JP6401380B2 - 新規のグリカンコンジュゲート及びその使用 - Google Patents

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Description

本発明の背景
腫瘍関連炭水化物抗原（ＴＡＣＡｓ）は、がん細胞の表面上に発現し、腫瘍細胞の接着及び転移に関連する。１それ故に、ＴＡＣＡｓは、がんワクチン開発の潜在的な標的である。２しかしながら、ほとんどのＴＡＣＡｓは免疫原性が低く、キャリアタンパク質とのコンジュゲーション３、免疫学的アジュバント併用の投与４、非天然グリコシド結合の使用５、クラスター化抗原６、単分子の多価ワクチン７又はヘテロ−グリカン多価ワクチン８などの、炭水化物系ワクチンの免疫応答を増強するための多くのアプローチが開発されてきた。これらの戦略を用いて、標的グリカン構造に対する顕著な免疫応答を誘発することのできる少しの炭水化物系ワクチンが、がん治療のために設計され、臨床試験に入った。３、９それらの中で、アジュバントＱＳ−２１併用のテラトープ（Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ）及びＧＭＫの臨床試験は、病死率（ｔｉｍｅ−ｔｏ−ｄｉｓｅａｓｅ）と全生存率との間に統計的に有意差を出せなかった。恐らくこれらの２つのワクチンは、患者において強力なＴ細胞依存性免疫応答を誘発することができなかった。１０具体的には、テラトープ及びＧＭＫは、より高いレベルのＩｇＭを患者において誘導したが、強い免疫ＩｇＧ応答を誘導できなかった。このことは、炭水化物系ワクチン開発における主要な問題である。１１
Ｇｌｏｂｏ Ｈ（ＧＨ；Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮａｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）は、グロボ系列スフィンゴ糖脂質のメンバーである。それは最初に、ヒトテラトカルシノーマ細胞及び乳がんＭＣＦ−７細胞において１９８３年に発見され特性を明らかにされ１２、それに続いて、乳、前立腺、卵巣、膵臓、脳、子宮内膜、胃、結腸及び肺がんを含む多くのタイプのヒトがん細胞において過剰発現していることが見いだされた。１３Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ及びＤａｎｉｓｈｅｆｓｋｙによって調製された、ＫＬＨをキャリアとして、ＱＳ−２１をアジュバントとして用いるＧｌｏｂｏ Ｈワクチンは、転移性乳がん患者に対する第Ｉ相研究において肯定的な結果を示した。１４合成の向上に伴い１５、それは現在、末期乳がん患者について、台湾において第ＩＩＩ相臨床試験中かつＵＳＡ、韓国、香港及びインドにおいて第ＩＩ相臨床試験中であり、卵巣がん患者について台湾において第ＩＩ相臨床試験中である。しかしながら、これらの初期段階の臨床結果は、誘導されたＩｇＭ抗体が依然としてＩｇＧ抗体よりもはるかに高かったことを示した。１４、１６最近、我々のグループは、ＧＨ、そのフラグメントＧｂ５及びＳＳＥＡ４（これらは全て乳がん細胞及びがん幹細胞のみに見られる）に対する強力なＩｇＧ抗体応答のあるクラススイッチを誘導する、ジフテリアトキソイド交差反応性物質（ＣＲＭ）１９７（ＤＴ）をキャリアとして、糖脂質Ｃ３４をアジュバントとして用いる、より良好なワクチンを開発した。１３ｂ
以前の研究は、炭水化物抗原構造（ＭＣＡＳ）の改変が、より高いレベルの免疫応答を効果的に誘発できることを示した。１７例えば、Ｂ群髄膜炎菌の莢膜多糖の改変研究において、α−（２，８）−結合型ポリシアル酸（ＰＳＡ）のＮ−アセチル基をＮ−プロピノイル基で置き換えた。このような改変は、Ｎ−プロピノイルＰＳＡだけでなく、天然Ｎ−アセチルＰＳＡをも認識する、高い抗体応答を誘発した。１８類似のアプローチをＳＴｎ１９及びＧＭ３２０抗原に適用し、改変形態及び天然形態に対する高い抗体力価を生じた。この結果は、グリカン抗原上のＮ−フェニルアセチル、Ｎ３、Ｎ−フルオロアセチル又はＮ−ジフルオロアセチル改変が、免疫原性を向上させることができることを示した。１９ａ、ｃさらに、Ｓｃｈｕｌｔｚのグループは、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）内へのｐ−ニトロフェニルアラニンの取り込みが、免疫寛容を破壊し、ＴＮＦ−αに対してより多くの抗体応答を誘導することができることを報告した。２１グリカンを抗原として用いると、いくつかの進歩は達成されたが、ほとんどの場合は二糖類（ＳＴｎ）、三糖類（ＧＭ３）及びポリシアル酸（ＰＳＡ）のＮ−改変であり、いくつかはフッ素化ＭＵＣ１グリコペプチド抗原に基づく。１８ａ、１９ａ、ｄ、２０、２２長期記憶でＩｇＧ応答を誘導する炭水化物系ワクチンの調製のための一般戦略が欠如している。
本発明は、Ｇｌｏｂｏ Ｈの還元末端グルコース又は非還元末端フコースを、本明細書に開示されるある特定の基で改変することが、Ｇｌｏｂｏ Ｈ（ＧＨ）、Ｇｂ５及びＳＳＥＡ４を特異的に認識する強力なＩｇＧ抗体応答を誘発した、という予期せぬ発見に関する。そのような非天然グリカン部分を含む免疫原性組成物によって誘導された抗体が、ＧＨ発現腫瘍細胞（ＭＣＦ−７）を認識し、腫瘍細胞に対する補体依存性の細胞の細胞傷害を介在することが見いだされた。
したがって、本発明は、合成グリカンコンジュゲート、それを含む免疫原性組成物、及びそのワクチンに関する。本発明はまた、合成グリカンコンジュゲート及びその免疫原性組成物を用いて、がんのリスクを処置又は低減する方法に関する。
一つの態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物


又はその塩に関する。
（式中、
Ｘ１は−ＯＲ又は−ＳＲであり、ここでＲは、水素、酸素又は硫黄保護基、任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアシル、又は任意選択的に置換されたイミドイルであり；
Ｒ１及びＲ２は、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、及び−ＮＨＳＯ２ＲＢから独立して選択され；
ＲＡは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、及び任意選択的に置換されたアリールから独立して選択され；
ＲＢは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、及び任意選択的に置換されたアリールから独立して選択され；
但し、Ｒ１が−ＯＨの場合は、Ｒ２が−ＣＨ３でなく、Ｒ２が−ＣＨ３の場合は、Ｒ１が−ＯＨでない。）
別の態様において、本発明は、免疫原性組成物であって、（ａ）リンカー及びキャリアを備える少なくとも１つのグリカンを含むグリカンコンジュゲートであって、前記少なくとも１つのグリカンが前記リンカーを介して前記キャリアにコンジュゲートしている、グリカンコンジュゲート；及び（ｂ）任意選択的にアジュバント、を含み、前記リンカーを備える前記少なくとも１つのグリカンが、式（ＩＩ）の化学構造を有する、免疫原性組成物に関する。


（式中、
Ｒ１及びＲ２が、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、及び−ＮＨＳＯ２ＲＢから独立して選択され；
ＲＡが、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、及び任意選択的に置換されたアリールから独立して選択され；
ＲＢが、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、及び任意選択的に置換されたアリールから独立して選択され；
但し、Ｒ１が−ＯＨの場合は、Ｒ２が−ＣＨ３でなく、Ｒ２が−ＣＨ３の場合は、Ｒ１が−ＯＨでない。）
代わりに、リンカーを備える少なくとも１つのグリカンは、式（ＩＶ）の化学構造を有する。
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ＲＡ及びＲＢは式（ＩＩ）において上に定義されているとおりであり；但し、Ｒ１が−ＯＨの場合は、Ｒ２が−ＣＨ３でなく、Ｒ２が−ＣＨ３の場合は、Ｒ１が−ＯＨでない。）
本発明の一つの実施形態において、Ｒ１は、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｎ３、−ＮＯ２、又はアリールオキシである。
別の実施形態において、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＨ２ＮＯ２、−ＣＨ２ＯＨ、又はアルキニルである。
別の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｎ３、−ＮＯ２、

、又は

であり、Ｒ２は−ＣＨ３である。
別の実施形態において、Ｒ１は−ＯＨであり、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＨ２ＮＯ２、−ＣＨ２ＯＨ、又は−Ｃ≡ＣＨである。
用語「ｎ」は、１−１０の整数を表す。それ故に、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０であってよい。
別の実施形態において、リンカーはヘテロ−又はホモ−二官能性リンカーである。
別の実施形態において、リンカーは−Ｌ１Ｌ２−である。（式中、Ｌ１は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲＬ１ａ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲＬ１ａ−、ｔｒａｎｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、ｃｉｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＯＣ（ＲＬ１ｂ）２−、−Ｃ（ＲＬ１ｂ）２Ｏ−、−ＮＲＬ１ａＣ（ＲＬ１ｂ）２−、−Ｃ（ＲＬ１ｂ）２ＮＲＬ１ａ−、−ＳＣ（ＲＬ１ｂ）２−、−Ｃ（ＲＬ１ｂ）２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲＬ１ａ−、−ＮＲＬ１ａＳ（＝Ｏ）２−、又は任意選択的に置換されたＣ１−２０炭化水素鎖であり（任意選択的にここで炭化水素鎖の１又は複数の炭素単位が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲＬ１ａ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲＬ１ａ−、ｔｒａｎｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、ｃｉｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲＬ１ａ−、又は−ＮＲＬ１ａＳ（＝Ｏ）２−で置き換えられる）、ここでＲＬ１ａは、水素、任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル、又は窒素保護基であり、あるいはＲＬ１ａは、隣接する炭素原子と結合して任意選択的に置換された複素環を形成しており、またここで各ＲＬ１ｂは、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、及び任意選択的に置換されたヘテロアリールからなる群より独立して選択され、あるいはＲＬ１ｂは、隣接する炭素又は窒素又は酸素原子と結合して任意選択的に置換された炭素環又は複素環を形成し、あるいは２つのＲＬ１ｂ基は、結合して任意選択的に置換された炭素環又は任意選択的に置換された複素環を形成し；Ｌ２は、キャリアとＬ１を架橋することのできる架橋試薬に由来する部分である。）
別の実施形態において、リンカーは、少なくとも１つの硫黄原子、カルボキシレート基、アミド基、カルバメート基、カーボネート基、チオカルバメート基、チオカーボネート基、チオエーテル基、スクシンアミド基、ｎ−ヒドロキシスクシンアミド基、又はそれらの任意の組み合わせを含む。
別の実施形態において、キャリアは、タンパク質、脂質、脂肪分解タンパク質（ｌｉｐｏｌｉｚｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ウイルス、ペプチド、又はグリコペプチドのデンドリマーである。ある実施形態において、キャリアは、Ｔ細胞エピトープを含むペプチドである。
キャリアは、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ジフテリア毒素交差反応物質１９７（ＣＲＭ１９７）、ＴＴのフラグメントＣ、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、タンパク質Ｄ、外膜タンパク質（ＯＭＰ）及びニューモリシンからなる群より選択されるタンパク質であってよい。
別の実施形態において、キャリアタンパク質は、ＴＴ、ＤＴ及びＣＲＭ１９７からなる群より選択される。別の実施形態において、キャリアタンパク質はＣＲＭ１９７であり、グリカンコンジュゲートは式（ＩＩＩ）のものである。


