JP2002112784A

JP2002112784A - 抗リン脂質抗体症候群治療用ｔ細胞レセプター可変領域

Info

Publication number: JP2002112784A
Application number: JP2000306677A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Kawakami; 裕河上; Masataka Kuwana; 正隆桑名
Original assignee: Keio University
Current assignee: Keio University
Priority date: 2000-10-05
Filing date: 2000-10-05
Publication date: 2002-04-16

Abstract

(57)【要約】【課題】抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）の原因物質
である抗リン脂質抗体の産生を誘導するβ２グリコプロ
テインＩ（β₂ＧＰＩ)反応性Ｔ細胞に対する免疫反応を
誘発するペプチドや、かかるペプチドを有効成分とする
ＡＰＳ治療予防剤等を提供すること。【解決手段】末梢血をβ₂ＧＰＩで刺激し、β₂ＧＰＩ
反応性Ｔ細胞株を樹立し、それらのＴＣＲ部分の遺伝子
解析を行う。β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖には
高頻度にＶβ７やＶβ８が用いられていること、β₂Ｇ
ＰＩ反応性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３には特定のア
ミノ酸モチーフが存在すること、複数のＡＰＳ患者から
ＣＤＲ３領域に全く同一のアミノ酸配列をもつＴＣＲβ
鎖が存在することから、このＣＤＲ３領域のアミノ酸配
列を含むペプチドを用いて、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に
対する免疫反応を誘発する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗リン脂質抗体症
候群（anti-phospholipid syndrome；ＡＰＳ）の治療等
に有用なＴ細胞レセプター（T cell receptor；ＴＣ
Ｒ）の可変領域を含むペプチド、詳しくはＡＰＳの原因
物質である抗リン脂質抗体の産生を誘導するベータ２グ
リコプロテインＩ（β₂-glycoprotein I；β₂ＧＰＩ)反
応性Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプチドや、か
かるペプチド等を有効成分とするＡＰＳ治療予防剤など
に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＡＰＳは、繰り返す脳梗塞、肺塞栓症、
下肢深部静脈血栓症などの動静脈血栓症、習慣性流産を
呈する疾患で、血液中にリン脂質と結合する血漿蛋白に
対する抗体（抗リン脂質抗体）が検出される。抗リン脂
質抗体の主要な標的はβ₂ＧＰＩであり、抗リン脂質抗
体がβ₂ＧＰＩの持つ凝固抑制活性を阻害することによ
り過凝固状態となり血栓症や流産が誘導されることが知
られている（ArthritisRhem 39, 1444-1454, 1996）。

【０００３】ＡＰＳを診断する方法としては、抗リン脂
質抗体を検出・測定する方法を挙げることができ、これ
らの方法は多数提案されている（特開２０００−９７３
１号公報、特開平１１−２９５３１２号公報、特開平１
０−２８２０９６号公報、特開平１０−１３２８２１号
公報、特開平０８−１１４５９７号公報、特開平０７−
１０３９８１号公報、特開平０７−１０３９８０号公
報、特開平０６−３３１６２８号公報、特開平０６−８
８８２３号公報、特開平０５−６０７５５号公報等）。
しかし、ＡＰＳの治療には抗血小板薬、抗凝固薬、免疫
抑制薬が用いられているが、いずれもコントロールを用
いた臨床試験での有効性は証明されておらず、また、抗
血小板薬や抗凝固薬による治療法には重篤な出血の危険
性があり、副腎皮質ステロイドをはじめとした免疫抑制
薬では易感染症性や動脈硬化、骨粗しょう症促進などの
副作用があり、臨床上大きな問題になっている。この問
題点を解決するためには、抗リン脂質抗体の産生を選択
的に抑制する治療法が必要となっており、米国特許第
５，８７４，４０９号には、抗リン脂質抗体エピトープ
のアナログを用いた抗リン脂質抗体産生抑制によるＡＰ
Ｓの治療法が開示されている。

【０００４】他方、Ｔ細胞の抗原認識を担う膜表面のＴ
ＣＲには、α鎖・β鎖から成るへテロ二量体とγ鎖・δ
鎖から成るへテロ二量体の二種類が同定されている。Ｔ
ＣＲ遺伝子は免疫グロブリン遺伝子と同様に、可変領域
（Ｖ：variable）、多様性領域（Ｄ：diversity）、結
合領域（Ｊ：joining）、定常領域（Ｃ：constant）の
各領域から成り、これらのアミノ酸配列はＴ細胞ごとに
異なっていることから、ＴＣＲは抗原認識分子であると
同時に個々のＴ細胞の目印にもなっている。このＴＣＲ
の多様性は後天的なＴＣＲ遺伝子の再構成によって生み
だされており、ＴＣＲβ，δ鎖はＶ−Ｄ−Ｊを、ＴＣＲ
α，γ鎖はＶ−Ｊを再構成することが知られている。

【０００５】Ｔ細胞の初期分化は、Ｂ細胞と同様にＴＣ
Ｒのα鎖及びβ鎖遺伝子の再構成と密接に関わってい
る。ＴＣＲβ鎖遺伝子の再構成はＤＮ−Ｔ細胞（double
negative：ＣＤ４^-８^-）の段階で開始され、β鎖遺伝
子の再構成に成功した細胞はβ鎖タンパク質と代替α鎖
（ｐｒｅＴα）の複合体、つまりプレＴＣＲを細胞表面
に発現する。そして、ＣＤ４及びＣＤ８分子の発現が誘
導され、ＤＰ−Ｔ細胞（double positive：ＣＤ４
⁺８⁺）へと移行し、ＤＰとなったＴ細胞は、次にＴＣＲ
のα鎖遺伝子の再構成に成功した細胞のみが、ＴＣＲを
表面に発現できることが知られている。

