JP2002209600A - 胃ガンを診断および処置する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 胃ガンを有効かつ簡便に診断および／または
処置する方法を提供すること。 【解決手段】 被験体が、胃ガンの危険性にあるか否か
を決定する方法であって、該方法は以下の工程：被験体
からの生物学的サンプルにおけるＧＩＳＰのレベルを決
定する工程；および該測定されたレベルと、ＧＩＳＰ発
現の閾値レベルとを比較する工程を包含し、ここで、該
閾値レベルよりも上の、該生物学的サンプルにおけるＧ
ＩＳＰ発現のレベルが、該被験体が胃ガンの危険性にあ
ることを示す、方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、胃ガンの診断およ
び処置のための方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】胃ガンは、世界において二番目に最も一
般的なガンであり、そして日本、韓国朝鮮のような極東
諸国およびインドにおいて非常に蔓延している。胃ガン
はまた、台湾において第四位のガン関連の死因である。
およそ４０％の患者のみが、胃ガンのための治癒的であ
る可能性のある手術を受け入れ、そして胃ガン患者の５
年生存率は貧弱である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、胃ガンの診
断および処置のための方法を提供することを目的とす
る。

【０００４】

【発明を解決するための手段】（発明の要旨）本発明
は、被験体における胃腸分泌タンパク質（ＧＩＳＰ）発
現のレベルが胃ガンの危険性と相関するという発見に基
づく。従って、ＧＩＳＰ発現を使用して、被験体に胃ガ
ンの危険性があるか、またはその被験体が胃ガンである
か否かを推測し得る。

【０００５】従って、本発明は、被験体に胃ガンの危険
性があるか否かを決定する方法を特徴とする。この方法
は、被験体からの生物学的サンプルにおけるＧＩＳＰ発
現のレベルを決定する工程；およびこの決定されたレベ
ルと、ＧＩＳＰ発現の閾値レベルとを比較する工程を包
含する。この閾値レベルよりも上の、この被験体におけ
るＧＩＳＰ発現のレベルは、胃ガンの危険性を示す。

【０００６】本発明の方法を実施する場合、ＧＩＳＰ発
現のレベルは、その生物学的サンプルにおけるＧＩＳＰ
タンパク質の量によって決定され得る。そして、閾値レ
ベルは、罹患していない被験体（すなわち、健常な被験
体）において決定されたＧＩＳＰタンパク質の量であり
得る。罹患していない被験体は、充分な期間の間（例え
ば、少なくとも６ヵ月、９ヶ月、１２ヵ月、１８ヶ月、
２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月またはそれより多い月
数）胃ガンを有しておらず、かつ、胃ガンを発生してい
ない被験体である。ＧＩＳＰタンパク質の量は、任意の
適切なアッセイ（例えば、抗ＧＩＳＰ抗体を用いること
によって、例えば、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩ
ＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、ウェスタンブロ
ットまたは免疫組織化学方法において）を用いることに
よって決定され得る。あるいは、ＧＩＳＰ発現のレベル
は、生物学的サンプル中のＧＩＳＰ ｍＲＮＡの量によ
って決定され得る。そして、閾値レベルは、罹患してい
ない被験体（例えば、充分な期間の間（例えば、少なく
とも６ヵ月、９ヶ月、１２ヵ月、１８ヶ月、２４ヶ月、
３０ヶ月、３６ヶ月またはそれより多い月数）胃ガンを
有しておらず、かつ、胃ガンを発生していない被験体）
において決定された、ＧＩＳＰ ｍＲＮＡの量であり得
る。ＧＩＳＰ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列が公知であ
る（例えば、米国特許第５，８３７，８４１号を参照の
こと）ことから、ＧＩＳＰ ｍＲＮＡの量は、任意の適
切なアッセイ（例えば、ノーザンブロッティング、ＲＴ
−ＰＣＲ、またはバイオチップ）を用いて容易に決定さ
れ得る。本発明の方法における使用のために適切な生物
学的サンプルとしては、胃の腫瘍由来の固形組織サンプ
ル、排泄物、ならびに消化液および血液のような流体が
挙げられる。

