JP2002515060A - （２，６）−ＳＴエピトープクラスターを有するα−Ｏ−結合複合糖質、その製造方法および使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規なα−O−結合複合糖質、たとえばα−O−結合糖ペプチド、並びにこれらの合成方法を提供する。一般的な調製アプローチは、上皮腫瘍細胞表面に一般的に見い出されるムチンモチーフの合成によって例解される。本発明はさらに、α−O−結合複合糖質を用いた癌の治療方法および組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 (2,6)-STエピトープクラスターを有するα-O-結合複合糖質、 その製造方法および使用 本発明は、1997年4月16日に出願された暫定米国特許出願第60/043,713号に基 づき、それによりその内容は出典明示して本出願の一部とみなす。本発明は、国 際衛生局から認可CA-28824、HL-25848およびAI-16943の下、政府の援助を得てな された。従って米国政府は本発明の一定の権利を有する。発明の分野 本発明はα-O-結合糖ペプチドの分野にある。詳しくは本発明は、抗癌治療薬 として有用な糖ドメインクラスター(clustered glycodomains)を有するα-O-結 合複合糖質の製造方法に関する。本発明はまた、かかるα-O-結合複合糖質を含 んでなる新規組成物、およびこれらの複合糖質（glycoconjugates）を用いる癌 の治療方法に関する。 本出願において、本発明が属する現行の技術水準をさらに十分に記載するため に種々の刊行物が引用されているが、その各々はそのまま出典明示して本出願の 一部とみなされる。発明の背景 最近、生物学的プロセスに関するシグナル分子としての炭水化物の役割が注目 されている。文献：M.L.Phillips,et al.,Science,1990,250,1130;M.J.Polleyら ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991 88,6224:T.Takiら,J.Biol.Chem.,1996,261,3075 ;Y.Hirabayashi,A,Hyogo,T.Nakao,K.Tsuchiya,Y.Suzuki,M.Matsumoto,K.Kon,S.A ndo,同書,1990,265,8144;O.Hindsgaul,T.Norberg,J.LePendu,R.U.Lemieux,Carbo hydr.Res.1982,109,109;U.Spohr,R.U.Lemineux,同書，1988，174,211．細胞の相 互作用の仲介における炭水化物の関わりの範囲を解明することは、最新の生物医 学的研究における重要な調査領域である。 詳細な構造情報をもたらす炭水化物分子は、遊離物質としてではなくむしろ複合 糖質（糖タンパク質および糖脂質参照）として存在する傾向がある。しばしば複 合体を均質な形で単離することを伴う錯形成性、及び、これら天然に存在する複 合体から完全な形の炭水化物を回収することの困難性があるとすれば、合成的ア プローチの方が適切であることは明白である（グリコシル化の最近の概説に関し ては、文献：Paulsen,H.;Angew.Chemie Int.Ed.Engl.1982,21,155;Schmidt,R.R. ,Angew.Chemie Int.Ed.Engl.1986,25,212;Schmidt,R.R.,Comprehensive Organic Synthesis,第6巻,第1(2)章,Pergamon Press,Oxford,1991;Schmidt,R.R.,Carboh ydrates,Synthetic Methods and Application in Medicinal Chemistry,第1巻， 第4章,VCH Publishers,Weinheim,New York,1992を参照。グリコシド合成におけ るグリコシル供与体としてのグリカール類の使用に関しては、文献：Lemieux,R. U.,Can.J.Chem.,1964,42,1417;Lemieux,R.U.,Fraiser-Reid,B.,Can.J.Chem.1965 ,43,1460;Lemieux,R.U.;Morgan,A.R.,Can.J.Chem.1965,43,2190;Thiem,J.ら,Syn thesis 1978,696;Thiem,J.Ossowski,P.,Carbohydr.Chem.,1984,3,287;Thiem,J. ら,LiebigsAnn.Chem.,1986,1044;Thiem,J.Trends in Synthetic Carbohydrate C hemistry,Horton,D.ら編,ACS Symposium Series No.386,American Chemical Soc iety,Washington,D.C.,1989,第8章を参照）。 糖タンパク質および糖脂質の双方に含まれる血液型物質の炭水化物ドメインは 、赤血球、上皮細胞および種々の分泌物に分配される。これらの系に対する初期 の焦点は、それらの中心を血液型の特異性を決定することに置かれていた。文献 ：R.R.Race;R.Sanger,Blood Groups in Man,第6版,Blackwell,Oxford,1975.しか しながら、かかる決定因子は概ね細胞の付着および結合現象に関わりがあること がわかっている（例えば、文献：M.L.Phillipsら,Science 1990,250,1130）。さ らに、複合形態にある血液型物質に関する集合体は、種々の腫瘍の発生のマーカ ーとして見出される。文献：K.O.Lloyd,Am.J.Clinical Path.,1987,87,129;K.O. Lloyd,Cancer Biol.,1991,2,421。炭水化物に基づく腫瘍抗原性因子は、診断レ ベルで、ドラッグデリバリーにおいて、または理想的には免疫療法における供給 源としての用途を持っている。文献：Toyokuni,T.ら，J.Am.Chem Soc. 1994,116,395;Dranoff,G.ら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993,90,3539;Tao,M-H.:L evy,R.,Nature 1993,362,755;Boon,T.,Int.J.Cancer 1993,54,177;Livingston,P .O.,Curr.Opin.Immunol.1992,4,624;Hakomori,S.,Annu.Rev.Immunol.1984,2,103 ;K.Shigetaら,J.Biol.Chem.1987,262,1358. 本発明は、精ペプチド合成の新しい戦略およびプロトコールを提供する。その 目的は、複合体ドメインを比較的高い立体特異性で会合させ得るよう製法を簡略 化することにある。主に複合糖質合成の進展には、高度の収斂とブロッキング基 の操作と関連した負荷からの除去を達成することが必要である。もう１つの必要 条件として、タンパク質または脂質を運ぶための適当な結合の提供を伴って炭水 化物決定因子を送達することである。文献：Bernstein,M.A.；Hall,L.D.,Carboh ydr.Res.1980,78,Cl;Lemieux,R.U.,Chem.Soc.Rev.1978,7,423;R.U.Lemieuxら,J. Am.Chem.Soc.1975,97,4076.合成により得られた炭水化物を臨床用途に適した担 体に組み込もうとするならば、このことは決定的な条件となる。 癌細胞に選択的な（または理想的には特異的な）抗原は、有効な免疫を惹起す るのに有用であることがわかっている。文献：Hakomori,S.,Cancer Res.,1985,4 5,2405-2414;Feizi,T.,Cancer Surveys 1985,4,245-269．新規炭水化物パターン はしばしば、細胞表面糖タンパク質、または膜を足場とする糖脂質のいずれかと して形質転換細胞により提供される。原則として、抗体生産を刺激する合成複合 糖質を十分に選択すれば、それらの細胞表面に同じタイプの構造が存在する癌に 対して有効な免疫性を与えることが可能であった。文献：Dennis,J.,Oxford Gly costems Glyconews,第2版,1992;Lloyd,K.O.,Specific Immunotherapy of Cancer with Vaccines,1993,New York Academy of Sciences,50-58頁．標的細胞に対す る抗原の限定を増強することで治療を首尾よく改良する見込みがある。例えば、 かかる特異的抗原の１つに、Hakomoriおよび共同研究者により、乳癌細胞系統MC F-7から単離され、モノクローナル抗体MBr1として免疫同定されたグリコスフィ ンゴ脂質がある。文献：Bremer,E.G.ら,J.Biol.Chem.1984,259,14773-14777;Men ard,S.ら,Cancer Res.1983,43,1295-1300. 糖タンパク質における注目されるサージ(文献：M.J.McPhersonら編，PCR A Practical Approach,1994,Oxford University Press,０xford,G.M．Blackburn;M .J Gait編,Nucleic Acids in Chemistry and Biology,1990,Oxford University press,Oxford;A.M.Bray;A.G.Jhingran;R.M.Valero;N.J.Maeji,J.Org.Chem.1994, 59,2197;G.Jung;A.G.Beck-Sickinger,AngewChem.Int.Ed.Engl.1992,31,367;M.A. Gallop;R.W.Barrett;W.J.Dower;S.P.A.Fodor;E.M．Gordon,J.Med.Chem.1994,37, 1233;H.P.Nestler;P.A.Bartlett;W.C.Still,J.Org.Chem.1994,59,4723;M.Meldal ,Curr.Opin.Struct.Biol.1994,4,673)は、細胞成長の調節、病原体の細胞への結 合(文献：O.P.Bahl,Glycoconjugates:Composition,structure and function,H.J .Allen,E.C．Kisailus編,1992,Marcel Dekker,Inc.,New York,1頁)、細胞内伝達 および転移(文献：A.Kobata,Acc.Chem.Res.1993,26,319)を含む種々の生物学的 プロセスにおけるそれらの重要性がよく知られることからもたらされた。糖タン パク質は細胞分化マーカーとして働き、おそらくはタンパク質分解に対する保護 を与えることにより、タンパク質の折りたたみおよび輸送に加わる。文献：G.Op denakkerら，FASEB J.1993,7,1330.単離技術および構造解明法の改良(文献：A.D e;K-H.Khoo,Curr.Opin.Struct.Biol.1993,3,687)により、天然で生産される糖タ ンパク質における高レベルの微細な不均一性が明らかとなった。文献：R.A.Dwek ら,Annu.Rev.Biochem.1993,62,65.単一真核細胞系統がしばしば、所定のタンパ ク質配列のいずれかを多くの糖形態で産生する。例えば、貧血症に対して臨床上 有効な赤血球刺激剤であるエリトロポエチン(EPO)は、チャイニーズハムスター 卵巣細胞(CHO)で発現させた場合、13を越える公知の種のオリゴ糖鎖によりグリ コシル化される(文献：Y.C.Lee;R.T.Lee編,Neoglycoconjugates:Preparation an d Applications,1994,Academic Press,London)。エリトロポエチンの効力は、グ リコシル化のタイプおよび程度にもよるが強力である(文献：E.Watsonら,Glycob iology,1994,4,227)。 ある糖タンパク質のオリゴ糖鎖の生物学的な適切性を解明するには、純品を入 手する必要があり、これまでは単離によって得るしかなかった。糖タンパク質の 不均一性はこの工程を特に集中的な労力の要るものする。しかしながら、特定の 細胞系統を選択すれば、構造活性研究のため、より均一な糖タンパク質を生産す ることができる。米国特許第5,272,070号。しかしながら天然の供給源からの単 離は依然、困難であるという問題がある。 受容体は通常、所定の高分子複合糖質の小断片しか認識しない。その結果とし て、より小さいが十分に定義された推定糖ペプチドリガンドの合成が、重要な構 造情報のソースとしての単離と競合するものとしてもたらされた(文献：Y.C.Lee ;R.T.Lee編,前記)。 すべて合成により製造された複合糖質は、ネズミ免疫系で体液性応答の起動を 誘発することが知られている。文献：Ragupathi,G.ら,Angew.Cnem.Int.Ed.Engl. 1997,36,125;Toyokuni,T.;Singhal,A.K.,Chem.Soc.Rev.1995,24,231;Angew.Cnem .Int.Ed.Engl.1996,35,1381.糖ペプチドは、大部分の糖脂質や炭水化物自体とは 対照的に、好都合な場合では主要組織適合遺伝子複合体(MHC)分子と結合し、T細 胞を刺激することが知られている。文献：Deck,B.ら，J.Immunology 1995,1074; Haurum,J.S.ら,L.Exp.Med.1994,180,739;Sieling,P.A.ら,Science 1995,269,227 （CD1に限定される微生物糖脂質のT細胞認識を示す）。適当に刺激されたT細胞 は糖ペプチドの炭水化物部分を特異的に認識する受容体を発現する。本発明は、 ペプチド結合の使用により炭水化物の免疫原性を増強させる手段を実証するもの である。 糖ペプチドおよび糖タンパク質を含む、化学的に均一な複合糖質の製造は、極 めて重要な挑戦である。文献：Bill,R.M.;Flitsch,S.L.;Chem.& Biol.1996,3,14 5。これらの目的を達成するため、確立されたクローニングのアプローチの進展 が意欲的に行われている。種々の発現系（細菌、酵母および細胞系統を含む）が この目的に向けたアプローチを提供するが、前記のように不均一な糖タンパク質 をもたらす。文献：Jenkins,N.ら，Nature Biotech.1996,14,975。かくして化学 合成が均一な形態にあるかかる２つのドメインからなる構築体への好ましい接近 手段を示す。さらに、合成は、選択された糖形態がペプチド鎖の望ましいいずれ の位置においても組み込まれる構築体の集合を可能とするものである。 主題の発明に先立ち、Kunz他により、液相および固相の双方において目的の均 一系へ合成により接近することが可能となる、糖ペプチド合成法が開発された（ 文献：M.Meldal,Curr.Opin.Struct.Biol,1994,4,710;M.Meldal,Neoglycoc onjugates:Preparation and Applications,前記;S.J.Danishefsky;J.Y.Roberge, Glycopeptides and Related Compounds:Chemical Synthesis,Analysis and Appl ications,1995,D.G.Large,C.D.Warren編,Marcel Dekker,New York;S.T.Cohen-An isfeld and P.T.Lansbury,Jr.,J.Am.Chem.Soc．1993,115,10531;S.T.Anisfeld;P .T.Lansbury Jr.Org.Chem,1990,55,5560;D.Vetterら,Angew.Chem.Int.Ed.Engl,1 995,34,60-63).Cohen-AnisfeldおよびLansburyは、収斂溶液に基づく、選択され たすでに入手可能な糖類とペプチドとの結合を開示している。文献：S.T.Cohen- Anisfeld;P.T.Lansbury,Jr.,J.Am.Chem.Soc.,前記。 このように、α-O-結合複合糖質の効果的な製造方法は、本発明に先行しては ほとんど知られていない。文献：Nakahara,Y.ら,Synthetic Oligosaccharides,A CS Symp.Ser.560,1994,249-266頁;Garg,H.G.ら,Adv.Carb.Chem.Biochem.1994,50 ,277。ほとんどすべてのアプローチが、単糖段階でアミノ酸（セリンまたはトレ オニン）を組み込むものであった。この構築の後にペプチジルおよび炭水化物ド メインの合成が漸次行われる。文献：Qui,D.;Koganty,R.R.;Tetrahedron Lett.1 997,38,45.Eloffson,M.ら,Tetrahedron 1997,53,369.Meinjohanns,E.ら,J.Chem. Soc.,Perkin Trans.1,1996,985.Wang,Z-G.ら、Carbohydr.Res.1996,295,25.Szab o,L.ら，Carbohydr.Res.1995,274,11.合成的な問題の範囲は当技術分野で十分公 知であるが、ほとんど進展していない。本発明は、別の、より単純でよりよく収 斂するアプローチを提供する（図2）。 文献：Toyokuniら,J.Amer.Chem．Soc.,1994,116,395は、Tn発現糖タンパク質 に対して免疫応答を惹起する効力を有する二量体Tn抗原-リポペプチド複合体を 含んでなる合成ワクチンを製造した。しかしながら、本発明者らの研究の以前に は、前立腺癌細胞の表面が、セリン残基ではなくトレオニンを介して結合したTn クラスターを含んでなる糖タンパク質を与えることは認識されていなかった。従 って本発明は、予期されないほど高い抗癌効力を有するワクチンを提供する。発明の概要 従って本発明の１つの目的は、糖ペプチドをはじめとする新規α-O-結合複合 糖質および抗癌治療薬として有用な関連化合物を提供することにある。 本発明のもう１つの目的は、かかる複合糖質を製造する合成方法を提供するこ とにある。本発明のさらなる目的は、本発明の製造方法によって得られる複合糖 質のいずれかを、所望により医薬担体と組み合わせて含んでなる、癌患者の治療 に有用な組成物を提供することにある。 本発明はまた、ヒトにおいて有効な免疫を惹起することができる完全合成炭水 化物ワクチンを提供することを意図するものである。 本発明のさらなる目的は、本発明の製造方法によって得られる複合糖質のいず れかを、所望により医薬担体と組み合わせて用いて癌患者を治療する方法を提供 することにある。図面の簡単な説明 図1は、ムチン中に存在する場合のα-O-結合複合糖質の概略的構造を示してい る。 図2は、ムチン複合糖質への一般的な合成戦略を示している。 図3は、鍵となる中間体β-フェニルチオグリコシド11を製造するための合成経 路を示している。反応条件：(a)(1)DMDO,CH₂Cl₂；(2)6-O-TIPS-ガラクタール，Z nCl₂,-78℃ないし0℃;(3)Ac₂O,Et₃N,DMAP,75％,(b)TBAF/AcOH/THT;80%;(c)5(1.3 当量),TMSOTf(0.1当量),THF:トルエン1:1,-60℃ないし-45℃,84％,α:β 4:1;(d )NaN₃,CAN,CH₃CN,-15℃,60％;(e)LiBr,CH₃CN,75％;(f)(1)1PhSH,iPr₂NEt,CH₃CN, 82％(2)CCl₃CN,K₂CO₃,CH₂Cl₂,80％;(g)(1)PhSH,iPr₂NEt;(2)CIP(OEt₂),iPr₂NEt, THF,(不安定な化合物，2段階で-72％);(h)(1)LiBr,CH₃CN,75％;(2)LiSPh,THF,0 ℃,70％)。 図4は、複合糖質ムチン1への合成経路を示している。 反応条件：(a)CH₃COSH,78％;(b)H₂/10％ Pd-C,MeOH,H₂O,定量的;(c)H₂N-Ala-Val -OBn,IIDQ,CH₂Cl₂,85％;(d)KF,DMF,18-クラウン-6,95％;(e)15,IIDQ,87％:(f)KF ,DMF,18-クラウン-6,93％;(g)14,IIDQ,90％;(h)(1)KF,DMF,18-クラウン-6;(2)Ac₂ O,CH₂Cl₂;(i)H₂/10％ Pd-C,MeOH,H₂O,92％(3段階);(j)NaOH,H₂O,80％。 図5は、断片結合による複合糖質を製造する合成経路を示している。 試薬：(a)IIDQ,CH₂Cl₂,室温,80％;(b)H₂/Pd-C,MeOH,H₂O,95％;(c)CF₃COOH,CH₂Cl₂ ;(d)NaOH,H₂O,MeOH。 図6は、ヨードスルホンアミノ化/4+2経路によるLe^yエピトープのα-O-結合糖 ペプチド複合体の合成を示している。 図7は、アジドニトロ化/4+2経路によるLe^yエピトープのα-O-結合糖ペプチド 複合体の合成を示している。 図8および9は、本発明の方法によって誘導された糖ペプチドの例を示している 。 図10は、糖ペプチドST_NおよびT(TF)を製造する合成経路を示している。 図11は、糖ペプチド(2,3)STを製造する合成経路を示している。 図12は、糖ペプチドグリコホリンを製造する合成経路を示している。 図13は、糖ペプチド3-Le^yおよび6-Le^yを製造する合成経路を示している。 図14は、T抗原を製造する合成経路を示している。 図15は、T抗原のαクラスターを製造する合成経路を示している。 図16は、T抗原のβクラスターを製造する合成経路を示している。反応の順序 は図15に示された通り。 図17、18および19は、Le^yエピトープのα-O-結合糖ペプチド複合体の合成を示 している。Rは図18に定義されている。 図20は、Tn三量体糖ペプチドのPamCysリポペプチドとの結合を示している；(B )新規ワクチン構築体の一般表示；(C)はPamCys Tn三量体。 図21では、(A)PamCys-Tn三量体の合成方法；(B)架橋結合を介するKLHとBSA複 合体の製造方法(12,13)を示している。 図22では、(A)はムチンに関連するF1α抗原およびその製造方法のための逆合 成的アプローチを；(B)は中間体5'および6'の製造方法を示している。条件：i)N aN₃,CAN,CH₃CN,-20℃,一晩,40％,α(4a'):β(4b')1:1;ii)PhSH,EtN(i-Pr)₂,CH₃, CN,0℃,1時間,99.8％,iii)K₂CO₃,CCl₃CN,CH₂Cl₂,室温，5時間,84％,5a':5b'1:5; iv)DAST,CH₂Cl₂,0℃,1時間,93％,6a':6b'1:1。 図23は、中間体1'および2'の製造方法を示している。