JP2002513547A - ワクチン・アジュバントとしてのインターロイキン−１８の使用 - Google Patents
ワクチン・アジュバントとしてのインターロイキン−１８の使用Info
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-
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- C07K—PEPTIDES
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- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、ワクチン・アジュバントとしてのインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）の使用、該ＩＬ−１８を含むアジュバント組成物及びワクチン、並びに該組成物及びワクチンにおいて使用される様々な組換えＩＬ−１８に関する。
Description
【０００１】 本発明は、アジュバントとしての組換えインターロイキン１８（ＩＬ−１８）
の使用、該ＩＬ−１８を含むアジュバント組成物及びワクチン、並びに該組成物
及びワクチンにおいて使用される様々な組換えＩＬ−１８に関する。
の使用、該ＩＬ−１８を含むアジュバント組成物及びワクチン、並びに該組成物
及びワクチンにおいて使用される様々な組換えＩＬ−１８に関する。
【０００２】 インターロイキン１８（ＩＬ−１８）は、肝臓から単離することができ、活性
化されたマクロファージにより主に産生される新規なサイトカインである。ＩＬ
−１８は樹立されたＴｈ１細胞におけるインターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）の
産生を誘導し、ＮＫ細胞の細胞障害性を刺激し、かつＴｈ１細胞の増殖を活性化
しＴｈ２細胞の増殖は活性化しないことが報告されている（Ｏｋａｍｕｒａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｖｏｌ．３７８：８８ （１９９５）； Ｓｔｏｌ
ｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｖｏｌ．１５９（１）：２９８（１９
９７））。さらに、ＩＬ−１８は顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ産生を増強し
、ＩＬ−１０産生を減少させることが見出されたが、ＣｏｎＡにより刺激された
ＰＢＭＣによるＩＬ−４産生に対する効果を有することは見出されていない（Ｕ
ｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｖｏｌ．１５６（１１）：４２
７４（１９９６）； Ｋｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｖｏｌ
．１５８（４）：１５４１（１９９７））。
化されたマクロファージにより主に産生される新規なサイトカインである。ＩＬ
−１８は樹立されたＴｈ１細胞におけるインターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）の
産生を誘導し、ＮＫ細胞の細胞障害性を刺激し、かつＴｈ１細胞の増殖を活性化
しＴｈ２細胞の増殖は活性化しないことが報告されている（Ｏｋａｍｕｒａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｖｏｌ．３７８：８８ （１９９５）； Ｓｔｏｌ
ｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｖｏｌ．１５９（１）：２９８（１９
９７））。さらに、ＩＬ−１８は顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ産生を増強し
、ＩＬ−１０産生を減少させることが見出されたが、ＣｏｎＡにより刺激された
ＰＢＭＣによるＩＬ−４産生に対する効果を有することは見出されていない（Ｕ
ｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｖｏｌ．１５６（１１）：４２
７４（１９９６）； Ｋｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｖｏｌ
．１５８（４）：１５４１（１９９７））。
【０００３】 これらの生物学的活性は、ＩＬ−１２に関して報告されているものと類似して
いるようであるが、ＩＬ−１８は、ＩＬ−１２とは独立にこれらの効果を発揮す
る。この所見、及びＩＬ−１８がＩＬ−１２と構造的に異なっているという事実
は、ＩＬ−１８とＩＬ−１２とが受容体結合及びシグナル伝達経路に関して機能
的に異なっていることを示している（Ｋｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．ｖｏｌ．１５８（４）：１５４１−１５５０（１９９７））。ネズミ及
びヒトのＩＬ−１８をコードするｃＤＮＡがクローニングされている（Ｏｋａｍ
ｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｖｏｌ．３７８：８８−９１，１９９５
； Ｕｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（１１）：４２７
１−４２７９，１９９６）。遺伝子は、ＩＬ−１シグナチャー（ｓｉｇｎａｔｕ
ｒｅ）様配列に類似したリーダー配列を含有する前駆タンパク質をコードしてい
る。ＩＬ−１８タンパク質及びＩＬ−１βタンパク質はいずれも、このＩＬ−１
シグナチャー様配列を含有するが、ＩＬ−１８とＩＬ−１とのアミノ酸配列の相
同性は、２０％未満であり、それらの生物学的活性はＩＮＦ−γの誘導に関して
異なっている（Ｕｓｈｉｏ、前記）。
いるようであるが、ＩＬ−１８は、ＩＬ−１２とは独立にこれらの効果を発揮す
る。この所見、及びＩＬ−１８がＩＬ−１２と構造的に異なっているという事実
は、ＩＬ−１８とＩＬ−１２とが受容体結合及びシグナル伝達経路に関して機能
的に異なっていることを示している（Ｋｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．ｖｏｌ．１５８（４）：１５４１−１５５０（１９９７））。ネズミ及
びヒトのＩＬ−１８をコードするｃＤＮＡがクローニングされている（Ｏｋａｍ
ｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ｖｏｌ．３７８：８８−９１，１９９５
； Ｕｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（１１）：４２７
１−４２７９，１９９６）。遺伝子は、ＩＬ−１シグナチャー（ｓｉｇｎａｔｕ
ｒｅ）様配列に類似したリーダー配列を含有する前駆タンパク質をコードしてい
る。ＩＬ−１８タンパク質及びＩＬ−１βタンパク質はいずれも、このＩＬ−１
シグナチャー様配列を含有するが、ＩＬ−１８とＩＬ−１とのアミノ酸配列の相
同性は、２０％未満であり、それらの生物学的活性はＩＮＦ−γの誘導に関して
異なっている（Ｕｓｈｉｏ、前記）。
【０００４】 ＥＰ−Ａ−７１２９３１及びＥＰ−Ａ−は、ＡＩＤＳのようなＩＮＦ−γ感受
性疾患、尖形コンジローム；腎臓癌、顆粒球腫、菌状息肉腫及び脳腫瘍のような
悪性腫瘍、関節リウマチ、並びにアレルギーの症例における治療薬かつ／又は予
防薬としてのＩＬ−１８の使用を提案している。さらに、ＩＬ−１８は、結腸癌
、直腸癌、胃癌、甲状腺癌、舌の癌、膀胱癌、絨毛癌、肝癌、前立腺癌、子宮癌
、喉頭肺癌、乳癌、悪性黒色腫、カポジ肉腫、脳腫瘍神経芽腫、卵巣の腫瘍、精
巣の腫瘍、骨肉腫、膵臓の癌などのような固形悪性腫瘍を治療するため、ＩＬ−
２を用いた、いわゆる「抗腫瘍免疫療法」において使用することが提案されてい
る。
性疾患、尖形コンジローム；腎臓癌、顆粒球腫、菌状息肉腫及び脳腫瘍のような
悪性腫瘍、関節リウマチ、並びにアレルギーの症例における治療薬かつ／又は予
防薬としてのＩＬ−１８の使用を提案している。さらに、ＩＬ−１８は、結腸癌
、直腸癌、胃癌、甲状腺癌、舌の癌、膀胱癌、絨毛癌、肝癌、前立腺癌、子宮癌
、喉頭肺癌、乳癌、悪性黒色腫、カポジ肉腫、脳腫瘍神経芽腫、卵巣の腫瘍、精
巣の腫瘍、骨肉腫、膵臓の癌などのような固形悪性腫瘍を治療するため、ＩＬ−
２を用いた、いわゆる「抗腫瘍免疫療法」において使用することが提案されてい
る。
【０００５】 感染性疾患に対するワクチン投与は、病原体による感染に関連した臨床的症状
