JP2002514183A

JP2002514183A - リン脂質薬剤誘導体

Info

Publication number: JP2002514183A
Application number: JP51503098A
Authority: JP
Inventors: アイチャサロー，フレッド
Original assignee: スーパージェン・インコーポレーテッド
Priority date: 1996-09-17
Filing date: 1997-09-17
Publication date: 2002-05-14
Also published as: WO1998011906A1; AU4892897A; EP0948341A4; CA2266404A1; EP0948341A1; US6127349A

Abstract

(57)【要約】リン脂質への接合によって製薬の生物学的利用能を増加するための方法がここに開示される。またリン脂質誘導化ステロイド、ペプチド、抗生物質及び他の生物学的活性剤及びそれらの化合物を含んだ製薬調製物も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】リン脂質薬剤誘導体発明の分野本発明は、リン脂質へのそれの接合化(conjugating)によって生物学的薬剤の水溶性及び生物利用性(bio-availability)を増加するための方法と組成物に関する。発明の背景哺乳動物への製薬及び治療剤を輸送するための通常の手段はしばしば、取込みのための化学的及び物理的な障壁によって、同様に取込みに続く急速な代謝的不活性化する投与薬剤の感受性によって厳しく制限される。多くの生物学的活性剤の経口輸送は、胃の極端なｐＨ、腸における蛋白分解的な及び他の消化酵素の作用、及び活性成分への胃腸の膜の不浸透性がないならば選択ルートとなるであろう。変化しやすい薬剤を経口投与するための方法は、胞壁の透過性を人工的に増加させるためのアジュバント(例えば、レゾルシノール及びポリオキシエチレンオレイルエーテルとｎ-ヘキサデシルポリエチレンエーテルのような非イオン界面活性剤)の共投与；酵素的分解を避けるための酵素インヒビター(例えば、膵臓トリプシンインヒビター、フルオロリン酸ジイソプロピル(ＤＦＰ)及びトラシロール)の共投与；及びリポソーム中又は他の輸送ベヒクル中の活性剤のカプセル内包化に頼っている。多くの治療用組成物の投与の形態と関係なく、一度それは身体組織又は流体に近づく機会を得て、それは肝臓において、最初の通過効果と呼ばれる急速な不活性化を受ける。経口投与された化合物は特に、門脈循環を経て肝臓に急速に運ばれる。多くの化合物は、混合機能オキシダーゼ、フェースＩ酵素及び腎臓によって急速に排出される不活性グルクロニド、馬尿酸、グリシル及びアセチル誘導体を生成する、他の肝臓酵素によって作用を受ける。かくして、腸内に急速に吸収され且つ肝臓での採取の通過不活性化を避ける能力を治療薬に与えるための方法と組成物が当該分野において必要とされる。発明の概要リン酸ジエステル結合を経てリン脂質に多くの生物学的活性剤の接合が、そのような剤の生物活性及び／又は生物利用能を顕著に増加されるであろうことが、思いかけずにここに発見されている。一つの態様において本発明は、一又はそれ以上のリン脂質部分に剤を接合すること、上記ホスホコリンに複合化した生物学的活性剤を回復すること及び哺乳動物に上記剤を投与すること、ここで複合化した形の上記剤は、非複合化形における上記剤よりもより顕著に水性媒体中に可溶性である、の工程を含む薬剤の生物利用能を増加するための方法を提供する。更に別の態様において、本発明はサリチル酸の分離リン脂質誘導体を含む組成物を提供する。更に別の態様において、エストロン又はエストラジオールからなる群から選択される化合物の分離リン脂質誘導体と製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬とを含む骨粗しょう症に罹った哺乳動物を治療するための製薬調製物を提供する。更に別な態様において、本発明は、セファロスポリンＰ１、フシジン酸及びヘルボリン酸(helvolicacid)からなる群から選択される抗生物質の分離リン脂質誘導体を含む組成物を提供する。更に別な態様において、本発明は、デヒドロエピアンドステロンの分離リン脂質誘導体を含む組成物を提供する。本発明のこれら及び他の態様は、本明細書、請求の範囲及び図面に照らして当業者において明らかとなるであろう。発明の詳細な説明本明細書において引用した全ての特許出願、特許及び関連の参考文献は、それらの全体において参考によってここに併合される。不一致の場合、定義を含む本説明が優先するであろう。定義「リン脂質複合」又は「リン脂質誘導」は、リン酸ジエステル結合を経てリン脂質部分に共有結合したとしてここに定義した。