JP2002332231A

JP2002332231A - γ−ＣＥＨＣ送達剤

Info

Publication number: JP2002332231A
Application number: JP2001083540A
Authority: JP
Inventors: Jiro Takada; 二郎高田; Takeshi Fukushima; 健福島; Kazuhiro Imai; 一洋今井; Yoshiharu Karube; 善晴加留部; Kazuhisa Matsunaga; 和久松永; Michihiro Fujiwara; 道弘藤原; Akihiro Hattori; 晃広服部; Ryoji Hidaka; 亮司日高
Original assignee: KENKO TSUSHO KK
Current assignee: KENKO TSUSHO KK
Priority date: 2001-03-06
Filing date: 2001-03-22
Publication date: 2002-11-22

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明の目的は、高い水溶性とともに生体内
で高いバイオアベイラビリティーを示すγ−ＣＥＨＣ送
達剤を提供することにある。【解決手段】一般式（Ｉ）で表される水溶性６−クロ
マノール誘導体を含み、体内で2,7,8-trimethyl-(β-ca
rboxyethyl)-6-hydroxychromane （γ−ＣＥＨＣ）を放
出するγ−ＣＥＨＣ送達剤。【化１】（式中Ｒ_１は窒素置換基を有するカルボン酸残基を意味
する。Ｒ_２は式IIで示される残基である。）【化２】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はγ−ＣＥＨＣ送達
剤、特に体内でγ−ＣＥＨＣを放出する送達剤の改良に
関する。

【０００２】

【従来の技術】ＬＬＵ−α（Loma Linda University-
α）は尿毒症患者の尿から単離精製されたナトリウム利
尿因子の一つである(Murry E.D.Jr, Kantoci D.,DeWind
S.A., Bigornia A.E.,D’Amico D.C.,King J.G.,Pham
T., Levine B.H.,Jung M.E., Wechter W.J., Life Sci.
57, 2145-2161(1995))が、γ−トコフェロール代謝物
である2,7,8-trimethyl-(β-carboxyethyl)-6-hydroxyc
hromane （γ−ＣＥＨＣ:式II）と同一化合物であるこ
とが明らかにされた(Wechter W.J.,Kantoci D.,Murray
E.D. Jr, D’Amico D.C.,Jung M.E.,Wang W-H., Proc.N
atl. Acad. Sci. USA 93,6002-6007(1996))。

【０００３】

【化３】

【０００４】このＬＬＵ−αはネフロンのナトリウムポ
ンプ、平均動脈圧、糸球体ろ過速度に影響を与えず、Ｎ
ａ^＋／Ｋ^＋−ＡＴＰａｓｅのアイソザイムを阻害しない
でヘンレ係蹄の上行脚の７０ｐＳカリウムチャンネルの
みに対して可逆的な阻害を示すことからナトリウム利尿
因子と考えられている。従って、ＬＬＵ−αにはカリウ
ム移動に伴う心筋などへの副作用の少ない利尿剤として
期待が持たれている。ＬＬＵ−αは２位に不斉炭素をも
ち、Ｓ−ＬＬＵ−αとＲ−ＬＬＵ−αが存在するが、Ｓ
−ＬＬＵ−αが最もカリウムチャンネル阻害作用が強
く、Ｓ−ＬＬＵ−αは２位がＲ体のｄ−γ−トコフェロ
ールの主要代謝物である。

【０００５】γ−ＣＥＨＣはcyclooxygenase-2 （ＣＯ
Ｘ−２）の阻害効果を有することが明らかになり(Jiang
Q.,Elson-Schwab I., Courtemanche C., Ames B.N., P
roc.Natl. Acad. Sci. USA 97, 11494-11499(2000))、
副作用の少ない抗炎症剤、抗がん剤として期待されてい
る。また、γ−ＣＥＨＣはクロマノール構造を有するた
め優れた抗酸化剤としても機能できる。

【０００６】一方、クロマン２位の不斉炭素がＲ体であ
る天然型ｄ−γ−トコトリエノールはラット体内でＳ−
γ−ＣＥＨＣに効率よく代謝されることが明らかにされ
ている(Hattori A., Fukushima T., Yoshimura H., Abe
K., Imai K., Biol. PharmBull., 23, 1395-1397(200
0))。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】以上のようにγ−ＣＥ
ＨＣの利尿剤、抗炎症剤、抗がん剤、抗酸化剤としての
機能を効率よく発揮させるためには、γ−ＣＥＨＣの速
度論的バイオアベイラビリティと量的バイオアベイラビ
リティの確保が必須である。