条件：i)TBAF,HOAc,THF, 室温,3d,9'については収率100％,10'については収率94％;ii)11',BF₃,Et₂O,-30 ℃,一晩,iii)AcSH,ピリジン,室温，一晩，11'の50％転化に基づき収率72％, 12'の48％転化に基づき収率58％（2段階）；iv)80％HOAc水溶液，一晩,室温-40 ℃;v)Ac₂O，ピリジン，室温，一晩;vi)10％ Pd/C_,H₂,MeOH-H₂O,室温,4時間;vii) モルホリン,DMF,室温，一晩;viii)NaOMe,MeOH-THF,室温,一晩，1'については収 率64％,2'については収率72％（５段階）。 図24は、F1α抗原の合成における中間体の製造方法を示している。条件：i)(s ym-コリジン)₂ClO₄,PhSO₂NH₂,0℃;LiHMDS<EtSH,-40℃ないし室温,2段階で収率88 ％;ii)MeOTf,DTBP,0℃,20'については収率86％およびα異性体の収率8％;21'に ついては収率85％およびα異性体の収率6％;iii)Na,NH₃,78℃;Ac₂O₂,Py,室温,22 'については2段階で59％;iv)NaN₃,CAN,CH₃CN,-20℃;v)PhSH,EtN(i-Pr)₂;CCl₃CN, K₂CO₃;23'について,3段階で2:7 α/βの収率17％；24'については3段階で3:1 α /βの収率30%;vi)LiBr,CH₃CN,25'についてはαのみ収率46％;vii)Ac₂O,Py;Na-Hg ,Na₂HPO₄1,2段階で収率94％,NaN₃,CAN,収率26％,PhSH,EtN(i-Pr)₂;K₂CO₃,CCl₃CN ,2段階で収率53％(27');viii)LiSPh,THF,収率60％,βのみ(26')。発明の詳細な説明 主題の発明は、癌の予防および治療に有用な、新規α−O-結合複合糖質を提供 する。 本発明は、構造： A-B_m-C_n-D_p-E_q-F ｛式中、m、n、pおよびqは0、1、2または3であってm+n+p+q≦6であり；A、B、C 、D、EおよびFは独立にアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基であり、AはN またはO末端であり、Aがアミノアシルの場合には遊離アミンまたはアンモニウム の形態のいずれかであり、またはAがヒドロキシアシルの場合には遊離ヒドロキ シであり、あるいはAはアルキル化、アリール化またはアシル化されており；Fは 遊離カルボン酸、第1級カルボキシアミド、モノまたはジアルキルカルボキシア ミド、モノまたはジアリールカルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（カルボキ シ）アルキルカルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（アルコキシカルボニル） アルキル−カルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（カルボキシ）アリールアル キルカルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（アルコキシカルボニル）アルキル カルボキシアミド、2ないし約20個のヒドロキシアシル残基を含んでなるオリゴ エステル断片、2ないし約20個のアミノアシル残基を含んでなるペプチド断片、 または直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリールカルボン酸エステルのいずれ かであり；1ないし約5個の当該アミノアシルまたはヒドロキシアシル残基は以下 の構造を有する炭水化物ドメインで置換されており、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびzは独立に0、1、2または3であり ；炭水化物ドメインはOH、COOHおよびNH₂からなる群より選択される側鎖置換基 の置換によってそれぞれアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基と結合してお り；R₀は水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、アリールアルキルまたは アリール基であり、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ独立に 、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂0Rⁱ、置換または非置換、直鎖ま たは分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、 ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり ；Rⁱは水素、CHO、COORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のア ルキル、アリールアルキルまたはアリール基、あるいは下記構造を有する糖類部 分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそれ ぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞれ 独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは置換ま たは非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシ アルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまた はアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、置換または非置換、 直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^{i v} 、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキ ルまたはアリール基であり；RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立にH、あるいは置換ま たは非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはアリール基 である｝ を有する複合糖質を提供する。 ある具体例では、本発明は、少なくとも１つの炭水化物ドメインが細胞表面エ ピトープのオリゴ糖構造を有する、前記の複合糖質を提供する。特定の具体例で は、本発明は、エピトープがLe^a、Le^b、Le^xまたはLe^yである複合糖質を提供する 。もう１つの特定の具体例では、本発明は、エピトープがMBr1、末端切断型MBr1 五糖類または末端切断型MBr1四糖類である複合糖質を提供する。 もう１つの具体例では、本発明は、アミノアシル残基が天然のアミノ酸に由来 する複合糖質を提供する。もう１つの具体例では、本発明は、少なくとも１つの アミノアシル残基が式：-NH-Ar-CO-を有する複合糖質を提供する。特殊な具体例 では、Ar部分はp-フェニレンである。 もう１つ具体例では、本発明は、少なくとも１つのアミノアシルまたはヒドロ キシアシル残基が構造： ｛式中、M、NおよびPは独立に0、1または2であり；XはNHまたはOであり；YはOH 、NHまたはCOOHであり；R'およびR''は独立に水素、直鎖または分枝鎖のアルキ ルまたはアリールである｝を有する複合糖質を提供する。特殊な具体例では、炭 水化物ドメインと結合したアミノアシル残基はSerまたはThrである。 もう１つの具体例では、本発明は、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R_{1 0} 、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅の１以上が1RS,2RS,3-トリヒドロキシ-プロピ ルである複合糖質を提供する。 本発明はまた、前記の複合糖質および医薬上好適な担体を含んでなる、癌治療 用の医薬組成物を提供する。 本発明はさらに、治療上有効量の前記複合糖質および医薬上好適な担体を患者 に投与することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法を提供する。本 治療方法は癌が固形腫瘍または上皮癌である場合に効果的である。 本発明はまた、構造： ｛式中、R₁、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₇はそれぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、 NHCORⁱ、F、N₃、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキ ル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシ ロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり；RⁱはH、CHO、COORⁱⁱ 、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキ ルまたはアリール基であり；R₂は水素、直鎖または分枝 鎖のアルキル、アシル、アリールアルキルまたはアリール基であり；R₈は水素、 COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキルまた はアリール基であり；Rⁱⁱは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、 アリールアルキルまたはアリール基であり；かつ、Xはハロゲン化物、トリハロ アセトアミデート、アルキルもしくはアリールスルフィドまたはジアルキル亜リ ン酸塩である｝を有する三糖類を提供する。好ましい具体例では、本発明は、X がトリエチル亜リン酸塩である前記の三糖類を提供する。本発明はさらに、R₇が 1RS,2RS,3-トリヒドロキシプロピルまたは1RS,2RS,3-トリアセトキシプロピルで ある三糖類を提供する。さらに本発明は、R₈がCOOHである三糖類を提供する。 本発明はまた、構造： ｛式中、R₁、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₇はそれぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、 NHCORⁱ、F、N₃、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキ ル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシ ロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり；RⁱはH、CHO、COORⁱⁱ 、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキ ルまたはアリール基であり；R₂は水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、 アリールアルキルまたはアリール基であり；R₈は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ 、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；R^{i i} は置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたは アリール基であり；R₀は塩基に不安定なN保護基であり；かつ、R'は水素または 低級アルキル基である｝を有する三糖類アミノ酸 を提供する。種々のN保護基が、前記の三糖類アミノ酸の製造に許容される。R₀ は、好ましくは数種の塩基に影響を受けやすい保護基の１つであってよいが、さ らに好ましくはフルオレニルメチルオキシカルボニル(FMOC)であってもよい。 本発明は、ヒト患者において抗体を誘導する方法を提供し、抗体はヒト腫瘍細 胞と特異的に結合することができ、それは抗体を誘導するために効果的な本明細 書中に開示された複合糖質の一定量を患者に投与することを含んでなる。ある具 体例では、本発明は、複合糖質が好適な担体タンパク質と結合している、抗体誘 導法を提供する。特に、担体タンパク質の好ましい例としては、ウシ血清アルブ ミン、ポリリジンまたはKLHが挙げられる。 もう１つの具体例では、本発明は、さらに免疫アジュバントをともに投与する ことを含む、抗体誘導法を考案する。ある具体例では、アジュバントは細菌また はリポソームである。特に、好ましいアジュバントとしては、サルモネラ・ミネ ソタ細胞、バチルスCalmette-GuerinまたはQS21が挙げられる。誘導される抗体 は典型的には、(2,6)-シアリルT抗原、Le^a、Le^b、Le^x、Le^y、GM1、SSEA-3および MBr1抗体からなる群より選択される。抗体を誘導する方法は、患者が臨床上緩解 にある場合、または患者が外科手術によって処置され、限定された切除できない 疾患を有している場合に有用である。 本発明はまた、抗体を誘導するために有効な量の前記複合糖質を用いて患者に ワクチン接種することを含んでなる、患者における上皮癌の再発を予防する方法 を提供する。この方法を実施する際には、複合糖質を単独で使用してもよいし、 または好適な担体タンパク質と結合させてもよい。本発明に用いられる担体タン パク質の特異な例としては、ウシ血清アルブミン、ポリリジンまたはKLHが挙げ られる。ある具体例では、上皮癌の再発を予防する本方法には、免疫アジュバン トをともに投与するさらなる工程が含まれる。特に、アジュバントは細菌または リポソームである。好ましいアジュバントとしては、サルモネラ・ミネソタ細胞 、バチルスCalmette-GuerinまたはQS21が挙げられる。本方法によって誘導され る抗体は典型的には、(2,6)-シアリルT抗原、Le^a、Le^b、Le^x、Le^y、GM1、SSEA-3 およびMBr1抗体からなる群より選択される。 本発明はさらに、構造：｛式中、XはOまたはNRであり；RはH、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアシル であり；A、BおよびCは独立に、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアシル、-CO -(CH₂)_p-OHまたはアリールであり、あるいは下記構造を有し、 式中、YはOまたはNRであり；DおよびEは構造：-(CH₂)_p-OHまたは-CO-(CH₂)_p-OH を有し；NおよびPは独立に、0ないし12の整数であり；DおよびE、ならびにA、B およびCのいずれかが-CO-(CH₂)_p-OHである場合には、A、BおよびCは独立に、下 記構造を有する炭水化物ドメインによって置換されており、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびZは独立に、0、1、2または3であ り；炭水化物ドメインは末端OH置換基の置換によってそれぞれのヒドロキシア シル残基と結合し；Roは水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、アリール アルキルまたはアリール基であり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉は それぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または 非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアル キル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまたはア リール基であり；Rⁱは水素、CHO、COOR_ii、あるいは置換または非置換、直鎖ま たは分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはアリール基、あるいは下記構造 を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそれ ぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞれ 独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは置換ま たは非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシ アルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまた はアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、置換または非置換、 直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^{i v} 、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキ ルまたはアリール基であり；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立にH、あるいは 置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはアリ ール基である｝を有する複合糖質を提供する。ある具体例では、本発明は、少な くとも１つの炭水化物ドメインが細胞表面エピトープのオリゴ糖構造を有してい る、前記の複合糖質を提供する。１つの具体例では、エピトープはLe^a、Le^b、Le^x またはLe^yである。もう１つの具体例では、エピトープはMBr1、末端切断型MBr1 五糖類または末端切断型MBr1四糖類である。特定の具体例では、本発明は、１つ 以上のR₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、 R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅が1RS,2RS,3-トリヒドロキシ-プロ ピルである前記複合糖質を提供する。 本発明はまた、前記の複合糖質および医薬上好適な担体を含んでなる癌治療用 の医薬組成物を提供する。 本発明はさらに、治療上有効量の前記の複合糖質および医薬上好適な担体を患 者に投与することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法を提供する。 本方法は癌が固形腫瘍または上皮癌である場合に効果的である。 本発明はまた、コア構造および炭水化物ドメインを含んでなる複合糖質であっ て、そのコア構造が、 ｛式中、Mは約2ないし約5,000の整数であり；Nは1、2、3または4であり；Aおよ びBは直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基を含む、好適な重合体の末 端基であり；コア構造は、下記構造を有する炭水化物ドメインによって置換され ており、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびZは独立に、0、1、2または3であ り；炭水化物ドメインはOH置換基の置換によってコア構造と結合し；R₀は水素、 直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、アリールアルキルまたはアリール基であ り；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ 、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のア ルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ） アシロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり；Rⁱは水素、CH O、COORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリー ルアルキルまたはアリール基、あるいは下記構造を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそれ ぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞれ 独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは置換ま たは非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシ アルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまた はアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、置換または非置換、 直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^{i v} 、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキ ルまたはアリール基であり；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立にH、あるいは 置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはアリ ール基である｝である複合糖質を提供する。 特殊な具体例では、本発明は、細胞表面糖タンパク質のムチンファミリーに関 連する糖ペプチドを製造する方法を提供する。ムチンは、セリンおよびトレオニ ン残基にα-O-結合した炭水化物のクラスター配列を有する異常なα-O-グリコシ デーションパターンによって特徴づけられている。図1。ムチンは上皮癌（例え ば、前立腺癌および乳癌）ならびにある血液細胞癌の一般的マーカーである。文 献：Finn,O.J.ら,Immunol.Rev.1995,145,61． (2,6)-シアリルT抗原(ST抗原)は、α-O-結合糖ペプチドの「グリコホリンファ ミリー」の例である（図2）。それは骨髄性白血病細胞で選択的に発現する。文 献：Fukuda,M.ら,J.Biol.Chem.1986,261,12796.Saitoh,O.ら,Cancer Res.1991,5 1,2854.従って、特殊な具体例では、本発明は、CD43（ロイコシアリン）糖タン パク質のＮ末端に由来する、ペンタペプチド1への合成経路を提供する。文献：P allant,A.ら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1989,86,1328. 特に、本発明は、ブロックアプローチによるα-O-結合(2,6)-STグリコシルセ リンおよびトレオニンの立体選択的製剤を提供する。