本発明の複合医薬に関して「顕著に増加した生物活性」又は「水性媒体中により顕著に可溶化」は、同じルートにより投与される場合、非複合親化合物に比べて、生物学的活性及び／又は水溶性が５から１０倍も増加するとしてここに定義される。本発明は製薬活性剤の生物利用能及び／又は水溶性を、特にリン酸ジエステル結合を経てホスホコリン部分のようなリン脂質へのそのような剤の接合によって増加させることを導く。本発明に従い、治療用物質は、(a)アルコール、と(b)リン脂質との間のリン酸ジエステルを形成することにより、それの水溶性(及び生物利用能)を増加することによって有利となるであろう。制限されることのないリン脂質の実例は、ホスホコリン、ホスホセリン、ホスホチロシン、ホスホエタノールアミン、ｎ-モノアルキル-ホスホエタノールアミン及びＮ,Ｎ-ジアルキル-ホスホエタノールアミン(全てAldrich Chemical、ミルウォーキー、ＷＩから商業的に利用可能である) を含む。ホスホコリンがリン脂質として特に好適である。ホスホコリンは、生物学的膜の偏在する成分であり、ホスファチジルコリンの形成、すなわちジアシルグリセロールへのリン酸ジエステルを経た付着において大抵存在する。二つの最も通例のホスホコリン含有分子は、レシチンとスフィンゴミエリンである。これら両方の化合物は、ジアシルグリセロールとセラミドとをそれぞれ放出するホスホコリンホスホジエステル結合でホスホリパーゼＣによって加水分解され得る。重要なことは、食品中に存在するレシチンとスフィンゴミエリンの両方は、胃腸管中に吸収され、ＨＤＬ-及びＬＤＬ-コレステロール内に合併され且つ肝臓において顕著な最初の通過の代謝なしに血液を通して移送されることである。本発明に従い、親油化合物への１又はそれ以上のリン脂質部分の接合は、生物学的膜を通過するためのそれの能力を廃棄することなしに、それをより親水性にさせるであろう。理論的な結合を浴することなしに、リン脂質接合は、多くのケースにおいて、その複合化した化合物の生物学的活性をマスクするであろうことが予期される。そのリン脂質接合は、それがシグナル変換通路のメンバーであるホスホリパーゼＣ、スフィンゴミエリナーゼ及び非特異的エステラーゼのような酵素に出会うまで複合化形態を維持するであろうし(Methods in Enzymotofy，Vo l.197，E.Dennis，editor，Academic Press，NY)、循環中及び標識組織上に存在するであろう。これらの酵素は、次いでリン脂質部分を取り除き且つ損なわれていないそれの生物学的活性を持つオリジナル化合物を開放するであろう。上述した酵素は、ホスホコリンに特異的であり；シグナル変換系の他のエステラーゼは他のリン酸エステルを加水分解するであろう(Methods in Enzymology，Vol.201 ，T．Hunter，Academic Press，NY，Beth Sefton，editor)。この手法において、リン脂質の添加は、肝臓における最初の通過不活性化から化合物を保護すること及び血液中又は周囲の組織中でそれの作用サイトへの到達を与えることを予期させる。本発明において使用するに好適な製薬剤は、制限することなしに、生物学的液体中で乏しい溶解度を示す親油性化合物、同様に肝臓において馬尿酸、グルクロナート、又は他の誘導体に急速に代謝される化合物を含む。好適な化合物の非制限的な実例は、製薬的適用において、特に、溶解度、取込み及び／又は代謝に伴う問題のために、経口的投与剤として目下のところ利用されないそれらを含む。本発明において使用されるべき剤の要求は、１）リン脂質が付着できるための遊離アルコール官能基の存在、及び２）ホスホリパーゼＣ、スフィンゴミエリナーゼ又は他の哺乳動物エステラーゼによって切断されるためのリン酸ジエステル結合を生じる結果となる感受性、のみである。本発明において用いるために好適な製薬剤の実例は、制限なしに、ステロイド、エピネフリン又はノルエピネフリンのようなカテコールアミン、ブロスタグランジンＥ１又はＥ２のようなプロスタグランジン、ロイコトリエンＢ４，Ｃ４又はＤ４のようなロイコトリエン及びペプチドを含む。本発明において使用するためのペプチドは、セリン又はトレオニンを含む、好ましくは黄体化ホルモン放出ホルモン(ＬＨＲＨ)(１０アミノ酸ペプチド)とそれの類似物のような、長さにおいて１０-１５アミノ酸残基よりも長くすべきでないそれらである。好ましい出発化合物又は製薬剤は、テストステロン(Sigma、セントルイス、ＭＯから利用できる)、エチオコラノロン(Sigma)、エストラジオール(Sigma)、エストロン(Sigma)及びデヒドロエピアンドロステロン(Sigma)を含む。これらのステロイドは、経口的に投与した際に僅かな制限された活性を有する。