JP2002142789A - 脱脂ゴマを発酵することによりｓｏｄ様活性画分および抗酸化活性画分を得る方法、並びにそれにより得られるｓｏｄ様活性画分および抗酸化活性画分 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 脱脂ゴマの有効利用法を提供すること。具体
的には、脱脂ゴマから、優れたＳＯＤ様活性画分および
抗酸化活性画分を得る方法を提供すること。 【解決方法】 脱脂ゴマを微生物により発酵することに
より、ＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活性画分
を得る方法。詳しくは、前記微生物がアスペルギルス・
ソヤまたはである方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】微生物を用いて発酵すること
により、脱脂ゴマからＳＯＤ様活性画分および抗酸化活
性画分を得る方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ゴマは、大豆等の油脂原料穀物に比べて
原料単価が高価である。それにも関わらず、搾油処理後
の脱脂ゴマは、一般的に、肥料または飼料として安価な
脱脂大豆と同等に利用されているに過ぎない。

【０００３】一方、ゴマは抗酸化性作用を有しているこ
とで知られている。しかしながら、その活性は脂溶性の
リグナン類に限られており、脱脂ゴマに含まれるその量
は極僅かであることも、また、分かっている。したがっ
て、従来の方法により、脱脂ゴマからリグナン類を抽出
回収しても、採算が合わず実用的ではなかった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、脱脂ゴマの
有効利用法を提供することを目的とする。具体的には、
脱脂ゴマから、優れたＳＯＤ様活性画分および抗酸化活
性画分を得る方法を提供することを目的とし、更に、そ
れにより得られたＳＯＤ様活性画分および抗酸化活性画
分を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】発明者らは、一般的に肥
料または飼料として処理されている脱脂ゴマを、微生物
で発酵することにより、優れたＳＯＤ様活性画分および
／または抗酸化活性画分が得られるという驚くべき発見
をした。本発明は、この発見を基に成されたものであ
る。

【０００６】従って、上記課題を解決し、目的を達成す
る手段は以下に示す通りである。即ち、 （１） 脱脂ゴマを微生物により発酵することにより、
ＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活性画分を得る
方法； （２） （１）に記載の微生物がアスペルギルス属の微
生物である方法。

【０００７】（３） （１）または２の何れか１項に記
載のＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活性画分を
得る方法であって、前記微生物を脱脂ゴマを含む培地中
で培養することと、および得られた培養物を８０％メタ
ノールで抽出することと、を具備する方法； （４） 脱脂ゴマを微生物により発酵することにより得
られるＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活性画
分；並びに （５）微生物を使用して脱脂ゴマからセサミノールを産
生する方法であって、微生物を脱脂ゴマを含む培地中で
培養することと、得られた培養物を８０％メタノールで
抽出することと、および得られた抽出液をＸＡＤ−７カ
ラムに供し、１００％酢酸エチルを用いて溶出すること
と、を具備するセサミノール産生方法；である。

【０００８】

【発明の実施の形態】［活性物質の製造方法］本発明
は、脱脂ゴマを微生物により発酵することにより、ＳＯ
Ｄ様活性画分および／または抗酸化活性画分を得る方法
である。

【０００９】この方法は、一般的に安価な肥料または飼
料として処理されている脱脂ゴマを、微生物で発酵する
ことにより、優れたＳＯＤ様活性画分および／または抗
酸化活性画分が得られるという本発明者らによる驚くべ
き発見に基づく。

【００１０】具体的には、本発明の方法は、一般的に使
用される食品微生物を脱脂ゴマを含有する培養液に添加
し、微生物により発酵させる過程を具備する。得られた
前記発酵物からは、優れたＳＯＤ様活性画分および抗酸
化活性画分が得られる。詳しくは、この発酵物を、水メ
タノール混液により振盪抽出し、更に遠心分離して、そ
の上清を得ることにより、活性画分を得ることが可能で
ある。前記上清を更に、蒸発による溶媒除去、凍結乾燥
等のそれ自身公知の方法により、乾燥物とすることも可
能である。

【００１１】この分画に好ましい溶媒は、水メタノール
混液であり、その濃度はメタノールが４０％から１００
％でよく、好ましくは約８０％メタノールである。

【００１２】また、ここで使用する「活性画分」の語
は、特に断りのない場合は、前記発酵物を水メタノール
混液で抽出した画分をいう。この活性画分は、前記水メ
タノール混液により抽出しただけの画分であってもよ
く、これを濃縮した濃縮画分であってもよく、また、濃
縮乾燥したものであってもよい。

