉｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，２０：４６５−４９
９（１９８６）；Ａｓｋｅｗら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．，１３：４１１５
：４１２４，１９９３；Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３７３：５２３−５２７
，１９９５；Ｖａｌａｎｃｉｕｓ及びＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂ
ｉｏ．，１１：１４０２−１４０８，１９９１；Ｓｔａｃｅｙら、Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｂｉｏ．，１４：１００９−１０１６，１９９４；Ｈａｓｔｙら、Ｎａｔ
ｕｒｅ，３５０：２４３−２４６，１９９５；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，２１：２６１３−２６１７，１９９３を参照のこと。
本発明による核酸は、マウス（Ｈｏｇａｎら、１９８６，ｉｎ Ｍａｎｉｐｕｌ
ａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ブタ（Ｈａｍ
ｍｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３１５：３４３−３４５，１９８５）、ヒツジ（Ｈａ
ｍｍｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３１５：３４３−３４５，１９８５）、ウシ、ラッ
ト、又は霊長類を含むいずれかの非ヒト哺乳動物に導入することができる。例え
ば、Ｃｈｕｒｃｈ，１９８７，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，５：１３
−１９；Ｃｌａｒｋら、１９８７，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，５：
２０−２４；及びＤｅＰａｍｐｈｉｌｉｓら、１９８８，Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ，６：６６２−６８０を参照のこと。更に、例えばカスタムのトランス
ジェニックラット及びマウス生産は商業的に利用できる。これらのトランスジェ
ニック動物は、癌モデルとして、例えば薬剤をテストするため、又はヘビのため
の食物として役立つ。
【００６１】 一般に、本発明の核酸、ポリペプチド、抗体等は、米国特許５，５０１，９６
９；５，５０６，１３３；５，４４１，８７０；ＷＯ９０／００６０７；ＷＯ９
１／１５５８２に記載される通り調製し、用いることができる。 本核酸、ポリペプチド、抗体等の他の態様のために、分子生物学、タンパク質
科学、及び免疫学の標準的な教科書を引用する。例えば、Ｄａｖｉｓら（１９８
６）、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，Ｅｌｓｅｖｉｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８５），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＩＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｆ．Ｍ．
Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ；Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｅｄｉｔｅｄ
ｂｙ Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉ
ｎｃ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；
Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【００６２】 実施例 ＲＣＥ１を証明するためのアッセイは、プレニル血性カルボキシメチラーゼに
連結した連結アッセイであり得る（イースト相同体；ＳＴＥ１４；例えばＭｅｔ
ｈｏｄ，Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９９５；２５０：２５１〜６６を参照のこと）。ビ
オチニル化、プレニル化ペプチド基質（例えばメチオン−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−（ファルネシル）Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅ
ｔは、Ｋ−Ｒａｓ−４ＢのＣ末端配列に基づいた。要約すると、ヒトＲＣＥ１発
現性昆虫細胞膜は最後の３つのアミノ酸を開裂してその（ファルネシル）Ｃｙｓ
−カルボキシル基を露出し；次に、内在性（又は外来性）プレニル−システイン
