JP2002506349A

JP2002506349A - 哺乳動物神経成長因子様タンパク質

Info

Publication number: JP2002506349A
Application number: JP50483699A
Authority: JP
Inventors: オー．シェパード，ポール; ジェイ．ジェリネク，ローラ; イー．ウィットモア，セオドア; ブルムバーグ，ハル; エム．レーナー，ジョイス
Original assignee: ザイモジェネティクス，インコーポレイティド
Priority date: 1997-06-18
Filing date: 1998-06-18
Publication date: 2002-02-26
Also published as: IL133582A0; WO1998057983A2; WO1998057983A3; AU7979898A; CA2295439A1; AU737132B2; EP0996628A2; NZ501873A

Abstract

(57)【要約】新規な哺乳動物神経成長因子様ポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、並びに関連組成物及び抗体及び抗−イデオタイプ抗体を含む方法。

Description

【発明の詳細な説明】哺乳動物神経成長因子様タンパク質発明の背景多細胞生物の細胞の増殖および分化は、ホルモンおよびポリペプチドの成長因子により制御される。これらの拡散可能な分子のために、細胞は互いに連絡しかつ協力して作用して、細胞および器官を形成し、そして損傷した組織を修復しかつ再生することができる。ホルモンおよび成長因子の例は次の通りである：ステロイドホルモン（例えば、エストロゲン、テストステロン）、副甲状腺ホルモン、小胞刺激ホルモン、インターロイキン、血小板由来成長因子（PDGF）、表皮成長因子(EGF)、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、エリトロポイエチン(EPO)およびカルシトニン。ホルモンおよび成長因子は、タンパク質への結合により細胞の代謝に影響を及ぼす。タンパク質は、細胞内のシグナリング経路、例えば、第２メッセンジャー系に結合されている、一体的膜タンパク質である。タンパク質の他のクラスは可溶性分子、例えば、転写因子である。発明の要約本発明は、Zneulと呼ばれる新規な神経成長因子様ポリペプチドおよび関係する組成物を提供することによって、この必要性を扱う。１つの面内において、本発明は、Zneulと命名する哺乳動物ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。成熟ヒトZneulポリペプチドは、ほぼ254アミノ酸長さのアミノ酸配列から構成されている。配列番号：２のアミノ酸残基のスレオニンは、成熟ポリペプチドの最初のアミノ酸である。したがって、アミノ酸残基１〜１９はシグナル配列を構成し、そして成熟Zneulポリペプチドは残基２０〜254から構成されたアミノ酸配列により表される。成熟Zneulポリペプチドはさらに配列番号：３により表される。マウスZneulは配列番号：１８および１９により定められる。アミノ酸残基１〜２３のシグナル配列を有すると、成熟マウスZneul は配列番号：２４により表される２４〜278である。追加の態様内で、ポリペプチドはさらに親和標識からなる。それ以上の態様内で、ポリヌクレオチドはDNA である。本発明の第２の面内で、（ａ）転写プロモーター；（ｂ）ZneulポリペプチドをコードするDNAセグメント；および（ｃ）転写ターミネーターからなり、ここでプロモーター、DNAセグメント、およびターミネーターが作用可能に連鎖されている、発現ベクターが提供される。本発明の第３の面内で、発現ベクターがDNAセグメントによりコードされるタンパク質ポリペプチドである、前述の発現ベクターが導入された、培養された真核細胞が提供される。本発明の第４の面内で、ペプチド結合により結合された第１部分および第２部分から本質的に成るキメラポリペプチドが提供される。キメラポリペプチドの第１部分は、（ａ）配列番号：２に示すZneulポリペプチド；（ｂ）配列番号：２のアレレ変異型；および（ｃ）（ａ）および（ｂ）に対して少なくとも９０％同一であるタンパク質ポリペプチドから本質的に成る。キメラポリペプチドの第２部分は、他のポリペプチド、例えば、親和標識から本質的に成る。１つの態様内で、親和標識は免疫グロブリンＦｃポリペプチドである。本発明は、また、キメラポリペプチドをコードするベクター、およびキメラポリペプチドを産生するようにトランスフェクトされた宿主細胞を提供する。本発明の追加の面内で、前述のZneulポリペプチドに特異的に結合する抗体、およびZneulポリペプチドに対する抗体を中和する抗イディオタイプ抗体が提供される。前述に加えて、本発明は、また、配列番号：８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、および１６を含むポリペプチドの方向づけられたドメインである。本発明の追加の態様は、前述のアミノ酸配列を有するZneulポリペプチドのエピトープ担持部分のアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドに関する。本発明のZneulポリペプチドのエピトープ担持部分のアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドは、少なくとも９、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも３０〜５０アミノ酸残基を有するが、前述の本発明のポリペプチドの全体までの長さのアミノ酸配列のエピトープ担持ポリペプチドもまた本発明内に含まれる。前記ポリペプチドの特定の例は、配列番号：２０〜２３のアミノ酸配列により定められる。また、他のポリペプチドまたは担体分子に融合された、これらのポリペプチドの任意のものが特許請求される。本発明の他の態様は、配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４により定められるペプチドまたはポリペプチドに結合するか、あるいは前記ペプチドまたはポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるペプチドまたはポリペプチドに結合する抗体を生産する方法に関し、この方法は、動物に前記ペプチドまたはポリペプチドを接種するか、あるいは前記ペプチドまたはポリペプチドをコードする核酸配列を接種し、ここで前記動物は前記ペプチドまたはポリペプチドに対する抗体を産生し、そして前記抗体を単離する、ことからなる。本発明のこれらおよび他の面は、下記の詳細な説明を参照すると、明らかとなるであろう。発明の詳細な説明本明細書において引用する参考文献のすべての教示は、それらの全体において引用することによって本明細書の一部とされる。用語「アレレ変異型」は、本明細書において、同一染色体位置を占有する遺伝子の２またはそれ以上のオールタネイティブ形態の任意のものを意味するために使用する。アレレ変異型は天然に突然変異により発生し、そして集団内で表現型の多形性を生ずることがある。遺伝子の突然変異はサイレントである（コードされたポリペプチドは変化しない）か、あるいは変更されたアミノ酸配列を有するペプチドをコードすることがある。アレレ変異型という用語は、また、本明細書において、遺伝子のアレレ変異型によりコードされるタンパク質を意味するために使用される。用語「発現ベクター」は、その転写を提供する追加のセグメントに作用可能に連鎖された問題のポリペプチドをコードするセグメントからなる、線状または円形の、DNA分子を意味するために使用される。このような追加のセグメントはプロモーターおよびターミネーターを含み、そして１またはそれ以上の複製起点、１またはそれ以上の選択可能なマーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、およびその他を含むことができる。発現ベクターは、一般に、プラスミドまたはウイルスDNAに由来するか、あるいは双方の要素を含有することができる。用語「単離された」は、ポリヌクレオチドに適用されるとき、ポリヌクレオチドがその天然の遺伝的環境から取出され、こうして他の外部のまたは望ましくないコーディング配列を含まず、そして遺伝子操作されたタンパク質産生系内で使用するために適当な形態であることを意味する。「作用可能に連鎖された」は、DNAセグメントに適用されるとき、セグメントがそれらの意図する目的のために協力して機能するように、例えば、転写がプロモーターにおいて開始されかつコーディングセグメントを通してターミネーターに進行するように、配置されていることを示す。「ポリヌクレオチド」は、５’→３’末端に読んだデオキシリボヌクレオチド塩基またはリボヌクレオチド塩基の一本鎖または二本鎖のポリマーである。ポリヌクレオチドはRNAおよびDNAを包含し、そして天然源から単離され、in vitro合成されるか、あるいは天然および合成の分子の組合わせから製造することができる。用語「プロモーター」は、本明細書において、その技術的に認識されている意味で、RNAポリメラーゼの結合および転写の開始を提供するDNA配列を含有する遺伝子の部分を意味するために使用される。プロモーター配列は普通に、しかし常にではないが、遺伝子の５’非コーディング領域において見出される。「可溶性タンパク質」は、細胞膜に結合しない、タンパク質のポリペプチドである。本発明の好ましい態様範囲内で、単離されたポリヌクレオチドは配列番号：１の同様な大きさの領域に、またはそれに対して相補的な配列に、ストリンジェント条件下に、ハイブリダイゼーションするであろう。一般に、ストリンジェント条件は、規定されたイオン強度およびpHにおいて、特定の配列について融点（Ｔｍ）よりも約５℃低いように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全に合致したプローブにハイブリダイゼーションする温度（規定されたイオン強度およびpH下に）である。典型的なストリンジェント条件は、塩濃度がpH７において約0.02Ｍたはそれより低くかつ温度が少なくとも約６０ ℃である条件である。前述したように、本発明の単離されたポリヌクレオチドは DNAおよびRNAを包含する。DNAおよびRNAを単離する方法はこの分野においてよく知られている。全体のRNAはグアニジンHCl抽出および引き続くCsCl勾配の遠心による単離を使用して製造することができる、Chirgwin et al．、Biochemistry 1 8：52-94(1979)。ポリ（Ａ）⁺RNAは、全体のRNAから、AvivおよびLeder、Proc． Natl．Acad．Sci．USA 69：1408-1412(1972)の方法に従い製造される。相補的DN A（cDNA）は、ポリ（Ａ）⁺RNAから、既知の方法に従い製造される。次いで、Zne ulポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを同定し、そして、例えば、ハイブリダイゼーションまたはPCRにより、単離する。