JP2002500227A - コンブレタスタチンａ−４プロドラッグとそのトランス異性体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 コンブレタスタチンＡ−４はこれまで抗新生物剤として前臨床開発のために選択されてきた。しかしながら、このものは本質的に水に不溶性である。 【解決手段】 コンブレタスタチンＡ−４とその適当な類似物質の新規な水溶性誘導体が発見され、コンブレタスタチンＡ−４の他の誘導体を中間体として用いる多工程プロセスにより合成された。これらの水溶性誘導体はここでは「コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ」と称する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は一般に、１種またはそれ以上の新生物疾患の治療に有用であろう化合
物の分野に関するものであり、さらに具体的には、本発明は「コンブレタスタチ
ンＡ−４」と命名された抗新生物化合物の水溶性プロドラッグの合成に関するも
のである。

【０００２】 この研究の一部は、ＤＨＨＳの国立ガン研究所から受領した優秀研究者助成金
ＣＡ４４３４４−０５−０９の資金によるものである。合衆国政府は本発明につ
いて一定の権利を有しているであろう。

【０００３】 本発明は、コンブレタスタチンＡ−４と命名された公知の抗新生物化合物のプ
ロドラッグとトランス異性体を合成する改良方法に関するものである。

【０００４】 本発明はさらに、アメリカ特許４９４０７２６、５４０９９５３および５５６
９７８６に記載のコンブレタスタチンＡ−４とその類似体に存在するフェノール
性水酸基との反応によるホスフェート塩を生成する化学を教示する。コンブレタ
スタチンＡ−４は、生物学的系のなかでは乏しい水溶性分布をもつ。コンブレタ
スタチンＡ−４の構造決定と単離は１９９１年２月２６日にＧ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉ
ｔほかに与えられたアメリカ特許４９９６２３７に記載されており、一方ではコ
ンブレタスタチンＡ−４プロドラッグを開発する初期の努力は１９９６年１０月
１日にＧ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔに与えられたアメリカ特許５５６１１２２に記載さ
れている。これらの特許の各々からの一般的な背景情報は、これらの参照により
ここに包含される。

【０００５】 有力なガン細胞生長とチューブリン集合阻害剤のコンブレタスタチンＡ−４は
、１９８５年頃にアフリカの樹木であるＣｏｍｂｒｅｔｕｍ ｃａｆｆｒｕｍ（
Ｃｏｍｂｒｅｔａｃｅａ）から単離され、前臨床が行なわれてきた。しかしなが
ら、該フェノールとそのアルカリ金属塩の極めて僅かな水溶性のために、医薬処
方の試みは不満足な結果を与えていた。本発明はコンブレタスタチンＡ−４に基
づく実用的な水溶性のプロドラッグを合成する継続した努力における画期的成功
を表わすもので、上記のアメリカ特許５５６１１２２に記載の初期の努力よりも
著しい進歩をなしている。

【０００６】 ある種のアフリカのズールー人の伝統においては、Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ ｃａ
ｆｆｒｕｍ（Ｃ．ｓａｌｉｃｙｏｌｉｕｍ，ｃｏｍｂｒｅｔａｃｅａ科）の根皮
は外敵を損傷させる魔力として使われてきた。この樹木から単離されたＺ−スチ
ルベンであるコンブレタスタチンＡ−４（ｌａ）（Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．
，１９８９，「強力な細胞生長とチューブリン阻害剤であるコンブレタスタチン
Ａ−４の単離と構造」、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉａ，４５，２０９）は、強力な
ガン細胞生長阻害剤［Ｅｌ−ｚａｙａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９３，「Ｃｏｍｂ
ｒｅｔｕｍ ｃａｆｆｒｕｍ（乾燥地帯の潅木）からの天然物であるコンブレタ
スタチンＡ−４の抗腫瘍活性のインビトロでの評価」Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ
Ｄｒｕｇｓ，４，１９）；ガン制圧剤（Ｄａｒｋ ｅｔ ａｌ．，１９９７，「
腫瘍脈管構造に対する強力かつ選択的毒性をもつ剤であるコンブレタスタチンＡ
−４」）；ならびにチューブリン集合阻害剤（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９
，「細胞分裂阻止性の天然物であるコンブレタスタチンＡ−４とコンブレタスタ
チンＡ−２：それらのコルヒチンとチューブリンとの結合の阻害メカニズム」、
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８，６９８４）］であることが分かっている。現
在、コンブレタスタチンＡ−４は臨床開発中である。

【０００７】 コンブレタスタチンＡ−４はフェノール性水酸基をもっており特異的な抗がん
剤としてかなりな有望性を示してはいるが、その極端に低い水溶性のため開発は
阻害されてきた。最近、一連の水溶性誘導体が報告されている（Ｂｒｏｗｎ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９５，「コンブレタスタチンＡ−４の水溶性糖誘導体の合成」
、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｐｅｒ
ｋｉｎ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，Ｉ，５７７；Ｗｏｏｄｓ，ｅｔ ａｌ．，
１９９５，「コンブレタスタチンＡ−４に基づく一連のスチルベン類のチューブ
リンとの相互作用、「Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，
７１，７０５；およびＢｅｄｆｏｒｄ，ｅｔ ａｌ．，１９９６，「細胞毒のコ
ンブレタスタチンＡ−４の水溶性プロドラッグの合成」、Ｂｉｏｏｒｑａｎｉｃ
＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，６，１５７
）。そしてそこでは水溶性のホスフェートのソーダ塩、１ｈがもっとも良いと証
明されている（Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａ
ｓｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ３２２，「コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグの
合成」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，１０，２９９；お
よびＰｅｔｔｉｔ，アメリカ特許５５６１１２２）。しかしながらビス（２，２
，２−トリクロエチル）ホスフォロクロリデートを用いるリン酸化配列、それに
続く還元（亜鉛、酢酸）、およびイオン交換樹脂による単離は、大規模でのプロ
ドラッグ１ｈの製造にはあまり適当でなく、したがって最終的な商業化に著しい
経済的障害を投げかけていた。

【０００８】 プロドラッグの選択は着実に増加しつつあり、次のものが含まれている。すな
わち、ポリ（エチレングリコール）エステル（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ
．，１９９６，「薬物伝達系：水溶性タキソール１’−ポリ（エチレングリコー
ル）エステルプロドラッグデザイン及びインビボ効果性」、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３９，４２４）；４級
塩（Ｌａｃｋｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９９６，「トポイソメラーゼＩの水溶性
阻害剤：カンプトテシインの４級塩誘導体」、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３９，７１３）；スルフォネート塩
（Ｈｅｊｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，「水溶性アンブロシンプロドラ
ッグ候補の合成と細胞毒性」、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎ
ａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８，３４０７）；ウレタン類（Ｉｚａｗａ ｅｔ
ａｌ．，１９９５，「スルフヒドリル化合物との反応により放出される抗腫瘍
プロドラッグのデザインと合成」、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎ
ａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５，５９３）；生分解性ポリマー（Ｇｏｍｂｏｔｚ
ｅｔ ａｌ．，１９９５，「蛋白とペプチド薬物伝達のための生分解ポリマー
」、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６，３３２）；ならび
にその他の種々の方法（Ｊｕｎｇｈｅｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，「抗腫瘍
プロドラッグの設計：抗体標的酵素のための基質」、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖ
ｉｅｗｓ，９４，１５５３）。しかし、今回の開示はかつて導入されたコンブレ
タスタチンＡ−４のリン酸ソーダ誘導体１ｈ（それは、ここで述べる方法によっ
て製造されるリン酸ソーダ誘導体３ｄと均等である。下記参照）に焦点があてら
れている。手元の証拠から、１ｈ（および３ｄ）は血清ホスファターゼによって
適当に脱リン酸化され、ついで細胞内へ輸送されると考えられる。

【０００９】 さらにリン酸塩プロドラッグの探求は次のような種々の物質と共に有用である
ことが分かった。すなわち、エトプサイド（Ｓａｕｌｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，
１９９４，「エトプサイドリン酸塩であるＢＭＹ−４０４８１の合成：エトプサ
イドの水溶性で臨床的に活性なプロドラッグ」、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍ
ｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，４，２５６７）；タ
キソール（Ｍａｍｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５，「アルカリホスファターゼ
で代謝活性後のパクリタキセル（タキソール）リン酸塩プロドラッグによるチュ
ーブリンの重合」、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，３７４，８
７７；Ｕｅｄａ ｅｔ ａｌ．，１９９５，「パクリタキセルの強力なプロドラ
ッグとしての２’−エトキシカルボニルパクリタキセルの新規で水溶性のリン酸
塩誘導体」、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，５，２４７；およびＵｅｄａ ｅｔ ａｌ．，１９９３
，「インビボで抗腫瘍活性をもつタキソールの新規で水溶性リン酸塩プロドラッ
グ」、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｌｅｔｔｅｒｓ，３，１７６１）；ならびにチロシン含有ペプチド（Ｃｈａｏ
ｅｔ ａｌ．，１９９３，「Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−ビス［２−（トリメトキ
シシリル）エチル］ホスファオラミダイト、ペプチド含有ホスフオチロシンの合
成のためのＦｍｏｃ／ｔ−ブチル戦略と両立可能な魅力的なリン酸化剤」、Ｔｅ
ｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３４，３３７７）。プロドラッグ１ｈ（
３ｄも然り）についてここに示すように、リン酸塩エステルは一般にインビボで
分解され（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編，１９８５，プロドラッグの設計、１−９２頁
、エルセビア、ニューヨーク）実用的な在庫期間で溶液に処方するに充分安定で
ある（Ｆｌｙｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９７０，「コルチコステロイド−２１−リ
ン酸塩エステルのソルボリシスに影響する因子」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，５９，１４３３）。コンブレタス
タチンＡ−４のリン酸ソーダエステルプロドラッグ１ｈ（３ｄ）の実用的な合成
の大規模化の改善のために、３種の新規なリン酸塩が合成され、ここに記載のよ
うに水溶性プロドラッグ３ｄに容易に変換された。

【００１０】 乳癌のようなヒトのガンのタイプの広範なスペクトルの強烈な性質は、迅速な
腫瘍の脈管形成の容易さと関連している。新脈管形成は新規な腫瘍脈管形成タイ
プの抗がん剤の極めて魅力的な標的である。コンブレタスタチンＡ−４ １ａは
強い抗脈管形成活性を示すことが見出され、誘導されたリン酸ソーダプロドラッ
グ１ｈ（３ｄ）は腫瘍の脈管化のインビボでの強力な阻害剤である。現在プロド
ラッグ１ｈは臨床開発中である。臨床試験のための量の純粋な薬物を提供するた
めの実際的な合成方法は、依然として重要な研究目的である。記載したように、
本発明は、リン酸化フェノール１ａのために本来の場所に作られたジベンジルク
ロロホスファイトを用いた大いに改良された配列、トリメチルインドシランによ
るベンジルエステル基の分解、そして生成物のナトリウムメトキサイドによりプ
ロドラッグ１ｈ（ここでは３ｄ）の良好な収率を得るための処理、という発見の
上に予測されたものである。しかしながら生成物は、まずプロドラッグ３ｄの水
溶液における若干の不透明性の存在により分かったところの異性体物質を伴なっ
ていることが見出された。副生物は、対応するトランス−スチルベン４ｃである
と思われ、抽出と分別再結晶で除去した。プロドラッグ３ｄの純度は、リン酸塩
緩衝液を用いてのイオンペアＨＰＬＣで容易にわかった。

【００１１】 この更なる研究は、合成による持続する副生物（４ｃと思われる）の構造の確
認に絞られた。加えるに、コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグの評価は、更
なる一連のプロドラッグ３ｄのリン酸前駆物質のリン酸塩金属とアンモニウムカ
チオン誘導体の作製により拡大された。トランス−スチルベンホスフェート４ｃ
の合成もまた、たとえばレスベラトロールのようなある種のトランス−スチルベ
ンフェノール類の化学的予防活性の観点からＳＡＲの目的に大いに有用であると
考えられた。