【０００６】上記ＴＣＲβ鎖には、染色体ＤＮＡには少
なくとも２４のＶβ、２つのＤβ、１４のＪβ、２つの
Ｃβ遺伝子が存在し、Ｖβ中に２つの可変領域（ＣＤＲ
１、ＣＤＲ２）が存在することも知られている。これら
遺伝子の中からＶβ、Ｄβ、Ｊβ、Ｃβが各１つずつ選
ばれて結合し、ＴＣＲβ鎖をコードするＤＮＡが構成さ
れている。この際、Ｖβ−Ｄβ−Ｊβ遺伝子の結合部に
はランダムな塩基の挿入や欠失が起こり、無限に近い多
様性が生みだされている。このＶβ−Ｄβ−Ｊβ遺伝子
の結合部位は、ＣＤＲ３（相補性決定領域３：third co
mplementaritydetermining region）、結合部（junctio
nal）領域、又はＮ−Ｄ−Ｎ領域と呼ばれ、ＴＣＲの中
で最も多型性に富む部分であることから、あるＴＣＲは
細菌やウイルスなどの外来抗原を認識するが、別のＴＣ
Ｒは自己抗原であるβ₂ＧＰＩを認識することができ
る。従来、多発性硬化症、重症筋無力症などの自己免疫
疾患では病因的なＴ細胞のＴＣＲには共通した構造（モ
チーフ）が存在することが示されており（Nat Med 2, 1
109-1115, 1996）、ＡＰＳ患者においても抗リン脂質抗
体産生を誘導するβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞が共通した構
造を持ったＴＣＲ鎖を用いている可能性がある。

【０００７】また、特定のＴ細胞がメディエイトする慢
性関節リウマチ等の疾患を予防若しくは抑制する方法と
して、ＴＣＲの可変領域由来のペプチドや、該ペプチド
を含んでなるワクチン（例えば、米国特許第５，６１
２，０３５号、米国特許第５，８３７，２４６号、米国
特許第５，８６１，１６４号、米国特許第５，９８５，
５５２号、米国特許第６，００７，８１５号など）や、
ＴＣＲの可変領域をコードするＤＮＡをレシピエントの
中に導入することにより、炎症性Ｔ応答を特異的に阻害
する方法（例えば、米国特許第５，９３９，４００号な
ど）等が知られている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】現在までに、ＡＰＳ患
者に有効性が証明されている治療法は知られておらず、
他に治療法がないために血栓症の予防を目的として抗血
小板薬、抗凝固薬、免疫抑制薬などの治療法が行われて
いるのが現状である。ただし、抗血小板薬や抗凝固薬に
よる治療では重篤な出血の危険性があり、また副腎皮質
ステロイドをはじめとした免疫抑制薬では易感染症性や
動脈硬化促進などの副作用があり、臨床上大きな問題に
なっている。本発明の課題は、副作用のないＡＰＳの治
療・予防剤として有用なペプチド、すなわちＡＰＳの原
因物質である抗リン脂質抗体の産生を誘導するβ₂ＧＰ
Ｉ反応性Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプチド
や、かかるペプチドを有効成分とするＡＰＳ治療予防剤
等を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究し、抗リン脂質抗体産生を誘
導している病因的なβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に共通して
用いられているＴＣＲ部分を分子レベルで同定すれば、
それらＴＣＲはβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞を特徴付ける目
印となり、ワクチン等の手法を用いて上記β₂ＧＰＩ反
応性Ｔ細胞のＴＣＲに対する特異的免疫応答を誘導すれ
ば、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞を選択的に除去して抗リン
脂質抗体産生を抑制することができるのではないかと考
え、ＡＰＳ患者におけるβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株の樹
立とそれらのＴＣＲ部分の遺伝子解析を行い、ＡＰＳ患
者における抗リン脂質抗体産生を誘導するβ₂ＧＰＩ反
応性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖には高頻度にＶβ７が用いられ
ており、数少ないがＶβ７が検出されなかった例ではＶ
β８遺伝子という可変領域遺伝子が用いられているこ
と、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３に
は特定のアミノ酸モチーフが存在すること、特に複数の
ＡＰＳ患者からＣＤＲ３領域に全く同一のアミノ酸配列
をもつＴＣＲβ鎖が存在することを見い出し、また、Ｔ
ＣＲβ鎖の可変領域Ｖβ７又はＶβ８陽性のＴ細胞を除
去することにより、抗リン脂質抗体産生がほぼ完全に抑
制されることを確認し、本発明を完成するに至った。