（式中、
ｍが１−３８の整数であり；
但し、Ｒ１が−ＯＨの場合は、Ｒ２が−ＣＨ３でなく、Ｒ２が−ＣＨ３の場合は、Ｒ１が−ＯＨでない。）
用語「ｍ」は、１−３８の整数を表す。本発明の一つの実施形態において、ｍは、１−３０の整数、又は１−２０の整数である。例えば、ｍは、１、２、３、４、６、８、１０、１５、２０、３０、又は３８であってよい。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載のグリカンコンジュゲートのうち少なくとも２つを含む、グリカンコンジュゲート混合物に関する。ある実施形態において、グリカン混合物中のｗの平均値は、約１．０−約３８．０の範囲、又は約１．０−１０．０の範囲であってよく、あるいは約５．７、４．９、２．９、２．８、又は３．１であってよい。
免疫原性組成物は、任意選択的に、アジュバントを含んでよい。アジュバントは、樹状細胞上のＣＤ１ｄ分子に結合することのできる糖脂質であってよい。ある実施形態において、アジュバントは、Ｃ３４、Ｇｌｕｃｏ−Ｃ３４、７ＤＷ８−５、Ｃ１７、Ｃ２３、Ｃ３０、α−ガラクトセラミド、アルミニウム塩、スクアレン、ＭＦ５９、又はＱＳ−２１である。
免疫原性組成物は、免疫原性的に有効量の又は医薬的に有効量の上述のグリカンコンジュゲートを含む。
別の態様において、本発明は、被験体において、がんに対する免疫応答を誘発するのに使用するための免疫原性組成物に関する。がんは、脳がん、肺がん、乳がん、口腔がん、食道がん、胃がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、結腸がん、腎臓がん、骨がん、皮膚がん、子宮頸がん、卵巣がん、及び前立腺がんからなる群より選択してよい。代わりに、本発明は、がん患者を処置して、がん細胞の細胞傷害の誘導、がんに対する免疫応答の誘発、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３及びＳＳＥＡ−４からなる群より選択される１又は複数のがん細胞表面抗原に特異的に結合する抗体の発生及び／又はＧｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３及びＳＳＥＡ−４からなる群より選択される１又は複数のがん細胞表面抗原の中和をするための医薬品の製造における、上述の免疫原性組成物の使用に関する。
本発明の一つの実施形態において、抗体は主としてＩｇＧ抗体である。免疫原性組成物は、主にＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ及びＩｇＧ３の誘導における使用のためのものであってよい。
さらに別の態様において、本発明は、本明細書に記載の免疫原性組成物に対するモノクローナル抗体に関する。
別の態様において、本発明は、上述の免疫原性組成物及び医薬的に許容される添加剤を含むがんワクチンに関する。がんワクチンは、単回用量又は多回用量の、本発明のグリカンコンジュゲート、そのグリカンコンジュゲート混合物、又はその免疫原性組成物を含んでよい。がんワクチンは、がんのリスクを処置又は低減するために使用される。がんワクチンは、被験体又は医療従事者のための使用又は処方情報を記載するパッケージング情報を含んでよい。このような情報は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）などの規制当局によって必要とされる場合がある。がんワクチンはまた、任意選択的に、化合物又は組成物の投与のための装置、例えば、非経口投与のためのシリンジを含んでよい。
別の態様において、本発明は、被験体におけるがんのリスクを処置及び／又は低減するための方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効量の、上述の免疫原性組成物又はがんワクチンを投与することを含む方法に関する。
この処置は、腫瘍サイズの低減、悪性細胞の排除、転移の予防、再発の予防、播種性がんの低減又は死滅、生存の延長及び／又は腫瘍がん進行までの時間の延長をもたらす。
この処置は、上述の免疫原性組成物又はがんワクチンの投与の前、最中又は後に、被験体に追加の治療を施すことをさらに含んでよい。追加の治療は、化学療法的薬剤、又は放射線治療を使用してよい。
別の態様において、本発明は、がんに対してヒト患者などのほ乳類にワクチン接種する方法であって、薬理的に有効量の、本明細書に記載の免疫原性組成物又はがんワクチンをほ乳類に投与することを含む、方法に関する。上述の免疫原性組成物又はがんワクチンは、皮下投与してよい。
がんとしては、脳がん、肺がん、乳がん、口腔がん、食道がん、胃がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、結腸がん、腎臓がん、子宮頸がん、卵巣がん及び前立腺がんがあるがこれらに限定されない。
別の態様において、本発明は、上述のグリカンを合成する方法に関する。
別の態様において、本発明は、上述の免疫原性組成物又はがんワクチンを作製するための方法に関する。本発明の一つの実施形態において、上述の免疫原性組成物を調製する方法は、以下のステップを含む。
（ｉ）式（Ｘ）の化合物を提供するステップ
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ＲＡ及びＲＢが、式（ＩＩ）において上に定義されているとおりであり；但し、Ｒ１が−ＯＨの場合は、Ｒ２が−ＣＨ３でなく、Ｒ２が−ＣＨ３の場合は、Ｒ１が−ＯＨでない）；
（ｉｉ）式（Ｘ）の化合物をアミノ活性二官能性リンカーと反応させて、第一の反応生成物を産するステップ；及び
（ｉｉｉ）前記第一の反応生成物をキャリアタンパク質と反応させて、グリカンコンジュゲートを産するステップ；及び
（ｉｖ）任意選択的に、アジュバントを混合して、前記組成物を産するステップ。
本発明の一つの実施形態において、アミノ活性二官能性リンカーは、４−６の炭素を有するジカルボン酸である。
本発明のある特定の実施形態の詳細を本明細書に記載する。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、詳細な説明、図面、実施例、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
図１Ａ−１Ｃは、ＧＨ−誘導体ＤＴコンジュゲートにより誘発された、それぞれＧＨ、Ｇｂ５及びＳＳＥＡ４に対する、ＩｇＧ抗体を示す図表である。 図２は、ＧＨ−誘導体ＤＴコンジュゲート−誘導マウス抗体が、ＧＨ発現腫瘍細胞（ＭＣＦ−７）を認識することを示す。 図３は、ＧＨ誘導体により誘発された抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介在して、ＧＨ発現腫瘍細胞を排除することを示す。
定義
化学的定義
化学元素は、元素の周期表、ＣＡＳバージョン、Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed.,見返し、にしたがい識別され、特定の官能基は、そこに記載されているように一般に定義される。加えて、有機化学の一般原則及び特定の官能性部分及び反応性は、Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; 及びCarruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987、に記載されている。
本明細書に記載の化合物は、１又は複数の不斉中心を含むことができ、それ故に様々な異性型、例えば、鏡像異性体及び／又はジアステレオマーで存在することができる。例えば、本明細書に記載の化合物は、単一の鏡像異性体、ジアステレオマー又は幾何異性体の形であることができ、あるいは、ラセミ混合物及び１又は複数の立体異性体に富んだ混合物などの、立体異性体の混合物の形であることができる。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及びキラル塩の形成及び結晶化などの、当業者に公知の方法によって、混合物から単離することができる。あるいは、好ましい異性体を不斉合成によって調製することができる。例えば、Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); 及び Wilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)を参照されたい。本発明は加えて、他の異性体を実質的に含まない単一の異性体としての本明細書に記載の化合物、及び代わりに、様々な異性体の混合物としての本明細書に記載の化合物を包含する。
値の範囲が列挙される場合、その範囲内の各値及び部分範囲を包含することが意図される。例えば「Ｃ１−６」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１−６、Ｃ１−５、Ｃ１−４、Ｃ１−３、Ｃ１−２、Ｃ２−６、Ｃ２−５、Ｃ２−４、Ｃ２−３、Ｃ３−６、Ｃ３−５、Ｃ３−４、Ｃ４−６、Ｃ４−５、及びＣ５−６を包含することが意図される。
「アルキル」は、１−２０の炭素原子を有する、直鎖又は分岐の飽和炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ１−２０アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１−１０（「Ｃ１−１０アルキル」）、１−９（「Ｃ１−９アルキル」）、１−８（「Ｃ１−８アルキル」）、１−７（「Ｃ１−７アルキル」）、１−６（「Ｃ１−６アルキル」）、１−５（「Ｃ１−５アルキル」）、１−４（「Ｃ１−４アルキル」）、１−３（「Ｃ１−３アルキル」）、１−２（「Ｃ１−２アルキル」）の炭素原子を有する。アルキル基は、１の炭素原子を指してもよい（「Ｃ１アルキル」）。
いくつかの実施形態において、アルキル基は２−６の炭素原子を有する（「Ｃ２−６アルキル」）。Ｃ１−６アルキル基の例は、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソ−プロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（Ｃ５）、３−ペンタニル（Ｃ５）、アミル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ５）、ターシャリーアミル（Ｃ５）、ｎ−ヘキシル（Ｃ６）、ｎ−ヘプチル（Ｃ７）、ｎ−オクチル（Ｃ８）などである。特に指定のない限り、アルキル基の各場合は、独立して任意選択的に置換される、すなわち、非置換（「非置換のアルキル」）であるか又は１又は複数の置換基で置換される（「置換されたアルキル」）。ある実施形態において、アルキル基は非置換のＣ１−１０アルキルである（例えば、−ＣＨ３）。ある実施形態において、アルキル基は置換されたＣ１−１０アルキルである。
「アルケニル」は、２−２０の炭素原子、及び１又は複数の炭素−炭素二重結合を有し、三重結合を有しない、直鎖又は分岐炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ２−２０アルケニル」）。アルケニル基は、２−１０（「Ｃ２−１０アルケニル」）、２−９（「Ｃ２−９アルケニル」）、２−８（「Ｃ２−８アルケニル」）、２−７（「Ｃ２−７アルケニル」）、２−６（「Ｃ２−６アルケニル」）、２−５（「Ｃ２−５アルケニル」）、２−４（「Ｃ２−４アルケニル」）、２−３（「Ｃ２−３アルケニル」）、又は２（「Ｃ２アルケニル」）の炭素原子を有してよい。１又は複数の炭素−炭素二重結合は、内部（２−ブテニルなど）又は末端（１−ブテニルなど）にあることが可能である。Ｃ２−４アルケニル基の例は、エテニル（Ｃ２）、１−プロペニル（Ｃ３）、２−プロペニル（Ｃ３）、１−ブテニル（Ｃ４）、２−ブテニル（Ｃ４）、ブタジエニル（Ｃ４）などである。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、Ｃ２−４アルケニル、ペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、ヘキセニル（Ｃ６）、ヘプテニル（Ｃ７）、オクテニル（Ｃ８）、オクタトリエニル（Ｃ８）などがある。特に指定のない限り、アルケニル基の各場合は、独立して任意選択的に置換される、すなわち、非置換（「非置換のアルケニル」）であるか又は１又は複数の置換基で置換される（「置換されたアルケニル」）。例えば、アルケニル基は、非置換のＣ２−１０アルケニル、又は置換されたＣ２−１０アルケニルであってよい。
「アルキニル」は、２−２０の炭素原子、１又は複数の炭素−炭素三重結合、及び任意選択的に１又は複数の二重結合を有する直鎖又は分岐炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ２−２０アルキニル」）。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２−１０（「Ｃ２−１０アルキニル」）、２−９（「Ｃ２−９アルキニル」）、２−８（「Ｃ２−８アルキニル」）、２−７（「Ｃ２−７アルキニル」）、２−６（「Ｃ２−６アルキニル」）、２−５（「Ｃ２−５アルキニル」）、２−４（「Ｃ２−４アルキニル」）、２−３（「Ｃ２−３アルキニル」）、又は２（「Ｃ２アルキニル」）の炭素原子を有する。１又は複数の炭素−炭素三重結合は、内部（２−ブチニル）又は末端（１−ブチニル）にあることが可能である。Ｃ２−４アルキニル基の例としては、エチニル（Ｃ２）、１−プロピニル（Ｃ３）、２−プロピニル（Ｃ３）、１−ブチニル（Ｃ４）、２−ブチニル（Ｃ４）などがあるが、これらに限定されない。Ｃ２−６アルケニル基の例としては、上述のＣ２−４アルキニル基、ペンチニル（Ｃ５）、ヘキシニル（Ｃ６）、ヘプチニル（Ｃ７）、オクチニル（Ｃ８）などがある。特に指定のない限り、アルキニル基の各場合は、独立して任意選択的に置換される、すなわち、非置換（「非置換のアルキニル」）であるか又は１又は複数の置換基で置換される（「置換されたアルキニル」）。例えば、アルキニル基は、非置換のＣ２−１０アルキニル、又は置換されたＣ２−１０アルキニルであってよい。
「ヘテロシクリル」又は「複素環式」は、環炭素原子及び１−４の環ヘテロ原子を有する３−１０員非芳香環系のラジカルを指し、ここで各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「３−１０員ヘテロシクリル」）。ある実施形態において、ヘテロ原子は、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される。１又は複数の窒素原子を含むヘテロシクリル基において、結合の点は、原子価が許すように、炭素又は窒素原子が可能である。ヘテロシクリル基は、単環系（「単環式ヘテロシクリル」）か、又は二環系（「二環式ヘテロシクリル」）などの縮合、架橋若しくはスピロ環系が可能であり、飽和又は部分的に不飽和が可能である。ヘテロシクリル二環系は、１つ又は両方の環に、１又は複数のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロシクリル」はまた、複素環が１又は複数のカルボシクリル基と縮合しており、結合の点がカルボシクリル又は複素環にある環系、又は複素環が１又は複数のアリール又はヘテロアリール基と縮合しており、結合の点が複素環にある環系を含み、そのような場合において、環員の数は、複素環系における環員の数を指定し続ける。特に指定のない限り、ヘテロシクリルの各場合は、独立して任意選択的に置換される、すなわち、非置換（「非置換のヘテロシクリル」）であるか又は１又は複数の置換基で置換される（「置換されたヘテロシクリル」）。例えば、ヘテロシクリル基は、非置換の３−１０員ヘテロシクリル、又は置換された３−１０員ヘテロシクリルであってよい。
「アリール」は、芳香環系に６−１４の環炭素原子を有しヘテロ原子を有しない、単環式又は多環式（例えば、二環式又は三環式）４ｎ＋２芳香環系（例えば、環状アレイに共有される６、１０、又は１４のπ電子を有する）のラジカルを指す（「Ｃ６−１４アリール」）。いくつかの実施形態において、アリール基は、６の環炭素原子（「Ｃ６アリール」；例えば、フェニル）、１０の環炭素原子（「Ｃ１０アリール」；例えば、１−ナフチル及び２−ナフチルなどのナフチル）、又は１４の環炭素原子（「Ｃ１４アリール」；例えば、アントラシル）を有する。「アリール」はまた、アリール環が１又は複数のカルボシクリル又はヘテロシクリル基と縮合しており、結合の点又はラジカルがアリール環にある環系を含み、そのような場合において、炭素原子の数は、アリール環系における炭素原子の数を指定し続ける。特に指定のない限り、アリール基の各場合は、独立して任意選択的に置換される、すなわち、非置換（「非置換のアリール」）であるか又は１又は複数の置換基で置換される（「置換されたアリール」）。例えば、アリール基は、非置換のＣ６−１４アリール、又は置換されたＣ６−１４アリールであってよい。
本明細書で定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリール基は、二価の架橋基である場合、さらに接頭辞−エン（−ｅｎｅ）を使用して、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、カルボシクリレン、ヘテロシクリレン、アリーレン、及びヘテロアリーレンと呼ばれる。
用語「アルコキシ」又は「アルキルオキシ」は、−Ｏ−アルキルラジカルを指し、ここでアルキルは任意選択的に置換されたアルキルである。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、及びｔｅｒｔ−ブトキシがあるがこれらに限定されない。
用語「アリールオキシ」は、−Ｏ−アリールを指し、ここでアリールは任意選択的に置換されたアリールである。
本明細書で使用される用語「任意選択的に置換された」は、置換又は非置換の部分を指す。
本明細書で定義される、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリール基は、任意選択的に置換される（例えば、「置換された」又は「非置換の」アルキル、「置換された」又は「非置換の」アルケニル、「置換された」又は「非置換の」アルキニル、「置換された」又は「非置換の」カルボシクリル、「置換された」又は「非置換の」ヘテロシクリル、「置換された」又は「非置換の」アリール又は「置換された」又は「非置換の」ヘテロアリール基）。一般に、用語「置換された」は、用語「任意選択的に」が前に付くか否かにかかわらず、基（例えば、炭素又は窒素原子）に存在する少なくとも１つの水素が、許容される置換基で、例えば、置換により、安定な化合物、例えば、転位、環化、脱離、又は他の反応などによる変換を自然発生的に受けない化合物を生じる置換基で、置き換えられることを意味する。特に指示のない限り、「置換された」基は、基の１又は複数の置換可能な位置に置換基を有し、任意の所与の構造の１以上の位置が置換されている場合、置換基は各位置で同一であるか又は異なる。用語「置換された」は、有機化合物の全ての許容される置換基、安定な化合物の形成を生じる本明細書に記載の任意の置換基、での置換を含むことが意図される。本発明は、安定な化合物に到達するために、任意の及び全てのこのような組み合わせを意図する。本発明の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たし、安定な部分の形成を生じる、本明細書に記載の任意の適切な置換基及び／又は水素置換基を有してよい。
「ハロ」又は「ハロゲン」は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）、又はヨウ素（ヨード、−Ｉ）を指す。
「アシル」は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＨＯ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂｂＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、及び−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲａａからなる群より選択される部分を指し、ここでＲａａ及びＲｂｂは本明細書で定義されるとおりである。
窒素原子は、原子価が許すように、置換又は非置換が可能であり、第１級、第２級、第３級、及び第４級窒素原子を含む。典型的な窒素原子の置換基としては、水素、−ＯＨ、−ＯＲａａ、−Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＣＯ２Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｃｃ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−ＳＯ２Ｒｃｃ、−ＳＯ２ＯＲｃｃ、−ＳＯＲａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｃｃ）２、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０ペルハロアルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ３−１０カルボシクリル、３−１４員ヘテロシクリル、Ｃ６−１４アリール、及び５−１４員ヘテロアリールがあるがこれらに限定されず、あるいは窒素原子に結合した２のＲｃｃ基が結合して、３−１４員ヘテロシクリル又は５−１４員ヘテロアリール環を形成し、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、０、１、２、３、４、又は５のＲｄｄ基で独立して置換され、またここで、Ｒａａ、Ｒｂｂ、Ｒｃｃ、及びＲｄｄは上に定義されるとおりである。
ある実施形態において、酸素原子に存在する置換基は酸素保護基である（ヒドロキシル保護基とも呼ばれる）。酸素保護基としては、−Ｒａａ、−Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＣＯ２Ｒａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｒａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）ＯＲａａ、−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａａ、−ＳＯ２Ｒａａ、−Ｓｉ（Ｒａａ）３、−Ｐ（Ｒｃｃ）２、−Ｐ（Ｒｃｃ）３、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｒａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒａａ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲｃｃ）２、−Ｐ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲｂｂ）２があるがこれらに限定されず、ここで、Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは本明細書で定義されるとおりである。酸素保護基は本技術分野において周知であり、Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, 1999（これは参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものを含む。
典型的な酸素保護基としては、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ'−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４'−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４′，４″−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４′，４″−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４′，４″−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４′，４″−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１′−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、メチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、エチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、イソブチルカーボネート、ビニルカーボネート、アリルカーボネート、ｔ−ブチルカーボネート（ＢＯＣ）、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、ベンジルカーボネート、ｐ−メトキシベンジルカーボネート、３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、ｏ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、Ｓ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチル（ｎａｐｔｈｔｈｙｌ）カーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート（ｍｏｎｏｓｕｃｃｉｎｏａｔｅ）、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシアシル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェナート、サルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、及びトシレート（Ｔｓ）があるがこれらに限定されない。
他の定義
単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されていない限り、複数形の言及を含む。用語「ａ」（又は「ａｎ」）、「１又は複数の」及び「少なくとも１つの」は、本明細書において交換可能に使用することができる。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は交換可能である。
本発明の実施は、特に指示のない限り、本技術分野の範囲内の分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技術を用いる。このような技術は、文献に完全に説明されている。例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989); DNA Cloning, Volumes I and II (D. N. Glover ed., 1985); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al. eds.), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Antibodies: A Laboratory Manual, by Harlow and Lane s (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988);及びHandbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986)を参照されたい。
本明細書において使用される用語「グリカン」は、多糖、又はオリゴ糖を指す。グリカンはまた、本明細書において、糖タンパク質、糖脂質、グリコペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖又はプロテオグリカンなどの複合糖質の炭水化物部分を指すために使用される。グリカンは、通常、単糖間のＯ−グリコシド結合のみからなる。例えば、セルロースはβ−１，４−結合型Ｄ−グルコースで構成されるグリカン（又はより具体的にはグルカン）であり、キチンはβ−１，４−結合型Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンで構成されるグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモ又はヘテロポリマーであることが可能であり、直鎖又は分岐が可能である。グリカンは、糖タンパク質及びプロテオグリカンでのように、タンパク質に結合していることを見ることができる。それらは、一般に、細胞の外表面に見られる。Ｏ−及びＮ−結合型グリカンは、真核生物において非常に一般的であるが、原核生物においても、あまり一般的ではないが、見られ得る。Ｎ−結合型グリカンは、シークオンのアスパラギンのＲ−基窒素（Ｎ）に結合していることが見られる。シークオンは、Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ又はＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列であり、ここでＸはプロリン以外の任意のアミノ酸である。
用語「抗原」は、免疫応答を誘発することのできる任意の物質として定義される。
用語「免疫原性」は、免疫応答を刺激する免疫原、抗原、又はワクチンの能力を指す。
用語「ＣＤ１ｄ」は、様々なヒト抗原提示細胞の表面上に発現された糖タンパク質のＣＤ１（分化のクラスター１）ファミリーのメンバーを指す。ＣＤ１ｄ提示脂質抗原は、ナチュラルキラーＴ細胞を活性化する。ＣＤ１ｄは、糖脂質抗原が結合する深い抗原結合溝を有する。樹状細胞上に発現されたＣＤ１ｄ分子は、Ｃ３４などのα−ＧａｌＣｅｒアナログを含む糖脂質を結合及び提示することができる。
用語「エピトープ」は、抗体の抗原結合部位又はＴ細胞受容体に接触する抗原分子の部分として定義される。
用語「ワクチン」は、疾患を引き起こす（殺された又は弱められた）生物全体又はそのような生物の成分（例えばタンパク質、ペプチド、又は多糖など）からなる抗原を含有する調製物を指し、その生物が引き起こす疾患に対する免疫性を与えるために使用される。ワクチン調製物は、天然のもの、合成のもの又は組換えＤＮＡ技術によって得られたものが可能である。
用語「抗原特異的」は、特定の抗原、又は抗原のフラグメントの供給が、特異的細胞増殖を生じるような、細胞集団の特性を指す。
用語「特異的に結合する」は、結合するペア（例えば、抗体及び抗原）の間の相互作用を指す。様々な場合において、「特異的に結合する」は、約１０−６モル／リットル、約１０−７モル／リットル、又は約１０−８モル／リットル以下の親和定数によって具体化することができる。
用語「フローサイトメトリー」又は「ＦＡＣＳ」は、流体の流れに懸濁した粒子又は細胞の物理的及び化学的特性を、光学的及び電子的検出装置を介して調べるための技術を意味する。
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似又は等価な任意の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料をここで説明する。本明細書中で具体的に言及される全ての刊行物及び特許は、本発明に関連して使用され得る刊行物に報告される化学物質、細胞株、ベクター、動物、器具、統計的分析及び方法論を記載及び開示すること含む全ての目的のために、参照により組み込まれる。本明細書で引用される全ての参考文献は、当業者のレベルを示すものとしてみなされるものである。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明に基づいてそのような開示に先行する資格がないことを認めるものとして解釈されるものではない。
発明の詳細な説明
本発明は、キャリアタンパク質ジフテリアトキソイド交差反応性物質（ＣＲＭ１９７）とコンジュゲートされ、アジュバントとしての糖脂質Ｃ３４と組み合わされた改変Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体抗原が、Ｇｌｏｂｏ Ｈ（ＧＨ）、Ｇｂ５及びＳＳＥＡ４を特異的に認識する強いＩｇＧ免疫応答を誘発する、という驚くべき発見に関する。いくつかの実施形態において、Ｇｌｏｂｏ Ｈの改変は、Ｇｌｏｂｏ Ｈの還元末端グルコースのＣ−６位のフルオロ、アジド又はＯ−フェニル基を含む。いくつかの実施形態において、Ｇｌｏｂｏ Ｈの改変は、非還元末端フコースのＣ−６位のアジド基を含む。これらのワクチンにより誘導された抗体は、ＧＨ発現腫瘍細胞（ＭＣＦ−７）を認識し、腫瘍細胞に対する補体依存性の細胞の細胞傷害を介在することが示された。本発明は、がんワクチン開発に新規のアプローチを提供する。
それぞれが還元及び／又は非還元末端に改変を有する、Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体が本明細書に記載される。このようなＧｌｏｂｏ Ｈ誘導体が、天然Ｇｌｏｂｏ Ｈと比較してより強い免疫応答（例えば、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、Ｇｂ５、及びＳＳＥＡ４に対するＩｇＧ抗体の誘導）を誘発することができることが、予期せず発見された。
化合物
本発明は、改変された炭水化物抗原（Ｇｌｏｂｏ Ｈ）を有する新規の化合物、及びそれを含むグリカンコンジュゲート、及びその免疫原性組成物及びワクチンを特徴とする。
一つの態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物：