【００１２】 コンブレタスタチンＡ−４は本質的に水に不溶性である。この特性は、前臨床
開発に用いるための本化合物の医薬製剤の必要処方の完成とは著しく相反する。
従ってコンブレタスタチンＡ−４の誘導体、１ａ、３’フェノール基は、可能性
のある水溶性プロドラッグとしての評価のために作製した。アメリカ特許５５６
１１２２に記載のように、フェノール１ａのナトリウム塩１ｂ、カリウム塩１ｃ
およびヘミコハク酸エステル１ｄ誘導体は、水には本質的に不溶性である。実際
にも、これらの物質は水との反応によりコンブレタスタチンＡ−４を再生した。
他の一連の誘導体は、水溶性または安定性またはそれら両方の点で不満足である
ことが分かった。最も溶解性のある誘導体はたとえばアンモニウム１ｆ、カリウ
ム１ｇおよびナトリウム１ｈリン酸塩であり、中でも最後の２つが最も安定であ
り適当である。ここに述べたコンブレタスタチンＡ−４のナトリウムおよびその
他のリン酸塩誘導体もまた、有用なプロドラッグとしての必要な生物学的性質を
示すことが見出された。

【化２】 １ａ，Ｒ＝Ｈ １ｂ，Ｒ＝Ｎａ １ｃ，Ｒ＝Ｋ １ｄ＝ＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ １ｅ＝−Ｐ（：Ｏ）（ＯＣＨ_２ＣＣｌ_３）_２ １ｆ＝アンモニウムホスフェート塩 １ｇ＝カリウムホスフェート塩 １ｈ＝ナトリウムホスフェート塩、たとえば−Ｐ（：Ｏ）（．ＯＨ）（．
ＯＮａ^＋）

【００１３】 ホスフェートエステル塩１ｈ（そして今後は３ｄ）としてのコンブレタスタチ
ンＡ−４ １ａは、強力な抗腫瘍性および抗脈管形成物質であり、臨床開発中で
ある。コンブレタスタチンＡ−４からのリン酸化合成経路の改良の目的で、新し
い経路が研究された。リン酸化工程は、自然位でのジベンジルクロロホスファイ
トを用いて大いに改良されることが見出された。トリメチルクロロシラン／ナト
リウムアイオダイド方法を使ってのベンジルエステルの分解と、それに続くナト
リウムメトキサイドでの処理は、高い収率の水溶性プロドラッグ３ｄをもたらし
た。

【化３】

【００１４】 プロドラッグ３ｄについて上に更に具体的に示したように、一般にホスフェー
トエステル塩はインビボで分解される（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，既出）。コンブレ
タスタチンＡ−４のナトリウムホスフェートエステルプロドラッグのために特に
大規模合成の改良のために、３種のホスフェートエステル３ａ、３ｂおよび３ｃ
を合成し、そのうち最後のものが、以下に詳細に記載するように水溶性プロドラ
ッグ３ｄに容易に変換された。

【００１５】 天然のコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ３ｄの（Ｅ）−スチルベン異性
体４ｃ（下記参照）もまた、リン酸化（ジベンジルクロロホスファイト）、その
ベンジルエステルの分解（トリメチルヨードシラン）および得られたリン酸のナ
トリウムメトキサイドとの反応を用いて、類似の反応経過により（Ｅ）−コンブ
レタスタチンＡ−４ １ａから効率的に製造された。このリン酸ナトリウム生産
物４ｃはおそらくヨードで触媒される異性化によるもので、この合成経路をコン
ブレタスタチンＡ−４プロドラッグ３ｄの製造に用いる時には重要な副産物であ
ることが見出された。

【化４】

【００１６】 （Ｚ）−コンブレタスタチンＡ−４ １ａから誘導されるプロドラッグ３ｄの
リン酸前駆物質はまた、ヒトのガン細胞生長、抗微生物活性および溶解度性能を
評価するために一連の金属カチオンおよびアンモニウムカチオン塩に変換された
。すなわち種々の新規なコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ修飾物５ａ−ｓ
（下記参照）が製造され、そして種々の細菌および日和見的カビ類に阻害作用を
もつことが見出された。

【化５】 ただしＸ＝Ｈ（Ｚ）（１価）またはＸ＝Ｚ（２価） ５ａ Ｚ＝Ｃａ^２＋ ５ｂ Ｚ＝Ｃｓ^２＋ ５ｃ Ｚ＝Ｌｉ^＋ ５ｄ Ｚ＝Ｍｇ^２＋ ５ｅ Ｚ＝Ｍｎ^２＋ ５ｆ Ｚ＝Ｚｎ^２ ５ｇ Ｚ＝イミダゾール ５ｈ Ｚ＝モルホリン ５ｉ Ｚ＝ピペラジン ５ｊ ｚ＝ピペリジン ５ｋ Ｚ＝ピラゾール ５ｌ Ｚ＝ピリジン ５ｍ Ｚ＝アデノシン ５ｎ Ｚ＝シンコニン ５ｏ Ｚ＝グルコサミン ５ｐ Ｚ＝キニン ５ｑ Ｚ＝キニジン ５ｒ Ｚ＝テトラサイクリン ５ｓ Ｚ＝ベラパミル

【化６】

【００１７】 したがって本発明の主たる目的は、水溶性でありかつ安定なコンブレタスタチ
ンＡ−４のプロドラッグを製造することであり、またその化合物を合成する手段
を改良することである。

【００１８】 以上のおよびそれ以外の以下に記載の目的は、特に上述の構造と添付の図面と
を合わせて読めば、以下の例示の実施態様の詳細な記載から容易にわかるように
極めて予期できない方法で本発明により容易に充足される。

【００１９】 コンブレタスタチンが合成される方法は当業者によく知られている。次を参照
。ｐｅｔｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，「強力な細胞生長とチューブリン阻害剤のコン
ブレタスタチンＡ−４の単離と構造」，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉａ，２０９（１
９８９）既出。アメリカ特許４９９６２３７（２３７特許）に開示の方法で合成
されたコンブレタスタチンＡ−４を、このプロセスの全てにおいて使用した。

【００２０】 コンブレタスタチンＡ−４（１ａ）は、既に１９９５年のｐｅｔｔｉｔ ｅｔ
ａｌに記載のようにして合成された。ジイソプロピルエチルアミン（９８％）
、水酸化リチウム１水塩、水酸化セシウム、酢酸亜鉛２水塩、キニン１水塩、ピ
ペリジン、ピラゾール、およびナトリウムメトキサイド（９５％）、ジベンジル
ホスファイト、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１Ｈ−テトラゾール
（９８％）、８５％３−クロフォペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＡＢＡ）、クロロ
トリメチルシラン（９８％）、トリフルオロ酢酸（９９％）、トリエチルアミン
およびナトリウムメトキサイド（９５％）はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから入手した。ｔｅｒｔ−ブタノールはＡｃｒｏ
ｓＯｒｇａｎｉｃｓから入手した。酢酸カルシウム、酢酸マグネシウム４水塩、
酢酸マンガンならびにその他の反応および単離剤はＢａｋｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｃｏｍｐａｎｙから入手した。テトラヒドロフランを、ナトリウム／ベンゾ
フェノンから蒸留した。イミダゾールはｎ−ヘキサンから再結晶し、ピペラジン
はエタノールから再結晶して真空乾燥した。モルホリンはＫＯＨで乾燥し次いで
分別蒸留した。ピリジンはＣａＨ_２で乾燥し分別蒸留し、ＫＯＨ上で貯蔵した。
アデノシンはＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎから入手した。Ｍａｔｅｓｏｎ，Ｃｏｌｅ ＆ Ｂｅｌｌからのシ
ンコニンは、使用前にエタノールから再結晶した。Ｄ−グルコサミンはＮｕｔｒ
ｉｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手
した。キニジンはＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから、テトラサイクリンはＭａｔｅｓｏｎ
、Ｃｏｌｅ ＆ Ｂｅｌｌから、そしてベラパミルはＡｌｅｘｉｓ Ｃｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎから入手した。「エーテル」はジエチルエーテルを表わす。すべて
の溶媒は使用前に蒸留した。金属塩の１．０Ｍ溶液は蒸留水中であり、アミンの
１．０Ｍ溶液は乾燥メタノール中である。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシ（Ｎ，Ｎ
−ジエチルアミド）ホスフィンは上のＪｏｈｎ ｅｔ ａｌに記載（１９８８，
「ジ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ，Ｎ−ジエチルホスフォルアミデート、アルコールの
効果的なリン酸化のための新規なリン酸化剤」、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１４２−
１４４頁）のようにして製造した。

【００２１】 反応は、長い波長と短い波長の紫外線照射下で可視化したＡｎａｌｔｅｃｈシ
リカゲルＧＨＬＦ Ｕｎｉｐｌａｔｅｓを用いての薄層クロマトグラフィーでモ
ニターした。水性溶液の溶媒抽出液は、無水硫酸ソーダ上で乾燥した。

【００２２】 適当とあれば、粗製物はＥ．Ｍｅｒｃｋのフラッシュカラムクロマトグラフィ
ー（２３０−４００メッシュＡＳＴＭ）で分離した。

【００２３】 融点はＥｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌデジタル融点測定装置のＩＡ９２００モ
デルで測定し、補正した。ＩＲスペクトルはＮｉｃｏｌｅｔ ＦＴＩＲのモデル
ＭＸ−１機器を用いて得た。ＥＩＭＳデータは、ＭＡＴ３１２質量分光器で記録
した。高分解能ＦＡＢスペクトルはＫｒａｔｏｓ ＭＳ−５０質量分光器（Ｍｉ
ｄｗｅｓｔ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ネ
ブラスカ大学、リンカーン、ＮＥ）で得られた。すべての^１Ｎ−および^１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルは、別段の記載がない限り、ＣＤＣｌ_３を使いＶａｒｉａｎ
Ｇｅｍｉｎｉ ３００ＭＨｚ機器（ＴＭＳ内部参照）を用いて得られた。^３１Ｐ
−ＮＭＲスペクトルは、Ｕｎｉｔｙ５００ＭＨｚ機器を用い、ＣＤＣｌ_３中で８
５％リン酸を外部標準として得られた。元素分析はＧａｌｂｒａｉｔｈ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮによって行なわれた
。

【００２４】 ＨＰＬＣ分離と分析 ＨＰＬＣは、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ＨＰ １０５０シリーズ３Ｄ
Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ、ＲＶ．Ａ．０３．０１液体クロマトグラフで行なっ
た。すべての溶媒はＨＰＬＣ品質のもであり、使用前に濾過した。ＨＰＬＣ分離
および分析方法は、３３℃で水性緩衝イオンペア逆相勾配溶離によった。流速は
１．２ｍｌ／ｍｉｎ。カラムはＭｅｒｋ Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ １００Ｒ
Ｐ １８（５μｍ）、２５０×４．０ｍｍ（Ｌｉｃｈｒｏｃａｒｔ ２５０−４
）。溶離液は次の通り。ＥｌｕｔｅｎｔＡは５ｍＭ硫酸水素テトラブチルアンモ
ニウム、５ｍＭリン酸、５ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４。溶離液Ｂは７５％ＣＨ_３ＣＮ。
勾配は、ａ）６５％のＡと３５％のＢで４分間保持、ｂ）６５％のＡから１０％
のＡまでの８分間の線形勾配、ｃ）３分間保持。検出は３１０ｎｍの紫外線。

【００２５】 乾燥エーテル（２０ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブタノール（３．７ｇ、４．７ｍｌ
、５０ｍｍｏｌ、２．０当量）とトリエチルアミン（５．６ｇ、７．７ｍｌ、５
５ｍｍｏｌ、２．２当量）の溶液を、乾燥エーテル（５ｍｌ）中のジクロロ−Ｎ
，Ｎ−ジイソプロピルホスフィン（５．０ｇ、２５ｍｍｏｌ）に、溶液温度を０
℃未満に保ちながら加えた。添加完了時（約１５分）、溶液を室温としさらに３
時間攪拌した。重炭酸ソーダの５％水溶液を加え、水相を除去し、そしてエーテ
ル溶液を５％重炭酸ソーダ水溶液（２×１０ｍｌ）、ＮａＣｌの飽和水溶液（２
５ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、濾過し、溶媒を除去して透明な残留油を得た。真空
蒸留による精製は透明な油状の生産物を与えた（４．３ｇ、６３％）。沸点５６
−５７℃／０．０５ｍｍＨｇ。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）δ １．１７（ｄ
，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ（ＣＨ_３）_２），１．３５（ｓ，１８Ｈ，２ｘ（ＣＨ_３ ）_３Ｃ），３．５３−３．６８（ｍ，２ｘ（ＣＨ_３）_２ＣＨ）；^１３Ｃ−ＮＭＲ
（１２５ＭＨｚ）δ ２４．２１（ｄ，Ｊ_ｐｃ＝７．７３Ｈｚ），３１．０６
（ｄ，Ｊ_ｐｃ ９．７Ｈｚ），４３．０９（ｄ，Ｊ_ｐｃ＝１３．８８Ｈｚ），７
５．４０（ｄ，Ｊ_ｐｃ＝９．７５Ｈｚ）；^３１Ｐ−ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ）δ
１３０．０（ｓ）。