を制限する免疫応答を惹起することを目的としている。活性化されうる免疫メカ
ニズムの多くの型が、特定の病原体の抑制にとっては不適切なものであるため、
正しい型の免疫反応が誘発されることが重要である。ワクチン抗原に対する低い
応答性は、アジュバントと組み合わせて抗原を投与することにより克服されうる
。アジュバントとは、例えば、アルミニウム塩、油乳濁液（ｏｉｌ ｅｍｕｌｓ
ｉｏｎ）、ムラミルペプチドの誘導体、モノホスフォリル・リピドＡ（ｍｏｎｏ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａ）、リポソーム、ＱＳ２１、ＭＦ−５９
、イスコムズ（Ｉｓｃｏｍｓ）などのような、抗原に対する免疫応答の増強に寄
与する抗原以外のワクチン製剤の成分と定義される。
を制限する免疫応答を惹起することを目的としている。活性化されうる免疫メカ
ニズムの多くの型が、特定の病原体の抑制にとっては不適切なものであるため、
正しい型の免疫反応が誘発されることが重要である。ワクチン抗原に対する低い
応答性は、アジュバントと組み合わせて抗原を投与することにより克服されうる
。アジュバントとは、例えば、アルミニウム塩、油乳濁液（ｏｉｌ ｅｍｕｌｓ
ｉｏｎ）、ムラミルペプチドの誘導体、モノホスフォリル・リピドＡ（ｍｏｎｏ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａ）、リポソーム、ＱＳ２１、ＭＦ−５９
、イスコムズ（Ｉｓｃｏｍｓ）などのような、抗原に対する免疫応答の増強に寄
与する抗原以外のワクチン製剤の成分と定義される。
【０００６】 ワクチン投与後に活性化される細胞及び分子のメカニズムは、ワクチン抗原と
共に投与されるアジュバントの選択により強く影響を受ける。従って、アジュバ
ントの選択は、最適な効率の提供において、ワクチン抗原自体の選択と同程度に
重要である。
共に投与されるアジュバントの選択により強く影響を受ける。従って、アジュバ
ントの選択は、最適な効率の提供において、ワクチン抗原自体の選択と同程度に
重要である。
【０００７】 本発明において、驚くべきことに、ＩＬ−１８が、ワクチンに対する対象の免
疫応答に対して、強力なアジュバント効果を有することが見出された。このため
、ＩＬ−１８はワクチン・アジュバントとして使用されうる。従って、一つの実
施態様において、本発明は、有効アジュバント量のＩＬ−１８を含むアジュバン
ト組成物を提供する。ＩＬ−１８を含むアジュバント組成物は、ワクチン製剤と
同時又は連続的に投与されうる。
疫応答に対して、強力なアジュバント効果を有することが見出された。このため
、ＩＬ−１８はワクチン・アジュバントとして使用されうる。従って、一つの実
施態様において、本発明は、有効アジュバント量のＩＬ−１８を含むアジュバン
ト組成物を提供する。ＩＬ−１８を含むアジュバント組成物は、ワクチン製剤と
同時又は連続的に投与されうる。
【０００８】 別法として、ＩＬ−１８は、ワクチン製剤に含まれていてもよい。従って、別
の一つの実施態様において、本発明は、少なくとも一つの活性薬物と、有効アジ
ュバント量のＩＬ−１８と、医薬的に許容される担体又は希釈剤とを含むワクチ
ンを提供する。好ましくは、対象動物又は患者において天然に見出されるＩＬ−
１８と密接に関連しているＩＬ−１８が、アジュバントとしての使用に適してい
る。従って、好ましくは、ＩＬ−１８は、ワクチンが設計される種と同一の種に
由来するものであり、例えば、イヌにおいて使用するためのワクチンの場合には
イヌＩＬ−１８、ヒトにおいて使用するためのワクチンの場合にはヒトＩＬ−１
８である。好ましい実施態様において、ＩＬ−１８は、イヌ及びウマのワクチン
投与において使用するための、それぞれイヌ又はウマに由来するものである。
の一つの実施態様において、本発明は、少なくとも一つの活性薬物と、有効アジ
ュバント量のＩＬ−１８と、医薬的に許容される担体又は希釈剤とを含むワクチ
ンを提供する。好ましくは、対象動物又は患者において天然に見出されるＩＬ−
１８と密接に関連しているＩＬ−１８が、アジュバントとしての使用に適してい
る。従って、好ましくは、ＩＬ−１８は、ワクチンが設計される種と同一の種に
由来するものであり、例えば、イヌにおいて使用するためのワクチンの場合には
イヌＩＬ−１８、ヒトにおいて使用するためのワクチンの場合にはヒトＩＬ−１
８である。好ましい実施態様において、ＩＬ−１８は、イヌ及びウマのワクチン
投与において使用するための、それぞれイヌ又はウマに由来するものである。
【０００９】 本発明に係るＩＬ−１８は、完全な分子であってもよいし、又はそれらのアジ
ュバント能を保持している限りにおいて、それらの断片であってもよい。ＩＬ−
１８の機能性等価物も、本発明において使用されうることを理解されたい。機能
性等価物とは、野生型ＩＬ−１８とアミノ酸配列が異なるが、にもかかわらず野
生型ＩＬ−１８と実質的に同一のアジュバント活性を有する、修飾されたＩＬ−
１８タンパク質と定義される。これらの修飾は、野生型ＩＬ−１８のアミノ酸配
列内の一つ又は複数のアミノ酸の挿入、欠失、又は保存的置換を構成しうる。直
接的に、又は接合剤（リンカー）を使用することにより、他の分子と接合された
ＩＬ−１８分子も、本発明の範囲内である。ただし、該接合は、ＩＬ−１８のア
ジュバント効果を阻害又は妨害しないものである。
ュバント能を保持している限りにおいて、それらの断片であってもよい。ＩＬ−
１８の機能性等価物も、本発明において使用されうることを理解されたい。機能
性等価物とは、野生型ＩＬ−１８とアミノ酸配列が異なるが、にもかかわらず野
生型ＩＬ−１８と実質的に同一のアジュバント活性を有する、修飾されたＩＬ−
１８タンパク質と定義される。これらの修飾は、野生型ＩＬ−１８のアミノ酸配
列内の一つ又は複数のアミノ酸の挿入、欠失、又は保存的置換を構成しうる。直
接的に、又は接合剤（リンカー）を使用することにより、他の分子と接合された
ＩＬ−１８分子も、本発明の範囲内である。ただし、該接合は、ＩＬ−１８のア
ジュバント効果を阻害又は妨害しないものである。
【００１０】 本発明のＩＬ−１８は、天然起源からの抽出又は精製により、有機化学合成に
より、又は組み換えＤＮＡ技術により、入手されうる。最も好ましいのは、組み
換えＤＮＡ技術によるＩＬ−１８の産生である。ＩＬ−１８の組み換え産生は、
該ＩＬ−１８をコードする遺伝子又はヌクレオチド配列の使用を必要とする。Ｉ
Ｌ−１８をコードするヌクレオチド配列は、ネズミＩＬ−１８、ヒトＩＬ−１８
及びラットＩＬ−１８に関して、それぞれ発表されている（Ｏｋａｍｕｒａ、前
記； Ｕｓｈｉｏ、前記； Ｂ．Ｃｏｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２７２（４），ｐｐ．２０３５−２０３７，１９９７）。
より、又は組み換えＤＮＡ技術により、入手されうる。最も好ましいのは、組み
換えＤＮＡ技術によるＩＬ−１８の産生である。ＩＬ−１８の組み換え産生は、
該ＩＬ−１８をコードする遺伝子又はヌクレオチド配列の使用を必要とする。Ｉ
Ｌ−１８をコードするヌクレオチド配列は、ネズミＩＬ−１８、ヒトＩＬ−１８
及びラットＩＬ−１８に関して、それぞれ発表されている（Ｏｋａｍｕｒａ、前
記； Ｕｓｈｉｏ、前記； Ｂ．Ｃｏｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２７２（４），ｐｐ．２０３５−２０３７，１９９７）。
【００１１】 さらなる実施態様において、本発明は、ＩＬ−１８、特にイヌ及びウマのＩＬ
−１８をコードするヌクレオチド配列を提供する。イヌＩＬ−１８及びウマＩＬ
−１８をコードするヌクレオチド配列は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１及び３
に示されている。イヌ及びウマのＩＬ−１８の推定される一次アミノ酸構造は、
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２及び４に与えられている。
−１８をコードするヌクレオチド配列を提供する。イヌＩＬ−１８及びウマＩＬ
−１８をコードするヌクレオチド配列は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１及び３
に示されている。イヌ及びウマのＩＬ−１８の推定される一次アミノ酸構造は、
それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２及び４に与えられている。
【００１２】 イヌ及びウマのＩＬ−１８をコードするヌクレオチド配列のクローニングは、
それぞれ、他のサイトカインを含まない純粋なＩＬ−１８の産生を可能にする。
これは、ＩＬ−１８特異的抗体を産生する場合に特に有用である。これらの特異