又はその塩に関する。
（式中、
Ｘ１は−ＯＲ又は−ＳＲであり、ここでＲは水素、酸素又は硫黄保護基、任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアシル、又は任意選択的に置換されたイミドイルであり；
Ｒ１及びＲ２は、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｎ（ＲＢ）２、−Ｎ（ＲＡ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−ＯＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２、及び−ＮＨＳＯ２ＲＢから独立して選択され；
ＲＡは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、及び任意選択的に置換されたアリールから独立して選択され；
ＲＢは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、及び任意選択的に置換されたアリールから独立して選択され；
但し、Ｒ１が−ＯＨの場合は、Ｒ２が−ＣＨ３でなく、Ｒ２が−ＣＨ３の場合は、Ｒ１が−ＯＨでない。）
本発明の一つの実施形態において、Ｘ１はアルファ配置にある。本発明の別の実施形態において、Ｘ１はベータ配置にある。
本発明の別の実施形態において、Ｘ１は、−ＯＲＡ、−ＯＨ、及び−Ｏ（保護基）からなる群より選択される。本発明の別の実施形態において、Ｘ１は−ＯＲＡであり、ここでＲＡは、非置換のＣ１−１０アルキル、非置換のアリール、非置換のアシル、又は非置換のイミドイルであるか、又はＲＡは、置換されたＣ１−１０アルキル、置換されたアリール、置換されたアシル、又は置換されたイミドイルである。
本発明の別の実施形態において、Ｘ１は−ＳＲＡである。本発明の別の実施形態において、Ｘ１は、−ＳＨ、及び−Ｓ（保護基）、及び−ＳＣＨ３からなる群より選択される。本発明の別の実施形態において、Ｘ１は−ＳＲＡであり、ここでＲＡは、非置換のＣ１−１０アルキル、非置換のアリール、非置換のアシル、又は非置換のイミドイルであるか、又はＲＡは、置換されたＣ１−１０アルキル、置換されたアリール、置換されたアシル、又は置換されたイミドイルである。
本発明の別の実施形態において、Ｘ１はＣ１−１０アルコキシ、Ｃ１−３アルコキシ、又はメトキシである。本発明の別の実施形態において、Ｘ１はアルファ−メトキシである。
本発明の別の実施形態において、Ｘ１は、アルファ−チオメチル、ベータ−チオメチル、アルファ−チオクレジル、ベータ−チオクレジル、アルファ−ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ、ベータ−ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ、及びアルファ−メトキシからなる群より選択される。
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は−Ｎ３又は−Ｎ（ＲＷ）２であり、ここで各ＲＷは独立して、水素又は窒素保護基である。例えば、Ｒ１は−ＮＨ２であってよい。
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は−ＮＨＲＷ又は−Ｎ（ＲＷ）２であり、ここでＲＷは窒素保護基である。ある実施形態において、Ｒ１は、−Ｎ３、−ＮＨ（Ｃｂｚ）、−ＮＨ（Ｂｏｃ）、−ＮＨ（Ｆｍｏｃ）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＣｌ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、及び−Ｎ（Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）２からなる群より選択される。
本発明の別の実施形態において、Ｒ２は−Ｎ３又は−Ｎ（ＲＷ）２であり、ここで各ＲＷは独立して、水素又は窒素保護基である。本発明の別の実施形態において、Ｒ２は−ＮＨ２、−ＮＨＲＷ、又は−Ｎ（ＲＷ）２であり、ここでＲＷは窒素保護基である。本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、−Ｎ３、−ＮＨ（Ｃｂｚ）、−ＮＨ（Ｂｏｃ）、−ＮＨ（Ｆｍｏｃ）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＣｌ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、及び−Ｎ（Ｃ（Ｏ）ＣＨ３）２からなる群より選択される。
本発明の別の実施形態において、Ｒ１及びＲ２は同一である。
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は−ＯＨである。本発明の別の実施形態において、Ｒ１は−ＯＨであり、Ｒ２は、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｎ３、ＣＨ２ＮＯ２、−ＣＨ２ＯＨ、又は−Ｃ≡ＣＨである。
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は−Ｆであり、かつＲ２は−ＣＨ３である、又はＲ１は−Ｎ３であり、かつＲ２は−ＣＨ３である、又はＲ１は−ＮＯ２であり、かつＲ２は−ＣＨ３である。
本発明の別の実施形態において、Ｒ１は

であり、かつＲ２は−ＣＨ３である、
又はＲ１は

であり、かつＲ２は−ＣＨ３である。
式（Ｉ）の典型的な化合物としては、以下のものがあるが、これらに限定されない。
Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体は、本技術分野において既知の又は本明細書に記載の手順を用いて合成することができる。ＵＳ２０１４００５１１２７も参照されたい。
免疫原性組成物
別の態様において、本発明は、免疫原性組成物であって、（ａ）リンカー及びキャリアを備える少なくとも１つのグリカン（すなわち、１又は複数のグリカン）を含むグリカンコンジュゲートであって、前記少なくとも１つのグリカンが、前記リンカーを介して前記キャリアにコンジュゲートしている、グリカンコンジュゲート；及び（ｂ）任意選択的にアジュバントを含み、前記リンカーを備える前記少なくとも１つのグリカンが、式（ＩＩ）の化学構造を有する、免疫原性組成物に関する。


（式中、Ｒ１及びＲ２は上述のとおりである。）
本発明の一つの実施形態において、リンカーはヘテロ−又はホモ−二官能性リンカーである。
本発明の別の実施形態において、リンカーは、少なくとも１つの硫黄原子、カルボキシレート基、アミド基、カルバメート基、カーボネート基、チオカルバメート基、チオカーボネート基、チオエーテル基、スクシンアミド基、ｎ−ヒドロキシスクシンアミド基、又はそれらの任意の組み合わせを含む。
本発明の別の実施形態において、リンカーは−Ｌ１Ｌ２−である。（式中、Ｌ１は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲＬ１ａ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲＬ１ａ−、ｔｒａｎｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、ｃｉｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＯＣ（ＲＬ１ｂ）２−、−Ｃ（ＲＬ１ｂ）２Ｏ−、−ＮＲＬ１ａＣ（ＲＬ１ｂ）２−、−Ｃ（ＲＬ１ｂ）２ＮＲＬ１ａ−、−ＳＣ（ＲＬ１ｂ）２−、−Ｃ（ＲＬ１ｂ）２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲＬ１ａ−、−ＮＲＬ１ａＳ（＝Ｏ）２−、又は任意選択的に置換されたＣ１−２０炭化水素鎖であり（任意選択的にここで炭化水素鎖の１又は複数の炭素単位が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲＬ１ａ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲＬ１ａ−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＬ１ａＣ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲＬ１ａ−、ｔｒａｎｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、ｃｉｓ−ＣＲＬ１ｂ＝ＣＲＬ１ｂ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲＬ１ａ−、又は−ＮＲＬ１ａＳ（＝Ｏ）２−で置き換えられる）、ここでＲＬ１ａは、水素、任意選択的に置換されたＣ１−６アルキル、又は窒素保護基であり、あるいはＲＬ１ａは、隣接する炭素原子と結合して任意選択的に置換された複素環を形成しており、またここで各ＲＬ１ｂは、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、及び任意選択的に置換されたヘテロアリールからなる群より独立して選択され、あるいはＲＬ１ｂは、隣接する炭素又は窒素又は酸素原子と結合して任意選択的に置換された炭素環又は複素環を形成し、あるいは２つのＲＬ１ｂ基は、結合して任意選択的に置換された炭素環又は任意選択的に置換された複素環を形成し；Ｌ２は、キャリアとＬ１を架橋することのできる架橋試薬に由来する部分である。）
キャリアは、タンパク質、脂質、脂肪分解タンパク質、ウイルス、ペプチド、又はグリコペプチドのデンドリマーであってよい。ある実施形態において、キャリアはＴ細胞エピトープを含むペプチドである。
キャリアタンパク質の例は、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ジフテリア毒素交差反応物質１９７（ＣＲＭ１９７）、ＴＴのフラグメントＣ、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、タンパク質Ｄ、外膜タンパク質（ＯＭＰ）及びニューモリシン、ジフテリア毒素交差反応物質１９７（ＣＲＭ１９７）又は他のＤＴ点変異体、例えば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Uchida et al J. Biol. Chem. 218; 3838-3844, 1973）；ＣＲＭ９、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３及びＣＲＭ１０７、及び本技術分野において説明される他の突然変異、である。
本発明の別の実施形態において、グリカンコンジュゲートは、式（ＩＶ−ａ）又は（ＩＶ−ｂ）のものである。

（式中、ｍが１−４０の整数である。）
本発明の別の実施形態において、ｍが包括的に１−３８の整数であり、又は１−２０の整数である。本発明の別の実施形態において、ｍが１、２、４、６、８、１０、１５、２０、３０、又は３８である。
別の態様において、本発明は、少なくとも２つの上述のグリカンコンジュゲートを含む、グリカンコンジュゲート混合物に関する。
本発明の別の実施形態において、Ｇｌｏｂｏ Ｈ誘導体は、リンカーを介してキャリアにコンジュゲートして、グリカンコンジュゲートを発生させてよい。各コンジュゲートは、同一の又は異なるＧｌｏｂｏ Ｈ誘導体の、１又は複数の分子（例えば、１−４０、１−２０、１−２５、１−３０、５−２０、５−２５、５−３０、又は５−３５）を含むことができる。グリカンコンジュゲートを発生させるための手順は、本技術分野において既知であり、以下に説明されている。米国特許第８，２６８，９６９号も参照されたい。
本明細書に記載の免疫原性組成物は、免疫原性的に有効量の本発明のグリカンコンジュゲートを含んでよい。
本発明の化合物は、本技術分野において既知の又は本明細書に記載の手順を用いて合成することができる。ＵＳ２０１４００５１１２７も参照されたい。
本発明の免疫原性組成物は、１又は複数のアジュバントを含んでよい。適切なアジュバントは、本技術分野において既知である（例えば、Ｃ３４、７ＤＷ８−５、Ｃ１７、Ｃ２３、アルミニウム塩、スクアレン、ＭＦ５９、及びＱＳ−２１）。
用語「アラムアジュバント」は、免疫アジュバント活性を備えるアルミニウム塩を指す。この薬剤は、溶液中のタンパク質抗原に吸着し沈殿させる。結果として得られる沈殿物は、接種の部位に形成されたワクチンデポーからの抗原の徐放を促進することによって、ワクチン免疫原性を向上させる。
用語「免疫学的アジュバント」は、免疫原と共に使用され、免疫原に対する免疫応答を強化又は改変する物質を指す。本開示のα−ＧａｌＣｅｒアナログは、免疫学的アジュバントとして使用され、ワクチンを投与される患者の免疫システムを刺激してワクチンに対しより精力的に応答することによって、ワクチンの効果を改変又は増強する。典型的な実施において、アナログＣ３４がアジュバントとして使用される。Ｃ３４及び他のアルファ−ガラクトシルセラミドアナログの構造及びアジュバントとしてのそれらの使用が米国特許第７，９２８，０７７号に開示されている。
用語「糖脂質」は、細胞認識のためのマーカーとして働く炭水化物結合脂質を指す。
糖脂質Ｃ３４、Ｃ２３及び７ＤＷ８−５は、以下の構造を有する。