【００２６】 ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシ（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド）ホスフィン（２ｂ）
。 ホスフィン２ｂは上述（Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ，１９８８、既出）の記載のよ
うであった。沸点４９−５１℃／０．００５ｍｍＨｇ（５５％収率）。^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ（３００ＭＨｚ）δ １．０６（ｔ，Ｊ_ＨＨ＝７．８Ｈｚ，１．３３（ｓ，
１８Ｈ，Ｃ（ＣＨ_３）_３），３．０３（ｄｑ，４Ｈ，Ｊ_ＨＨ＝９．０Ｈｚ，ＰＣ
Ｈ_２ＣＨ_３）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ）δ １４．８４（ｄ，Ｊ_ｐｃ＝３
．９Ｈｚ），３０．８８（ｄ，Ｊ_ｐｃ９．７５Ｈｚ），３７．４５（ｄ，Ｊ_ｐｃ ＝２１．２Ｈｚ），７４．４０（ｄ，Ｊ_ｐｃ＝１１．６３Ｈｚ）。

【００２７】 乾燥エーテル（１０ｍｌ）中の２−（トリメチルシリル）エタノール（１．２
ｇ、９．９ｍｍｏｌ、２当量）とトリエチルアミン（１．５ｍｌ、１０．９ｍｍ
ｏｌ、２．２当量）の溶液を、乾燥エーテル（１０ｍｌ）中のジクロロ−Ｎ，Ｎ
−ジイソプロピルアミドホスフィン（１．０ｇ、４．９ｍｍｏｌ）に、溶液温度
を０℃未満に保ちながら加えた。添加完了時（約３０分）、溶液を室温としさら
に３時間攪拌した。重炭酸ソーダの５％水溶液（１０ｍｌ）を加え、水相を５％
重炭酸ソーダ水溶液（２×１０ｍｌ）、ＮａＣｌの飽和水溶液（１０ｍｌ）で洗
浄し、乾燥し、濾過した。溶媒を減圧で除去して透明な油を得た（２．２ｇ、７
８％）。沸点６２−６４℃／０．００５ｍｍＨｇ。ＩＲ（ｎｅａｔ）−νｍａｘ
２９６０（ｓ），２８９７（ｍ），１４６２（ｗ），１３９６（ｍ），１３６３
（ｍ），１１９４（ｓ），１１８６（ｓ），１１２６（ｍ），１０４５（ｓ），
９７２（ｓ），８３７（ｓ），７４４（ｓ），６９４（ｓ），６６３（ｗ）ｃｍ
^−１；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）δ０．００（ｓ，１８Ｈ），１．０２（ｍ
，４Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１２Ｈ），３．５２−３．７７（ｍ
，６Ｈ）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ）δ−１．４９，２０．００，２４．４
１，２４．５１，４２．４７，４２．６３，６０．４３，６０．６７；^３１Ｐ−
ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ）δ１４３．５０。

【００２８】 ３’−Ｏ−ビス（ベンジル）ホスフォリルコンブレタスタチンＡ−４（３ａ） 炎乾燥を行いテフロンの攪拌棒をもつ３頚フラスコに隔壁、温度計およびアル
ゴン導入口をつけた。フェノール（１ａ、２０．０ｇ、６３．２ｍｍｏｌ）を攪
拌しながらアセトニトリル（２００ｍｌ）に溶解し次いで−２５℃に冷却した。
４塩化炭素（３０．５ｍｌ、３１６ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、その溶液を５
分間攪拌した。ジイソプロピルエチルアミン（２３．１３ｍｌ、１３３ｍｍｏｌ
、２．１当量）を注射筒経由で添加し、ついでＤＭＡＰ（７７２ｍｇ、６．３２
ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。１分後に、反応温度を−１０℃以下に保つよ
うな速度でジベンジルホスファイト（２０．３３ｍｌ、９２ｍｍｏｌ、１．４５
当量）の滴下（ゆっくりと）を開始した。反応が完結したとき（ＴＬＣ分析によ
り１時間）、０．５ＭのＫＨ_２ＰＯ_４水溶液（５０ｍｌ）を添加し、室温まで加
温した。酢酸エチル（３ｘ１００ｍｌ）で抽出後、溶媒抽出液を合併したものを
水（１００ｍｌ）と飽和ＮａＣｌ（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥した。濾過と溶
媒除去を減圧下で行ない、薄黄色の油を得た。この油状残滓をシリカゲルカラム
でクロマトグラフし（ヘキサン−酢酸エチル、３：２）透明な油を得、これを酢
酸エチルとヘキサンから再結晶して純粋の白色結晶（３６．０ｇ、９８％）を得
た。融点７３℃、Ｒｆ０．２６（ヘキサン−酢酸エチル、３：２）。ＥＩＭＳｍ
／ｚ５７６（１００，Ｍ^＋），５６１（８），４８５（２），３９４（２），３
７８）３，３６３（３），２５２（５），１８１（３）；ＩＲ（ｎｅａｔ）νｍ
ａｘ３００５，２９３９，２８３７，１５７９，１５１２，１４５４，１４２５
，１２８０，１２４０，１１２２，１０１０，８９１，７４０，６９８ｃｍ^−１ ；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）δ ３．６７（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３
．７７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），５．１２（
ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２−Ａｒ），５．１４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２−Ａｒ），６．４０（
ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝１２０Ｈｚ，１Ｈ），６．
４８（ｓ，２Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，
Ｊ＝１．９，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７
．３１（ｓ，１ＯＨ，Ａｒ−Ｈ）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ）δ １５２．
９７，１３９．３２，１３９．２２，１３５．６７，１３２．４６，１３０．１
９，１２９．６７，１２８．５３，１２７．８８，１２６．５６，１２２．２１
，１１２．２７，１０５．９３，６９．７９，６９．７２，６０．８６，６０．
４０，５５．９２，２１．０５，１４．２２；^３１Ｐ−ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ）
δ−５．２９；Ｃ_３２Ｈ_３３Ｏ_８Ｐとしての分析計算値；Ｃ，６６．６７；Ｈ，
５．７７。実験値：Ｃ，６６．９６；Ｈ，６．０５。

【００２９】 ３’−Ｏ−ビス（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフォリルコンブレタスタチンＡ−４
（３ｂ） 方法Ａ：１Ｈ−テトラゾール（３．７３ｇ、５３ｍｍｏｌ、３．６７当量）を
、乾燥テトラヒドロフラン（１５ｍｌ）中のコンブレタスタチンＡ−４（１ａ、
５．００ｇ、１６ｍｍｏｌ、１．０当量）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−Ｎ，
Ｎ−ジエチルアミンドホスフィン（５．１９ｇ、２１ｍｍｏｌ、１．３当量）の
攪拌溶液へ一時に添加した。溶液をアルゴン下で２０分間室温にて攪拌し、−７
０℃に冷却した（ＣＯ_２／アセトン）。次いで、乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ
）中の８５％のｍ−ＣＰＢＡ（３．２２ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）溶液を（迅速に
）加えてその反応混合物の温度が−３０℃以下に保たれるようにした。室温で５
分間攪拌後、１０％の重炭酸ソーダ水溶液（１５ｍｌ）を加えた。溶液を更に１
０分間攪拌し、エーテル（７０ｍｌ）で抽出した。エーテル相を１０％の重炭酸
ソーダ水溶液（２ｘ２０ｍｌ）、１ＮのＮａＯＨ（６ｘ４０ｍｌ）で洗浄し、乾
燥し、濾過した。減圧で溶媒を除去すると黄色の油を得、それをフラッシュカラ
ムクロマトグラフィー（シリカゲル；３：２のヘキサンと酢酸エチル）で精製し
、透明な油として標記の化合物を得た（１．１５ｇ；７５％）。Ｒｆ０．２５（
ヘキサン−酢酸エチル）；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ５０８（Ｍ^＋，２２），４５２（５
），４３７（７），３９６（１００，３８１（１７），３６４（４），３４９（
３），３１６（５）；ＩＲ（ｎｅａｔ）−νｍａｘ３４６２，２９８０，２９３
７，２８３７，２２４３，１５７９，１５１２，１４６２，１４２５，１３７１
，１３２７，１２７６，１１７４，１１２８，９９９，９２０，８６８，７３１
，６４６ｃｍ^−１；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）δ １．４７（ｓ，１８Ｈ，
２ｘＣ（ＣＨ_３）_３），３．６９（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．８２（ｓ，
３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４２（ｓ，Ｊ＝１２
Ｈｚ），１Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｓ，２Ｈ，
２，６−Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄｄ，Ｊ＝
８．５，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ
−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ）δ １５２．９４，１３２．６２，１２９，８５，１２
９，２５，１２９．０２，１２５．６３，１２１．８０，１１２．１４，１０５
．９３，９９．２８，８３．４９，６０．８９，５５．９２，２９．８０，２９
．７１；^３１Ｐ−ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３／８５％Ｈ_３ＰＯ_４）δ−
１４．４７；Ｃ_２６Ｈ_３７Ｏ_８Ｐとしての分析計算値；Ｃ，６１．４０％；Ｈ，
７．３３％；実験値：Ｃ，６０．９２％；Ｈ，７．６７％。 方法Ｂ： リン酸化剤としてジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプ
ロピルアミドホスフィンを使ったこと以外は上記の方法Ａと同様に行なった。収
率７８％。

【００３１】 ３’−Ｏ−ビス（トリメチルシリルエトキシ）ホスフォリルコンブレタスタチ
ンＡ−４（３ｃ） ビス［２−（トリメチルシリル）エトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミドホ
スフィン（２ｃ）を用いて上記の方法Ａと同様の操作で無色の油として目的物を
得た（８．６７ｇ，９１％）。Ｒｆ０．２６（ヘキサン−酢酸エチル、３；１）
；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ５９６（Ｍ^＋，９０），５６８（２０），５４０（２１）
，５１５（３８），４９６（１０），４６８（４０），４５３（１３），３９６
（２２），２８３（１０），２５２（１１），２１１（１３），１４７（１５）
，７２（１００）；ＩＲ（ｎｅａｔ）νｍａｘ２９９９，２９９５，２９０１，
２８３７，１５７９，１５１２，１４６４，１５２５，１２７６，１２４９，１
２１７，１１８０，１１２８，９９１，８５６，７６７，６９６ｃｍ^−１；^１Ｈ
−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ ０．００（ｓ，１８Ｈ），１．０４（ｍ，４Ｈ，
−ＣＨ_２Ｓｉ−），３．６３（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７７（ｓ，６Ｈ
，２ｘＯＣＨ_３），４．１７（ｍ，３Ｈ，−ＯＣＨ_２ＣＨ_２−），６．０９（ｓ
，２Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝１２
．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄｄ，
Ｊ＝８．５，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ−ＮＭＲ
（７５ＭＨｚ）δ １５２．７７，１４９．６９，１３９．５４，１３７．０５
，１３２．２４，１２９．９４，１２９．３７，１２８．４１，１２６．０５，
１２１．７８，１１２．０８，１０５．７６，６６．７２，６４．００，６０．
５９，５５．７０，１９．５１，１９．２０，−１．７２；^３１Ｐ−ＮＭＲ（２
０２ＭＨｚ）δ−５．５４。