血性カルボキシメチラーゼは、同時基質 3Ｈ−Ｓ−アデノシルメチオニンを用い
てその露出したカルボキシル基をメチル化するであろう。得られた標識は、基質
ペプチドに組み込まれ、それはストレプトアビジンコート化ＳＰＡビーズを用い
て定量される。
【００６３】 標準アッセイは、一般に５０μＬの化合物、２５μＬの膜及び２５μＭの 3Ｈ
−ＳＡＭ／基質をこの順番で加えて含む１００μＬの全アッセイ容量の９６−ウ
ェルサンプルプレート（Ｗａｌｌａｃ Ｐａｒｔ Ｎｏ．１４５０〜４０１）中
で行われる。 １００mMＨＥＰＥＳpH７．４中の膜２５μＬの容量を各々のウェルに加え、次
に２５μＬの希釈した基質（プロテアーゼ基質ビオチン−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−（ファルネシル）Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅ
ｔを１００％ＤＭＳＯ中−２０℃に保存するが、使用直前に要求される濃度に１
０％ＤＭＳＯで希釈する）を加える。これに、標識、即ち 3Ｈ−ＳＡＭ（約８５
Ｃｉmmol；１ｍＣｉ／mL；１２μＭ）、典型的にはウェル当り０．２μＬを１０
０mMＨＥＰＥＳpH７．４で２５μＬにしたものを加えた。次にそのプレートを密
閉し、室温で６０分、インキュベートする。この反応を、ＰＢＳpH７．１＋５mM
ＥＤＴＡ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０中ＳＰＡビーズ（２５０μｇ）を含む１５
０μＬＳｔｏｐ Ｍｉｘを加えることにより停止させる。そのプレートを再び密
閉してビーズを一晩、放置して読みとる。
【００６４】 更に詳述することなく、当業者は、先の記載を用いて、本発明を、その十分な
程度まで利用することができると確信される。それゆえ、先の好ましい特定の実
施形態は、単に詳述するためとして解釈され、いずれの手段によっても本開示の
残りを限定するものと解釈するべきではない。 上述の及び図中の全ての出願、特許及び出版物の全体の開示は、引用により本
明細書に組み込まれる。
【００６５】 先の記載から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確めることができ、
その精神及び範囲から逸脱することをし、本発明に種々の変化及び改良を加えて
それを種々の利用及び条件に適合させることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ヒトＲＣＥ１のヌクレオチド及びアミノ酸配列を示す。
【図２】 マウスＲＣＥ１の完全なヌクレオチド配列を示す。
【図３】 マウスＲＣＥ１の完全なアミノ酸配列を示す。
【図４】 ヒト、マウス及びイーストＲＣＥ１のアミノ酸配列間の比較を示す。共通配列
を示す。アミノ酸配列同一の領域は強調して示す。
【図５】 ヒト及びマウスＲＣＥ１のアミノ酸配列間の比較を示す。非配列同一の領域を
強調して示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｑ 1/02 1/37 1/37 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 マーティン，ジョージ エー． アメリカ合衆国，カリフォルニア 94702， バークレー，スタネイジ アベニュ 1430 (72)発明者 ボラッグ，ガイディオン アメリカ合衆国，カリフォルニア 94547， ハークルス，カタリナ ドライブ 172 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA12 BA14 BA80 CA02 CA12 DA01 DA02 DA05 DA12 GA11 HA17 4B050 CC01 CC03 DD11 EE01 LL01 LL03 LL05 4B063 QA01 QA05 QQ21 QQ41 QQ61 QQ89 QQ95 QR06 QR12 QR16 QR42 QR56 QR57 QR83 QS28 QS32 QX07 4B064 AG27 CA10 CA20 CC01 CC24 DA01 DA14 4C084 AA06 AA07 AA13 NA14 ZB262 4H045 AA11 CA40 DA75 EA28 EA51 FA71

Claims (56)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＡＡ０２１８５９，ＡＡ０７２１９０，ＡＡ１５４６５８，
    ＡＡ１５４８６４，ＡＡ１６８６１４，ＡＡ２１８３９６，ＡＡ６１９２８２，
    ＡＡ７９０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６９６６，Ｗ１４３４４、又はＷ５７１
    ６２によりコードされるポリペプチドでない単離された哺乳動物ＲＣＥ１ポリペ
    プチド又はその生物学的に活性なポリペプチドフラグメント。
  2. 【請求項２】 前記ポリペプチドがエンドヌクレアーゼ活性、基質結合活性