免疫原性組成物は、医薬的に許容される添加剤をさらに含んでよい。上述の免疫原性組成物は、医薬的に有効量の本発明のグリカンコンジュゲートを含んでよい。
別の態様において、本発明は、上述の免疫原性組成物及び医薬的に許容される添加剤を含むがんワクチンに関する。
本発明のがんワクチンは、単回用量又は多回用量の、発明に係るグリカンコンジュゲート、そのグリカンコンジュゲート混合物、又はその免疫原性組成物を含んでよい。それはまた、がんのリスクを処置又は低減するために使用してよい。それはまた、被験体又は医療従事者のための使用又は処方情報を記載するパッケージング情報を含んでよい。このような情報は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）などの規制当局によって必要とされる場合がある。それはまた、任意選択的に、化合物又は組成物の投与のための装置、例えば、非経口投与のためのシリンジを含んでよい。
医薬製剤
免疫組成物は、投薬製剤に適合する様式で、かつ治療的に効果的、保護的及び免疫原性である量で投与される。投与されるべき量は、例えば、抗体を合成し、必要に応じて、細胞介在免疫応答を生じる、個体の免疫システムの能力を含む、処置されるべき被験体に依存する。投与の必要な活性成分の正確な量は、施術者の判断に依存する。しかしながら、適切な投薬範囲は、当業者によって容易に決定可能である。初回投与及びブースター用量に適切なレジメンもまた可変であるが、初回投与及びそれに続く投与を含んでよい。ワクチンの投薬はまた、投与の経路に依存する可能性があり、ホストのサイズによって異なる。
がんの処置及び診断の両方に使用することのできる抗体の作製のために、本発明の免疫原性組成物を使用して、動物において抗体を発生させることも可能である。動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、又はウマ）においてモノクローナル及びポリクローナル抗体及びそれらのフラグメントを作製する方法は、本技術分野において周知である。例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New Yorkを参照されたい。用語「抗体」は、インタクトな免疫グロブリン分子及びそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖抗体）、及びｄＡｂ（ドメイン抗体； Ward, et. al. (1989) Nature, 341, 544）など）を含む。
本明細書に開示される組成物は、本開示を読むことにより当業者によって識別可能な、追加の活性薬剤、担体、ビヒクル、添加剤、又は補助剤と共に医薬組成物中に含まれてよい。
医薬組成物は好ましくは、少なくとも１つの医薬的に許容される担体を含む。このような医薬組成物において、本明細書に開示される組成物は、「活性薬剤」とも呼ばれる「活性化合物」を形成する。医薬的に許容される担体としては、医薬投与と適合性の、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延薬剤などがある。補足の活性化合物を組成物に組み込むこともできる。医薬組成物は、その意図される投与の経路に適合するように処方される。投与の経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、及び直腸投与がある。非経口、皮内、又は皮下適用に使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分を含むことができる：滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒など；抗菌薬剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベンなど；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなど；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸など；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩など、及び浸透張力調整剤、例えば塩化ナトリウム又はデキストロースなど。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整することができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製の多回用量バイアル、アンプル、又は使い捨てシリンジに封入することができる。
臨床適用
本発明は、がん（例えば肺がん、大腸がん、膵臓がん、胆道がん、又は子宮内膜がん）、良性新生物、又は血管新生などの増殖性疾患を被験体で処置するのに有用な、グリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンに関する。
がんの処置及び診断の両方に使用され得る抗体の作製のために、本発明の免疫原性組成物又はワクチンを使用して、ヒト又は動物において抗体を発生させてよい。それらを使用して、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３及び／又はＳＳＥＡ−４抗体の作製のために抗体を発生させてもよい。ヒト及び／又は動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、又はウマ）においてモノクローナル及びポリクローナル抗体及びそれらのフラグメントを作製する方法は、本技術分野において周知である。例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New Yorkを参照されたい。用語「抗体」は、インタクトな免疫グロブリン分子及びそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）．ｓｕｂ．２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖抗体）、及びｄＡｂ（ドメイン抗体；Ward, et. al. (1989) Nature, 341, 544）など）を含む。
本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンは、がんを処置又は診断するために使用してよい。このがんとしては、聴神経腫、腺癌、副腎がん、肛門がん、血管肉腫（例えば、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ））、虫垂がん、良性単クローン性免疫グロブリン血症、胆道がん（例えば、胆管がん腫）、膀胱がん、乳房がん（例えば、乳房の腺癌、乳房の乳頭状がん腫、乳がん、乳房の髄様がん腫）、脳がん（例えば、髄膜腫；グリオーマ、例えば、星状細胞腫、乏突起膠腫；髄芽細胞腫）、気管支がん、カルチノイド腫瘍、子宮頚部がん（例えば、子宮頚部腺癌）、絨毛がん腫、脊索腫、頭蓋咽頭腫、結腸直腸がん（例えば、結腸がん、直腸がん、結腸直腸腺癌）、上皮がん腫、上衣腫、内皮肉腫（例えば、カポジ肉腫、多発性特発性出血性肉腫）、子宮内膜がん（例えば、子宮がん、子宮肉腫）、食道がん（例えば、食道の腺癌、バレット腺癌）、ユーイング肉腫、眼がん（例えば、眼内メラノーマ、網膜芽細胞腫）、家族性過好酸球増加症、胆のうがん、胃がん（例えば、胃腺癌）、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮がん腫、口腔がん（例えば、経口扁平上皮がん腫（ＯＳＣＣ）、咽喉がん（例えば、喉頭がん、咽頭がん、鼻咽頭がん、中咽頭がん））、 造血器 がん（例えば、白血病、例えば急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）（例えば、Ｂ−細胞ＡＬＬ、Ｔ−細胞ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（例えば、Ｂ−細胞ＡＭＬ、Ｔ−細胞ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（例えば、Ｂ−細胞ＣＭＬ、Ｔ−細胞ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ−細胞ＣＬＬ、Ｔ−細胞ＣＬＬ）；リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫（ＨＬ）（例えば、Ｂ−細胞ＨＬ、Ｔ−細胞ＨＬ）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（例えば、Ｂ−細胞ＮＨＬ、例えばびまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ））、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ−細胞リンパ腫（例えば、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ−細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ−細胞リンパ腫）、縦隔原発Ｂ−細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（すなわち、「ワルデンシュトレームマクログロブリン血症」）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂ−リンパ芽球性リンパ腫及び中枢神経系（ＣＮＳ）原発リンパ腫；及びＴ−細胞ＮＨＬ、例えば前駆Ｔ−リンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ−細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）（例えば、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば、菌状息肉腫、セザリー症候群）、血管免疫芽球性Ｔ−細胞リンパ腫、節外性ナチュラルキラーＴ−細胞リンパ腫、腸管症型Ｔ−細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ−細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫）；１又は複数の上述の白血病／リンパ腫の混合；及び多発性骨髄腫（ＭＭ））、重鎖病（例えば、アルファ鎖病、ガンマ鎖病、ｍｕ鎖病）、血管芽細胞腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、免疫細胞性アミロイドーシス、腎臓がん（例えば、腎芽細胞腫、別名ウィルムス腫瘍、腎臓細胞がん腫）、肝臓がん（例えば、肝細胞がん（ＨＣＣ）、悪性ヘパトーマ）、肺がん（例えば、気管支原性がん腫、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肺の腺癌）、平滑筋肉腫（ＬＭＳ）、肥満細胞症（例えば、全身性肥満細胞症）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）（例えば、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、特発性骨髄化生（ＡＭＭ）、別名骨髄線維症（ＭＦ）、慢性特発性骨髄線維症、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、過好酸性症候群（ＨＥＳ））、神経芽細胞腫、神経線維腫（例えば、神経線維腫症（ＮＦ）１型又は２型、神経鞘腫症）、神経内分泌がん（例えば、膵消化管神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ−ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍）、骨肉腫、卵巣がん（例えば、嚢胞腺癌、卵巣胎児性がん腫、卵巣腺癌）、乳頭状腺癌、膵臓がん（例えば、膵臓腺癌、膵管内乳頭粘液性腫瘍（ＩＰＭＮ）、膵島細胞腫瘍）、陰茎がん（例えば、陰茎及び陰嚢のパジェット病）、松果体腫、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＴ）、前立腺がん（例えば、前立腺腺癌）、直腸がん、横紋筋肉腫、だ液腺がん、皮膚がん（例えば、扁平上皮がん腫（ＳＣＣ）、ケラトアカントーマ（ＫＡ）、メラノーマ、基底細胞がん腫（ＢＣＣ））、小腸がん（例えば、虫垂がん）、軟組織肉腫（例えば、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、軟骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫）、脂腺がん腫、汗腺がん腫、滑膜腫、精巣がん（例えば、精上皮腫、精巣胎児性がん腫）、甲状腺がん（例えば、甲状腺の乳頭状がん腫、乳頭状甲状腺がん腫（ＰＴＣ）、髄様甲状腺がん）、尿道がん、膣がん及び外陰がん（例えば、外陰のパジェット病）があるが、これらに限定されない。ある実施形態において、提供されるグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンは、脳がん、肺がん、乳がん、口腔がん、食道がん、胃がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、結腸がん、腎臓がん、骨がん、皮膚がん、子宮頸がん、卵巣がん、及び前立腺がんを処置するのに有用である。
有効量の、本発明の任意のグリカンコンジュゲート又は免疫原性組成物又はワクチンは、処置を必要としている被験体に、上述の適切な経路を介して投与してよい。ヒトなどの被験体は、がんを有する患者、がんを有すると疑われる患者、又はがんに罹りやすい患者であってよい。有効量は、コンジュゲート又は組成物のグリカン部分に特異的な免疫応答を誘発するのに有効であるか、又はがん成長の阻害及び／又は腫瘍量の低減をもたらす免疫応答を誘発するのに十分であるか、又は標的がんの発症を遅延させる若しくはがん発生のリスクを低減させるのに有効であり得る。必要とされる正確な量は、被験体によって異なることとなり、例えば、種、年齢、及び被験体の全身状態、副作用又は障害の重症度、特定の１又は複数の化合物の性質、投与の様式、などに依存する。所望の投薬は、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回、送達してよい。それは、多回投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又はそれ以上の投与）を用いて送達してよい。
７０ｋｇ成人ヒトに対する、本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンの有効量は、単位剤形あたり、約０．０００１ｍｇ−約３０００ｍｇ、約０．０００１ｍｇ−約２０００ｍｇ、約０．０００１ｍｇ−約１０００ｍｇ、約０．００１ｍｇ−約１０００ｍｇ、約０．０１ｍｇ−約１０００ｍｇ、約０．１ｍｇ−約１０００ｍｇ、約１ｍｇ−約１０００ｍｇ、約１ｍｇ−約１００ｍｇ、約１０ｍｇ−約１０００ｍｇ、又は約１００ｍｇ−約１０００ｍｇの化合物を含んでよい。
１日あたり、約０．００１ｍｇ／ｋｇ−約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ−約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ−約４０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ−約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ−約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ−約１０ｍｇ／ｋｇ、及びより好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ−約２５ｍｇ／ｋｇ被験体体重で、１日１回又は複数回送達して、所望の治療的効果を得るのに十分な投薬レベルで、本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンを、経口的に又は非経口的に投与してよい。
本明細書に記載の用量範囲は、本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンを成人に投与するための指針を提供することが理解されるだろう。小児又は青年に投与すべき量は、医師又は当業者が決定してよく、成人に投与される量よりも少ないか又は同じであり得る。
本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンは、１又は複数の追加の治療的活性薬剤と組み合わせて投与してよい。それらは、それらの生物学的利用能を向上させ、それらの代謝を低減及び／又は改変し、それらの排出を阻害し、及び／又は体内でのそれらの分布を改変する、追加の治療的活性薬剤と組み合わせて投与してよい。用いられる治療が、同一の障害に対して所望の効果を達成し得ること、及び／又はそれが異なる効果を達成し得ることも理解されるだろう。
本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンは、１又は複数の追加の治療的活性薬剤と同時に、その前に、又はその後に、投与してよい。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量及び／又はタイムスケジュールで投与される。組み合わせて用いられる追加の治療的活性薬剤は、単一の組成物中で共に投与されてよく、又は異なる組成物中で別々に投与されてよい。レジメンにおいて用いられる特定の組み合わせは、発明に係る化合物の追加の治療的活性薬剤との適合性及び／又は達成されるべき所望の治療的効果を考慮に入れるであろう。併用療法における追加の治療的活性薬剤は、それらが個別に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが期待される。場合によっては、組み合わせて利用されるレベルは、個別に利用されるレベルよりも低くてよい。
本発明のグリカンコンジュゲート、免疫原性組成物又はワクチンは、バイオ療法的抗がん剤及び化学療法的薬剤を含む、抗がん剤などの、１又は複数の追加の医薬薬剤と組み合わせて投与してよい。
バイオ療法的抗がん剤としては、インターフェロン、サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子、インターフェロンα、インターフェロンγ）、ワクチン、造血成長因子、モノクローナル血清療法、免疫賦活剤及び／又は免疫調節剤（例えば、ＩＬ−１、２、４、６、又は１２）、免疫細胞成長因子（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）及び抗体（例えばＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（トラスツズマブ）、Ｔ−ＤＭ１、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ）、ＥＲＢＩＴＵＸ（セツキシマブ）、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（パニツムマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ）、ＢＥＸＸＡＲ（トシツモマブ））があるが、これらに限定されない。
化学療法的薬剤としては、以下のものがあるがこれらに限定されない：抗エストロゲン（例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、及びメゲストロール）、ＬＨＲＨアゴニスト（例えばゴスクリン及びロイプロリド）、抗アンドロゲン（例えばフルタミド及びビカルタミド）、光線力学的療法（例えばベルテポルフィン（ＢＰＤ−ＭＡ）、フタロシアニン、光増感剤Ｐｃ４、及びデメトキシ−ヒポクレリンＡ（２ＢＡ−２−ＤＭＨＡ））、ナイトロジェンマスタード（例えばシクロホスファミド、イフォスファミド、トロホスファミド、クロラムブシル、エストラムスチン、及びメルファラン）、ニトロソ尿素（例えばカルムスチン（ＢＣＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ））、アルキルスルホネート（例えばブスルファン及びトレオスルファン）、トリアゼン（例えばダカルバジン、テモゾロミド）、白金含有化合物（例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン）、ビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビン）、タキソイド（例えばパクリタキセル又はパクリタキセル等価物、例えばナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル（アブラキサン）、ドコサヘキサエン酸結合パクリタキセル（ＤＨＡ−パクリタキセル、タキソプレキシン）、ポリグルタミン酸結合パクリタキセル（ＰＧ−パクリタキセル、パクリタキセルポリグルメックス、ＣＴ−２１０３、ＸＹＯＴＡＸ）、腫瘍活性化プロドラッグ（ＴＡＰ）ＡＮＧ１００５（３分子のパクリタキセルに結合したＡｎｇｉｏｐｅｐ−２）、パクリタキセル−ＥＣ−１（ｅｒｂＢ２認識ペプチドＥＣ−１に結合したパクリタキセル）、及びグルコース−コンジュゲートパクリタキセル、例えば、２'−パクリタキセルメチル２−グルコピラノシルスクシネート；ドセタキセル、タキソール）、エピポドフィリン（例えばエトポシド、エトポシドリン酸塩、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、イリノテカン、クリスナトール、マイトマイシンＣ）、抗代謝剤、ＤＨＦＲ阻害剤（例えばメトトレキセート、ジクロロメトトレキセート、トリメトレキセート、エダトレキセート）、ＩＭＰデヒドロゲナーゼ阻害剤（例えばミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、及びＥＩＣＡＲ）、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（例えばヒドロキシ尿素及びデフェロキサミン）、ウラシルアナログ（例えば５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド（ｒａｔｉｔｒｅｘｅｄ）、テガフール−ウラシル、カペシタビン）、シトシンアナログ（例えばシタラビン（ａｒａ Ｃ）、シトシンアラビノシド、及びフルダラビン）、プリンアナログ（例えばメルカプトプリン及びチオグアニン）、ビタミンＤ３アナログ（例えばＥＢ １０８９、ＣＢ １０９３、及びＫＨ １０６０）、イソプレニル化阻害剤（例えばロバスタチン）、ドーパミン作動性神経毒（例えば１−メチル−４−フェニルピリジニウムイオン）、細胞周期阻害剤（例えばスタウロスポリン）、アクチノマイシン（例えばアクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン）、ブレオマイシン（例えばブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン）、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン）、ＭＤＲ阻害剤（例えばベラパミル）、Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ阻害剤（例えばタプシガルギン）、イマチニブ、サリドマイド、レナリドマイド、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、アキシニチブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ−３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ−５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマキサニブ（セマキシニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵ１０Ｔ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、エベロリムス（ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＥＮＭＤ−２０７６、ＰＣＩ−３２７６５、ＡＣ２２０、ドビチニブ乳酸塩（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ−２５８）、ＢＩＢＷ ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ−０４２１７９０３、ＰＦ−０２３４１０６６、ＰＦ−２９９８０４、ＢＭＳ−７７７６０７、ＡＢＴ−８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ−２０３６、ＢＭＳ−６９０１５４、ＣＥＰ−１１９８１、チボザニブ（ＡＶ−９５１）、ＯＳＩ−９３０、ＭＭ−１２１、ＸＬ−１８４、ＸＬ−６４７、及び／又はＸＬ２２８）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ））、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ−００１）、リダフォロリムス、ＡＰ２３５７３（Ａｒｉａｄ）、ＡＺＤ８０５５（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＴ２２６（Ｎｏｒｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ７６５（Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＰＦ−４６９１５０２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＧＤＣ０９８０（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）、ＳＦ１１２６（Ｓｅｍａｆｏｅ）及びＯＳＩ−０２７（ＯＳＩ））、オブリメルセン、ゲムシタビン、カルミノマイシン、ロイコボリン、ペメトレキセド、シクロホスファミド、ダカルバジン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂｉｚｉｎｅ）、プレドニゾロン、デキサメタゾン、カンプトテシン（ｃａｍｐａｔｈｅｃｉｎ）、プリカマイシン、アスパラギナーゼ、アミノプテリン、メトプテリン、ポルフィロマイシン、メルファラン、ロイロシジン、ロイロシン、クロラムブシル、トラベクテジン、プロカルバジン、ディスコデルモリド、カルミノマイシン、アミノプテリン、及びヘキサメチルメラミン。
処置される被験体は、ヒトなどのほ乳類、又はイヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、又はヤギなどの家畜化動物である。被験体はまた、トランスジェニックマウス又はトランスジェニックブタなどの非ヒトトランスジェニック動物であってもよい。
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために提供される。当業者であれば、本開示に照らして、開示された特定の実施形態において多くの変更を行うことができることを理解し、そしてさらに本発明の精神及び範囲から逸脱することなく同様の又は類似の結果を得ることができるはずである。
例１：ＧＨ−Ｌａｃ誘導体の合成
スキーム１は、ＧＨ−Ｌａｃ誘導体２−６の合成を示す。酵素：ＧａｌＫ、ガラクトキナーゼ；ＡｔＵＳＰ、ＵＤＰ−糖ピロホスホリラーゼ；ＬｇｔＣ、α１，４−ガラクトシル−トランスフェラーゼ；ＰＫ、ピルビン酸キナーゼ；ＰＰＡ、無機ピロホスファターゼ；ＧｌｍＵ、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ；ＮａｈＫ、Ｎ−アセチルヘキソサミンキナーゼ；ＬｇｔＤ、β１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ；ＦＫＰ、二官能性フコキナーゼ／ＧＤＰ−Ｌ−フコースピロホスホリラーゼ；ＦｕｔＣ、α−１，２−フコシルトランスフェラーゼ。
ＧＨ−Ｌａｃ誘導体２−６（還元末端誘導体）の合成（スキーム１）を、以前に記載された酵素的手順にしたがってＬａｃ誘導体１１−１５から開始した。１５ａＧｂ３−Ｌａｃ誘導体１６−２０を、ガラクトース、α１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＬｇｔＣ）並びにＵＤＰ−糖ピロホスホリラーゼ（ＡｔＵＳＰ）、ガラクトキナーゼ（ＧａｌＫ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）及び無機ピロホスファターゼ（ＰＰＡ）を含むＵＤＰ−Ｇａｌ再生システムで合成した。ＬｇｔＣは、注意深く特性を明らかにされ、α−（１→４）−ガラクトシル化誘導体の合成に利用されてきた。３１ここで、ＬｇｔＣはまた、Ｌａｃ誘導体（１１−１５）に対して良好な活性を示すことが見いだされた。Ｇｂ３−Ｆ １６、Ｇｂ３−フェニルＮＯ２ １９及びＧｂ３−ＮＯ２ ２０の収率はそれぞれ、９２、８１及び９５％であり、Ｇｂ３−Ｎ３ １７及びＧｂ３−フェニル １８の収率はそれぞれ、６７及び６９％であった。
Ｇｂ３−Ｌａｃ誘導体１６−２０を、ガラクトサミン、β１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（ＬｇｔＤ）並びにＮ−アセチルヘキソサミンキナーゼ（ＮａｈＫ）、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ（ＧｌｍＵ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）及び無機ピロホスファターゼ（ＰＰＡ）を含むＵＤＰ−ＧａｌＮａｃ再生システムを用いて、Ｇｂ４誘導体２１−２５の合成のためのアクセプターとして使用した。１５ａ過剰発現及び生化学的特徴付けの後、３２ＬｇｔＤを使用して、アクセプターとしてのＧｂ３−Ｆ １６、Ｇｂ３−Ｎ３ １７及びＧｂ３−フェニル １８をグリコシル化し、Ｇｂ４−Ｆ ２１、Ｇｂ４−Ｎ３ ２２及びＧｂ４−フェニル ２３を、それぞれ９０、８７及び８９％収率で得た。Ｇｂ３−フェニルＮＯ２ １９及びＧｂ３−ＮＯ２ ２０から、Ｇｂ４−フェニルＮＯ２ ２４及びＧｂ４−ＮＯ２ ２５が、それぞれ７２及び６１％収率で得られた。
β１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（ＬｇｔＤ）及び前述のＵＤＰ−ｇａｌ再生システムを用いて、Ｇｂ４誘導体２１−２５及びガラクトースからＧｂ５−Ｌａｃ誘導体２６−３０を得た。１５ａＧｂ５−Ｆ ２６、ＧＢ５−Ｎ３ ２７、Ｇｂ５−フェニル ２８、Ｇｂ５−フェニルＮＯ２ ２９及びＧｂ５ ＮＯ２ ３０が、５５％−７９％収率で得られた。
α−１，２−フコシルトランスフェラーゼ（ＦｕｔＣ）、二官能性フコキナーゼ／ＧＤＰ−Ｌ−フコースピロホスホリラーゼ（ＦＫＰ）、ピロホスファターゼ（ＰＰＡ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）及びフコースを用いて、ＧＨ−Ｌａｃ誘導体２−６をＧｂ５−Ｌａｃ誘導体２６−３０から合成した。１５ａＧＨ−Ｆ ２及びＧＨ−フェニル ４を、アクセプターＧｂ５−Ｆ ２６及びＧｂ５−フェニル ２８から、それぞれ７５及び９３％収率で調製した。Ｇｂ５−Ｎ３ ２７、Ｇｂ５−フェニルＮＯ２ ２９及びＧｂ５−ＮＯ２ ３０をアクセプターとして用いて、ＧＨ−Ｎ３ ３、ＧＨ−フェニルＮＯ２ ５及びＧＨ−ＮＯ２ ６を、それぞれ４９、６５及び６６％収率で得た。
例２：ＧＨ−Ｆｕｃ誘導体の合成
スキーム２は、ＧＨ−Ｆｕｃ誘導体の化学的酵素的合成を示す。反応条件：ＦＫＰ、ＦｕｔＣ、ＰＰＡ、ＰＫ、Ｍｇ２＋、ＡＴＰ、ＧＴＰ。
ＧＨ−Ｆｕｃ誘導体７−１０（非還元末端誘導体）の合成（スキーム２）もまた、フコース誘導体及びアクセプターＧｂ５オリゴ糖を、組換えＦＫＰ、α−１，２−フコシルトランスフェラーゼ（ＦｕｔＣ）、ＰＰＡ及びＰＫと組み合わせて、以前に記載された方法にしたがった。１５ａペンチルアミンを有する出発物Ｇｂ５オリゴ糖３１を、以前に記載された化学的方法を用いて合成した。２９この化学的酵素的方法を用いて、一連のＧＨ−Ｆｕｃ誘導体７−１０を、４３％−８３％収率で合成した。化合物３６をＦＫＰと反応させてＧＤＰ−３６を形成したが、化合物３６はＦｕｔＣに適切な供与体ではなく、痕跡量の生成物が形成された。加えて、化合物３７はＦＫＰの基質ではなく、ＧＤＰ−３７中間体は形成されなかった。
さらなる使用のために、全ての精製されたＧＨ誘導体及び切断型の構造を、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法及び高分解能質量分析法（ＨＲＭＳ）によって確認した。
例３：ＧＨ誘導体ＤＴ−コンジュゲートの合成
スキーム３は、ＧＨ−Ｌａｃ及びＧＨ−Ｆｕｃ改変ワクチンの合成を示す。
ＧＨ−Ｌａｃ及びＧＨ−Ｆｕｃ ＤＴ−コンジュゲート（１−ＤＴ〜１０−ＤＴ）を合成するために、アミン末端ＧＨ Ｌａｃ誘導体２−６又はＧＨ Ｆｕｃ誘導体７−１０をホモ二官能性ｐ−ニトロフェニルリンカーと反応させ、対応する半エステルを良好な収率で産した（補足情報）。逆相クロマトグラフィーによる精製の後、この半エステル及びＤＴを、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．８）中で一晩カップリングさせた（スキーム３）。ＤＴに組み込まれたＧＨ誘導体の数は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳによって特性を明らかにした。表１は、平均炭水化物取り込みのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析の結果を示す。ａピークｍ／ｚ。