的抗ＩＬ−１８抗体は、一般的に利用可能な技術により産生されうる。好ましく
は、特異的抗ＩＬ−１８抗体は、モノクローナル抗ＩＬ−１８抗体である。従っ
て、本発明は、ＩＬ−１８特異的抗体、より具体的にはイヌ及び／又はウマのＩ
Ｌ−１８に特異的な抗体をさらに提供する。本発明に係るＩＬ−１８特異的抗体
は、診断における使用、又は粗調製物からのＩＬ−１８たんぱく質の単離及び精
製に適している。さらに、抗体は、インビトロのＩＬ−１８産生の定量的分析又
はインビボのＩＬ−１８レベルの定量的測定のためのアッセイを開発するために
使用されうる。
それぞれ、他のサイトカインを含まない純粋なＩＬ−１８の産生を可能にする。
これは、ＩＬ−１８特異的抗体を産生する場合に特に有用である。これらの特異
的抗ＩＬ−１８抗体は、一般的に利用可能な技術により産生されうる。好ましく
は、特異的抗ＩＬ−１８抗体は、モノクローナル抗ＩＬ−１８抗体である。従っ
て、本発明は、ＩＬ−１８特異的抗体、より具体的にはイヌ及び／又はウマのＩ
Ｌ−１８に特異的な抗体をさらに提供する。本発明に係るＩＬ−１８特異的抗体
は、診断における使用、又は粗調製物からのＩＬ−１８たんぱく質の単離及び精
製に適している。さらに、抗体は、インビトロのＩＬ−１８産生の定量的分析又
はインビボのＩＬ−１８レベルの定量的測定のためのアッセイを開発するために
使用されうる。
【００１３】 本発明に係るアジュバント組成物は、ＩＬ−１８と医薬的に許容される担体と
を含む。適当な医薬的担体は、水、生理食塩水などである。さらに、アジュバン
ト組成物は、油乳濁液、アルミニウム塩、ムラミルジペプチドの誘導体、モノホ
スフォリル・リピドＡ、リポソーム、ＱＳ２１、ＭＦ−５９、イスコムズなどの
ような、一つ又は複数の他のアジュバントを含んでいてもよい。好ましくは、Ｉ
Ｌ−１８は、例えばＩＬ−１２のような他のサイトカインと共に使用される。好
ましい実施態様において、本発明に係るアジュバント組成物は、該ＩＬ−１８を
発現することができるＤＮＡプラスミドを含む。該ＤＮＡプラスミドは、転写制
御配列と機能的に連結したＩＬ−１８をコードするＤＮＡ配列を含む。ＩＬ−１
８と共に使用される他のサイトカインをコードするヌクレオチド配列は、同一の
ＤＮＡプラスミド上に存在してもよいし、別々のプラスミド上に存在してもよい
。そのようなＤＮＡアジュバント組成物が対象へ投与される際、宿主細胞は、接
種されたＤＮＡを取り込み、その上にコードされた遺伝子を発現し、該ＩＬ−１
８のインビボ発現をもたらす。
を含む。適当な医薬的担体は、水、生理食塩水などである。さらに、アジュバン
ト組成物は、油乳濁液、アルミニウム塩、ムラミルジペプチドの誘導体、モノホ
スフォリル・リピドＡ、リポソーム、ＱＳ２１、ＭＦ−５９、イスコムズなどの
ような、一つ又は複数の他のアジュバントを含んでいてもよい。好ましくは、Ｉ
Ｌ−１８は、例えばＩＬ−１２のような他のサイトカインと共に使用される。好
ましい実施態様において、本発明に係るアジュバント組成物は、該ＩＬ−１８を
発現することができるＤＮＡプラスミドを含む。該ＤＮＡプラスミドは、転写制
御配列と機能的に連結したＩＬ−１８をコードするＤＮＡ配列を含む。ＩＬ−１
８と共に使用される他のサイトカインをコードするヌクレオチド配列は、同一の
ＤＮＡプラスミド上に存在してもよいし、別々のプラスミド上に存在してもよい
。そのようなＤＮＡアジュバント組成物が対象へ投与される際、宿主細胞は、接
種されたＤＮＡを取り込み、その上にコードされた遺伝子を発現し、該ＩＬ−１
８のインビボ発現をもたらす。
【００１４】 本発明に係るワクチンは、ヒト及び動物、例えば、ブタ、ヒツジ、トリ、ウシ
、イヌ、ネコ、ウマ、サカナ、及び甲殻類の免疫化のために使用されうる。本発
明に係るワクチンは、少なくとも一つの活性薬物と、有効アジュバント量のＩＬ
−１８、即ち、該ＩＬ−１８を含まないワクチンと比較して増強された免疫学的
応答を、ワクチン投与された対象に生じさせる量のＩＬ−１８とを含む。
、イヌ、ネコ、ウマ、サカナ、及び甲殻類の免疫化のために使用されうる。本発
明に係るワクチンは、少なくとも一つの活性薬物と、有効アジュバント量のＩＬ
−１８、即ち、該ＩＬ−１８を含まないワクチンと比較して増強された免疫学的
応答を、ワクチン投与された対象に生じさせる量のＩＬ−１８とを含む。
【００１５】 本発明に係るアジュバント組成物又はワクチン中のＩＬ−１８の必要とされる
有効量は、使用される活性薬物の型、免疫化される病原体の型、及びワクチン投
与される対象の型に依存する。有効量の決定は、医療現場の医師の通常の技術の
範囲内であり、一般的には０．００１〜５００μｇ／一回であろう。好ましくは
、その量は、０．０１〜５０μｇ／一回、より好ましくは０．１〜５μｇ／一回
であろう。
有効量は、使用される活性薬物の型、免疫化される病原体の型、及びワクチン投
与される対象の型に依存する。有効量の決定は、医療現場の医師の通常の技術の
範囲内であり、一般的には０．００１〜５００μｇ／一回であろう。好ましくは
、その量は、０．０１〜５０μｇ／一回、より好ましくは０．１〜５μｇ／一回
であろう。
【００１６】 本発明のワクチンにおいて使用するための活性薬物は、ウイルス、細菌、又は
寄生虫に由来するものでありうる。活性薬物は、疾患を引き起こす病原体全体で
あるか、又は該病原体に由来する成分からなる。活性薬物が病原体全体である場
合、該病原体は、生病原体又は不活化病原体でありうる。生病原体は、該病原体
の弱毒化された型、又は天然に存在する穏和な型のいずれかであると考えられる
。不活化病原体は、化学的又は物理学的な手段により殺傷された病原体であり、
即ち、不活化又は「殺傷された」病原体は、もはや複製能を有しない。化学的不
活化にとって適当な手段は、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、β−プロ
ピオラクトン（β−ｐｒｏｐｉｏｌａｃｔｏｎｅ）、エチレンイミン及び誘導体
などである。物理学的不活化にとって適当な手段は、ＵＶ照射、γ線照射、「熱
ショック」、Ｘ線照射などである。別法として、活性薬物は、該疾患を引き起こ
す病原体に由来する一つ又は複数の成分、例えば精製されたタンパク質、タンパ
ク質−多糖、タンパク質−リポ多糖、リポ多糖などを構成しうる。
寄生虫に由来するものでありうる。活性薬物は、疾患を引き起こす病原体全体で
あるか、又は該病原体に由来する成分からなる。活性薬物が病原体全体である場
合、該病原体は、生病原体又は不活化病原体でありうる。生病原体は、該病原体
の弱毒化された型、又は天然に存在する穏和な型のいずれかであると考えられる
。不活化病原体は、化学的又は物理学的な手段により殺傷された病原体であり、
即ち、不活化又は「殺傷された」病原体は、もはや複製能を有しない。化学的不
活化にとって適当な手段は、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、β−プロ
ピオラクトン（β−ｐｒｏｐｉｏｌａｃｔｏｎｅ）、エチレンイミン及び誘導体
などである。物理学的不活化にとって適当な手段は、ＵＶ照射、γ線照射、「熱
ショック」、Ｘ線照射などである。別法として、活性薬物は、該疾患を引き起こ
す病原体に由来する一つ又は複数の成分、例えば精製されたタンパク質、タンパ
ク質−多糖、タンパク質−リポ多糖、リポ多糖などを構成しうる。
【００１７】 本発明の好ましい実施態様において、活性薬物は、病原体又は該病原体に由来
する選択された成分を、インビボで発現することができるＤＮＡプラスミドであ
る。さらに、ワクチンは、インビボでＩＬ−１８アジュバントを発現することが
できるＤＮＡプラスミドを含みうる。該ＩＬ−１８アジュバントをコードするＤ
ＮＡと、該病原体又は選択された成分をコードするＤＮＡとは、一つの同一プラ
スミド上に存在してもよいし、又は別々のプラスミド上に存在してもよい。ＤＮ
Ａワクチンが対象へ投与された際、宿主細胞は、それを取り込み、該活性薬物と
該ＩＬ−１８とをインビボで発現する。ＤＮＡワクチンは、例えば、米国特許第
５，５８０，８５９号に記載されている。
する選択された成分を、インビボで発現することができるＤＮＡプラスミドであ
る。さらに、ワクチンは、インビボでＩＬ−１８アジュバントを発現することが
できるＤＮＡプラスミドを含みうる。該ＩＬ−１８アジュバントをコードするＤ
ＮＡと、該病原体又は選択された成分をコードするＤＮＡとは、一つの同一プラ
スミド上に存在してもよいし、又は別々のプラスミド上に存在してもよい。ＤＮ
Ａワクチンが対象へ投与された際、宿主細胞は、それを取り込み、該活性薬物と
該ＩＬ−１８とをインビボで発現する。ＤＮＡワクチンは、例えば、米国特許第
５，５８０，８５９号に記載されている。