さらに本発明は、STエピト ープクラスター(1,20)を有するかかるグリコシル単位を組み込むO-結合糖ペプチ ドを提供する。 広範囲の炭水化物ドメインが、本発明によって考案されている。特に記載すれ ば、以下の細胞表面エピトープおよび抗原に由来する炭水化物ドメインがある： MBr1エピトーフ゜： Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glu→Ocer 末端切断型MBrlエピトープ五糖類： Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galａ1→4Galβ1 末端切断型MBr1エピトープ四糖類：Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1 SSEA-3抗原:2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1 Le^yエピトープ：Fucα1→2Galβ1→4(Fucα1→3)GalＮAcβ1 GM1エピトープ:Galβ1→3GalNAcβ1→4Galβ1→4(NeuAcα2→3)Glu→Ocer 固相方式に基づく炭水化物ドメインの製造方法は、米国特許出願第08/213,053 号および同第08/430,355号、ならびにPCT国際出願第PCT/US96/10229号に開示さ れており、それらの内容は出典明示して本明細書の一部とみなす。 本発明はまた、構造： ｛式中、m、nおよびpは約8ないし約20の整数であり；qは約1ないし約8の整数で あり；R_V、R_W、R_XおよびR_Yは独立に、水素、所望により置換されていてもよい直 鎖または分枝鎖の低級アルキル、あるいは所望により置換されていてもよいフェ ニルであり；R_A、R_BおよびR_Cは独立に、下記構造を有する炭水化物ドメインであ り、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびzは独立に、0、1、2または3であ り；R₀は水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アシル、アリールアルキルま たはアリール基であり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ独 立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、所望により置換されて いてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキ シアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルま たはアリール基であり；Rⁱは水素、CHO、COORⁱⁱ、あるいは所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリー ル基、あるいは下記構造を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたは0であり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそれ ぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞれ 独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは所望に より置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまたは トリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリ ールアルキルまたはアリール基であり；R¹⁶は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、所 望により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリール 基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^iv、あるいは所望により置換されていてもよ い直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり ；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立に、水素、あるいは所望により置換されて いてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリール 基である｝を有する複合糖質を提供する。ある具体例では、本発明は、R_V、R_W、 R_XおよびR_Yがメチルである複合糖質を提供する。 ある他の具体例では、炭化水素ドメインは独立に、単糖類または二糖類であっ てもよい。１つの具体例では、本発明は、yおよびzが0であり；xが1であり；か つ、R₃がNHAcである複合糖質を提供する。もう１つの具体例では、本発明は、h が0であり；gおよびiが1であり；R₇がOHであり；R₀が水素であり；かつ、R₈がヒ ドロキシメチルである複合糖質を提供する。さらにもう１つの具体例では、m、n およびpは14であり；かつ、qは3である。好ましい具体例では、複合糖質の各ア ミノアシル残基がその中にL-配置を有する。 特殊な例では、複合糖質の炭水化物ドメインは、独立に、 である。 もう１つの例では、炭水化物ドメインは、独立に、である。 さらに、炭水化物ドメインは、独立に、 である。 炭水化物ドメインはまた、独立に、 である。 炭水化物ドメインは、独立に、である。 また、炭水化物ドメインは、独立に、 であってもよい。 炭水化物ドメインはまた、独立に、 である。 本発明は、構造：｛式中、担体はタンパク質であり；架橋剤は担体およびチオールの表面アミンと 結合することができる架橋剤に由来する部分であり；m、nおよびpは約8ないし約 20の整数であり；jおよびqは独立に、約1ないし約8の整数であり；R_V、R_W、R_Xお よびR_Yは独立に、水素、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低 級アルキル、あるいは所望により置換されていてもよいフェニルであり；R_A、R_B およびR_Cは独立に、下記構造を有する炭水化物ドメインであり、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびZは独立に、0、1、2または3であ り；R₀は水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アシル、アリールアルキルま たはアリール基であり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ独 立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、所望により置換されて いてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキ シアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルま たはアリール基であり；Rⁱは水素、CHO、COORⁱⁱ、あるいは所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリー ル基、あるいは下記構造を有する糖類部分であり、式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそれ ぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞれ 独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、Ｆ、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは所望 により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまた はトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、ア リールアルキルまたはアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、 所望により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリー ル基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^iv、あるいは所望により置換されていても よい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリール基であ り；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立に、水素、あるいは所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリー ル基である｝を有する複合糖質を提供する。 種々のタンパク質が好適であると考えられ、ウシ血清アルブミン、KLH、およ びヒト血清アルブミンが含まれる。本発明に適する架橋剤は当技術分野において 広く知られており、ブロモ酢酸NHSエステル、6-(ヨードアセトアミド)カプロン 酸NHSエステル、マレイミド酢酸NHSエステル、マレイミド安息香酸NHSエステル などが含まれる。１つの具体例では、複合糖質は、構造：を有する。 １つの具体例では、本発明は、R_v、R_W、R_XおよびR_Yがメチルである複合糖質を 提供する。もう１つの具体例では、本発明は、炭水化物ドメインが単糖類または 二糖類である複合糖質を提供する。もう１つの具体例では、本発明は、yおよびz が０であり；xが１であり；R₃がNHAcである複合糖質を提供する。さらなる具体 例では、本発明は、hが0であり；gおよびiが1であり；R₇がOHであり；R₀が水素 であり；m、nおよびpが14であり；qが3であり；かつ、R₈がヒドロキシメチルで ある複合糖質を提供する。 ある具体例では、本発明は、タンパク質がBSAまたはKLHである、開示されたよ うな複合糖質を提供する。好ましい具体例では、複合糖質のそれぞれのアミノア シル残基はL-配置を有する。 複合糖質の特殊な例には、以下の炭水化物ドメインのいずれもが含まれ、それ はいずれの具体例においても同一であっても異なっていてもよい。 本発明はさらに、前記で開示した複合糖質および医薬上好適な担体を含んでな る、癌治療用の医薬組成物を提供する。 本発明はまた、治療上有効量の前記で開示した複合糖質および医薬上好適な担 体を患者に投与することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法を提供 する。ある具体例では、本発明は癌が固形癌である場合の方法を提供する。特に 明示すれば、本方法は癌が上皮癌である場合に適用できる。特に、前立腺癌の治 療への適用が効果的である。 本発明はまた、抗体を誘導するのに効果的な前記で開示した複合糖質の一定量 を患者に投与することを含んでなる、ヒト患者において抗体を誘導する方法を提 供し、ここで抗体はヒト腫瘍細胞と特異的に結合できる。ある具体例では、本発 明は、担体タンパク質がウシ血清アルブミン、ポリリジンまたはKLHである方法 を提供する。 さらに本発明は、免疫アジュバントをともに投与することをさらに含んでなる 、関連の抗体誘導法を提供する。アジュバントは、好ましくは細菌またはリポソ ームである。特に、アジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞、バチルスCalm ette-GuerinまたはQS21である。誘導される抗体は好ましくは、Tn、ST_N、(2,3)S T、グリコホリン、3-Le^y、6-Le^y、T(TF)およびT抗体からなる群より選択される 。 本発明はさらに、患者が臨床上緩解にある場合に、または患者が外科手術によ り処置され、限定された切除できない疾病を有している場合に抗体を誘導する方 法を提供する。 本発明はまた、抗体を誘導するのに効果的な量で前記で開示した複合糖質を用 いて患者にワクチン接種することを含んでなる、患者における上皮癌の再発を予 防する方法を提供する。担体タンパク質がウシ血清アルブミン、ポリリジンまた はKLHである本方法が実施され得る。さらに本発明は、免疫アジュバントをとも に投与することをさらに含んでなる、関連の上皮癌再発予防方法を提供する。好 ましくは、アジュバントは細菌またはリポソームである。特に明示すれば、好ま しいアジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞、バチルスCalmette-Guerinま たはQS21である。本方法の実施において誘導される抗体は、Tn、ST_N、(2,3)ST、 グリコホリン、3-Le^y、6-Le^y、T(TF)およびT抗体からなる群より選択される。 本発明はまた、保護されたO-結合Le^y複合糖質を形成するのに好適な条件下で 、構造： ｛式中、Rは水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換さ れていてもよいアリールであり；R₁はt-ブチルオキシカルボニル、フルオレニル メチレンオキシカルボニル、直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアシル、所 望により置換されていてもよいベンジルまたはアリールであり；R₂は直鎖または 分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換されていてもよいベンジルまたは アリールであり；かつ、R₄は水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアシ ル、所望により置換されていてもよいアリールまたはベンジルであり、あるいは 所望により置換されていてもよいアリールスルホニルである｝を有する保護され たO-結合Le^y複合糖質を製造する方法であって、該方法は構造： （式中、R₃は直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリールである）を有する 硫化四糖類と、構造： を有するO-結合グリコシルアミノアシル成分を結合させることを含んでなる、方 法を提供する。 本発明の１つの具体例においては、前記の硫化四糖類は、(a)ハロスルホンア ミノ化四糖類を形成するのに好適な条件下で、構造：を有する四糖類グリカールをハロスルホンアミノ化し、 次いで(b)メルカプタンおよび硫化四糖類を形成するのに好適な塩基で、ハロス ルホンアミノ化物を処理することによって製造してもよい。特に、メルカプタン が直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリールであり；かつ、塩基が水素化 ナトリウム、水素化リチウム、水素化カリウム、リチウムジエチルアミド、リチ ウムジイソプロピルアミド、ナトリウムアミド、またはリチウムヘキサメチルジ シラジドである本方法が実施され得る。 本発明はまた、開示された方法によって製造されたO-結合複合糖質を提供する 。 特に、本発明は、構造： ｛式中、R₄は直鎖または分枝鎖の低級アシルであり；かつ、Rは水素、あるいは 直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリールである｝を有するO-結合複合糖 質を提供する。糖ペプチドのペプチド部分の変更は本発明の範囲内である。特殊 な具体例では、本発明は、R₄がアセチルであるO-結合糖ペプチドを提供する。 本発明は、保護されたO-結合Le^y複合糖質を形成するのに好適な条件下で、構 造： ｛式中、Rは水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換さ れていてもよいアリールであり；R₁はt-ブチルオキシカルボニル、フルオレニル メチレンオキシカルボニル、直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアシル、所 望により置換されていてもよいベンジルまたはアリールであり；かつ、R₂は直鎖 または分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換されていてもよいベンジル またはアリールである｝を有する保護されたO-結合Le^y複合糖質を製造する方法 であって、該方法は構造： を有するアジドイミノ化四糖類と、構造：を有するO-結合グリコシルアミノアシル成分を結合させることを含んでなる方法 を提供する。 好ましくは、アジゾイミノ化四糖類は、(a)アジドアルコールを形成するのに 好適な条件下で、構造： を有するアジドニトロ化四糖類を処理し、次いで(b)アジゾイミノ化物を形成す るのに好適な条件下で、アジドアルコールをイミドアシル化剤と反応させること により製造する。アジドニトロ化四糖類は、(a)好適な条件下で、構造： を有する四糖類グリカールを、構造：を有する過アセチル化四糖類グリカールに変換し、次いで(b)アジドニトロ化四 糖類を形成するのに好適な条件下で、工程(a)で生じたグリカールをアジドニト ロ化することにより製造してもよい。工程(b)は好ましくは、アジ化ナトリウム 、アジ化リチウム、アジ化カリウム、アジ化テトラメチルアンモニウムおよびア ジ化テトラエチルアンモニウムからなる群より選択されるアジ化塩の存在下で、 ニトロ化セリウムアンモニウムを用いて達成される。 さらに本発明は、前記した通りに製造したO-結合複合糖質を提供する。 一旦、O-保持アミノアシル側鎖と共有結合した炭水化物ドメインを製造すれば 、主題の発明の複合糖質は、液相または固相合成プロトコールのいずれかを用い て製造してもよく、それら双方は簡単なペプチドを合成する技術分野では十分に 公知である。他の方法の中で、本発明において有用な広く用いられている液相ペ プチド合成法は、FMOC保護基を除去するための、α-アミノ置換基；アンモニア 、第1級または第2級アミン（モルホリンなど）に対する保護基としてのFMOC（ま たは関連するカルバミン酸塩）、および好適な有機溶媒中でペプチドまたはペプ チド誘導体のCからNへの合成用カップリング剤としての置換カルボジイミド（N, N'-ジシクロヘキシル-または-ジイソプロピルカルボジイミドなど）を使用する 。NからC方向でのO-結合複合糖質の液相および固相合成もまた、本発明の範囲内 である。 固相合成については、数種の異なる樹脂支持体が当分野で標準として採用され ている。オリジナルのMerrifieldのクロロメチル化ポリスチレンの他にも、他の 種の樹脂がペプチドアミドおよび酸を製造するために広く用いられており、ベン ズヒドリルアミンおよびヒドロキシメチル樹脂(文献：Stewart,Solid Phase Pep tide Synthesis,Pierce Chemical Co.,1984,Rockford,IL;Piettaら,J.Chem.Soc. D.,1970,650-651;Orlowskiら,J.Org.Chem.,1976,50,3701-5;Matsuedaら,Peptide s,1981,2,45-50;およびTam,J.Org.Chem.,1985,50,5291-8)ならびに官能化ポリス チレンでグラフトした重合体基質からなる樹脂(米国特許第5,258,454号)が含ま れる。これらの固相は酸に不安定である(文献：Albericioら，Int.J.Peptide Re search.1987,30,206-216)。本発明を実施する際に容易に利用できる別の酸に不 安定な樹脂は、FMOCで保護したアミノ酸との結合におけるトリアル コキシジ-フェニルメチルエステル部分を使用する(文献：Rink,Tetrahedron Let ters,1987,28,3787-90;米国特許第4,859,736号および米国特許第5,004,781号)。 ペプチドは結局、トリフルオロ酢酸での切断によって放出される。酸に不安定な N保護基であれ塩基の影響を受けやすいN保護基であれ、本発明の方法の特定の樹 脂プロトコールへの適用には適合する保護基の選択が含まれ、それは化学分野の 当業者の技術の範囲内である。 本明細書に開示されたように製造された複合糖質は、種々の形態の癌の治療お よび予防において有用である。従って、本発明は、治療上有効量の本明細書に開 示されたα-O-結合複合糖質のいずれかを、所望により医薬上好適な担体と組み 合わせて患者に投与することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法を 提供する。癌が固形癌または上皮癌、または白血病である場合に、本方法を適用 してもよい。特に、癌が乳癌であり、適切なエピトープがMBr1である場合に、本 方法を適用できる。 主題の発明はまた、有効成分として前記で開示したα-O-結合複合糖質のいず れかを、所望によるが典型的には、医薬上好適な担体と組み合わせて含んでなる 、癌治療用の医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、他の治療上有効な 成分をさらに含んでなってもよい。 主題の発明はさらに、前記α-O-結合複合糖質のいずれかの治療上有効量と、 医薬上好適な担体を患者に投与することを含んでなる、癌患者において癌を治療 する方法を提供する。 α-O-結合複合糖質に関連する前記で教示された化合物は、in vivoおよびin v itroの双方での癌の治療に有用である。これらの化合物が組織培養において癌細 胞の増殖を阻害し、腫瘍の大きさを小さくすることができることは、本化合物が 癌患者において癌を治療、予防または改善するために有用であることを示す。 さらに、本明細書に開示された方法によって製造された複合糖質は、アジュバ ント治療において種々の上皮癌および白血病細胞で抗体を免疫反応性とすること ができるワクチンとして有用な抗原である。かかるアジュバント治療によって、 上皮癌および白血病の再発率を小さくし、外科手術後の生存率を上昇させる可能 性がある。癌を外科的に処置した患者に、次いで免疫化に先立って抗体を欠く患 者において見出された細胞表面分化抗原から作成したワクチンで処置する臨床上 の試みで、無病間隔が極めて著しく長くなることが認められる可能性がある。文 献：P.O.Livingstonら,J.Clin.Oncol.,1994,12,1036を参照。 本発明の化合物の治療用量は、治療すべき病状の性質および重篤さにより、ま た特定の化合物およびその投与経路により異なると考えられる。一般に、抗癌活 性に対する１日用量範囲は、１回または複用量で、哺乳類の体重の0.001ないし2 5mg/kg、好ましくは0.001ないし10mg/kg、最も好ましくは0.001ないし1.0mg/kg の範囲内である。特殊な場合には、25mg/kgより多い量を投与する必要があるか も知れない。 