【００１０】すなわち本発明は、抗リン脂質抗体産生を
誘導するベータ２グリコプロテインＩ（β₂ＧＰＩ）反
応性Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプチドであっ
て、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞の表面に存在するＴ細胞レ
セプター（ＴＣＲ）のアミノ酸配列を有することを特徴
とする実質的に純粋な単鎖ペプチド（請求項１）や、β
₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプ
チドが、ＴＣＲのＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むペプチ
ドであることを特徴とする請求項１記載の実質的に純粋
な単鎖ペプチド（請求項２）や、ＴＣＲのＣＤＲ３が、
ＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３であることを特徴とする請求項２
記載の実質的に純粋な単鎖ペプチド（請求項３）や、Ｔ
ＣＲβ鎖のＣＤＲ３が、ＴＣＲＶβ７のＣＤＲ３である
ことを特徴とする請求項３記載の実質的に純粋な単鎖ペ
プチド（請求項４）や、ＴＣＲＶβ７のＣＤＲ３のアミ
ノ酸配列が、Thr-Gly-Xaa-Xaa-Asn （Xaa は任意のアミ
ノ酸を表す。）を含むアミノ酸配列であることを特徴と
する請求項４記載の実質的に純粋な単鎖ペプチド（請求
項５）や、Thr-Gly-Xaa-Xaa-Asn を含むアミノ酸配列
が、Thr-Gly-Ala-Ser-Asn を含むアミノ酸配列であるこ
とを特徴とする請求項５記載の実質的に純粋な単鎖ペプ
チド（請求項６）や、Thr-Gly-Ala-Ser-Asn を含むアミ
ノ酸配列が、Ser-His-Asp-Thr-Gly-Ala-Ser-Asn-Tyr-Gl
y-Tyr-Thr を含むアミノ酸配列であることを特徴とする
請求項6記載の実質的に純粋な単鎖ペプチド（請求項
７）や、ＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３が、ＴＣＲＶβ８のＣＤ
Ｒ３であることを特徴とする請求項３記載の実質的に純
粋な単鎖ペプチド（請求項８）や、ＴＣＲＶβ８のＣＤ
Ｒ３のアミノ酸配列が、Pro- Xaa-Ala-Xaa-Xaa-Asp/Glu
-Xaa-Gln-Tyr （Xaa は任意のアミノ酸を表す。）を含
むアミノ酸配列であることを特徴とする請求項8記載の
実質的に純粋な単鎖ペプチド（請求項９）に関する。

【００１１】また本発明は、請求項１〜９のいずれか記
載のペプチドをコードするＤＮＡ又はその相補的配列
（請求項１０）や、請求項１〜９のいずれか記載のペプ
チドと、マーカータンパク質及び／又はペプチドタグと
を結合させた融合ペプチド（請求項１１）や、請求項１
〜９のいずれか記載のペプチドに特異的に結合する抗体
（請求項１２）や、抗体がモノクローナル抗体であるこ
とを特徴とする請求項１２記載の抗体（請求項１３）
や、請求項１２又は１３記載の抗体が特異的に結合する
組換えペプチド（請求項１４）や、請求項１〜９のいず
れか記載のペプチドをコードするＤＮＡが組み込まれた
ことを特徴とする発現ベクター（請求項１５）や、請求
項１〜９のいずれか記載のペプチドを発現することがで
きる発現系を含んでなる細胞（請求項１６）や、請求項
１〜９のいずれか記載のペプチドをコードする遺伝子機
能が染色体上で欠損したことを特徴とする非ヒト動物
（請求項１７）や、請求項１〜９のいずれか記載のペプ
チドを過剰発現することを特徴とする非ヒト動物（請求
項１８）や、非ヒト動物が、マウス又はラットであるこ
とを特徴とする請求項１７又は１８記載の非ヒト動物
（請求項１９）に関する。

【００１２】さらに本発明は、被検物質と、β₂ＧＰＩ
と、Ｖβ７及び／又はＶβ８をもつＴＣＲを有するβ₂
ＧＰＩ反応性Ｔ細胞とを用い、該Ｔ細胞における抗リン
脂質抗体産生誘導活性を測定・評価することを特徴とす
る抗リン脂質抗体産生誘導活性抑制又は促進物質のスク
リーニング方法（請求項２０）や、請求項１７〜１９の
いずれか記載の非ヒト動物に被検物質を投与し、該非ヒ
ト動物の血中における抗リン脂質抗体産生量を測定・評
価することを特徴とする抗リン脂質抗体産生誘導活性抑
制又は促進物質のスクリーニング方法（請求項２１）
や、請求項２０又は２１記載のスクリーニング方法によ
り得られる抗リン脂質抗体産生誘導活性抑制物質（請求
項２２）や、請求項１〜９のいずれか記載のペプチドを
有効成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群
治療予防剤（請求項２３）や、請求項１〜９のいずれか
記載のペプチドとアジュバンドとを有効成分とすること
を特徴とする抗リン脂質抗体症候群治療予防剤（請求項
２４）や、請求項１２又は１３記載の抗体を有効成分と
することを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治療予防剤
（請求項２５）や、請求項１５記載の発現ベクターを有
効成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治
療予防剤（請求項２６）や、請求項１６記載の細胞を有
効成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治
療予防剤（請求項２７）や、請求項１〜９のいずれか記
載のペプチドを抗原として提示することができる樹状細
胞を有効成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症
候群治療予防剤（請求項２８）や、ＴＣＲＶβ７又はＴ
ＣＲＶβ８の可変領域（ＣＤＲ１，ＣＤＲ２）のアミノ
酸配列を含むペプチドを有効成分とすることを特徴とす
る抗リン脂質抗体症候群治療予防剤（請求項２９）に関
する。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明の対象となるペプチドとし
ては、抗リン脂質抗体産生を誘導するβ₂ＧＰＩ反応性
Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプチドであって、
β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞の表面に存在するＴＣＲのアミ
ノ酸配列を有する実質的に純粋な単鎖ペプチドであれば
特に制限されるものではなく、ここで、β₂ＧＰＩ反応
性Ｔ細胞とは、β₂ＧＰＩを特異的に認識するＴＣＲを
その膜表面に有するＴ細胞をいい、かかるβ₂ＧＰＩ反
応性Ｔ細胞は、例えば末梢血Ｔ細胞をインターロイキン
２（ＩＬ−２）存在下でβ₂ＧＰＩのリコンビナント蛋
白と自己の抗原提示細胞（末梢血単核球、ＥＢウイルス
でトランスフォームしたＢ細胞など）で複数回刺激する
ことによって、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株として樹立す
ることにより、当業者であれば過度の実験なしで、容易
に得ることができる。