【００１３】本発明の方法に使用可能な微生物は、種々
の微生物でよく、例えば、一般的に使用される食品微生
物等を含むである。ここで用いる「食品微生物」とは、
味噌、醤油、パン、および酒等の発酵食品を製造するた
めに使用される微生物をいう。例えば、アスペルギルス
・ソヤ(Aspergillus sojae；一般的にショウユコウジカ
ビともいう)、アスペルギルス・オリゼー(Aspergillus
oryzae；一般的にキコウジカビともいう)、アスペルギ
ルス・アワモリ(Aspergillus awamori；一般的にアワモ
リのコウジカビともいう) 等の糸状菌および酵母等であ
る。最も効率よく、且つ多量に活性物質を生成すること
から、アスペルギルス・ソヤ（Aspergillus sojae）を
用いることが好ましい。更に、アスペルギルス・ソヤ、
アスペルギルス・アワモリおよびアスペルギルス・オリ
ゼー、特に、アスペルギルス・ソヤ・ＩＡＭ２６６４
株、ＩＡＭ２６７３株、ＩＡＭ２６７４株、ＩＡＭ２６
７７株、ＩＡＭ２７０３株、ＩＡＭ１２１７６株および
ＩＡＭ１３９０２株、アスペルギルス・オリゼー・ＩＡ
Ｍ２６０９株およびＩＡＭ２６４９株、並びにアスペル
ギルス・アワモリＩＡＭ２１１２株を用いることがより
好ましい。更に、アスペルギルス・ソヤ・ＩＡＭ２６７
４株は、後述する通り、安定した本発明のＳＯＤ様活性
画分を得ることが可能であることから特に好ましい。

【００１４】本発明の方法において使用可能な発酵用培
地は、蒸留水に脱脂ゴマを添加することにで調製するこ
とが可能である。このとき、添加する脱脂ゴマの量は、
５０ｇ／ｌから５００ｇ／ｌでよく、２００ｇ／ｌから
３００ｇ／ｌが好ましい。このように調製した発酵用培
地に、使用する微生物を白金耳により接種するればよ
い。

【００１５】本発明の発酵は、用いる微生物の要求性に
応じて、好気性条件下で振盪培養を行っても、好気性条
件下で静置培養を行っても、または暗所で嫌気性条件下
で行なう。

【００１６】また、本発明における発酵は、ｐＨ６から
８で行なうことができ、より好ましくはｐＨ６．５から
７．２で行なう。ｐＨの調整は、例えば、リン酸緩衝液
を用いることにより行い得る本方法における発酵は、２
０℃から４５℃で行なうことが可能であり、３０℃から
４５℃が好ましく、３６℃がより好ましい。

【００１７】後述の実施例において詳述するが、アスペ
ルギルス・ソヤにより発酵した後に、水メタノール混液
により抽出して得た本発明のは活性画分は、未発酵脱脂
ゴマを水メタノール液で同様に抽出した画分よりも、約
２倍のＳＯＤ様活性および抗酸化活性がある。

【００１８】また、本発明の更なる側面は、セサミノー
ルの製造方法である。セサミノール画分は、アスペルギ
ルス・ソヤ等の微生物により脱脂ゴマを発酵した後、水
メタノール混液で抽出して得た活性画分を、更にＸＡＤ
７カラムに供し、１００％の酢酸エチルにより溶出する
ことで得られる。

【００１９】［活性画分］本発明の更なる側面は、脱脂
ゴマを微生物により発酵することにより得られるＳＯＤ
様活性画分である。具体的には、脱脂ゴマを微生物によ
り発酵した後に得られる水メタノール混液による抽出画
分である。本発明の画分は、優れたＳＯＤ様活性を有す
る。このようなＳＯＤ様活性画分は、前述した方法によ
り製造することが可能である。

【００２０】本発明のＳＯＤ様活性画分は、これを、更
に、ＸＡＤ７を用いたカラムクロマトグラフィに供し、
各溶出液により得られた溶出画分、即ち、１００％水溶
出画分、２０％、４０％、６０％、８０％および１００
％メタノール溶出画分、並びに１００％酢酸エチル溶出
画分の全てに分布している。また、後述するように、セ
サミノールにＳＯＤ様活性がないことは確認されている
ので、本発明の活性画分に含まれる活性成分は、セサミ
ノール以外の成分であることが示唆される。また、後述
する用途に、前記夫々の溶出画分を単独で使用してもよ
く、それらを組み合わせて使用してもよい。