本明細書で開示された化合物の有効用量を、哺乳類、特にヒトに与えるには、 いずれの好適な投与経路を使用してもよい。例えば、経口、直腸、局所、非経口 、目、肺、鼻などの経路を使用してもよい。投与形態としては、錠剤、トローチ 剤、分散液、懸濁液、水剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏、エアゾル剤などが 挙げられる。 組成物には、経口、直腸、局所（経皮装置、エアゾル、クリーム、軟膏、ロー ションおよび散剤を含む）、非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）、目（ 眼）、肺（鼻または口腔内吸入）または鼻腔投与に好適な組成物が含まれる。所 定の場合のいずれかにおいて最も好適な経路は、治療すべき病状の性質および重 篤さならびに有効成分の性質に依存するところが大きい。便宜にはそれらを単位 投与形で提供してもよく、製薬分野で十分公知のいずれの方法によって調製して もよい。 経口投与形態を調製する際、経口液体製剤（例えば、懸濁液、エリキシル剤お よび水剤）の場合には、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着 色剤などの通常でない薬剤媒体を用いてもよく；また、散剤、カプセル剤および 錠剤などの経口固形製剤の方が、液体経口製剤よりも好ましい場合には、デンプ ン、糖類、微晶質セルロース、賦形剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤など 担体のような特殊な医薬媒質を使用してもよい。所望であれば、カプセルを標準 的な水性または非水性法によって被覆してもよい。前記の投与形態に加えて、本 発明の化合物を徐放手段および装置によって投与してもよい。 経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、所定量の有効成分を粉末または顆粒 形態でそれぞれ含有するカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤、あるいは溶液、ま たは水溶液もしくは非水溶液中の懸濁液、または油中水型もしくは水中油型エマ ルションのような個別単位として調製してもよい。かかる組成物は製薬分野で公 知のいずれの方法によって調製してもよい。一般に、組成物は有効成分を、液体 担体、細かく砕いた固形担体、またはその双方と均一かつ十分に混合することに より調製し、次いで必要であれば生成物を成形して所望の形態にする。例えば、 錠剤は、所望により１以上の補助成分とともに圧縮または成形することにより調 製してもよい。圧縮錠剤は、所望により結合剤、滑沢剤、不活性賦形剤または界 面活性剤もしくは分散剤と混合した粉末または細粒などのさらさらした形態の有 効成分を好適な機械で圧縮することにより調製してもよい。成形錠剤は、不活性 な液体賦形剤で湿らせた粉末化合物の混合物を好適な機械で成形することにより 製造してもよい。 本発明は、以下の実験の詳細からさらに理解されるであろう。しかしながら、 当業者ならば、議論された特異な方法および結果がその後に続く請求の範囲に記 載されている発明の単なる例示であることが容易に理解できるであろう。α-O- 結合複合糖質を調製するための本発明の方法は当技術分野で公知の種々の代替保 護基の使用を包含することが理解されるであろう。下記実施例を含む開示の中で 用いられた保護基は単なる例示である。実験の詳細：一般法 空気および湿気の影響を受けやすい反応は、特に断らない限り、アルゴン雰囲 気下で火炎乾燥した装置で実施した。空気に影響を受けやすい液体および溶液は シリンジまたはカニューレで移した。可能な限り、反応は、薄層クロマトグラフ ィー(TLC)で監視した。大まかな溶媒除去は、”Buchi”式ロータリーエバポレー タにおいて吸引真空下の真空中で行い、痕跡溶媒は高真空ポンプにより0.1-0.5m mHgで除去した。 融点(mp)は補正せず、”Electrothernml”シリーズIA9100デジタル融点装置を 用いて軟質ガラス製の毛細管中で行った。赤外線(IR)は、”Perkin-Elmer 1600 ” シリーズフーリエ変換装置を用いて記録した。特に断らない限り、サンプルは、 NaClプレート上のニートの膜として調製した。吸収バンドは波数(cm¹)で報告す る。適切なで妥当なバンドのみを報告する。 プロトン核磁気共鳴(¹H NMR)スペクトルは、”Bruker AMX-400”型分光計を用 いて400MHzを用いて測定した。化学シフトは、ロック標準(δ=7.25ppm)として残 留CHCl₃を用い、テトラメチルシラン(TMS;δ=0ppm)からの100万分の1(ppm)の低 磁場で報告する。多重度は通常の様式で、s=一重線、d=二重線、t=三重線、q=四 重線、m=多重線、br=幅広して略記する。炭素核磁気共鳴(¹³C NMR)スペクトルは 、”Bruker AMX-400”型分光計にて、合成パルスデカップリングにより100MHzで 行った。サンプルは¹H NMRスペクトルの場合と同様に調製し、化学シフトはTMS( 0ppm)と比較して報告し、残留CHCl₃は内部標準(δ=77.0ppm)として用いた。高分 解能質量スペクトル(HRMS)分析は、内部標準としてペルフルオロケロセン(PFK) を用い、”JEOL JMS-DX 303HF”型質量分析計にて電子衝撃イオン化(EI)により 測定した。低分解能質量スペクトル(MS)は、”Delsi-Nermag R-10-10”型質量分 析計にて、指示されたキャリヤーガス（アンモニアまたはメタン）を用い、電子 衝撃イオン化(EI)または化学イオン化(CI)のいずれかによって測定した。ガスク ロマトグラフィー／質量スペクトル(GCMS)については、キャリヤーガスとしての ヘリウムとともに、DB-5接合毛細管カラム(30m,厚さ0.25mm)を使用した。典型的 な条件としては、40℃/分で60ないし250℃の温度プログラムを使用した。 薄層クロマトグラフィー(TLC)は、プレコートガラスプレート(シリカゲル60、 厚さ0.25mm)を用いて行った。視覚化は、254nm UVランプを照射することにより 、またはアニスアルデヒド染料(3.5mLの酢酸、12.5mLの濃硫酸および338mLの95 ％エタノール(EtOH)中の9.2mLのp-アニスアルデヒド)中に浸漬し、加熱して発色 させることにより行った。フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーは、標準プ ロトコールに従って行った。 特に断らない限り、すべての溶媒および試薬は市販の等級であり、以下、括弧 内に挙げた乾燥方法を用いてアルゴン下で溶媒を蒸留することを示した場合以外 は、受け取ったまま使用した：CH₂Cl₂(CaH₂)；ベンゼン(CaH₂)；THF(Na/ケ チル)；Et₂O(Na/ケチル)；ジイソプロピルアミン(CaH₂)。略号 TLC 薄層クロマトグラフィー EtOAc 酢酸エチル TIPS トリイソプロピルシリル PMB p-メトキシベンジル Bn ベンジル Ac 酢酸塩 hex ヘキサン THF テトラヒドロフラン coll コリジン LiHMDS リチウムヘキサメチルジシラジド DMF N,N-ジメチルホルムアミド DMAP 2-ジメチルアミノピリジン DDQ 2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ-1,4-ベンゾキノリン TBAF テトラ-n-ブチルアンモニウムフロリド M.S. モレキュラーシーブス r.t. 室温 r.b. 丸底フラスコ 実施例１ ２，６−ジ−O−アセチル−３，４−O−カルボニル−β−Ｄ−ガラクトピラ ノシル−（１−３）−６−O−（トリイソプロピルシリル）−４−O−アセチル− ガラクタール（３）。 ガラクタール２（１．９５９g，９．８９mmol，１．２当量）を１００mLの 無水ジクロロメタンに溶解し、０℃に冷却した。ジメチルジオキシラン（アセト ン中約０．０６M溶液、２００mL）をカニュレを経由して反応フラスコに添加し た。１時間後、出発原料が消費されたことをTLCで確認した。溶媒を窒素気流に よって除去し、粗エポキシドを真空下、１時間室温で乾燥した。粗残さ（TLCで は１つのスポット）を３３mLのTHFに取り込み、２０mLのTHF中の６−Ｏ−トリイ ソプロピル−ガラクタールアクセプタ（２．５０g，８．２４mmol）を添加した 。反応混合物を−７８℃に冷却し、ZnCl₂（９．８mLのエーテル中の１M溶液）を 滴下した。反応混合物をゆっくりと室温まで昇温し、一昼夜撹拌した。混合物を 酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、次いで食塩水で洗浄し、最 後に硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒蒸発後、粗材料をフラッシュクロマトグ ラフィー（４０−４５−５０−６０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製すると、直 ちにアセチル化される純粋な生成物が得られた。３．３６gを乾燥したジクロロ メタン、５０mLに溶解し、トリエチルアミン（１９．２mL）、触媒量のDMAP（約 ２０mg）を添加し、溶液を０℃に冷却した。無水酢酸（９．９mL）を０℃で滴下 した。反応混合物を一昼夜、室温で撹拌した。溶媒を真空下で除去し、粗材料を クロマトグラフにかける（５０％酢酸エチル／ヘキサン）と、グリカール３（３ ．３g，７５％）が得られた： 実施例２ ２，６−ジ−O−アセチル−３，４−O−カルボニル−β−D−ガラクトピラ ノシル−（１−３）−４−O−アセチル−ガラクタール（４）。 化合物３（１．５g，２．４３mmol）を２４mLのTHFに溶解し、０℃に冷却し た。TBAF（５．８mL，５．８３mmol，２．４当量）と酢酸（３３６mL，２．４当 量）の混合物を０℃で先の混合物に添加した。反応混合物を３０℃で５時間撹拌 した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を 止めた。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、次いで、硫酸 マグネシウムで乾燥した。粗生成物をクロマトグラフイー（８０−８５−９０％ 酢酸エチル／ヘキサン）で精製すると、化合物４が得られた（０．９g，８０％ ）： 実施例３ ［（メチル＝５−アセタミド−４，７，８，９−O−アセチル−３，５−ジ デオキシ−O−グリセロ−α−D−ガラクト−２−ノヌロピラノシロナート）−（ ２−６）］−（２，６−ジ−O−アセチル−３，４−O−カルボニル−β−D−ガ ラクトピラノシル）−（１−３）−４−O−アセチルーガラクタール（６）。 火炎乾燥したフラスコに、シアリルホスファイトドナー５（６９mg，０．１ １mmol，１．３当量）とアクセプタ４（４０mg，０．０８５mmol）を、ドライボ ックス（アルゴン雰囲気）中で充填した。混合物を０．６mLの乾燥THFに溶解し た。０．６mLの乾燥トルエンを添加し、溶液をゆっくり−６０℃まで冷却し、沈 殿を避けた。トリメチルシリル＝トリフラート（２．４μL，０．１１当量）を 添加し、混合物を−４５℃で撹拌した。２時間後（TLCで反応完了確認後）、− ４５℃で、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、２mLで反応を止め、水が溶解するまで 昇温し、混合物を過剰の酢酸エチルに注いだ。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム 溶液で洗浄し、次いで、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。粗生成物の¹H NMRから 、α：β異性体が４：１の比率であることが判明した（６６．４mg，８４％）。 混合物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（２−２．５−３−３．５ −４％（メタノール／ジクロロメタン）で精製すると、化合物６ （５０mg，６３％収率）が得られた。 実施例４ アジノニトラートのα／β混合物（７）。 化合物６（３７０mg，０．３９６mmol）を２．２mLの乾燥アセトニトリルに 溶解し、溶液を−２０℃に冷却した。アジドナトリウム（NaN₃，３８．６mg，０ ．５９４，１．５当量）とセリウム＝アンモニウム＝ニトラート（CAN，６５１ ．３，１．１８８mmol，３当量）を添加し、混合物を激しく−１５℃で１２時間 撹拌した。不均一混合物を酢酸エチルで希釈し、２回、氷水で洗浄して、硫酸ナ トリウムで乾燥すると、４００mgの粗生成物が得られた。フラッシュクロマトグ ラフィーで精製すると、混合物７（２４６mg，６０％収率）が得られた： 実施例５ α−アジドブロミド（８）。 化合物７（１５０mg，０．１４５mmol）の０．６mLの乾燥アセトニトリル中 の溶液を、臭化リチウム（６２．７mg，０．７２５mmol，５当量）と混合し、暗 所で室温で３時間撹拌した。不均一混合物をジクロロメタンで希釈し、２回、 水で洗浄して、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を加熱することなく蒸発させた 。フラッシュクロマトグラフィー（５％メタノール，ジクロロメタン）で精製す ると、α−ブロミド８（１２０mg，７５％収率）が単離され、−８０℃のアルゴ ン雰囲気下で保存した： 実施例６ アジド−トリクロロアセタミダート（９）。 化合物７（６００mg，０．５７８mmol）を３．６mLのアセトニトリルに溶解 し、溶液をチオフェノール（１８０μL）とジイソプロピルエチルアミン（１０ ０μL）で処理した。１０分後、溶媒を窒素気流で除去した。粗生成物をクロマ トグラフィー（２−２．５−３−３．５％メタノール／ジクロロメタン）で精製 すると、４７２mg（８２％）の中間ヘミアセタールが得られた。６０mg（０．０ ６mmol）のこの中間体を２００mLのジクロロメタンに取り込み、トリクロロアセ トニトリル（６０μL）と６０mgの炭酸カリウムで処理した。６時間後、混合物 をジクロロメタンで希釈し、溶液をピペットで除去し、過剰の炭酸カリウムをジ クロロメタンで３回洗浄した。溶媒蒸発後、粗生成物をフラッシュクロマトグラ フィー（５％メタノール／ジクロロメタン）で精製すると、９（５３．２mg，６ ４％収率（２工程），α／βアノマー１：１混合物）が得られた。アノマーをフ ラッシユクロマトグラフイーで、勾配溶媒系（８５−９０−９５−１００％酢酸 エチル／ヘキサン）で分離可能である。 実施例７ グリコシルブロミド８を用いたAgClO₄−プロモート化グリコシド化によるグ リコシル−L−スレオニン１３の調製。 火炎乾燥したフラスコに、銀パークロラート（２７．３mg，２当量）と１１ ５mgの４Åモレキュラーシーブと、N−FMOC−L−スレオニンベンジルエステル（ ３７．３mg，０．０８６mmol，１．２当量）を、ドライボックス中で充填した。 ０．７２mLのジクロロメタンをフラスコに添加し、混合物を室温で１０分間撹拌 した。４６０μLジクロロメタン中のドナー８（７６mg，０．０７２mmol）をゆ っくり４０分かけて添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下、室温で２時間撹 拌した。混合物を次いでジクロロメタンで希釈し、セライトでろ過した。沈殿を ジクロロメタンで完全に洗浄し、ろ液を蒸発させて、粗材料をシリカゲルカラム で精製する（１−１．５−２−２．５％メタノール／ジクロロメタン）と、１３ （７４mg，７４％収率）が得られた。所望しないβ−アノマーは、粗材料の¹H N MRおよびHPLC分析からは検出されなかった。 実施例８ グリコシル−L−セリン（１２）。 トリクロロアセタミダート９を用いたBF₃・OEt₂プロモート化グリコシド化 。 火炎乾燥したフラスコに、ドナー９（５０mg，０．０４４mmol）、８０mg の４Åモレキュラーシーブ、N−FMOC−L−セリンベンジルエステル（２７．５mg ，０．０６６mmol）を、ドライボックス中で充填した。０．６mLのTHFをフラス コに添加し、混合物を−３０℃に冷却した。BF₃・OEt₂（２．８mL，０．０２２m mol，０．５当量）を添加し、反応混合物をアルゴン雰囲気下で撹拌した。３時 間中で、混合物を−１０℃まで昇温し、次いで酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水 素ナトリウム溶液で冷却したまま洗浄した。粗材料をシリカゲルカラム で精製する（２−２．５−３％メタノール／ジクロロメタン）と、１２（４０mg ，６６％収率）が４：１のα：β異性体比で得られた。純粋なα−アノマーは、 フラッシユクロマトグラフィーで分離した（８０−８５−９０−１００％酢酸エ チル／ヘキサン）。 実施例９ グリコシル−Ｌ−スレオニン（１５）。 化合物１３（４７mg，３３．４２μmol）をチオール酢酸（３mL，３回蒸留 ）で２７時間、室温で処理した。チオール酢酸を窒素気流で除去し、次いでトル エン蒸発（４回）した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１．５−２ −２．５−３−３．５％メタノール／ジクロロメタン）で精製すると、３７mg（ ７８％）の中間体が得られ、これを７．６mLのメタノールと０．５mLの水に直ち に溶解した。アルゴンで反応系を浄化した後、６．５mgのパラジウム触媒（１０ ％pd−Ｃ）を添加し、水素のバルーンを取り付けた。８時間後、水素をアルゴン によって除去し、触媒をろ紙で除去して、溶媒蒸発させると粗材料が得られた。 フラッシュクロマトグラフィー（１０％メタノール／ジクロロメタン）にかける と、純粋な化合物１５（３６mg，７８％）が得られた： 実施例１０ グリコシル−L−セリン（１４）。 化合物１４は、１２から、以下の１５の方法と同様にして８０％の収率で得 られた。 実施例１１ ペプチドカップリングの一般方法： グリコシルアミノ酸１４または１５（１当量）とフリーのアミノ基を有する ペプチド（１．２当量）をジクロロメタン（２２mL／１mmol）に溶解した。溶液 を０℃に冷却し、IIDQ（１．１５−１．３当量）を添加した（約２０mLジクロロ メタン中の１mg）。反応混合物を室温で８時間撹拌した。混合物を直接シリカゲ ルカラムに添加した。 実施例１２ FMOC脱保護の一般方法： サブストレート（３６mLのDMF中１mmol）を無水DMFに溶解し、次いでKF（１ ０当量）と１８−クラウン−６エーテル（触媒量）を添加した。混合物を次いで 室温で４８時間撹拌した。DMFを真空中で除去し、次いでシリカゲルのフラッシ ュクロマトグラフィーにふした。 実施例１３ グリコペプチド（１６）。 実施例１４ グリコペプチド（１）。 実施例１５ グリコペプチド（１９）。 MS(EI)計算値（C178H249N15094Na2）４１４６（M＋２Na），実測値４１４７ ，負イオンモードから正確な分子量を確かめた；MALDI（MatrixAssisted Laser Desorption Ionization）から、質量４１３１，４１６３。 実施例１６ グリコペプチド（２０）。 MS(FAB)C119H193N15O70N 2975(M+Na) 実施例１７ アジドニトラート（４’）の調製： 保護されたガラクタール３’（４．１４g，１２．１mmol）の−２０℃の無 水アセトニトリルの６０mL中の溶液に、NaN₃（１．１８g，１８．１mmol）とCAN （１９．８g，３６．２mmol）の混合物を添加した。反応混合物を−２０℃で一 昼夜、激しく撹拌した。次いで反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、冷水、 次いで食塩水で洗浄した。最後に、溶液を無水の硫酸ナトリウムで乾燥した。溶 媒蒸発後、残さをシリカゲルのクロマトグラフィーで分離した。α及びβ異性体 （４’）の混合物（２．１７g，４０％収率）が得られた。α異性体とβ異性体 の比率は、¹H NMRに基づくと、ほぼ１：１であった。 実施例１８ トリクロロアセチミダート（５a’）および（５b’）の調製： アジドニトラート（４’）の混合物（１．３６g，３．０４mmol）の０℃で の無水アセトニトリル、１０mL中の溶液に、ゆっくりと、ジイソプロピルエチル アミン（０．５３mL，３．０５mmol）とPhSH（０．９４ml，９．１３mmol）を順 次、添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで溶媒を真空下で室温で 蒸発させた。残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、ヘミアセター ル（１．２２g，９９．８％収率）が得られた。このヘミアセタール（６０３mg ，１．５０mmol）の０℃での１５mLの無水ジクロロメタン溶液に、炭酸カリウム （１．０４g，７．５０mmol）およびCCl₃CN（１．５０ml，１５．０２mmol）を 添加した。反応混合物を室温で０℃で５時間撹拌した。懸濁液をセライトのパッ ドを通過させてろ過し、ジクロロメタンで洗浄した。ろ液を蒸発させ、残さをシ リカゲルクロマトグラフィーで分離すると、α−トリクロロアセチミダート５a ’（１１８mg，１４％収率）、β−トリクロロアセチミダート５b’（５７２mg ，７０％収率）が得られ、ヘミアセタール（７２mg）が回収された。 実施例１９ グリコシルフルオリド６a’および６b’の調製： 先に調製したヘミアセタール（６８．０mg，０．１６９mmol）の０℃での３ mLの無水ジクロロメタン溶液に、DAST（１３４ml，１．０２mmol）をゆっくりと 添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。次いで、混合物を酢酸エチルで 希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で順次洗浄した。最後に、溶液を 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフ ィーで分離すると、α−フルオリド６a’（３０．２mg，４４％収率）およびβ −フルオリド６b’（３３．７mg，４９％収率）が得られた。 実施例２０ 保護されたセリン誘導体７’とのβ−トリクロロアセチミダート５b’のカ ップリング： ９a’および９b’の合成： β−トリクロロアセチミダート５b’（５２．３mg，０．０９６mmol）、セ リン誘導体７’（４４．０mg，０．１０５mmol）、および２００mgの４Åモレキ ュラーシブの、−７８℃での２mLの無水ジクロロメタンと２mLの無水ヘキサンと の混合物中の懸濁液に、TMSOTf（１．９１μl，０．０１mmol）の３６μLのジク ロロメタン溶液を添加した。反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、次いで、 ３時間、室温まで昇温した。反応をトリエチルアミンで止めた。