本発明のポリヌクレオチドは、DNA合成装置を使用して合成することができる。現在、選択される方法はホスホルアミダイト法である。遺伝子または遺伝子フラグメントの合成のような用途のために化学的に合成された二本鎖DNAが必要とする場合、各相補的鎖を別々に作る。短い遺伝子（６０〜８０bp）の製造は技術的に簡単であり、そして相補的鎖を合成し、次いでそれらをアニールすることによって達成することができる。しかしながら、より長い遺伝子(＞300bp)の製造のためには、特別の戦略に頼らなくてはならない。なぜなら、化学DNA合成のカップリング効率はめったに100％とならないからである。この問題を克服するために、２０〜100ヌクレオチドの長さの一本鎖フラグメントから合成遺伝子（二本鎖）を組立てる。下記の文献を参照のこと：Glick、Bernard R.およびJack J ．Pasternak、Molecular Biotechnology，Principle & Applications of Recomb inant DNA、（ASM Press、ワシントンＤＣ、1994）、Itakura、K．et al．、合成オリゴヌクレオチドの合成および使用、Ann．Rev．Biochem．53：323-356(1984)、およびClimie、S．et al．、チミジレートシンターゼ遺伝子の化学的合成、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87：633-6 37(1990)。当業者は認識するように、配列番号：１、２および３に開示されている配列はヒトの単一のアレレを表す。これらの配列のアレレ変異型は、標準的手順に従い、異なる個体からのcDNAまたはゲノムのライブラリーをプロービングすることによってクローニングすることができる。さらに、本発明は、他の種からの対応物のタンパク質およびポリヌクレオチドを提供する（「種のオーソログ」）。他の哺乳動物種、例えば、ネズミ、ブタ、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、および他の霊長類からのZneulポリペプチドは特に重要である。本発明により提供される情報および組成物を慣用のクローニング技術と組み合わせて使用して、ヒトZneulタンパク質の種のオーソログをクローニングすることができる。例えば、前記タンパク質を発現する組織または細胞の型から得られたmRNAを使用して、cDNAをクローニングすることができる。本明細書において開示する配列から設計されたプローブでノザンブロットをプロービングすることによって、適当なmRNA源を同定することができる。次いで、陽性の組織または細胞系統のmRNAからライブラリーを調製する。次いで、タンパク質をコードするcDNAを、種々の方法により、例えば、完全なまたは部分的ヒトまたはマウスcDNAでプロービングするか、あるいは開示された配列をベースとするデジェネレイトプローブのＩまたはそれ以上の組でプロービングすることによって、単離することができる。また、ポリメラーゼ連鎖反応、すなわち、PCR（Mulli s、米国特許第4,683,202号）により、本明細書において開示する配列から設計されたプロモーターを使用して、cDNAをクローニングすることができる。追加の方法範囲内で、cDNAライブラリーを使用して宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができ、そして問題のcDNAの発現をタンパク質に対する抗体で検出することができる。また、同様な技術をゲノムのコロニーの単離に適用することができる。言語「ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドは配列番号：２により定められる」は、本明細書および請求の範囲において使用するとき、配列番号：２のすべてのアレレ変異型および種のオーソログを包含する。本発明は、また、配列番号：３のポリペプチドおよびその種のオーソログに対して実質的に相同性である、単離された製造ポリペプチドを提供する。「単離された」とは、その自然環境以外の、例えば、血液および動物の組織以外の、状態において見出されるタンパク質またはポリペプチドを意味する。好ましい形態において、単離されたポリペプチドは他のポリペプチド、特に動物由来の他のポリペプチドを実質的に含有しない。高度に精製された形態、すなわち、９５％より高い、より好ましくは９９％より高い純度のポリペプチドを提供することが好ましい。用語「実質的に相同性の」は、本明細書において、配列番号：２に示す配列またはその種のオーソログに対して５０％、好ましくは６０％、より好ましくは少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドを意味するために使用される。このようなポリペプチドは、配列番号：２に示す配列またはその種のオーソログに対して、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、最も好ましくは９５％またはそれ多い同一性を有する。配列の同一性の百分率は、慣用法により決定される。例えば、下記の文献を参照のこと：Altschul et al．、Bull．Math．Bio ．48：603-616(1986)およびHenikoffおよびHenikoff、Proc．Natl．Acad．Sci． USA 89：10915-10919(1992)。簡単に述べると、１０のギャップオープニングペナルティー、１のギャップエクステンションペナルティー、および表１に示すようなHenikoffおよびHenikoff(ibid.)の「ブラッサム６２」スコアリングマトリックス（アミノ酸は標準的１文字コードにより示される）を使用して、整列のスコアが最適になるように２つのアミノ酸配列を整列させる。次いで、次のようにして、同一性の百分率を計算する：（同一の合致の総数）／（より長い配列の長さ＋２つの配列を整列させるためにより長い配列の中に導入されたギャップの数）×100 ポリヌクレオチド分子の配列の同一性は、前述の比を使用する同様な方法により決定される。実質的に相同性のタンパク質およびポリペプチドは、１またはそれ以上のアミノ酸配列の置換、欠失または付加を有するとして特性決定される。これらの変化は好ましくは小さい特質を有する、すなわち、下記の変化である：保存的アミノ酸配列の置換（表２参照）およびタンパク質またはポリペプチドのフォルディングまたは活性に有意に影響を与えない他の置換；小さい、典型的には１〜約３０アミノ酸の、欠失：および小さいアミノ末端またはカルボキシル末端のエクステンション、例えば、アミノ末端のメチオニン残基、約２０〜２５残基の小さいリンカーペプチド、または精製を促進する小さいエクステンション（親和標識）、例えば、ポリ−ヒスチジンのトラクト、プロテインＡ、Nilsson et al.、EMBO J ．4：1075（1985）；Nilsson et al.、Methods Enzymol．198：3、(1991)、グルタチオンＳトランスフェラーゼ、SmithおよびJohnson、Gene 67：31、(1988 )、または他の抗原性エピトープまたは結合ドメイン。一般に、下記の文献を参照のこと：Ford et al．、Protein Expression and Purification 2：95-107、( 1991)。親和標識をコードするDNAsは、商業的供給会社から入手可能である（例えば、Pharmacia Biotech.、ニュージャージイ州ピスカタウェイ）。本発明のポリペプチド中の必須アミノ酸は、この分野において知られている手法、例えば、部位特異的突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発に従い同定することができる、CunninghamおよびWells、Science 244、1081-1085、（198 9）；Bass et al.、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88：4498-4502、(1991)。後者の技術において、単一のアラニンの突然変異を分子中のすべての残基において導入し、そして生ずる突然変異体の分子を生物学的活性について試験して（例えば、リガンドの結合およびシグナルトランスダクション）分子の活性に対する重大であるアミノ酸残基を同定する。リガンド−タンパク質の相互作用部位は、また、核磁気共鳴、結晶学またはフォトアフィニティー標識化のような技術により測定される結晶構造の分析により、決定することができる。例えば、下記の文献を参照のこと：de Vos et al．、Science 255：306-312、（1992）；Smith et al ．、J．Mol．Biol．224：899-904、（1992）；W lodaver et al.、FEBS Lett．309：59-64、(1992)。必須アミノ酸の同一性は、また、関係するタンパク質との相同性の分析から推定可能である。既知の突然変異誘発法およびスクリーニング、例えば、下記の文献に開示されている方法により、多重アミノ酸配列置換を行い、試験することができる：Reid haar-OlsonおよびSauer、Science 241：53-57、(1988)またはBowieおよびSauer 、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86：2152-2156、(1989)。簡単に述べると、これらの著者らは、ポリペプチド中の２またはそれ以上の位置を同時にランダム化し、機能的ポリペプチドについて選択し、次いで突然変異化されたポリペプチドを配列決定して、各位置における許容可能な置換のスペクトルを決定する方法を開示している。使用できる他の方法は下記のものを包含する：ファージのディスプレイ、例えば、Lowman et al．、Biochem．30：10832-10837、（1991）；Ladner et al.、米国特許第5,223,409号；Huse、WIPO公開WO92/06204号、および領域特異的突然変異誘発、Derbyshire et al．、Gene 46：145、（1986）；Ner et al ．、DNA 7：127、(1988)。上に開示した突然変異誘発法を高い処理量のスクリーニング法と組合わせて、宿主細胞中のクローニングし、突然変異化されたタンパク質の活性を検出することができる。これに関して好ましいアッセイは、細胞の増殖アッセイおよびバイオセンサーをベースとするリガンド結合アッセイを包含し、これらについて後述する。活性タンパク質またはその一部分（例えば、リガンド結合フラグメント）をコードする突然変異化DNA分子を宿主細胞から回収し、現代的装置を使用して、急速に配列決定することができる。これらの方法は、問題のポリペプチド中の個々のアミノ酸残基の重要性の急速な決定を可能とし、そして未知のポリペプチドに適用可能である。前述の方法を使用して、配列番号：３またはそのアレレ変異型に対して実質的に相同性でありかつ野生型タンパク質の性質を保持する、種々のポリペプチドを製造することができる。