【０００７】ＧＩＳＰ発現の閾値レベルは、例えば、胃
ガンを有する被験体におけるＧＩＳＰ発現を、被験体の
６０％以上（例えば、少なくとも約６０％、７０％、７
５％、８０％、８５％、９０％または９５％）が充分な
期間の間（例えば、少なくとも６ヵ月、９ヶ月、１２ヵ
月、１８ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月またはそ
れより多い月数）、胃ガンを発生していない被験体に対
して比較することによって決定され得る。危険性のある
群に入らないかまたは内包されるかについての発現の閾
値レベルは、胃ガンを発生していない被験体の所定のレ
ベルを達成するように設定され得る。好ましくは、胃ガ
ンの危険性にある被験体は、閾値レベルよりも少なくと
も約１０％、２０％、または４０％大きいＧＩＳＰ発現
レベルを有する。

【０００８】本発明の方法は、被験体が胃ガンを発生す
る危険性を予測する手段および胃ガンを有する被験体を
同定する手段を提供する。従って、本発明は、その被験
体およびその被験体の健康管理の提供者に予後的情報を
提供して、より充分な情報に基づく医療上の決定が行わ
れることを確実にする。

【０００９】別の局面において、本発明は、胃ガンを処
置するための化合物の有効性を決定する方法を特徴とす
る。この方法は、胃ガン細胞と、化合物とを接触させる
工程、およびその化合物との接触の前と後とで、その胃
ガン細胞によるＧＩＳＰ発現のレベルを比較する工程を
包含する。その化合物と接触させた後のＧＩＳＰ発現の
レベルの減少は、この化合物が胃ガンを処置するに有効
であることを示す。胃ガンを処置する化合物の有効性
は、インビトロまたはインビボで評価され得る。

【００１０】本発明の方法がインビトロで実施される場
合、胃ガン細胞は、胃ガン細胞株に由来し得る。適切な
胃ガン細胞株の例としては、ＡＧＳ細胞株、ＫＡＴＯ
ＩＩＩ細胞株、ＳＮＵ−１６細胞株、ＲＦ−４８細胞
株、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞株、ＮＵＧＣ細胞株、およびＡ
Ｚ−５２１細胞株が挙げられる。あるいは、この胃ガン
細胞は、胃ガンを有する動物において存在し得る。例え
ば、この化合物は、胃ガンを有する動物に投与され得、
そして投与後のＧＩＳＰ発現のレベルを、投与前の動物
におけるＧＩＳＰ発現レベルと比較し得る。この動物に
おけるＧＩＳＰ発現レベルは、インビボまたはインビト
ロで決定され得る。例えば、ＧＩＳＰレベルは、インビ
トロで、その動物からの生物学的サンプル（例えば、腫
瘍からの固形組織サンプル、排泄物、血液または消化
液）を、その化合物の投与前および投与後の両方で入手
することによって、検出され得る。動物におけるＧＩＳ
Ｐ発現レベルを決定する他の方法が本明細書において記
載される。ヒトの胃ガン腫組織を正常位に移植した胃ガ
ンの種々の動物モデル（例えば、ＳＣＩＤマウス）が使
用され得る。

【００１１】その化合物が、胃ガンを処置する能力は、
胃ガンを有する動物にその化合物を投与する工程、およ
び腫瘍の大きさ、成長または転移の可能性に対するその
化合物の効果を決定する工程によって、インビボで確認
され得る。

【００１２】詳細には、本発明は以下を提供する。

【００１３】一つの局面において、本発明は被験体に胃
ガンの危険性があるか否かを決定する方法を提供する。
この方法は以下の工程：被験体からの生物学的サンプル
におけるＧＩＳＰ発現のレベルを決定する工程；および
該レベルと、ＧＩＳＰ発現の閾値レベルとを比較する工
程であって、該閾値レベルよりも上の、該生物学的サン
プルにおけるＧＩＳＰ発現のレベルが、該被験体に胃ガ
ンの危険性があることを示す、工程を包含する。