懸濁液をセライ トのパッドでろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を水、食塩水で洗浄して、無 水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィ ーで分離すると、α−生成物９a’（５５mg，７１％収率）およびβ−生成物９b ’（２２mg，２９％収率）が得られた。 実施例２１ TMSOTf（０．５当量）によってプロモートされたTHF中の保護されたセリン 誘導体７’とのβ−トリクロロアセチミダート５b’のカップリング： トリクロロアセチミダート５b’（１４．４mg，０．０２７mmol）、セリン 誘導体７’（１６．７mg，０．０４０mmol）、および５０mgの４Åモレキュラー シブの、−７８℃での０．２mLの無水THF中の懸濁液に、TMSOTf（２．７μl，０ ．０１３mmol）の５０μLのTHF溶液を添加した。反応混合物を−７８℃で２時間 撹拌し、トリエチルアミンで中性化した。反応混合物をセライトのパッドでろ過 し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウム で乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、 α−生成物９a’（１８．５mg，８６％収率）が得られた。 実施例２２ TMSOTf（０．５当量）によってプロモートされたTHF中の保護されたセリン 誘導体７’とのα−トリクロロアセチミダート５aのカップリング： トリクロロアセチミダート５a’（１２．３mg，０．０２３mmol）、セリン 誘導体７’（１４．１mg，０．０３４mmol）、および５０mgの４Åモレキュラー シブの、−７８℃での０．２mLの無水THF中の懸濁液に、TMSOTf（２．２μl，０ ．０１１mmol）の４５μLのTHF溶液を添加した。反応混合物を−７８℃で４時間 撹拌し、トリエチルアミンで中性化した。反応混合物をセライトのパッドでろ過 し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウム で乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、 α−生成物９a’（１１．８mg，６６％収率）が得られた。 実施例２３ 保護されたスレオニン誘導体８とβ−トリクロロアセチミダート５b’のカ ップリング： １０a’および１０b’の合成： β−トリクロロアセチミダート５ｂ’（５０．６mg，０．０９３mmol）、ス レオニン誘導体８’（４４．０mg，０．１０２mmol）、および２００mgの４Åモ レキュラーシブの、−７８℃での２mLの無水ジクロロメタンおよび２mLの無水ヘ キサンの混合物中の懸濁液に、TMSOTf（１．８５μl，０．００９mmol）の３５ μLのジクロロメタン溶液を添加した。反応混合物を−７８℃で半時間撹拌し、 ４時間室温に昇温した。反応をトリエチルアミンで止めた。反応混合物をセライ トのパッドでろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を水、食塩水で洗浄して、無 水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィ ーで分離すると、スレオニン誘導体７’（２８．０mg）、α−生成物１０a’（ ２２．０mg，２９％収率）、及びβ−生成物１０b’（３．０mg，４％収率）が 得られた。 実施例２４ (Cp)₂ZrCl₂−AgClO₄によってプロモートされたジクロロメタン中の保護され たスレオニン誘導体８’とα−グリコシルフルオリド６a’のカップリング： AgClO₄（２５．１mg，０．１２１mmol）、（Cp）₂ZrCl₂（１７．８mg，０．０ ６mmol）、および１５０mgの４Åモレキュラーシブの、−３０℃での１mLの無水 ジクロロメタン中の懸濁液に、α−グリコシルフルオリド６a’（１６．３mg， ０．０４mmol）およびスレオニン誘導体８’（１９．２mg，０．０４５mmol）の ４．０mLの無水ジクロロメタン溶液をゆっくりと添加した。反応混合物を−３０ ℃で６時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を止めた。溶液をセライ トのパッドでろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を飽和炭酸水素ナトリウム溶 液、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシ リカゲルクロマトグラフィーで分離すると、α−生成物１０a’（２４．８mg， ７５％収率）及びβ−生成物１０b’（３．９ｍｇ，１２％収率）が得られた。 実施例２５ （Cp）₂ZrCl₂−AgClO₄によってプロモートされたジクロロメタン中の保護さ れたスレオニン誘導体８’とβ−グリコシルフルオリド６b’のカップリング： AgClO₄（２４．４mg，０．１１８mmol）、（Cp）₂ZrCl₂（１７．２mg， ０．０５９mmol）、および２００mgの４Åモレキュラーシブの、−３０℃での１ mLの無水ジクロロメタン中の懸濁液に、β−グリコシルフルオリド６b’（１５ ．８mg，０．０３９１８mmol）およびスレオニン誘導体８’（２０．３mg， ０．０４７０２mmol）の４．０mLの無水ジクロロメタン溶液をゆっくりと添加し た。反応混合物を−３０℃で１０時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反 応を止めた。反応混合物をセライトのパッドでろ過し、酢酸エチルで洗浄した。 ろ液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで 乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、α −生成物１０a’（２２．３mg，７０％収率）及びβ−生成物１０b’（３．９mg ，１２％収率）が得られた。 実施例２６ ９a’のシリル基の脱保護： α−生成物９a’（１５．０mg，０．０１８７３mmol）の０℃での２mLのTHF 溶液に、HOAc（５６μl，０．９７８mmol）および１MのTBAF（２４０μl，０． ２４０mmol）を添加した。反応を０℃で１時間行い、３日間、室温まで昇温した 。混合物を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで 乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフイーで分離すると、所 望の生成物１１’（１２．４mg，１００％収率）が得られた。１１’： 実施例２７ １０a’のシリル基の脱保護： α−生成物１０a’（１６．０mg，０．０２mmol）の０℃での３mLのTHF 溶液に、HOAc（６７μl，１．１８mmol）および１MのTBAF（３００μl，０．３ ０００mmol）を添加した。反応を０℃で１時間行い、次いで、３日間、室温まで 昇温した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナト リウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離す ると、所望の生成物１２’（１２．１mg，９４％収率）が得られた。１２’： 実施例２８ 化合物１４’の調製： トリクロロアセチミダート１３’（３３２．０mg，０．４３５mmol）、アク セプター１１’（１４０．２mg，０．２１８mmol）、および１．０gの４Åモレ キュラーシブの、−３０℃での４mLの無水ジクロロメタン中の懸濁液に、BF₃・E t₂O（１３．８μl，０．１０９mmol）の１２０μlの無水ジクロロメタン溶液を ゆっくりと添加した。反応混合物を−３０℃で一昼夜撹拌し、次いで３時間室温 まで昇温した。反応をトリエチルアミンで止め、反応混合物をセライトのパッド でろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナト リウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離す ると、粗の回収アクセプター１１’（これはさらに化合物９a’に変換した）（ ８７．０mg，０．１０９mmol）と粗カップリング生成物が得られ、カップリング 生成物はピリジンおよびチオール酢酸によって化合物１４’に還元された。粗カ ップリング生成物を１mLのピリジンおよび１mLのチオール酢酸に０℃ で溶解した。反応混合物を一昼夜室温で撹拌した。溶媒を室温で真空下に蒸発さ せ、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、化合物１４’（９９． ６mg，７２％収率、アクセプター１１’の５０％変換に基づく）が得られた。 １４’： 実施例２９ 化合物１５’の調製： トリクロロアセチミダート１３’（３０５．０mg，０．３９９６mmol）、ア クセプター１２’（１３１．６mg，０．１９９８mmol）、および１．０gの４Å モレキユラーシブの、−３０℃での４mLの無水ジクロロメタン中の懸濁液に、BF₃ ・Et₂O（１２．７μl，０．１０mmol）の１１５μlの無水ジクロロメタン溶液 をゆっくりと添加した。反応混合物を−３０℃で一昼夜撹拌し、次いで３時間室 温まで昇温した。反応をトリエチルアミンで止め、反応混合物をセライトのパッ ドでろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナ トリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離 すると、粗の回収アクセプター１２’（これはさらに化合物１０a’に変換した ）（８５．０mg，０．１０４mmol）と粗カップリング生成物が得られ、カップリ ング生成物はピリジンおよびチオール酢酸によって化合物１５’に還元 された。粗カップリング生成物を１mLの無水ピリジンおよび１mLのチオール酢酸 に０℃で溶解した。反応混合物を一昼夜室温で撹拌した。溶媒を室温で真空下に 蒸発させ、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、化合物１５’（ ７１．１mg，５８％収率、アクセプター１２’の４８％変換に基づく）が得られ た。１５’： 実施例３０ 化合物１’の合成： トリサッカリド１４’（１０５．８mg，０．０８３mmol）を室温で、８０％ HOAc水溶液、５mLに溶解した。反応混合物を室温で一昼夜撹拌し、次いで４０℃ で３時間撹拌した。溶液を酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、 水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシ リカゲルクロマトグラフィーで分離すると、ジオール（９３．０mg，９１％収率 ）が得られた。このジオール（９１．５mg，０．０７４mmol）の１０mLの無水ジ クロロメタンの０℃での溶液中に、触媒のDMAP（４．５mg，０．０３７mmol）、 トリエチルアミン（１０３μl，０．７４mmol）およびAc₂O（２８μl，０．３０ mmol）を順次添加した。反応を室温で一昼夜行った。反応混合物 を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した 。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、過アセチル 化化合物（８８．８mg，９１％収率）が得られた。１０％Pd／Ｃ（５．０mg）の １mLメタノール及び０．１mL水の混合物中の懸濁液に、過アセチル化化合物（３ ８．５mg，０．０３mmol）の４．０mLのメタノール溶液を添加した。反応を水素 雰囲気下、室温で４時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルのショートカラムに 通し、触媒を除去して、メタノールで洗浄した。溶媒除去後、残さを１．５mLの DMFに溶解し、この溶液に０．５mLのモルホリンを０℃でゆっくりと添加した。 反応を室温で一昼夜行った。溶媒を真空下で除去し、残さをシリカゲルクロマト グラフィーで分離すると、２９．０mgの材料が得られ、これは、塩基性条件下で 脱アセチル化した。この予め得られた材料を５０mLの無水THFおよび５mLの無水 メタノール中に溶解した。溶液を０℃に冷却し、NaOMe（１４．０mg，０．２６m mol）の５mL無水メタノール溶液を添加した。反応混合物を室温で一昼夜撹拌し 、５０％HOAc水溶液で止めた。溶媒蒸発後、残さを逆相シリカゲルクロマトグラ フィーで分離すると、粗生成物が得られ、これをさらに、”Sephadex LH-20”で ゲルパーミエーションろ過して精製すると、最終生成物１’（１５．１mg，７７ ％収率）が得られた。 実施例３１ 化合物２’の合成： トリサッカリド１５’（７０．２mg，０．０５４mmol）を室温で、８０％HO Ac水溶液、５mLに溶解した。反応混合物を室温で一昼夜撹拌し、次いで４０ ℃で３時間撹拌した。溶液を酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液 、水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さを シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、ジオール（６７．１mg，９９％収 率）が得られた。このジオール（６５．１mg，０．０５２mmol）の８mLの無水ジ クロロメタンの０℃での溶液中に、触媒のDMAP（３．２mg，０．０２６mmol）、 トリエチルアミン（７２μl，０．５２mmol）およびAc₂O（２０μl，０．２ｌmm ol）を順次添加した。反応を室温で一昼夜行った。反応混合物を酢酸エチルで希 釈し、水、食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残 さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、過アセチル化化合物（６６． ０mg，９５％収率）が得られた。１０％Pd／C（５．０mg）の１mLメタノール及 び０．１mL水の混合物中の懸濁液に、過アセチル化化合物（２２．１mg，０．０ １７mmol）の４．０mLのメタノール溶液を添加した。反応混合物を水素雰囲気下 、室温で４時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルのショートカラムに通し、触 媒を除去して、メタノールで洗浄した。溶媒除去後、残さを１．５mLのDMFに溶 解し、この溶液に０．５mLのモルホリンを０℃でゆっくりと添加した。反応を室 温で一昼夜行った。溶媒を真空下で除去し、残さをシリカゲルクロマトグラフィ ーで分離すると、２９．０mgの材料が得られ、これは、塩基性条件下で脱アセチ ル化した。この予め得られた材料を５０mLの無水THFおよび５mLの無水メタノー ル中に溶解した。溶液を０℃に冷却し、NaOMe（１４．９mg，０．２７６mmol） の５mL無水メタノール溶液を添加した。反応混合物を室温で一昼夜撹拌し、５０ ％HOAc水溶液で止めた。溶媒蒸発後、残さを逆相シリカゲルクロマトグラフィー で分離すると、粗生成物が得られ、これをさらに、”Sephadex LH-20”でゲルパ ーミエーションろ過によって精製すると、最終生成物２’（８．４mg，７４％収 率）が得られた。 実施例３２ チオグリコシド１７’の調製： 過ベンジル化ラクタール１６’（４２０mg，０．４９mmol）および６００mg の４Åモレキュラーシブの、５mLの無水ジクロロメタン中の懸濁液に、ベンゼン スルホンアミド（１１６mg，０．７４mmol）を室温で添加した。１０分後、懸濁 液を０℃に冷却し、I（sym-コリジン）₂ClO₄を一部添加した。１５分後、溶液を セライトのパッドでろ過し、酢酸エチルで洗浄した。有機溶液をNa₂S₂O₃、食塩 水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲル クロマトグラフィーで分離すると、５００mgのヨードスルホンアミダート誘導体 （９０％収率）が得られた。−４０℃の、エタンチオール（１５０μl，１．９ ８mmol）の４mLの無水DMF中の溶液に、LiHMDS（０．８８ml，０．８８mmol）溶 液を添加した。１５分後、ヨードスルホンアミダート（４５０mg，０．３９７mm ol）の６mLの無水DMF中の溶液を、ゆっくりと室温で添加した。反応混合物を− ４０℃で４時間撹拌し、水で反応を止めた。水溶液を酢酸エチルで３回抽出し、 合わせた有機層を水、食塩水で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発 後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、所望のチオグリコシド １７’（３５０mg，８３％収率）が得られ、ヨードスルホンアミダート（６０mg ）が回収された。 実施例３３ トリサッカリド２０’の調製： 丸底フラスコに、チオグリコシド１７’（２．１０g，１．９７mmol）、ア クセプター１８’（９６４mg，２．９５mmol）、ジ−t−ブチルピリジン（２． ６５ml，１１．８１mmol）および７．０gの４Åモレキュラーシブを入れた。混 合物を１０mLの無水ジクロロメタンおよび２０mLの無水エチルエーテルに溶解し た。溶液を０℃に冷却し、次いでMeOTf（１．１１mL，８．８５mmol）をゆっく りと添加した。反応混合物を０℃で一昼夜撹拌した。セライトのパッドでろ過し 、有機相を水性ワークアップした。酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し た。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、２０α’ （２０６mg，８％）および２０β’（２．２６g，８６％）が得られた。 実施例３４ トリサッカリド２１’の調製： 丸底フラスコに、チオグリコシド１７’（９６６mg，０．９０６mmol）、ア クセプター１９’（２１９mg，１．１８mmol）、ジ−t−ブチルピリジン（１． ２２ml，５．４４mmol）および２．５gの４Åモレキュラーシブを入れた。混合 物を５mLの無水ジクロロメタンおよび１０mLの無水エチルエーテルに溶解した。 溶液を０℃に冷却し、次いでMeOTf（０．５１mL，４．５３mmol）をゆっくりと 添加した。反応混合物を０℃で５時間撹拌した。セライトのパッドでろ過し、有 機層を水性ワークアップした。酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、２１α’（５ ９mg，６％）および２１β’（９１０mg，８４％）が得られた。 実施例３５ トリサッカリド２２’の調製： 火炎乾燥フラスコに、−７８℃で３０mLの無水アンモニアを凝縮させた。こ の液体アンモニアに、金属ナトリウム（３２０mg，１３．９５mmol）を一部入れ た。１５分後、ドライアイス−エタノール浴をはずし、暗青色溶液を２０分間還 流した。再度、−７８℃に冷却し、トリサッカリド２０’（６１９mg，０．４７ mmol）の６mLの無水THF溶液をゆっくりと添加した。反応混合物を３０分間、− ３０℃で還流し、１０mLのメタノールで反応を止めた。アンモニアを蒸発させた 後、塩基性溶液をDowexレジンによって中性化した。有機溶液をろ過し、蒸発さ せて粗生成物を得て、これをアセチル化にふした。粗生成物を、３．０mLのピリ ジンと２．０mLのAc₂Oに、０℃で１０mgのDMAPの存在下に溶解させた。反応混合 物を０℃から室温まで、一昼夜かけて撹拌した。水性ワークアップ後、有機層を 硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィー で分離すると、過アセチル化トリサッカリド２２’（２３３mg，５９％）が得ら れた。 実施例３６ トリサッカリドドナー２３’の調製： −２５℃の、トリサッカリドグリカール２０’（４６０mg，０．３４６mmol ）の３mLの無水アセトニトリル中の溶液に、NaN₃(３４mg，０．５１９mmol）お よびCAN（５６９mg，１．４mmol）を順次添加した。混合物を−２５℃で８時間 撹拌した。水性ワークアップ後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸発 後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、アジドニトラート誘導 体（１３４mg，２７％）の混合物が得られた。このアジドニトラート混合物を還 元条件下において加水分解した。アジドニトラートを２mLの無水アセトニトリル に室温で溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（１６μl，０．０９１mmol） およびPhSH（２８μl，０．２７２mmol）を順次添加した。１５分後、反応は完 了し、溶媒を室温で蒸発させた。ヘミアセタール誘導体（１０３mg，７４％）が シリカゲルクロマトグラフィー後に得られた。このヘミアセタール（９５mg，０ ．０６８mmol）を２mLの無水ジクロロメタンに溶解した。この溶液に、１mLのCC l₃CNと０．５gのK₂CO₃を室温で添加した。反応を一昼夜行った。セライトのパッ ドでろ過した後、有機溶媒を蒸発させ、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで 分離すると、２３α’（１８mg，１７％）および２３β’（７０mg，６７％）が 得られた。 実施例３７ トリサッカリドドナー２４’の調製： −１５℃の、トリサッカリドグリカール２１’（２２５mg，０．２６４mmol ）の２mLの無水アセトニトリル中の溶液に、NaN₃（２６mg，０．４０mmol）およ びCAN（４３６mg，０．７９４mmol）を順次添加した。混合物を−１５℃で一昼 夜撹拌した。水性ワークアップ後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒蒸 発後、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、アジドニトラート誘 導体（１３０mg，５１％）の混合物が得られた。このアジドニトラート混合物を 還元条件下において加水分解した。アジドニトラート（１２５mg，０．１２９mm ol）を５mLの無水アセトニトリルに室温で溶解した。ジイソプロピルエチルアミ ン（２５μl，０．１４７mmol）およびPhSＨ（４５μl，０．４４１mmol）を順 次添加した。１５分後、反応は完了し、溶媒を室温で蒸発させた。ヘミアセター ル誘導体（９２mg，７７％）がシリカゲルクロマトグラフィー後に得られた。こ のヘミアセタール（８０mg，０．０８７mmol）を５mLの無水ジクロロメタンに溶 解した。この溶液に、０．９mLのCCl₃CNと０．１２gのＫ₂CO₃を室温で添加した 。