【０００８】そのためにはγ−ＣＥＨＣ自体を用いる方
法が考えられる。しかし、ラセミ体のγ−ＣＥＨＣをＳ
Ｄラットに静脈内投与した場合、血漿中の生物学的半減
期はＳ−γ−ＣＥＨＣで２分以内、Ｒ−γ−ＣＥＨＣで
約１時間であり、特に活性の高いＳ−γ−ＣＥＨＣは非
常に短いことが明らかになっている(Hattori A.,Fukush
ima T., Hamamura K.,Kato M., Imai K.,Biomed.Chroma
togr., in press)。従って、γ−ＣＥＨＣ自体を用いて
γ−ＣＥＨＣのバイオアベイラビリティを確保すること
は非常に困難である。

【０００９】一方、γ−トコトリエノールおよびγ−ト
コフェロールはγ−ＣＥＨＣに体内で効率よく代謝され
ることから、γ−トコトリエノールおよびγ−トコフェ
ロールの体内レベルを確保することで、γ−ＣＥＨＣの
バイオアベイラビリティを確保する方法が考えられる。
γ−トコフェロールを用いてＬＬＵ−α（γ−ＣＥＨ
Ｃ）の薬物送達を行う方法としては、米国特許６，０４
８，８９１などがある。しかし、γ−トコトリエノール
とγ−トコフェロールは、どちらも酸化に対して不安定
であり、粘性の高い油状物質で水に全く溶解しない化合
物であるため、これらの物理化学的性質が注射投与を不
可能としている。また、製剤化上、取り扱いが困難で、
保存安定性に問題がある。このため、トコトリエノール
の水溶性製剤または水性化粧品の調製には大量の非イオ
ン性界面活性剤の添加による可溶化方法が検討されてい
るが、大量の界面活性剤はアナフィラキシーショック等
の重篤な問題を生じる場合がある。従って、γ−トコト
リエノールおよびγ−トコフェロールのバイオアベイラ
ビリティを確保することは困難であり、結果としてγ−
ＣＥＨＣのバイオアベイラビリティを確保することも困
難である。

【００１０】本発明は前記従来技術の課題に鑑みなされ
たものであり、その目的は高い水溶性を有するととも
に、生体内でγ−ＣＥＨＣを生成し得る６−クロマノー
ルカルボン酸エステル誘導体を含むγ−ＣＥＨＣ送達剤
を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に本発明者等が鋭意検討を行った結果、特定の６−クロ
マノールカルボン酸エステルがγ−ＣＥＨＣのバイオア
ベイラビリティ確保を可能とし得ることを見出し、本発
明を完成するに至った。

【００１２】すなわち、本発明にかかるγ−ＣＥＨＣ送
達剤は、一般式（Ｉ）で表される水溶性６−クロマノー
ル誘導体を含み、体内で2,7,8-trimethyl-(β-carboxye
thyl)-6-hydroxychromane （γ−ＣＥＨＣ）を放出する
ものである。

【化４】（式中Ｒ_１は窒素置換基を有するカルボン酸残基を意味
する。Ｒ_２は化５で示される残基である。）

【００１３】

【化５】また、前記送達剤において、窒素置換基を有するカルボ
ン酸残基が、アミノ酸、Ｎ−アシルアミノ酸、Ｎ−アル
キルアミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸、ピリジン
カルボン酸及びそれらのハロゲン化水素酸塩またはアル
キルスルホン酸塩の残基からなる群より選択される少な
くとも一種であることが好適である。

【００１４】なお、一般式（Ｉ）で表される６−クロマ
ノールカルボン酸エステル誘導体がトコトリエノール誘
導体である場合には、クロマノール骨格の２位に不斉炭
素を有するので、ｄ，ｄｌ体などの立体異性体が存在す
るが、本発明はこれらの異性体を包含するものである。