【００２１】本発明のもう１つの側面は、脱脂ゴマを微
生物により発酵することにより得られる抗酸化活性画分
である。具体的には、脱脂ゴマを微生物により発酵した
後に得られる水メタノール混液抽出画分である。本発明
の活性画分は、優れた抗酸化活性を有する。このような
抗酸化活性画分は、前述した方法により製造することが
可能である。

【００２２】本発明の抗酸化活性画分は、これを、更
に、ＸＡＤ７を用いたカラムクロマトグラフィに供し、
各溶出液により得られる夫々の溶出画分、即ち、１００
％水溶出画分、２０％、４０％、６０％、８０％および
１００％メタノール溶出画分、並びに１００％酢酸エチ
ル溶出画分の全てに分布している。一方、セサミノール
画分は、１００％酢酸エチル溶出画分である。従って、
本発明の活性画分に含まれる活性成分は、セサミノール
と、それ以外の成分とからなることが示唆される。ま
た、後述する用途に、前記夫々の溶出画分を単独で使用
してもよく、それらを組み合わせて使用してもよい。

【００２３】［活性画分の利用分野］本発明のＳＯＤ様
活性画分および抗酸化活性画分、または夫々の溶出画分
を、医薬品、化粧品、医薬部外品および飲食料品等に含
有することが可能である。その場合、一般的に使用され
る担体、賦形剤、保存剤等の添加物と混合することが可
能である。

【００２４】本発明の画分を活性成分として含有する医
薬組成物は、様々な活性酸素の関与する疾患（例えば、
虚血性疾患、動脈硬化、糖尿病、腎炎、老化、癌等）の
予防および治療に効果的である。また、本発明の活性画
分を添加した食品は、栄養強化食品または特定保健用食
品として用いることが可能である。更に、抗酸化剤とし
て食品、その他に用いることも可能である。

【００２５】本発明の医薬組成物は、上述した方法によ
り得られたＳＯＤ様活性画分および抗酸化活性画分、ま
たはそれらを上記の通りにＸＡＤ７カラムに供した後で
得られた溶出画分の少なくとも１を活性成分として含有
する。また、本画分を含有する医薬組成物は、その上更
に、他の様々な薬効を有する薬剤を共に含有することも
可能である。この場合、配合による各薬剤の有効性、安
全性等に問題がないことを確認することは当業者に周知
である。

【００２６】本発明の医薬組成物は、ＳＯＤ様活性画分
および／または抗酸化活性画分は、乾燥重量で、投与量
約１０ｍｇ／体重ｋｇ／日から約１００ｍｇ／体重ｋｇ
／日の範囲内での有効量を、１回または数回に分割する
方法で投与すればよい。或いは、前記用量の範囲に相当
する本発明の何れかの画分の有効量を、１回または数回
に分割する方法で投与すればよい。厳密な用量は、投与
様式、投与薬の剤形、治療する対象の症状および体重等
により広範に変化し得るので、責任のある医師または獣
医師の経験と選択によって決定されるべきものである。

【００２７】投与経路は、活性成分が適切且つ希望する
作用部位に効果的に輸送される限り、経口または非経口
投与、例えば経直腸、経皮膚、皮下、静脈内、尿道内、
筋肉内、鼻腔内、眼科的経路等の如何なる経路による投
与も可能であるが、経口が好ましい。

【００２８】本発明を化粧品として利用する場合の例
は、所望に応じて、種々の担体および添加剤等と混合す
ることが可能であり、洗浄料、クリーム、化粧水、メー
キャップ用品、毛髪用製品、日焼け止め製品等の特殊香
粧品等に含有することが可能であるが、これらに限定さ
れるものではない。

【００２９】本発明の食品として利用できるものの例に
は、米類、豆類、小麦粉、澱粉、砂糖、澱粉糖、パン
類、麺類、菓子類、食用油、乳製品（バター、チーズ、
アイスクリーム、乳酸菌製品等）、豆製品、園芸加工品
（缶詰、ジャム、乾燥果実、果実飲料等）、清涼飲料、
発酵食品類（酒類、食酢、醤油、ソース、味噌、納豆、
漬物等）、肉製品類（ハム、ベーコン、ソーセージ、缶
詰類）、卵製品、水酸食品類、各種冷凍食品類、乾燥食
品類、インスタント食品類、およびレトルト食品類等が
挙げられる。また、調味料類、酵素製品類等に添加する
ことも可能である。しかし、これらに限定されるもので
はない。