【００３２】 ナトリウム（Ｚ）−コンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（３
ｄ） 乾燥アセトニトリル（１００ｍｌ、アルゴン下で炎乾燥したフラスコ中）の中
のベンジルエステル（３ｃ、２０．５ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）とナトリウムアイ
オダイド（１０．７ｇ、７１ｍｍｏｌ、２当量）の溶液へ、激しく攪拌しながら
クロロトリメチルシラン（９．０２ｍｌ、７１ｍｍｏｌ、２当量）をゆっくり添
加した。反応混合物を２０分間攪拌すると、ＴＬＣ分析（ヘキサン−酢酸エチル
、３：２）では出発物質が示されなくなる。水（塩を丁度溶解するに充分な）を
加え、１０％のナトリウムチオサルフェート水溶液（２ｍｌ）の添加により淡黄
色を除いた。有機層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した（４ｘ５０ｍｌ）。
合併した抽出液を減圧で濃縮して淡黄色の泡を得た。この泡を乾燥メタノール（
１００ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキサイド（９５％、４．１ｇ、７１ｍｍ
ｏｌ、２当量）を一時に添加し、その溶液を９時間攪拌した。メタノールを減圧
で除去し、固形物を水−アセトンおよびメタノール−アセトンから再結晶して無
色結晶を得た（１４ｇ，９０％）。融点１９０−１９５℃（分解）。Ｒｆ０．６
４（ｎ−ブタノール−メタノール−水−アンモニア、４：３：２：１）。ＵＶ
ＣＨ_３ＯＨ中のλｍａｘ（ｌｏｇ ε）２９４１ｍ，２８３９ｓ，２３６１ｍ（
ｂｒｏａｄ），１５８１ｓ，１５１４ｓ，１４３１ｍ，１２４０ｍ，１１２４ｓ
，９８３ｍ，ｃｍ^−１；^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ），Ｄ_２Ｏ）δ ３．５０
（ｓ，６Ｈ，３，５−ＯＣＨ_３），３．５７（ｓ，３Ｈ，４’−ＯＣＨ_３），３
．６８（ｓ，３Ｈ，４ＯＣＨ_３），６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｈ
−１ａ’），６．４２（ｓ，２Ｈ，Ｈ−２，６），６．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１
２．５Ｈｚ，Ｈ−１ａ），６．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−５’），
６．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２，８．５Ｈｚ，Ｈ−６’），７．１９（ｄ，１Ｈ
，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｈ−２’）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＫＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ１５３
．１７，１５０．５０，１４３．４０，１３６．９０，１３４．６５，１３１．
２８，１３０，９７，１２９．９２，１２４．６９，１２２．６４，１１３．５
８，１０７．５４，６１．９７，５７．１０，５６．９０；ＨＲＦＡＢ ｍ／ｃ
４４１．０６９４２［Ｍ＋Ｎａ］^＋，４９１［Ｍ＋Ｈ］，３９６［Ｍ−Ｎａ＋
Ｈ］^＋．Ｃ_１８Ｈ_２０Ｏ_８ＰＮａ_２ ４４１．０６９１２としての分析値、Ｎａ
５．０４％，Ｈ_２Ｏ６．２６％ Ｃ_１８Ｈ_２０Ｏ_８ＰＮａ．１．５Ｈ_２Ｏ水和物
としての計算値、Ｎａ５．１６％，Ｈ_２Ｏ６．０７％。

【００３３】 方法Ａで得たナトリウムホスフェート３ｄは、最初の３’−Ｏ−ビス（２，２
，２−トリクロロエチル）ホスフォリル経路で得られ蒸留水中２５℃で＞２０ｍ
ｇ／ｍｌ溶解度をもつ初期の見本（１ｈ、ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．，１９９
５，既出，およびアメリカ特許５５６１１２２）と同等（ＴＬＣおよびスペクト
ル）であった。

【００３４】 方法Ｂ：乾燥ジクロロメタン（２５ｍｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフォ
リルエステル３ｂ（７．２５ｇ）とトリフルオロ酢酸（２５ｍｌ）の混合物を、
常温で４５分間攪拌した（分解完了はＴＬＣ分析、３：１のヘキサン−アセトン
による）。水（１０ｍｌ）を加え、溶媒を蒸発させる。残ったＴＦＡをトルエン
（３ｘ２０ｍｌ）と共に共沸除去し、得られた油状の残滓を減圧（０．００５ｍ
ｍ／Ｈｇ）で１時間乾燥した。この油を乾燥メタノール（２ｍｌ）に溶解し、ナ
トリウムメトキサイド（１．６０ｇ、２８ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。溶
液をアルゴン下に１４時間攪拌し、溶媒を減圧で除去し、残った固形物を乾燥し
た。残滓を水（１０ｍｌ）に溶かし、その溶液を細かい多孔度の焼結ガラス漏斗
を通して濾過した。濾液の濃度は白色固形物であり、それを水−アセトンで再結
晶して、方法Ａで得たプロドラッグ３ｄの標本と同等な無色の粉末（５．８ｇ，
９２％）を得た。

【００３５】 方法ｃ：テトラブチルアンモニウムフルオライド（８．３８ｍｌ、ＴＨＦ中１
．０Ｍ、８．３８ｍｍｏｌ）を、１５ｍｌの無水テトラヒドロフラン中のジシリ
ルエトキシホスフォリルエステル３ｃ（５．０ｇ、８．３８ｍｍｏｌ）の攪拌（
窒素下での）溶液へ、注射器を使ってゆっくり加えた。３０分後のＴＬＣ分析（
３：２のヘキサン−酢酸エチル）によると反応は完結していることが示された。
氷（５ｇ）を加え、ついでエーテル（５０ｍｌ）を加えた。有機溶媒を分離し、
水（３ｘ５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、濾過し、溶媒を減圧で除去して淡黄色の
ガムを得た。この生成物をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキサ
イド（０．９０ｇ、１６．８ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。溶液をアルゴン下で
１２時間攪拌し、溶媒いを減圧で除去し、残った固形物を水−アセトンから再結
晶して、方法Ａの生成物と同等の無色粉末（３ｄ、３．６０、９８％）を得た。

【００３６】 ナトリウムコンブレタスタチンＡ−４３’−Ｏ−ホスフェート３ｄの最初の合
成完了後、他の多くのリン酸化の試みが、大規模での場合に更に容易に適合する
方法を確立するための目的に向って行なわれた。コンブレタスタチンＡ−４ １
ａの適切なリン酸化方法の選択はまた、可能性のあるホスフェート保護基の除去
方法によって限定をうける。別のジベンジルホスファイト−四塩化炭素方法は、
高い収率（９５％）でホスフェートエステル３ａを得るのに極めて実用的である
ことが証明された。種々の条件下でのベンジル酸素結合の接触水素化分解は、オ
レフィン架橋の同時還元をもたらす。その他の研究されたベンジル酸素分解方法
には、トリフェニルカルボニウムテトラフルオロボレート、アリールチオトリメ
チルシラン−沃化亜鉛、マイクロ波中の酸性アルミナ、およびルイス酸ＳｎＣｌ
_４がある（Ｍｕｋａｉｅｔ ａｌ．，１９９６，「抗腫瘍スチリルアクトンの全
合成の研究：（＋）−ゴニオフフロン、（＋）−ゴニオブテノライドＡおよび（
−）−ゴニオブテノライドＢの立体選択的全合成」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，
５２，６５４７）。すべてがベンジル基を分解したとき、それらはシスからトラ
ンスへの異性化の変更レベルをもたらすようである（ＴＬＣによる）。最後に、
適切なまたはその位置で生成したトリメチルシリルアイオダイドは、対応するリ
ン酸を得るための最良の経路を提供することがわかった。後者をナトリウムメト
キサイドで処理すると、再結晶に続いてホスフェート塩３ｄが高い全収率で得ら
れる。

【００３７】 研究された２番目の一連のリン酸化剤は、高い収率でアルコールとフェノール
を容易にリン酸化することが示されている種々のアルキルアミドホスフィン類で
あった。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミド）ホスフ
ィン２ａは、ジクロロ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミド）ホスフィンとｔｅｒｔ
−ブタノールから好収率で得られた。ホスフィン類２ｂおよび２ｃは、同様にし
て、ジクロロ（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド）ホスフィンおよびジクロロ（Ｎ，Ｎ−
ジイソプロピルアミド）ホスフィンの夫々とｔｅｒｔ−ブタノールおよび２−（
トリメチルシリル）エタノールの夫々を反応させて得られた。１Ｈ−テトラゾー
ル触媒の存在下では、これらの反応性アミドはフェノール１ａをよくリン酸化し
て、９０％を超える収率で対応するホスフェートエステル３ｂと３ｃを与えた。
エステル保護基の分解は、ｔｅｒｔ−ブチルエステルにはトリフルオロ酢酸また
はビス（２−トリメチルシリル）エチルエステルのためにはテトラブチルアンモ
ニウムフルオライドで容易に作用された。単離後、リン酸誘導体はメタノール中
でナトリウムメトキサイドで処理して、高い収率でナトリウムホスフェート３ｄ
を得た。

【００３８】 ここで述べたプロドラッグ３ｄへの３つの新しいリン酸化経路は容易に行なわ
れ、収量や純度を減少させずに１０ｇまたはそれより多い量が得られる。得られ
たホスフェートプロドラッグ３ｄ標本は、われわれのもとの見本と同一であり、
したがってコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ３ｄの臨床用提供必要度は今
や満たされるのである。

【００３９】 トランス−スチルベンホスフェート４ｃ（下記参照）と、不純物を伴なうコン
ブレタスタチンＡ−４プロドラッグ３ｄの大規模合成の比較は、構造決定を確認
した。上記のイオンペアＨＰＬＣ分析は、この不純物の少量を検出するのに極め
て有用であることが分かった。明らかに、トランス−スチルベン４ｃは、ヨード
の電気親和性２分子添加により不一致の量をもたらし、ヨードニウムイオンとそ
れに引き続く抗付加生成物を形成する（Ｈａｓｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７
９，「オレフィンへのハロゲンアジド付加の立体化学、３員ヨードニウム対ボロ
ニウムイオンの安定性」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，９２，４８７９；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅ
ｔ ａｌ．，１９５０，「不飽和化合物へのハロゲン付加の速度論、ＸＶＩＩＩ
、ヨード付加」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉ
ｅｔｙ，２１９２；Ｚａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５，「１，２−ジ置換
エチレンのヨード化の核磁気共鳴研究、トランス付加とシス脱離の証拠」、Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４０，２４８；Ａｙ
ｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，１９７１，「オレフィンとヨードの反応、ペンテン異性
体へのヨード付加の速度論とメカニズム」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，９３，１３８９；Ｓｋｅ
ｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９６４，「脂肪族オレフィンへの元素ヨードの立体特異
的トランス光付加、架橋ヨードアルキルラジカル」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔ
ｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，８６，１９５６
）。幸いにも異性体スチルベン３ｄと４ｃは、用いられたリン酸緩衝液の中では
特有のＨＰＬＣ保持時間をもっている。コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ
３ｄは、Ｕｖλｍａｘ２９０ｎｍにより９．２８分で溶離し、トランス異性体は
Ｕｖλｍａｘ３２５ｎｍにより９．４０分で溶離する（図１ａ−１ｄ参照）。ト
ランス異性体のホスフェート塩４ｃは水には僅かしか溶解しない事がわかってい
るので、それはコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ３ｄを最小量の水に再溶
解し酢酸エチルで抽出することで簡単にシス異性体ホスフェート塩３ｄから除去
される。（Ｅ）−スチルベン４ｃはその水への低溶解度により、酢酸エチルの中
へ選択的に分配される。（Ｚ）−スチルベンを含有する水相を濃縮し、残滓を水
−アセトンおよびメタノール−アセトンから再結晶して、＞８０％の収量で９９
＋％純度（ＨＰＬＣによる）のナトリウムコンブレタスタチンＡ−４ホスフェー
ト３ｄを得た。