【００１５】

【発明の実施の形態】以下、本発明の好適な実施形態に
ついて説明する。本発明において、窒素置換基を有する
カルボン酸残基は、窒素原子に対し水素原子ないし、１
または２のアルキル基、アシル基が結合したものが好適
である。このアルキル基としては、炭素数１〜６の直
鎖、もしくは分枝のアルキル基、例えばメチル基、エチ
ル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、n−ペンチル
基、ｎ−ヘキシル基、イソプロピル基、イソブチル基、
１−メチルプロピル基、tert−ブチル基、１−エチルプ
ロピル基、イソアミル基などを例示することが可能であ
り、特にメチル基、エチル基が好ましい。また、アシル
基を有する場合の炭化水素鎖も同様に定義可能である。

【００１６】アミノ基とカルボニル基の間は、好ましく
は炭素数１〜７の直鎖、分枝または環状のアルキレン基
で結合される。分枝状のアルキレン基とは、例えばイソ
プロピル、イソブチル、tert−ブチル、１−エチルプロ
ピルなどのアルキル基から誘導されたアルキレン基を意
味する。環状アルキレン基とは、シクロペンタン環、シ
クロヘキサン環、あるいはメチルシクロヘキサン環など
を構造中に含むアルキレン基を意味する。アルキレン基
として特に好ましいのは、メチレン基あるいはエチレン
基である。

【００１７】ハロゲン化水素酸塩としては、ＨＣｌ塩、
ＨＢｒ塩などが好ましい。本発明において、ハロゲン化
水素酸塩は結晶化ないし固形化する場合が多く、製剤に
あたっての取り扱いが容易になるという利点がある。ま
た、アルキルスルホン酸塩としては、メタンスルホン酸
等が例示される。このアルキルスルホン酸塩とした場合
には、吸湿性の低い固形化が可能である。

【００１８】本発明において体内でトコフェロールを介
してγ−ＣＥＨＣを生じる水溶性６−クロマノールカル
ボン酸エステル誘導体としては、特開平２−１４９５７
６、特開平２−１４９５７７、特開平１−１２１２８
４、あるいは特開平１−１２１２８５に示されるものが
例示される。しかし、これらの文献では、γ−ＣＥＨＣ
のバイオアベイラビリティー確保についてはまったく検
討されていない。また、本発明において、体内でトコト
リエノールを生じる６−クロマノールカルボン酸エステ
ル誘導体の製造方法としては、以下のようなものが例示
される。

【００１９】

【化６】

【００２０】一般式（II）で表されるトコトリエノール
類と、窒素置換基を有するカルボン酸、もしくはその反
応性酸誘導体、またはこれらのハロゲン化水素酸塩と
を、常法によりエステル化反応を行うことにより、本発
明の目的物質（Ｉ）を得ることができる。

【００２１】トコトリエノール類のエステル化反応は常
法に従うが、１級、２級アミノ基あるいは側鎖に水酸
基、チオール基を有するアミノ酸のエステル化を行う際
は、tert-ブトキシカルボニル基（以下、ｔ−ＢＯＣ基
という）、ベンジルオキシカルボニル基（以下、Ｚ基と
いう）などの適切な保護基で保護して用いることが好ま
しい。

【００２２】また、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸はハロ
ゲン化水素酸塩を用いて、ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（以下、ＤＣＣという）、Ｎ，Ｎ−ジサクシニミド
オキザレート（以下、ＤＳＯという）などの活性エステ
ル化試薬の存在下に反応を行うことが好ましい。この際
の溶媒としては、無水ピリジンが好ましい。

【００２３】また、反応性酸誘導体を用いる方法では、
酸ハロゲナイト、特に酸クロリドを用いる方法が好まし
い。この際の溶媒としては、無水ベンゼン−無水ピリジ
ン混合物が好ましい。ハロゲン化水素酸塩及びアルキル
スルホン酸塩は、常法により遊離のアミノ酸エステルと
ハロゲン化水素酸またはアルキルスルホン酸を反応させ
て製造する。また、Ｎ−アシルアミノ酸エステルを製造
した後、常法によりハロゲン化水素酸で脱保護基化する
ことによって、ハロゲン化水素酸塩を製造することがで
きる。なお、本発明にかかる６−クロマノールカルボン
酸エステル誘導体は、胆汁酸塩とすることも可能であ
る。