【００１４】上記抗リン脂質抗体産生を誘導するβ₂Ｇ
ＰＩ反応性Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプチド
としては、ＴＣＲのＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むペプ
チド、好ましくはＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含むペプチド、より好ましくは、例えば配列表の配列
番号８〜１４のいずれかに示されるアミノ酸配列からな
るペプチド若しくはその一部からなるペプチド、又はそ
れらペプチドのアミノ酸配列において、１若しくは数個
のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配
列からなり、かつ免疫誘導活性を有するペプチド等の、
ＴＣＲＶβ７やＴＣＲＶβ８のＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含むペプチドを挙げることができる。上記ＴＣＲＶβ
７のＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むペプチドとしては、
Thr-Gly-Xaa-Xaa-Asn（配列番号１５、なお Xaa は任意
のアミノ酸を表す。以下同じ。）を含むアミノ酸配列、
好ましくは Thr-Gly-Ala-Ser-Asn（配列番号１６）を含
むアミノ酸配列、より好ましくは Ser-His-Asp-Thr-Gly
-Ala-Ser-Asn-Tyr-Gly-Tyr-Thr（配列番号１８）を含む
アミノ酸配列からなるペプチドを具体的に挙げることが
でき、Ser-His-Asp-Thr-Gly-Ala-Ser-Asn-Tyr-Gly-Tyr-
Thr で示されるアミノ酸配列からなるペプチドや、ＴＣ
ＲＶβ７．２のＣ末端に上記ＣＤＲ３のアミノ酸配列が
結合したペプチドをより具体的に例示することができ
る。また、上記ＴＣＲＶβ８のＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含むペプチドとしては、Pro-Xaa-Ala-Xaa-Xaa-Asp/Gl
u-Xaa-Gln-Tyr（配列番号１９）を含むアミノ酸配列を
含むアミノ酸配列からなるペプチドを具体的に挙げるこ
とができ、ＴＣＲＶβ８．１やＴＣＲＶβ８．２のＣ末
端に上記ＣＤＲ３のアミノ酸配列が結合したペプチドを
より具体的に例示することができる。

【００１５】本発明の対象となるＤＮＡ又はその相補的
配列としては、例えば配列番号１〜７のいずれかに示さ
れる塩基配列からなるＤＮＡの全部又はその一部であ
る、上記本発明のペプチドをコードするＤＮＡであれば
特に制限されるものではないが、配列番号１７に示され
る塩基配列又はその相補的配列を含むＤＮＡを好適に例
示することができる。例えば、上記本発明のペプチドを
コードするｃＤＮＡは、前記β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株
から得られたｍＲＮＡを用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成
し、既知のＴＣＲのＶβ１〜２４の塩基配列に相補的な
２６種類のプライマーと、共通するＣβ領域のプライマ
ーとを用いて各Ｖβごとにポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ
Ｒ）を行うことによってＴＣＲのＤＮＡを増幅し、得ら
れた各ＰＣＲ産物をアガロースゲル電気泳動後のデンシ
トメトリーにより解析し、末梢血Ｔ細胞に比べてβ₂Ｇ
ＰＩ反応性Ｔ細胞株で増加したＶβを、β₂ＧＰＩ反応
性Ｔ細胞により用いられているＴＣＲβ鎖の候補とし、
候補としたこれらＶβのＰＣＲ産物を一本鎖ＤＮＡとし
て一本鎖コンフォメーション多型性（single-strand co
nformation polymorphisms：ＳＳＣＰ）の解析を行い、
β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株においてオリゴクローナルな
増加を示したＤＮＡとして得ることができる。また、本
発明のＤＮＡ又はその相補的配列は、上記本発明のペプ
チドのアミノ酸配列情報から常法により合成することも
できる。本発明のペプチドをコードするＤＮＡ又はＲＮ
Ａのアンチセンス鎖の全部又は一部は、ＡＰＳの診断用
プローブとして利用することができる。

【００１６】本発明の融合ペプチドとしては、本発明の
ペプチドとマーカータンパク質及び／又はペプチドタグ
とが結合しているものであればどのようなものでもよ
く、マーカータンパク質としては、従来知られているマ
ーカータンパク質であれば特に制限されるものではな
く、例えば、アルカリフォスファターゼ、抗体のＦｃ領
域、ＨＲＰ、ＧＦＰなどを具体的に挙げることができ、
また本発明におけるペプチドタグとしては、Ｍｙｃタ
グ、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、ＧＳＴタグなどの従来
知られているペプチドタグを具体的に例示することがで
きる。かかる融合ペプチドは常法により作製することが
でき、Ｎｉ−ＮＴＡとＨｉｓタグの親和性を利用した本
発明のペプチドの精製や、Ｔ細胞誘導活性を有するタン
パク質の検出や、本発明のペプチドに対する抗体の定量
に有用であり、また当該分野の研究用試薬としても有用
である。