反応を一昼夜行った。セライトのパッドでろ過した後、有機溶媒を蒸発させ、 残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、２４’のαおよびβ異性体 の混合物（７１mg，７７％，α：β＝３：１）が得られた。 ２４’： 実施例３８ トリサッカリドドナー２５’の調製： 過アセチル化トリサッカリド２１’からのアジドニトラート誘導体（１００ mg，０．１０３mmol）を０．５mLの無水アセトニトリルに室温で溶解した。この 溶液に、無水LiBr（４５mg，０．５２mmol）を添加した。混合物を３時間撹拌し た。水性ワークアップ後、有機溶媒を蒸発させ、残さをシリカゲルクロマトグラ フィーで分離すると、化合物２５’（９１mg，９０％）が得られた。 ２５’： 実施例３９ トリサッカリドドナー２６’の調製： トリサッカリドドナー２５’（９１mg，０．０９３mmol）を２mLの無水THF に０℃で溶解した。この溶液に、LiSPh（１００mL，０．１０３mmol）を添加し た。反応を０℃で３０分間行った。溶媒を除去し、残さをシリカゲルクロマトグ ラフィーで分離すると、化合物２６’（６１mg，６６％）が得られた。 実施例４０ トリサッカリドドナー２７’の調製： トリサッカリドドナー２１’（８６０mg，０．７２２mmol）を、２mLのピリ ジンと１mLのAc₂Oに、１０mgのDMAPの存在下に溶解させた。反応混合物を０℃か ら室温まで、一昼夜かけて撹拌した。水性ワークアップ後、溶媒を除去し、残さ を室温で１０mLのメタノールおよび５mLの酢酸エチルに溶解した。この溶液に、 Na₂HPO₄（４１０mg，２．８９mmol）および２０％NaHg（１．０g，４．３５mmol ）を添加した。反応を２時間行って、水性ワークアップした。有 機溶媒を除去後、残さをシリカゲルクロマトグラフイーで分離すると、Ｎ−アセ チルトリサッカリドグリカール（７４０mg，９４％）が得られた。トリサッカリ ドグリカール（６２４mg，０．５７mmol）を３mLの無水アセトニトリルに−４０ ℃で溶解した。この溶液に、NaN₃（５６mg，０．８６mmol）およびCAN（９３９m g，１．７１mmol）を順次添加した。混合物を−４０℃で４時間撹拌した。水性 ワークアップ後、有機溶媒を除去し、残さをシリカゲルクロマトグラフィーで分 離すると、およびβアジドニトラートアノマーの混合物（１９１mg，２７％）が 得られた。アノマーのこの混合物（１７２mg，０．１３７mmol）を室温で１mLの アセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２４μ l，０．１３７mmol）とPhSH（４２μl，０．４１０mmol）を順次添加した。反応 は３０分で完了し、溶媒を蒸発させた。カラムによる分離によって、所望のヘミ アセタール（１７０mg）が得られた。このヘミアセタールを１mLのジクロロメタ ンに室温で溶解した。この溶液に、１mLのCCl₃CNおよび５００mgの炭酸カリウム を添加した。反応を室温で一昼夜行った。セライトのパッドでろ過後、有機溶媒 を除去し、シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、所望のα−トリクロロ アセチミダート２７’（７０mg，４２％）が得られた。 実施例４１ メチル＝N−Fmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２３α’のカッ プリング： トリサッカリドドナー２３α’（７０mg，０．０４６mmol）、メチル＝N −Fmocセリナート（２３．４mg，０．０６８mmol）および３００mgの４Åモレキ ュラーシーブの、−７８℃での０．５mLのTHF溶液に、TMSOTf（４．６μl，０． ０２３mmol）を添加した。反応を−３５℃で一昼夜撹拌した。反応をトリエチル アミンで止め、溶液をセライトのパッドでろ過した。ろ液を蒸発させ、残さを、 シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、２９α’（７０mg，９０％）およ び２９β’（７．０mg，９．０％）が得られた。 実施例４２ ベンジル＝N−Fmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２４’のカッ プリング： トリサッカリドドナ−２４’（３３mg，０．０３０mmol）、ベンジル＝N−F mocセリナート（３３．０mg，０．０７５mmol）および１００mgの４Åモレキュ ラーシーブの、−７８℃での０．３mLのTHF溶液に、TMSOTf（６．０μl，０．０ ３０mmol）を添加した。反応を−７８℃から室温まで、２時間撹拌した。反応を トリエチルアミンで止め、溶液をセライトのパッドでろ過した。ろ液を蒸発させ 、残さを、シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、３０’（８．６mg，２ ２％，α：β＝２：１）が得られた。 実施例４３ ベンジル＝N−Fmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２５α’のカ ップリング： ベンジル＝N−Fmocセリナート（４５mg，０．１０７mmol）、AgClO₄（３７ ．０mg，０．１７９mmol）および２００mgの４Åモレキュラーシーブの、０．６ mLの無水ジクロロメタン溶液に、トリサッカリドドナー２５α’（８８mg，０． ０８９３mmol）の０．５mLのジクロロメタン溶液をゆっくりと添加した。反応を 室温で一昼夜行った。セライトのパッドでろ過後、溶媒を除去し、残さを、 シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、カップリング生成物３０’（６６ mg，５６％，α：β＝３．５：１）が得られた。 実施例４４ ベンジル＝N−Fmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２６β’のカ ップリング： ベンジル＝N−Fmocセリナート（４５mg，０．１０７mmol）、トリサッカリ ドドナー２６β’（２３mg，０．０２３mmol）、および５０mgの４Åモレキュラ ーシーブの、０℃での１．０mLの無水ジクロロメタン溶液に、NIS（６．２mg， ０．０２７mmol）およびTfOH（０．２４μl，０．００３mmol）の０．５mLジク ロロメタン溶液をゆっくりと添加した。反応を０℃で１時間行った。反応をトリ エチルアミンで止め、水性ワークアップした。有機溶媒を硫酸ナトリウムで乾燥 した。溶媒除去後、残さを、シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、カッ プリング生成物３０’（１２．１mg，４０％，α：β＝２：１）が得られた。 実施例４５ ベンジル＝Nmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２７α’のカップ リング： トリサッカリドドナー２７α’（４０．１mg，０．０２９mmol）、ベンジル ＝N−Fmocセリナート（１８．０mg，０．０４４mmol）、および２００mgの４Å モレキュラーシーブの、−２０℃での２．０mLのTHF溶液に、TMSOTf（１．８μl ，０．００９mmol）を添加した。反応混合物を−２０℃から室温まで３時間撹拌 した。反応をトリエチルアミンで止め、水性ワークアップした。硫酸ナトリウム で乾燥後、ろ液を蒸発させ、残さを、シリカゲルクロマトグラフィーで分離する と、３１’（２４mg，５１％）が得られた。 実施例４６ ベンジル＝N−Fmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２８’のカッ プリング： トリサッカリドドナー２８’（α：β＝１：１）（１６２mg，０．１６３mm ol）、ベンジル＝N−Fmocセリナート（４８．０mg，０．０９７mmol）、および ３００mgの４Åモレキュラーシーブの、−７８℃での２．０mLのTHF溶液に、ジ クロロメタン中のBF₃・Et₂O（０．５当量，０．０８２mmol）を添加した。反応 混合物を−７８℃から室温まで２時間撹拌した。反応をトリエチルアミンで止め 、水性ワークアップした。硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ液を蒸発させ、残さを、 シリカゲルクロマトグラフィーで分離すると、３２’（８１mg，６７％）が得ら れた。 実施例４７ ベンジル＝N−Fmocセリナートを用いたトリサッカリドドナー２８β’のカ ップリング： トリサッカリドドナー２８β’（１２mg，０．０１２mmol）、ベンジル＝ N−Fmocセリナート（９．０mg，０．０２２mmol）、および１００mgの４Åモレ キュラーシーブの、−４０℃での０．５mLのTHF溶液に、ジクロロメタン中のBF₃ Et₂O（１．５当量，０．０１８mmol）を添加した。反応混合物を−４０℃から室 温まで２時間撹拌した。反応をトリエチルアミンで止め、水性ワークアップした 。硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ液を蒸発させ、残さを、シリカゲルクロマトグラ フィーで分離すると、３２’（５．２mg，３５％）が得られた。 2,3-ST抗原前駆体 チオエチルグリコシル供与体30(52mg,0.064mmol)および6-TBDMS受容体31(94 mg,0.13mmol)混合物をベンゼン(4x50mL)とともに共沸混合し、次いで高真空下に １時間置いた。この混合物を窒素下に置き、その時点で４Åモレキュラーシーブ ス(0.5g)、CH₂Cl₂(5mL)、およびNIS(36mg,0.16mmol)を加えた。混合物を０℃ま で冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸(CH₂Cl₂中1％,0.96mL,0.064mmol)を５ 分間にわたって滴下した。懸濁液を添加後直ちに周囲温度まで温め、２０分撹拌 した。この混合物をEtOAc(50mL)と飽和NaHCO₃(50mL)で分液した。これらの相を 分離し、有機相を食塩水(50mL)で洗浄、乾燥(Na₂SO₄)、濃縮した。残渣をシリカ ゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（4:1、EtOAc:ヘキサン）により精製し 、無色の結晶性固体として三糖類32、59mg(62％)を得た。 Le^y抗原前駆体 チオ供与体32(44.0mg,29.5μmol)および受容体31(42.4mg,59.0μmol)（トル エンとともに３度共沸混合）にCH₂C1₂および新たに活性化した４Åモレキュラー シーブスを加えた。この混合物を２０分間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。N- ヨードスクシンイミド(16.6mg,73.8μmol)を加え、次いでCH₂Cl₂中のTfOHの1％ 溶液を滴下した。この赤色混合物を0℃で５分間撹拌し、さらにEtOAcで希釈した 。有機相を飽和NaHCO₃、飽和Na₂S₂O₃、および食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥させ 、さらに真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフイー（1:1 EtOAc:CH₂Cl₂から 2:1 EtOAc:CH₂Cl₂）により、カツプリング生成物34、43.2mg(68％)を得た。 b-トリクロロアセトイミデートの保護トレオニンとのカップリング 無水CH₂Cl₂6ml中のトリクロロアセトイミデート35(98mg,0.13mmol)、トレオ ニン誘導体36(70mg,0.167mmol)および4Åモレキュラーシーブス100mgの溶液に− 30℃でTMSOTf(14mL,0.07mmol)を加えた。この反応物を−30℃で１時間撹拌し、 次いでEt₃Nで中和した。反応混合物をセライトのパッドで濾過し、EtOAcで洗浄 した。濾過物をH₂Oおよびブラインで洗浄し、無水Na₂SO₄で乾燥させた。溶媒を 蒸発させた後、残渣をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより分離 し、β生成物37β(56mg,42％)およびα生成物37α(57mg,42％)を得た。 考察 本発明で採用される合成アプローチは、4段階を包含する（図2）。まず、全 糖ドメインを改良型グリカールの形で構築する。次ぎに、セリン、トレオニンま たは類似の残基との効率的なカップリングを行う。第3段階として、全グリコシ ルドメインアミノ酸をペプチド主鎖に組み込むペプチドの構築を含む。最終の段 階として、同時にかまたは逐次かのいずれかでの全体の脱保護を含む。 合成開始点は、容易に入手可能なグリカール2（図3）であった。この化合物 のジメチルジオキシランによる酸化および続いて起こる得られたエポキシドの6- O-TIPS-ガラクタールとのカップリングは標準的な方法でZnCl₂により促進させた 。文献：Toyokuni,T.;Singhal,A.K.;Chem.Soc.Rev.1995,24,231.粗生成物のアセ チル化により高収率および立体選択性のある二糖類3を得た。緩やかな条件下で のTIPS保護基の除去により、シアル酸の受容体4への結合のための準備をする。 触媒量のTMSOTfによる促進下、供与体として亜リン酸シアリル5を使用すると、 一貫して高収率(80ないし85％)の生成物の4:1混合物が得られた。文献：Martin, T.J.ら,Glycoconjugate J.1993,10,16.Sim,M.Mら,J.Am.Chem.Soc.1993,115,2260 .かくして、改良型グリカール6（「2,6-STグリカール」）は４工程で非常に効率 よく入手できる。 三糖類グリカール6は示されるように（図3）アジドニトロ化させた。このよ うにして収率60％で得られた化合物7は種々の供与体構築物への変換に有用であ った（8から11を参照）。例えば、α-ブロミド8は供与体として直接使用できる か、またはリチウムチオフェノキシドにより立体選択的にβ-フェニルチオグリ コシド11へ変換され得る。別法としては、硝酸塩7の混合物を加水分解し、得ら れたヘミアセタールをα:βトリクロロアセトアミデート(9)と亜リン酸ジエチル (10)の1:1混合物へ高収率で変換した（図3）。（硝酸塩加水分解:文献：Gauffen y,F.ら，Carbohydr.Chem.1991,219,237.トリクロロアセトアミデートの製造およ び使用：文献：Schmidt,R.R.およびKinzy,W.:Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.1994 ,50,21.亜リン酸塩供与体：文献：Kondo,H.ら;J.Org.Chem.1994,59,864.） 種々の供与体タイプ(8から11)の入手が可能となったことにより、(2,6)-ST 三糖類のN-Fmoc-保護L-セリンおよびL-トレオニンのベンジルエステルへの直接 的なカップリングの研究が可能になった。結果は表1に要約する。受容体としてF moc保護L-トレオニンを用い、あらゆる供与体が高い立体選択性でα-Oグリコシ ルトレオニン系を提供した。これに対し、同様な保護L-セリン受容体とのカップ リング反応の結果は、その供与体の特徴および反応条件に依存していた。あらゆ る場合において、所望のα-アノマー12が主生成物であった（β-アノマーが主生 成物として単離される、三糖類供与体をセリンへ結合させる先の試みについては 、文献：Paulsen,H.ら，Liebigs.Ann.Chem.1988,75;Iijima,H.：Ogawa, T.,Carbohydr.Res.1989,186,95.を参照）。供与体10を用いる場合の所望のα-生 成物：所望でないβ−グリコシドの比率は約３０：１であった。 構築単位14および15を用いて糖ペプチド構築段階に入り、これにより最終の 糖ペプチドに対して実施されるはずの必要な化学操作数が減る。このように、化 合物14および15は、12および13それぞれから2段階で得られた。アジド官能基はC H₃COSHの作用により、収率78-80％で、直接N-アセチル基に変換し、ベンジルエ ステルを水素添加分解により定量的に除去した（図4）。文献：Paulsen,H.ら,Li ebigs.Ann.Chem.1994,381． 糖ペプチド主鎖はC→N末端方向に構築した（図4）。ペプチドのN末端および 保護グリコシルアミノ酸間のカップリング工程の反復、次いでFMOC保護基の除去 により、保護されたペンタペプチド16を得た。12および13のようなブロック構造 のペプチドカップリング工程は優れた収率で進行した。IIDQおよびDICDの両カッ プリング試薬は十分に作用した(85ないし90％)。FMOC脱保護は18-クラウン-6の 存在下でDMF中のKFを用い、緩やかな処理の下で行った。文献：Jiang,J.ら,Synt h.Commun.1994,24,187.糖ペプチド16の2回の脱ブロッキングは3段階：(i)KFによ るFmoc除去およびアセチル基を有するアミノ末端の保護；(ii)ベンジルエステル の水素添加分解；および(iii)糖ペプチドムチンモデル1へ導くNaOH水溶液による 3のメチルエステル、環式カーボネートおよびアセチル保護物の加水分解で完了 した（図4）。 NおよびC両末端のオルト位の露出により、断片連結による糖ペプチド構築体 のさらなる伸長の機会が得られた。かかる請求の範囲の可能性を実証する目的で 、ST三価元素19を持つノナペプチドは、トリペプチド18とヘキサペプチド17との カップリングにより作製した（図5参照）。前記の脱保護プロトコールにより、O -グリコシル化セリンートレオニン三価元素がペプチドの中央に組み込まれたノ ナペプチドムチンモデル20が得られた。 マウスにおけるTnクラスター構築体のワクチン接種 本発明は、本明細書に開示された糖ペプチド抗原はリポペプチド担体PamCys へ結合している抗癌ワクチンを提供する。抗原の新たな担体への結合は、 従来のタンパク質担体と比較して主要には簡略化される。表2および3では、新し い構築体の免疫原性をマウスのタンパク質担体ワクチンと比較する。これらの新 規構築体はマウスに免疫原性をもたらした。表に示されるように、マウスの３度 目の予防接種後、Tn-PamCys構築体は高力価のIgMおよびIgG双方を惹起する。５ 度目の予防接種後、いっそう高い力価が誘導される。Tn-KLHワクチンはより強力 な全体的な応答をもたらす。しかしながら、IgM/IgG比率は２種のワクチン間で 異なる。Tn-KLHはTn PamCysより高いIgM/IgG比率をもたらす。相対的に、新規Tn -PamCysはより強いIgG応答を惹起する。タンパク質担体ワクチンに比べ、アジュ バントQS-21では免疫原性のさらなる増大はもたらされない。従って、PamCysリ ポペプチド担体は、「組み込まれた」免疫刺激剤／アジュバントと考えられるで あろう。さらに、QS-21がIgG力価を犠牲にして、Tn-PamCysに対するIgM応答を増 大させることが示されよう。PamCys担体を基にしたワクチンは前立腺癌に向けら れる。 抗原0.3μg/ウェルをアルコール中で平板培養;３度目のワクチン接種後11日に 抜き取った血清 ムチン関連F1α抗原の全合成 本発明は、主として糖タンパク質のムチンファミリーに基づく腫瘍組織表面の 誘導模擬物を提供する（文献：Ragupathi,G.ら,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1997,3 6,125.（この分野の概説としては、文献：Toyokuni,T.;Singhal,A.K.Chem.Soc.R ev.1995,24,231;Dwek,R.A.Chem.Rev.1996,96,683.を参照）。上皮細胞表面で発 現が高く、かつ、O-結合炭水化物クラスターが高含量であるため、ムチンは抗癌 免疫学的研究に関する重要な標的となる。上皮癌におけるムチンはしばしば異常 型α-O-結合炭水化物を有する。文献：Finn,O.J.ら,Immunol.Rev.1995,145,61;S aitoh,O.ら，Cancer Res.1991,51,2854;Carlstedt,I.;Davies,J.R.Biochem.Soc. Trans.1997,25,214.同定されたF1α抗原1'および2'は、胃腺癌と関連するムチン 上で見い出された異常型炭水化物エピトープの例を示す（図22A）。文献：Yamas hita,Y.ら,J.Nat.Cancer Inst.1995,87,441;Yamashita,Y.ら,Int.J.Cancer.1994 ,58,349.従って本発明は、合成によりF1αエピトープを構築する方法を提供する 。F1αの前記合成は、文献：Qui,D.;Koganty,R.R.Tetrahedron Lett.1997,38,45 によるものである。先行するα-O-結合糖ペプチドへの他のアプローチとしては 、文献：Nakahara,Y.ら,ライフサイエンスに関わる合成オリゴ糖類において不可 欠なプローブACS Symp.Ser.560,249-266頁(1994);Garg,H.G.ら,Adv.Carb.Chem.B iochem.1994,50,277;Paulsen,H.ら,J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1,1997,281,;Lie be,B.;Kunz,H.Angew.Chem.Int.Ed.Engl．1997,36,618;Elofsson,M.ら，Tetrahed ron 1997,53,369;Meinjphanns,E.ら,J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1,1996,985;Wan g,Z.G.ら，Carbohydr.Res.1996,295,25;Szabo,L.ら,Carbohydr.Res.1995,274,11 が挙げられる。 F1α構造は、3つの主要な構成単位I-IIIより構築され得る（図22A）。かか る一般的なプランにより、2つの選択的実行モデルが可能となる。（グリカール 構築体の包括的な総論については、文献：Bilodeau，M.T.;Danishcfsky，S.J.An gew.Chem.Int.Ed.Engl.1996,35,1381.を参照。炭水化物腫瘍抗原に基づくワクチ ンの合成への応用については、文献：Sames,D.ら，Nature 1997,389, 587;Park,T.K.ら,J.Am.Chem.Soc.1996,118,11488;およびDeshpande,P.P.;Danish efsky,S.J.Nature 1997,387,164.を参照。）まず、GalNAc-セリン／トレオニン 構築物は最初の段階で構築してよい。これに次いで「非還元末端」で伸長が起こ る(II+III、次いでI)。別法としては、まず全糖ドメインを三糖類グリカールの 形で構築することが可能であろう(I+II)。