本明細書において表現しかつ請求の範囲に記載する言語「配列番号：２により定められるポリペプチド」は、前記ポリペプチドのすべてのアレレ変異型および種のオーソログを包含する。本発明のタンパク質ポリペプチドは、全長のタンパク質、タンパク質フラグメント（例えば、リガンド結合性フラグメント）、および融合ポリペプチドを包含し、慣用技術に従い、遺伝子操作された宿主細胞中で生産することができる。適当な宿主細胞は、外因的DNAで形質転換またはトランスフェクトし、培養成長した細胞の型であり、細菌、菌類の細胞、および培養された高等真核細胞を包含する。真核細胞、特に多細胞生物の培養した細胞は好ましい。クローニングしたDN A分子を操作し、種々の宿主細胞の中に導入する技術は、下記の文献に開示されている：Sambrook et al．Molecular Cloning：A Laboratory Manual、第２版、 Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、NY、(1989)、およびAusubel et al.、ibid．。一般に、ZneulポリペプチドをコードするDNA配列を、発現ベクター内のその発現に必要な他の遺伝的因子、例えば、転写プロモーターおよびターミネーターに作用可能に連鎖させる。ベクターは、また、通常１またはそれ以上の選択可能なマーカーおよび１またはそれ以上の複製起点を含有するであろうが、当業者は認識するように、ある種の系内において、選択可能なマーカーを別のベクター上に設け、そして宿主細胞系の中への組込みにより外因的DNAの複製を実施することができる。プロモーター、ターミネーター、選択可能なマーカー、ベクターおよび他の因子の選択は、当業者のレベルの範囲内の日常的設計事項である。多数のこのような因子が文献に記載されており、商業的供給会社から入手可能である。本発明の他の態様は、本発明のポリペプチドのエピトープ担持部分からなるペプチドまたはポリペプチドを提供する。このポリペプチド部分のエピトープは、本発明のポリペプチドの免疫原性または抗原性エピトープである。抗体が結合できるタンパク質の領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。例えば、： Geysen、H.M．et al．、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81：3998-4002(1984)参照。抗原性エピトープを有する（すなわち、抗体が結合できるタンパク質分子の領域を含有する）ペプチドまたはポリペプチドの選択に関すると、タンパク質配列の一部分を模擬する比較的短い合成ペプチドは、部分的に模擬されたタンパク質を反応する抗血清を日常的に引き出することができることは、この分野においてよく知られている。Sutcliffe、J.G．et al．、Science 219：660-666（1983）参照。タンパク質反応性血清を引き出すことができるペプチドは、しばしばタンパク質の一次配列において表示され、１組の簡単な化学的ルールにより特徴づけられ、そして無傷のタンパク質の免疫優性領域（すなわち、免疫原性エピトープ）に拘束されず、また、アミノ末端またはカルボキシル末端に拘束されない。極めて疎水性であるペプチドおよび６またはそれより少ない残基のペプチドは、一般に、模擬されたタンパク質に結合する抗体の誘導において無効である；より長い可溶性ペプチド、特にプロリン残基を含有するペプチドは通常有効である。したがって、本発明の抗原性エピトープ担持ペプチドおよびポリペプチドは、本発明のポリペプチドに特異的に結合する、モノクローナル抗体を包含する、抗体を発生させるために有用である。本発明の抗原性エピトープ担持ペプチドおよびポリペプチドは、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列内に少なくとも９、好ましくは１５〜約３０アミノ酸の配列を含有する。しかしながら、本発明のポリペプチドの３０〜５０アミノ酸、または全体のアミノ酸配列までの任意の長さを含有する、本発明のアミノ酸配列の主要な部分からなるペプチドまたはポリペプチドは、また、タンパク質と反応する抗体を誘導するために有用である。好ましくは、エピトープ担持ペプチドのアミノ酸配列は、水性溶媒中の実質的な溶解度を提供するように選択される（すなわち、配列は比較的親水性の残基を含み、そして疎水性残基は好ましくは回避される）；そしてプロリン残基を含有する配列は特に好ましい。配列のリストに示すポリペプチドのすべては本発明に従い使用すべき抗原性エピトープを含有するが、特別に設計された抗原性エピトープは配列番号：２０〜２４により定められるペプチドを包含する。本発明のポリヌクレオチド、一般にcDNA配列は、前述のポリペプチドをコードする。本発明のポリペプチドをコードするcDNA配列は１系列のコドンから構成され、ポリペプチドの各アミノ酸残基はコドンによりコードされ、そして各コドンは３つのヌクレオチドから構成されている。アミノ酸残基は、次のようにして、それらのそれぞれのコドンによりコードされる：アラニン(Ala)は、GCA，GCC，GCGまたはGCTによりコードされる；システイン(Cys)は、TGCまたはTGTによりコードされる；アスパラギン酸(Asp)は、GACまたはGATによりコードされる；グルタミン酸(Glu)は、GAAまたはGAGによりコードされる；フェニルアラニン(Phe)は、TTCまたはTTTによりコードされる；グリシン(Gly)は、GGA，GGC，GGGまたはGGTによりコードされる；ヒスチジン(His)は、CACまたはCATによりコードされる；イソロイシン(Ile)は、ATA，ATCまたはATTによりコードされる；リジン(Lys)は、AAAまたはAAGによりコードされる；ロイシン(Leu)は、TTA，TTG，CTA，CTC，CTGまたはCTTによりコードされる；メチオニン(Met)は、ATGによりコードされる；アスパラギン（アスパラギン）は、AACまたはAATによりコードされる；プロリン(Pro)は、CCA，CCC，CCGまたはCCTによりコードされる；グルタミン(Gln)は、CAAまたはCAGによりコードされる；アルギニン(Arg)は、AGA，AGG，CGA，CGC，CGGまたはCGTによりコードされる；セリン(Ser)は、AGC，AGT，TCA，TCC，TCGまたはTCTによりコードされる；スレオニン(Thr)は、ACA，ACC，ACGまたはACTによりコードされる；バリン(Val)は、GTA，GTC，GTGまたはGTTによりコードされる；トリプトファン(Trp)は、TGGによりコードされる；そしてチロシン(Tyr)は、TACまたはTATによりコードされる。本発明によれば、cDNAが前述したように特許請求されるとき、特許請求されるものは双方のセンス鎖、アンチセンス鎖、およびそれらのそれぞれの水素結合により一緒にアニールされたセンス鎖およびアンチセンス鎖の双方を有する二本鎖としてのDNAであることが理解されることを認識すべきである。また、本発明のポリペプチドをコードするメッセンジャーRNA（mRNA）は特許請求され、そして前記mRNAは前述のcDNAによりコードされる。メッセンジャーRNA（mRNA）は上に定義されたコドンと同一のコドンを使用してポリペプチドをコードするであろうが、ただし各チミン（Ｔ）はウラシルヌクレオチト（Ｕ）で置換されている。 Zneulポリペプチドを分泌経路に向けるために、分泌シグナル配列（また、リーダー配列、プレプロ配列または前配列として知られている）が発現の中に準備されている。分泌シグナル配列はタンパク質のそれであるか、あるいは他の分泌されたタンパク質から誘導される（例えば、t-PA）か、あるいは新たに合成することができる。分泌シグナル配列は正しいリーディングフレームでZneul DNA配列に結合されている。分泌シグナル配列は問題のポリペプチドをコードするDNA 配列に対して５’に通常位置するが、ある種のシグナル配列は問題のDNA配列中のどこかに位置することができる（Welch et al.、米国特許第5,037,743号；Hol land.et al.、米国特許第5,143,830号参照）。培養した哺乳動物細胞は本発明において好ましい宿主である。哺乳動物宿主細胞の中に外因的DNAを導入する方法は、リン酸カルシウム仲介トランスフェクション［Wigler et al．、Cell 14：725、（1978）；CorsaroおよびPearson、Soma tic Cell Genetics 7：603、（1981）；GrahamおよびVan der Eb、Virology 52 ：456、(1973)］、エレクトロポレーション（Neumann et al.、EMBO J．1：841- 845、(1982)］、DEAE−デキストラン仲介トランスフェクション［Ausubel et al .、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons，Inc．、NY 、(1987)］、およびリポソーム仲介トランスフェクション［Hawley-Nelson et al.、Focus 15：73、（1993）；Ci ccarone et al．、Focus 15：80、(1993)］を包含する。培養した哺乳動物細胞中の組換えポリペプチドの産生は、例えば、下記の米国特許に開示されている： Levinson et al．、米国特許第4,713,339号；Hagen et al.、米国特許第4,784,9 50号；Palmiter et al．、米国特許第4,579,821号；およびRingold、米国特許第 4,656,134号。適当な培養した哺乳動物細胞は、COS-1(ATCC No.CRL 1650)、COS- 7(ATCC No.CRL 1651)、BHK(ATCC No.CRL 1632)、BHK 570（ATCC No.CRL 10314）、293、ATCC No.CRL 1573；Graham et al.、J．Gen．Virol．36：59-72、(1977) およびチャイニーズハムスター卵巣(例えば、CHO-K1；ATCC No.CCL 61)細胞系統を包含する。追加の適当な細胞系統はこの分野において知られており、そして公衆用寄託機関、例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Amer ican Type Culture Collection）米国マリイランド州ロックビレ）から入手可能である。一般に、強い転写プロモーター、例えば、SV-40またはサイトメガロウイルスからのプロモーターが好ましい。例えば、米国特許第4,956,288号参照。他の適当なプロモーターは、メタロチオネイン遺伝子からのプロモーター（米国特許第4,579,821号および米国特許第4,601,978号）、およびアデノウイルスの主要な後期プロモーターを包含する。薬剤選択を一般に使用して、外来DNAが挿入されている培養した哺乳動物細胞について選択する。このような細胞は普通に「トランスフェクタント」と呼ばれる。