【００１４】一つの実施態様において、ＧＩＳＰの発現
はＧＩＳＰ ｍＲＮＡのレベルを決定することによって
評価され得る。

【００１５】別の実施態様において、上記ＧＩＳＰ ｍ
ＲＮＡのレベルは、上記ｍＲＮＡにハイブリダイズする
核酸プローブを用いて決定され得る。

【００１６】別の実施態様において、上記ＧＩＳＰ ｍ
ＲＮＡのレベルが、ＰＣＲを用いて決定される。

【００１７】他の実施態様において、上記ＧＩＳＰ発現
のレベルは、ＧＩＳＰタンパク質のレベルを決定するこ
とによって評価され得る。

【００１８】他の実施態様において、上記ＧＩＳＰタン
パク質発現のレベルは、上記タンパク質に結合する抗体
を用いて決定され得る。

【００１９】別の局面において、本発明は、胃ガンを処
置するための化合物の有効性を決定する方法を提供す
る。この方法は、以下の工程：胃細胞と化合物とを接触
させる工程；および上記接触させる工程の前と後とで、
上記胃ガン細胞により発現されるＧＩＳＰのレベルを比
較する工程であって、ここで、ＧＩＳＰ発現のレベルの
減少は、上記化合物が胃ガンを処置するに有効であるこ
とを示す、工程を包含する。

【００２０】一つの実施態様において、上記胃細胞は、
胃ガン細胞株に由来し得る別の実施態様において、上記
胃細胞は、胃腫瘍を有する動物内に存在し得る。

【００２１】別の実施態様において、本発明の方法は、
さらに、投与の後の上記動物における上記胃腫瘍の大き
さと、上記投与前の上記胃腫瘍大きさとを比較する工程
を包含し得る。

【００２２】別の実施態様において、上記ＧＩＳＰ発現
のレベルは、ＧＩＳＰ ｍＲＮＡのレベルを決定するこ
とによって評価され得る。

【００２３】別の実施態様において、上記ＧＩＳＰ ｍ
ＲＮＡのレベルは、上記ｍＲＮＡにハイブリダイズする
核酸プローブを用いて決定され得る。

【００２４】別の実施態様において、上記ＧＩＳＰ ｍ
ＲＮＡのレベルは、ＰＣＲを用いて決定され得る。

【００２５】他の実施態様において、上記ＧＩＳＰ発現
のレベルは、ＧＩＳＰタンパク質のレベルを決定するこ
とによって評価され得る。

【００２６】他の実施態様において、上記ＧＩＳＰタン
パク質のレベルは、上記タンパク質に結合する抗体を用
いて決定され得る。

【００２７】他の局面において、本発明は、胃ガンを有
する被験体を処置する方法を提供する。この方法は以下
の工程：ＧＩＳＰインヒビターを、胃ガンを処置するに
充分な量で、上記被験体に投与する工程、を包含する。

【００２８】本発明の他の特徴または利点は、以下の詳
細な説明から、および上記特許請求の範囲からもまた明
白である。

【００２９】

【発明の実施の形態】（発明の詳細な説明）本発明は、
胃ガンを発症する危険性の決定因子としてＧＩＳＰ発現
を用いた予知医療および胃ガンの決定因子としてＧＩＳ
Ｐを使用する診断医療に関する。本発明の範囲内にある
と意図されるのは、患者の状態および予後を評価するた
めに、薬理遺伝学プロトコル（例えば、バイオチップを
用いる）の一部として、ＧＩＳＰ発現分析を実行するこ
とである。