    、又は免疫原活性を有することを特徴とする請求項１に記載の単離された哺乳動
    物ＲＣＥ１又はその生物学的に活性なポリペプチドフラグメント。
  3. 【請求項３】 前記基質結合活性がプレニル化ＣＡＡＸペプチド基質への結
    合であることを特徴とする請求項１に記載の単離された哺乳動物ＲＣＥ１又はそ
    の生物学的に活性なポリペプチド。
  4. 【請求項４】 ヒトである請求項１に記載の単離されたＲＣＥ１又はその生
    物学的に活性なポリペプチド。
  5. 【請求項５】 マウスである請求項１に記載の単離されたＲＣＥ１又はその
    生物学的に活性なポリペプチド。
  6. 【請求項６】 ヒトであり、かつ図１に記載のアミノ酸１〜アミノ酸３２９
    を含む請求項１に記載の単離された哺乳動物ＲＣＥ１。
  7. 【請求項７】 ヒトであり、かつ図１に記載のアミノ酸１〜アミノ酸２３０
    及びアミノ酸２５２〜アミノ酸３２９を隣接して含む請求項１に記載の単離され
    た哺乳動物ＲＣＥ１。
  8. 【請求項８】 図３に記載のアミノ酸１〜３２９を含む請求項１に記載の単
    離された哺乳動物ＲＣＥ１。
  9. 【請求項９】 図１に記載のＤＮＡ配列又はその相補配列とストリンジェン
    シー条件下でハイブリダイズする天然で得られる核酸によりコードされる請求項
    １に記載の単離されたＲＣＥ１であって、その配列がＡＡ０２１８５９，ＡＡ０
    ７２１９０，ＡＡ１５４６５８，ＡＡ１５４８６４，ＡＡ１６８６１４，ＡＡ２
    １８３９６，ＡＡ６１９２８２，ＡＡ７９０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６９６
    ６，Ｗ１４３４４，Ｗ５７１６２、イーストＲＣＥ１、又はイーストＲＣＥ１の
    フラグメントでない単離されたＲＣＥ１。
  10. 【請求項１０】 図１に記載のアミノ酸配列と少くとも約９５％のアミノ酸
    同一性を含む請求項９に記載の単離されたＲＣＥ１。
  11. 【請求項１１】 図２に記載のＤＮＡ配列又はその相補配列とストリンジェ
    ンシー条件下でハイブリダイズする天然で得られる核酸によりコードされる請求
    項１に記載の単離されたＲＣＥ１であって、その配列が、ＡＡ０２１８５９，Ａ
    Ａ０７２１９０，ＡＡ１５４６５８，ＡＡ１５４８６４，ＡＡ１６８６１４，Ａ
    Ａ２１８３９６，ＡＡ６１９２８２，ＡＡ７９０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６
    ９６６，Ｗ１４３４４，Ｗ５７１６２、イーストＲＣＥ１、又はイーストＲＣＥ
    １のフラグメントでない単離されたＲＣＥ１。
  12. 【請求項１２】 哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチド又はその生物学的に活性な
    ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、そ
    の配列が、ＡＡ０２１８５９，ＡＡ０７２１９０，ＡＡ１５４６５８，ＡＡ１５
    ４８６４，ＡＡ１６８６１４，ＡＡ２１８３９６，ＡＡ６１９２８２，ＡＡ７９
    ０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６９６６，Ｗ１４３４４、又はＷ５７１６２でな
    い単離された核酸。
  13. 【請求項１３】 前記ポリペプチドが、エンドヌクレアーゼ活性、基質結合
    活性、又は免疫原活性を有することを特徴とする請求項１２に記載の単離された
    核酸。
  14. 【請求項１４】 前記基質結合活性が、プレニル化ＣＡＡＸペプチド基質へ
    の結合である請求項１３に記載の単離された核酸。
  15. 【請求項１５】 ヒトである請求項１２に記載の単離された核酸。
  16. 【請求項１６】 前記核酸配列が図１に記載のアミノ酸１〜アミノ酸３２９
    をコードすることを特徴とする請求項１２に記載の単離された核酸。
  17. 【請求項１７】 前記核酸が、図１に記載のアミノ酸１〜アミノ酸２３０及
    びアミノ酸２５２〜アミノ酸３２９を隣接してコードすることを特徴とする請求
    項１２に記載の単離された核酸。
  18. 【請求項１８】 図１に記載の完全なコーディングヌクレオチド配列又はそ
    の相補配列を有する請求項１２に記載の単離された核酸。
  19. 【請求項１９】 １又は複数のアミノ酸位置が置換されもしくは削除され又
    は両方であり、前記核酸によりコードされるポリペプチドが生物学的に活性であ
    ることを除く、請求項１８に記載の単離された核酸。
  20. 【請求項２０】 １又は複数の置換されたアミノ酸位置が同種アミノ酸によ
    り置換されていることを特徴とする請求項１８に記載の単離された核酸。
  21. 【請求項２１】 前記核酸配列が図１が選択されるアミノ酸配列をコードし
    、前記アミノ酸配列がエンドヌクレアーゼ活性、基質結合活性、又は免疫原活性
    を有することを特徴とする請求項１２に記載の単離された核酸。