【００１８】 本発明に係るアジュバント組成物又はワクチン組成物を製剤化するために使用
されうる薬学的に許容される担体又は希釈剤は、例えば、水性緩衝液、生理食塩
水などのような、無菌であり、かつ生理学的に適合性のものである。さらに、安
定剤、保存料などが、これらの組成物に添加されうる。
されうる薬学的に許容される担体又は希釈剤は、例えば、水性緩衝液、生理食塩
水などのような、無菌であり、かつ生理学的に適合性のものである。さらに、安
定剤、保存料などが、これらの組成物に添加されうる。
【００１９】 本発明に係るアジュバント組成物又はワクチンにおいて使用されうるＤＮＡプ
ラスミドは、所望により、担体ＤＮＡ断片、並びに転写制御配列、標的遺伝子、
及びその他の制御配列を含む適当な発現カセットを含有する。適当なプラスミド
の例には、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８及びｐＵＣ１９、ｐＮｅｏ、ｐＳＶＬ、ｐ
ＭＳＧ（ファルマシア・バイオテク（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）よ
り商業的に入手可能）及びｐＭＣ１ｎｅｏ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１及びｐＢＸ（ス
トラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）より商業的に入手可能）が含まれる。
ラスミドは、所望により、担体ＤＮＡ断片、並びに転写制御配列、標的遺伝子、
及びその他の制御配列を含む適当な発現カセットを含有する。適当なプラスミド
の例には、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８及びｐＵＣ１９、ｐＮｅｏ、ｐＳＶＬ、ｐ
ＭＳＧ（ファルマシア・バイオテク（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）よ
り商業的に入手可能）及びｐＭＣ１ｎｅｏ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１及びｐＢＸ（ス
トラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）より商業的に入手可能）が含まれる。
【００２０】 適当な転写制御配列の例には、（ヒト）サイトメガロウイルス極初期プロモー
ター（Ｓｅｅｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２９，８４０−８４２，
１９８７； Ｆｙｎａｎ，Ｅ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９０，１１４７８
−１１４８２，１９９３； Ｕｌｍｅｒ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２５９，１７４５−１７４８，１９９３）、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｒ
ＳＶ，Ｇｏｒｍａｎ，Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ７９，６７７７−６７
８１，１９８２； Ｆｙｎａｎ ｅｔ ａｌ．，前記； Ｕｌｍｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．，前記）、ＭＰＳＶ ＬＴＲ（Ｓｔａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ ５０，７２５−７３２，１９８４）、ＳＶ４０極初期プロモーター（
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５，７７３，１
９８３）、メタロチオネイン・プロモーター（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９６，３９−４２，１９８２）、Ａｄ２の主要後期
プロモーター、β−アクチン・プロモーター（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３５６，１５２−１５４，１９９２）のようなプロモーターが含まれる
。もまた適切である。
ター（Ｓｅｅｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２９，８４０−８４２，
１９８７； Ｆｙｎａｎ，Ｅ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９０，１１４７８
−１１４８２，１９９３； Ｕｌｍｅｒ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２５９，１７４５−１７４８，１９９３）、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｒ
ＳＶ，Ｇｏｒｍａｎ，Ｃ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ７９，６７７７−６７
８１，１９８２； Ｆｙｎａｎ ｅｔ ａｌ．，前記； Ｕｌｍｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．，前記）、ＭＰＳＶ ＬＴＲ（Ｓｔａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ ５０，７２５−７３２，１９８４）、ＳＶ４０極初期プロモーター（
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５，７７３，１
９８３）、メタロチオネイン・プロモーター（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９６，３９−４２，１９８２）、Ａｄ２の主要後期
プロモーター、β−アクチン・プロモーター（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３５６，１５２−１５４，１９９２）のようなプロモーターが含まれる
。もまた適切である。
【００２１】 制御配列には、終結因子及びポリアデニル化配列も含まれうる。使用されうる
配列には、周知のウシ成長因子ポリアデニル化配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配
列、ヒト・サイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）の終結因子及びポリアデニル化配
列が含まれる。
配列には、周知のウシ成長因子ポリアデニル化配列、ＳＶ４０ポリアデニル化配
列、ヒト・サイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）の終結因子及びポリアデニル化配
列が含まれる。
【００２２】 原則として、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄ
ｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，１９８９に記載されたような、真核細胞において遺伝子の転写を制
御することができる任意の転写制御配列が使用されうる。さらに、制御配列には
、コードされたタンパク質の発現を増加させる効果を有するイントロン、例えば
ｈＣＭＶイントロンＡ（Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９，３９７９−３９８６，１９９１）も含
まれうる。
ｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄ
ｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，１９８９に記載されたような、真核細胞において遺伝子の転写を制
御することができる任意の転写制御配列が使用されうる。さらに、制御配列には
、コードされたタンパク質の発現を増加させる効果を有するイントロン、例えば
ｈＣＭＶイントロンＡ（Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９，３９７９−３９８６，１９９１）も含
まれうる。
【００２３】 本発明の組成物は、経口又は非経口投与に適する任意の形態をとりうる。経口
使用の場合、本発明に係るアジュバント又はワクチン組成物は、溶液、シロップ
、懸濁液、錠剤、カプセルなどとして製剤化されうる。非経口使用の場合、本発
明に係る組成物は、懸濁液、溶液、分散液、乳濁液などのような、注射に適した