本発明の代替の実施態様においては、セファロスポリンＰ１のような抗生物質が、その水溶性を増加するため及び肝臓を通る最初の通過でそれの代謝を及び腎臓の最初の通過を通しての排出を減じるために、リン脂質に接合され得る。本発明のこの実施態様においての使用のための化合物の非制限的な実例は、セファロスポリンＰ１(Burtonら、Biochem．J．50:168-174,1951；Halsallら、Chem．Com m.，pp．685-687，1966中に記載の通り分離した)、フシジン酸(Sigmaから商業的に利用し得る)、及びヘルホリン酸(Sigmaから商業的に利用し得る)を含む。これら抗生物質の使用は、受容する哺乳動物の血清又は組織のレベルを治療用にまで進展することが不可能であるから、及び、多分、抵抗性の進展が容易であるため、制限されている。抵抗性の出現は、他のステロイド治療剤によって起こるように代謝酵素の誘発によって生じ得る。遊離アルコール基を含む、本発明において使用するための追加の物質の非制限的な実例は、上述したステロイド物質(ＤＨＥＡ、エチオコラノロン、テストステロン、エストラジオール、エストロン、カテコールアミン、など)、上述した抗生物質、ジゴキシゲニン(Sigmaから商業的に利用し得る)、ジギトキシゲニン( Sigmaから商業的に利用し得る)、ウアバゲニン(Sigmaから商業的に利用し得る) 、及びサリチル酸(Sigmaから商業的に利用し得る)のような、強心配糖体を含むアグリコンを含む。本発明において用いるための化合物の非制限的な更なるリストを以下に提示した。化合物の名称に続く、括弧内に提示したのは、メルクインデックス１２版 (Merck Index，1996，12th Edition)中の化合物に付した番号である。メナジオール(5873)、メトロニダゾール(6242)、クリンダマイシン(2414)、四硝酸ペンタエリトリトール(7249)、メサラミン(5964)、β-トコフェロール(9632)、γ-トコフエロール(9633)、δ-トコフェロール(9634)、ロキシンドール(8432)、ビタミンＥ(10159)、スチラメート(9027)、ストロファンチジン(9015)、ビタミンＡ(10 150)、ビタミンＤ₂(10156)、ビタミンＤ₃(10157)、ビタミンＡ₂(10151)、カルシトリオール(1681)、ジフルニサル(3190)、クラブラン酸(2402)、レチノイン酸(8333)、マチンドール(5801)。本発明において使用するために特に良好に適した化合物は、サイクリック尿素ベースＨＩＶ-１プロテアーゼインヒビターＤＭＰ-３２３(J．Med．Chem．39:21 56-2169，1996)である。その低い水溶性のために、研究者は、患者への投与について化合物生物利用能に可変性及び効果の不一致があることを見出した。リン脂質部分の添加は、それの治療のための使用を改善することが予期される。本発明において使用するために良好に適した他の化合物は、ジゴキシゲニン、ジギトキシゲニン及びウアバゲニン(全てSigma,セントルイス、ＭＯから商業的に利用し得る)のような、強心配糖体からのアグリコンを含む。先に明らかにした化合物の溶解度を増加することに加え、以下の水溶性化合物へのリン脂質部分の接合の最初の効果は、増加した半減期、すなわち、それらは親化合物の長期作用形となるであろうことが予期される。そのような化合物の非制限的な実例は、イソプロテレノール(5236)、プロプラノロール(8025)、メチルドーパ(6132)、エピネフリン(3656)、コデイン(2525)、リン酸コデイン(2528)、アセトアミノフェン(45)、アスピリン(886)を含む。複合化した治療剤は、オリジナルのアルコールに比べ少なくとも１０倍水溶性となるであろう。これは、それの生物利用能を増加させるであろうし、且つ、例えばステロイドのケースにおいて、主要な排出通路とされるべき3-グリコシドへのそれの代謝を減じるであろう。減じられたグリコシド形は、そのサイトでリン酸エステルの存在によって生じるだろう。その誘導体は、リン脂質の加水分解の以前に活性であるとは予想されない。本発明者は、リンパ球が、ホスホコリン及び他のエステル接合体(セラミド又はジアシルグリセロール)を放出するために他の化合物(例えば、スフィンゴミエリン又はレシチン)からホスホコリンを切断する、それの細胞膜上の酵素を有することを見出している。この酵素の活性は、ＴＧＦ-αにより１０倍刺激される(データ示さず)。理論による結合を浴することなしに、本発明のリン脂質複合抗生物質の使用は、以下のメカニズムによって感染したサイトで活性剤の高い濃度に至るだろう。リンパ球は、他のサブタイプにおけるリン脂質加水分解を交互に刺激するＴＧＦ-αをそれらが放出する、感染又は炎症のサイトに付着される。これと同じプロセスは、リン脂質ジエステル接合からの抗生物質の活性形の局部的な放出に至るであろう。