例４：ＧＨ−Ｌａｃ及びＧＨ−Ｆｕｃ誘導体の前駆体の合成
酵素の使用に基づき３０、有効な糖ヌクレオチド再生と合わせた１５ａ方法を用いて、ＧＨ−Ｌａｃ及びＧＨ−Ｆｕｃ誘導体を、グリコシルトランスフェラーゼ（ＬｇｔＣ、ＬｇｔＤ、Ｆｕｔｃ）及び補因子再生システム（ＵＤＰ−Ｇａｌ、ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃ、ＧＤＰ−Ｆｕｃ）を用いて容易に調製することができる。出発Ｌａｃ誘導体１１−１５及びＦｕｃ誘導体３２−３７を化学的方法により合成した（スキーム４−８）。
化合物Ｓ１を報告された手順により合成した。１Ｓ１（６３０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３０ｍＬ）に、イミダゾール（２０８ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、２９１μＬ（１．１３ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチル（クロロ）ジフェニルシランを添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めた。１３時間撹拌した後、反応溶液を濃縮した。残渣をピリジン（２０ｍＬ）に０℃で溶解し、無水酢酸（４０１μＬ、３．９３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めた。１０時間撹拌した後、メタノール（１ｍＬ）を０℃でゆっくり添加することによって反応をクエンチし、揮発性物質を減圧下で除去した。残渣を酢酸エチル（８０ｍＬ）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（０−４０％ＥｔＯＡｃ、ヘキサン中）によって精製し、Ｓ２（６６７ｍｇ、６４％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.78 - 7.71 (m, 4H), 7.46 - 7.25 (m, 11H), 5.43 (s, 1H), 5.23 - 5.15 (m, 2H), 4.95 (m, 1H), 4.87 - 4.81 (m, 2H), 4.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.32 - 4.30 (dd, J = 1.4, 12.5 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.14 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 1.5, 12.5 Hz, 1H), 3.96 - 3.90 (m, 2H), 3.85 - 3.81 (m, 1H), 3.44 - 3.40 (m, 1H), 3.31 - 3.30 (m, 2H), 3.08 (m, 2H), 2.08 - 2.00 (m, 9H), 1.77 (s, 3H), 1.60 - 1.58 (m, 2H), 1.48 - 1.45 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.35 - 1.33 (m, 2H), 1.05 (s, 9H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.69, 170.66, 169.83, 168.64, 155.99, 137.55, 136.02, 135.43, 133.50, 132.20, 129.95, 129.92, 129.20, 128.26, 127.93, 127.67, 126.54, 101.40, 100.60, 100.26, 75.23, 74.26, 73.36, 72.36, 72.21, 71.68, 69.22, 68.99, 68.62, 66.27, 61.12, 29.77, 29.08, 28.44, 26.84, 23.30, 20.90, 20.82, 20.80, 20.59, 19.45。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ５３Ｈ７１ＮＯ１７ＳｉＮａ＋についての計算値１０４４．４３８３、実測値１０４４．４４０４。
Ｓ２（４２５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液に、ＡｃＯＨ（２４６μＬ、４．１０ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。ＴＨＦ中１．０Ｍのテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液を４．１ｍＬ（４．１０ｍｍｏｌ）添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めた。７時間撹拌した後、反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（７０ｍＬ）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（５０−８０％ＥｔＯＡｃ、ヘキサン中）により精製し、Ｓ３（２７９ｍｇ、８７％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.47 - 7.42 (m, 2H), 7.40 - 7.32 (m, 3H), 5.44 (s, 1H), 5.26 - 5.15 (m, 2H), 4.92 - 4.83 (m, 2H), 4.57 (m, 2H), 4.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 2H), 4.01 (dd, J = 12.4, 1.5 Hz, 1H), 3.90 (m, 2H), 3.83 - 3.74 (m, 2H), 3.48 - 3.44 (m, 2H), 3.37 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 3.06 (m, 2H), 2.01 (dd, J = 6.4, 2.8 Hz, 12H), 1.56 - 1.54 (m, 2H),1.48 - 1.30 (m, 13H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.94, 170.60, 169.88, 169.05, 156.21, 137.74, 129.37, 128.44, 126.72, 101.54, 101.14, 100.86, 79.35, 75.30, 74.68, 73.49, 72.64, 72.31, 71.84, 70.11, 69.40, 68.78, 66.47, 60.46, 40.63, 29.78, 29.20, 28.63, 23.21, 21.06, 20.95。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ３７Ｈ５３ＮＯ１７Ｎａ＋についての計算値８０６．３２０６、実測値８０６．３２１２。
Ｓ３（２２１ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に、１３０μＬ（１．２ｍｍｏｌ）の２，６−ルチジンを０℃で添加した。１５０μＬ（１．２ｍｍｏｌ）のジエチルアミノ硫黄トリフルオリドを添加した。混合物を８時間超音波処理し、次いで真空中で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０−５０％ＥｔＯＡｃ、ヘキサン中）により精製し、Ｓ４（１２９ｍｇ、５９％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.47 - 7.39 (m, 2H), 7.39 - 7.32 (m, 3H), 5.45 (s, 1H), 5.28 - 5.18 (m, 2H), 4.92 - 4.85 (m, 2H), 4.72 - 4.55 (m, 2H), 4.55 - 4.41 (m, 2H), 4.32 - 4.24 (m, 2H), 4.02 (dd, J = 12.4, 1.4 Hz, 1H), 3.90 - 3.80 (m, 2H), 3.51 - 3.41 (m, 3H), 3.07 (dd, J = 12.9, 6.4 Hz, 2H), 2.01 (dd, J = 5.9, 4.3 Hz, 12H), 1.58 - 1.51 (m, 2H), 1.51 - 1.38 (m, 11H), 1.38 - 1.26 (m, 2H)。19F NMR (470 MHz, CDCl3) δ -234.24 (td, J = 47.2, 29.6 Hz)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.97, 170.43, 169.85, 169.06, 156.16, 137.62, 129.41, 128.45, 126.68, 101.49, 100.99, 100.92, 81.51, 80.36, 79.28, 74.67, 74.64, 74.03, 73.90, 73.39, 72.72, 72.21, 71.71, 69.99, 69.32, 68.68, 66.59, 40.63, 29.86, 29.18, 28.62, 23.32, 21.08, 20.94。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ３７Ｈ５２ＦＮＯ１６Ｎａ＋についての計算値８０８．３１６２、実測値８０８．３１８５。
Ｓ４（１０５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、ＮａＯＭｅ（５ｍｇ）を添加し、６時間撹拌した。反応溶液をアンバーライトＩＲ−１２０で中和し、濾過し、濃縮した。残渣を５ｍＬのＨ２Ｏ中９０％ＴＦＡで処置した。２時間撹拌した後、反応溶液を濃縮し、逆相カラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８）により精製して、ラクトース誘導体１１（４９ｍｇ、８９％）を産した。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１１）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.88-4.71 (m, 1H), 4.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.93 - 3.90 (m, 2H), 3.84 - 3.65 (m, 8H), 3.56 (dd, J = 10.0, 7.8 Hz, 1H), 3.34 (dd, J = 9.3, 8.1 Hz, 1H), 3.02 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.75 - 1.65 (m, 4H), 1.51 - 1.43 (m, 2H)。19F NMR (471 MHz, D2O) δ -234.79 (td, J = 47.8, 31.6 Hz)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 105.60, 104.84, 84.54, 83.43, 79.71, 79.67, 78.00, 76.88, 75.96, 75.84, 75.42, 75.14, 73.56, 72.90, 71.19, 63.71, 41.98, 30.82, 29.05, 24.73。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ１７Ｈ３２ＦＮＯ１０Ｈ＋についての計算値４３０．２０８３、実測値４３０．２０９２。
Ｓ１（１．９ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（３０ｍＬ）に、４−トルエンスルホニルクロリド（０．８ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めた。８時間撹拌した後、反応溶液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（２−８％ＭｅＯＨ、ＤＣＭ中）により濃縮及び精製し、Ｓ５（１．２ｇ、４５％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.78 - 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.44 - 7.42 (m, 2H), 7.34 (m, 3H), 7.24 - 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.49 (s, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.52 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.28 - 4.17 (m, 2H), 4.15 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.02 - 4.00 (m, 1H), 3.77 - 3.72 (m, 2H), 3.61 - 3.55 (m, 4H), 3.49 - 3.41 (m, 3H), 3.32 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.58 - 1.55 (m, 2H), 1.47 - 1.44 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.36 - 1.33 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 156.26, 137.72, 132.87, 130.03, 129.45, 128.52, 128.24, 126.63, 102.79, 102.46, 101.49, 79.29, 77.76, 75.35, 74.77, 73.44, 72.77, 72.61, 70.33, 70.11, 69.47, 69.05, 67.14, 40.61, 29.85, 29.25, 28.64, 23.38, 21.82。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ３６Ｈ５１ＮＯ１５ＳＮａ＋についての計算値７９２．２８７２、実測値７９２．２７９８。
Ｓ５（２０４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（１６９ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ）を１１０℃で添加した。１４時間撹拌した後、反応溶液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（２−８％ＭｅＯＨ、ＤＣＭ中）により濃縮及び精製し、Ｓ６（１４８ｍｇ、８９％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.44 (m, 2H), 7.33 - 7.31 (m, 3H), 5.46 (s, 1H), 4.29 - 4.24 (m, 2H), 4.20 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.04 (m Hz, 1H), 3.97 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.72 - 3.63 (m, 1H), 3.60 - 3.33 (m, 10H), 3.26 (s, 1H), 3.04 (m, 2H), 1.59 - 1.57 (m, 2H), 1.45 - 1.19 (m, 13H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 137.57, 129.45, 128.47, 126.48, 103.37, 102.58, 101.42, 79.91, 79.34, 75.46, 74.62, 74.53, 73.47, 72.58, 70.47, 69.96, 69.12, 67.05, 51.17, 40.43, 29.73, 29.24, 28.56, 23.33。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ２９Ｈ４４Ｎ４Ｏ１２Ｎａ＋についての計算値６６３．２８４８、実測値６６３．２８５９。
Ｓ６（１２２ｍｇ）を５ｍＬのＨ２Ｏ中９０％ＴＦＡで処置し、２時間撹拌した。反応溶液を逆相カラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８）により濃縮及び精製し、ラクトース誘導体１２（８０ｍｇ、９３％）を産した。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−アジド−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１２）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.54 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.98 - 3.91 (m, 2H), 3.85 - 3.60 (m, 10H), 3.55 (dd, J = 9.9, 7.8 Hz, 1H), 3.38 - 3.32 (m, 1H), 3.06 - 2.99 (m, 2H), 1.76 - 1.65 (m, 4H), 1.52 - 1.43 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 105.84, 104.76, 82.08, 78.14, 76.98, 76.40, 75.54, 75.25, 73.64, 72.93, 71.26, 63.76, 53.14, 42.09, 30.92, 29.13, 24.83。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ１７Ｈ３２Ｎ４Ｏ１０Ｈ＋についての計算値４５３．２１９１、実測値４５３．２２０１。
Ｓ３（１９０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に、２５μＬ（０．２７ｍｍｏｌ）のフェノール及び７０ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを０℃で添加した。３８μＬ（０．２７ｍｍｏｌ）のアゾジカルボン酸ジエチルを添加した。混合物を４時間超音波処理し、次いで真空中で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０−５０％ＥｔＯＡｃ、ヘキサン中）により精製し、Ｓ７（１３８ｍｇ、６７％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.43 - 7.42 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 2H), 7.36 - 7.31 (m, 3H), 7.31 - 7.26 (m, 2H), 6.98 - 6.90 (m, 3H), 5.42 (s, 1H), 5.26 - 5.17 (m, 2H), 4.94 (dd, J = 9.7, 8.0 Hz, 1H), 4.67 (dd, J = 10.3, 3.7 Hz, 1H), 4.49 - 4.44 (m, 3H), 4.26 - 4.23 (m, 3H), 4.17 (m, 1H), 4.06 - 3.96 (m, 2H), 3.80 (dt, J = 9.7, 6.3 Hz, 1H), 3.66 (m, 1H), 3.43 (dt, J = 9.6, 6.6 Hz, 1H), 3.34 (s, 1H), 3.05 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.01 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.59 - 1.48 (m, 2H), 1.48 - 1.38 (m, 11H), 1.36 - 1.19 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.89, 170.56, 169.88, 168.91, 158.56, 156.15, 137.67, 129.82, 129.37, 128.42, 126.67, 121.71, 115.00, 101.49, 101.01, 100.79, 79.23, 75.35, 74.07, 73.28, 72.80, 72.36, 71.83, 69.83, 69.26, 68.68, 66.51, 65.92, 40.63, 29.81, 29.17, 28.62, 23.28, 21.02, 20.94, 20.93, 20.84。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ４３Ｈ５７ＮＯ１７Ｎａ＋についての計算値８８２．３５１９、実測値８８２．３５４２。
Ｓ７（１１０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（５ｍＬ）に、ＮａＯＭｅ（３ｍｇ）を添加し、６時間撹拌した。反応溶液をアンバーライトＩＲ−１２０で中和し、濾過し、濃縮した。残渣を５ｍＬのＨ２Ｏ中９０％ＴＦＡで処置した。２時間撹拌した後、反応溶液を逆相カラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８）により濃縮及び精製し、ラクトース誘導体１３（４５ｍｇ、７８％）を産した。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−フェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１３）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 7.42 (dd, J = 8.7, 7.4 Hz, 2H), 7.12 - 7.07 (m, 3H), 4.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 11.1, 1.6 Hz, 1H), 4.37 (dd, J = 11.1, 4.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 3H), 3.84 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 3.79 - 3.67 (m, 4H), 3.56 (dd, J = 4.0, 8.3 Hz, 1H), 3.52 (m, 1H), 3.45 - 3.35 (m, 2H), 3.02 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.73 - 1.63 (m, 4H), 1.50 - 1.41 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 163.11, 135.23, 135.21, 127.09, 120.35, 108.11, 107.54, 82.71, 80.68, 79.65, 78.32, 78.17, 77.73, 76.06, 75.44, 73.81, 71.22, 66.35, 44.62, 33.46, 31.66, 27.34。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２３Ｈ３７ＮＯ１１Ｈ＋についての計算値５０４．２４３９、実測値５０４．２４５０。
Ｓ３（２２０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（１０ｍＬ）に、４２ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）の４−ニトロフェノール及び８１ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを室温で添加した。４３μＬ（０．３０ｍｍｏｌ）のアゾジカルボン酸ジエチルを添加した。混合物を５時間超音波処理し、次いで真空中で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０−６０％ＥｔＯＡｃ、ヘキサン中）により精製し、Ｓ８（２３５ｍｇ、９２％）を産した。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.19 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 7.33 (m, 3H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.43 (s, 1H), 5.23 - 5.19 (m, 2H), 4.90 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.76 (dd, J = 10.3, 2.7 Hz, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.47 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 4.36 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.24 (m, 3H), 4.04 - 3.93 (m, 2H), 3.78 - 3.73 (m, 2H), 3.41 (m, 2H), 3.03 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.05 - 1.94 (m, 9H), 1.87 (s, 3H), 1.56 - 1.35 (m, 13H), 1.29 - 1.91 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.72, 170.26, 169.73, 168.72, 163.43, 156.06, 142.12, 137.53, 129.30, 128.33, 126.53, 126.13, 114.89, 101.33, 100.93, 100.61, 79.13, 77.43, 75.31, 73.60, 73.18, 72.54, 72.00, 71.72, 69.99, 69.34, 68.53, 66.71, 66.56, 40.50, 29.75, 29.06, 28.52, 23.16, 20.89, 20.82, 20.81, 20.80。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ４３Ｈ５６Ｎ２Ｏ１９Ｎａ＋についての計算値９２７．３３６９、実測値９２７．３３７７。
Ｓ８（１５５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（５ｍＬ）にＮａＯＭｅ（３ｍｇ）を添加し、６時間撹拌した。反応溶液をアンバーライトＩＲ−１２０で中和し、濾過し、濃縮した。残渣を５ｍＬのＨ２Ｏ中９０％ＴＦＡで処置した。２時間撹拌した後、反応溶液を逆相カラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８）により濃縮及び精製し、ラクトース誘導体１４（７８ｍｇ、８３％）を産した。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１４）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 8.29 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 4.57 - 4.53 (m, 3H), 4.32 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.84 (m, 4H), 3.84 - 3.66 (m, 4H), 3.60 (dt, J = 11.7, 5.8 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 9.9, 7.7 Hz, 1H), 3.47 (dd, J = 9.9, 3.4 Hz, 1H), 3.41 - 3.35 (m, 1H), 2.97 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.69 - 1.63 (m, 4H), 1.45 - 1.41 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 163.56, 141.49, 126.22, 115.08, 103.07, 102.25, 77.72, 75.43, 74.34, 72.85, 72.78, 72.45, 70.74, 70.16, 68.47, 66.40, 61.03, 39.34, 28.17, 26.48, 22.07。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２３Ｈ３６Ｎ２Ｏ１３Ｈ＋についての計算値５４９．２２９０、実測値５４９．２２９４。
Ｓ３（１８８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に、ヨウ化ナトリウム（３６３ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を１１０℃で添加した。１４時間撹拌した後、反応溶液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（２−８％ＭｅＯＨ、ＤＣＭ中）により濃縮及び精製し、Ｓ９（１４６ｍｇ、８４％）を産した。1H NMR (600 MHz, MeOD) δ 7.52 - 7.46 (m, 2H), 7.30 - 7.28 (m, 3H), 5.58 (s, 1H), 4.48 - 4.43 (m, 1H), 4.27 (dd, J = 7.8, 4.0 Hz, 1H), 4.20 - 4.09 (m, 3H), 3.89 - 3.78 (m, 2H), 3.66 - 3.49 (m, 5H), 3.42 - 3.13 (m, 4H), 3.00 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.69 - 1.55 (m, 2H), 1.49 - 1.28 (m, 13H)。13C NMR (150 MHz, MeOD) δ 157.17, 138.13, 128.51, 127.64, 126.08, 103.78, 102.62, 100.81, 83.24, 78.43, 75.91, 74.32, 73.84, 73.45, 72.09, 70.48, 69.57, 68.78, 66.92, 46.63, 39.93, 29.27, 29.05, 27.44, 22.94。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ２９Ｈ４４ＩＮＯ１２Ｎａ＋についての計算値７４８．１８００、実測値７４８．１７５８。
Ｓ９（１３３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に、亜硝酸ナトリウム（１２４ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を室温で２日間添加した。反応溶液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（２−８％ＭｅＯＨ、ＤＣＭ中）により濃縮及び精製し、Ｓ１０（４０ｍｇ、３５％）を産した。1H NMR (600 MHz, MeOD) δ 7.45 (dt, J = 4.3, 2.3 Hz, 2H), 7.27 - 7.25 (m, 3H), 5.55 (s, 1H), 5.12 (dd, J = 13.6, 2.5 Hz, 1H), 4.59 - 4.44 (m, 6H), 4.36 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.14 - 4.07 (m, 4H), 3.67 - 3.49 (m, 5H), 3.48 - 3.39 (m, 2H), 3.18 - 3.14 (m, 1H), 2.93 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.56 - 1.45 (m, 2H), 1.39 - 1.32 (m, 11H), 1.32 - 1.24 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, MeOD) δ 157.20, 138.17, 128.56, 127.69, 126.10, 103.60, 102.87, 100.86, 79.81, 78.45, 75.91, 75.74, 74.62, 73.23, 72.10, 71.38, 70.17, 69.68, 68.78, 67.01, 39.91, 29.25, 29.02, 27.44, 22.90。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＮａ＋） Ｃ２９Ｈ４４Ｎ２Ｏ１４Ｎａ＋についての計算値６６７．２６８５、実測値６６７．２７２６。
Ｓ１０（４０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＨ２Ｏ中９０％ＴＦＡで処置し、２時間撹拌した。反応溶液を逆相カラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８）により濃縮及び精製し、ラクトース誘導体１５（２２ｍｇ、７８％）を産した。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−ニトロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１５）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.56 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 3.86 - 3.65 (m, 8H), 3.57 (dd, J = 9.9, 7.9 Hz, 1H), 3.35 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 3.04 - 2.97 (m, 2H), 1.66 (m, 4H), 1.47 - 1.38 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 105.84, 104.88, 82.22, 78.46, 78.25, 76.89, 75.36, 75.24, 73.91, 73.53, 73.37, 71.21, 63.71, 42.06, 30.93, 29.09, 24.76。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ１７Ｈ３２Ｎ２Ｏ１２Ｈ＋についての計算値４５７．２０２８、実測値４５７．２０３６。
化合物３３、３４、３５、３６、３７を報告された手順により合成した。２
Ｇｂ３−Ｌａｃ誘導体の合成
反応を、１５ｍＬ遠心管中で、Ｌａｃ誘導体（１０−１５ｍｇ）、ガラクトース（１．０当量）、ＰＥＰ（４．４当量）、ＡＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＵＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）、α−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＬｇｔＣ、３．０ユニット）、ガラクトキナーゼ（ＧａｌＫ、２．０ユニット）、ＵＤＰ−糖ピロホスホリラーゼ（ＡｔＵＳＰ、２．８ユニット）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ、２．５ユニット）、及びピロホスファターゼ（ＰＰＡ、２．５ユニット）を含有する５．０ｍＬトリス−ＨＣｌ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）で実施した。反応混合物を、室温で一晩振盪しながら（３００ｒｐｍ）インキュベートした。反応を、５：３：２ブタノール／アセテート／水を展開溶媒として用いるＴＬＣ分析によりモニターし、プレートをエタノール中のアニスアルデヒドで染色した。管を温浴（８０℃）に１０分間入れ、続いて遠心分離（１００００ｒｐｍ、１５分間）し、上清を真空中で濃縮した。次いで、水性の残渣をＣ−１８ゲルクロマトグラフィーにより精製し、１００％Ｈ２ＯからＨ２Ｏ中８０％メタノールの勾配で溶離した。生成物を含有する画分のみを回収し、凍結乾燥し、ＮＭＲ分光法及びＨＲＭＳにより特性を明らかにした。
Ｇｂ４−Ｌａｃ誘導体の合成
反応を、１５ｍＬ遠心管中で、Ｇｂ３誘導体（８−１２ｍｇ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧＡｌＮＡｃ、１．１当量）、ＰＥＰ（４．４当量）、ＡＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＵＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）、β−１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β１，３ＧａｌＮＡｃＴ、ＬｇｔＤ、３．５ユニット）、Ｎ−アセチルヘキソサミン１−キナーゼ（ＮａｈＫ、５．０ユニット）、Ｎ−アセチルグルコサミン１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ（ＧｌｍＵ、３．０ユニット）、ＰＫ（２．５ユニット）、ＰＰＡ（２．５ユニット）を含有する３．０ｍＬトリス−ＨＣｌ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）で達成した。反応混合物を、室温で一晩振盪しながら（３００ｒｐｍ）インキュベートした。反応を、５：３：２ブタノール／アセテート／水を展開溶媒として用いるＴＬＣ分析によりモニターし、プレートをエタノール中のアニスアルデヒドで染色した。管を温浴（８０℃）に１０分間入れ、続いて遠心分離（１００００ｒｐｍ、１５分間）し、上清を真空中で濃縮した。次いで、水性の残渣をＣ−１８ゲルクロマトグラフィーにより精製し、１００％Ｈ２ＯからＨ２Ｏ中８０％メタノールの勾配で溶離した。生成物を含有する画分のみを回収し、凍結乾燥し、ＮＭＲ分光法及びＨＲＭＳにより特性を明らかにした。
Ｇｂ５−Ｌａｃ誘導体の合成
反応を、１５ｍＬ遠心管中で、Ｇｂ４誘導体（５−８ｍｇ）、ガラクトース（１．１当量）、ＰＥＰ（４．４当量）、ＡＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＵＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）、β−１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ（β１，３ＧａｌＴ、ＬｇｔＤ、５．０ユニット）、ＧａｌＫ（２．５ユニット）、ＡｔＵＳＰ（４．０ユニット）、ＰＫ（２．５ユニット）、及びＰＰＡ（２．５ユニット）を含有する３．０ｍＬトリス−ＨＣｌ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）で実施した。反応混合物を、室温で一晩振盪しながら（３００ｒｐｍ）インキュベートした。反応を、３：２：２ブタノール／アセテート／水を展開溶媒として用いるＴＬＣ分析によりモニターし、プレートをエタノール中のアニスアルデヒドで染色した。管を温浴（８０℃）に１０分間入れ、続いて遠心分離（１００００ｒｐｍ、１５分間）し、上清を真空中で濃縮した。次いで、水性の残渣をＣ−１８ゲルクロマトグラフィーにより精製し、１００％Ｈ２ＯからＨ２Ｏ中７０％メタノールの勾配で溶離した。生成物を含有する画分のみを回収し、凍結乾燥し、ＮＭＲ分光法及びＨＲＭＳにより特性を明らかにした。
Ｇｌｏｂｏ Ｈ−Ｌａｃ誘導体又はＧｌｏｂｏ Ｈ−Ｆｕｃ誘導体の合成
反応を、１５ｍＬ遠心管中で、Ｇｂ５誘導体（４−６ｍｇ）、Ｌ−フコース又はそれらの誘導体（１．２当量）、ＰＥＰ（４．４当量）、ＡＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＧＴＰ二ナトリウム塩（０．１当量）、ＭｇＣｌ２（１０ｍＭ）、α−１，２−フコシルトランスフェラーゼ（ＦｕｔＣ、３．０ユニット）、Ｌ−フコキナーゼ／ＧＤＰ−フコースピロホスホリラーゼ（ＦＫＰ）、ＰＫ（２．５ユニット）、及びＰＰＡ（２．５ユニット）を含有する３．０ｍＬトリス−ＨＣｌ緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）で実施した。反応混合物を、室温で一晩振盪しながら（３００ｒｐｍ）インキュベートした。反応を、３：２：２ブタノール／アセテート／水を展開溶媒として用いるＴＬＣ分析によりモニターし、プレートをエタノール中のアニスアルデヒドで染色した。管を温浴（８０℃）に１０分間入れ、続いて遠心分離（１００００ｒｐｍ、１５分間）し、上清を真空中で濃縮した。次いで、水性の残渣をＣ−１８ゲルクロマトグラフィーにより精製し、１００％Ｈ２ＯからＨ２Ｏ中８０％メタノールの勾配で溶離した。生成物を含有する画分のみを回収し、凍結乾燥し、ＮＭＲ分光法及びＨＲＭＳにより特性を明らかにした。