【００１７】本発明の前記タンパク質やペプチドに特異
的に結合する抗体としては、モノクローナル抗体、ポリ
クローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体
等の免疫特異的な抗体を具体的に挙げることができ、こ
れらは上記本発明のペプチド又はその一部を抗原として
用いて常法により作製することができるが、その中でも
モノクローナル抗体がその特異性の点で好ましく、特に
前記ＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列を特異的に認
識するモノクローナル抗体がより好ましい。かかるモノ
クローナル抗体等の抗体は、例えば、ＡＰＳの予防治療
ばかりでなく、ＡＰＳの発症機構を明らかにする上で有
用である。

【００１８】また、本発明の抗体は、慣用のプロトコー
ルを用いて、動物（好ましくはヒト以外）に本発明のペ
プチドあるいは本発明のペプチドと担体（シュレッパ
ー）との結合物を投与することにより産生され、例えば
モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物に
より産生される抗体をもたらす、ハイブリドーマ法（Na
ture 256, 495-497, 1975）、トリオーマ法、ヒトＢ細
胞ハイブリドーマ法（Immunology Today 4, 72, 1983）
及びＥＢＶ−ハイブリドーマ法（MONOCLONAL ANTIBODIE
S AND CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R.Liss, Inc.,
1985）など任意の方法を用いることができる。

【００１９】本発明の上記本発明のペプチドに対する一
本鎖抗体をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特
許第4,946,778号）を適用することができる。また、ヒ
ト化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウ
ス又は他の哺乳動物等を利用したり、上記抗体を用い
て、その本発明のペプチドを発現するクローンを単離・
同定したり、アフィニティークロマトグラフィーでその
ポリペプチドを精製することもできる。また、本発明に
は、これら抗体が特異的に結合する組換えペプチドも包
含される。

【００２０】本発明はまた、上記本発明のペプチドをコ
ードするＤＮＡが組み込まれた発現ベクターや、本発明
のペプチドを発現することができる発現系を含んでなる
細胞に関する。かかる発現ベクターや発現系としては、
上記本発明のペプチドを宿主細胞内で発現させることが
できるベクターや発現系であればどのようなものでもよ
く、染色体、エピソーム及びウイルスに由来するベクタ
ーや発現系、例えば、細菌プラスミド由来、酵母プラス
ミド由来、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシニ
アウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬
病ウイルス、レトロウイルス由来のベクター、バクテリ
オファージ由来、トランスポゾン由来及びこれらの組合
せに由来するベクター、例えば、コスミドやファージミ
ドのようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要
素に由来するものを挙げることができる。これらベクタ
ーや発現系は発現を起こさせるだけでなく発現を調節す
る制御配列を含んでいてもよい。

【００２１】そして、上記宿主細胞としては、大腸菌、
ストレプトミセス、枯草菌、ストレプトコッカス、スタ
フィロコッカス等の細菌原核細胞や、酵母、アスペルギ
ルス等の真菌細胞や、ドロソフィラＳ２、スポドプテラ
Ｓｆ９等の昆虫細胞や、Ｌ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細
胞、ＨｅＬａ細胞、Ｃ１２７細胞、ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３
細胞（ジヒドロ葉酸レダクターゼやチミジンキナーゼな
どを欠損した変異株を含む）、ＢＨＫ２１細胞、ＨＥＫ
２９３細胞、Ｂｏｗｅｓ悪性黒色腫細胞等の動物細胞
や、植物細胞等を挙げることができる。これらの細胞の
中でも、ＨＬＡ発現能を有する宿主細胞が好ましく、か
かる宿主細胞としては、元来ＨＬＡ発現能を有する細胞
の他、元来ＨＬＡ発現能を有さない細胞にＨＬＡｃＤＮ
Ａをトランスフェクションした細胞を挙げることがで
き、これらＨＬＡ発現能を有する宿主細胞の場合、本発
明のペプチドが細胞表面に提示され、免疫応答を誘発す
ることができる。

【００２２】また、本発明のペプチドをコードする遺伝
子の宿主細胞への導入は、Davisら（BASIC METHODS IN
MOLECULAR BIOLOGY, 1986）及びSambrookら（MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y., 1989）などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング (scrape loading)、弾丸導入(ballisti
c introduction)、感染等により行うことができる。

【００２３】上記本発明のペプチドをコードするＤＮＡ
が組み込まれた発現ベクターや上記発現系を含んでなる
細胞は、ＡＰＳの治療予防薬として適用しうる可能性が
あり、また、上記発現系を含んでなる細胞を用いると、
本発明のペプチドを製造することができ、かかる細胞の
培養物から本発明のペプチドを回収し精製するには、硫
酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン
又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロー
スクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフ
ィー、アフィニティークロマトグラフィー、ハイドロキ
シアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマ
トグラフィーを含めた公知の方法、好ましくは、高速液
体クロマトグラフィーが用いられる。特に、アフィニテ
ィークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、例え
ば、本発明のペプチドに対する抗体を結合させたカラム
や、上記本発明のペプチドに通常のペプチドタグを付加
した場合は、このペプチドタグに親和性のある物質を結
合したカラムを用いることにより、本発明のペプチドを
得ることができる。