選択的因子の存在において培養され、そして問題の遺伝子をそれらの子孫に渡すことができる細胞は、「適当なトランスフェクタント」と呼ばれる。好ましい選択可能なマーカーは、抗生物質ネオマイシンに対する耐性をコードする遺伝子である。選択はネオマイシン型薬剤、例えば、Ｇ−418またはその他の存在において実施される。また、選択系を使用して問題の遺伝子の発現レベルを増加することができ、これは「増幅」と呼ばれる。低いレベルの選択因子の存在においてトランスフェクタントを培養し、次いで選択因子の量を増加させて、導入された遺伝子の産物を高いレベルで産生する細胞について選択することによって、増幅は実施される。好ましい増幅可能な選択可能なマーカーはジヒドロフォレートリダクターゼであり、これはメトトレキセートに対する耐性を与える。他の薬剤耐性因子（例えば、ヒグロマイシン耐性、多薬剤耐性、プロマイシンアセチルトランスフェラーゼ）を使用することもできる。また、他の高等真核細胞、例えば、昆虫細胞、植物細胞およびトリ細胞を宿主として使用することができる。昆虫細胞の形質転換およびその中の外来ポリペプチドの産生は、Guarino et al.、米国特許第5,162,222号；Bang et al．、米国特許第4,775,624号；およびWIPO公開WO94/06463号に開示されている。植物細胞において遺伝子を発現するためのベクターとしてアグロバクテリウム・リゾゲネス（Agrobacterium rhizogenes）を使用することは、Sinker et al．、J．Biosc i．(Bangalore)11：47-58、(1987)において概観されている。菌類細胞、例えば、酵母細胞、特にサッカロマイセス(Saccharomyces)属の細胞を、また、本発明において、例えば、タンパク質フラグメントまたはポリペプチド融合物の製造に使用することができる。外因的DNAで酵母細胞を形質転換し、それから組換えポリペプチドを生産する方法は、例えば、下記の米国特許に開示されている：Kawasaki、米国特許第4,599,311号；Kawasaki et al．、米国特許第4,931,373号；Brake、米国特許第4,870,008号；Welch et a l.、米国特許第5,037,743号；およびMurray et al．、米国特許第4,845,075号。選択可能なマーカー、普通の薬剤耐性または特定の栄養（例えば、ロイシン）の非存在において成長する能力により決定された表現型により、形質転換された細胞を選択する。酵母において使用するために好ましいベクター系はKawasaki et al．（米国特許第4,931,373号）に開示されているPOT1ベクター系であり、これはグルコース含有培地中の成長による形質転換された細胞の選択を可能とする。酵母において使用するために適当なプロモーターおよびターミネーターは、解糖酵素の遺伝子（例えば、Kawasaki、米国特許第4,599,311号；Kingsman et al．、米国特許第4,615,974号；およびBitter、米国特許第4,977,092号参照）およびアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子からプロモーターを包含する。また、米国特許第4,990,446号；米国特許第5,063,154号；米国特許第5,139,936号および米国特許第4,661,454号参照。他の酵母、例えば、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Hanse nula polymorpha）、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe) 、クルイベロマイセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、クルイベロマイセス・フラギリス（Kluyveromyces fragilis）、ウスチラゴ・マイディス(Ustilag o maydis)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、ピキア・メタノリカ(Pichi a metanolica)、ピキア・グイレルモンディイ（Pichia guillermondii）およびカンジダ・マルトサ(Candida maltosa)はこの分野において知られている。例えば、下記の文献を参照のこと：Gleeson et al.、J．Gen．Microbiol．132：3459 -3465、(1986)およびCregg、米国特許第4,882,279号。アスペルギルス(Aspergil lus)細胞を、McKnight et al．、米国特許第4,935,349号の方法に従い利用することができる。アクレモニウム・クリソゲヌム（Acremonium chrysogenum）を形質転換する方法は、Su mino et al．、米国特許第5,162,228号に開示されている。ニューロスポラ（Neu rospora）を形質転換する方法は、Lambowitz、米国特許第4,486,533号に開示されている。形質転換された宿主細胞またはトランスフェクトされた宿主細胞を、慣用手順に従い、栄養および選択した宿主細胞の成長に必要な他の成分を含有する培地中で培養する。規定培地および複合培地を包含する、種々の適当な培地はこの分野において知られており、そして一般に炭素源、窒素源、必須アミノ酸、ビタミンおよび無機質を含む。培地は、また、必要に応じて、成長因子または血清のような成分を含有することがある。外因的に付加されたDNAを含有する細胞について、例えば、発現ベクター上に担持されるか、あるいは宿主細胞の中に共トランスフェクトされた選択可能なマーカーにより補足された必須栄養中の薬剤選択または欠失により、成長培地は一般に選択されるであろう。本発明の１つの面において、新規なタンパク質は培養した細胞により産生され、そしてこの細胞を使用して、そのタンパク質のための１またはそれ以上のレセプターについてスクリーニングする。レセプターは天然のレセプター、ならびに天然リガンドのアゴニストおよびアンタゴニストを包含する。タンパク質の単離：発現された組換えポリペプチド（またはキメラポリペプチド）を、分画および／または慣用の精製方法および媒質により精製することができる。試料の分画に、硫酸アンモニウム沈降および酸またはカオトロープ抽出を使用することができる。典型的な精製工程は、ヒドロキシアパタイト、サイズ排除、FPLCおよび逆相高性能液体クロマトグラフィーを包含する。適当なアニオン交換媒質は、誘導化デキストラン、アガロース、セルロース、ポリアクリルアミド、特製品シリカ、およびその他を包含する。PEI，DEAE，QAEおよびＱ誘導体は好ましく、DEAEファスト−フロウ・セファローズ（Pharmacia、ニュージャージイ州ピスカタウェイ）は特に好ましい。典型的なクロマトグラフィー媒質は、フェニル、ブチル、またはオクチル基で誘導化された媒質、例えば、フェニル−セファローズＦＦ(Pharmacia)、トヨパール(Toyopearl)ブチル650（TosoHaas、ペンシルベニア州モントゴメリヴィレ）、オクチル−セファローズ(Pharmacia)およびその他；またはポリアクリル酸樹脂、例えば、アンバークロム（Amberchrom）CG71 (Toso Haas)およびその他を包含する。適当な固体の支持体は、使用条件下に不溶性である、ガラスビーズ、シリカをベースとする樹脂、セルロース樹脂、架橋したアガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、架橋したポリアクリルアミド樹脂およびその他を包含する。これらの支持体は、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基および／または炭水化物部分によりタンパク質を結合させる反応性基で変性することができる。カップリング化学的の例は、臭化シアンの活性化、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドの活性化、エポキシドの活性化、スルフヒドリルの活性化、ヒドラジドの活性化、およびカーボジイミドのカップリング化学のためのカルボキシルおよびアミノ誘導体を包含する。これらおよび他の固体の媒質はこの分野においてよく知られており、広く使用されており、そして商業的供給会社から入手可能である。支持媒質にレセプターを方法する方法は、この分野においてよく知られている。特定の方法の選択は日常的設計事項であり、そして選択した支持体の性質により一部分決定される。例えば、下記の文献を参照のこと：Affinity Chromatography：Prlnciple & Methods、Paharmac ia LKB Biotechnology、スイス国ウップサラ、(1988)。本発明のポリペプチドは、それらの性質を利用することによって単離することができる。例えば、固定化された金属イオン吸着（IMAC）クロマトグラフィーを使用して、ヒスチジンに富んだタンパク質を精製することができる。簡単に述べると、ゲルにまず２価の金属イオンを負荷してキレートを形成する、E．Sulkows ki、Trends in Biochem．3：1-7、(1985)。ヒスチジンに富んだタンパク質は、使用する金属イオンに依存して、異なるアフィニティーでこのマトリックスに吸着され、そして競合溶離、pHの低下、または強いキレート化剤の使用により溶離されるであろう。他の精製法は、レクチンアフィニティークロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーによるグリコシル化タンパク質の精製を包含する、Methods in Enzymol．、Vol.182、”Guide to Protein Purification”、 M．Deutscher、（編）、Academic Press、サンディエゴ、（1990）、pp.529-39 。あるいは、問題のポリペプチドおよび親和標識（例えば、ポリヒスチジン、マルトース結合性タンパク質、免疫グロブリンのドメイン）の融合物を構築して、精製を促進することができる。 Zneul の物理的構造配列番号：２に示すZneulポリペプチドは、アミノ酸残基１〜19を含むシグナルペプチドを有する。アミノ酸残基２０〜104は、HSMHC3W5Aドメイン、配列番号：１７、（GenBank No.g1401159）に対して相同性の親水性ドメインを定める。アミノ酸残基105〜135は、表皮成長因子(EGF)ドメインに対して相同性のドメインを定める。アミノ酸残基136〜177は、EGFドメインに対して相同性の他のドメインを定める；そしてアミノ酸残基178〜273は、HSMHC3W5Aドメイン、配列番号：１７、（GenBank No.g1401159）に対してまた相同性のドメインを定める。しかしながら、配列番号：２のアミノ酸残基105〜135に対応するZneulの第１のEGF様ドメイン(EGF1)、配列番号：９は、先行技術における任意の他のEGFドメインと区別される。Zneul中のEGF1は、HSMHC3W5A_6ドメイン、その最も密接なヒト関係物、に約56％類似する。