【００３０】細胞におけるＧＩＳＰ遺伝子に対応するｍ
ＲＮＡのレベルは、インサイチュまたはインビトロの形
式で決定され得る。

【００３１】ＧＩＳＰ ｍＲＮＡのプローブは、ハイブ
リダイゼーションアッセイまたは増幅アッセイにおいて
使用され得る。これらのアッセイとしては、以下が挙げ
られるがそれらに限定されない：サザン分析、ノーザン
分析、ポリメラーゼ連鎖反応分析、およびプローブアレ
イ。ｍＲＮＡレベルの検出のための１つの診断方法は、
そのｍＲＮＡを、検出される遺伝子によってコードされ
るｍＲＮＡにハイブリダイズし得る核酸分子（プロー
ブ）と接触させる工程を包含する。この核酸プローブ
は、例えば、全長ＧＩＳＰ核酸またはその一部（例え
ば、少なくとも７、１０、１５、３０、５０、１００、
２５０または５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチ
ド）であり得、そしてＧＩＳＰ ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡま
たはその一部に対して、ストリンジェントな条件下で特
異的にハイブリダイズするに充分であり得る。本明細書
において使用される用語「ストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする」とは、ハイブリダイゼーションお
よび洗浄についての条件を記載する。ストリンジェント
な条件は、当業者に公知であり、そしてＣｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．
Ｙ．（１９８９）、６．３．１．−６．３．６．に見出
され得る。このプローブは、検出可能な試薬で標識され
て、そのプローブの同定を容易にし得る。有用な試薬と
しては以下が挙げられるがそれらに限定されない：放射
能、蛍光色素または検出可能な産物を触媒し得る酵素。

【００３２】１つの形式において、例えば、単離された
ｍＲＮＡをアガロースゲルに泳動し、そしてそのｍＲＮ
Ａを、そのゲルからメンブレン（例えば、ニトロセルロ
ース）に転写することによって、ｍＲＮＡ（またはｃＤ
ＮＡ）は、表面に固定され、そしてプローブと接触され
る。別の形式において、そのプローブは、例えば、二次
元遺伝子チップアレイにおいて、表面に固定され、そし
てそのｍＲＮＡ（またはｃＤＮＡ）は、そのプローブに
接触される。当業者は、公知のｍＲＮＡ検出方法を、Ｇ
ＩＳＰ遺伝子によってコードされるｍＲＮＡのレベルを
検出するにおける使用について適応させ得る。

【００３３】ＧＩＳＰ核酸によってコードされるサンプ
ルにおけるｍＲＮＡのレベルは、核酸増幅（例えば、Ｒ
Ｔ−ＰＣＲ（米国特許第４，６８３，２０２号）、リガ
ーゼ連鎖反応（Ｂａｒａｎｙ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８９−１９３、１９
９１）、自己維持型（ｓｅｌｆ−ｓｕｓｔａｉｎｅｄ）
配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４−１８７
８，１９９０）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３
−１１７７、１９８９）、Ｑβレプリカーゼ（Ｌｉｚａ
ｒｄｉら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６：１１９
７，１９８８）、ローリングサークル複製（米国特許第
５，８５４，０３３号）、または他の任意の核酸増幅方
法）に続いて、増幅された分子の検出を当該分野で公知
の技術を用いて行うことによって評価され得る。本明細
書において使用される「増幅プライマー」とは、遺伝子
の５’側領域または３’側領域（それぞれ、プラス鎖お
よびマイナス鎖またはその逆）にアニールし得、そして
その間に短い領域を含み得る核酸分子の対であると定義
される。一般に、増幅プライマーは、約１０〜約３０ヌ
クレオチド長であり、そして約５０〜約２００ヌクレオ
チド長の領域に隣接する。適切な条件下および適切な試
薬を用いて、そのようなプライマーは、そのプライマー
に隣接するヌクレオチド配列を含む核酸分子の増幅を可
能にする。

【００３４】インサイチュ方法について、細胞または組
織のサンプルを調製／処理し得、そして支持体（代表的
には、ガラススライド）に固定し得、次いで、分析され
るＧＩＳＰ遺伝子をコードするｍＲＮＡとハイブリダイ
ズし得るプローブと接触され得る。

【００３５】別の実施態様において、この方法は、さら
に、ＧＩＳＰ ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡを検出し得る化
合物もしくは因子とコントロールサンプルとを接触させ
る工程、およびそのコントロールサンプルにおけるＧＩ
ＳＰ ｍＲＮＡもしくはｃＤＮＡの存在と、その試験サ
ンプルにおけるＧＩＳＰ ｍＲＮＡもしくはｃＤＮＡの
存在とを比較する工程を包含する。