形態で製剤化されうる。本発明に係る組成物の調製は、当業者にとって一般的な
手段により実施される。
使用の場合、本発明に係るアジュバント又はワクチン組成物は、溶液、シロップ
、懸濁液、錠剤、カプセルなどとして製剤化されうる。非経口使用の場合、本発
明に係る組成物は、懸濁液、溶液、分散液、乳濁液などのような、注射に適した
形態で製剤化されうる。本発明に係る組成物の調製は、当業者にとって一般的な
手段により実施される。
【００２４】 好ましい投与経路は、非経口経路、例えば筋肉内注射、静脈注射、皮内注射、
皮下注射、及び粘膜経路、例えば鼻腔内滴剤、点眼剤、（エアロゾル）スプレー
などである。
皮下注射、及び粘膜経路、例えば鼻腔内滴剤、点眼剤、（エアロゾル）スプレー
などである。
【００２５】 以下、実施例により、本発明を制限することなく、本発明を例示する。
【００２６】 実施例 実施例１ Ａ．肺胞マクロファージの回収 肺に組織培養培地（ウマにはＨＢＳＳ、イヌにはＲＰＭＩ）を充填し、液体を
遠心分離容器へ注入して培地及び細胞を回収することにより、（死後の）ウマ又
はイヌの肺から、肺マクロファージを抽出した（肺由来の細胞の回収を最大にす
るため、この操作を数回実施し、例えば３リットルまでのイヌ「肺洗浄液」を回
収した）。イヌの場合は、環境からの細菌混入の可能性を最小限に抑えるため、
この操作を層流フード（ｌａｍｉｎａｒ ｆｌｏｗ ｈｏｏｄ）内で実施した。
慎重な取り扱い及び肺の外表面からの混入の回避により、赤血球の混入を最少限
に抑えるための、あらゆる努力をした。
遠心分離容器へ注入して培地及び細胞を回収することにより、（死後の）ウマ又
はイヌの肺から、肺マクロファージを抽出した（肺由来の細胞の回収を最大にす
るため、この操作を数回実施し、例えば３リットルまでのイヌ「肺洗浄液」を回
収した）。イヌの場合は、環境からの細菌混入の可能性を最小限に抑えるため、
この操作を層流フード（ｌａｍｉｎａｒ ｆｌｏｗ ｈｏｏｄ）内で実施した。
慎重な取り扱い及び肺の外表面からの混入の回避により、赤血球の混入を最少限
に抑えるための、あらゆる努力をした。
【００２７】 Ａ．１ イヌ 「肺洗浄液」を１７００ｒｐｍで１０分間遠心分離することにより肺洗浄材料
から回収された細胞を、２０ｍｌの培地中に再懸濁させ（洗浄工程）、１７００
ｒｐｍで１０分間遠心分離し、細胞ペレットを、ペレットのサイズに応じて２０
ｍｌ又は４０ｍｌの培地中に再懸濁させた。フラスコ２５ｃｍ２当たり１０ｍｌ
の細胞懸濁液を、組織培養フラスコに移した。フラスコにＣＯ２を供給し、３７
℃で４時間インキュベートして、マクロファージを接着させた。その後、未接着
の混入赤血球を除去するため培地を交換し、培養物を３７℃で一晩インキュベー
トした。培養物をＰＭＡ（５ｎｇ／ｍｌ）で４時間刺激した。培地を除去するこ
とにより細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、その後、ファルマシア・バイオテク・
クイック・プレップ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂａｉｏｔｅｃｈ Ｑｕｉｃｋ ｐ
ｒｅｐ）ｍＲＮＡ精製キットにより細胞を溶解させた。
から回収された細胞を、２０ｍｌの培地中に再懸濁させ（洗浄工程）、１７００
ｒｐｍで１０分間遠心分離し、細胞ペレットを、ペレットのサイズに応じて２０
ｍｌ又は４０ｍｌの培地中に再懸濁させた。フラスコ２５ｃｍ２当たり１０ｍｌ
の細胞懸濁液を、組織培養フラスコに移した。フラスコにＣＯ２を供給し、３７
℃で４時間インキュベートして、マクロファージを接着させた。その後、未接着
の混入赤血球を除去するため培地を交換し、培養物を３７℃で一晩インキュベー
トした。培養物をＰＭＡ（５ｎｇ／ｍｌ）で４時間刺激した。培地を除去するこ
とにより細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、その後、ファルマシア・バイオテク・
クイック・プレップ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂａｉｏｔｅｃｈ Ｑｕｉｃｋ ｐ
ｒｅｐ）ｍＲＮＡ精製キットにより細胞を溶解させた。
【００２８】 培地： １０％ＦＣＳ ２０ｍＭヘペス １００Ｕ／ｍｌペニシリン １００μｇ／ｍｌストレプトマイシン が添加されたダルベッコ改変イーグル培地（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）カタログ番号
３１９６６−０２１）。
３１９６６−０２１）。
【００２９】 Ａ．２ ウマ ウマ肺から回収された細胞を含むハンクス緩衝生理食塩水（ＨＢＳＳ）を、４
℃で１８００ｇで１０分間遠心分離した。細胞ペレットをＨＢＳＳに再懸濁させ
、細胞を４℃で１８００ｇで１０分間遠心分離した（洗浄工程）。この操作を繰
り返した。次に、完全培地を用いて細胞をさらに２回洗浄した。最終的な細胞ペ
レットを５〜１０ｍｌのＲＰＭＩに再懸濁させ、細胞を計数した。細胞懸濁液を
完全培地（下記参照）１ｍｌ当たり２×１０７細胞に希釈し、１０８細胞（５０
ｍｌの培地中）を１６２ｃｍ２のフラスコに移した。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気
中３７℃で一晩インキュベートした。一晩のインキュベーションの後、培地を除
去し、単層を完全培地で２回洗浄した。１０μｇ／ｍｌのリポ多糖（ＬＰＳ）を
含有する４０ｍｌの完全培地を、各フラスコに添加し、培養物を６時間インキュ
ベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。その後、培地を除去し、細胞スクレーパー
を使用してフラスコ表面から細胞を剥離した。回収された細胞を５０ｍｌの完全
培地に再懸濁させ、２００ｇで５分間ペレット化した。ペレットを５０ｍｌの完
全培地に再懸濁させ、２００ｇで５分間遠心分離した（洗浄工程）。上清を除去
し、細胞をドライアイス／１００％エタノール中に浸漬することにより急速凍結
させた。凍結ペレットを−７０℃で保存した。
℃で１８００ｇで１０分間遠心分離した。細胞ペレットをＨＢＳＳに再懸濁させ
、細胞を４℃で１８００ｇで１０分間遠心分離した（洗浄工程）。この操作を繰
り返した。次に、完全培地を用いて細胞をさらに２回洗浄した。最終的な細胞ペ
レットを５〜１０ｍｌのＲＰＭＩに再懸濁させ、細胞を計数した。細胞懸濁液を
完全培地（下記参照）１ｍｌ当たり２×１０７細胞に希釈し、１０８細胞（５０
ｍｌの培地中）を１６２ｃｍ２のフラスコに移した。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気
中３７℃で一晩インキュベートした。一晩のインキュベーションの後、培地を除
去し、単層を完全培地で２回洗浄した。１０μｇ／ｍｌのリポ多糖（ＬＰＳ）を
含有する４０ｍｌの完全培地を、各フラスコに添加し、培養物を６時間インキュ
ベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。その後、培地を除去し、細胞スクレーパー
を使用してフラスコ表面から細胞を剥離した。回収された細胞を５０ｍｌの完全
培地に再懸濁させ、２００ｇで５分間ペレット化した。ペレットを５０ｍｌの完
全培地に再懸濁させ、２００ｇで５分間遠心分離した（洗浄工程）。上清を除去
し、細胞をドライアイス／１００％エタノール中に浸漬することにより急速凍結
させた。凍結ペレットを−７０℃で保存した。
【００３０】 完全培地： ＲＰＭＩ１６４０ ２％ＦＣＳ １００Ｕ／ｍｌペニシリン １００μｇ／ｍｌストレプトマイシン １０ｍＭヘペス緩衝液 ２ｍＭグルタミン ５×１０−５β−メルカプトエタノール
【００３１】 Ｂ．刺激された培養物からのｍＲＮＡの単離 ファルマシア・クイック・プレップ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｑｕｉｃｋ Ｐｒ
ｅｐ）（登録商標）キットを使用して、ｍＲＮＡを単離した。新たに回収された
、又は以前に調製された細胞ペレット（−７０℃で保存）を、ｍＲＮＡの調製の
ための出発材料として使用した。ｍＲＮＡの調製は、製造業者のプロトコルにわ
ずかな修飾を加えて、行った。
ｅｐ）（登録商標）キットを使用して、ｍＲＮＡを単離した。新たに回収された
、又は以前に調製された細胞ペレット（−７０℃で保存）を、ｍＲＮＡの調製の
ための出発材料として使用した。ｍＲＮＡの調製は、製造業者のプロトコルにわ
ずかな修飾を加えて、行った。
【００３２】 Ｂ．１ イヌ 製造業者の指示に従い、ファルマシア第一鎖ｃＤＮＡ合成キットを用いた、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のための鋳型として、０．６μｇのｍＲＮＡを使用した。使用