配列番号：２のアミノ酸残基136〜177に対応するZneulの第２のEGF様ドメイン（EGF2）、配列番号：１０は、先行技術における任意の他のEGFドメインと区別される。Zneul中のEGF2は、PIR_S31101フィブリリン、その最も密接なヒト関係物、に約４８％類似する。配列番号：２のアミノ酸残基２０〜104に対応するZneulの第２のEGF様ドメイン（EGF1）、配列番号：８。配列番号：８は、HSMHC3W5A、その最も密接なヒト関係物、にほぼ３８％類似する。配列番号：２のアミノ酸残基178〜273に対応するZneulの第２のEGF様ドメイン（EGF2）、配列番号：１１は、先行技術における任意の他のポリペプチド区別される。それはHSMHC3W5A_6に約３２％類似する。使用 Zneulの発現の組織特異性は、Zneulを、脊髄、心臓、脾臓、精巣、甲状腺およびリンパ節における成長、維持、または分化の因子として使用できることを示す。本発明は、また、診断の用途において使用される試薬を提供する。例えば、Zn eul遺伝子は染色体9q34.3上にマッピングされた。Zneul核酸プローブを使用して、染色体９における異常性を検査することができるであろう。正常の染色体９において、Zneul核酸プローブが染色体９に対してハイブリダイゼーションすることが予測される。プローブが染色体９に対してハイブリダイゼーションしない場合、これは染色体９における異常性を示すであろう。 Zneulの最も密接なヒト相同体は、HSMHC3W5A、すなわち、ノッチ(Notch)４を含有するコスミドの中に含有される、HLAクラスIII領域中の遺伝子である。Zneu lは、また、そのEGF様ドメイン中のノッチ４に対して相同性である。ZneulはEGF −レセプター経路に関係することができる。ノッチの構造／機能この遺伝子のファミリーのもとのメンバーは、末梢神経系の発育における細胞の運命の決定を制御する、ショウジョバエ（Drosophila）遺伝子のノッチであった。ノッチは単一の膜貫通ドメインを有する細胞表面のレセプターである。相同体は今回C．elegans（lin12およびglp1）、クセノプス(Xenopus)、マウスおよびヒトにおいて見出された。ノッチのファミリーのすべてのメンバーは、多数のEG F様モチーフ（マウスにおいて２９〜３９、C．elegansにおいて１０〜１３）および細胞外ドメインの中にLNR（lin12／ノッチの反復）３またはそれより多いコピーを有する。ノッチのファミリーのメンバーは、また、cdc10/SWI6モチーフ（また、アンキリン反復と呼ばれる）の６コピーおよび細胞内ドメインの中にPEST タンパク質分解配列を含有する。特定のEGF反復（ショウジョバエ（Drosophila ）反復１１および１２）は、リガンドの結合に関係する。LNRは調節ドメインであり、高いリガンドの濃度が存在するとき、リガンドに結合し、そしてノッチの活性を低下させる。cdc10/SWI6ドメインは、ノッチ活性化シグナルトランスダクション経路の成分とのタンパク質の相互作用に関係する。ノッチの生物学２つの消化転位は、オンコジーンの状態を生ずる変更されたノッチ遺伝子の形成に導いた。TAN−１オンコジーンは、βＴ細胞レセプターの一部分とヒトノッチ１の細胞外ドメインおよび全体の細胞内ドメインの小さい領域との融合物である。TAN−１は、Ｔリンパ芽球性白血病を引き起こす、ノッチの活性化された形態である。ｉnt−３オンコジーンは、マウス乳癌ウイルスをノッチ４遺伝子の中に組込んで、無傷の細胞内ドメインを発現させるさせることによって生ずる。int−３もまた乳癌腫に導くノッチの活性化された形態である。ノッチのファミリーのメンバーの機能は、ショウジョバエ（Drosophila）およびC．elegansにおいて網羅的に研究されてきている。これらのタンパク質は、細胞−細胞の相互作用に依存する二元性決定を制御する。ノッチタンパク質は、レセプターとしてのそれらの提案された役割と一致する。機能的ノッチアレレの獲得および喪失は、反対の細胞の運命の決定を生ずる。ノッチのレセプターおよびそれらのリガンドは、文字通りの阻害において重要な役割を演じ、隣接する細胞の間のシグナリングのプロセスはノッチとそのリガンドとの間のフィードバックループにより増幅される。このプロセスはある細胞においてレセプターの活性を増加させ、そして他の細胞においてリガンドの活性を増加させて、シグナル発生細胞と受容細胞とを区別させる。最近、マウスの発生するＴ細胞におけるノッチ１の活性化された形態の発現は、CD8系列Ｔ細胞を増加させかつCD4系列Ｔ細胞を組換えさせることが示された。活性化されたノッチの発現は、クラスＩ主要組織適合性複合体(MHC)タンパク質、これらの細胞の発生に通常必要であるリガンド、の非存在においてさえ、成熟 CD8系列胸腺細胞の発生を可能とする。しかしながら、クラスＩおよびクラスＩＩの双方のMHCが存在しないとき、活性化されたノッチはCD8を促進するために不十分である。これらの結果は、CD4/CD8系列の決定における参加物としてノッチを関係づける。Robey、E．et al．、Cell 87：48 3-492(1996)。染色体１９上のCADASILと呼ばれる遺伝子領域（皮質下梗塞を伴う脳常染色体優性動脈症および白質萎縮症）は、再発性皮質下虚血事象および血管性痴呆を包含する主要な特徴を有する、卒中および痴呆の型に関係づけられる。ノッチ３はこの領域にマッピングされ、そしてCADASIL患者における突然変異はノッチ３がC ADASIL患者において欠陥のあるタンパク質であるうることを示す、Joutel、A．e t al．、Nature 383：707-710(1996)。ノッチのリガンドまた、ノッチのレセプターのファミリーのためのリガンドの保存されたファミリーが存在する。多数のリガンドは同一レセプターを活性化することができる。例えば、デルタ状および鋸歯状の各々はショウジョバエ（Drosophila）ノッチのリガンドとして作用する。これらのリガンドのすべては、EGF反復（１〜１４）、DSLドメイン（デルタ状、鋸歯状、lag−２）および膜貫通ドメインを含有する。したがって、レセプターおよびリガンドは互いに対して相同性である。さらに、レセプターおよびリガンドはしばしば共発現され、そして小胞中で互いに関連する。 Zneul の構造 Zneulは、２つのEGFを有することにおいて、ノッチおよびそのリガンドに類似する。しかしながら、Zneulは小さい数のEGF反復を有し、そして膜スパニングドメイン、lin12／ノッチドメインおよびアンキリンドメインを欠如する。ノッチの構造／機能の実験に基づいて、Zneulはノッチ機能を中和するであろうことが予測されるであろう。Zneul中のEGF反復がレセプターに結合できる場合、それは隣接する細胞上のリガンドの結合を阻害することができるであろう。さらに、Zneulはそれがアゴニストである、それ自身の標的包膜するを有することができる。 Zneul の組織分布／多数のmRNAの大きさ Zneulは大人のヒト組織において広く発現される。Zneulは、心臓、胎盤、脾臓、精巣、甲状腺、脊髄およびリンパ節において最も高度に発現される。ドットブロットは、Zneulが、また、種々の胎児組織において発現されることを示す。少なくとも３つのmRNAの大きさが存在する：脳および精巣におけるのみの1.3kbのmRNA リンパ節におけるのみの1.7kb 多数の組織における1.3＋1.7 胎盤におけるのみの2.4kb Zneulの配列は脳において1.3kbのmRNAであるので、どの型の分子がより大きい転写物をコードするかを予測することは困難である。より多いEGF反復およびノッチまたはノッチのリガンドにおいて観察される他のドメインを有する、可溶性 Zneulタンパク質をより大きい形態がコードできる可能性がある。あるいは、余分の配列が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインをコードできるであろう。ノッチ機能に対する可能な関係 Zneulがノッチのリガンドとして作用するかどうかを予測すること、あるいはレセプターの結合について競合することによって他のノッチのリガンドの活性を中和することは困難である。Zneulは幹細胞の特定の系列への分化における二元的決定を変更することができるか、あるいは隣接する細胞の細胞運命の決定を変更することができる。あるいは、Zneulはノッチとともに何もなすことができない。多数のタンパク質はEGF反復を有する。Zneulは異なるクラスのレセプターの成長因子として作用することができる。他の可能な役割 ● 乳癌において役割（EGFレセプター多数の乳癌において過度に発現される）。 ● グリア芽細胞腫、下垂体腺腫。マッピングのデータ Zneulはヒト染色体9q34.3に、ノッチ１と同一の染色体バンドにおいて、マッピングされる。ノッチ４およびHSMHC3W5Aは、また、MHC III遺伝子座において結合されることは重要である、すなわち、真性のノッチレセプターおよび２EGF反復の新規なタンパク質の重複。治療上の実用性 Zneulおよびそのアンタゴニストは、下記の治療上の試薬として使用することができる。１．アルツハイマー病 Sel12遺伝子がlin12機能獲得突然変異体のサプレッサーとして同定された。Se l12は、位置のクローニングされたヒト初期開始ファミリーのアルツハイマー病遺伝子の相同体である。したがって、Zneulはこの病気に影響を与える経路に影響を与えることができ、そして大部分の他の組織よりも低いレベルにもかかわらず、それは脳において発現される。２．癌非ホジキンリンパ腫および急性骨髄性白血病を包含する9q34における中断点に関連する、多数の染色体再配列が存在する。染色体9q34に対して適切にハイブリダイゼーションしないZneulのプローブは、染色体９の異常性を示し、そして発生する癌についての個体の起こりうる偏好を示すであろう。内皮特異的遺伝子であるノッチ４との関連性の可能性が与えられると、Zneul は内皮細胞腫、例えば、血管周囲細胞腫を促進または阻害に関係しうるであろうか？他の可能性は血管形成においてである。なぜなら、腫瘍への血液供給の遮断は有効な癌の治療法であるからである。 Zneulが高度に発現されていることが与えられると、最も優勢な形態の癌が精巣およびリンパ節の中に存在するであろう。３．造血 Moore et al．(PNAS 94：4011-4016、1997)は、双方の高い増殖性の潜在的祖先の促進および幹細胞の再居住にデルタ様（哺乳動物のノッチのリガンド）を関係づけた。Zneulはリンパ節および脾臓において高度に発現されるので、分化を阻害して幹細胞の自己更新を促進するか、あるいは祖先の集団の決定に関係することができるであろう。化学療法後または幹細胞のin vitro拡大後に、再居住する血球における可能な使用。４．心臓心筋梗塞後の修復プロセスにおける筋源繊維の増殖または移動の刺激。最近、縮れた相同体はこのプロセスに関係づけられた。ショウジョバエ（Drosophila）において縮れた相同体およびノッチの経路の間の相互作用の証拠が存在する。５．胎盤種々の成長因子の刺激および阻害が胎盤において行われた。６．精巣受精および避妊における役割。７．