【００３６】種々の方法を使用して、ＧＩＳＰ遺伝子に
よってコードされるタンパク質のレベルを決定し得る。
一般に、これらの方法は、そのタンパク質に選択的に結
合する因子（例えば、抗体）を、サンプルと接触させ
て、そのサンプル内のタンパク質のレベルを評価する工
程を包含する。１つの実施態様において、この抗体は検
出可能な標識を有する。抗体は、ポリクローナルまたは
モノクローナルであり得る。インタクトな抗体またはそ
のフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａ
ｂ’）₂）が使用され得る。プローブまたは抗体に関し
て、用語「標識された」とは、そのプローブまたは抗体
に対して検出可能な物質を連結（すなわち、物理的に連
結）することによってそのプローブまたは抗体を直接標
識すること、ならびに、検出可能な物質との反応性によ
って、そのプローブまたは抗体を間接的に標識すること
を包含することが意図される。

【００３７】この検出方法を使用して、インビトロおよ
びインビボで、生物学的サンプルにおけるＧＩＳＰタン
パク質を検出し得る。ＧＩＳＰタンパク質の検出のため
のインビトロ技術としては、以下が挙げられる：酵素結
合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ），免疫沈降法、免疫
蛍光法、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、放射免疫アッセ
イ（ＲＩＡ）およびウェスタンブロット分析。ＧＩＳＰ
タンパク質の検出のためのインビボ技術としては以下が
挙げられる：被験体への標識されたＧＩＳＰ抗体の導
入。例えば、この抗体は、被験体におけるその存在およ
び位置が標準的な造影技術によって検出可能である放射
性マーカーを用いて標識され得る。

【００３８】別の実施態様において、この方法は、さら
に、そのコントロールサンプルと、ＧＩＳＰタンパク質
を検出し得る化合物もしくは因子とを接触させる工程、
およびそのコントロールサンプルにおけるＧＩＳＰタン
パク質の存在と、その試験サンプルにおけるＧＩＳＰタ
ンパク質の存在とを比較する工程を包含する。

【００３９】本発明は、さらに、胃ガンを処置するため
の化合物（すなわち、候補または試験化合物）の有効性
を決定するための方法（本明細書において「スクリーニ
ングアッセイ」ともいう）を提供する。試験され得る候
補化合物の例としては、タンパク質、ペプチド、ペプチ
ド模倣物、ペプトイド、核酸、低分子または他の薬物
（これらは、ＧＩＳＰ発現に対して阻害効果を有する）
が挙げられる。

【００４０】ＧＩＳＰ発現のインヒビターは、公知の方
法により同定され得る。例えば、胃ガン細胞は、候補化
合物と接触され得、そしてＧＩＳＰのｍＲＮＡまたはタ
ンパク質の発現は、その候補化合物の非存在下で、ＧＩ
ＳＰのｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルと比較し
て評価され得る。ＧＩＳＰのｍＲＮＡまたはタンパク質
の発現が、その候補化合物の非存在下よりも、その候補
化合物の存在下で、より少ない（統計的に有意に少な
い）場合、その候補化合物は、胃ガンの処置において有
効であり得る、ＧＩＳＰのｍＲＮＡまたはタンパク質の
発現のインヒビターと同定される。ＧＩＳＰのｍＲＮＡ
またはタンパク質の発現のレベルは、ＧＩＳＰのｍＲＮ
Ａまたはタンパク質を検出するために本明細書中に記載
される方法によって決定され得る。

【００４１】ＧＩＳＰのインヒビターは、上記のアッセ
イを用いて同定され得る。そして、そのＧＩＳＰインヒ
ビターが胃ガンを処置する能力は、例えば、胃ガンにつ
いての動物モデルのような動物においてインビボで確認
され得る。例えば、胃の腫瘍の大きさ、成長および／ま
たは転移の可能性に対するその化合物の効果が評価され
得る。胃ガンについての動物モデルは、例えば、ヒトの
胃ガン腫組織を移植したＳＣＩＤマウスであり得る。