５−アミノペンチルα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１６）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.97 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.94 - 4.70 (m, 1H), 4.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 7.9, 3.2 Hz, 2H), 3.98 - 3.64 (m, 14H), 3.60 (dd, J = 10.3, 7.8 Hz, 1H), 3.33 (dd, J = 9.3, 8.1 Hz, 1H), 2.92 (m,2H), 1.76 - 1.64 (m, 4H), 1.52 - 1.42 (m, 2H)。19F NMR (470 MHz, CDCl3) δ -234.92 (td, J = 47.0, 32.9 Hz)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 103.29, 102.15, 100.31, 81.94, 80.82, 77.40, 77.36, 75.40, 74.29, 73.35, 73.23, 72.87, 72.15, 70.87, 70.81, 70.25, 69.13, 68.92, 68.53, 60.49, 60.38, 39.37, 28.17, 26.55, 22.07。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２３Ｈ４２ＦＮＯ１５Ｈ＋についての計算値５９２．２６１１、実測値５９２．２６２０。

５−アミノペンチルα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−アジド−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１７）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.97 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 7.6, 3.0 Hz, 2H), 4.00 - 3.56 (m, 16H), 3.34 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 3.01 - 2.94 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.72 - 1.66 (m, 4H), 1.49 - 1.43 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 106.16, 104.71, 103.03, 82.33, 80.03, 78.20, 77.04, 76.44, 75.62, 74.89, 73.61, 73.55, 72.99, 71.87, 71.66, 71.28, 63.23, 63.10, 53.12, 42.21, 30.97, 29.78, 24.88。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２３Ｈ４２Ｎ４Ｏ１５Ｈ＋についての計算値６１５．２７１９、実測値６１５．２７３４。

５−アミノペンチルα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−フェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１８）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 7.43 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.11 (m, 3H), 4.94 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 10.9, 3.5 Hz, 1H), 4.35 (m, 2H), 4.04 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 8H), 3.79 - 3.65 (m, 4H), 3.65 - 3.48 (m, 3H), 3.37 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 2.98 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.68 (s, 4H), 1.47 (dd, J = 14.6, 7.4 Hz, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 160.54, 132.68, 124.56, 117.82, 105.93, 104.97, 103.00, 80.47, 80.05, 78.23, 77.13, 75.83, 75.73, 74.84, 73.54, 73.43, 72.92, 71.85, 71.65, 71.26, 68.62, 63.23, 63.15, 42.12, 30.93, 29.34, 24.81。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２９Ｈ４７ＮＯ１６Ｈ＋についての計算値６６６．２９６８、実測値６６６．２９７９。

５−アミノペンチルα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１９）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 8.29 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 4.94(d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.59 - 4.50 (m, 3H), 4.37 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.34(t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.84 (m, 4H), 3.84 - 3.66 (m, 4H), 3.73 - 3.66 (m, 5H), 3.60 - 3.53 (m, 2H), 3.39 - 3.36 (m, 1H), , 2.97 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.68 - 1.63 (m, 4H), 1.46 - 1.41 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 166.28, 144.25, 128.97, 117.83, 106.20, 104.97, 102.99, 80.82, 79.96, 78.25, 77.13, 75.68, 75.56, 74.86, 73.54, 73.43, 72.93, 71.85, 71.65, 71.25, 69.09, 63.22, 63.12, 42.15, 30.94, 29.56, 24.84。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２９Ｈ４６Ｎ２Ｏ１８Ｈ＋についての計算値７１１．２８１８、実測値７１１．２８００。

５−アミノペンチルα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−ニトロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２０）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.96 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.54 (m, 2H), 4.36 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.05 - 4.03 (m, 2H), 3.99 - 3.51 (m, 15H), 3.32 (m, 1H), 3.00 (m, 2H), 1.68 - 1.60 (m, 4H), 1.46 - 1.40 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 102.70, 101.73, 100.04, 79.37, 76.98, 75.20, 73.91, 72.59, 71.80, 70.45, 70.40, 70.34, 69.95, 68.86, 68.61, 68.32, 65.87, 60.19, 60.13, 52.12, 39.71, 29.10, 28.16, 22.00。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ２３Ｈ４２Ｎ２Ｏ１７Ｈ＋についての計算値６１９．２５５６、実測値６１９．２５５９。

５−アミノペンチル２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２１）
[0100] 1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.93 (d, J =3.9 Hz, 1H), 4.92-4.74 (m, 2H), 4.75 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.02 - 3.64 (m, 18H), 3.62 (dd, J = 10.2, 7.8 Hz, 1H), 3.34 (m, 1H), 2.99 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.75 - 1.64 (m, 4H), 1.55 - 1.43 (m, 2H)。19F NMR (471 MHz, D2O) δ -234.84 (td, J = 47.0, 32.9 Hz)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.91, 106.06, 105.95, 104.89, 103.15, 84.69, 83.57, 81.42, 80.22, 80.18, 79.97, 78.16, 77.68, 77.05, 76.10, 75.98, 75.65, 74.85, 73.59, 73.52, 73.03, 71.67, 70.50, 70.35, 63.74, 63.11, 63.07, 55.35, 42.19, 30.95, 29.68, 24.99, 24.85。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３１Ｈ５５ＦＮ２Ｏ２０Ｈ＋についての計算値７９５．３４０５、実測値７９５．３４２９。

５−アミノペンチル２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−アジド−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２２）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.94 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.02 - 3.57 (m, 22H), 3.35 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 2.99 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.76 - 1.63 (m, 4H), 1.48 (dt, J = 15.5, 7.7 Hz, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.91, 106.19, 105.95, 104.72, 103.13, 82.41, 81.43, 79.90, 78.23, 77.68, 77.07, 76.44, 75.66, 74.85, 73.59, 73.53, 73.00, 72.99, 71.67, 70.50, 70.34, 63.74, 63.11, 63.05, 55.36, 53.13, 42.17, 30.97, 29.57, 24.99, 24.88。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３１Ｈ５５Ｎ５Ｏ２０Ｈ＋についての計算値８１８．３５１３、実測値８１８．３５４３。

５−アミノペンチル２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−フェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（２３）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.08 (m, 3H), 4.89 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.47 - 4.31 (m, 4H), 4.25 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.00 - 3.84 (m, 9H), 3.84 - 3.67 (m, 9H), 3.67 - 3.45 (m, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.66 (m, 4H), 1.44 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.92, 160.53, 132.66, 124.54, 117.79, 105.96, 105.95, 104.96, 103.10, 81.41, 80.58, 79.91, 78.24, 77.67, 77.15, 75.83, 75.77, 75.58, 74.80, 73.52, 73.40, 72.99, 72.90, 71.67, 70.50, 70.33, 68.64, 63.74, 63.10, 55.34, 42.06, 30.92, 29.13, 25.00, 24.80。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３７Ｈ６０Ｎ２Ｏ２１Ｈ＋についての計算値８６９．３７６１、実測値８６９．３７９５。

５−アミノペンチル２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（２４）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 8.29 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 4.90 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.56 (m, 3H), 4.41 - 4.33 (m, 2H), 4.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.02 - 3.74 (m, 13H), 3.73 - 3.63 (m, 7H), 3.61 - 3.52 (m, 2H), 3.38 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 2.87 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.66 - 1.59 (m, 4H), 1.44 - 1.40 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.90, 166.28, 144.25, 128.97, 117.83, 106.20, 105.93, 104.97, 103.10, 81.39, 80.92, 79.85, 78.27, 77.68, 77.16, 75.72, 75.57, 74.83, 73.52, 73.42, 73.00, 72.89, 71.66, 70.50, 70.32, 69.11, 63.74, 63.10, 55.36, 42.08, 30.94, 29.20, 24.99, 24.82。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３７Ｈ５９Ｎ３Ｏ２３Ｈ＋についての計算値９１４．３６１２、実測値９１４．３６０９。

５−アミノペンチル２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−ニトロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２５）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.96 - 4.90 (m, 1H), 4.68 - 4.50 (m, 4H), 4.39 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 9.6, 2.9 Hz, 1H), 4.01 - 3.64 (m, 19H), 3.64 - 3.53 (m, 1H), 3.38 - 3.29 (m, 1H), 3.07 - 2.91 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.70 - 1.60 (m, 4H), 1.47 - 1.40 (m, 2H)。13C NMR (150 Hz, D2O) δ 175.16, 103.45, 103.22, 102.10, 100.37, 79.82, 78.70, 77.08, 75.53, 74.92, 74.24, 72.71, 72.08, 71.09, 70.77, 70.75, 70.60, 70.25, 68.91, 67.74, 67.58, 60.98, 60.35, 60.24, 52.59, 39.31, 39.29, 28.18, 26.37, 22.23, 22.01。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３１Ｈ５５Ｎ３Ｏ２２Ｈ＋についての計算値８２２．３３５０、実測値８２２．３３５７。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２６）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.97 - 4.84 (m, 2H), 4.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.19 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 4.11 - 4.03 (m, 2H), 3.95 (m, 6H), 3.91 - 3.50 (m, 18H), 3.33 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.70-1.67 (m, 4H), 1.54 - 1.33 (m, 2H)。19F NMR (471 MHz, D2O) δ -234.85 (td, J = 47.0, 28.2 Hz)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 175.11, 104.79, 103.31, 102.89, 102.13, 100.38, 81.92, 80.80, 79.55, 78.63, 77.45, 77.41, 77.19, 75.40, 74.98, 74.59, 74.29, 73.34, 73.22, 72.89, 72.43, 72.08, 72.03, 70.82, 70.57, 70.28, 70.25, 68.90, 68.55, 67.97, 67.58, 62.45, 60.98, 60.94, 60.34, 60.31, 51.48, 39.43, 28.19, 26.91, 22.25, 22.09。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３７Ｈ６５ＦＮ２Ｏ２５Ｈ＋についての計算値９５７．３９３３、実測値９５７．３９６９。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−アジド−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２７）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.94 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.21 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.16 - 4.04 (m, 2H), 4.04 - 3.89 (m, 7H), 3.89 - 3.51 (m, 19H), 3.35 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.02 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.79 - 1.68 (m, 4H), 1.49 - 1.47 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 180.40, 110.09, 108.73, 108.18, 107.26, 105.66, 84.95, 84.85, 83.94, 82.43, 80.76, 80.27, 79.89, 79.61, 78.98, 78.20, 77.73, 77.38, 76.13, 75.87, 75.55, 75.50, 74.20, 73.85, 73.26, 72.87, 66.28, 66.23, 65.64, 65.59, 56.78, 55.67, 44.64, 33.48, 31.75, 27.55, 27.39。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３７Ｈ６５Ｎ５Ｏ２５Ｈ＋についての計算値９８０．４０４１、実測値９８０．４０８０。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−フェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（２８）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 7.43 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 8.2 Hz, 3H), 4.91 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.71 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 5H), 4.26 (s, 1H), 4.20 (a, 1H), 4.09 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 3.98 - 3.63 (m, 22H), 3.59 - 3.51 (m, 3H), 3.39 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 2.91 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.67 (m, 4H), 1.45 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.87, 160.55, 132.68, 124.57, 117.82, 107.55, 105.96, 105.64, 104.97, 103.10, 82.31, 81.37, 80.57, 79.91, 78.24, 77.74, 77.34, 77.15, 75.83, 75.77, 75.20, 74.79, 73.40, 73.33, 73.00, 71.66, 71.31, 70.72, 70.32, 68.65, 65.21, 63.74, 63.69, 63.10, 54.23, 42.28, 31.01, 30.15, 25.01, 24.87。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３ Ｈ７０ Ｎ２ Ｏ２６ ＋Ｈ：についての計算値１０３１．４２９０、実測値１０３１．４３００。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（２９）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 8.30 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 4.91 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 5.8 Hz, 3H), 4.47 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 2H), 4.26 (s, 1H), 4.20 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.93 - 3.62 (m, 21H), 3.59 - 3.53 (m, 3H), 3.38 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.58 (m, 4H), 1.42 - 1.25 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 175.10, 163.52, 141.49, 126.21, 115.07, 104.80, 103.47, 102.87, 102.22, 100.34, 79.55, 78.60, 78.15, 77.07, 75.52, 74.98, 74.59, 74.39, 72.97, 72.81, 72.44, 72.06, 70.65, 70.57, 70.24, 70.20, 68.90, 68.55, 67.97, 67.56, 66.35, 60.98, 60.94, 60.33, 51.49, 39.41, 28.21, 26.92, 22.26, 22.10。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ６９Ｎ３Ｏ２８Ｈ＋についての計算値１０７６．４１４０、実測値１０７６．４１３５。