【００２４】本発明において、上記本発明のペプチドを
コードする遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒト動物
とは、染色体上の本発明のペプチドをコードする遺伝子
の一部若しくは全部が破壊・欠損・置換等の遺伝子変異
により不活性化され、本発明のペプチドを発現する機能
を失なった非ヒト動物をいい、また、本発明のペプチド
を過剰発現する非ヒト動物とは、野生型非ヒト動物に比
べてかかる本発明のペプチドを大量に産生する非ヒト動
物をいう。そして、本発明における非ヒト動物として
は、マウス、ラット等の齧歯目動物などの非ヒト動物を
具体的に挙げることができるが、これらに限定されるも
のではない。

【００２５】ところで、メンデルの法則に従い出生して
くるホモ接合体非ヒト動物には、本発明のペプチド欠損
型又は過剰発現型とその同腹の野生型とが含まれ、これ
らホモ接合体非ヒト動物における欠損型又は過剰発現型
とその同腹の野生型を同時に用いることによって個体レ
ベルで正確な比較実験をすることができることから、野
生型の非ヒト動物、すなわち本発明のペプチドをコード
する遺伝子機能が染色体上で欠損又は過剰発現する非ヒ
ト動物と同種の動物、さらには同腹の動物を、例えば下
記に記載する本発明のスクリーニングに際して併用する
ことが好ましい。かかる本発明のペプチドをコードする
遺伝子機能が染色体上で欠損又は過剰発現する非ヒト動
物の作製方法を、本発明のペプチドのノックアウトマウ
スやトランスジェニックマウスを例にとって以下説明す
る。

【００２６】例えば、本発明のペプチドをコードする遺
伝子機能が染色体上で欠損したマウス、すなわち本発明
のペプチドノックアウトマウスは、マウス遺伝子ライブ
ラリーからＰＣＲ等の方法により得られた遺伝子断片を
用いて、本発明のペプチドをコードする遺伝子をスクリ
ーニングし、スクリーニングされた本発明のペプチドを
コードする遺伝子をウイルスベクター等を用いてサブク
ローンし、ＤＮＡシーケンシングにより特定する。この
クローンの本発明のペプチドをコードする遺伝子の全部
又は一部をｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット等に置換し、
３′末端側にジフテリアトキシンＡフラグメント（ＤＴ
−Ａ）遺伝子や単純ヘルペスウイルスのチミジンキナー
ゼ（ＨＳＶ−ｔｋ）遺伝子等の遺伝子を導入することに
よって、ターゲッティングベクターを作製する。

【００２７】この作製されたターゲティングベクターを
線状化し、エレクトロポレーション（電気穿孔）法等に
よってＥＳ細胞に導入し、相同的組換えを行い、その相
同的組換え体の中から、Ｇ４１８やガンシクロビア（Ｇ
ＡＮＣ）等の抗生物質により相同的組換えを起こしたＥ
Ｓ細胞を選択する。また、この選択されたＥＳ細胞が目
的とする組換え体かどうかをサザンブロット法等により
確認することが好ましい。その確認されたＥＳ細胞のク
ローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェクション
し、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメラマウス
を作製する。このキメラマウスを野生型のマウスとイン
タークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得ることが
でき、また、このヘテロ接合体マウスをインタークロス
させることによって、本発明の本発明のペプチドノック
アウトマウスを作製することができる。また、本発明の
ペプチドノックアウトマウスが生起しているかどうかを
確認する方法としては、例えば、上記の方法により得ら
れたマウスからＲＮＡを単離してノーザンブロット法等
により調べたり、またこのマウスの発現をウエスタンブ
ロット法等により調べる方法がある。

【００２８】本発明のペプチドのトランスジェニックマ
ウスは、本発明のペプチドをコードするｃＤＮＡにチキ
ンβ−アクチン、マウスニューロフィラメント、ＳＶ４
０等のプロモーター、及びラビットβ−グロビン、ＳＶ
４０等のポリＡ又はイントロンを融合させて導入遺伝子
を構築し、該導入遺伝子をマウス受精卵の前核にマイク
ロインジェクションし、得られた卵細胞を培養した後、
仮親のマウスの輸卵管に移植し、その後被移植動物を飼
育し、産まれた仔マウスから前記ｃＤＮＡを有する仔マ
ウスを選択することによりかかるトランスジェニックマ
ウスを創製することができる。また、ｃＤＮＡを有する
仔マウスの選択は、マウスの尻尾等より粗ＤＮＡを抽出
し、導入した本発明のペプチドをコードする遺伝子をプ
ローブとするドットハイブリダイゼーション法や、特異
的プライマーを用いたＰＣＲ法等により行うことができ
る。

【００２９】また、上記本発明のペプチドをコードする
ＤＮＡ、本発明のペプチド、本発明のペプチドとマーカ
ータンパク質及び／又はペプチドタグとを結合させた融
合ペプチド、本発明のペプチドに対する抗体、本発明の
ペプチドをコードするＤＮＡが組み込まれた発現ベクタ
ー、本発明のペプチドを発現することができる発現系を
含んでなる細胞等は、ＡＰＳの予防や治療に有用に用い
ることができるばかりでなく、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞
の誘導等免疫応答のメカニズムの解明にも使用すること
ができる。