  22. 【請求項２２】 図１に記載のＤＮＡ配列又はその相補配列とストリンジェ
    ンシー条件下でハイブリダイズする天然で得ることができる核酸配列によりコー
    ドされた請求項１２に記載の単離された核酸であって、ＡＡ０２１８５９，ＡＡ
    ０７２１９０，ＡＡ１５４６５８，ＡＡ１５４８６４，ＡＡ１６８６１４，ＡＡ
    ２１８３９６，ＡＡ６１９２８２，ＡＡ７９０５１７，Ｃ７７０５２，Ｃ８６９
    ６６，Ｗ１４３４４，Ｗ５７１６２、イーストＲＣＥ１、又はイーストＲＣＥ１
    のフラグメントでない単離された核酸。
  23. 【請求項２３】 図１に記載のヌクレオチド配列から選択される１２〜１０
    ０塩基対のいずれかの連続配列又はその相補配列から本質的になる請求項１２に
    記載の単離された核酸。
  24. 【請求項２４】 前記配列からの少くとも１で５以下のヌクレオチド置換を
    有する請求項２３に記載の単離された核酸。
  25. 【請求項２５】 検出可能なラベルを更に含む請求項２３に記載の単離され
    た核酸。
  26. 【請求項２６】 図２に記載の完全なコーディングヌクレオチド配列又はそ
    の相補配列を有する請求項１２に記載の単離された核酸。
  27. 【請求項２７】 前記核酸配列が発現調節配列に作用可能に連結しているこ
    とを特徴とする請求項１２に記載の単離された核酸。
  28. 【請求項２８】 前記核酸配列が天然で得られるヌクレオチド配列を含むこ
    とを特徴とする請求項１２に記載の単離された核酸。
  29. 【請求項２９】 前記核酸が、中断なく前記ポリペプチドをコードすること
    を特徴とする請求項１２に記載の単離された核酸。
  30. 【請求項３０】 前記核酸がＤＮＡ又はＲＮＡであることを特徴とする請求
    項１２に記載の単離された核酸。
  31. 【請求項３１】 前記コードされる生物学的に活性なポリペプチドが、エン
    ドヌクレアーゼ活性、基質結合活性、又は免疫原活性を有することを特徴とする
    請求項１１に記載の単離された核酸。
  32. 【請求項３２】 核酸によりコードされた哺乳動物ＲＣＥ１ポリペプチドを
    、形質転換された宿生細胞中で発現させる方法であって、 請求項１２に記載の核酸を含む形質転換された宿生細胞を、前記ポリペプチド
    を発現させるために有効な条件下で培養することを含む方法。
  33. 【請求項３３】 前記ポリペプチドを単離することを更に含む請求項３２に
    記載の方法。
  34. 【請求項３４】 前記ポリペプチドの発現を調節することを更に含む請求項
    ３２に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 請求項３２に記載の方法により生産される単離されたポリ
    ペプチド。
  36. 【請求項３６】 請求項１２に記載の核酸を含む形質転換されたポリペプチ
    ド。
  37. 【請求項３７】 請求項１２に記載の核酸を含むベクター。
  38. 【請求項３８】 請求項１２に記載の核酸を含むベクター。
  39. 【請求項３９】 請求項１２に記載の核酸を含むトランスジェニック非ヒト
    哺乳動物。
  40. 【請求項４０】 哺乳動物ＲＣＥ１活性を調節する化合物を同定する方法で
    あって、 テスト化合物の存在下で、末端ＣＡＡＸポリペプチドモチーフを含む基質及び
    哺乳動物ＲＣＥ１又はそのタンパク質内部分解フラグメントを、哺乳動物ＲＣＥ
    １又は前記フラグメントのために有効な条件下で反応させて、前記基質からＡＡ
    Ｘアミノ酸残基をタンパク質分解により除去して前記基質のＣｙｓ−ＣＯＯＨ末
    端を露出させ； 前記ＡＡＸ残基のタンパク質分解による除去を検出し；そして 前記テスト化合物の存在及び欠如下で前記ＡＡＸ残基のタンパク質分解による
    除去の量を比較することにより前記テスト化合物がＲＣＥ１タンパク質内部分解
    活性を調節するか否かを同定すること を含む方法。
  41. 【請求項４１】 前記基質がプレニル化されていることを特徴とする請求項
    ４０に記載の方法。
  42. 【請求項４２】 前記基質がビオチン−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−
    Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−（ファルネシル）Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔであること
    を特徴とする請求項４０に記載の方法。
  43. 【請求項４３】 前記タンパク質分解による除去の検出が、 哺乳動物ＲＣＥ１によるタンパク質分解により露出された基質のＣｙｓ−ＣＯ
    ＯＨ末端を検出することにより行われることを特徴とする請求項４０に記載の方
    法。
  44. 【請求項４４】 前記タンパク質分解による除去の検出が、 検出可能に標識されたＳ−アデノシルメチオニンを用いて哺乳動物ＲＣＥ１に