【００２４】ここで、胆汁酸塩とは、具体的には、タウ
ロコール酸、グリココール酸、コール酸、タウロデオキ
シコール酸、デオキシコール酸、タウロケノデオキシコ
ール酸、グリコケノデオキシコール酸、ウルソデオキシ
コール酸の塩等をいう。そして、前記トコトリエノール
カルボン酸エステルとこれらの胆汁酸を反応させて胆汁
酸塩を得ることができる。例えばメタノール、エタノー
ル、プロパノールなどの低級アルコール系の溶媒を用
い、反応終了後、溶媒を減圧下で留去することにより６
−クロマノールカルボン酸エステル胆汁酸塩を得ること
ができる。

【００２５】本発明で得られる目的物質（Ｉ）は、生体
内に広範囲に存在する加水分解酵素で容易に加水分解さ
れてトコトリエノールないしトコフェロールを経てγ−
ＣＥＨＣを生成する。また、ハロゲン化水素酸塩及びア
ルキルスルホン酸塩は結晶性の粉末であり、製剤技術
上、取り扱いが容易且つ簡便であり、比較的高い水溶性
を有する。従って、静脈内投与可能な製剤、点眼剤、経
口投与剤、水性塗布剤として有用である。

【００２６】

【実施例】以下、本発明の好適な実施例について説明す
る。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。

【００２７】まず、水溶性クロマノールカルボン酸エス
テル誘導体として特に好適なトコトリエノールカルボン
酸エステル誘導体の調製例を示す。実施例１〜１８下記製造方法Ａ〜Ｄに示す方法により表１、表３に示す
トコトリエノール誘導体を製造した。また、表１に示す
化合物の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表２に示す。

【００２８】［製造方法Ａ］アミノ酸０．１molを蒸留
水−ジオキサン（１：１，v／v）１００mlに溶解し、ト
リエチルアミン３０mlを加え、さらにジ−tert−ブチル
ジカルボネートを徐々に加え、３０分間室温で攪拌す
る。減圧下ジオキサンを留去し、炭酸水素ナトリウム水
溶液（０．５Ｍ）５０mlを加え、酢酸エチル１００mlで
洗う。酢酸エチル層を５０mlの炭酸水素ナトリウム液で
洗い、水層を合わせて氷冷下でクエン酸水溶液（０．５
Ｍ）を加えて酸性（ｐＨ３）とし、塩化ナトリウムを飽
和させた後、酢酸エチルで抽出する（１００ml×３
回）。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧下に
溶媒を留去し、油状残渣をイソプロピルエーテルを加え
るか、または冷却にて結晶化させてＮ−ｔ−ＢＯＣアミ
ノ酸を得る。

【００２９】アルゴンガス雰囲気下で、トコトリエノー
ル５mmol，Ｎ−ｔ−ＢＯＣアミノ酸５mmol、ＤＣＣ５mm
olを無水ピリジン３０mlに加え室温で２０時間攪拌す
る。溶媒を減圧下留去し、残渣に酢酸エチルを加えて可
溶性画分を抽出する（１００ml×２回）。抽出液を減圧
下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（溶離溶媒；n−ヘキサン−酢酸エチル＝９：１）で分
離精製し、トコトリエノールＮ−ｔ−ＢＯＣ−アミノ酸
エステルを得る。

【００３０】トコトリエノールＮ−ｔ−ＢＯＣ−アミノ
酸エステルを少量のアセトンに溶解し、塩酸−ジオキサ
ン（２．５〜４．０Ｎ）を塩酸量がエステルの２０倍モ
ル量に相当する量加え、１時間攪拌後、減圧下溶媒を留
去する。残渣をアセトン−メタノール系または酢酸エチ
ル−メタノール系で再結晶して、トコトリエノールアミ
ノ酸の塩酸塩を得る。

【００３１】［製造方法Ｂ］トコトリエノールアミノ酸
の塩酸塩３mmolを水１５０mlに加え、炭酸水素ナトリウ
ムを加えて溶液のｐＨを７〜８にした後に、酢酸エチル
で抽出する（１００ml×３回）。抽出液を無水硫酸ナト
リウムで脱水後減圧下溶媒を留去し、油状のトコトリエ
ノールアミノ酸を得る。