【００３０】本発明の抗リン脂質抗体産生誘導活性抑制
又は促進物質のスクリーニング方法としては、被検物質
と、β₂ＧＰＩと、Ｖβ７及び／又はＶβ８をもつＴＣ
Ｒを有するβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞とを用い、該Ｔ細胞
における抗リン脂質抗体産生誘導活性を測定・評価する
方法を挙げることができ、例えば、被検物質の存在下に
β₂ＧＰＩを用いて末梢血中の上記β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細
胞をインビトロで刺激し、該末梢血中の抗リン脂質抗体
産生量を測定し、対照としての被検物質非存在下におけ
る場合と比較することにより抗リン脂質抗体産生誘導活
性抑制又は促進物質をスクリーニングすることができ
る。上記Ｖβ７及び／又はＶβ８をもつＴＣＲを有する
β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞としては、Ｖβ７．１若しくは
Ｖβ７．２及び／又はＶβ８．１若しくはＶβ８．２を
もつＴＣＲを有するβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞が好まし
い。また、例えば被検物質がβ₂ＧＰＩのアンタゴニス
トの場合、かかる被検物質は抗リン脂質抗体産生誘導活
性抑制物質としてＡＰＳの治療予防剤として用いること
ができる可能性がある。また、他の態様の本発明の抗リ
ン脂質抗体産生誘導活性抑制又は促進物質のスクリーニ
ング方法としては、前記ノックアウトマウスやトランス
ジェニックマウス等の非ヒト動物に被検物質を投与し、
該非ヒト動物の血中における抗リン脂質抗体産生量を測
定・評価する方法を挙げることができる。例えば、被検
物質を投与したトランスジェニックマウスの血中におけ
る抗リン脂質抗体産生量が対照に比べて有意に低下した
ときは、かかる被検物質は抗リン脂質抗体産生誘導活性
抑制物質としてＡＰＳの治療予防剤として用いることが
できる可能性がある。

【００３１】本発明の抗リン脂質抗体症候群治療予防剤
としては、本発明のペプチドを有効成分とするワクチン
や、本発明のペプチドとアジュバンドとを有効成分とす
るワクチンを挙げることができ、上記本発明のペプチド
は担体との結合物とすることもできる。これらの治療予
防剤には、通常の製薬上の賦形剤を含んでいてもよく、
体内に静注等により投与されることにより、かかる本発
明のペプチドに対する抗体の産生が促され、かかる抗体
によりβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞による抗リン脂質抗体産
生誘導が抑制される。これらのことから明らかなよう
に、本発明の前記抗体も抗体ワクチンとして、本発明の
抗リン脂質抗体症候群治療予防剤として有用である。

【００３２】本発明の他の態様の抗リン脂質抗体症候群
治療予防剤としては、本発明のペプチドをコードするＤ
ＮＡが組み込まれた発現ベクターや、本発明のペプチド
を発現することができる発現系を含んでなる細胞を有効
成分とするＤＮＡワクチンや細胞ワクチンを例示するこ
とができる。これらワクチンは、生体内で本発明のペプ
チドを産生することができることから、上記ワクチンと
同様に、生体内に本発明のペプチドに対する抗体の産生
を促し、かかる抗体によりβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞によ
る抗リン脂質抗体産生誘導を抑制することができる。ま
た、本発明の他の態様の抗リン脂質抗体症候群治療予防
剤としては、本発明のペプチドを抗原として提示するこ
とができる樹状細胞を有効成分とする樹状細胞ワクチン
を挙げることができる。かかる樹状細胞ワクチンは、樹
状細胞を本発明のペプチドで刺激することにより調製す
ることができ、該樹状細胞表面に提示されたＭＨＣII結
合抗原によりＴ細胞が誘発され、その結果本発明のペプ
チドに特異的な抗体産生が促されることになる。この本
発明のペプチドの強力な抗原提示細胞である樹状細胞は
生体内投与により免疫誘導を行うことができる他、養子
免疫療法においても有効に用いることができる。さら
に、本発明の他の態様の抗リン脂質抗体症候群治療予防
剤としては、ＣＤＲ３を含まないＴＣＲＶβ７、好まし
くはＴＣＲＶβ７．１やＴＣＲＶβ７．２、及びＣＤＲ
３を含まないＴＣＲＶβ８、好ましくはＴＣＲＶβ８．
１やＴＣＲＶβ８．２の可変領域（ＣＤＲ１，ＣＤＲ
２）のアミノ酸配列を含むペプチドを挙げることがで
き、これらのペプチドを用いると、ＴＣＲＶβ７陽性Ｔ
細胞やＴＣＲＶβ８陽性Ｔ細胞に対する免疫反応が誘発
され、その結果これらのペプチドに特異的な抗体産生が
促されることになる。ＴＣＲＶβ７．１、ＴＣＲＶβ
７．２、ＴＣＲＶβ８．１及びＴＣＲＶβ８．２のアミ
ノ酸配列を図１に示す。なお、これらＶβ７（７．１、
７．２）及びＶβ８（８．１、８．２）の塩基配列はい
ずれもすでにGenBankに登録されているが、ゲノムの塩
基配列（アクセッション番号：U66059、L36092）あるい
は何らかのＴ細胞株のＴＣＲのｍＲＮＡの塩基配列（ア
クセッション番号：X57728、AJ403831など）として登録
されているため、個々のＶβセグメントとしてのアクセ
ッション番号は付されていない。