この工程に次いで得られた三糖類供与 体とセリンまたはトレオニンアミノ残基とのカップリングが行われるであろう(I I参照)。両方法は本明細書で開示される。 第1の合成アプローチは、単糖類供与体5a'/b'および6a'/b'の製造で開始し た（図22B）。ガラクタールの保護基(II参照)はいくつかの必要条件を満たすよ うに慎重に選択した。それらは試薬およびアジドニトロ化プロトコール（下記参 照）の条件に安定でなければならない。また、保護官能基はグリコシルアミノ酸 へと導くカップリング工程を低下させてはならない。いくつかの開始試験の後、 ガラクタール3'が出発物質として選択された。アジドニトロ化プロトコール(NaN 3,CAN CH₃CN,-20℃)により4a'および4b'の1:1混合物が40％の収率で得られる。 文献：Lemieux,R.U.;Ratcliffe,R.M.Can.J.Chem.1979,57,1244.両アノマーを加 水分解し、次いで十分な収率(84％)でトリクロロアセトイミデート5a'および5b' の1:5混合物へと変換した。文献：Schmidt,R.R.;Kinzy,W.Adv.Carbohydr.Chem.B iochem.1994,50,84.別法としては、硝酸塩4'の加水分解、次いでDAST試薬の使用 (文献：Rosenbrook,Jr.W.ら，Tetrahedron Lett.,1985,26,3;Posner,G.H.;Haine s,S.R.Tetrahedron Lett.1985,26,5)により、フルオリド供与体6a'および6b'の1 :1混合物が得られた。両場合においてα/βアノマーは分離でき、かくしてカッ プリング事象におけるそれらの挙動について一連の研究がなされた。保護された カルボキシおよびアミノ部分を持つ、遊離側鎖アルコールを有する供与体5'-6' のセリンまたはトレオニン受容体とのカップリングにより得られた最良の結果を 表5aで要約する。 トリクロロアセトイミデート供与体タイプ5'は、セリン誘導アルコール7'と のカップリング反応で優れた収率をもたらした。最適化した後、THF中のTMSOTf の存在下での供与体5b'（エントリー2、表5a）により、86％の収率で純粋なα- 生成物9'を得られた。興味深いことに、供与体5a'はまた、α-グリコシド 9'のみを独占してもたらした。供与体5b'のトレオニンとのカップリングは立体 選択性にもかかわらず、低収率であった。この場合、幾分低下した選択性による にもかかわらず、フルオリド供与体6a'および6b'はCP₂ZrCl₂/AgClO₄により促進 させると、所望のグリコシルトレオニン10'が優れた収率(82ないし87％)で得ら れた(6:1，α:β)。文献：Ogawa,T.Carbohydrate Res.1996,295,25.このように 、互いの相補性を与える供与体セットとグリコシルトレオニン10'ならびにグリ コシルセリン9'が高収率、かつ優れた立体選択性限界をもって得られた。これら の供与体のアノマー中心での配座による、それらのカップリング工程の立体化学 的な結果への実質的な影響はないということがわかった。この結果は一般に２- デオキシ-2-アジド-トリ-O-アセチルガラクトース-1-O-トリクロロアセトイミデ ートを用いる試験結果とは異なる。文献：Schmidt,R.R.:Kinzy,W.,id.を参照。 その場合、各アノマーにより異なる比率のα/β生成物が得られる（下記参照） 。 6位のTIPS基をTBAFおよびAcOHで定量的に除去し、受容体11'および12'を得た （図23）。ラクトサミン供与体13'への最終カップリングは、THF中のBF₃OEt₂の 存在下で行った。この見かけの立体選択的カップリング工程からの粗生成物をチ オール酢酸によりそれぞれ化合物14'および15'へと変換した。文献：Paulsen,H. ら,Liebigs Ann.Chem.1994,381.これらのグリコシルアミノ酸は、糖ペプチド構 築体の好適な単位を示す。それらの構造を確認するために、発明者 らは、全体的な脱保護を行った。これは遊離F1α抗原1'および2'がそれぞれ70％ および73％の収率で得られる５工程で完了した（図23）。グリコシド結合は、酸 性および塩基性脱保護プロトコールの条件下では妥協点はなかった。 直接的カップリングはグリカール構築体により、適切に保護されたセリンま たはトレオニンアミノ酸を用いて合成される三糖類供与体(文献：Bilodeau,M.T. ;Danishefsky,S.J.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1996,35,1381)から提供される。こ の論理は式I+II、次いでIIIとのカップリングのもとで初期に検討された。 図24で概説するように、三糖類供与体23'-27'を製造した。容易に入手可能なラ クタール16'(文献：Kinzy,W.;Schmidt,R.R.Carbohydrate Res.1987,164,265)を 一連のヨード−スルホンアミノ化、次いでLiHMDSの存在におけるエタンチオール での後の再配置によりチオ-供与体17'へと変換した。文献：Park,T.K.ら、J.Ame r.Chem.Soc.,1996,118,11488.ガラクタール18'および19'へのMeOTfにより促進さ れるカップリングにより、優れた収率かつ立体選択性で三糖類グリカール20'お よび21'が得られた。20'のベンジル基およびスルホンアミドの還元脱保護および 粗生成物の一連の均一なアセチル化によりグリカール22'が得られた。グリカー ル20'-22'のアジドニトロ化により中間体アジドニトレートが得られ、それを対 応する供与体23'-27'へと変換した。 これらの三糖類供与体の適切なセリン／トレオニン誘導受容体とのカップリ ングの結果を表6に要約する。さらに保護パターンは、カップリングの反応性お よび立体選択性へ大きな影響を及ぼした。アノマー中心のラクトースドメインの ヒドロキシル基および他の官能基間の距離が見かけ上離れているにもかかわらず 、これらの置換基は立体化学的な結果へ多大な影響を及ぼす。定性的に電子供与 基（ベンジル参照）による官能基の均一な保護が、推定されるオキソニウム陽イ オンを安定化させることにより、非常に反応性のある供与体が得られる。これに 対し、電子吸引性保護基はカップリング工程において供与体を失活させる傾向が ある。文献：Andrews,C.W.ら,J.Org.Chem.1996,61,5280;Halcomb,R.L.:Danishef sky,S.J.J.Am.Chem.Soc．1989,111,6656．かかる失活はまた、アノマー中心の供 与体官能基の元の立体化学へのカップリングの感受性に関して供与体にいくらか の立体化学的復元力を与える可能性がある。表6で示されるよう に、ペル-O-ベンジル-保護供与体23'は−78℃で高い反応性があり、90％の収率 で、高い選択性(10:1,第1エントリー、表6)をもって生成物28'が得られた。供与 体24'の場合において実証されたように、ペル-O-ベンジルからペル-O-アセチル 基までの全体的な保護の変化において劇的な差が見られた。カップリング工程の 収率および立体選択性は低下した。これに匹敵する結果が供与体25'および26'で も得られた。 化合物27'および28'の場合、ガラクトサミン環は環状アセトニドの3-および4- 位の結合により、コンホメーションが制限され、さらに驚くべき知見が示された 。ペル-O-ベンジル保護ラクトサミン二糖類を有する供与体27α'によっては、所 望のα-アノマー31'のみが得られた。しかしながら、純粋な28'のβ-アノマーと トリクロロアセトイミデートの混合物によっては、所望されないβ-アノマー32' のみが生じた。従って、（供与体官能基を含む環の）第2および第3炭水化物単位 上の比較的離れた部位での保護パターンの修飾により、グリコシド化の立体選択 性へ大きな逆作用が働いた。環状保護基により供与体集団内の環に強いられるコ ンホメーションの制限は、加水分解速度により判断されるように供与体反応性に 影響を及ぼし得る。文献：Wilson,B.G.;Fraser-Reid,B．J.Org.Chem.1995,60,31 7;Fraser-Reid,B.ら,J.Am.Chem.Soc.,1991,113,1434．保護基は、それらの電子 的、立体的およびコンホメーション的影響により、溶媒和合作用とともにグリコ シル供与体の特性を著しく変調する。従ってより長期の作用はセリンおよびトレ オニン側鎖ヒドロキシル基のグリコシド化に先立っては厳密に推定できない。 従って本発明は、予め構築した立体特異的合成α-O-結合セリンまたはトレ オニングリコシド（例えば9'および10'）を使用して糖質構築体を完成させるカ セットアプローチに対する予期されないほどの優位性を実証するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ０７Ｈ 3/06 Ｃ０７Ｈ 3/06 15/04 Ｅ 15/04 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，Ｍ Ｗ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，Ｅ Ｓ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ｗ (72)発明者 ヒンターマン，サミュエル スイス国 ＣＨ―4002 ベイセル キンゲ ルベルグストラッセ 93 (72)発明者 チェン，シァオ−タオ アメリカ合衆国 ニューヨーク 10027 ニューヨーク ダブリュ ワンハンドレッ ドフィフティーンス ストリート 604 アパートメント ２ビー (72)発明者 シュワルツ，ジャコブ ビー アメリカ合衆国 ニューヨーク 10128 ニューヨーク イー エイティナインス ストリート 401 アパートメント 12デ ィ (72)発明者 グルンツ，ピーター アメリカ合衆国 ニューヨーク 10028 ニューヨーク イー エイティファースト ストリート 504 アパートメント ６ ジー (72)発明者 ラグパティ，ゴヴィンダスワミ アメリカ合衆国 ニューヨーク 10028 ニューヨーク イー エイティファースト ストリート 504 アパートメント ５ エー (72)発明者 リビングストン，フィリップ オー アメリカ合衆国 ニューヨーク 10021 ニューヨーク イー セブンティナインス ストリート 156 アパートメント ６ シー (72)発明者 クドゥク，スコット アメリカ合衆国 ペンシルバニア 19438 ハーリーヴィル サマーミスト レーン 219 (72)発明者 ウィリアムズ，ローレンス アメリカ合衆国 ニューヨーク 10021 ニューヨーク イースト エイティナイン ス ストリート 401 アパートメント １エル

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 1.構造： ｛式中、m、n、pおよびqは0、1、２または3であってm+n+p+q≦6であり；A、 B、C、D、EおよびFは独立にアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基であり、A はNまたはO末端であり、Aがアミノアシルの場合には遊離アミンまたはアンモニ ウムの形態のいずれかであり、またはAがヒドロキシアシルの場合には遊離ヒド ロキシであり、あるいはAはアルキル化、アリール化またはアシル化されており ；Fは遊離カルボン酸、第1級カルボキシアミド、モノまたはジアルキルカルボキ シアミド、モノまたはジアリールカルボキシアミド、直鎖まなは分枝鎖の（カル ボキシ）アルキルカルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（アルコキシカルボニ ル）アルキル−カルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（カルボキシ）アリール アルキルカルボキシアミド、直鎖または分枝鎖の（アルコキシカルボニル）アル キルカルボキシアミド、2ないし約20個のヒドロキシアシル残基を含んでなるオ リゴエステル断片、2ないし約20個のアミノアシル残基を含んでなるペプチド断 片、または直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリールカルボン酸エステルのい ずれかであり；1ないし約5個の当該アミノアシルまたはヒドロキシアシル残基は 以下の構造を有する炭水化物ドメインで置換されており、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびzは独立に0、1、2または3であ り；炭水化物ドメインはOH、COOHおよびNH₂からなる群より選択される側鎖置換 基の置換によってそれぞれアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基と結合して おり；R₀は水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、アリールアルキルまた はアリール基であり、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ独立 に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖 または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ 、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であ り；Rⁱは水素、CHO、COORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖の アルキル、アリールアルキルまたはアリール基、あるいは下記構造を有する糖類 部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびWはそ れぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞ れ独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは置換 または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキ シアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルま たはアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱⁱ、置換または非置 換、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、C OOR^iv、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールア ルキルまたはアリール基であり；RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立にH、あるいは置 換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはアリー ル基である｝ を有する複合糖質。 2.少なくとも１つの炭水化物ドメインが、細胞表面エピトープのオリゴ糖構 造を有する請求項１記載の複合糖質。 3.エピトープがLe^a、Le^b、Le^x、またはLe^yである請求項２記載の複合糖質。 4.エピトープがMBr1、末端切断型MBr1五糖類、または末端切断型MBr1四糖類 である請求項２記載の複合糖質。 5.アミノアシル残基が天然のアミノ酸に由来する請求項１記載の複合糖質。 6.少なくとも１つのアミノアシル残基が式：-NH-Ar-CO-を有する請求項１記 載の複合糖質。 7.Ar部分がp-フェニレンである請求項６記載の複合糖質。 8.少なくとも１つのアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基が構造： ｛式中、M、NおよびPは独立に0、1または2であり；XはNHまたはOであり；YはO H、NHまたはCOOHであり；R'およびR''は独立に水素、直鎖または分枝鎖のアルキ ルまたはアリールである｝を有する請求項１記載の複合糖質。 9.炭水化物ドメインと結合したアミノアシル残基がSerまたはThrである請求 項１記載の複合糖質。 10.R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄および R₁₅の１以上が1RS,2RS,3-トリヒドロキシ-プロピルである請求項１記載の複合糖 質。 11.請求項１の化合物および医薬上好適な担体を含んでなる、癌治療用の医 薬組成物。 12.治療上有効量の請求項１の化合物および医薬上好適な担体を患者に投与 することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法。 13.癌が固形腫瘍である請求項12記載の方法。 14.癌が上皮癌である請求項12記載の方法。 15.構造： ｛式中、R1、R3、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂ 、NHCORⁱ、F、N₃、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアル キル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ア シロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり；RⁱはH、CHO、CO ORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアル キルまたはアリール基であり；R₂は水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル 、アリールアルキルまたはアリール基であり；R₈は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHR^{i i} 、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキ ルまたはアリール基であり；Rⁱⁱは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアル キル、アリールアルキルまたはアリール基であり；かつ、Xはハロゲン化物、ト リハロアセトアミデートアルキルもしくはアリールスルフイドまたはジアルキル 亜リン酸塩である｝を有する三糖類。 16.Xがトリエチル亜リン酸塩である請求項15の三糖類。 17.R₇が1RS,2RS,3-トリヒドロキシプロピルまたは1RS,2RS,3-トリアセトキ シプロピルである請求項15記載の三糖類。 18.R₈がCOOHである請求項15の三糖類。 19.構造： ｛式中、R₁、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₇はそれぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂ 、NHCORⁱ、F、N₃、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアル キル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ア シロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり；RⁱはH、CHO、CO ORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアル キルまたはアリール基であり；R₂は水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル 、アリールアルキルまたはアリール基であり；R₈は水素、COOH、C0ORⁱⁱ、CONHR^{i i} 、置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱ は置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアル キル、アリールアルキルまたはアリール基であり；R₀は塩基に不安定なN保護基 であり；かつ、R^'は水素または低級アルキル基である｝を有する三糖類アミノ酸 。 20.R₀がFMOCである請求項19記載の三糖類アミノ酸。 21.ヒト患者において抗体を誘導する方法であって、該抗体がヒト腫瘍細胞 と特異的に結合することができ、該抗体を誘導するために効果的な請求項１の複 合糖質の一定量を患者に投与することを含んでなる方法。 22.複合糖質が好適な担体タンパク質と結合している、請求項21記載の方法 。 23.担体タンパク質が、ウシ血清アルブミン、ポリリジンまたはKLHである請 求項22記載の方.法。 24.さらに免疫アジュバントをともに投与することを含んでなる請求項21記 載の方法。 25.アジュバントが細菌またはリポソームである請求項24記載の方法。 26.アジュバントがサルモネラ・ミネソタ細胞、バチルスCalmette-Guerinま たはQS21である請求項25記載の方法。 27.誘導される抗体が、(2,6)-シアリルT抗原、Le^a、Le^b、Le^x、Le^y、GM1、S SEA-3およびMBr1抗体からなる群より選択される請求項21記載の方法。 28.患者が臨床上緩解にあるか、または患者が外科手術によって処置された 場合に、限定された切除できない疾患を有している請求項21記載の方法。 29.抗体を誘導するのに有効な量の請求項１の複合糖質を用いて患者にワク チン接種することを含んでなる、患者における上皮癌の再発を予防する方法。 30.複合糖質が好適な担体タンパク質と結合している請求項29記載の方法。 31.担体タンパク質がウシ血清アルブミン、ポリリジンまたはKLHである請求 項30記載の方法。 32.さらに免疫アジュバントをともに投与することを含んでなる請求項29記 載の方法。 33.アジュバントが細菌またはリポソームである請求項32記載の方法。 34.アジュバントがサルモネラ・ミネソタ細胞、バチルスCalmette-Guerinま たはQS21である請求項32記載の方法。 35.誘導される抗体が、(2,6)-シアリルT抗原、Le^a、Le^b、Le_x、Le^y、GM1、S SEA-3およびMBr1抗体からなる群より選択される請求項29記載の方法。 36.