脊髄ノッチはハエおよび哺乳動物の双方の細胞における神経発生においてある役割を演ずるので、Zneulは神経の再生においてある役割を演ずる。本発明は、また、有意な治療上の価値を有する試薬を提供する。Zneulポリペプチド（天然に存在するまたは組換え）、そのフラグメント、それに対する抗体および抗イディオタイプ抗体、ならびにZneulポリペプチドに対する結合アフィニティーを有するとして同定された化合物は、異常な増殖を包含する、異常な生理学または発生に関連する症状、例えば、癌の症状、または変性的症状の治療において有用であろう。例えば、Zneulポリペプチドによる異常な発現または異常なシグナリングに関連する疾患または障害は、Zneulポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストの標的となるであろう。 Zneulポリペプチドに対する抗体を精製し、患者に投与することができる。これらの試薬を療法上の使用のために追加の活性成分または不活性成分、例えば、薬学上許容される担体または希釈剤と、生理学的に無害の安定剤および賦形剤と一緒に組合わせることができる。これらの組合わせを滅菌濾過し、例えば、投与用バイアル中で凍結乾燥して投与形態にするか、あるいは安定化された水性調製物の形態で貯蔵することができる。本発明は、また、抗体、その結合性フラグメントまたは補体結合性ではない形態を包含する抗体の一本鎖抗体の使用に関する。有効な療法に必要な試薬の量は、多数の異なる因子、例えば、投与手段、ターゲット部位、患者の生理学的状態、および投与される他の薬剤に依存するであろう。したがって、治療の投与量は安全性および効能を最適化するように調節されるべきである。典型的には、in vitroにおいて使用する投与量は、それらの試薬のin vivo投与に有効量の有用な手引きを提供できる。特定の障害の治療に有効な投与量の動物の試験は、ヒトの投与量のそれ以上の予測的指示を提供するであろう。投与方法は、経口、静脈内、腹腔、筋肉内、または経皮の投与を包含する。薬学上許容される担体は、水、生理食塩水、緩衝液を包含するが、これらに限定されない。投与量の範囲は、１μｇ〜1000μｇ／kg体重／日である。しかしながら、投与量はこれより高いか、あるいはこれより低くすることができ、通常医師により決定される。薬剤の処方および投与量の範囲の詳細な説明については、下記の文献を参照のこと：Remington's Pharmaceutical Sciences 第１７版、（Mack Publshing Co．、ペンシルベニア州イーストン、1990）、およびGoodmanおよびGilman's：The Pharmacological Bases of Therapeutics、第９版（Pergamon Press、1996）。核酸をベースとする療法上の治療哺乳動物が突然変異したZneul遺伝子を有するか、あるいはZneul遺伝子を欠如する場合、Zneul遺伝子を哺乳動物細胞の中に導入することができる。１つの態様において、Zneulポリペプチドをコードする遺伝子をin vivoにおいてウイルスベクターの中に導入する。このようなベクターは、弱毒化または欠陥DNAウイルス、例えば、単純ヘルペスウイルス(HSV)、肺炎ウイルス属、ＥＢウイルス（EBV ）、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス(AAV)、およびその他を包含するが、これらに限定されない。ウイルス遺伝子を完全にまたはほとんど完全に欠如する、欠陥ウイルスは好ましい。欠陥ウイルスは、細胞の中に導入後、感染性ではない。欠陥ウイルスを使用すると、ベクターが他の細胞を感染しうることを無視して、特定の局在化された区域における細胞への投与が可能となる。特定のベクターの例は下記のものを包含するが、これらに限定されない：欠陥ヘルペスウイルス１（HIV1）のベクター［Kaplitt et al.、Molec．Cell．Neurosci．2：320-33 0(1991)］、弱毒化アデノウイルスのベクター、例えば、Stratford-Perricaudet et al.、J．Clin．Invest．90 ：626-630(1992)、および欠陥アデノ関連ウイルスのベクター［Samulski et al ．、J．Virol．61：3096-3101（1987）；Samulski et al．、J．Virol．63：382 2-3828（1989）］。他の態様において、遺伝子をレトロウイルスのベクターの中に導入することができる、例えば、下記の文献を参照のこと：Anderson et al．、米国特許第5,39 9,346号；Mann et al．、Cell 33：153（1983）；Temin et al．、米国特許第4, 650,764号；Temin et al.、米国特許第4,980,289号；Markowitz et al.、J．Vir ol．62：1120（1988）；Temin et al．、米国特許第5,124,263号；国際特許公開 No.WO95/07358号、1995年３月１６日発行、Dougherty et al.；およびBlood 82 ：845(1993)。また、ベクターをin vivoリポフェクションによりリポソームを使用して導入することができる。マーカーをコードする遺伝子のin vivoトランスフェクションのリポソームを製造するために、合成カチオンリガンドを使用することができる［Felgner et al.、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84：7413-7417（1987）；Ma ckey et al．、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85：8027-8031(1988)参照］。in v ivoにおいて特定の器官の中に外因的遺伝子を導入するためにリポフェクションを使用することは、ある種の実際的利点を有する。特定の細胞へのリポソームの分子ターゲッティングは、有益な１つの領域を表す。特定の細胞にトランスフェクションを向けることは、有益な１つの領域を表すことが明らかである。特定の細胞の型にトランスフェクションを向けることは、細胞の不均質性を有する組織、例えば、膵臓、肝臓、腎臓、および脳において特に好都合であろうことが明らかである。ターゲッティングの目的で、脂質を他の分子に化学的にカップリングすることができる。ターゲッテッドペプチド、例えば、ホルモンまたは神経伝達物質およびタンパク質、例えば、抗体、または非ペプチド分子をリポソームの化学的にカップリングすることができる。体から細胞を取出し、裸のDNAプラスミドとしてベクターを導入し、次いで形質転換された細胞を体の中に再移植することができる。遺伝子治療のための裸の DNAベクターをこの分野において知られている方法、例えば、下記の方法により所望の宿主細胞の中に導入することができる：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、トランスダクション、細胞融合、 DEAEデキストラン、リン酸カルシウム沈澱法、遺伝子ガンの使用またはDNAベクターのトランスポーターの使用［例えば、Wu et al．、J．Biol．Chem．267：96 3-967（1992）；Wu et al．、J．Biol．Chem．263：14621-14624（1988）］。抗体 Zneulエピトープ、ペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合する抗体を製造するために、ZNEU1ポリペプチドを、また、使用することができる。Zneulポリペプチドまたはそのフラグメントは、動物を接種し、免疫応答を引き出すための抗原（免疫原）として働く。適当な抗原は配列番号：２または３あるいはその少なくとも隣接９アミノ酸のフラグメントによりコードされるZneulポリペプチドであろう。この免疫応答から発生した抗体を、前述したように、単離し、精製することができる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を製造し、単離する方法は、この分野においてよく知られている。例えば、下記の文献を参照のこと：Current Protocols in Imunology、Cooligan、et al．(編)、National In stitutes of Health（John Wiley & Sons，Inc.、1995）；Sambrook et al．、M olecular Cloning：A Laboratory Manual、第２版（Cold Spr ing Harbor、NY,．1989）；およびHurrel、J.G.R.、編、Monoclonal Hybridoma Antibodies：Techniqes and Applications（CRC Press，Inc．、フロリダ州ボカレイトン）。当業者にとって明らかなように、種々の温血動物、例えば、ウマ、雌牛、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ニワトリ、ウサギ、マウス、およびラットにZneulポリペプチドまたはそのフラグメントを接種することによって、ポリクローナル抗体を発生させることができる。アジュバント、例えば、明礬（水酸化アルミニウム）またはフロインド完全アジュバントまたはフロインド不完全アジュバントを使用することによって、Zneulポリペプチドの免疫原性を増加させることができる。免疫化に有用なポリペプチドは、また、融合ポリペプチド、例えば、Zneulまたはそのタンパク質と免疫グロブリンポリペプチドまたはマルトース結合性タンパク質との融合物を包含する。ポリペプチドの免疫原は、全長の分子またはその一部分であることができる。ポリペプチドの部分が「ハプテン様」である場合、このような部分を免疫化のために高分子の担体（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)、ウシ血清アルブミン(BSA)または破傷風トキソイド）に結合させることは好都合であろう。本明細書において使用するとき、用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、アフィニティー精製されたポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、および抗原結合性フラグメント、例えば、F(ab')₂およびFabタンパク質分解フラグメントを包含する。遺伝子操作された無傷の抗体またはフラグメント、例えば、キメラ抗体、Ｆｖフラグメント、一本鎖抗体およびその他、ならびに合成抗原結合性ペプチドおよびポリペプチドもまた包含される。非ヒトCDRsヒトフレームワークおよび定常領域をグラフトするか、あるいは全体の非ヒト可変ドメインを組込むことによって、非ヒト抗体をヒト化することができる（必要に応じて露出された残基の置換により、それらをヒト様表面で「クローキング（cloaking）する、ここで「ベニヤ化された（veneered）」抗体が得られる）。