ＴＧＦ-αの局部的な濃縮への酵素の応答のため、それは抗生物質の高い局部濃度に応答さすべきである。これは、効果的な治療と低い毒性に至るであろう。本発明に従い、出発化合物は、当該分野で周知であるいずれかの方法を用いてリン脂質誘導体に変換され得る。一つの好適な実施態様において、ホスホコリン (Sigma Chemicals、セントルイス、ＭＯから得られる)は、活性エステル縮合反応において可溶性カルボジイミド、好ましくは1-エチル-3(3-ジメチルアミノプロピル) カルボジイミド塩酸(ＥＤＡＣ、Sigma)と反応させる。このカルボジイミドは、それがホスホコリンに類似していることから好適であり、水溶性である。活性なリン酸エステル中間生成物は、次いで、望まれるホスホコリンエステルを得るため、製薬活性剤と反応させる。その反応は後述の実施例１中に示される。水中のホスホコリンは、活性エステルを得るためにＥＤＡＣと反応させる。これは次いで、最終生成物又は他のエステル化生成物を得るために、例えばテストステロン又は他の生物学的活性出発化合物等と反応させる。その生成物は、必然的に水溶性であり且つかくして例えばフラッシュクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)等の当業者が周知であるような通常の抽出及び／又は分離法によって出発化合物から容易に分離される。ホスホコリン誘導体の合成のための代替の方法は、リン酸エステル、例えばキレート化剤としてのＥＤＡＣを用いてコリンにカップリングされるリン酸テストステロンのようなリン酸エステルを与えるためにＤＰＰＰと、ステロイド、ペプチドなどとのリン酸化を含む。代替的に、そのアルコール(「薬」)は、塩化ホスホリルと過剰に加えたアミノアルコール成分とを反応させ得る。この手法において、未反応の塩化ホスホリルの全ては、使用し尽くされるであろう。その塩化リンエステルは分離することもでき、且つアミノアルコール成分(コリン等)との第２の工程として反応させることもできる。最終生成物は、ＨＰＬＣによって生成され得る。本発明のリン脂質誘導医薬は、増大した生物学的活性、増加した生物利用能及び増加した水溶性を実証することが予期される。例えば、エチオコラノロンは、哺乳動物の肝臓においてグルクロニドの形成により代謝される。経口投与の後、遊離エチオコラノロンの約９９％が肝臓を通る各通過により不活性化される。エチオコラノロンが経口投与される場合、それは胃腸管で吸収され、次いで門脈循環を経て直接肝臓に移送される。続いて、投与した薬の一部のパーセントのみが機能のための生物学的に利用される。これに対して、ホスホコリン複合エチオコラノロンは、低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)及び高密度リポタンパク質(ＨＤＬ) コレステロールと結合でき、肝臓を通る最初の通過で分解されることは予想されない。そのホスホコリン誘導形において、約８０％のエチオコラノロンが各通過で代謝されないであろうと確信される。ホスホコリン部分がホスホリパーゼＣ、スフィンゴミエリナーゼ等のエステラーゼによって取り除かれる際、その親化合物が標的組織中に結合し且つ機能するために利用され得るであろう。グルクロン酸抱合は、ホスホコリン部分の除去後にそれが肝臓に戻される場合にのみ起こり得る。本発明のリン脂質複合化合物は、当該分野で周知の、例えば経口、静脈内、筋肉内、皮下、吸入により又はエアロゾル形態において、及び局所のようないずれかのルートによって治療のために投与され得る。本発明は、それの非複合化状態では経口ルートによって有効に投与できない化合物に特に適用可能である。本発明のリン酸複合化合物は、後述の通り効能を試験され得る。出発化合物、及びそのリン脂質誘導体は、試験動物、例えばラット、マウス、ウサギ、モルモットなどに上記したいずれかのルートによって投与され得る。血清サンプルは、投与後の時間経過で採集され、出発化合物と複合化合物のレベルが分析され、且つ比較される。その分析方法は、出発化合物に基づくであろうことは当業者によって理解されるだろう。ステロイド又はペプチドのケースにおいて、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、又は免疫アッセイが、血清中レベルを定量するために使用され得る。出発化合物が性腺ステロイドである場合、それは、試験化合物の内因的生成を刺激するために、薬剤投与の前に試験動物を去勢する必要もあるだろう。成功した化合物は、血清レベルが、出発化合物の投与関係するリン脂質誘導体の投与によって又は、例えば経口のような代替的なルートにより投与される場合に治療的に十分な血清レベルに到達させるためのそれの能力によって顕著に増加される。第２の段階において、出発化合物とそのリン脂質誘導体は、試験動物に投与され、そしてその化合物の生理学的効果が経時的に分析されるであろう。