【００４２】本発明はまた、胃ガンを有する被験体を処
置する方法を特徴とする。この方法は、胃ガンを有する
被験体に胃ガンを処置するに十分な量でＧＩＳＰインヒ
ビターを投与する工程を包含する。このＧＩＳＰインヒ
ビターは、本明細書において記載されるスクリーニング
方法によって同定される任意の化合物であり得る。ＧＩ
ＳＰ発現に対する阻害効果についてスクリーニングされ
得る候補化合物の例としては、タンパク質、ペプチド、
ペプチド模倣物、ペプトイド、核酸、抗体、および低分
子が挙げられる。このような化合物は、薬学的組成物に
取り込まれ得る。そのような組成物は、代表的に、核
酸、タンパク質、抗体または低分子および薬学的に受容
可能なキャリアを含む。薬学的に受容可能なキャリアと
しては、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤、抗真
菌剤、等張剤、および吸収遅延剤など（これらは、薬学
的投与の経路に適合性である）が挙げられる。

【００４３】

【実施例】（実施例Ｉ：ＧＩＳＰ遺伝子配列の同定）Ｂ
ＬＡＳＴサーバープログラム（バージョン２０．４）
を、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）、
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａ
ｌｔｈ、ＵＳＡから入手し、そしてＳＧＩ ｏｒｉｇｉ
ｎ ２００サーバーにローカルに確立した。デフォルト
のＢＬＡＳＴパラメータを分析に用いた（ｅ＝１０、ｖ
＝５０、ｂ＝５０およびｗ＝０）。ヒトおよびマウスの
ｄｂＥＳＴデータベースを入手し、そして遺伝子同定に
使用した。ヒトのリソスタチン（ｌｉｔｈｏｓｔａｔｈ
ｉｎｅ）およびＰＡＰタンパク質の配列を、検索問合せ
として用いてヒトｄｂＥＳＴデータベースに対するｔｂ
ｌａｓｔｎ検索を行い、そして有意なＥＳＴ配列を、Ｍ
ａｃＶｅｃｔｏｒプログラムを用いてアセンブルした。
配列の整列および系統樹分析をＣＬＵＳＴＡＬ Ｘおよ
びＰＨＹＬＩＰのコンピュータプログラムを、Ｐｏｗｅ
ｒＭａｃ Ｇ３システム上で用いて行った。

【００４４】（実施例ＩＩ：ＲＴ−ＰＣＲによるヒトＧ
ＩＳＰ遺伝子の分子クローニング）データベースの調査
によるＧＩＳＰ遺伝子の同定の後、ＰＣＲプライマー対
を、アセンブルしたヌクレオチド配列から設計した。ｃ
ＤＮＡを、ヒト胃ガン細胞株から、Ｌｉｎら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．５：１０１−１１０，１９９８およ
びＬｉｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓ．５：１
７４５−１７５１，１９９９に記載されるように調製し
た。簡潔には、逆転写を、２μｇの総ｍＲＮＡ、オリゴ
（ｄＴ）₁₅およびＭＭＬＶ逆転写酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ
（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から入手した）を用いて行っ
た。ＲＴ産物の質を、アガロースゲル電気泳動およびＧ
ＡＰＤＨ特異的プライマーを用いたＰＣＲ反応により検
査した。ＰＣＲプライマーを用いて、ｇａｐ両域を増幅
した。このＰＣＲ反応を、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ
２４００ ＰＣＲサーモサイクラーおよびＴａｋａｒａ
Ｔａｑポリメラーゼ（日本、滋賀県）を用いて、９４℃
で５分間、９４℃を１５秒間、５８℃を３０秒間、およ
び７０℃を２分間を３５サイクル行い、そして最後の伸
長期を７２℃で１０分間行った。最後のＰＣＲ産物を、
１％アガロースゲル電気泳動を用いて分析した。増幅さ
れたフラグメントを、そのゲルから溶出し、そしてｐＣ
Ｒ２．１Ｔ／Ａクローニングベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）由来）中にサブクロ
ーニングした。クローニング手順の後、いくつかのクロ
ーンを、ランダムに選択し、精製し、そしてそれらの配
列を、ＡＢＩ ３７７自動配列決定機によって決定し
た。

【００４５】ヒトのＧＩＳＰ遺伝子の同定後、マウスＥ
ＳＴ配列を、その定向進化遺伝子について検索した。３
つの別個のクローンが同定された。これらのクローン
を、ＩＭＡＧＥコンソーシアムから得、そしてそれらの
配列を、ＡＢＩ ３７７自動配列決定機により決定し
た。