【００３０】

【実施例】１．菌の選別 種々の菌を、脱脂ゴマ培地中に生育させた。その発酵産
物中に得られたＳＯＤ様活性を比較した。その結果か
ら、ＳＯＤ様活性画分産生能の高い菌を選別した。

【００３１】［サンプルの調製方法］以下に列記した菌
を、以下の適切な培地の斜面培養した。その後、各菌
を、三角フラスコ中の下記のゴマ脱脂粕培地、１０ｍｌ
に接種し、恒温振盪培養器（ＡＴ１２Ｒ、ＴＨＯＭＡＳ
社製）を用いて、室温にて、１５５ｒｐｍで振盪培養を
６日間行なった。

【００３２】振盪培養後、夫々に４０ｍｌのメタノール
を添加し、約１日間、振盪抽出（１５４から１５５ｒｍ
ｐ）した後、その抽出液を微量遠心分離器（ＭＸ−１６
０、ＴＯＭＹ社製）を用いて、１５℃、９０００ｒｐ
ｍ、１５分間の低温遠心分離を行ない、その上清をサン
プルとした。

【００３３】［対象微生物］試験に供した食品微生物
は、３種１０株の糸状菌である。これらの菌株は、財団
法人応用微生物研究奨励会(東京都文京区)より入手し
た。以下に、使用した菌名を表１に纏めた。

【００３４】

【表１】

【００３５】［培地］脱脂ゴマ培地は、脱脂ゴマ（かど
や製油社製）２ｇに蒸留水１０ｍｌを添加し、リン酸緩
衝液にてｐＨ７．０に調整することにより得た。

【００３６】［試験方法］ ＳＯＤ様活性測定法（ＮＢＴ法） 上記で得たサンプルについて、体外診断用医薬品として
販売されている「ＳＯＤテストワコー」（和光社製）を
用いたＮＢＴ法によりＳＯＤ様活性測定を行なった。

【００３７】［測定原理］ＮＢＴ法は、キサンチン（Ｘ
Ａ）−キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）系により生成
する・Ｏ_２ ⁻がＳＯＤによりＨ_２Ｏ_２とＯ_２に不均一化
される割合を、ジホルマザンの生成阻害率、即ち、ＳＯ
Ｄ無添加時のジホルマザン生成により得られる吸光度に
対する、その減少率から測定する方法である。

【００３８】［測定方法］任意に希釈したサンプルを
０．１ｍｌずつ試験管に添加し、そこに、０．４０ｍＭ
のキサンチンおよび０．２４ｍＭのニトロブルーテトラ
ゾリウム（ＮＯ_２−ＴＢ）を含有するリン酸緩衝液
（０．１Ｍ，ｐＨ８．０）である発色試液の１．０ｍｌ
と、０．０４９ユニット／ｍｌのキサンチンオキシダー
ゼを含有する酵素液の１．０ｍｌと加え、温浴中（３７
℃）で２０分間、反応した。２０分後、６９ｍＭのドデ
シル硫酸ナトリム溶液を２ｍｌ添加して反応停止し、吸
光度を測定した。

【００３９】得られた吸光度から、この反応系で生ずる
スーパーオキサイドアニオンによるニトロブルーテトラ
ゾリウム還元に伴なう吸光度（５６０ｎｍ）の増加に対
する、各サンプルの増加阻害率（消去活性能）を求め
た。具体的には、以下の式より阻害率Ｉ（％）を求め
た。

【００４０】

【数１】

【００４１】その結果、以下の表６に示す。この結果か
ら、アスペルギルス・ソヤが特に優れていることが明ら
かとなった。詳しくは、アスペルギルス・ソヤおよびア
スペルギルス・オリゼー、特に、アスペルギルス・ソヤ
・ＩＡＭ２６６４株、ＩＡＭ２６７３株、ＩＡＭ２６７
４株、ＩＡＭ２６７７株、ＩＡＭ２７０３株、ＩＡＭ１
２１７６株およびＩＡＭ１３９０２株、アスペルギルス
・オリゼー・ＩＡＭ２６０９株およびＩＡＭ２６４９
株、並びにアスペルギルス・アワモリＩＡＭ２１１２株
は、優れた活性物質産生能を有していることが明らかと
なった。また、アスペルギルス・ソヤ・ＩＡＭ２６７４
株は、本発明のＳＯＤ様活性画分を安定して産生するこ
とも既に明らかになっている。従って、以後の試験は、
アスペルギルス・ソヤ・ＩＡＭ２６７４株を用いて行な
った。