例えば、エチオコラノロンとそのリン脂質誘導体のために、体重増加率及び基礎代謝における変化が測定される。エストラジオール、エストロン及びそのリン脂質誘導体は、卵巣摘出マウス又はラットに胃管により投与されるであろうし、子宮重量の変化、乳房発育及びエストラジオール血中レベルが測定されるであろう。テストステロン及びそのホスホコリン誘導体は、去勢マウス又はラットに経口的に投与されるであろうし、精嚢の変化、前立腺サイズ、及び肛門挙筋が測定されるだろう。テオフィリンとそのホスホコリン誘導体は、経口的にラットに投与されるであろうし、次の６時間にわたる血中レベルが測定されるであろう。これらの試験から、リン脂質誘導体が誘導体化していない親化合物よりもより有効である度合が測定されるであろう、すなわち同じ応答が、親化合物よりも誘導対化合物の少量の投薬量で達成されるだろう。これはよりすぐれた有効性の尺度となるだろう。成功した化合物は、機能的終点が出発化合物よりもリン脂質誘導体が顕著に低いそれらである。本発明の好適な実施態様において、テストステロンは、テストステロン-17-ホスホコリンに変換され、エストロンは、エストロン-3-ホスホコリンに変換され、且つエストラジオールは、エストラジオール-3-ホスホコリン又はエストラジオール-17-ホスホコリンに変換される。同様の手法において、テオフィリンは、テオフィリンホスホコリンに変換される。これらの化合物は、各種のホルモン欠乏症のための代替治療として、及び他のケースにおいて薬学的治療としてしばしば与えられるであろう。テオフィリンは喘息を治療するために与えられ、エストラジオールは骨粗しょう症を治療するために与えられ、エチオコラノロンはヘマポエチック材(Haemapoetic agent)として、体重損失を促進するため及び糖尿病血糖レベルを減じるために与えられる。同様の誘導体は、エピネフリンの増加したレベルを提供するためにも使用され得る。本発明はまた、本発明のリン脂質誘導薬剤を含む製薬調製物及び投薬形態を提供する。本発明の製薬調製物はまた、任意の成分、製薬的に許容されるベヒクル、キャリア、賦形薬、可溶化、又は乳化剤、及び当業者において周知のタイプの塩を含め得る。本発明のリン脂質誘導薬剤は、哺乳動物を治療するために使用するべき製薬調製物中に合併することができる。少なくとも１種の活性成分として本発明のリン脂質複合薬剤を含む製薬調製物は、それに加え、製薬的に許容されるキャリア、賦形薬、フィラー、塩及び利用した投薬形態に基づいて当該分野で周知の他の材料を任意に含むであろう。例えば、好適な非経口の投薬形態は、滅菌等張塩溶液、０．５Ｎ食塩、５％デキストロースなどを含み得る。メチルセルロース又はカルボキシセルロースは、溶解度を増すために緩衝化塩溶液中又はシクロデキストラン溶液中の懸濁化剤として経口投与形態において利用され得る。別個の投薬量又は投薬形態において含まれる活性成分のユニット含量は、必要な有効量がそのような多数の投薬形態の投与によって達成され得ることから、本発明のリン脂質誘導化医薬の各種の取り扱いのための有効量をそれ自身で組成する必要はないことが理解されるであろう。次の実施例は、それをそこで制限することなしに本発明を更に説明することを意図した。実施例１：ホスホコリン誘導体の合成方法１ホスホコリン(Sigma)(0.1モル)は、モルホリン(Sigma)の０．１モルとＤＤＣ( Sigma)の０．１モルとともにピリジン(Fisher,VWR)(100ml)中で窒素又はアルゴン下に６時間撹拌される。この時点で反応複合体を撹拌している間に０．１モルのステロイド(エチオコラノロン、エストラジオール、テストステロン)が加えられる。追加した３時間の撹拌の後、その反応混合物は１リットルの氷水で希釈される。不溶性のＮ,Ｎ'ジシクロヘキシルウレアは濾過によって取り除かれ、その水性分画が、４ｘ０．５容量の酢酸エチルで抽出される。該酢酸エチルは、ピリジンを除去するために飽和塩溶液(０．１容量)で洗浄され、硫酸ナトリウム上で乾燥される。その溶媒を濾過によって取り除き、生成物はＬＨ-２０カラムクロマトグラフィーによって又は予備ＨＰＬＣによって分離される。方法２上記のホスホコリン(０．１モル)、ステロイド(０．１モル)及びＤＣＣ(０．１２モル)は、１００ｍｌのピリジン中、窒素下に８０℃で６時間撹拌される。その溶液は６００ｍｌの水で希釈し、さらに上述した通りの方法を行う。方法３テストステロン又は他のステロイド、プロスタグランジン、等(０．１モル)は、リン酸ステロイドを得るために、ピリジン中、ＰＯＣｌ₃と反応させる。ビリジン中での乾燥後のこの生成物は、ｐＨ７．０を維持するように正確に十分な割合で０．１モルのＥＤＡＣと反応されるだろう。その生成物は次いで上述した通り精製される。