【００４６】（実施例ＩＩＩ：ＲＮＡ抽出）胃ガン組織
およびその正常胃粘膜組織を、胃切除を受けた患者から
得た。インフォームドコンセントを、全ての患者から得
た。検体を切除後液体窒素中で直ぐに凍結させた。総Ｒ
ＮＡを胃ガンおよび正常粘膜組織から、直接グアニジン
イソチオシアネート溶解および塩化セシウム勾配分離方
法（Ｌｉｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓ．５：
１７４５−１７５１，１９９９に記載される）によって
抽出した。ＲＴ−ＰＣＲ実験を上記のように実施した。

【００４７】（実施例ＩＶ：組織分布分析）組織発現お
よび組織分布の分析のために、複数の組織ｍＲＮＡブロ
ット（ＭＴＮ Ｉ−ＩＩＩ）およびＲＮＡヒトマスター
ブロットを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、
ＣＡ）から得た。配列を確認したＧＩＳＰクローンから
の³²Ｐ標識したフラグメントを、供給業者が推奨するハ
イブリダイゼーションプロトコルに従って、ハイブリダ
イゼーション反応について使用した。

【００４８】ＧＩＳＰは、ヒトの膵臓、小腸、胃、およ
び結腸の組織において高度に発現する。さらに、ＧＩＳ
Ｐは、ヒト胃ガン細胞株ＡＧＳにおいて過剰発現してい
た。図２を参照のこと。ＲＴ−ＰＣＲ手順によるいくつ
かのヒト胃ガン組織の実験の後、正常胃上皮におけるよ
りも高いレベルのＧＩＳＰ発現が、ヒト胃ガン組織にお
いて見出された。図３を参照のこと。

【００４９】さらなる説明がなくても、当業者は、上記
の開示および実施例に基づいて、本発明をその完全な範
囲にまで利用し得ると考えられる。上記実施例は、当業
者が本発明を実施し得る方法の単なる例示として考えら
れるべきであり、そしていかなる様式においてもその開
示の残りの部分を制限するものと考えられるべきではな
い。本開示において引用された全ての刊行物は、本明細
書において参考として援用される。

【００５０】（発明の要旨）本発明は、被験体からの生
物学的サンプルにおけるＧＩＳＰ発現のレベルを決定す
ること；およびこのレベルをＧＩＳＰ発現の閾値レベル
と比較することによって、被験体に胃ガンの危険性があ
るか否かを決定する方法を特徴とする。その生物学的サ
ンプルにおけるＧＩＳＰ発現のレベルがその閾値レベル
より上であることは、その被験体に胃ガンの危険性があ
ることを示す。本発明はまた、胃ガンを処置するための
化合物の有効性を決定する方法および胃ガンを有する被
験体を処置する方法を特徴とする。

【００５１】

【発明の効果】本発明によって、胃ガンを有効にかつ簡
便に診断および処置する方法およびそれを実現するため
の組成物、キットなどが提供され、胃ガンを従来に比し
て簡便にかつ効率よく診断および処置することが達成さ
れた。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】図１Ａ〜Ｃは、ヒトＧＩＳＰのアミノ酸配列
および核酸配列を示す。