【００３２】［製造方法Ｃ］アルゴンガス雰囲気下で、
トコトリエノール５mmol、塩酸Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミ
ノ酸５mmol、ＤＣＣ５mmolを無水ピリジン３０mlに加
え、室温で２０時間攪拌する。溶媒を減圧下留去し、残
渣を蒸留水に懸濁させ炭酸水素ナトリウムを加えて溶液
のｐＨを７〜８にした後、酢酸エチルで抽出する（１０
０ml×３回）。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後減
圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（溶離溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝８：
２）で分離精製し、トコトリエノールＮ，Ｎ−ジアルキ
ルアミノ酸を得る。

【００３３】［製造方法Ｄ］トコトリエノールアミノ酸
またはトコトリエノールＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸２
mmolをアセトン２０mlに溶解し、塩酸−ジオキサン
（２．５〜４．０Ｎ）を塩酸量がエステルの１０倍モル
量に相当する量、またはアルキルスルホン酸２mmolを加
え、減圧下溶媒を留去する。残渣をアセトン−メタノー
ル系または酢酸エチル−メタノール系で再結晶して、ト
コトリエノールアミノ酸またはトコトリエノールＮ，Ｎ
−ジアルキルアミノ酸の塩酸塩を得る。

【００３４】以下、本発明にかかる化合物の具体的化学
式及びその物性、製造方法について、表１，３に示す。
なお、実施例１〜３については、質量分析（ｍ／ｚ，Ｆ
ＡＢ−ＭＳ）及び核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭ
Ｒ，δｐｐｍ，内部標準ＴＭＳ）を表２に示す。

【００３５】

【表１】実施例化合物名Ｒ_１Ｒ_２Ｒ_３塩形状融点製造法１ d-γ-トコトリエニル H NH₂CH₂CO- CH₃ HCl 白色結晶 195-198 A,D アミノアセテート塩酸塩２ d-γ-トコトリエニル H CH₃NHCH₂CO- CH₃ HCl 白色結晶 130-132 A,D N-メチルアミノアセテート塩酸塩３ d-γ-トコトリエニル H (CH₃)₂NCH₂CO- CH₃ HCl 白色結晶 160-161 B,D N,N-シ゛メチルアミノアセテート塩酸塩

【００３６】

【表２】実施例質量分析 ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル１ 468(M-HCl+H⁺) (in CDCl₃) 8.67(2H,s),6.61(1H,s),5.10(3H,m),4.04(2H,s), 2.60(2H,m),2.16-1.92(16H,m,including 2.02(3H,s), 1.92(3H,s)),1.69-1.49(16H,m,including 1.67(3H,s),1.58(6H,s),1.55(3H,s)),1.24(3H,s) ２ 482(M-HCl+H⁺) (in CDCl₃) 10.01(1H,s),6.66(1H,s),5.11(3H,m),4.04(2H,s), 2.81(3H,s),2.66(2H,m),2.10-1.95(16H,m,including 2.08(3H,s),2.01(3H,s)),1.69-1.49(16H,m,including 1.67(3H,s),1.59(6H,s),1.56(3H,s)),1.24(3H,s) ３ 496(M-HCl+H⁺) (in CDCl₃) 6.63(1H,s),5.10(3H,m),4.21(2H,s),3.09(6H,s), 2.72(2H,m),2.13-1.95(16H,m,including 2.12(3H,s), 2.02(3H,s)),1.81-1.59(16H,m,including 1.68(3H,s),1.60(6H,s),1.59(3H,s)),1.28(3H,s)

【００３７】一般にトコトリエノール類は、非常に粘性
の高い油状物質であり、正確な秤量を含め、取り扱いが
困難である。これに対し、本発明のトコトリエノールカ
ルボン酸エステル誘導体のハロゲン化水素塩は、前記実
施例１〜３のように結晶ないし固形となり、取り扱いが
極めて簡便となる利点を有する。この点、前記従来のト
コトリエノールコハク酸エステルなどは、油状ないしワ
ックス状であり、取り扱いは一般のトコトリエノール類
と同様困難であり、ハロゲン化水素塩は本発明の特に好
ましい形態として特筆される。