されたプライマーは、キット中に供給されていた、５’−ＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡ
ＡＴＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ−
３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５）なる配列のＮｏｔＩ−ｄ（Ｔ）１８二機能性プラ
イマーであった。第一鎖ｃＤＮＡ反応混合物の全最終容量は１９８μｌであった
。
一鎖ｃＤＮＡ合成のための鋳型として、０．６μｇのｍＲＮＡを使用した。使用
されたプライマーは、キット中に供給されていた、５’−ＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡ
ＡＴＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ−
３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５）なる配列のＮｏｔＩ−ｄ（Ｔ）１８二機能性プラ
イマーであった。第一鎖ｃＤＮＡ反応混合物の全最終容量は１９８μｌであった
。
【００３３】 Ｂ．２ ウマ ｍＲＮＡを１０ｍＭ水酸化メチル第二水銀で処理した。即ち、ｍＲＮＡを２０
μｌのＤＥＰＣ（ジエチルピロカルボネート（ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂ
ｏｎａｔｅ））で処理された水に再懸濁させ、６５℃で５分間インキュベートし
、室温（ＲＴ）まで冷却した。ＲＴにて１分間にわたり、２μｌの１００ｍＭ水
酸化メチル第二水銀を添加し、その後４μｌの７００ｍＭベータ−メルカプトエ
タノールをＲＴにて５分間にわたり添加した。
μｌのＤＥＰＣ（ジエチルピロカルボネート（ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂ
ｏｎａｔｅ））で処理された水に再懸濁させ、６５℃で５分間インキュベートし
、室温（ＲＴ）まで冷却した。ＲＴにて１分間にわたり、２μｌの１００ｍＭ水
酸化メチル第二水銀を添加し、その後４μｌの７００ｍＭベータ−メルカプトエ
タノールをＲＴにて５分間にわたり添加した。
【００３４】 製造業者の指示に従い、ファルマシア第一鎖ｃＤＮＡ合成キットを用いた、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のための鋳型として、０．５μｇの処理されたｍＲＮＡを使用
した。使用されたプライマーは、キット中に供給されていた、５’−ＡＡＣＴＧ
ＧＡＡＧＡＡＴＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ
ＴＴＴＴ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５）なる配列のＮｏｔＩ−ｄ（Ｔ）１８二
機能性プライマーであった。第一鎖ｃＤＮＡ反応混合物の全最終容量は８６μｌ
であった。
一鎖ｃＤＮＡ合成のための鋳型として、０．５μｇの処理されたｍＲＮＡを使用
した。使用されたプライマーは、キット中に供給されていた、５’−ＡＡＣＴＧ
ＧＡＡＧＡＡＴＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ
ＴＴＴＴ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ５）なる配列のＮｏｔＩ−ｄ（Ｔ）１８二
機能性プライマーであった。第一鎖ｃＤＮＡ反応混合物の全最終容量は８６μｌ
であった。
【００３５】 Ｃ．ＰＣＲ反応 反応混合物 鋳型＊ １×ＰＣＲ反応緩衝液＊ ２００μＭ ｄＮＴＰ［ウマＰＣＲ］、１００μＭ ｄＮＴＰ［イヌＰＣＲ］
＊２ｍＭ ＭｇＣｌ２ ＊ ２ユニットのアンプリタック（Ａｍｐｌｉｔａｑ）ポリメラーゼ［ウマＰＣＲ
］、１．２５ユニット［イヌＰＣＲ］ ５０ｐｍｏｌのプライマー［ウマＰＣＲ］、２０ｐｍｏｌ［イヌＰＣＲ］＊ パーキン・エルマー・シータス（ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ）キ
ットより供給 プライマーはクルアケム（Ｃｒｕａｃｈｅｍ）（グラスゴー（Ｇｌａｓｇｏｗ）
）より供給
＊２ｍＭ ＭｇＣｌ２ ＊ ２ユニットのアンプリタック（Ａｍｐｌｉｔａｑ）ポリメラーゼ［ウマＰＣＲ
］、１．２５ユニット［イヌＰＣＲ］ ５０ｐｍｏｌのプライマー［ウマＰＣＲ］、２０ｐｍｏｌ［イヌＰＣＲ］＊ パーキン・エルマー・シータス（ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ）キ
ットより供給 プライマーはクルアケム（Ｃｒｕａｃｈｅｍ）（グラスゴー（Ｇｌａｓｇｏｗ）
）より供給
【００３６】 Ｃ．１ ＰＣＲ反応 標的としてｃＤＮＡを用いたＰＣＲ反応を実施した。いくつかのプライマー組
み合わせは、一次ＰＣＲ後に有意な産物を生成させず、この反応からのＰＣＲ産
物を、一次ＰＣＲにおいて使用したのと同一又は異なるプライマー条件を用いた
二次ＰＣＲ反応において使用した。５μｌのｃＤＮＡを一次ＰＣＲにおいて使用
し、１μｌの一次ＰＣＲ産物を二次ＰＣＲにおいて使用した。アニール化温度及
びサイクル条件は、ウマ及びイヌのＩＬ−１８ｃＤＮＡの一部又は全部の増幅の
ため最適化された。ＰＣＲ反応条件の例を、以下に詳細に示す。ＰＣＲ機パーキ
ン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）モデル９６００をウマＰＣＲ反応に
使用し、パーキン・エルマー・ジーンアンプＰＣＲシステム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅ
ｌｍｅｒ Ｇｅｎｅａｍｐ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ）２４００をイヌＰＣＲ反応
に使用した。 ’＝分；ｓ＝秒 一次ウマＰＣＲ反応条件：プライマーＡ＋Ｂ、Ｃ＋Ｂ、Ａ＋Ｄ又はＣ＋Ｄ ９４℃／５’（９４℃、５分間を意味する） ９４℃／４０ｓ−４５℃／５５ｓ−７２℃／２’を３０サイクル［全てのプライ
マー組み合わせ］ ７２℃／７’ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃ Ａ＋Ｂ反応及びＣ＋Ｂ反応からクローニング可能産物が回収された。 二次ウマＰＣＲ反応条件：プライマーＣ＋Ｄ ９４℃／５’ ９４℃／４５ｓ−４５℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｂ反応：鋳
型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｂ；Ｃ＋Ｄ反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｄ又はＣ＋Ｄ］
７２℃／７’ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃ Ａ＋Ｄ、Ａ＋Ｂ又はＣ＋Ｄを使用して一次反応を実施し、その後プライマーＡ＋
Ｂ又はＣ＋Ｄを用いて二次反応を実施することにより、クローニング可能なＡ＋
Ｂ産物又はＣ＋Ｄ産物が生成した。 一次イヌＰＣＲ反応条件：プライマーＡ＋Ｅ、Ａ＋Ｂ、Ａ＋Ｄ 酵素添加の前に９４℃／５’（「ホットスタート（ｈｏｔｓｔａｒｔ）」）［Ａ
＋Ｅプライマー組み合わせのみ］ 酵素添加の前に９５℃／５’（「ホットスタート」）［Ａ＋Ｄプライマー組み合
わせのみ］ ９５℃／１５ｓ−５５又は５８℃／１５ｓ−７２℃／１５ｓを３０サイクル［Ａ
＋Ｄ反応］ ９５℃／４５ｓ−５０℃／４５ｓ−７２℃／１’を３０サイクル［Ａ＋Ｂ反応］
９４℃／４５ｓ−５８℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｅ反応］ ７２℃／６０’ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃ Ａ＋Ｅ反応及びＡ＋Ｂ反応のみからクローニング可能産物が回収された。
み合わせは、一次ＰＣＲ後に有意な産物を生成させず、この反応からのＰＣＲ産
物を、一次ＰＣＲにおいて使用したのと同一又は異なるプライマー条件を用いた
二次ＰＣＲ反応において使用した。５μｌのｃＤＮＡを一次ＰＣＲにおいて使用
し、１μｌの一次ＰＣＲ産物を二次ＰＣＲにおいて使用した。アニール化温度及
びサイクル条件は、ウマ及びイヌのＩＬ−１８ｃＤＮＡの一部又は全部の増幅の