５−アミノペンチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−ニトロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（３０）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.93 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 4.60 - 4.51 (m, 2H), 4.47 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.43 - 4.28 (m, 2H), 4.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 3H), 3.97 - 3.49 (m, 22H), 3.41 - 3.28 (m, 1H), 3.01 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.86 - 1.55 (m, 4H), 1.63 - 1.25 (m, 3H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 175.10, 104.79, 103.45, 102.91, 102.09, 100.36, 79.83, 79.54, 78.67, 77.06, 75.53, 74.98, 74.59, 74.24, 72.71, 72.43, 72.08, 71.15, 71.09, 70.78, 70.61, 70.57, 70.26, 68.89, 68.54, 67.96, 67.58, 60.97, 60.93, 60.34, 60.23, 51.47, 39.29, 28.19, 26.35, 22.26, 22.01。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ３７Ｈ６５Ｎ３Ｏ２７Ｈ＋についての計算値９８４．３８７８、実測値９８４．３８６４。

５−アミノペンチルα−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 4.84-4.74 (m, 1H), 4.65 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.07 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.13 - 3.64 (m, 32H), 3.34 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 2.99 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.75 - 1.64 (m, 4H), 1.55 - 1.43 (m, 2H)。19F NMR (470 MHz, CDCl3) δ -234.87 (td, J = 47.0, 32.9 Hz)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 174.28, 103.95, 103.33, 102.15, 102.04, 100.45, 99.27, 81.94, 81.72, 80.83, 78.23, 77.49, 77.46, 77.21, 76.36, 76.11, 75.46, 75.07, 74.63, 74.31, 73.58, 73.36, 73.24, 72.91, 72.10, 71.85, 70.83, 70.29, 70.16, 69.52, 69.18, 69.11, 68.48, 68.02, 67.83, 66.79, 60.98, 60.96, 60.36, 51.65, 39.43, 28.21, 26.84, 22.25, 22.10, 15.31。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ７５ＦＮ２Ｏ２９Ｈ＋についての計算値１１０３．４５１２、実測値１１０３．４５４９。

５−アミノペンチルα−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−アジド−６−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物３）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.26 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 4.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.34 - 4.23 (m, 2H), 4.13 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.09 - 3.57 (m, 31H), 3.35 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.06 - 2.99 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.77 - 1.63 (m, 4H), 1.53 - 1.41 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.02, 106.70, 106.20, 104.79, 104.72, 103.18, 102.02, 82.42, 80.99, 79.88, 79.11, 78.85, 78.27, 77.81, 77.37, 77.07, 76.44, 76.33, 75.66, 74.84, 74.59, 73.57, 72.96, 72.89, 72.26, 71.91, 71.85, 71.22, 70.77, 70.56, 69.53, 63.73, 63.70, 63.10, 54.39, 53.13, 42.09, 30.94, 29.17, 24.99, 24.85, 18.05。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ７５Ｎ５Ｏ２９Ｈ＋についての計算値１１２６．４６２０、実測値１１２６．４６３９。

５−アミノペンチルα−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−フェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物４）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 7.43 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.11 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 5.26 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.45 - 4.34 (m, 3H), 4.27 - 4.24 (m, 2H), 4.13 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.06 - 3.62 (m, 27H), 3.58 - 3.50 (m, 2H), 3.39 (dd, J = 9.3, 8.2 Hz, 1H), 2.91 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.73 - 1.60 (m, 4H), 1.51 - 1.39 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 174.28, 157.80, 129.93, 121.82, 115.08, 103.95, 103.24, 102.23, 102.05, 100.40, 99.28, 78.22, 77.85, 77.14, 76.36, 76.11, 75.54, 75.07, 74.62, 74.42, 73.58, 73.09, 73.04, 72.05, 71.85, 70.64, 70.28, 70.13, 69.52, 69.17, 69.11, 68.48, 68.02, 67.81, 66.78, 65.91, 60.98, 60.95, 60.38, 60.35, 51.64, 39.56, 28.27, 27.49, 22.25, 22.13, 15.31。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４９Ｈ８０Ｎ２Ｏ３０Ｈ＋についての計算値１１７７．４８６９、実測値１１７７．４９１８。

５−アミノペンチルα−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 8.30 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.26 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.60 (m, 3H), 4.39 (m, 2H), 4.25 - 4.21 (m, 1H), 4.13 (s, 1H), 4.01- 3.65 (m, 28H), 3.59 - 3.56 (m, 3H), 3.45 - 3.35 (m, 1H), 2.94 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.66 - 1.62 (m, 4H), 1.44 - 1.42 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.03, 166.29, 144.26, 128.97, 117.83, 106.69, 106.25, 104.98, 104.79, 103.15, 102.02, 80.94, 79.82, 79.10, 78.85, 78.31, 77.81, 77.37, 77.16, 76.32, 75.73, 75.56, 74.82, 74.78, 74.59, 73.40, 72.97, 72.88, 72.26, 71.91, 71.86, 71.22, 70.77, 70.55, 69.53, 69.12, 65.21, 63.73, 63.70, 63.09, 54.39, 42.19, 30.97, 24.99, 24.86, 18.05。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４９Ｈ７９Ｎ３Ｏ３２Ｈ＋についての計算値１２２２．４７１９、実測値１２２２．４７２９。

５−アミノペンチルα−Ｌ−フコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−６−デオキシ−６−ニトロ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物６）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.26 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.69 - 4.52 (m, 5H), 4.42 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.26 (m, 2H), 4.13 (s, 1H), 4.12 - 3.62 (m, 28H), 3.57 (m, 1H), 3.34 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 3.02 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.80 - 1.62 (m, 4H), 1.47 (dt, J = 22.4, 7.5 Hz, 2H), 1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ７５Ｎ３Ｏ３１Ｈ＋についての計算値１１３０．４４５７、実測値１１３０．４４３８。

５−アミノペンチルα−Ｌ−ガラクトピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物７）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.40 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 2H), 4.15 - 3.56 (m, 34H), 3.33 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 2.97 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.74 - 1.66 (m, 4H), 1.49 - 1.42(m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 174.45, 103.70, 103.30, 102.02, 101.95, 100.42, 98.45, 78.77, 78.40, 77.16, 76.09, 75.47, 75.15, 74.79, 74.58, 74.52, 74.50, 73.71, 72.93, 72.09, 70.85, 70.24, 70.14(2C), 69.44, 69.20, 69.17, 69.06, 68.43, 68.28, 67.75, 61.76, 60.96, 60.89, 60.33, 60.03, 51.49, 39.47, 28.20, 27.12, 22.30, 22.12。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ７６Ｎ２Ｏ３１Ｈ＋についての計算値１１１７．４５０５、実測値１１１７．４４８８。

５−アミノペンチル６−アジド−６−デオキシ−α−Ｌ−ガラクトピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物８）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.46 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 2H), 4.18 (s, 1H), 4.09 - 3.59 (m, 32H), 3.33 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 2.99 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.78 - 1.64 (m, 4H), 1.55 - 1.44 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 174.36, 103.87, 103.30, 102.29, 101.95, 100.42, 98.41, 78.79, 78.35, 77.17, 76.95, 75.48, 75.11, 74.79, 74.67, 74.53, 74.43, 73.85, 72.93, 72.09, 70.85, 70.15, 70.12, 69.67, 69.61, 69.14, 69.08, 69.05, 68.56, 68.02, 67.78, 60.95, 60.91, 60.33, 60.04, 51.40, 51.25, 39.44, 28.19, 26.96, 22.32, 22.10。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ７５Ｎ５Ｏ３０Ｈ＋についての計算値１１４２．４５７０、実測値１１４２．４５６９。

５−アミノペンチル６−デオキシ−６−フルオロ−α−Ｌ−ガラクトピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物９）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.40 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.64 - 4.60 (m, 2H), 4.57 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.39 (m, 2H), 4.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.09 - 3.56 (m, 31H), 3.32 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 2.99 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.71 - 1.66 (m, 4H), 1.49 - 1.44 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 174.38, 103.84, 103.30, 102.05, 101.95, 100.43, 98.98, 83.96, 82.86, 78.79, 78.27, 77.16, 76.69, 75.65, 75.48, 75.09, 74.79, 74.52, 74.47, 73.65, 72.93, 72.09, 70.85, 70.14, 70.12, 69.11, 68.96, 68.36, 68.05, 67.80, 60.95, 60.90, 60.34, 60.03, 51.45, 39.43, 28.18, 26.89, 22.28, 22.10。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４３Ｈ７５ＦＮ２Ｏ３０Ｈ＋についての計算値１１１９．４４６１、実測値１１１９．４４５９。