【００３８】

【表３】実施例化合物名Ｒ_１Ｒ_２Ｒ_３性状質量分析製造法４ d-γ-トコトリエニル H N-t-BOC-NHCH₂CO- CH₃ 油状 568 Ａ N-t-BOC-アミノアセテート５ d-γ-トコトリエニル H N-t-BOC-N(CH₃)CH₂CO- CH₃ 油状 582 Ａ N-t-BOC-N-メチルアミノアセテート６ d-γ-トコトリエニル H NH₂CH₂CO- CH₃ 油状 468 Ｃアミノアセテート７ d-γ-トコトリエニル H CH₃NHCH₂CO- CH₃ 油状 482 Ｃ N-メチルアミノアセテート８ d-γ-トコトリエニル H (CH₃)₂NCH₂CO- CH₃ 油状 496 Ｃ N,N-シ゛メチルアミノアセテート

【００３９】水溶性試験１）実験方法ｄ−γ−トコトリエノール、ｄ−γ−トコトリエノール
アミノアセテート塩酸塩（実施例１：以下、ｄ−γ−
Ｔ３ＡＡ）、ｄ−γ−トコトリエノールＮ−メチルア
ミノアセテート塩酸塩（実施例２：以下、ｄ−γ−Ｔ３
ＭＡ）、ｄ−γ−トコトリエノールＮ，Ｎ−ジメチル
アミノアセテート塩酸塩（実施例３：以下、ｄ−γ−Ｔ
３ＤＭＡ）のそれぞれ０．２５０mmolをメスフラスコに
とり、蒸留水を加えて５mlとし、２０℃、２４時間攪拌
後、溶液中の各添加化合物濃度を高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）で測定した。

【００４０】２）結果 d−γ−トコトリエノールはＨＰＬＣの検出限界以下
で、溶解度は測定できなかった。ｄ−γ−Ｔ３ＡＡ，ｄ
−γ−Ｔ３ＭＡ，ｄ−γ−Ｔ３ＤＭＡはいずれも溶液と
なり、溶解度は５０ｍＭ以上であった。

【００４１】加水分解性実験１）方法ＳＤ系ラット肝臓ミクロソーム及びラット血漿の等張リ
ン酸緩衝液に、ｄ−γ−トコトリエノールＮ，Ｎ−ジ
メチルアミノアセテート塩酸塩（実施例３：以下、ｄ−
γ−Ｔ３ＤＭＡ）、ｄ−γ−トコトリエノールＮ−メ
チルアミノアセテート塩酸塩（実施例２：以下、ｄ−γ
−Ｔ３ＭＡ）、ｄ−γ−トコトリエノールアミノアセテ
ート塩酸塩（実施例１：以下、ｄ−γ−Ｔ３ＡＡ）を添
加し、３７℃で経時的に反応溶液中に生成するｄ−γ−
トコトリエノールを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）で測定した。

【００４２】比較例として、同様にｄ−γ−トコトリエ
ノールコハク酸エステル（以下、ｄ−γ−Ｔ３Ｓ）につ
いて加水分解実験を行った。ＨＰＬＣ条件：カラムはＣ
ＡＰＣＥＬＬＰＡＫＵＧ１２０、移動相はメタノー
ル−アセトニトリル（５：５ｖ／ｖ）、流速０．７ml/m
in、検出は２８３nmの吸光度と蛍光光度（励起２９８n
m、蛍光３２５nm）で行った。

【００４３】２）結果ラット肝ミクロソーム及びラット血漿溶液におけるｄ−
γ−トコトリエノールの生成のMichaelis-Mentenモデル
に従った速度論パラメータを表４及び表５に示した。

【００４４】

【表４】肝臓ミクロソーム Km(×10^-3M) Vmax(×10^-6M/min) Vmax/Km(×10^-3min^-1) d-γ-T3DMA 5.575 323.0 56.10 d-γ-T3MA 2.097 120.4 57.42 d-γ-T3AA 1.563 77.16 49.38d-γ-T3S 0.02207 0.7161 32.44

【００４５】

【表５】血漿 Km(×10^-3M) Vmax(×10^-6M/min) Vmax/Km(×10^-3min^-1) d-γ-T3DMA 0.7860 7.592 9.659 d-γ-T3MA 12.71 51.78 4.074 d-γ-T3AA 5.507 35.94 6.527d-γ-T3S 1.052 1.945 1.849

【００４６】トコトリエノールの窒素置換基を有するカ
ルボン酸エステルはトコトリエノールコハク酸エステル
に比較して速やかにトコトリエノールを生成した。この
加水分解反応はエステラーゼ阻害剤で強く阻害される
（図１参照）ことから、エステラーゼで触媒されること
が明らかになった。本発明化合物は、従来のコハク酸エ
ステルに比較してトコトリエノールの優れた誘導体であ
ることが理解される。