【００４０】 コンブレタスタチンＡ−４は、９７％と報告されている阻害と共に、コルヒチ
ン結合部位においてチューブリンと極めて強固に結合しているので（Ｌｉｎ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８８，「細胞分裂阻止性コンブレタスタチンの強力な天然と合
成類似体とチューブリンの相互作用、構造と活性の研究」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３４，２００）、活性と溶解度に対する影響を調
べるために、２価および３価の両方の異なるカチオンで、プロドラッグ３ｄのナ
トリウムカチオンを置き換えることが重要となってきた。この同じやりかたを用
いて、ガン細胞系と細胞分裂阻止活性と溶解度の対するそれらの可能性のある影
響を調べるため、ナトリウムイオンを、金属イオンや種々のアンモニウムカチオ
ンで置き換えた。これらアンモニウムカチオンの若干は、ｐ−糖蛋白メカニズム
との干渉による多剤抵抗を逆転する能力のある安定で水溶性の薬剤を得る目的の
ために研究された。Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｎａｔ．
Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８９（７），ｐｐ．５１２−５１８；Ａｄａｍｓ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９５，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ
，１３：１３−２１； Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔ
ｈｅｒ．ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３５：２７１−２７；Ｇｅｎｎｅ ｅｔ ａｌ
．，Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，１０，１０３−１１８
。すなわち、プロドラッグ５ａ−ｓが合成され評価された。

【００４１】 高純度のプロドラッグ３ｄの極めて実用的な合成が入手できたので、もとのホ
スフェートの種々のカチオン誘導体が合成され評価された。プロドラッグ３ｄリ
ン酸前駆物質を、それぞれ金属水酸化物または酢酸塩の１．０Ｍ溶液で処理する
ことにより、対応する塩類が生成された。類似の方法が、メタノール中１．０Ｍ
のアミンの溶液を使って、アンモニウム塩のために行なわれた。アルカロイド塩
のためには、適当な溶媒中の２当量の塩基（リン酸中間体の１００％の生成を予
測して）をその酸溶液に加え、そして６−８時間反応させた。沈澱または再結晶
により生成物が得られた。

【００４２】 ３’−Ｏ−ビス（ベンジル）ホスフォリル−３，４，４’，５−テトラメトキ
シ−（Ｅ）−スチルベン（４ｂ） （Ｅ）−コンブレタスタチンＡ−４（４ａ、２．２ｇ、７ｍｍｏｌ）を、隔壁
、温度計およびアルゴン導入口を備えたフラスコの中でアセトニトリル（２０ｍ
ｌに溶解した。これを−２５℃に冷却後、４塩化炭素（３．３８ｍｌ、３５ｍｍ
ｏｌ、５当量）を加え、その溶液を分間攪拌した。注射器を使ってジイソプロピ
ルエチルアミン（２．５６ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ、２．１当量）を加え、更に
ＤＭＰＡ（８６ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。反応温度が−２
０℃以下に保たれるような速度で１分後にジベンジルホスファイト（２．２４ｍ
ｌ、１０．２ｍｍｏｌ、１．４５当量）をゆっくりと（滴下で）加えた。反応は
１時間で完結した（ＴＬＣで分析）。０．５ＭのＫＨ_２ＰＯ_４を加え（５ｍｌ）
、その溶液を室温に加温し酢酸エチル（３ｘ２０ｍｌ）で抽出した。合併した溶
媒抽出液を水（２５ｍｌ）と飽和ＮａＣｌ（２５ｍｌ）で洗浄し、乾燥した。濾
過と溶媒除去により油を得た。これをシリカゲルのカラムでクロマトフラフし（
ヘキサン−酢酸エチル、３：２）、透明なガムとしてホスフェートエステル４ｂ
を得た（３．９６ｇ，９８％）。Ｒｆ０．１５（ヘキサン−酢酸エチル、３：２
）；ＥＩＭＳ ｍ／ｚ（％強度）５７６（Ｍ^＋，１００），５６１（１２），４
８６（３），４０６（６），３９４（２），３７８（６），３６４（７），３１
６（１７），３０１（１０），２５２（８），２４１（５），１８１（５）；Ｉ
Ｒ（ｎｅａｔ）νｍａｘ３００５，２９３９，２８３９，１７３４，１５８１，
１５１２，１４５６，１４２５，１３４６，１２７８，１１２６，１００８，９
００，８２３，７４０，６９８ｃｍ^１；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）δ３．８
０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．９１（ｓ，
６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），５．１８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ_２−Ａｒ），５．２１（ｓ，
２Ｈ，ＣＨ_２−Ａｒ），６．６９（ｓ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈ
ｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝９
．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１０Ｈ，Ａｒ−Ｈ）
，７．４２（ｔ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ）δ
１５３．４１，１５０．２２，１３９．８７，１３３．０６，１３０．５７，１
２８．５３，１２７．９３，１２７．６５，１２６．８２，１２４．２８，１１
９．００，１１２，７１，１０３．４７，６９．９５，５６．１３；^３１Ｐ−Ｎ
ＭＲ（２０２ＭＨｚ）δ−５．５２；Ｃ_３２Ｈ_３３Ｏ_８Ｐとしての分析計算値：
Ｃ，６６．６７；Ｈ，５．７７．実験値：Ｃ，６６．７１；Ｈ，５．９３。

【００４３】 ナトリウム（Ｅ）−コンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（４
ｃ）クロロトリメチルシラン（０．８８ｍｌ、４．９ｍｍｏｌ、２当量）を、乾
燥アセトニトリル（１０ｍｌ、アルゴン下の炎乾燥フラスコ）中のベンジルエス
テル（４ｂ、２．０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）およびナトリウムアイオダイド（１．
０４ｇ、６．９ｍｍｏｌ、２当量）溶液へゆっくりと（激しく攪拌しながら）加
えた。２０分間攪拌後、ＴＬＣ分析（ヘキサン−酢酸エチル、３：２）では出発
物質が認められなかった。塩を溶解するのに充分な水を加え、淡黄色を１０％の
ナトリウムチオサルフェート水溶液（５滴）の添加により除去した。溶媒を分離
し、水相を酢酸エチル（４ｘ１０ｍｌ）で抽出した。合併した抽出液を減圧で濃
縮し、得られた泡を乾燥メタノール（１００ｍｌ）に溶解した。ナトリウムメト
キサイド（９５％、３７５ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ、２当量）を一時に加え、溶液
を６時間攪拌した。メタノールを減圧で除去し、固形物をメタノール−アセトン
で再結晶して、灰色がかった白色の粉末（１．４３ｇ，９３％）を得た。融点１
５７−１５８℃、Ｒｆ０．４５（ｎ−ブタノール−メタノール−水−アンモニア
、４：３：２：１）。ＵＶ λｍａｘ３２５ｎｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）２９３９，２
８３９，１５８３，１５１２，１４６４，１４２３，１３４０，１２５２，１１
２６，９９１，９２３，８５６，８１９，７７３，７１７，６４４ｃｍ^−１；^１ Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ３．７３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３）
，３．８４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８７（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），６
．８２（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，
Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄｄ
，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）；^１３ Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ １５３．１２，１３４．０７，１３
０．４７，１２７．６２，１２６．３５，１２１．２０，１１７．６６，１１２
．０１，１０３．１６，７３．７０，５９．６９，５５．１２；^３１Ｐ−ＮＭＲ
（２０２ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ−１．４；ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４４１．
０６９８［Ｍ＋Ｎａ］^＋，（Ｃ_１８Ｈ_２０Ｏ_８Ｎａ_２Ｐ，としての計算値、４４
１．０６９１）。

【００４４】 コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグの合成の一般的方法 方法Ａ（プロドラッグ５ａ−ｆ） セシウムコンブレタスタチンＡ−４３’−Ｏ−ホスフェート（５ｂ） アルゴン下で炎乾燥フラスコ中の乾燥アセトニトリル（４ｍｌ）の中のジベン
ジルコンブレタスタチンＡ−４３’−Ｏ−ホスフェート（４ｂ、０．５０ｇ、０
．８７ｍｍｏｌ）とナトリウムアイオダイド（０．２６ｇ、１．７４ｍｍｏｌ、
２当量）の攪拌溶液へ、注射器を介してクロロトリメチルシラン（０．２２ｍｌ
、１．７４ｍｍｏｌ、２当量）をゆっくりと添加した。この混合物を、反応がＴ
ＬＣで完了するまで（約２０分）室温で攪拌した。塩を溶解するのに充分な水を
加え、淡黄色をナトリウムチオサルフェート（４滴）の添加で除去した。水相を
酢酸エチル（４ｘ５ｍｌ）で抽出し、合併した抽出液を減圧で濃縮して淡黄色の
泡を得た。蒸留水（２ｍｌ）と１．０ＭのＣｓＯＨ水溶液（１．７４ｍｌ、１．
７４ｍｍｏｌ）を滴下した後、溶液は曇ってきた。混合物をアルゴン下に６時間
攪拌し、沈澱を採取して水−アセトンで再結晶して無色の粉末を得た（０．５１
ｇ）。融点１６７−１６８℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．
７０（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８３
（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．５３（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．６５
（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，ｍ １Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）
，６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝１．
８Ｈｚ，１Ｈ）。

【００４５】 カルシウムコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ａ） 水−アセトンから再沈澱して無色の粉末（１４７ｍｇ）を得た。融点２９３−
２９５℃（分解）。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．６９（ｓ，
６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８１（ｓ，３Ｈ
，ＯＣＨ_３），６．５４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝
１２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ
，１Ｈ），６．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，
Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）。

【００４６】 リチウムコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｃ） 水−アセトンから再沈澱して無色の粉末（１５１ｍｇ）を得た。融点２４１−
２４２℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．５６（ｓ，６Ｈ，２
ｘＯＣＨ_３），３．６２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．７０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ
_３），６．３８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｓ，２Ｈ），６．
５３（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．４Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）。

【００４７】 マグネシウムコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｄ） 水−アセトンから再沈澱してクリーム色の固形物（１２１ｍｇ）を得た。融点
２７０℃（分解）。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．５４（ｓ，
６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．６２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．７２（ｓ，３Ｈ
，ＯＣＨ_３），６．３４（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｓ，２Ｈ
），６．５０（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｍ，２Ｈ），６．５
０（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｓ，１
Ｈ）。

【００４８】 マンガンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｅ） 水−アセトンから再沈澱してクリーム色の固形物（１４３ｍｇ）を得た。融点
２４１−２４２℃（分解）。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．６
６（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８２（
ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４６（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（
ｓ，２Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８
．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２
４（ｓ，１Ｈ）。

【００４９】 亜鉛コンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｆ） 白色固形物を採取しアセトンで洗浄して無色で半透明の固形物（１６４ｍｇ）
を得た。融点１９８−２００℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３
．５８（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．７３
（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４１（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｓ
，２Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈ
ｚ，１Ｈ），６．８９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ
，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）。

【００５０】 方法Ｂ（プロドラッグ５ｇ−１） 乾燥メタノール中アミンの１．０Ｍ溶液２当量を添加し、反応混合物を８時間
放置したこと以外は上記の一般的製法を行なった。すべてのアミン塩はメタノー
ル−エーテルから再結晶した。

【００５１】 イミダゾールコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｇ） 再結晶により１３７ｍｇを得た。融点１９６−１９８℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３０
０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．６６（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７３（ｓ，
３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４７（ｄ，Ｊ＝１２
Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｓ，２Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），
６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ，δ４
，δ５），８．６７（ｓ，１Ｈ，δ２）。

【００５２】 モルホリンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｈ） 再結晶により１２１ｍｇ、収率６１％を得た。融点２０９−２１０℃。^１Ｈ−
ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．２２（ｓ，３Ｈ，−ＣＨ _２ＯＣＨ _２−
），３．４６（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ_３），３．４８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．
５４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８８（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ _２ＮＣＨ _２−），６
．３６（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｓ，２Ｈ），６．５０（ｄ
，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．２Ｈｚ，１Ｈ
），７．２４（ｂｄ，８．１Ｈ，１Ｈ），７．４０（ｂｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１
Ｈ）。

【００５３】 ピペラジンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェ−ト（５ｉ） 再結晶により１５１ｍｇを得た。融点１９８−２００℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３０
０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ ３．０１（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．５２（ｂｍ，８Ｈ
，δ２−１１），３．６７（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７４（ｓ，３Ｈ，
ＯＣＨ_３），３．８３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４９（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，
１Ｈ），６．５６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．６２（ｓ，２Ｈ），６．９
５（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ）。

【００５４】 ピペリジンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｊ） 再結晶により１３７ｍｇを採取した。融点１５９−１６０℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（
３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ １．６７（ｍ，８Ｈ，［２ｘδ３Ｈｓ］），１．７
７（ｍ，４Ｈ，［２ｘδ４Ｈｓ］），３．１５（ｍ，８Ｈ，［２ｘδ２Ｈｓ］）
，３．６６（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３
．８２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．６
０（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．８５４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６
．９１（ｄｄ，Ｊ＝１９．５，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ）。