その化合物は、反応生成物の純度を測定するためにＨＰＬＣによって、その構造を実証するためにＮＭＲによって及びそれの同一性を測定するためにＵＶ及びＩＲスペクトルによって、分析されるであろう。ホスホジエステラーゼによる処理は、構造同一性を更に立証するためジエステルを切断するのに使用されるであろう。実施例２：テストステロンの薬物速度論及びそれのホスホコリン誘導体テストステロン(約５ｍｇ)のホスホコリン誘導体は緩衝化した２０ｍｌの塩溶液中に又は塩溶液中４０％のシクロデキストラン溶液２０ｍｌ中に溶解され、ヒトの志願者に経口的に与えられる。代替的に、テストステロン(５ｍｇ)は、カルボキシメチルセルロース懸濁化媒体中に懸濁させ、かき混せてから経口的に与えた。血液サンプルは、投与後３０，６０，１２０，２４０及び７２０分で採取され、グリーントッブチューブ内に採取される。その血液サンプルは、速心分離し、血漿を採集し、ミクロフューズ管中にアリコートとして保管される。そのサンプルは次いで、標準ＲＩＡキット(Diagnostics Products Corp.,Tarzana,CA)を用いて２つ組においてテストステロンが分析される。実施例３：ホスホコリン誘導体の生物活性の測定経口投与したエストラジオールとエストラジオールホスホコリンの生物活性は、卵巣摘出したマウス又はラットにおいて測定されるだろう。加えて、他の動物は簡潔に言えば麻酔されるであろうし、且つホスホコリン誘導体又は遊離ステロイドは腹腔内(ＩＰ)に投与されるであろう。二日後、その動物をと殺し、第四及び第九鼡径乳房組織が分離されるであろう。同時に子宮が分離され重量測定されるだろう。ホスホコリン誘導化ステロイドは、経口的に又は腹腔内注射によって投与した場合の親化合物よりもより活性となるだろうことが予期される。エストラジオールとそれのホスホコリン誘導体は、卵巣摘出したマウスとラットに胃管によっても投与されるであろうし、そして子宮重量の変化、乳房発達及びエストラジオール血中レベルが計測されるだろう。エストラジオールは、Diag nostics Products Corp.(Tarzana,CA)からのＲＩＡキットによって測定されるだろう。テストステロンとそのホスホコリン誘導体は、去勢したマウス又はラットに経口的に投与されるであろうし、精嚢の変化、前立腺サイズ、及び肛門挙筋が測定されるだろう。テストステロン血中レベルは、Diagnostics Products Corp.(Tar zana,CA)からのキットを用いたＲＩＡによって測定されるだろう。その化合物はまた、ＵＫＶによって特徴付けされるだろう。応答はＩＰ注射後に測定されるだろう。テオフィリンとそのホスホコリン誘導体は、経口的にラットに与えられるであろうし、テオフィリンの血中レベルは、ＲＩＡキット(Diagnostics Products Co rp.(Tarzana,CA)を用いて６時間にわたり測定されるだろう。これらの試験から、ホスホコリン誘導体が非誘導化親ホルモンよりもより効能のあることの度合が測定できる；すなわち、その同じ応答が２５親化合物よりも誘導化した化合物のより少ない投薬量により達成できるだろう。これはより優れた効能の測定となるであろう。実施例４：デヒドロエピアンドロステロン(ＤＨＥＡ)-ホスホコリン誘導体の合成デヒドロエピアンドロステロン(ＤＨＥＡ)-ホスホコリン誘導体は、以下のように合成された：１ｍｇのホスホコリン(カルシウム塩；Sigma Chemical,セントルイス、ＭＯ)は、０．５ｍｌのホルムアミド(Cat #S-7503；ロット #55H0257；Sigma Che mical)と０．５ｍｌのピリジン(Cat #P-4036；ロット #55H1489；Sigma Chemical) 中に溶解した。０．０２５ｍｌのエタノール中、０．０２５ｍＣｉの(1,2,6,7³ Ｈ(n)-デヒドロエピアンドロステロン(Cat # NET814;Lot # 3146097;89.2Ci/mmo l;Dupont，NEN Products，ボストン、ＭＡ)を加えた。その反応は、５ｍｇのジシクロヘキシルカルボジイミド(Cat # D-3129；ロット # 34h0647；Sigma Chemical)の添加(乾燥固体として)によって触媒化された。その反応混合物は室温で一晩インキュベーションした。翌朝、９ｍｌの水を加え、その混合物はベンゼンの１０ｍｌ部分によって三回抽出した。そのベンゼン抽出物は組み合わされ、両方の相のアリコートをシンチレーションカウンター中で計数した。その結果は以下の通りであった：水相１０，７２９ｃｐｍ(0.01ml) ベンゼン相１，１２１ｃｐｍ(0.01ml) その水相はベンゼンによって再抽出した。その第二のベンゼン抽出物は確認として２７２ｃｐｍ(0.01Ml)得た。遊離ＤＨＥＡ出発化合物は、このプロトコールによってベンゼン中に量的に抽出されているだろう。反応生成物が水相中に残るとの観察はそれの増加した親水性特性を立証する。