【００４７】［動物実験］実験例１ｄ−γ−tocotrienyl N,N-dimethylaminoacetare hydro
chloride（γ−Ｔ３ＤＭＡ）のラット静脈内投与による
γ−ＣＥＨＣのバイオアベイラビリティの確保ＳＤ系雄
性ラット７週令を用いた。γ−Ｔ３ＤＭＡ投与液はｄ−
γ−トコトリエノール当量２５mg/ml水溶液とした。軽
度エーテル麻酔下左大腿静脈から静脈内投与し、ヘパリ
ン処理したツベルクリン用注射器で経時的に外頚静脈か
ら採血し、遠心後血漿を採取した。血漿はＨＰＬＣ測定
まで−８０℃で保存した。血漿中のγ−ＣＥＨＣレベル
は光学異性体Ｓ−γ−ＣＥＨＣとＲ−γ−ＣＥＨＣの分
別定量が可能なＨＰＬＣ法(Hattori A., Fukushima T.,
Imai K., Anal.Biochem.,281,209-215(2000))で行っ
た。図２にγ−Ｔ３ＤＭＡ静脈内投与後の血漿中Ｓ−γ
−ＣＥＨＣ動態を示した。投与後の血漿中にはＲ−γ−
ＣＥＨＣは検出されず、Ｓ−γ−ＣＥＨＣのみが検出さ
れ、γ−Ｔ３ＤＭＡはＳ−γ−ＣＥＨＣに代謝されるこ
とが明らかになった。ここで、ラセミγ−ＣＥＨＣ投与
後のＳ−γ−ＣＥＨＣレベルはラセミγ−ＣＥＨＣ１
ｍｇ／ｋｇ時の値である。表６にγ−Ｔ３ＤＭＡ投与群
のＳ−γ−ＣＥＨＣのファルマコキネティクパラメータ
をラセミγ−ＣＥＨＣ投与後のＳ−γ−ＣＥＨＣのデー
タとともに示した。γ−Ｔ３ＤＭＡ投与後血漿中Ｓ−γ
−ＣＥＨＣは急速に高くなり、投与１時間でＣｍａｘと
なった。ラセミγ−ＣＥＨＣ投与時のＳ−γ−ＣＥＨＣ
を基準とするγ−Ｔ３ＤＭＡ投与群の量的バイオアベイ
ラビリティ（Ｆ）は、７８．６％であり、効率よくＳ−
γ−ＣＥＨＣの体内レベルを高めることが示された。γ
−Ｔ３ＤＭＡ投与群の平均滞留時間（ＭＲＴ）は６．６
４ｈｒであり、ラセミγ−ＣＥＨＣ投与群のＭＲＴ１．
００ｈｒに比較して約７倍の値となった。以上のことか
ら、γ−Ｔ３ＤＭＡは体内のＳ−γ−ＣＥＨＣレベルを
高めることができ、更に長時間継続してＳ−γ−ＣＥＨ
Ｃレベルを維持できることが理解される。

【００４８】

【表６】投与薬物化合物 γ−Ｔ３ＤＭＡ γ−ＴＤＭＡラセミγ−ＣＥＨＣＤｏｓｅ 61 60 3.8 (μmol/kg) Ｃ_ｍａｘ 19.2±2.98 11.5±4.97 12.1±1.42 (μmol・ml^-1) Ｔ_ｍａｘ（ｈ）１１ 0.003 ＡＵＣ 100±14.7 128±36.9 7.93±4.34 (μmol・h・ml^-1) ＭＲＴ（ｈ） 6.64±0.50 8.32±0.99 1.00±0.25Ｆ（％） 78.6^a) 102^b) 100

【００４９】なお、ファルマコキネティクパラメータは
４匹の平均値と標準偏差を表す。投与量はγ−Ｔ３当量
２５mg/kgである。また、Ｆ（％）は下記式１で求め
た。