【００５５】 ピラゾールコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｋ） 再結晶により１１２ｍｇを得た。融点１８６−１８７℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３０
０ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ３．６９（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７６（ｓ，３
Ｈ，ＯＣＨ_３），３．８５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．３０（ｄ，Ｊ＝１．４
Ｈｚ，２ｘδ_４），６．５３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ
＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｓ，２Ｈ），６．９７（ｍ，２Ｈ），７．２５
（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，４Ｈ，２ｘδ_３，δ_５Ｈ）。

【００５６】 ピリジンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｌ） 収量は９６ｍｇであった。融点１６５−１６８℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨ
ｚ，Ｄ_２Ｏ）δ３．６６（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７３（ｓ，３Ｈ，Ｏ
ＣＨ_３），７．８２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），６．４８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１
Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９
０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．５Ｈｚ，
１Ｈ），７．２２（ｂｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝３．３
Ｈｚ，４Ｈ），２ｘδ_３．５−Ｈ），８．０（ｍ，２Ｈ，δ_４−Ｈ），８．８６
（ｍ，４Ｈ，２ｘδ_２．６−Ｈ）。

【００５７】 方法Ｃ（プロドラッグ５ｍ−ｓ） 適当な溶媒中の２当量のアルカロイドまたはその他の塩基を同じ溶媒中のリン
酸に加えたこと以外は、プロドラッグ３ａ−ｆについて概説したのと類似の方法
を用いた。再結晶／沈澱化は、メタノール／エーテルを用いて行なった。

【００５８】 アデノシンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｍ） アデノシン塩は１６０ｍｇであった。融点１５５−１５８℃。^１Ｈ−ＮＭＲ（
３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ３．５０（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．５７（ｓ
，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．６８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．７１（ｄ，Ｊ＝２
．１Ｈ_ｘ，２Ｈ），３．７６（ｂｓ，２Ｈ），３．８０（ｄｄ，Ｊ＝２．１，６
．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２８（ｔ，Ｊ
＝３．０Ｈｚ，２Ｈ），４．５８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），５．８５（ｄ
，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３
２（ｓ，２Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｂｓ，
３Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ），８．
１１（ｓ，２Ｈ）。

【００５９】 シンコニンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェ−ト（５ｎ） シンコニンを用いて１７５ｍｑの生成物を得た。融点１８９−１９３℃。^１Ｈ
−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ０．８２９（ｍ，１Ｈ），１．２１
（ｍ，１Ｈ），１．７４（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），
２．３２（ｑ，１Ｈ），３．３０（ｂｒｓ，−ＯＨ，１Ｈ），３．６（ｓ，３Ｈ
，ＯＣＨ_３），３．６４（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．７８（ｓ，３Ｈ，Ｏ
ＣＨ_３），４．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ＝１６Ｈ
ｚ，１Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４２（ｄ，Ｊ＝１
２Ｈｚ，１Ｈ），５．８７（ｍ，１Ｈ），７．７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）
，７．７６（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１
Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ
，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｄ，Ｊ＝４．５
Ｈｚ，１Ｈ）。

【００６０】 グルコサミンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｏ） 再結晶して９８７５ｍｇの生成物を得た。融点１９０−１９５℃（分解）。^１ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ １．８１（ｓ），１．８８（ｓ）
，１．９３（ｓ），２．８５（ｓ），２．８８（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），
２．９１（ｓ，１Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．１９（ｄ
，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３８（ｈ，２Ｈ），３．５３−３．８２（ｍ，
４Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．６９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），
３．７４（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），４．８２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）
，５．３３（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，
１Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｓ，２Ｈ），６
．８０−７．２２（ｍ，３Ｈ）。

【００６１】 キニンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｐ） キニン塩を再結晶して７５ｍｇを得た。融点１７９−１８４℃。^１Ｈ−ＮＭＲ
（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ３．００（ｑ，１０．１，１３．７Ｈｚ，１
Ｈ），３．１５（ｏ，Ｊ＝５．０，８．９，８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３７（ｈ
，Ｊ＝３．０，５．３，１０．１，１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｂｓ，１
Ｈ，ＯＨ），３．６１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．６９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３ ），３．８２（ｓ，６Ｈ，２ ｘ ＯＣＨ_３），３．９１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３ ），４．９０（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈ
ｚ，１Ｈ），５．５０（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｏ，Ｊ＝７．
６，１０．０，１７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｂｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１
Ｈ），６．６１（ｂｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｓ，２Ｈ），６
．６７（ｂｓ，３Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝ ９．５Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝４．
２Ｈｚ，１Ｈ）。

【００６２】 キニジンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｑ） キニジンを用いて３００ｍｇの生成物を得た。融点１８０−１８１℃。^１Ｈ−
ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ０．９６３（ｔ，１Ｈ），１．１６（
ｍ，１Ｈ），１．８９（ｍ，２Ｈ），１．９９（ｂｓ，１Ｈ），２．３４（ｔ，
Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．６５（ｄｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１２．３Ｈｚ，１
Ｈ），３．１０（ｓ，１Ｈ），３．２２（ｍ，１Ｈ），３．２９（ｏ，Ｊ＝１．
６，７．９，１４Ｈｚ），３．３２（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ_３），３．６５（ｓ，３
Ｈ，ＯＣＨ_３），３．９９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），４．０９（ｓ，６Ｈ，２
ｘ ＯＣＨ_３），４．６１（ｂｓ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），
５．２８（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），５．９６（ｂｓ，１Ｈ），６．１１（ｏ，
Ｊ＝７．４，１０．５，１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５４（ｂｄ，Ｊ＝１２．０
Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｂｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｓ，２Ｈ）
，７．４３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝７
．２，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），７．７０（ｔ，
Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（
ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６
９（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）。

【００６３】 テトラサイクリンコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｒ
） テトラサイクリン塩を再結晶して１３６ｍｇを得た。融点１９１−１９３℃。
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １．５３−３．３１（ｍ，
４Ｈ，Ｃ_４αおよびＣ_５αメチンプロトン、Ｃ_５メチレン水素）、１．５６（ｓ
，３Ｈ，Ｃ_６−ＣＨ_３），２．５５（Ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ_３）_２），３．３１（
ｂｓ，１Ｈ，Ｃ_４−Ｈ），３．６４（ｓ，６Ｈ，２ｘＯＣＨ_３），３．６７（ｓ
，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．７２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），４．３１（ｂｓ，１Ｈ
，Ｃ_４−Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝
１２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｓ，２Ｈ），６．８７（ｓ，３Ｈ），６．９
３（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｄ−Ａｒ−Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，
１Ｈ，Ｄ−Ａｒ−Ｈ），６．６１（ｓ，２Ｈ），６．８７（ｓ，３Ｈ），６．９
３（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ，Ｄ−Ａｒ−Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，
１Ｈ，Ｄ−Ａｒ−Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｔ，Ｊ＝７．８，１
Ｈ，Ｄ−ＡｒＨ），９．１３（ｂｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ_２），１１．７（ｂｓ，１
Ｈ，Ｃ_１０−ＯＨ）。

【００６４】 ベラパミルコンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホスフェート（５ｓ） ベラパミルから１１０ｍｇの生成物を得た。融点１８５−１８６℃。^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ０．７３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）
，１．１５（ｄ ｏｎ ｍ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），１．３２（ｍ，１Ｈ），
１．６５（ｍ，１Ｈ），１．９９（ｓ，１Ｈ），２．１７（ｍ，１Ｈ），２．１
９（ｓ，１Ｈ），２．７８（ｂｓ，２Ｈ），３．１１（ｍ，２Ｈ），３．２７（
ｂｓ，２Ｈ），３．３６−３．８２（３ｓ，８ｘＯＣＨ_３，２４Ｈ），６．４７
（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），６．
６４（ｂｄ，１Ｈ），６．８０（ｂｄ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，
１．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（１Ｈ）。

【００６５】 生物学的結果 すべての合成生成物の、ミニパネルのヒトガン細胞系、ネズミＰ３８８リンパ
球白血病および選択された微生物に対する評価を行なった。これらの結果は、そ
れぞれ表１−３に要約してある。

【００６６】 抗微生物感受性試験の場合は、確立されているディスク感受性検査プロトコル
（臨床研究所標準のための国立委員会、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ
ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ，１
９９７）により、次のバクテリアすなわちＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｏｍｏｎａ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ， Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｑｏｌｉ，Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ，Ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ， Ｓｐｔｅｐｒｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅ お よ びＮａｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｓｅ
ならびに次のカビ類すなわちＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓおよびＣｒｙｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓについてスクリーニングを行なった。

【００６７】

【表１】 コンブレタスタチンＡ−４（Ｉａ）および合成修飾化合物（４ａ−５ｓ）の、
ヒトガン細胞系活性（ＧＩ_５０、μｇ／ｍｌ）およびネズミＰ−３８８白血病阻
害活性（ＥＤ_５０、μｇ／ｍｌ）

【００６８】

【００６９】

【表２】 コンブレタスタチンＡ−４（１ａ）、コンブレタスタチンプロドラッグ（３ｄ）
および合成修飾化合物（４ａ，４ｃ，５ａ−ｓ）の抗微生物活性

【００７０】

【表３】 コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ３ｄ、（Ｅ）−スチルベンプロドラッグ
（４ｃ）および構造的修飾体（５ａ−ｓ）の、２５℃の水への溶解度（ｍｇ／ｍ
ｌ）

【００７１】 コンブレタスタチンＡ−４、コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ、および
若干のプロドラッグ修飾体は、病原微生物のＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒ
ｈｏｅａｅの生長を阻害した（表２）。もとのホスフェートへのマンガン５ｅお
よびピペラジン５ｉの付加は、日和見カビに対して阻害的な化合物を生成した。
予期したように、テトラサイクリン誘導体５ｒは、試験したグラム陰性およびグ
ラム陽性細菌の生長を阻害した。

【００７２】 生物学的評価と統計学的定義 細胞の生長を特定百分率生長に減少させる薬物用量を投与することによる薬物
の活性を表わすために、つぎの方法を用いた。すなわちＥＤ_５０（Ｐ３８８）お
よびＧＩ_５０（ＨＴＣＬ）は、ガン細胞を５０％減少させるに必要な薬物の用量
（μｇ／ｍｌガン細胞）である。いずれも、同じ式を使って計算したＥＤ_５０お
よびＧＩ_５０のあいだには数学的な相違点はない。唯一の相違点は歴史的な用法
のみである。

【００７３】 全生長阻害（ＩＧＩ）とは、ゼロパーセント生長をもたらすに必要な薬物用量
（μｇ／ｍｌガン細胞）である。生成したものと全く同数の多数の細胞が死滅し
たか（定常状態）、または生長がなかったか（全阻害）かは、区別できない。

【００７４】 ５０％致死濃度（ＬＣ_５０）とは、実験開始時に最初から存在した細胞の半数
を死滅させる薬物濃度（μｇ／ｍｌガン細胞）である。

【００７５】 各々の薬物を１００−１−１−０．１−０．０５μｇ／ｍｌの５つの用量で試
験する。各々の用量での生長百分率を計算する。５０％生長以上、以下（または
それに近い）生長値での２つ（または３つ）の用量を、線型回帰式を用いてのＥ
Ｄ_５０／ＧＩ_５０の計算に使用する。用量の対数を、回帰計算において用いる。
もし用量が５０％未満の生長値を示さないときは、その結果を「ＥＤ_５０＞最大
用量」と表わす。もし用量が５０％より大きい生長値を示さないときは、その結
果を「ＥＤ_５０＜最小用量」と表わす。０％生長でのＴＧＩ、および−５０％で
のＬＣ_５０についても類似の計算を行なう。

【００７６】 生長百分率 実験を開始するにあたって、インビトロの細胞培養液からの細胞を、適当なチ
ューブ又はマイクロタイタープレートの中へ接種する。対照のチューブ／プレー
トの１セットを直ちに計数して、実験開始時の細胞数を測定する。これは「基準
数」または「Ｔゼロ値」である。実験の終了時（４８時間後）に、チューブ／プ
レートの２番目のセットを分析して、「対照生長」を測定する。当初の細胞数に
対する細胞生長（または死滅）を、「生長百分率」を定義するために用いる。