【００４２】

【表２】

【００４３】ここで、表中の略称は、以下の通りであ
る；Ａ．Ｓはアスペルギルス・ソヤ、Ａ．Ｏ．はアスペ
ルギルス・オリゼー、Ａ．Ａ．はアスペルギルス・アワ
モリである。

【００４４】２．ＳＯＤ様活性画分についての検討 脱脂ゴマをアスペルギルス・ソヤ、即ち、コウジカビで
発酵することにより得られるＳＯＤ様活性画分について
更に検討を進めた。

【００４５】［脱脂ゴマ抽出物との比較］まず、本発明
のためにアスペルギルス・ソヤで発酵した脱脂ゴマと、
発酵工程を経ていない未発酵脱脂ゴマの抽出画分につい
て、ＳＯＤ様活性を比較した。

【００４６】ＳＯＤ様活性画分は、次のように調製し
た。アスペルギルス・ソヤを上記の脱脂ゴマ培地中に白
金耳により接種し、恒温振盪培養器（ＡＴ１２Ｒ、ＴＨ
ＯＭＡＳ社製）中で、３６℃、１５５ｒｐｍで、６日間
培養した。培養後、４０ｍｌの１００％メタノールによ
り３６℃、１５５ｒｐｍで、１日間振盪抽出を行なっ
た。その後、遠心分離を微量遠心分離器（ＭＸ−１６
０、ＴＯＭＹ社製）で行なって上清を得た。上清を濃縮
乾燥した。更に、この濃縮乾燥品を５０ｍｌの８０％メ
タノールに溶解し、または、上清から０．１ｍｌ分取
し、上記方法と同様にＳＯＤを測定した。

【００４７】このとき、比較対照物として、未発酵脱脂
ゴマ水メタノール抽出液を用いた。脱脂ゴマ水メタノー
ル抽出液は、２ｇの脱脂ゴマ（かどや製油社製）を５０
ｍｌの８０％メタノール液を用いて、３６℃、１５５ｒ
ｐｍで、１日間振盪抽出を行ない調製し、前記の方法に
よりＳＯＤ活性を測定した。

【００４８】その結果、本発明のＳＯＤ活性画分は、未
発酵脱脂ゴマよりも高いＳＯＤ様活性を有していた（図
１）。

【００４９】［溶出画分の比較］次に、未発酵脱脂ゴマ
と、アスペルギルス・ソヤによる発酵により得た本発明
のＳＯＤ様活性画分とを、更にカラムクロマトグラフィ
ーに供し、各溶出液により得た溶出画分について、ＳＯ
Ｄ活性を測定した。

【００５０】本発明のＳＯＤ様活性画分は、次のように
得た。上記の脱脂ゴマ培地中にアスペルギルス・ソヤを
白金耳で接種し、恒温振盪培養器（ＡＴ１２Ｒ、ＴＨＯ
ＭＡＳ社製）中で、３６℃、１５５ｒｐｍで、６日間培
養した。培養後、４０ｍｌの１００％メタノールにより
３６℃、１５５ｒｐｍで、１日間振盪抽出を行なった。
その後、遠心分離を微量遠心分離器（ＭＸ−１６０、Ｔ
ＯＭＹ社製）で行なって上清を得た。更に、この上清を
エバポレーターにより５ｍｌまで濃縮した。この濃縮液
をＸＡＤ−７カラム（オルガノ社製）による逆相カラム
クロマトグラフィーに供した。その後、溶出液として、
１００％水、２０％メタノール、４０％メタノール、６
０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノー
ルおよび１００％酢酸エチルを順次用いて溶出し、各溶
出画分を得た。各溶出は、カラムの３倍量の溶出液を用
いたので、得られた溶出液は約５０ｍｌに濃縮してから
サンプルとした。得られたサンプルについてのＳＯＤ様
活性を測定した。