    よるタンパク質分解により露出された基質のＣｙｓ−ＣＯＯＨ末端をメチル化し
    ； その検出可能に標識されたメチル化Ｃｙｓ−ＣＯＯＨを検出することにより行
    われることを特徴とする請求項４０に記載の方法。
  45. 【請求項４５】 前記タンパク質分解による除去の検出が、 検出可能に標識されたＳ−アデノシルメチオニンを用いて哺乳動物ＲＣＥ１ポ
    リペプチドのタンパク質分解により露出された基質のＣｙｓ−ＣＯＯＨ末端をメ
    チル化し、ここで該メチル化が、メチルトランスフェラーゼにより行われ、検出
    可能に標識されたメチル化Ｃｙｓ−ＣＯＯＨ末端を生ずることにより行われるこ
    とを特徴とする請求項４０に記載の方法。
  46. 【請求項４６】 前記メチルトランスフェラーゼがプレニルタンパク質特異
    的であることを特徴とする請求項４０に記載の方法。
  47. 【請求項４７】 前記哺乳動物ＲＣＥ１が実質的に精製されていることを特
    徴とする請求項４０に記載の方法。
  48. 【請求項４８】 前記哺乳動物ＲＣＥ１が細胞膜の異種成分として存在する
    ことを特徴とする請求項４０に記載の方法。
  49. 【請求項４９】 前記哺乳動物ＲＣＥ１が細胞膜抽出物の異種成分として存
    在することを特徴とする請求項４０に記載の方法。
  50. 【請求項５０】 前記ポリペプチド基質がビオチン−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｓｅ
    ｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−（ファルネシル）Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅ
    ｔであり、前記タンパク質分解による除去の検出が、 検出可能に標識されたＳ−アデノシルメチオニンを用いて哺乳動物ＲＣＥ１の
    タンパク質分解により露出された基質のＣｙｓ−ＣＯＯＨ末端をメチル化し、こ
    こで該メチル化は、メチルトランスフェラーゼにより行われ、前記基質の検出可
    能に標識されたメチル化Ｃｙｓ−ＣＯＯＨ末端を作り出し； ストレプトアビジン−コート化ビーズを用いて前記基質を捕獲し； その捕獲された基質中に存在する検出可能な標識を定量すること により行われることを特徴とする請求項４０に記載の方法。
  51. 【請求項５１】 前記哺乳動物ＲＣＥ１がヒト又はマウスであることを特徴
    とする請求項４０に記載の方法。
  52. 【請求項５２】 ｒａｓ依存性シグナル伝達経路を調節する方法であって、
    請求項１２に記載の核酸又はそのアンチセンスを、前記細胞に、前記核酸が前記
    シグナル伝達経路を調節するために有効な量で発現される条件下で導入すること
    を含む方法。
  53. 【請求項５３】 前記ＲＣＥ１がヒトであることを特徴とする請求項５２に
    記載の方法。
  54. 【請求項５４】 ＲＣＥ１に特異的である単離された抗体。
  55. 【請求項５５】 図１に記載のアミノ酸１〜アミノ酸３１１のアミノ酸配列
    に結合する請求項５２に記載の単離された抗体。
  56. 【請求項５６】 Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌ
    ｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒに特異的である請求項５２に記載
    の単離された抗体。
JP2000551012A 1998-05-22 1999-04-19 ファルネシル向性エンドペプチダーゼに関連する新規核酸及びポリペプチド Pending JP2002516111A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8642198P 1998-05-22 1998-05-22
US60/086,421 1998-05-22
PCT/US1999/008594 WO1999061628A2 (en) 1998-05-22 1999-04-19 Novel nucleic acids and polypeptides related to a farnesyl-directed endopeptidase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2002516111A true JP2002516111A (ja) 2002-06-04

Family

ID=22198461

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000551012A Pending JP2002516111A (ja) 1998-05-22 1999-04-19 ファルネシル向性エンドペプチダーゼに関連する新規核酸及びポリペプチド

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20030013181A1 (ja)