【００７７】

【式１】

【００７８】 試験のプロトコールや方法についての更なる情報は次を参照のこと。Ａｎｎｅ
Ｍｏｎｋｓ ｅｔ ａｌ．，「培養したヒトの腫瘍細胞系の多様パネルを使っ
たハイフラックス抗がん剤のスクリーニング実現可能性」８３，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．，Ｎｏ．１１，ｐｐ．７５７−６６（５ Ｊｕｎｅ １
９９１）およびＭｉｃｈａｅｌ Ｊ．Ｂｏｙｄ，「ＮＣＩ前臨床抗がん剤発見の
スクリーニングの状態」３，Ｐｒｉｎｃ．＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆＯｎｃｏ
ｌｏｇｙ Ｕｐｄａｔｅｓ，Ｎｏ．１０，ｐｐ．１−１２（Ｏｃｔ．１９８９）
。

【００７９】 「プロドラッグ」とは、インビボで活性薬物への代謝活性化を行なうであろう
前駆物質を表わす。すなわち、ある種のホスフェート誘導体は、もしホスフェー
ト基が内因性の非特定ホスファターゼで分解されるならば、理想的なプロドラッ
グとなる（ＭｃＣｏｍｂ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔ
ａｓｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，１９７９）。既に発表
されているように（アメリカ特許４９９６２３７および５５６１１２２参照）、
Ｐ３８８ネズミ白血病および選択された６つのヒト腫瘍細胞系（ＯＶＣＡＲ−３
，ＳＦ−２９５，Ａ４９８，ＮＣＩ−Ｈ４６０，ＫＭ２０Ｌ２，ＳＫ−ＭｅＬ−
５）に対する、安定なコンブレタスタチンＡ−４ホスフェート金属またはアンモ
ニウム塩の予備的なインビトロでの比較が、スルフォローダミンＢ試験を使って
行なわれた（Ｓｋｅｈａｎ ｅｔ ａｌ．，「抗がん剤スクリーニングのための
新しい比色細胞毒性試験」Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．，１１０７（
１９９０））。ここでも、リン酸ソーダ誘導体３ｄは、はじめに開示した誘導体
１ｈと同等である。すなわち１ｈに関する試験結果は、ここでは３ｄについて繰
り返されるであろう。ついでコンブレタスタチンＡ−４ １ａとプロドラッグ１
ｈ（３ｄ）を、フルパネルのＮＣＩスクリーニングに対して比較評価した（Ｂｏ
ｙｄ，「ＮＣＩ前臨床抗がん剤発見スクリーニングの状態、臨床試験のための新
規な薬剤の選択のための推定」３，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎ
ｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｕｐｄａｔｅｓ，Ｎｏ．１０
，ｐｐ．１−１２（１９８９）；およびＢｏｙｄｅｔ ａｌ．，「新規薬剤開発
の将来、第１部、ガン治療序論」Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｏｎ
ｃｏｌｏｇｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｄｅｃｋｅｒ（１９９３））。両者
は、各々異なる３つの濃度範囲で４回テストした（１０^−５，１０^−６および１
０^−７Ｍ上限、各々の範囲で５つのｌｏｇ_１０間隔での濃度）。全体としての強
度と特異的な細胞毒性比較のために最適なテストが選択された（Ｂｏｙｄ ａｎ
ｄ Ｐａｕｌ，「ＮＣＩのインビトロ抗がん剤発見スクリーニングの若干の実用
的な考察と応用」，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（印
刷中）。プロドラッグ１ｈ（３ｄ）の６．８９±０．９６ｘ１０^−９Ｍと比較し
ての、親化合物１ａの平均パネルＧＩ_５０は６．６１±０．７９ｘ１０^−９Ｍで
あった。ＴＧＩ−ＣＯＭＰＡＲＥ分析（Ｉｄ）は、コンブレタスタチンＡ−４（
１ａ）とそのプロドラッグ１ｈ（３ｄ）の特異的細胞毒性プロファイルが０．９
１という極めて高いｐｅａｒｓｏｎ相関係数を示した。このような高い相関係数
は、生物学的性質及び／又は化学構造と性質における類似性を反映している。Ｐ
ａｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，「ヒトの腫瘍細胞系に対する薬物の特異的活性のパタ
ーンの表示と分析、平均グラフとＣＯＭＰＡＲＥアルゴリズムの開発」８１，Ｊ
．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ，Ｉｎｓｔ．，Ｎｏ．１４，ｐｐ．１０８−９２（Ｊｕ
ｌｙ１９，１９８９）。

【００８０】 明らかに、リン酸ソーダ１ｈ（３ｄ）の優れた水溶性と、コンブレタスタチン
１ａに匹敵する良好な安定性と細胞阻害活性は、薬剤処方研究のためのこのプロ
ドラッグの候補の選択を許容する。同じようにして、コンブレタスタチンＡ−４
ホスフェート金属またはアンモニウム塩のいずれもが合成でき、コンブレタスタ
チン１ａに匹敵する細胞生長阻害活性をもつプロドラッグとして利用可能である
と思われる。

【００８１】 以上述べたことに基づいて、コンブレタスタチン１ｈ（３ｄ）は、１つまたは
それり多い新生物疾患の治療に有用であると信じられる。それは例えば、急性骨
髄性白血病、急性リンパ球白血病、慢性メラノーマ、肺の腺ガン、神経芽腫、肺
の小細胞ガン、乳ガン、大腸ガン、卵巣ガン、膀胱がん、などである。

【００８２】 投与される用量は、新生物疾患の主体性、年齢や健康や体重を含めた患者のタ
イプ、同時治療をもし行なっておればその種類、処置頻度や治療比率、などに依
存するであろう。

【００８３】 具体的には、投与する活性成分の用量レベルは患者の体重あたりでは、静脈内
投与では０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内投与では１から約５０ｍｇ／ｋｇ
、経口投与では５から約１００ｍｇ／ｋｇ、経鼻投与では５から約１００ｍｇ／
ｋｇ、そしてエアゾールでは５から約１００ｍｇ／ｋｇである。

【００８４】 濃度を用いて表わすと、経皮、経鼻、経咽喉、経気管支、経膣、経直腸または
経眼についての本発明組成物中に存在する活性成分は組成物の約０．０１から妬
く５０％ｗ／ｗの濃度であり、好ましくは組成物の約１から約２０％ｗ／ｗであ
り；そして非経口投与のためには、組成物の約０．０５から約５０％ｗ／ｖであ
り、好ましくは組成物の約５から約２０％ｗ／ｖである。

【００８５】 好ましくは本発明の組成物はヒトや動物に対して、活性成分の適量を含む単位
投与形態、たとえば錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒、坐薬、滅菌非経口溶液
または懸濁液、滅菌非非経口溶液または懸濁剤、および経口溶液または懸濁剤な
どとして投与するために提供される。

【００８６】 経口投与のためには、固体または液体の投与形態が製造される。

【００８７】 粉末は、活性成分を適当に細かい大きさに粉砕し、そして同じように粉砕した
希釈剤と混合することによって極めて簡単に製造される。希釈剤は、たとえば乳
糖やデンプンのような可食性の炭水化物材料であってよい。有利には、香料油と
同様に甘味剤や砂糖が存在している。

【００８８】 カプセル剤は、上述のようにして粉末混合物を作り、そして形成されたゼラチ
ンの鞘の中へ充填して製造される。有利には充填作業前に、補助剤として、たと
えばタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、などのよう
な潤滑剤を粉末混合物に加える。

【００８９】 軟ゼラチンカプセル剤は、活性成分のスラリーを、許容可能な植物油、液体軽
油またはその他の不活性油やトリグリセライドと共に機械的カプセル化により製
造される。

【００９０】 錠剤は、粉末混合物を作製し、顆粒またはスラグとし、潤滑剤を添加し、そし
て打錠して製造される。粉末混合物は、適当に粉砕した活性成分を、たとえばデ
ンプン、乳糖、カオリン、リン酸ジカルシウムのような希釈剤や基剤と混合して
製造される。粉末混合物は、たとえばコーンシロップ、ゼラチン溶液、メチルセ
ルロース溶液またはアラビアゴム粘液のような結合剤で湿らせ、そしてスクリー
ンを強制通過させて顆粒化させる。顆粒化の別法として、粉末混合物をスラグ化
、すなわち打錠機を通過させ得られた不完全な形の錠剤を粉砕（スラグ）とする
。このスラグにステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱物油を添加する
ことによって製錠用の型への付着を防ぐため潤滑化することができる。ついで潤
滑化した混合物を圧縮して錠剤とする。

【００９１】 有利には錠剤は、シェラックの密閉被膜または腸溶性被膜から成る保護被覆、
砂糖とメチルセルロースの被覆、およびカルナウバ蝋の研磨被覆をすることがで
きる。

【００９２】 シロップ、エリキシル及び懸濁液のような経口投与のための液体単位投与形態
は、組成物の１匙分が投与のための活性成分の一定量を含むように製造すること
ができる。この水溶性の形態のものは、砂糖、香料および保存剤と共に水性のベ
ヒクルに溶解してシロップとすることができる。エリキシルは、香料と共に適当
な甘味剤を水性アルコールのベヒクルを使って製造する。懸濁剤は、アラビアゴ
ム、トラガカント、メチルセルロースなどのような懸濁用剤を補助剤として適当
なベヒクルと共に不溶性の形態として製造することができる。

【００９３】 非経口投与のために、液体単位投与形態は、活性成分と滅菌ベヒクル（水が好
ましい）を用いて製造される。形態と使用濃度により、活性成分はベヒクルに懸
濁または溶解することができる。溶液を製造するときは、水溶性の活性成分は注
射用水に溶解し、そして適当なバイアルまたはアンプルに充填して、密封する前
に滅菌濾過する。有利には、たとえば局所麻酔剤、保存剤および緩衝剤のような
補助剤をベヒクルに溶解することができる。活性成分をベヒクルに溶解せずに懸
濁させ滅菌は濾過によって行なわない、ということ以外は実質的に上記と同様に
して非経口剤を製造する。滅菌ベヒクルに懸濁する前にエチレンオキサイドに曝
露させることで、活性成分を滅菌することができる。有利には、界面活性剤また
は湿潤剤を組成物に包含させて、活性成分を均一に分布させる。

【００９４】 経口および非経口投与に加えて、直腸や膣経由もまた用いられる。活性成分は
坐薬という手段で投与することができる。おおむね体温での融点をもつベヒクル
または容易に溶けるベヒクルを用いることができる。たとえば、カカオ脂や種々
のポリエチレングリコール（カルナウバワックス）がベヒクルとして用いられる
。

【００９５】 経鼻滴下のために、液体単位投与形態を、活性成分と適当な医薬用ベヒクル好
ましくはＰ．Ｆ．水を用いて製造する。吹入剤が好ましい投与であるときは乾燥
粉末が処方される。

【００９６】 エアロゾルとしての使用のために活性成分は、必要または所望に応じてたとえ
ば共溶媒や湿潤剤のような通常の補助剤と共に、たとえばジクロロジフルロメタ
ン、二酸化炭素、窒素、プロパンなどのような気体や液体の噴射剤と一緒に加圧
エアロゾル容器に詰めることができる。

【００９７】 本明細書や請求の範囲で用いる「単位用量形態」という用語は、ヒトや動物の
対象のための単位用量として適当な物理的に分離された単位であって、各々の単
位は、必要な医薬用希釈剤、担体またはベヒクルと共に所望の治療効果を生じる
ように計算した一定量の活性剤を含むものである。本発明の新規な単位投与形態
の明細は記載されそして、（ａ）活性成分のユニークな特性および得られるべき
特定の治療効果、そして（ｂ）本発明の特徴である本明細書に開示のヒトにおけ
る治療的使用のためのそのような活性材料の配合技術に本質的な限定に直接に依
存する。本発明における適当な単位投与形態の例は、錠剤、カプセル、トローチ
、坐剤、粉末のパケット、ウェーファー剤、カシェ剤、茶さじ用剤、スプーン用
剤、滴剤、アンプル、バイアル、上記の適当な組合わせ、およびここに記載のそ
の他の形態である。