【図１Ｂ】図１Ａ〜Ｃは、ヒトＧＩＳＰのアミノ酸配列
および核酸配列を示す。

【図１Ｃ】図１Ａ〜Ｃは、ヒトＧＩＳＰのアミノ酸配列
および核酸配列を示す。

【図２】図２は、種々の胃ガン細胞株におけるＧＩＳＰ
遺伝子発現のノーザンブロットを提供する。

【図３】図３は、５つの異なる対のヒト胃ガン組織（Ｔ
１〜Ｔ５）およびそれらに適合する隣接する正常粘膜組
織（Ｎ１〜Ｎ５）におけるヒトＧＩＳＰのＲＴ−ＰＣＲ
発現を実証する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/566 33/566 (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ //(Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (71)出願人 500586738 128， Ｓｅｃ．２， Ａｃａｄｅｍｉａ Ｒｏａｄ， Ｎａｎ−Ｋａｎｇ， Ｔａ ｉｐｅｉ， 115 Ｔａｉｗａｎ， Ｒ. Ｏ．Ｃ. (72)発明者 フアン チャン−ジェン 台湾台北 115， ナンカン， イェン− ジュ イェン ロード， セクション ２， ナンバー128 (72)発明者 ウ チュー−ウン 台湾台北， シー−パイ ロード， セク ション ２， ナンバー201 (72)発明者 チ チン−ウェン 台湾台北， シー−パイ ロード， セク ション ２， ナンバー201 (72)発明者 チェン ジュー−ユアン 台湾台北 115， ナンカン， イェン− ジュ イェン ロード， セクション ２， ナンバー128 (72)発明者 チャン リン−ヤン 台湾台北 115， ナンカン， イェン− ジュ イェン ロード， セクション ２， ナンバー128 Ｆターム(参考） 4B024 AA12 BA80 CA04 CA12 HA14 HA15 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ43 QQ53 QR08 QR33 QR36 QR42 QR56 QR77 QS25 QS34 QX02 4C084 AA14 AA17 NA14 ZA661 ZB261

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 被験体に胃ガンの危険性があるか否かを
   決定する方法であって、該方法は以下の工程：被験体か
   らの生物学的サンプルにおけるＧＩＳＰ発現のレベルを
   決定する工程；および該レベルと、ＧＩＳＰ発現の閾値
   レベルとを比較する工程であって、該閾値レベルよりも
   上の、該生物学的サンプルにおけるＧＩＳＰ発現のレベ
   ルが、該被験体に胃ガンの危険性があることを示す、工
   程を包含する、方法。
2. 【請求項２】 ＧＩＳＰの発現がＧＩＳＰ ｍＲＮＡの
   レベルを決定することによって評価される、請求項１に
   記載の方法。
3. 【請求項３】 前記ＧＩＳＰ ｍＲＮＡのレベルが、該
   ｍＲＮＡにハイブリダイズする核酸プローブを用いて決
   定される、請求項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記ＧＩＳＰ ｍＲＮＡのレベルが、Ｐ
   ＣＲを用いて決定される、請求項２に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記ＧＩＳＰ発現のレベルが、ＧＩＳＰ
   タンパク質のレベルを決定することによって評価され
   る、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記ＧＩＳＰタンパク質発現のレベル
   が、該タンパク質に結合する抗体を用いて決定される、
   請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 胃ガンを処置するための化合物の有効性
   を決定する方法であって、該方法は、以下の工程：胃細
   胞と化合物とを接触させる工程；および該接触させる工
   程の前と後とで、該胃ガン細胞により発現されるＧＩＳ
   Ｐのレベルを比較する工程であって、ここで、ＧＩＳＰ
   発現のレベルの減少は、該化合物が胃ガンを処置するに
   有効であることを示す、工程を包含する、方法。
8. 【請求項８】 前記胃細胞が、胃ガン細胞株に由来す
   る、請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記胃細胞が、胃腫瘍を有する動物内に
   存在する、請求項７に記載の方法。
10. 【請求項１０】 さらに、投与の後の前記動物における
    前記胃腫瘍の大きさと、該投与前の該胃腫瘍大きさとを
    比較する工程、を包含する、請求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記ＧＩＳＰ発現のレベルが、ＧＩＳ
    Ｐ ｍＲＮＡのレベルを決定することによって評価され
    る、請求項７に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記ＧＩＳＰ ｍＲＮＡのレベルが該
    ｍＲＮＡにハイブリダイズする核酸プローブを用いて決
    定される、請求項１１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記ＧＩＳＰ ｍＲＮＡのレベルがＰ
    ＣＲを用いて決定される、請求項１１に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記ＧＩＳＰ発現のレベルが、ＧＩＳ
    Ｐタンパク質のレベルを決定することによって評価され
    る、請求項７に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記ＧＩＳＰタンパク質のレベルが、
    該タンパク質に結合する抗体を用いて決定される、請求
    項１４に記載の方法。
16. 【請求項１６】 胃ガンを有する被験体を処置する方法
    であって、該方法は以下の工程：ＧＩＳＰインヒビター
    を、胃ガンを処置するに充分な量で、該被験体に投与す
    る工程、を包含する、方法。