実施例５：ＤＨＥＡ-３-ホスホコリン：合成と生物活性ＤＨＥＡ-３-ホスホコリンは、酸塩化リンとともにＤＨＥＡ、コリン、及び水の逐次反応によって合成した。その合成生成物は、内因性の、現実の化合物と同じＨＰＬＣ保持時間と同じ質量分析結果を有した。それは中性でスフィンゴミリナーゼにより加水分解されるが、しかし酸性でスフィンゴミエリナーゼではされない。ヒト血清抽出物が分析される際、質量分画は合成材料と同じ保持時間で測定された。ＤＨＥＡ-ＰＣがマウスに投与される場合、後述するジニトロクロロベンゼン誘導感作を高めた。実施例６：ＤＨＥＡ-ＰＣがＤＮＣＢ-誘発免疫学的感作を高める皮膚接触過敏症に関するＤＨＥＡ-ＰＣの効果を実験した。この実験において、マウス(Balb/c)は、背部上２ｃｍエリアに塗布したＤＮＣＢ(エタノール中２％)によって免疫学的に対抗された。ステロイドは１２日の実験ピリオドを通して皮下(100μg/日/マウス)注射した。耳は、７−１２日にＤＮＣＢ(エタノール中１％)によって再対抗させ、浮腫が免疫系に関する効果を評価するために毎日測定された。７−１２日の間、ＤＨＥＡ-ＰＣは、固有のステロイド(ＤＨＥＡ及びＤＨＥＡ -硫酸)に類似した皮膚過敏症免疫応答を増した。これら３つのホルモンへの応答は、たとえデキサメタゾンがコントロールより下の免疫応答を刺激したそれ自身によって投与した場合でも、デキサメタゾンによって刺激されることはなかった。これは、３つのホルモン全てが、類似した高いレベルの応答を誘発したことを示す。実施例７：新規ホスホコリン合成方法ＤＨＥＡ(I)(82.0g，0.284mol,Steraloids，Inc.，Wilton，NH)は、５Ｌの三ツ首丸底フラスコ中、乾燥ベンゼン(１．５Ｌ，Fisher，ピッツバーグ、ＰＡ)に溶かした。緩和な加熱が該プロセスを促進するために適用された。トリエチルアミン(30. 3g、41.6ml、Aldrich、ミルウォーキー、ＷＩ)を一度に加えた。反応後は室温まで冷やし、塩化ホスホリル(43.6g、26ml、0.284mol、Fluka，Ronkonkoma，NY)を一部づつ加えた。その混合物は窒素下で一晩(12時間)撹拌した。沈澱は窒素下でカニューラ移送を経て濾過し、乾燥ベンゼン(300mL)で一度洗浄した。合体した透明なベンゼン溶液に、エチレングリコール(18.6g、0.30mol、Aldrich)とトリエチルアミン(61g、0.60mol、Aldrich)を加えた。その混合物は、室温で１６時間、急速に撹拌した。薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)(シリカゲル、酢酸エチルで展開、Fisher)は大部分転換が完成したことを示した。新たに形成された沈澱は、ブフナー漏斗上に分離し、熱した乾燥ベンゼン(800mlトータル)によって３回洗浄した。合併した濾液は、ロータリーエバポレーター(Buchi、Fisher)で乾固するまで濃縮した。その中間物(II)は、白色固体で、更なる精製なしに次の工程で使用した。追加の量の中間物(II)は、水中に再懸濁と真空濾過によってブフナー漏斗に保持された固体から得られた。合体した採集した固体は空気乾燥した。粗中間物の全般的な収量は、事実土定量的であった(110g)。該粗II(2.9g)は、アセトニトリル(25ml、Fisher Chemicals)中に懸濁させた。白色のその混合物は、バルーンを通じて圧力を維持しつつ、５０-６０℃で撹拌し、トリメチルアミン(Aldrich)をガスとして導入した。ＴＬＣ分析によって示されるように、転換が完成した後、その混合物を真空濾過し、アセトニトリルで繰り返し洗浄し、次いで空気乾燥した。その収率は７５％(2.5g)であった。ＬＣ-質量分析(Micromass、Beverly、ＭＡ)は、予報値として、４５４ダルトン(Ｍ＋Ｈ)の質量を持ったＲｆ＝９．８分で主要ピークを示した。ＤＨＥＡ(8.75g、0.031mol )はベンゼン中に溶解し、さらにトリエチルアミン(4.45ml)を加えた。次いで、2 -クロロ-1,3,2-ジオキサホスホラン-2-オキシド(4.54g、0.032mol、Aldrich)を室温で加えた。反応混合物は、ＤＨＥＡの現れたIIへの変換完成まで撹拌した。その反応は、ＴＬＣ(シリカゲル、酢酸エチル)によってモニターした。濾過後、その固体を乾燥ベンゼンで洗った。合体したベンゼン溶液は、白色固体(II)が与えられるように濃縮し、更なる精製なしに使用した。上記の通り調製したIIのサンプル(0.75g)は、アセトニトリル(10mL)中に懸濁し、加熱と共に撹拌した。フラスコの首の一つに取り付けたバルーンによって圧力を調節しつつ、トリメチルアミンをガスとして導入した。ＴＬＣ(シリカゲル、酢酸エチル)が、IIの消失を示した時に、ガスの添加を停止した。