【００５１】その結果を図２に示す。未発酵脱脂ゴマ抽
出液の１００％水、２０％メタノール、４０％メタノー
ル、および６０％メタノールによる各溶出画分は、夫々
に対応するアスペルギルス・ソヤの発酵物から得た溶出
画分に対して、約半分程度の活性しかなかった。一方、
未発酵脱脂ゴマの８０％メタノール、１００％メタノー
ルおよび１００％酢酸エチルによる溶出画分の活性につ
いては、検出できなかった。この結果から、アスペルギ
ルス・ソヤの発酵により、未発酵脱脂ゴマからでは得ら
れなかった、新規活性画分を得ることが可能であること
が分かった。

【００５２】３．１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラ
ジル(DPPH)還元活性 次に、脱脂ゴマをアスペルギルス・ソヤで発酵すること
により得られる画分について、抗酸化活性能を評価し
た。抗酸化活性能の評価は、１−ジフェニル−２−ピク
リルヒドラジル(以下、DPPHと略す)還元活性を測定する
ことにより行なった。

【００５３】［ＤＰＰＨ還元活性の測定方法］ＤＰＰＨ
還元活性の測定は、ブロイス(M.S.Brois,Nature,181,11
99-1200(1958))の方法に従い行なった。この方法は、Ｄ
ＰＰＨの吸光度が、抗酸化性物質により減少することを
指標とする。

【００５４】具体的には、エタノール中の０．１ｍＭの
ＤＰＰＨ溶液２ｍｌに、測定すべきサンプルを２５μｌ
添加し、２０分後に５１６ｎｍにおける吸光度を測定す
る方法である。

【００５５】［サンプルの調製］サンプルは、次のよう
に調製した。上記の脱脂ゴマ培地中に、アスペルギルス
・ソヤを白金耳により接種し、恒温振盪培養器（ＡＴ１
２Ｒ、ＴＨＯＭＡＳ社製）中で、３６℃、１５５ｒｐｍ
で、６日間培養した。培養後、４０ｍｌの１００％メタ
ノールにより３６℃、１５５ｒｐｍで、１日間振盪抽出
を行なった。その後、遠心分離を微量遠心分離器（ＭＸ
−１６０、ＴＯＭＹ社製）で行なって上清を得た。上清
を濃縮乾燥した。この濃縮乾固品を、８０％メタノール
の５０ｍｌに溶解してサンプルとした。

【００５６】また、陽性対照として用いたセサミノール
およびα-トコフェロールは、ジメチルスルホキシド中
で、５０μＭ、１００μＭ、５００μＭ、１ｍＭ、５ｍ
Ｍおよび１０ｍＭに調製した。

【００５７】更に、比較対照物として、発酵過程を経て
いない未発酵脱脂ゴマ抽出物を用いた。未発酵脱脂ゴマ
抽出物は、２ｇの脱脂ゴマ（かどや製油社製）を５０ｍ
ｌの８０％メタノール液を用いて、３６℃、１５５ｒｐ
ｍで、１日間振盪抽出を行ない調製した。

【００５８】前述の通りに調製したサンプルについて、
ＤＰＰＨ還元活性を測定した。その結果、本発明のアス
ペルギルス・ソヤ発酵抽出物は、未発酵脱脂ゴマ抽出物
よりも高い活性を有していることが分かった（図３）。

【００５９】［溶出画分の比較］次に、未発酵脱脂ゴマ
抽出物と、アスペルギルス・ソヤの発酵により得た本発
明の抽出画分を、カラムクロマトグラフィーにより分画
し、得られた各溶出画分について抗酸化活性を測定し
た。

【００６０】本発明の活性画分は、次のように得た。上
記の脱脂ゴマ培地中にアスペルギルス・ソヤを白金耳に
より接種し、恒温振盪培養器（ＡＴ１２Ｒ、ＴＨＯＭＡ
Ｓ社製）中で、３６℃、１５５ｒｐｍで、６日間培養し
た。培養後、８０％メタノールにより３６℃、１５５ｒ
ｐｍで、１日間振盪抽出を行なった。その後、遠心分離
を微量遠心分離器（ＭＸ−１６０、ＴＯＭＹ社製）で行
なって上清を活性画分として得た。

【００６１】得られた活性画分を、エバポレーターによ
り約５ｍｌまで濃縮した。更に、これをＸＡＤ−７カラ
ム（オルガノ社製）による逆相カラムクロマトグラフィ
ーに供した。その後、溶出液として、１００％水、２０
％メタノール、４０％メタノール、６０％メタノール、
８０％メタノール、１００％メタノールおよび１００％
酢酸エチルを順次用いて溶出し、各溶出画分を得た。各
溶出は、カラムの３倍量の溶出液により行なったので、
各分画溶液を約５０ｍｌに濃縮してからサンプルとし
た。得られたサンプルについてのＤＰＰＨ還元活性を測
定した。