ある場合において、ヒト化抗体は、適切な結合特性を増強するために、ヒト可変領域内に非ヒト残基を保持することができる。抗体をヒト化することによって、生物学的半減期を増加することができ、そしてヒトに投与するときの悪い免疫反応の可能性が減少される。本発明において有用な抗体を発生させるか、あるいは選択する別の技術は、Zn eulタンパク質またはペプチドへのリンパ球のin vitro暴露、およびファージまたは同様なベクター中の抗体ディスプレイライブラリーの選択を包含する（例えば、固定化または標識化されたZneulタンパク質またはペプチドを使用する）。ファージ（ファージディスプレイ）または細菌、例えば、大腸菌（E.coli）上でディスプレイされるランダムペプチドライブラリーをスクリーニングすることによって、潜在的Zneulポリペプチド結合性ドメインを有するポリペプチドをコードする遺伝子を得ることができる。ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、多数の方法において、例えば、ランダム突然変異誘発およびランダムポリヌクレオチド合成により、得ることができる。これらのランダムペプチドディスプレイライブラリーを使用して、既知のターゲットと相互作用するペプチドについてスクリーニングすることができ、ここで既知のターゲットはタンパク質またはポリペプチド、例えば、リガンドまたはレセプター、生物学的または合成的分子、または有機または無機の物質であることができる。このようなランダムペプチドディスプレイライブラリーをつくり、スクリーニングする技術はこの分野において知られており（Ladner et al．、米国特許第5,223,409号；Ladner et al．、米国特許第4,946,778号；Ladner et al．、米国特許第5,403,484号およびLadner et al．、米国特許第5,571,698号）そしてランダムペプチドディスプレイライブラリーおよびこのようなライブラリーをスクリーニングするためのキットは商業的に入手可能であり、例えば、下記から入手可能である：クロンテク（Clontech）（カリフォルニア州パロアルト）、インビトロゲン・インコーポレーテッド（Invitrogen Inc.）(カリフォルニア州サンディエゴ)、ニニュー・イングランド・バイオラブズ・インコーポレーテッド（New Eng land Biolabs Inc.）（マサチュセッツ州ベバーリイ）およびファーマシアLKBバイテクノロジー・インコーポレーテッド(Pharmacia LKB Biotechnology，Inc.) 。本明細書において開示するZneul配列を使用してランダムペプチドディスプレイライブラリーをスクリーニングして、Zneulに結合するタンパク質を同定することができる。Zneulポリペプチドと相互作用する、これらの「結合性タンパク質」は、細胞のターゲッティング；アフィニティー精製による相同性ポリペプチドの単離に使用することができる；それらは薬剤、トキシン、放射性核種およびその他に直接的または間接的に結合させることができる。これらの結合性タンパク質は、また、分析方法において、例えば、発現ライブラリーのスクリーニングおよび活性の中和のために使用することができる。結合性タンパク質は、また、ポリペプチドの循環レベルを測定し、そして根元的な病理または疾患のマーカーとして可溶性ポリペプチドを検出または定量する診断アッセイにおいて使用することができる。また、これらの結合性タンパク質は、in vitroおよびin vivoにおけるZneulの結合およびシグナルトランスダクションをブロックするZneul「アンタゴニスト」として作用することができる。これらの抗Zneulタンパク質は、Z neulの作用をダウンレギュレートするために有用である。下記の場合、抗体は特異的に結合すると決定される：１）抗体が限界値のレベルの結合活性を示す場合、および／または２）抗体が関係するポリペプチド分子と有意に交差反応しない場合。第１に、ここにおける抗体が１０⁶／Ｍまたはそれより大きい、好ましくは１０⁷／Ｍまたはそれより大きい、より好ましくは１０⁸／Ｍまたはそれより大きい、最も好ましくは１０⁹／Ｍまたはそれより大きい、結合アフィニティー（Ｋａ）で、Zneulポリペプチド、ペプチドまたはエピトープと結合する場合、抗体は特異的に結合する。抗体の結合アフィニティーは、当業者により、例えば、スキャッチャード分析により、容易に測定することができる。第２に、抗体が関係するポリペプチドと有意に交差反応しない場合、抗体は特異的に結合すると決定される。例えば、標準的ウェスタンブロット分析を使用して、抗体がZneulを検出するが、既知の関係するポリペプチドを検出しない場合、抗体は関係するポリペプチド分子と有意に交差反応しない(Ausbel et al．、i bid.)。既知の関係するポリペプチドの例は、オーソログ、タンパク質のファミリーのメンバーである同一種からのタンパク質（例えば、IL-16）、Zneulポリペプチド、および非ヒトZneulである。そのうえ、抗体を既知の関係するポリペプチド「に対してスクリーニングして」、本発明のポリペプチドに特異的に結合する集団を単離することができる。例えば、Zneulに対する発生させた抗体は不溶性マトリックスに付着した関係するポリペプチドに吸着される；Zneulに対して特異的な抗体は適切な緩衝条件下にマトリックスを通して流れるであろう。このようなスクリーニングは、密接に関係するポリペプチドに対する非交差反応性のポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の単離を可能とする、Antibodies ：A Laboratory Manual、HarlowおよびLane（編）(Cold Spring Harbor Laborat ory Press 、1988)；Current Protocols in Imunology、Coolingan、et al．（編）、Natio nal Institutes of Health（John Wiley & Sons，Inc.、1995）。特定の抗体のスクリーニングおよび単離はこの分野においてよく知られている。下記の文献を参照のこと：Fundamental Immunology、Paul（編）(Raven Press、1993)；Getzo ff et al.、Adv．in Immunol．43：1-98（1988）；Monoclonal Antibodies：Pri nciples and Practice、Doding、J.W．(編)、（Academic Press Ltd.、1996）； Benjamin et al．、Ann．Rev．Immunol．2：67-101(1984)。この分野において知られている種々のアッセイを利用して、Zneulタンパク質またはペプチドに特異的に結合する抗体を検出することができる。典型的なアッセイは、Antibodies：A Laboratory Manual、HarlowおよびLane（編）(Cold Spr ing Harbor Laboratory Press、1988)に詳細に記載されている。このようなアッセイの代表的な例は次の通りである：並流免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ、放射線免疫沈澱、酵素結合イムノアッセイ(ELISA)、ドットブロットまたはウェスタンブロットアッセイ、阻害または競合アッセイ、およびサンドイッチアッセイ。さらに、抗体を野生型／突然変異体Zneulタンパク質またはポリペプチドに対する結合についてスクリーニングすることができる。 Zneulに対する抗体は、Zneulを発現する細胞の標識化；アフィニティー精製によるZneulの単離；Zneulポリペプチドの循環レベルを測定する診断アッセイ；根元的な病理または疾患のマーカーとしての可溶性Zneulポリペプチドの検出または定量；FACSを使用する分析法；発現ライブラリーのスクリーニング；抗イディオタイプ抗体の発生において；および抗体の中和またはin vitroおよびin vivo においてZneulポリペプチドをブロックするアンタゴニストとして；使用することができる。適当な直接的標識は、放射性核種、酵素、基質、コファクター、インヒビター、蛍光マーカー、化学発光マーカー、磁気粒子およびその他を包含する；間接的標識は、中間体としてビオチン−アビジンまたは他の補体／抗補体の対の使用を特徴とする。ここにおける抗体は、また、薬剤、トキシン、放射性核種およびその他に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこれらの複合体はin vivoの診断または療法上の用途に使用することができる。そのうえ、Zneulまたはそのフラグメントに対する抗体は、アッセイ、例えば、ウェスタンブロットまたはこの分野において知られているアッセイにおいて、in vitroで変性されたZneulまたはそのフラグメントを検出するために使用できる。本発明の追加の態様は、前述のアミノ酸配列を有するZneulポリペプチドのエピトープ担持部分のアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドに関する。本発明のZneulポリペプチドのエピトープ担持部分のアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチド、少なくとも９、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも３０〜５０アミノ酸配列を有する、このようなポリペプチドの部分を含むが、前述の本発明のポリペプチドの全体のアミノ酸配列までの任意の長さのエピトープ担持ポリペプチドもまた本発明に包含される。前記ポリペプチドの例は、配列番号：２０〜２３のアミノ酸配列により定められる。また、他のポリペプチドまたは担体分子に融合した、これらのポリペプチドの任意のものも特許請求される。下記の非限定的実施例により、本発明をさらに説明する。実施例１．Zneulのクローニング Zneulは発現された配列標識(EST)配列番号：４から同定された。ESTを含有するcDNAクローンは、ESTを含有する脳cDNAライブラリーの中に発見された。プラスミドで形質転換された大腸菌（E.coli）からcDNAを単離し、次いでＬＢ 100μｇ／mlのアンピシリンおよび100μｇ／mlのメチシリンのプレート上にストリーキングした。cDNAインサートを配列決定した。インサートは1514塩基対の長さであり、274アミノ酸のオープンリーディングフレームおよび推定上の１９アミノ酸のシグナルペプチドを有することが決定された。実施例２．ノザンブロット分析ヒト多重組織ブロット１、２、３（Clontech）をプロービングして、Zneulの組織分布を決定した。全体のZneulコーディング領域を含有するHindIII／NotIフラグメントを単離されたcDNAクローンから発生させ、プローブのために使用した。QIAprep Spin Miniprepキット（Qiagen）を使用して、５mlのＬＢ100μｇ／ml のアンピシリンの一夜の培養物から３７℃においてクローンのプラスミドプレプを調製した。