生成物(III)を真空濾過によって採集し、追加のアセトニトリルで洗浄し、そして空気乾燥した。その収率は、0.72g(83%)であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．製薬活性剤の水溶性を増加するための方法であり、リン脂質部分に上記剤を接合すること、上記リン脂質部分は、ホスホセリン、ホスホチロシン、ホスホエタノールアミン、ｎ-モノアルキル-ホスホエタノールアミン及びＮ,Ｎ-ジアルキル-ホスホエタノールアミンからなる群から選択される、及び上記リン脂質に接合した上記製薬活性剤を回復すること、の工程を備える方法。２．上記剤が、ステロイド、ペプチド、プロスタグランジン、カテコールアミン、及びロイコトリエンからなる群から選択される、請求項１記載の方法。３．上記剤が、セファロスポリンＰ１、フシジン酸及びヘルボリン酸からなる群から選択される、請求項１記載の方法。４．請求項１記載の方法によって生産されたリン脂質複合製薬活性剤。５．リン脂質複合活性剤及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬を含む製薬調製物であり、上記剤は、テストステロン、エストロン、エストラジオール、エチオコラノロン、及びデヒドロエピアンドステロンからなる群から選択され、リン脂質はホスホセリン、ホスホチロシン、ホスホエタノールアミン、ｎ-モノアルキル-ホスホエタノールアミン及びＮ,Ｎ-ジアルキル-ホスホエタノールアミンからなる群から選択される、製薬調製物。６．テオフィリンの分離リン脂質誘導体、該リン脂質はホスホセリン、ホスホチロシン、ホスホエタノールアミン、ｎ-モノアルキル-ホスホエタノールアミン及びＮ,Ｎ-ジアルキル-ホスホエタノールアミンからなる群から選択される、及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬とを含む、喘息に罹っている哺乳動物を治療するための製薬調製物。７．セファロスポリンＰ１、フシジン酸及びヘルボリン酸からなる群から選択される抗生物質の分離リン脂質誘導体、及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬とを含む製薬調製物。８．リン脂質複合製薬活性剤、該剤はジゴキシゲニン、ジギトキシゲニン、ウアバゲニン、及びサリチル酸からなる群から選択される、及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬を含む製薬調製物。９．生物学的活性リン脂質複合製薬活性剤、上記剤はメナジオール、メトロニダゾール、クリンダマイシン、四硝酸ペンタエリトリトール、メサラミン、β- トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール、ロキシンドール、ビタミンＥ、スチラメート、ストロファンチジン、ビタミンＡ、ビタミンＤ₂、ビタミンＤ₃、ビタミンＡ₂、カルシトリオール、ジフルニサル、クラブラン酸、レチノイン酸、及びマチンドールからなる群から選択される、及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬を含む製薬調製物。１０．ＤＭＰ-３２３のリン脂質複合誘導体及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬を含む製薬調製物。１１．リン脂質複合製薬活性剤、上記剤はイソプロテレノール、プロプラノロール、メチルドーパ、エピネフリン、コデイン、リン酸コデイン、アセトアミノフェン、及びアスピリンからなる群から選択される、及び製薬的に許容されるキャリア又は賦形薬を含む製薬調製物。１２．セファロスポリンＰ１、フシジン酸及びヘルボリン酸からなる群から選択される抗生物質の分離リン脂質誘導体を含む組成物。１３．リン脂質複合製薬活性剤、上記剤はジゴキシケニン、ジギトキシゲニン、ウアバケニン、及びサリチル酸からなる群から選択される、を含む組成物。１４．生物学的活性リン脂質複合製薬活性剤、上記剤はメナジオール、メトロニダゾール、クリンダマイシン、四硝酸ペンタエリトリトール、メサラミン、β -トコフェロール、γ-トコフェロール、δ-トコフェロール、ロキシンドール、ビタミンＥ、スチラメート、ストロファンチジン、ビタミンＡ、ビタミンＤ₂、ビタミンＤ₃、ビタミンＡ₂、カルシトリオール、ジフルニサル、クラブラン酸、レチノイン酸、及びマチンドールからなる群から選択される、を含む組成物。１５．ＤＭＰ-３２３のリン脂質複合誘導体を含む組成物。１６．リン脂質複合製薬活性剤、上記剤はイソプロテレノール、プロプラノロール、メチルドーパ、エピネフリン、コデイン、リン酸コデイン、アセトアミノフェン、及びアスピリンからなる群から選択される、を含む組成物。