【００６２】その結果を図４に示す。何れの溶出画分に
関しても、アスペルギルス・ソヤ発酵活性画分由来の方
が、未発酵脱脂ゴマ抽出物由来のものに比較し、高い活
性を有していることが明らかとなった。

【００６３】［培養物に含まれるセサミノールの抗酸化
活性］アスペルギルス・ソヤ発酵活性画分の１００％酢
酸エチル画分をＨＰＬＣで精製した結果、セサミノール
を得た。セサミノールは、０．５μＭから１０ｍＭまで
段階毎にジメチルスルホキシドに溶解してサンプルとし
た。得られたサンプルについてのＤＰＰＨ還元活性を上
述と同様な方法で測定した。

【００６４】その結果を図５に示す。本発明の培養物に
含まれるセサミノールは、代表的な抗酸化剤α-トコフ
ェロールと同等の高い活性を有していることが示され
た。

【００６５】

【発明の効果】本発明の方法により、脱脂ゴマを、微生
物、特にアスペルギルス・ソヤを用いて発酵することに
より、ＳＯＤ様活性画分および抗酸化活性画分を得るこ
とが可能である。

【００６６】脱脂ゴマを微生物により発酵することによ
り得られるＳＯＤ様活性画分は、未発酵脱脂ゴマを抽出
しただけの画分とは異なる成分を含み、その活性は非常
に高い。

【００６７】また、本発明のセサミノール製造方法を行
なうことにより、脱脂ゴマを有効に利用でき、それによ
り多量のセサミノールを得ることも可能である。また、
本セサミノール製造方法は、微生物による発酵を利用し
た方法であるため、単離した酵素を利用する方法とは異
なり、製造方法がシンプルである。また、本方法に使用
する微生物は、何度も繰り返して使用することが可能で
あるため、経費を節減することにも繋がる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 アスペルギルス・ソヤ発酵物と未発酵脱脂ゴ
マとの８０％メタノール抽出液のＳＯＤ様活性を示すグ
ラフ。

【図２】 アスペルギルス・ソヤ発酵物と未発酵脱脂ゴ
マとを夫々ＸＡＤ７カラムクロマトグラフィーに供する
ことにより得られた各画分のＳＯＤ様活性を示すグラ
フ。

【図３】 アスペルギルス・ソヤ発酵物と未発酵脱脂ゴ
マとのメタノール抽出液のＤＰＰＨ還元活性を示すグラ
フ。

【図４】 アスペルギルス・ソヤ発酵物と未発酵脱脂ゴ
マとを夫々ＸＡＤ７カラムクロマトグラフィーに供する
ことにより得られた各分画のＤＰＰＨ還元活性を示すグ
ラフ。

【図５】 アスペルギルス・ソヤ発酵物からの酢酸エチ
ル１００％画分からＨＰＬＣを用いて単離したセサミノ
ールと、α-トコフェロールのＤＰＰＨ還元活性を示す
グラフ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 17/02 Ｃ１２Ｐ 17/02 //(Ｃ１２Ｐ 17/02 (Ｃ１２Ｐ 17/02 Ｃ１２Ｒ 1:66） Ｃ１２Ｒ 1:66）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 脱脂ゴマを微生物により発酵することに
   より、ＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活性画分
   を得る方法。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の微生物がアスペルギル
   ス属の微生物である方法。
3. 【請求項３】 請求項１または２の何れか１項に記載の
   ＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活性画分を得る
   方法であって、前記微生物を脱脂ゴマを含む培地中で培
   養することと、および得られた培養物を８０％メタノー
   ルで抽出することと、を具備する方法。
4. 【請求項４】 脱脂ゴマを微生物により発酵することに
   より得られるＳＯＤ様活性画分および／または抗酸化活
   性画分。
5. 【請求項５】 微生物を使用して脱脂ゴマからセサミノ
   ールを産生する方法であって、微生物を脱脂ゴマを含む
   培地中で培養することと、得られた培養物を８０％メタ
   ノールで抽出することと、および得られた抽出液をＸＡ
   Ｄ−７カラムに供し、１００％酢酸エチルを用いて溶出
   することと、を具備するセサミノール産生方法。