【００９８】 抗新生物剤として用いられる活性成分は、それ自体が当該技術で入手可能であ
り確立された方法で製造可能な医薬材料を用いて容易に上記の単位用量形態にす
ることができる。つぎの製法は本発明の単位用量形態の製造の説明であって限定
ではない。本発明の態様として種々の投与形態を製造した。それらは以下の例に
示されており、「活性成分」という用語はコンブレスタチンＡ−４ホスフェート
の金属またはアンモニウム塩、たとえば３ｄ又は構造的修飾物の４ａ、４ｃ及び
／又は５ａ−ｓを意味する。

【００９９】 組成物Ａ 硬ゼラチンカプセル剤 各々のカプセルが２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の経口用２部分
型ゼラチンカプセル剤を、次のタイプと量の成分から製造した。 活性成分、微粉末化 ２００ｇ コーンスターチ ２０ｇ タルク ２０ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ

【０１００】 空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を別の微粉砕した成分に加え、完全に
混合し、ついで常法によりカプセルに封入した。

【０１０１】 上記のカプセル剤は、１日１ないし３回、１ないし２カプセルの経口投与によ
り、新生物疾患の治療に有用である。

【０１０２】 上の方法を用いて、上記の２００ｇの活性成分を５０ｇ、２５０ｇおよび５０
０ｇに代えて５０、２５０および５００ｍｇの活性成分を含有するカプセル剤を
同様にして製造する。

【０１０３】 組成物Ｂ 軟カプセル剤 まず０．５ｍｌのトウモロコシ油に化合物を懸濁し材料をカプセル化可能とし
次いで上記のようにしてカプセル充填して、空気微粉砕機で細かく粉砕した活性
成分を各２００ｍｇ含有する経口用の一体型軟ゼラチンカプセル剤を製造する。

【０１０４】 上記のカプセル剤は、１日１ないし４回、１ないし２カプセルの経口投与によ
り、新生物疾患の治療に有用である。

【０１０５】 組成物Ｃ 錠剤 各々の錠剤が２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の錠剤を、次のタイ
プと量の成分から製造した。 活性成分、微粉末化 ２００ｇ 乳糖 ３００ｇ コーンスターチ ５０ｇ ステアリン酸マグネシウム ４ｇ 軽油 ５ｇ

【０１０６】 空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を別の微粉砕した成分に加え、ついで
完全に混合しスラグとする。スラグを１５号スクリーンを通し力を加えて破砕す
る。得られた顆粒を打錠して、各錠剤が２００ｍｇの活性成分を含有するように
する。

【０１０７】 上記の錠剤は、１日１ないし４回、１ないし２錠の経口投与により、新生物疾
患の治療に有用である。

【０１０８】 上の方法を用いて、上記の２００ｇの活性成分を２５０ｇおよび１００ｇに代
えて２５０および１００ｍｇの活性成分を含有する錠剤を同様にして製造する。

【０１０９】 組成物Ｄ 経口用懸濁剤 各茶さじ（５ｍｌ）用量が５０ｍｇの活性成分を含有する経口用の水性懸濁剤
１リットルを、次のタイプと量の成分から製造する。 活性成分、微粉化 １０ｇ クエン酸 ２ｇ 安息香酸 １ｇ 蔗糖 ７９０ｇ トラガカントガム ５ｇ レモン油 ２ｇ 脱イオン水、適量 １０００ｍｌ

【０１１０】 クエン酸、安息香酸、蔗糖、トラガカントガム、およびレモン油を充分な量の
水に分散して８５０ｍｌの懸濁液とする。微粉末機で細かく粉砕した活性成分を
、均一に分布したシロップ単位の中へ攪拌する。充分な量の水を加えて１０００
ｍｌとする。

【０１１１】 このようにして製造した組成物は、１日３回、茶さじ１杯（１５ｍｌ）の用量
で新生物疾患の治療に有用である。

【０１１２】 組成物Ｅ 非経口製品 新生物疾患治療のための１ｍｌあたり３０ｍｇの活性成分含有の非経口注射の
ための滅菌水性懸濁剤を、次のタイプと量の成分から製造する。 活性成分、微粉化 ３０ｇ ポリソルベート８０ ５ｇ メチルパラベン ２．５ｇ プロピルパラベン ０．１７ｇ 注射用水、適量１０００ｍｌ

【０１１３】 活性成分以外のすべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過により滅菌する。
この滅菌溶液に、微粉砕機で細かく粉砕した滅菌活性成分を加え、そして最終懸
濁液を滅菌バイアルに充填し、バイアルを密封する。

【０１１４】 このようにして製造した組成物は、１日３回、１ｍｌの用量で新生物疾患の治
療に有用である。

【０１１５】 組成物Ｆ 坐剤、直腸および膣 新生物疾患治療のための、各々が２．５ｇの重量であり２００ｍｇの活性成分
を含有する１０００個の坐剤を、次のタイプと量の成分から製造する。 活性成分、微粉化 １５ｇ プロピレングリコール １５０ｇ ポリエチレングリコール＃４０００適量 ２５００ｇ

【０１１６】 活性成分を空気微粉砕機で細かく粉砕し、プロピレングリコールに添加し、混
合物が均一に分散されるまでコロイドミルを通過させる。ポリエチレングリコー
ルを溶融し、プロピレングリコール分散液を攪拌しながらゆっくりと添加する。
この懸濁液を、非冷却の型へ４０℃で注ぐ。組成物を放冷固化させ、ついで型か
ら外し、各々の坐剤をホイルで包む。

【０１１７】 上記の坐剤を、新生物疾患の治療のために直腸または膣に挿入する。

【０１１８】 組成物Ｇ 経鼻用懸濁剤 １ｍｌあたり２０ｍｇの活性成分を含む経鼻滴下のための滅菌水性懸濁液１リ
ットルを次のタイプと量の成分から製造する。 活性成分、微粉化 １５ｇ ポリソルベート８０ ５ｇ メチルパラベン ２．５ｇ プロピルパラベン ０．１７ｇ 脱イオン水 適量 １０００ｍｌ

【０１１９】 活性成分以外のすべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過により滅菌する。
この滅菌溶液に、微粉砕機で細かく粉砕した滅菌活性成分を加え、そして最終懸
濁液を無菌的に滅菌容器に充填する。

【０１２０】 このようにして製造した組成物は、１日１−３回、０．５から０．５ｍｌの経
鼻滴下により新生物疾患の治療に有用である。

【０１２１】 活性成分はまた、経皮、経鼻、経径咽頭、経気管支または経口での局所的使用
のために非希釈の純粋な形態でも存在することができる。

【０１２２】 組成物Ｈ 粉末 バルク形態の活性成分５ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。この微粉砕化し
た粉末を振盪型の容器に入れる。

【０１２３】 上記の組成物は１日１−４回、粉末を局所部位に適用することにより新生物疾
患の治療に有用である。

【０１２４】 組成物Ｉ 経口用粉末 バルク型の活性成分１００ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。この微粉砕化
した粉末を、２００ｍｇの個々の用量に分けて包装する。

【０１２５】 上記の組成物は１日１−４回、コップ１杯の水に１−２包装を経口投与するこ
とにより新生物疾患の治療に有用である。

【０１２６】 組成物Ｊ 吹入剤 バルク型の活性成分１００ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。

【０１２７】 上記の組成物は１日１−４回、３００ｍｇを吹入することにより新生物疾患の
治療に有用である。

【０１２８】 上述したところから、それに基づく新規で有用な抗新生物薬剤および新規で有
用な抗新生物製剤がここに記載され説明されており、それは上記の目的のすべて
を極めて予期しない態様で満たしている。この開示に直面する当業者において容
易に起こるその修飾、変更および適用は、請求の範囲で定義される本発明の精神
の範囲内にあると意図されることは当然に理解される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ａ）は（Ｚ）−および（Ｅ）−コンブレタスタチンＡ−４プロド
ラッグの、そしてｂ）は１００％純粋のコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ
の、ＨＰＬＣによる高速液体クロマトグラフィーチャートである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ，Ｕ Ｓ Ｆターム(参考） 4C086 AA03 AA04 DA34 GA13 GA14 MA01 MA04 NA15 ZB26 ZB31 4H050 AA01 AA02 AB20 AB28 AD15 WA11 WA12 WA17 WA21 WA23 WA24

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コンブレタスタチンＡ−４をリン酸化剤と混合してその上に
   保護基をもつコンブレタスタチンＡ−４のホスフェートエステルを製造し； そのホスフェートエステル保護基を分解剤で処理し選択的に分解してコンブレ
   タスタチンＡ−４のリン酸誘導体とし；そして そのコンブレタスタチンＡ−４のリン酸誘導体をナトリウムメトキサイドで処
   理し、最終生産物としてコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグジナトリウムホ
   スフェート、コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグモノナトリウムホスフェー
   トまたはそのトランス異性体を製造する ことから成るモノナトリウムホスフェート塩およびジナトリウムホスフェート
   塩としてのコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグならびにトランスコンブレタ
   スタチンＡ−４プロドラッグを合成する方法。
2. 【請求項２】 リン酸化剤がジベンジルホスファイト／四塩化炭素、ジ−ｔ
   ｅｒｔ−ブチルオキシ（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド）ホスフィン及びビス［２−（
   トリメチルシリル）エトキシ］Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミドホスフィンよりな
   る群から選ばれる請求項１の方法。
3. 【請求項３】 分解剤がヨードトリメチルシラン、トリフルオロ酢酸、及び
   テトラブチルアンモニウムフルオライドより成る群から選ばれる請求項１の方法
   。
4. 【請求項４】 分解剤がヨードトリメチルシラン、トリフルオロ酢酸、及び
   テトラブチルアンモニウムフルオライドより成る群から選ばれる請求項２の方法
   。
5. 【請求項５】 最終生産物がＸ−コンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホ
   スフェートから成り、ここにＸはセシウム、カルシウム、リチウム、マグネシウ
   ム、マンガン、ナトリウム、カリウム及び亜鉛より成る群から選ばれる請求項１
   の方法。
6. 【請求項６】 最終生産物がＹ−コンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホ
   スフェートから成り、ここにＹはイミダゾール、モルホリン、ピペラジン、ピペ
   リジン、ピラゾール及びピリジンより成る群から選ばれる請求項１の方法。
7. 【請求項７】 最終生産物がＺ−コンブレタスタチンＡ−４ ３’−Ｏ−ホ
   スフェートであり、ここにＺはアデノシン、シンコニン、グルコサミン、キニン
   、キニジン、テトラサイクリン及びベラパミルより成る群から選ばれる請求項１
   の方法。
8. 【請求項８】 コンブレタスタチンＡ４をアセトニトリルに溶解し；その溶
   液を−２５°Ｆに冷却し；その冷却液に四塩化炭素を攪拌しながら添加し；その
   冷却し攪拌した溶液に４−ジメチルアミノピリジンとジベンジルホスフェートを
   添加して室温に加温し；その室温の溶液から溶媒抽出して３’−Ｏ−ビス（ベン
   ジル）ホスホリル−３，４，４’，５−テトラメトキシ−（Ｅ）−スチルベンを
   得；該３’−Ｏ−ビス（ベンジル）ホスホリル−３，４，４’，５−テトラメト
   キシ−（Ｅ）−スチルベンをクロロトリメチルシランと混合し；その混合溶液か
   ら酢酸エチルで溶媒を分離してエキスをつくり；そのエキスをメタノールに溶解
   し；該溶解エキスにナトリウムメトキサイドを添加して第二の溶液をつくり；そ
   して該第二の溶液からメタノールを除去しそして該第二の溶液から固形物を再結
   晶してコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグのトランス異性体を製造する ことから成るコンブレタスタチンＡ−４プロドラッグのトランス異性体を合成
   する方法。
9. 【請求項９】 次の構造をもつコンブレタスタチンＡ−４金属およびアンモ
   ニウムホスフェートプロドラッグならびにトランスコンブレタスタチンＡ−４プ
   ロドラッグ。 【化１】 ここでＸはセシウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、マンガン、ナトリ
   ウム、カリウム、亜鉛、イミダゾール、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、
   ピラゾール、ピリジン、アデノシン、シンコニン、グルコサミン、キニン、キニ
   ジン、テトラサイクリン及びベラパミルより成る群から選ばれる。
10. 【請求項１０】 最終生産物を再結晶する請求項１の方法。