ため最適化された。ＰＣＲ反応条件の例を、以下に詳細に示す。ＰＣＲ機パーキ
ン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）モデル９６００をウマＰＣＲ反応に
使用し、パーキン・エルマー・ジーンアンプＰＣＲシステム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅ
ｌｍｅｒ Ｇｅｎｅａｍｐ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ）２４００をイヌＰＣＲ反応
に使用した。 ’＝分；ｓ＝秒 一次ウマＰＣＲ反応条件：プライマーＡ＋Ｂ、Ｃ＋Ｂ、Ａ＋Ｄ又はＣ＋Ｄ ９４℃／５’（９４℃、５分間を意味する） ９４℃／４０ｓ−４５℃／５５ｓ−７２℃／２’を３０サイクル［全てのプライ
マー組み合わせ］ ７２℃／７’ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃ Ａ＋Ｂ反応及びＣ＋Ｂ反応からクローニング可能産物が回収された。 二次ウマＰＣＲ反応条件：プライマーＣ＋Ｄ ９４℃／５’ ９４℃／４５ｓ−４５℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｂ反応：鋳
型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｂ；Ｃ＋Ｄ反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｄ又はＣ＋Ｄ］
７２℃／７’ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃ Ａ＋Ｄ、Ａ＋Ｂ又はＣ＋Ｄを使用して一次反応を実施し、その後プライマーＡ＋
Ｂ又はＣ＋Ｄを用いて二次反応を実施することにより、クローニング可能なＡ＋
Ｂ産物又はＣ＋Ｄ産物が生成した。 一次イヌＰＣＲ反応条件：プライマーＡ＋Ｅ、Ａ＋Ｂ、Ａ＋Ｄ 酵素添加の前に９４℃／５’（「ホットスタート（ｈｏｔｓｔａｒｔ）」）［Ａ
＋Ｅプライマー組み合わせのみ］ 酵素添加の前に９５℃／５’（「ホットスタート」）［Ａ＋Ｄプライマー組み合
わせのみ］ ９５℃／１５ｓ−５５又は５８℃／１５ｓ−７２℃／１５ｓを３０サイクル［Ａ
＋Ｄ反応］ ９５℃／４５ｓ−５０℃／４５ｓ−７２℃／１’を３０サイクル［Ａ＋Ｂ反応］
９４℃／４５ｓ−５８℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｅ反応］ ７２℃／６０’ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃ Ａ＋Ｅ反応及びＡ＋Ｂ反応のみからクローニング可能産物が回収された。
【００３７】 その他のイヌＩＬ−１８クローンは、Ａ＋Ｂ、Ａ＋Ｅ及びＣ＋Ｂを使用した二
次ＰＣＲのための標的として、プライマーＡをプライマーＢ、Ｄ及びＥと組み合
わせて用いた一次ＰＣＲを使用した、二次ＰＣＲにより回収された。 二次イヌＰＣＲ反応： ９４℃／５’ホットスタート［場合による］ ９４℃／４５ｓ−５４又は５８℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｂ
反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｄ］ ９４℃／４５ｓ−５８又は６０℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｅ
反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｅ］ ９４℃／４５ｓ−４５℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ｃ＋Ｂ、Ｃ＋Ｄ
反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｄ］ ７２℃／７’ ７２℃／５３℃［場合による］ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃
次ＰＣＲのための標的として、プライマーＡをプライマーＢ、Ｄ及びＥと組み合
わせて用いた一次ＰＣＲを使用した、二次ＰＣＲにより回収された。 二次イヌＰＣＲ反応： ９４℃／５’ホットスタート［場合による］ ９４℃／４５ｓ−５４又は５８℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｂ
反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｄ］ ９４℃／４５ｓ−５８又は６０℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ａ＋Ｅ
反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｅ］ ９４℃／４５ｓ−４５℃／１’−７２℃／２’を３０サイクル［Ｃ＋Ｂ、Ｃ＋Ｄ
反応：鋳型 一次ＰＣＲ Ａ＋Ｄ］ ７２℃／７’ ７２℃／５３℃［場合による］ ＰＣＲ機から反応チューブが取り出されるまで４℃
【００３８】 Ｃ．２ 使用されたプライマー Ａ（上流）：５’−ＧＣＡＧＧＡＡＴＡＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＣ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ６） Ｂ（下流）：５’−ＧＣＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧＴＧＡＡＣＡＴ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７） Ｃ（上流）：５’−ＧＡＣＡＡＴＡＣＧＣＴＴＴＡＣＴＴＴＡＴ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８） Ｄ（下流）：５’−ＧＧＣＡＴＧＡＡＡＴＴＴＴＡＡＴＡＧＣＴＡ−３’（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ９） Ｅ（下流）（イヌＩＬ−１８の場合にのみ使用）：５’−ＧＣＴＡＧＣＴＣＴＴ
ＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０）
Ｑ ＩＤ ＮＯ９） Ｅ（下流）（イヌＩＬ−１８の場合にのみ使用）：５’−ＧＣＴＡＧＣＴＣＴＴ
ＧＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１０）
【００３９】 Ｃ．３ コンセンサス配列の導出 プライマー・セットＡ＋Ｂ、Ｃ＋Ｂ、Ａ＋Ｅ（イヌのみ）及びＣ＋Ｄを使用し
た少なくとも３つの独立したＰＣＲ反応［一次及び二次］からのＰＣＲ反応産物
を、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ＴＡクローニング・ベクターｐ
ＣＲ２．１にクローニングした。アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）のサーモシー
ケナーゼ・サイクル・シーケンシング（ＴｈｅｒｍｏＳｅｑｕｅｎａｓｅ ｃｙ
ｃｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）キット及びＬＩ−ＣＯＲ自動ＤＮＡシーケンサ
ー・モデル４０００Ｌを使用して、ＩＬ−１８クローンを配列決定した。ウマ及
びイヌのＩＬ−１８ｃＤＮＡのコンセンサス配列は、ウィスコンシン・パッケー
ジ・バージョン（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ）９．
０（ジェネティクス・コンピュータ・グループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ）（ＧＣＧ）（ウィスコンシン州マディソン））を使用した
クローン配列の整列化により得られた。
た少なくとも３つの独立したＰＣＲ反応［一次及び二次］からのＰＣＲ反応産物
を、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ＴＡクローニング・ベクターｐ
ＣＲ２．１にクローニングした。アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）のサーモシー
ケナーゼ・サイクル・シーケンシング（ＴｈｅｒｍｏＳｅｑｕｅｎａｓｅ ｃｙ
ｃｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）キット及びＬＩ−ＣＯＲ自動ＤＮＡシーケンサ