構造： ｛式中、XはOまたはNRであり；RはH、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアシ ルであり；A、BおよびCは独立に、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアシル、- CO-(CH₂)_p-OHまたはアリールであり、あるいは下記構造を有し、 式中、YはOまたはNRであり；DおよびEは構造：-(CH₂)_p-OHまたは-CO-(CH₂)_p-O Hを有し；NおよびPは独立に、0ないし12の整数であり；DおよびE、ならびにA、B およびCのいずれかが-CO-(CH₂)_p-OHである場合には、A、BおよびCは独立に、下 記構造を有する炭水化物ドメインによって置換されており、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびZは独立に、0、1、2または3で あり；炭水化物ドメインは末端OH置換基の置換によってそれぞれのヒドロキシア シル残基と結合し；R₀は水素、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、アリール アルキルまたはアリール基であり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉は それぞれ独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または 非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアル キル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまたはア リール基であり；Rⁱは水素、CHO、COORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖ま たは分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはアリール基、あるいは下記構造 を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそ れぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞ れ独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは置換 または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキ シアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルま たはアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、置換または非置換 、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COO R^iv、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアル キルまたはアリール基であり；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立にH、あるい は置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはア リール基である｝を有する複合糖質。 37.少なくとも１つの炭水化物ドメインが細胞表面エピトープのオリゴ糖構 造を有する請求項36記載の複合糖質。 38.エピトープがLe^a、Le^b、Le^xまたはLe^yである請求項37記載の複合糖質。 39.エピトープがMBr1、末端切断型MBr1五糖類または末端切断型MBr1四糖類 である請求項37記載の複合糖質。 40.R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄および R₁₅の１つ以上が1RS,2RS,3-トリヒドロキシ-プロピルである請求項 36記載の複合糖質。 41.請求項33記載の化合物および医薬上好適な担体を含んでなる、癌治療用 の医薬組成物。 42.治療上有効量の請求項33の化合物および医薬上好適な担体を患者に投与 することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法。 43.癌が固形腫瘍である請求項42記載の方法。 44.癌が上皮癌である請求項42記載の方法。 45.コア構造および炭水化物ドメインを含んでなる複合糖質であって、その コア構造が、 ｛式中、Mは約2ないし約5,000の整数であり；Nは1、2、3または4であり；Aお よびBは好適な重合体の末端基であり；コア構造は、下記構造を有する炭水化物 ドメインによって置換されており、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびZは独立に、0、1、2または3で あり；炭水化物ドメインはOH置換基の置換によってコア構造と結合し；R₀は水素 、直鎖または分枝鎖のアルキル、アシル、アリールアルキルまたはアリール基で あり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ独立に、水素、OH、 ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、置換または非置換、直鎖または分枝鎖の アルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ ）アシロキシアルキル、アリールアルキルまたはアリール基であり；Rⁱは水素、 CHO、COORⁱⁱ、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリ ールアルキルまたはアリール基、あるいは下記構造を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそ れぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞ れ独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは置換 または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロキ シアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキルま たはアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、置換または非置換 、直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアリール基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、CO0 R^iv、あるいは置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアル キルまたはアリール基であり；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立にH、あるい は置換または非置換、直鎖または分枝鎖のアルキル、アリールアルキルまたはア リール基である｝である複合糖質。 46.構造： ｛式中、m、nおよびpは約8ないし約20の整数であり；qは約1ないし約8の整数 であり；R_V、R_W、R_XおよびR_Yは独立に、水素、所望により置換されていてもよい 直鎖または分枝鎖の低級アルキル、あるいは所望により置換されていてもよいフ ェニルであり；R_A、R_BおよびR_Cは独立に、下記構造を有する炭水化物ドメインで あり、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびZは独立に、0、1、2または3で あり；R₀は水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アシル、アリールアルキル またはアリール基であり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ 独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロ キシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキル またはアリール基であり；Rⁱは水素、CHO、COORⁱⁱ、あるいは所望により置換さ れていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリ ール基、あるいは下記構造を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそ れぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞ れ独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは所望 により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまた はトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、ア リールアルキルまたはアリール基であり；R₁₆は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、 所望により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリー ル基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^iv、あるいは所望により置換されていても よい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリール基であ り；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立に、水素、あるいは所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリー ル基である｝を有する複合糖質。 47.R_V、R_W、R_XおよびR_Yがメチルである請求項46記載の複合糖質。 48.炭化水素ドメインが独立に単糖類または二糖類である請求項46記載の複 合糖質。 49.yおよびzが0であり；xが1であり；かつ、R₃がNHAcである請求項48記載の 複合糖質。 50.hが0であり；gおよびiが1であり；R₇がOHであり；R₀が水素であり；か つ、R₈がヒドロキシメチルである請求項46記載の複合糖質。 51.m、nおよびpは14であり；かつ、qは3である請求項46記載の複合糖質。 52.それぞれのアミノアシル残基がその中にL-配置を有する請求項46記載の 複合糖質。 53.炭水化物ドメインが独立に である請求項46記載の複合糖質。 54.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項46記載の複合糖質。 55.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項46記載の複合糖質。 56.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項46記載の複合糖質。 57.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項46記載の複合糖質。 58.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項46記載の複合糖質。 59.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項46記載の複合糖質。 60.構造： ｛式中、担体はタンパク質であり；架橋剤は担体およびチオールの表面アミン と結合することができる架橋剤に由来する部分であり；m、nおよびpは約8ないし 約20の整数であり；jおよびqは独立に、約1ないし約8の整数であり；R_V、R_W、R_X およびR_Yは独立に、水素、所望により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の 低級アルキル、あるいは所望により置換されていてもよいフェニルであり；R_A、 R_BおよびR_Cは独立に、下記構造を有する炭水化物ドメインであり、 式中、a、b、c、d、e、f、g、h、i、x、yおよびzは独立に、0、1、2または3で あり；R₀は水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アシル、アリールアルキル またはアリール基であり；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈およびR₉はそれぞれ 独立に、水素、OH、ORⁱ、NH₂、NHCORⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱ、所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまたはトリ）ヒドロ キシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、アリールアルキル またはアリール基であり；Rⁱは水素、CHO、C0ORⁱⁱ、あるいは所望により置換さ れていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリ ール基、あるいは下記構造を有する糖類部分であり、 式中、YおよびZは独立にNHまたはOであり；k、l、r、s、t、u、vおよびwはそ れぞれ独立に0、1または2であり；R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄およびR₁₅はそれぞ れ独立に水素、OH、ORⁱⁱⁱ、NH₂、NHCORⁱⁱⁱ、F、CH₂OH、CH₂ORⁱⁱⁱ、あるいは所望 により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、（モノ、ジまた はトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ、ジまたはトリ）アシロキシアルキル、ア リールアルキルまたはアリール基であり；R¹⁶は水素、COOH、COORⁱⁱ、CONHRⁱⁱ、 所望により置換されていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリー ル基であり；Rⁱⁱⁱは水素、CHO、COOR^iv、あるいは所望により置換されていても よい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリール基であ り；かつ、RⁱⁱおよびR^ivはそれぞれ独立に、水素、あるいは所望により置換され ていてもよい直鎖または分枝鎖の低級アルキル、アリールアルキルまたはアリー ル基である｝を有する複合糖質。 61.構造： を有する請求項60記載の複合糖質。 62.R_V、R_W、R_XおよびR_Yがメチルである請求項60記載の複合糖質。 63.炭水化物ドメインが単糖類または二糖類である請求項60記載の複合糖質 。 64.yおよびzが0であり；xが1であり；かつ、R₃がNHAcである請求項63記載の 複合糖質。 65.hが0であり；gおよびiが1であり；R₇がOHであり；R₀が水素であり；m、n およびpが14であり；qが3であり；かつ、R₈がヒドロキシメチルである請求項60 記載の複合糖質。 66.タンパク質がBSAまたはKLHである請求項60記載の複合糖質。 67.それぞれのアミノアシル残基がその中にL-配置を有する請求項60記載の 複合糖質。 68.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 69.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 70.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 71.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 72.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 73.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 74.炭水化物ドメインが独立に、 である請求項60記載の複合糖質。 75.請求項46または60記載の複合糖質および医薬上好適な担体を含んでなる 、癌治療用の医薬組成物。 76.治療上有効量の請求項46または60記載の複合糖質および医薬上好適な担 体を患者に投与することを含んでなる、癌患者において癌を治療する方法。 77.癌が固形癌である請求項76記載の方法。 78.癌が上皮癌である請求項76記載の方法。 79.ヒト患者において抗体を誘導する方法であって、その抗体はヒト腫瘍細 胞と特異的に結合でき、抗体を誘導するのに効果的な請求項46または60記載の複 合糖質の一定量を患者に投与することを含んでなる方法。 80.担体タンパク質がウシ血清アルブミン、ポリリジンまたはKLHである請求 項79記載の方法。 81.さらに免疫アジュバントをともに投与することを含んでなる請求項79記 載の方法。 82.アジュバントが細菌またはリポソームである請求項81記載の方法。 83.アジュバントがサルモネラ・ミネソタ細胞、バチルスCalmette-Guerinま たはQS21である請求項81記載の方法。 84.誘導される抗体が、Tn、ST_N、(2,3)ST、グリコホリン、3-Le^y、6-Le^y、T (TF)およびT抗体からなる群より選択される請求項79記載の方法。 85.患者が臨床上緩解にあるか、または患者が外科手術により処置され、限 定された切除できない疾病を有している請求項79記載の方法。 86.抗体を誘導するのに効果的な量で請求項46または60記載の複合糖質を用 いて患者にワクチン接種することを含んでなる、患者における上皮癌の再発を予 防する方法。 87.担体タンパク質がウシ血清アルブミン、ポリリジンまたはKLHである請求 項86記載の方法。 88.さらに免疫アジュバントをともに投与することを含んでなる請求項86記 載の方法。 89.アジュバントが細菌またはリポソームである請求項88記載の方法。 90.アジュバントがサルモネラ・ミネソタ細胞、バチルスCalmette-Guerinま たはQS21である請求項88記載の方法。 91.誘導される抗体が、Tn、ST_N、(2,3)ST、グリコホリン、3-Le^y、6-Le^y、T (TF)およびT抗体からなる群より選択される請求項86記載の方法。 92.保護されたO-結合Le^y複合糖質を形成するのに好適な条件下で、構造： ｛式中、Rは水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換 されていてもよいアリールであり；R₁はt-ブチルオキシカルボニル、フルオレニ ルメチレンオキシカルボニル、直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアシル、 所望により置換されていてもよいベンジルまたはアリールであり；R₂は直鎖また は分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換されていてもよいベンジルまた はアリールであり；かつ、R₄は水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはア シル、所望により置換されていてもよいアリールまたはベンジルであり、あるい は所望により置換されていてもよいアリールスルホニルである｝の製造方法であ って、該方法は構造： （式中、R₃は直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリールである）を有す る硫化四糖類と、構造： を有するO-結合グリコシルアミノアシル成分を結合させることを含んでなる、 保護されたO-結合Le^y複合糖質を製造する方法。 93.硫化四糖類が、(a)ハロスルホアミノ化四糖類を形成するのに好適な条件 下で、構造： を有する四糖類グリカールをハロスルホアミノ化し、 次いで(b)メルカプタンおよび硫化四糖類を形成するのに好適な塩基で、ハロ ス ルホアミノ化物を処理することによって製造される請求項92記載の方法。 94.メルカプタンが直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリールであり ；かつ、塩基が水素化ナトリウム、水素化リチウム、水素化カリウム、リチウム ジエチルアミド、リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムアミド、またはリ チウムヘキサメチルジシラジドである請求項92記載の方法。 95.請求項92に従って製造されたO-結合複合糖質。 96.構造： ｛式中、R₄は直鎖または分枝鎖の低級アシルであり；かつ、Rは水素、あるい は直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアリールである｝を有するO-結合糖ペ プチド。 97.R₄がアセチルである請求項96記載のO-結合糖ペプチド。 98.保護されたO-結合Le^y複合糖質を形成するのに好適な条件下で、構造： ｛式中、Rは水素、直鎖または分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換 されていてもよいアリールであり；R₁はt-ブチルオキシカルボニル、フルオレニ ルメチレンオキシカルボニル、直鎖または分枝鎖の低級アルキルまたはアシル、 所望により置換されていてもよいベンジルまたはアリールであり；かつ、R₂は直 鎖または分枝鎖の低級アルキル、または所望により置換されていてもよいベンジ ルまたはアリールである｝の製造方法であって；その方法は、構造： を有するアジドイミノ化四糖類と、構造： を有するO-結合グリコシルアミノアシル成分を結合させることを含んでなる、 保護されたO-結合Le^y複合糖質を製造する方法。 99.アジゾイミノ化四糖類が、(a)アジドアルコールを形成するのに好適な条 件下で、構造： を有するアジドニトロ化四糖類を処理し、次いで(b)アジドイミノ化物を形成 するのに好適な条件下で、アジドアルコールをイミドアシル化剤と反応させるこ とにより製造される請求項98記載の方法。 100.アジドニトロ化四糖類が、(a)好適な条件下で、構造： を有する四糖類グリカールを、構造： を有する過アセチル化四糖類グリカールに変換し、次いで(b)アジドニトロ化 四糖類を形成するのに好適な条件下で、工程(a)で生じたグリカールをアジドニ トロ化することにより製造される請求項99記載の方法。 101.工程(b)が、アジ化ナトリウム、アジ化リチウム、アジ化カリウム、ア ジ化テトラメチルアンモニウムおよびアジ化テトラエチルアンモニウムからなる 群より選択されるアジ化塩の存在下で、ニトロ化セリウムアンモニウムを用いて 達成される請求項100記載の方法。 102.請求項98に従って製造されたO-結合複合糖質。