【００５０】

【数１】

【００５１】実験例２ｄ−γ−tocopheryl N,N-dimethylaminoacetate hydroc
hloride （γ−ＴＤＭＡ）のラット静脈内投与によるγ
−ＣＥＨＣのバイオアベイラビリティの確保実験例１と
同様の実験方法で、γ−ＴＤＭＡ水溶液をラットに静脈
内投与し、血漿中γ−ＣＥＨＣ動態を検討した。血漿中
のγ−ＣＥＨＣはすべてＳ−γ−ＣＥＨＣであり、Ｒ−
γ−ＣＥＨＣは検出されなかった。図３に投与後のＳ−
γ−ＣＥＨＣの血漿中動態を、前記表６にファルマコキ
ネティクパラメータを示した。血漿中レベルは投与後急
速に高くなり、１ｈｒでＣｍａｘとなり、明らかにＳ−
γ−ＣＥＨＣレベルを高くした。ラセミγ−ＣＥＨＣ投
与時のＳ−γ−ＣＥＨＣを基準とするγ−ＴＤＭＡ投与
群の量的バイオアベイラビリティ（Ｆ）は１０２％であ
り、ラセミγ−ＣＥＨＣ投与群と同程度であり、効率よ
くＳ−γ−ＣＥＨＣの体内レベルを高めることが示され
た。γ−ＴＤＭＡ投与群の平均滞留時間（ＭＲＴ）は
８．１９ｈｒであり、ラセミγ−ＣＥＨＣ投与群のＭＲ
Ｔ１．００ｈｒに比して約８倍の値となった。この結果
から、γ−ＴＤＭＡは体内のＳ−γ−ＣＥＨＣレベルを
高めることができ、長時間継続してＳ−γ−ＣＥＨＣレ
ベルを維持できることが理解される。

【００５２】

【発明の効果】以上説明したように本発明にかかる送達
剤によれば、窒素置換基を有する６−クロマノールカル
ボン酸エステルとすることにより、水溶性が向上し、し
かも生体内で高いバイオアベイラビリティーでγ−ＣＥ
ＨＣの放出がなされる。

【図面の簡単な説明】

【図１】トコトリエノールカルボン酸エステル誘導体の
加水分解反応に対するエステラーゼ阻害剤の影響の説明
図である。

【図２】ｄ−γ−Ｔ３ＤＭＡとラセミγ−ＣＥＨＣを投
与した場合のラット体内動態を検討した結果の説明図で
ある。

【図３】ｄ−γ−ＴＤＭＡとラセミγ−ＣＥＨＣを投与
した場合のラット体内動態を検討した結果の説明図であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 43/00 １１１Ａ６１Ｐ 43/00 １１１Ｃ０７Ｄ 405/12 Ｃ０７Ｄ 405/12 // Ｃ０７Ｄ 311/72 １０２ 311/72 １０２ (72)発明者高田二郎福岡県福岡市西区生松台１丁目19番14号 (72)発明者福島健東京都文京区千石２丁目27番６号 (72)発明者今井一洋東京都世田谷区代田６丁目15番18号 (72)発明者加留部善晴福岡県福岡市城南区梅林１丁目６番20号 (72)発明者松永和久福岡県福岡市東区馬出２丁目19番５−303 号 (72)発明者藤原道弘福岡県福岡市中央区梅光園２丁目17番14号 (72)発明者服部晃広東京都豊島区南大塚３丁目37番５−1401号 (72)発明者日高亮司福岡県福岡市城南区七隈７丁目１番16− 201号Ｆターム(参考） 4C062 FF21 4C063 AA01 BB08 CC79 DD12 EE01 4C086 AA01 AA02 BA08 BC17 GA02 GA08 MA01 MA04 NA14 NA15 ZA81 ZB11 ZB26 ZC02 ZC41

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式（Ｉ）で表される水溶性６−クロ
マノール誘導体を含み、体内で2,7,8-trimethyl-(β-ca
rboxyethyl)-6-hydroxychromane （γ−ＣＥＨＣ）を放
出するγ−ＣＥＨＣ送達剤。【化１】（式中Ｒ_１は窒素置換基を有するカルボン酸残基を意味
する。Ｒ_２は化２で示される残基である。）【化２】
【請求項２】請求項１記載の送達剤において、窒素置
換基を有するカルボン酸残基が、アミノ酸、Ｎ−アシル
アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジアルキル
アミノ酸、ピリジンカルボン酸及びそれらのハロゲン化
水素酸塩またはアルキルスルホン酸塩の残基からなる群
より選択される少なくとも一種であることを特徴とする
γ−ＣＥＨＣ送達剤。