EP (1) EP1078076A2 (ja)
JP (1) JP2002516111A (ja)
CN (1) CN1304454A (ja)
AU (1) AU3570399A (ja)
CA (1) CA2325462A1 (ja)
WO (1) WO1999061628A2 (ja)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998005786A2 (en) * 1996-08-07 1998-02-12 The Regents Of The University Of California Afc1 and rce1:isoprenylated caax processing enzymes
WO1998054333A2 (en) * 1997-06-02 1998-12-03 Acacia Biosciences Inc. Mammalian caax processing enzymes
CA2234402A1 (en) * 1997-06-24 1998-12-24 Smithkline Beecham Corporation Human rce1
WO1999014343A1 (en) * 1997-09-19 1999-03-25 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Dna encoding a ras carboxyl-terminal processing protein

Also Published As

Publication number Publication date
US20030013181A1 (en) 2003-01-16
WO1999061628A3 (en) 2000-02-03
WO1999061628A2 (en) 1999-12-02
CN1304454A (zh) 2001-07-18
AU3570399A (en) 1999-12-13
CA2325462A1 (en) 1999-12-02
EP1078076A2 (en) 2001-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2665489C (en) Prrg4-associated compositions and methods of use thereof in methods of tumor diagnosis
US7994294B2 (en) Nucleic acids and polypeptides related to a guanine exchange factor of Rho GTPase
JP2007289196A (ja) 癌組織でディファレンシャルに発現される核酸配列
JPH09512702A (ja) Ｄｎａミスマッチ修復遺伝子に関する組成物および方法
JP2003533174A (ja) 新規なポリペプチドおよびこのポリペプチドをコードする核酸
AU770667B2 (en) CHP polypeptide, a ligand of PAK65
JP4488140B2 (ja) セリンプロテアーゼであるコリン
JP2005505237A (ja) スルファターゼおよびそれらの使用の方法
US6511825B1 (en) Cell signaling polypeptides and nucleic acids
JP2002516111A (ja) ファルネシル向性エンドペプチダーゼに関連する新規核酸及びポリペプチド
JP2002511271A (ja) 新規膜メタロプロテアーゼｎｅｐｉｉ及び治療において有用な阻害因子のスクリーニングのためのその使用
JP2002512803A (ja) ファルネシル指向システインカルボキシメチルトランスフェラーゼに関連する新規核酸およびポリペプチド
US6806075B1 (en) Corin, a serine protease
CA2319037A1 (en) Identification of factors which mediate the interaction of heterotrimeric g proteins and monomeric g proteins
JP2006512923A (ja) 癌関連遺伝子ファミリー
US20050026255A1 (en) Corin, a serine protease
CN100552027C (zh) 与癌症相关的基因家族
EP1259625A2 (en) 18232, a dual specificity phosphatase
WO2002077162A2 (en) Gene (t23490) associated with benign prostatic hyperplasia
WO2001073043A2 (en) 32451, a human ubiquitin conjugating enzyme-like molecule and uses thereof
WO2002057417A2 (en) Angiogenesis gene and modulators