ー・モデル４０００Ｌを使用して、ＩＬ−１８クローンを配列決定した。ウマ及
びイヌのＩＬ−１８ｃＤＮＡのコンセンサス配列は、ウィスコンシン・パッケー
ジ・バージョン（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ）９．
０（ジェネティクス・コンピュータ・グループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ）（ＧＣＧ）（ウィスコンシン州マディソン））を使用した
クローン配列の整列化により得られた。
【００４０】 実施例２ Ｃ５７ＢＬ／６ネズミ群（雌、６週齢）の上方脚筋肉に、抗原として不活化さ
れたシュードラビーズ（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）ウイルス（ＰＲＶと０．１
ＬＦ破傷風毒素（ＴＴ）との混合物；一回当たり１０６．７ＴＣＩＤ５０）を含
有するワクチン製剤を筋肉内（ｉ．ｍ）注射した。免疫化の直前、１〜２時間前
に、抗原調製物を、大腸菌（ペプロテック（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ）、カタログ
番号３１５−０４）において発現した０．１μｇの組換えネズミＩＬ−１８と混
合した。平行して、ネズミ群を、対照ビヒクルの生理食塩水とワクチン抗原（Ｐ
ＲＶとＴＴとの混合物；一回当たり１０６．７ＴＣＩＤ５０）との組合わせで免
疫化した。免疫化の４週間後、動物の眼窩後脈絡叢（ｒｅｔｒｏｏｒｂｉｔａｌ
ｐｌｅｘｕｓ）から採血し、記載された方法（Ｓｃｈｉｊｎｓ ｅｔ ａｌ．
，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １５３： ２０２９，１９９４）を使用して、それらの
血清を抗原特異的抗体について分析した。
れたシュードラビーズ（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）ウイルス（ＰＲＶと０．１
ＬＦ破傷風毒素（ＴＴ）との混合物；一回当たり１０６．７ＴＣＩＤ５０）を含
有するワクチン製剤を筋肉内（ｉ．ｍ）注射した。免疫化の直前、１〜２時間前
に、抗原調製物を、大腸菌（ペプロテック（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ）、カタログ
番号３１５−０４）において発現した０．１μｇの組換えネズミＩＬ−１８と混
合した。平行して、ネズミ群を、対照ビヒクルの生理食塩水とワクチン抗原（Ｐ
ＲＶとＴＴとの混合物；一回当たり１０６．７ＴＣＩＤ５０）との組合わせで免
疫化した。免疫化の４週間後、動物の眼窩後脈絡叢（ｒｅｔｒｏｏｒｂｉｔａｌ
ｐｌｅｘｕｓ）から採血し、記載された方法（Ｓｃｈｉｊｎｓ ｅｔ ａｌ．
，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １５３： ２０２９，１９９４）を使用して、それらの
血清を抗原特異的抗体について分析した。
【００４１】 採血の１日後、全てのネズミ群に、病原性ＰＲＶ（ＡＤＶフィラキシア（ｐｈ
ｙｌａｘｉａ）Ａ２５Ｈ、Ａ−１０１５ １：６００希釈）をｉ．ｍ．接種した
。未感作のワクチン投与されていない動物は全て、３〜４日以内に感染のため死
亡した。抗原のみをワクチン投与された動物では、わずか３０％（１０匹中３匹
）が感染により死亡せず、同量の抗原をわずか０．１μｇのＩＬ−１８と共に受
容した動物では、８０％（１０匹中８匹）が感染により死亡しなかった。
ｙｌａｘｉａ）Ａ２５Ｈ、Ａ−１０１５ １：６００希釈）をｉ．ｍ．接種した
。未感作のワクチン投与されていない動物は全て、３〜４日以内に感染のため死
亡した。抗原のみをワクチン投与された動物では、わずか３０％（１０匹中３匹
）が感染により死亡せず、同量の抗原をわずか０．１μｇのＩＬ−１８と共に受
容した動物では、８０％（１０匹中８匹）が感染により死亡しなかった。
【００４２】 さらに、抗原をＩＬ−１８と共に受容したネズミ群においては、抗原のみをワ
クチン投与された動物と比較して、ＰＲＶ特異的抗体のレベルが増加しているこ
とが観察された（表１参照）。
クチン投与された動物と比較して、ＰＲＶ特異的抗体のレベルが増加しているこ
とが観察された（表１参照）。
【００４３】
【表１】
【配列表】
【図１】 抗原及び０．１μｇのＩＬ−１８、又は抗原のみで免疫化されたネズミの、病
原性ＰＲＶ感染後の生存率。
原性ＰＲＶ感染後の生存率。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ， ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，Ｌ Ｔ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA26 CA04 CA12 DA06 EA04 GA11 HA17 4C084 AA03 AA13 BA35 BA44 DA12 MA02 NA14 ZB261 ZC022 4C085 AA03 BB23 DD61 DD86 EE06 FF13 4H045 AA10 AA30 CA40 DA02 EA22 EA28 FA74
Claims (11)
- 【請求項１】 有効量のＩＬ−１８を含むワクチン。
- 【請求項２】 ワクチン・アジュバントとして使用するためのＩＬ−１８。
- 【請求項３】 対象のワクチン投与のための医薬調製物の製造のためのＩＬ
−１８の使用 - 【請求項４】 転写制御配列と機能的に連結したＩＬ−１８タンパク質をコ
ードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡプラスミドを含むアジュバント組成物又
はＤＮＡワクチンであって、該ＤＮＡプラスミドが、ワクチン投与された対象の
細胞において該ＩＬ−１８をインビボ発現させることができるものである、アジ
ュバント組成物又はＤＮＡワクチン。 - 【請求項５】 該ＩＬ−１８がワクチン投与される対象と同一の起源に由来
することを特徴とする、請求項１から４のいずれかに記載のＩＬ−１８。 - 【請求項６】 ＩＬ−１８はイヌ又はウマのＩＬ−１８であることを特徴と
する、請求項１から５のいずれかに記載のＩＬ−１８。 - 【請求項７】 イヌ又はウマのＩＬ−１８活性を有するタンパク質。
- 【請求項８】 配列番号２（イヌＩＬ−１８）又は配列番号４（ウマＩＬ−
１８）に示されたアミノ酸配列を有する、請求項７に記載のタンパク質。 - 【請求項９】 イヌ又はウマのＩＬ−１８活性を有するタンパク質をコード
するヌクレオチド配列。 - 【請求項１０】 配列番号２又は配列番号４に示されたアミノ酸配列を有す
るタンパク質をコードする、請求項９に記載のヌクレオチド配列。 - 【請求項１１】 配列番号１（イヌＩＬ−１８）又は配列番号３（ウマＩＬ
−１８）に示されたヌクレオチド配列。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP98201451 | 1998-05-07 | ||
| EP98201451.6 | 1998-05-07 | ||
| PCT/EP1999/003098 WO1999056775A1 (en) | 1998-05-07 | 1999-05-04 | Use of interleukin-18 as vaccine adjuvant |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002513547A true JP2002513547A (ja) | 2002-05-14 |
Family
ID=8233676
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000546799A Withdrawn JP2002513547A (ja) | 1998-05-07 | 1999-05-04 | ワクチン・アジュバントとしてのインターロイキン−１８の使用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1075275A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002513547A (ja) |
| AU (1) | AU3827699A (ja) |
| CA (1) | CA2328059A1 (ja) |
| WO (1) | WO1999056775A1 (ja) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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