５−アミノペンチル６−アセチレニル−６−デオキシ−α−Ｌ−ガラクトピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１０）
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 5.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 4.64 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.17 - 4.13 (m, 2H), 4.05 - 3.58 (m, 32H), 3.32 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 3.02 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.77 - 1.64 (m, 4H), 1.53 - 1.43 (m, 2H)。13C NMR (150 MHz, D2O) δ 177.06, 106.53, 106.04, 104.69, 104.60, 103.17, 102.13, 81.52, 80.89, 79.91, 79.26, 78.87, 78.79, 78.22, 77.88, 77.54, 77.27, 77.19, 76.13, 75.67, 74.83, 74.77, 73.69, 73.59, 72.89, 72.81, 71.86, 71.83, 71.28, 71.19, 70.59, 70.21, 65.69, 65.19, 63.68, 63.64, 63.08, 62.77, 54.26, 42.06, 30.89, 29.13, 25.00, 24.81。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ、ＭＨ＋） Ｃ４４Ｈ７４Ｎ２Ｏ３０Ｈ＋についての計算値１１１１．４３９９、実測値１１１１．４３９７。
例５：ＧＨ誘導体ＤＴ−コンジュゲートの免疫原性研究
ＧＨ誘導体ＤＴ−コンジュゲート（１−ＤＴ〜１０−ＤＴ）の免疫原性を調査するために、５匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスを、２μｇのＧＨ誘導体ＤＴ−コンジュゲート及び２μｇの糖脂質アジュバントＣ３４で、隔週の間隔で３回、筋肉内に免疫化した。以前の研究において、アジュバントを含まないＧＨ−タンパク質コンジュゲート単独での抗ＧＨ抗体力価は低かった。１３ｂ各免疫原からの抗血清を３回目の免疫化の１０日後に得て、ＧＨ１、ＧＨ誘導体２−１０、ＧＨ誘導体フラグメント１１−３０及び他の腫瘍関連炭水化物抗原（ＳＩの表Ｓ１）を含む、９４の化学合成グリカンを含有するグリカンマイクロアレイ上で試験した。いくつかの化学的改変がグリカン上で行われたので、いくつかの官能性リンカーもまた、交差反応性を検査するグリカンアレイに含まれた。
ＧＨ誘導体ＤＴ−コンジュゲート（１−ＤＴ〜１０−ＤＴ）により誘導された抗体は、ＧＨ、ＧＨ誘導体及びＧＨフラグメントによって特異的に認識されたが、他のＴＡＣＡｓ及び官能性リンカーによっては認識されなかった。ＧＨ、Ｇｂ５及びＳＳＥＡ４を、全てのＤＴ−コンジュゲートの標準抗原として選択した（図１Ａ−１Ｃ）。これらの複合糖質から得られた血清は、高いＩｇＧ抗体力価を誘導した。これは、Ｔ−細胞依存性免疫応答を示唆する。興味深いことに、全てのＧＨ−Ｌａｃ又はＦｕｃ誘導体について、顕著なＩｇＭ生成は観察されなかった。ＧＨに対するＩｇＧレベルに関して、ＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）及びＮ３−ＧＨ−ＤＴ（８−ＤＴ）により誘導された抗体の力価は、天然型ＧＨ−ＤＴコンジュゲート（１−ＤＴ）よりもはるかに高く、ＧＨ−Ｆ−ＤＴ（２−ＤＴ）及びＧＨ−フェニル−ＤＴ（４−ＤＴ）により誘導された抗体の力価は、天然型ＧＨ−ＤＴコンジュゲート（１−ＤＴ）と同等であった。ＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）及びＮ３−ＧＨ−ＤＴ（８−ＤＴ）が良好な力価を提供するため、アジド基は免疫モジュレーターであるようである。免疫原性の強化の理由は不明であるが、天然ＧＨと比較して、ＧＨ−Ｎ３ ３又はＮ３−ＧＨ ８のグリカンのＮ３特性が、決定的役割を果たす可能性がある。ＧＨ上のフルオロ（Ｆ）基による免疫原性変調は、位置選択的である。１９ｃ、３３ＧＨの還元末端のＧｌｃのＣ−６位にあるＦ部分は、天然ＧＨと同等の力価を誘導することができたが、ＧＨの非還元末端のＦｕｃのＣ−６位にあるＦ基により誘導された力価は、ＧＨとのより低い反応を示した。興味深いことに、ＧＨ−フェニル−ＤＴ（４−ＤＴ）により誘導された抗体は、ＧＨと交差反応することができる。この交差免疫原性は、Ｎ−フェニルアセチルＧＭ３又はＳＴｎベースのワクチンの使用により、天然ＧＭ３及びＳＴｎの交差反応が形成されなかった、という以前の報告と一致しない。１９ａ、２０免疫原ＧＨ−フェニルＮＯ２−ＤＴ（５−ＤＴ）、ＧＨ−ＮＯ２−ＤＴ（６−ＤＴ）、ＯＨ−ＧＨ−ＤＴ（７−ＤＴ）、Ｆ−ＧＨ−ＤＴ（９−ＤＴ）及びアセチレニル−ＧＨ−ＤＴ（１０−ＤＴ）は、ＧＨに対し弱い応答を示した。さらに、ＧＨ−フェニルＮＯ２−ＤＴ（５−ＤＴ）及びＧＨ−ＮＯ２−ＤＴ（６−ＤＴ）は、フェニルＮＯ２及びＮＯ２糖アナログに対する強い免疫応答を誘発したが、天然型ＧＨアナログに対しては誘発しなかった。この結果も、ＴＮＦ−αの単一のｐ−フェニルＮＯ２突然変異が野生型ＴＮＦ−αを認識する強力な抗体を誘導する、という以前の報告と一致しない。２１ａ興味深いことに、これらの複合糖質により誘導された抗体も、Ｇｂ５及びＳＳＥＡ４の認識において同一のパターンを示した（図１Ｂ−１Ｃ）。それ故に、Ｇｌｏｂｏ Ｈの還元末端グルコースのＣ−６位の、フルオロ、アジド又はフェニル基による改変が、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、Ｇｂ５及びＳＳＥＡを特異的に認識する強力なＩｇＧ抗体応答を誘発した、と我々は結論づけた。しかしながら、非還元末端フコースのＣ−６位の、アジド基によるＧｌｏｂｏ Ｈの改変のみが、強いＩｇＧ免疫応答を誘発することができた。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Lee et al., J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 16844-16853を参照されたい。
グリカンアレイを用いたこれらのワクチンからの抗血清のＩｇＧサブクラスの抗体アイソタイプのさらなる分析は、顕著な量のＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ及びＩｇＧ３及び低いレベルのＩｇＧ２ａを抗体が有することを示した。さらに、ＩｇＧ１サブクラスは、高いレベルのＩｇＧ３抗体を有する抗血清において最も高く、これは典型的な抗炭水化物応答であり、Ｔ細胞介在免疫性と一致している。
ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）、ＧＨ−Ｆ−ＤＴ（２−ＤＴ）、ＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）、ＧＨ−フェニル−ＤＴ（４−ＤＴ）及びＮ３−ＧＨ−ＤＴ（８−ＤＴ）により誘導されたマウス抗血清の、ＧＨ発現ＭＣＦ７ヒト乳がん細胞株を認識する能力を、フローサイトメトリーにより調べた（図２）。予想されたとおり、ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）により誘導された抗血清は、未処置マウスからの抗血清と比較して、ＧＨ陽性ＭＣＦ７細胞と顕著に反応性であった。ＭＣＦ７細胞はまた、ＧＨ誘導体−ＤＴ（２−ＤＴ、３−ＤＴ、４−ＤＴ及び８−ＤＴ）により誘発された抗血清によっても、特異的に認識された。
例６：ＧＨ誘導体ＤＴ−コンジュゲートの補体依存性細胞傷害
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を、ＧＨ発現ＭＣＦ７がん細胞によって試験した（図３）。ＭＣＦ−７細胞を、９６穴細胞培養プレートに、１ウェルあたり１０４細胞の密度で播種した。３７℃で一晩培養した後、培地を１００μＬの抗血清／補体混合物で置き換え、次いで３７℃で２時間インキュベートした。抗血清／補体混合物を調製するために、抗血清を、２０％のウサギ補体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した培地中に２０倍希釈した。インキュベートに続いて、抗血清により誘導された細胞傷害を、ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｆｉｔｃｈｂｕｒｇ、ＷＩ）を用い、製造者の指示にしたがって測定した。抗血清により誘導された細胞傷害の相対的倍数を、未処置Ｂｌａｂ／ｃマウスからの血清により引き起こされた細胞傷害に対して正規化した。
ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）、ＧＨ−Ｆ−ＤＴ（２−ＤＴ）、ＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）、ＧＨ−フェニル−ＤＴ（４−ＤＴ）及びＮ３−ＧＨ−ＤＴ（８−ＤＴ）での免疫化から得られた抗血清は、未処置マウスからの血清と比較して、がん細胞の細胞傷害を顕著に誘導することができた。ＧＨ−フェニル−ＤＴ（４−ＤＴ）及びＮ３−ＧＨ−ＤＴ（８−ＤＴ）から得られた抗血清の、細胞の細胞傷害は、天然型ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）と同等であった。興味深いことに、ＧＨ−Ｆ−ＤＴ（２−ＤＴ）又はＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）ワクチンに由来する抗血清は、ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）と比較して、１５％を超える高いがん細胞の細胞傷害を誘導することができた。このことは、これらの誘導体が、より良好な治療用ワクチンとして使用される可能性があることを示唆する。
本発明は、ＧＨ誘導体及びそれらの免疫原性コンジュゲートの化学的酵素的合成のための戦略を確立した。ＧＨ誘導体コンジュゲートの免疫学的特性を、グリカンアレイを用いて評価し、天然型ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）と比較した。この結果は、フルオロ、アジド又はフェニル基によるＧｌｏｂｏ Ｈの還元末端の改変が、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、Ｇｂ５及びＳＳＥＡ４を特異的に認識する強いＩｇＧ抗体応答を誘発したが、Ｇｌｏｂｏ Ｈのアジド−フコース誘導体のみが強いＩｇＧ免疫応答を誘発することができたことを示した。さらに、ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）、ＧＨ−Ｆ−ＤＴ（２−ＤＴ）、ＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）、ＧＨ−フェニル−ＤＴ（４−ＤＴ）及びＮ３−ＧＨ−ＤＴ（８−ＤＴ）により誘導された抗体が、ＧＨ発現腫瘍細胞（ＭＣＦ−７）を認識し、腫瘍細胞に対する補体依存性の細胞の細胞傷害を介在することができた。ＧＨ−Ｆ−ＤＴ（２−ＤＴ）及びＧＨ−Ｎ３−ＤＴ（３−ＤＴ）ワクチンは、ＧＨ−ＤＴ（１−ＤＴ）と比較してより高いがん細胞の細胞傷害を有し、炭水化物抗原構造の改変に基づく新世代のワクチンを提供する。
一般的方法、材料及び器具類
全ての化学物質及び試薬は、Ａｃｒｏｓ、Ｅｃｈｏ ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｍｅｒｃｋ Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａから購入し、さらに精製することなく使用した。空気又は水分感受性試薬又は中間体が関与する全ての反応は、アルゴン雰囲気下で実施した。分子ふるい４Å（Ａｃｒｏｓ）は、高真空下で、ヒーターで乾燥させた。反応の進行は、シリカゲル６０ Ｆ２５４プレート（２ｍｍ、Ｍｅｒｃｋ）上の薄層クロマトグラフィーによりモニターし、酸性モリブデン酸アンモニウムセリウム又はｐ−アニスアルデヒドで染色することにより、ＵＶ照明下で視覚化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、シリカゲル（４０−６３μｍ、Ｍｅｒｃｋ）又はＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８（４０−６３μｍ、Ｍｅｒｃｋ）で実施した。透析膜（セルロースエステル、ＭＣＣＯ＝１０，０００）は、使用前にｄｄＨ２Ｏで洗浄した。ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ６００の６００ＭＨｚ（１Ｈ ＮＭＲ）及び１５０ＭＨｚ（１３Ｃ ＨＭＲ）分光計で記録した。化学シフトは、ｐｐｍ（δスケール）で報告され、重水素化クロロホルム（δ＝７．２４ｐｐｍ）、重水素化水（δ＝４．８０ｐｐｍ）又は重水素化メタノール（δ＝３．３１ｐｐｍ）の残留プロトン及び炭素シグナルに対してキャリブレーションした。Ｈｚ単位の結合定数は、１Ｈ ＮＭＲ又はスペクトルの化学シフトから計算した。データを以下のように表す：化学シフト、多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｂｒ＝ブロード）、積分値及びＨｚ単位の結合定数（Ｊ）。高分解能ＥＳＩ質量スペクトルは、ＡＰＥＸ−ｕｌｔｒａ ９．４ Ｔ ＦＴＩＣＲ−ＭＳ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ）で記録した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルは、シナピン酸をマトリクスとして用い、Ｂｒｕｋｅｒ Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ ＩＩ ＴＯＦ／ＴＯＦ２００分光計で記録した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体、ＤｙＬｉｇｈｔ ６４９−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＭ抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ１抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ５９４−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ抗体、Ｃｙ３−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ２ｂ抗体、Ｒ−ＰＥ−コンジュゲート抗マウスＩｇＧ２ｃ抗体及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ３抗体は、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈから購入した。マイクロアレイスライドは、マイクロアレイ蛍光チップリーダー（ＧｅｎｅＰｉｘ ４３００Ａ； Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で、６３５ｎｍ、５９４ｎｍ、５３２ｎｍ、又は４８８ｎｍの波長でスキャンした。蛍光データは、ＧｅｎｅＰｉｘ Ｐｒｏ−６．０ソフトウェア（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｕｎｉｏｎ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）により分析した。ジフテリアトキソイド（ＣＲＭ １９７）はＰＦｅｎｅｘ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。
全てのヌクレオチド、糖、糖ヌクレオチド、及び化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。全ての酵素のクローニング、過剰発現、精製及び活性アッセイは、報告された手順にしたがい記載した。３
ＧＨ−誘導体モノエステルの合成の一般手順
ＧＨ誘導体（２−３ｍｇ、１当量）を無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液に溶解した。次いで、ｐ−ニトロフェニルエステルリンカー（５−６ｍｇ、５当量）を添加し、１−５時間室温で撹拌した。反応を、３：２：２ブタノール／アセテート／水を展開溶媒として用いる薄層クロマトグラフィーによりモニターした。最適な収率が達成された時に、反応混合物を真空中で加熱せずに濃縮し、ＤＭＦを除去した。逆相（Ｃ１８）カラムクロマトグラフィーにより精製し、１％酢酸含有Ｈ２Ｏ〜ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝７：３で徐々に溶離した。溶液を、淡黄色固体のＧＨ−誘導体モノエステル（１．５−２ｍｇ、６０〜８０％）に凍結乾燥した。
ＧＨ−誘導体複合糖質の一般手順
ＤＴを、１００ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．９（５ｍｇ／ｍＬ）に溶解し、３０−４０当量のＧＨ−誘導体モノエステルを溶液に添加した。混合物を２４時間室温で穏やかに撹拌した。次いで、混合物をｄｄＨ２Ｏで希釈し、脱イオン水の１０回の交換に対して、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、１０ｋＤａによって遠心分離した。溶液を白色粉末に凍結乾燥した。得られたＧＨ−誘導体ＤＴコンジュゲートは、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（ポジティブモード、マトリクスシナピン酸、Ｈ２Ｏ）分析によって特性を明らかにし、オリゴ糖取り込み数を決定することができる。
マイクロアレイの作製及び検出
マイクロアレイを作製するために、化合物１−３０、９種類の官能性リンカー及び５５種類のアミノペンチルリンカーを有する他のオリゴ糖（表Ｓ１）を、１０ｍＭ濃度のプリント用緩衝液（３００ｍＭリン酸緩衝液、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ８．５）に溶解することにより調製した。〜０．６ｎＬの様々な溶液の、９６穴プレートからＮＨＳコートスライドガラス（Ｎｅｘｔｅｒｉｏｎ Ｈ ｓｌｉｄｅ； ＳＣＨＯＴＴ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ）上へのロボットピン（ＳＭＰ３； ＴｅｌｅＣｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）沈着によって、グリカンをプリントした（ＢｉｏＤｏｔ； Ｃａｒｔｅｓｉａｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。マイクロアレイは、１スライドに１６グリッド、及び１グリッドに２０列×１０行に設計した。プリントされたスライドを８０％湿度の雰囲気下で１時間反応させ、その後一晩乾燥させた。これらのスライドは、使用前に室温でデシケーター内で保存した。
細胞株及びフローサイトメトリー分析
ヒト乳がん細胞株ＭＣＦ−７を、１０％ＦＢＳ、１Ｘ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びインシュリン（５０ｍｇ／ｍＬ）を補充したダルベッコの改変イーグル培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中に維持した。フローサイトメトリー分析のために、細胞を採取し、５００ｇで３分間スピンし、ＦＡＣＳ染色／洗浄緩衝液（１％ＦＢＳ、０．１％ＮａＮ３、ＰＢＳ中）に再懸濁した。次いで、細胞（２．５ｘ１０５）を、ＧＨ誘導体で免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウスからの抗血清（１／１０希釈、５０μＬのＦＡＣＳ染色／洗浄緩衝液中）と共に、２時間、４℃でインキュベートした。ここで、未処置Ｂａｌｂ／ｃマウスからの血清をコントロールとして使用した。１ｍＬのＦＡＣＳ染色／洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞を、ＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ／ＩｇＭ抗体（１／２０希釈、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）と共に、３０分間、４℃でインキュベートした。もう１回の洗浄サイクルの後、細胞をフローサイトメトリー分析に供した。全てのサンプルを、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）で、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）及びＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を用いて分析した。
マウス投薬及び免疫化スケジュール
ＧＨ誘導体ワクチン（１−ＤＴ〜１０−ＤＴ）の免疫原性を比較するために、５匹のマウス（８週齢メスＢａｌｂ／ｃマウス、ＢｉｏＬＡＳＣＯ、Ｔａｉｗａｎ）の１０グループを糖脂質Ｃ３４で筋肉内に免疫化した。３回の免疫化を２週間の間隔で行った。各ワクチン接種は、２μｇのＧＨ誘導体及び２μｇのＣ３４を含有した。コントロールマウスにはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を注射した。マウスは、１回目の免疫化の前（免疫前）及び３回目の免疫化の１０日後に採血した。４，０００×ｇで１０分間の遠心分離により、全ての血清を得た。血清学的応答をグリカンマイクロアレイにより分析した。
グリカンアレイでの血清学的アッセイ
マウス血清を１％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ緩衝液（ＰＢＳＴ緩衝液：ＰＢＳ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４）で希釈した。グリカンマイクロアレイをＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋブロッキングバッファー（Ｐｉｅｒｃｅ）で、１時間、４℃でブロッキングし、使用前にＰＢＳＴ緩衝液で３回洗浄した。次いで、血清希釈液をグリカンマイクロアレイに導入し、４℃で１時間インキュベートした。過剰の血清抗体を洗い流し、マイクロアレイを、第２抗体としてのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体又はＤｙＬｉｇｈｔ ６４９−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＭ抗体と共に、４℃で、暗所で１時間、個別にインキュベートした。次いで、スライドをＰＢＳＴで３回洗浄し、マイクロアレイ蛍光チップリーダー（ＧｅｎｅＰｉｘ ４３００Ａ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で６３５ｎｍの波長でスキャンし、スキャンした画像をＧｅｎｅＰｉｘ Ｐｒｏ−６．０分析ソフトウェア（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｕｎｉｏｎ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）で分析した。
抗体サブクラス分析
抗体サブクラス分析の手順は、上記と同じであった。Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ５９４−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ抗体、Ｃｙ３−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ２ｂ抗体、Ｒ−ＰＥ−コンジュゲート抗マウスＩｇＧ２ｃ抗体及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ３抗体を、４００倍希釈でマイクロアレイに別々に添加し、続いてインキュベート及び洗浄した。
他の実施形態
本明細書で開示される特徴の全ては、任意の組み合わせで組み合わせてよい。本明細書に開示される各特徴は、同一の、等価の、又は類似の目的を果たす代わりの特徴によって置き換えてよい。それ故に、特に明記しない限り、開示された各特徴は、包括的な一連の等価又は類似の特徴の一例にすぎない。
以上の説明から、当業者は、記載された実施形態の本質的な特徴を容易に確認することができ、その精神及び範囲から逸脱することなく、実施形態の様々な変更及び修正を行って、それを様々な用途及び条件に適合させることができる。それ故に、他の実施形態もまた特許請求の範囲内にある。
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Claims (20)

  1. 免疫原性組成物であって、
    （ａ）リンカー及びキャリアを備える少なくとも１つのグリカンを含むグリカンコンジュゲートであって、前記少なくとも１つのグリカンが、前記リンカーを介して前記キャリアにコンジュゲートしている、グリカンコンジュゲート；及び（ｂ）任意選択的にアジュバント、を含み、
    前記リンカーを備える前記少なくとも１つのグリカンが、式（ＩＩ）の化学構造を有する、免疫原性組成物。
    （式中、
    Ｒ１が、−Ｆ、−Ｎ３、−ＮＯ２、
    、及び
    からなる群より選択され、かつＲ２が−ＣＨ３である、又は
    Ｒ１が−ＯＨであり、かつＲ２が、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＨ２ＮＯ２、−ＣＨ２ＯＨ、及び−Ｃ≡ＣＨからなる群より選択される。）
  2. 前記キャリアが、タンパク質、脂質、脂肪分解タンパク質、ウイルス、ペプチド、又はグリコペプチドのデンドリマーである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  3. 前記キャリアタンパク質が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ジフテリア毒素交差反応物質１９７（ＣＲＭ１９７）、ＴＴのフラグメントＣ、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、タンパク質Ｄ、外膜タンパク質（ＯＭＰ）及びニューモリシンからなる群より選択される、請求項２に記載の免疫原性組成物。
  4. 前記キャリアタンパク質がＣＲＭ１９７であり、前記グリカンコンジュゲートが式（ＩＩＩ）の化学構造を有する、請求項３に記載の免疫原性組成物。
    （式中、
    ｍが１−３８の整数である。）
  5. 前記リンカーが、ヘテロ−又はホモ−二官能性リンカーである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  6. 前記リンカーが、前記少なくとも１つのグリカン及び前記キャリアタンパク質と、それぞれアミド結合を形成することができる、２−２０の炭素を備えるアミノ活性ホモ−二官能性リンカーである、請求項５に記載の免疫原性組成物。
  7. 前記アジュバントが、樹状細胞上のＣＤ１ｄ分子に結合することのできる糖脂質、又は任意の認可された若しくは臨床的に使用されるアジュバントである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  8. 前記アジュバントが、Ｃ３４、７ＤＷ８−５、Ｃ２３、アルミニウム塩、スクアレン、ＭＦ５９、又はＱＳ−２１である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
  9. 請求項１に記載の免疫原性組成物及び医薬的に許容される添加剤を含む、がんワクチン。
  10. 請求項１に記載の免疫原性組成物に対するモノクローナル抗体。
  11. 請求項１に記載の免疫原性組成物を含む、がんの処置のための医薬であって、前記免疫原性組成物が、がん細胞の細胞傷害の誘導、がんに対する免疫応答の誘発、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３及びＳＳＥＡ−４からなる群より選択される１又は複数のがん細胞表面抗原に特異的に結合する抗体の発生及び／又はＧｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３及びＳＳＥＡ−４からなる群より選択される１又は複数のがん細胞表面抗原の中和をする、医薬。
  12. 前記抗体が、主としてＩｇＧ抗体である、請求項１１に記載の医薬。
  13. 前記がんが、脳がん、肺がん、乳がん、口腔がん、食道がん、胃がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、結腸がん、腎臓がん、骨がん、皮膚がん、子宮頸がん、卵巣がん、及び前立腺がんからなる群より選択される、請求項１１に記載の医薬。
  14. 前記がんが、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ３及び／又はＳＳＥＡ４抗原を発現する、請求項１１に記載の医薬。
  15. 請求項１に記載の免疫原性組成物を作成するための方法であって、前記キャリアを提供するステップ；及びコンジュゲーション反応により、前記少なくとも１つのグリカンを、前記リンカーを介して前記キャリアにコンジュゲートするステップ、を含む方法。
  16. 前記リンカーが、少なくとも１つの硫黄原子、カルボキシレート基、アミド基、カルバメート基、カーボネート基、チオカルバメート基、チオカーボネート基、チオエーテル基、スクシンアミド基、ｎ−ヒドロキシスクシンアミド基、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１５に記載の方法。
  17. 式（Ｉ）の化合物。
    （式中、
    Ｘ１が−ＯＲ又は−ＳＲであり（式中、Ｒが、水素、酸素又は硫黄保護基、任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアシル、又は任意選択的に置換されたイミドイルである）；
    Ｒ１が、−Ｆ、−Ｎ３、−ＮＯ２、
    、及び
    からなる群より選択され、かつＲ２が−ＣＨ３である、又は
    Ｒ１が−ＯＨであり、かつＲ２が、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＨ２ＮＯ２、−ＣＨ２ＯＨ、及び−Ｃ≡ＣＨからなる群より選択される。）
  18. 請求項１に記載の免疫原性組成物を調製する方法であって、
    （ｉ）式（Ｘ）の化合物を提供するステップ
    （式中、Ｒ１及びＲ２が、式（ＩＩ）において上に定義されているとおりである）；
    （ｉｉ）式（Ｘ）の化合物をアミノ活性二官能性リンカーと反応させて、第一の反応生成物を産するステップ；及び
    （ｉｉｉ）前記第一の反応生成物をキャリアタンパク質と反応させて、グリカンコンジュゲートを産するステップ；及び
    （ｉｖ）任意選択的に、アジュバントを混合して、請求項１の前記組成物を産するステップ、
    を含む、方法。
  19. 前記アミノ活性二官能性リンカーが、４−６の炭素を有するジカルボン酸である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記キャリアが、タンパク質、脂質、脂肪分解タンパク質、ウイルス、ペプチド、又はグリコペプチドのデンドリマーである、請求項１８に記載の方法。
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