100μｌのうちの２０μｌを、３０μｌの反応において３７℃で２時間３μｌのNEB緩衝液３、１０単位のHindIII（Gibco BRL）および１０単位のN otI(New England Biolabs)で消化した。消化物を0.8％ TBEアガロースゲル上で電気泳動させ、フラグメントを切断した。DNAをゲルスラブからQIAquickゲル抽出キット（Qiagen）で抽出した。このDNAの２５ngをＰ³²でMultiprime DNA Labe ling System（Amersham）により標識化し、そして組込まれなかった放射性物質をNucTarpプローブ精製カラム（Stratagene）で除去した。多重組織ノザンおよびヒトRNAマスターブロットを３時間１０mlのExpressHyb溶液とインキュベートし、ブロットに添加した。１mgのサケ精子DNAを添加し、５分間沸騰させた、２ ×１０⁶／mlの濃度のプローブを含有するプローブの溶液の１０mlと４２ ℃において一夜ハイブリダイゼーションを実施し、次いで１分間氷処理し、１０ mlのExpressHyb溶液（Clontech）に添加した。最初の洗浄条件は次の通りであった：２×SSC，0.05％ SDS、室温、４０分間、溶液の数回の交換、次いで0.1×SS C，0.1％SDS、６５℃、４０分間、１溶液の交換。次いでブロットをフィルムに −８０℃において露出した。交差ハイブリダイゼーション／バックグラウンドが存在したので、ブロットをさらに７２℃、次いで６５℃において0.1％×SSC，0. 1％ SDSで各１時間洗浄した。結果はZneulが大人の組織において広く発現されることを示す。Zneulは、心臓、胎盤、脾臓、精巣、甲状腺、脊髄およびリンパ節において高度に発現される。少なくとも３つのmRNAの大きさが存在する：脳および精巣におけるのみの1.3kbのmRNA；リンパ節におけるのみの1.4kb；多数の組織における1.3＋1.7kb；および胎盤におけるのみの1.4kb。実施例３．染色体の帰属およびZneulの配置商業的に入手可能な「GeneBridge 4 Radiation Hybrid Panel」（Research Ge netics，Inc.、アラバマ州ハンツヴィレ）を使用して、Zneulは染色体９にマッピングされた。GeneBridge 4 Radiation Hybrid Panelは、９３の放射線ハイブリッドクローンの各々からのPCRエイブル（PCRable）DNA、および２つの対照DNA （HFLドナーおよびA23レシピエント）を含有する。公衆的に入手可能なWWWサーバー(http://www-genome.wi.mit.edu/cgibin/cntig/rhmapper.pl)は、ヒトゲノムのゲノム研究の放射線ハイブリッド地図（「WICGR」放射線ハイブリッド地図）（これはGeneBridge 4 Radiation HybridPanelを使用して構築された）についてのホワイトヘッド研究所／MITセンター（Whitehead Institute/MIT Center）に関するマッピングを可能とする。「GeneBridge 4 RHPanel」でZneulをマッピングするために、PCRエイブル９６ウェルのマイクロタイタープレート（Stratagene、カリフォルニア州ラジョラ）中で、２０μｌの反応物を構成し、「RoboCycIer Gradient 96」サーマルサイクラー（Stratagene）において使用した。９５のPCR反応物の各々は、２μｌの１０×Klen Taq PCR反応緩衝液（CLONTECH Laboratories,Inc.、カリフォルニア州パロアルト）、1.6μｌのdNTP混合物（2.5mMの各々、PERKIN-ELMER、フォスターシティー、カリフォルニア州）、１μｌのセンスプライマー、配列番号：６、１ μｌのアンチセンスプライマー、配列番号：７、２μｌの「RediLoad」(Researc h Genetics,Inc．、アラバマ州ハンツヴィレ)、0.4μｌの５０×アドバンテイジ（Advantage）KlenTaqポリメラーゼミックス（Clontech Laboratories，Inc.）、２５ngの個々のハイブリッドクローンまたは対照からDNA、および全体の体積を２０μｌするためのｘμｌの蒸留水から成っていた。反応物を等しい量の鉱油でオーバーレイし、密閉した。PCRサイクラーの条件は次の通りであった：最初の１サイクル、５分の変性、９５℃、３５サイクルの１分の変性、９５℃、１分のアニーリング、７０℃、および1.5分のエクステンション、７２℃、次いで最後の１サイクルの７分のエクステンション、７２℃。反応物を２％アガロースゲル（Life Technologies、マリイランド州ガイサースバーグ）上の電気泳動により分離した。結果により、Zneulは、WICGR放射線ハイブリッド地図上でヒト染色体９結合基の上部から529.80cR_3000、フレームワークマーカーD9S158の7.90cR_3000遠位にマッピングされることが示された。これはZneulを統合されたLBD染色体９地図上の9q34.3領域に位置決定する（The Genetic Location Database、University of Southhampton、WWWサーバー（http ://cedar.genetics.soton.ac.uk/public_html/）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＺＷ (72)発明者ジェリネク，ローラジェイ. アメリカ合衆国，ワシントン 98155，シアトル，ノースイーストワンハンドレッドフォーティセブンス 1124 (72)発明者ウィットモア，セオドアイー. アメリカ合衆国，ワシントン 98052，レッドモンド，ノースイースト，ワンハンドレッドフィフティーセカンドアベニュ 6916 (72)発明者ブルムバーグ，ハルアメリカ合衆国，ワシントン 98103，シアトル，サニーサイドアベニュノース 4620 (72)発明者レーナー，ジョイスエム. アメリカ合衆国，ワシントン 98103，シアトル，フィネイアベニュノース 6522 ＃201

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４のグループから選択されるポリペプチドまたは前記グループのポリペプチドに対して少なくとも９０％同一でありかつ前記ポリペプチドの活性を保持するペプチドをコードする、哺乳動物Zneulポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド。２．配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４のポリペプチドまたは前記ポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドのエピトープ担持部分から構成された、少なくとも１５アミノ酸残基を有するペプチドまたはポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド。３．前記ペプチドまたはポリペプチドが担体のポリペプチドまたは他の担体分子に融合されている、請求項２に記載のポリヌクレオチド。４．下記の作用可能に連鎖された因子からなる発現ベクター：転写プロモーター； ZneulポリペプチドまたはZneulポリペプチドのエピトープ担持領域を含有するペプチドまたはポリペプチドをコードするDNAセグメント；および転写ターミネーター。５．下記の作用可能に連鎖された因子からなる発現ベクター：（ａ）転写プロモーター；（ｂ）キメラポリペプチドをコードするDNAセグメント、ここで前記キメラポリペプチドはペプチド結合により結合された第１部分および第２部分から本質的に成り、前記第１部分は哺乳動物ペプチドから構成されており、前記ペプチドは配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるポリペプチドであり、そして前記第２部分は第２ポリペプチドまたはタンパク質である；および（ｃ）転写ターミネーター。６．配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４から成るアミノ酸配列のグループから選択される単離されたZneulポリペプチドまたは前記ポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるポリペプチド。７．配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４のエピトープ担持部分から構成されているか、あるいは前記エピトープ担持部分に対して少なくとも９０％同一である、少なくとも１５アミノ酸残基を有する単離されたペプチドまたはポリペプチド。８．前記エピトープ担持部分が配列番号：２０〜２３から成るアミノ酸配列または前記エピトープ担持部分に対して少なくとも９０％同一であるペプチドまたはポリペプチドのグループから選択される、請求項７に記載の単離されたペプチドまたはポリペプチド。９．配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４のアミノ酸配列により定められる哺乳動物ポリペプチドに特異的に結合する抗体、抗体フラグメントまたは一本鎖抗体。１０．前記抗体、抗体フラグメントまたは一本鎖抗体がヒト化されている、請求項９に記載の抗体、抗体フラグメントまたは一本鎖抗体。１１．動物に配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４により定められるペプチドまたはポリペプチドまたは前記ペプチドまたはポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるペプチドまたはポリペプチドを接種するか、あるいは前記ペプチドまたはポリペプチドをコードする核酸配列を接種し、ここで前記動物は前記ペプチドまたはポリペプチドに対する抗体を産生し、そして前記抗体を単離する、ことからなる、配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４により定められるペプチドまたはポリペプチドまたは前記ペプチドまたはポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるペプチドまたはポリペプチドに結合する抗体を生産する方法。１２．配列番号：２〜３、８、９、１１〜１６、および１９〜２４により定められるペプチドまたはポリペプチドまたは前記ペプチドまたはポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるペプチドまたはポリペプチドの抗体、抗体フラグメントまたは一本鎖抗体に結合する、抗イディオタイプ抗体、抗イディオタイプ抗体フラグメントまたは抗イディオタイプ一本鎖抗体。１３．前記抗体がポリクローナルまたはモノクローナルである、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の抗体。