【００３３】

【実施例】以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具体
的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの実施
例に限定されるものではない。なお、対象として、これ
までに血栓症又は流産を繰り返していたＡＰＳ患者５例
（Ｐ１〜Ｐ５の全例が抗リン脂質抗体陽性であり、末梢
血中にβ₂ＧＰＩと反応するＴ細胞を有する）及び健常
人コントロール３例（Ｄ１〜Ｄ３の全例が抗リン脂質抗
体陰性）を用いた。

【００３４】（β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞のＴＣＲの同
定）末梢血単核球分画から分離した末梢血Ｔ細胞を、イ
ンターロイキン２の存在下において、大腸菌で発現させ
たリコンビナントβ₂ＧＰＩ（１０μｇ／ｍｌ）及び自
己抗原提示細胞（末梢血単核球）で１週間おきに２回刺
激することにより、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株を樹立し
た。このβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株（２×１０ ⁶個）から
グアニジン−塩化セシウム超遠心法により全ＲＮＡを抽
出し、２μｇの全ＲＮＡをテンプレイトとして、oligo
(dT)プライマーと逆転写酵素AMV Reverse Transcriptas
e（Takara社製）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。

【００３５】文献（Biotechniques 13, 248, 1992）記
載の方法に従って、ＴＣＲのＶβ１〜２４の塩基配列に
相補的な２６種類のプライマーと、共通するＣβ領域の
プライマーのセット（サワディー社製）とを用いて各Ｖ
βごとにＰＣＲを行うことによってＴＣＲのＤＮＡを増
幅した。なお、ＰＣＲの反応条件は、反応酵素にＥｘ−
Ｔａｑ（Takara）を使用し、熱変性９４℃で３０秒間、
アニーリング６５℃で３０秒間、伸長反応７２℃で１分
間というサイクルで３２サイクル行った。得られた各Ｐ
ＣＲ産物はアガロースゲル電気泳動後のデンシトメトリ
ーにより解析し、末梢血Ｔ細胞に比べてβ₂ＧＰＩ反応
性Ｔ細胞株で増加したＶβを、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞
により用いられているＴＣＲβ鎖の候補とした。候補と
したこれらＶβのＰＣＲ産物２μｌにホルムアミド溶液
（９５％のホルムアミド、２０ｍＭのＥＤＴＡ）を４８
μｌ加え、１００℃で５分間熱処理することにより一本
鎖ＤＮＡを調製し、一本鎖コンフォメーション多型性
（single-strand conformationpolymorphisms：ＳＳＣ
Ｐ）の解析を行った。

【００３６】上記β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株のＳＳＣＰ
解析の結果を表１に示す。この結果からもわかるよう
に、ＡＰＳ患者及び健常人全例においてβ₂ＧＰＩ反応
性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖が得られた。得られたβ₂ＧＰＩ
反応性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖には各種Ｖβが用いられてい
ることがわかった。その中で、Ｖβ７は８例中６例（Ａ
ＰＳ患者４例、健常人２例）に、Ｖβ８は８例中４例
（ＡＰＳ患者２例、健常人２例）に高頻度で検出されて
いた。今回検討した全例においてＶβ７、Ｖβ８のいず
れかがβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に用いられていたことか
ら、Ｖβ７やＶβ８をβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に用いら
れる主要なＶβセグメントと考えた。

【００３７】

【表１】

【００３８】上記ＳＳＣＰ解析の結果、β₂ＧＰＩ反応
性Ｔ細胞株においてオリゴクローナルに増殖したＶβ
７、Ｖβ８を有するＴＣＲβ鎖をコードするＤＮＡを、
ＳＳＣＰ解析後のゲルから回収し、それらの塩基配列を
ＤＮＡシークエンサー（Applied Biosystems社製）によ
り決定した。Ｖβ７陽性の６つのＴＣＲ（Ｐ２、Ｐ３、
Ｐ４、Ｐ５、Ｄ２）及びＶβ８陽性の３つのＴＣＲ（Ｐ
５、Ｄ１、Ｄ２）の塩基配列を、それぞれ配列番号１
（Ｐ２）、配列番号２（Ｐ３）、配列番号３（Ｐ３〜
５）、配列番号４（Ｄ２）、配列番号５（Ｐ５）、配列
番号６（Ｄ１）及び配列番号７（Ｄ２）に示す。また、
それらＴＣＲの塩基配列から予測されるアミノ酸配列を
表２並びに配列番号８（Ｐ２）、配列番号９（Ｐ３）、
配列番号１０（Ｐ３〜５）、配列番号１１（Ｄ２）、配
列番号１２（Ｐ５）、配列番号１３（Ｄ１）及び配列番
号１４（Ｄ２）に示す。

【００３９】

【表２】

【００４０】ＴＣＲβ鎖の塩基配列はＮＣＢＩ（Nation
al Center for Biotechnology Information；http://ww
w.ncbi.nlm.nih.gov/)のサイトでホモロジー検索を行
い、相同性のある既知の遺伝子及びアミノ酸配列を検索
した。この結果、いずれのＴＣＲβ鎖の塩基配列やアミ
ノ酸配列に一致する配列はGenBankに登録されていなか
った。次にＶβ、Ｊβ及びＣβ遺伝子セグメントを既知
の配列から調べてみた。この結果、Ｖβ７陽性ＴＣＲに
おいては、Ｖβ遺伝子としてはＶβ７．１又はＶβ７．
２が、Ｊβ遺伝子としてはＪβ１．１、Ｊβ１．２又は
Ｊβ１．６が、Ｃβ遺伝子としてはＣβ１が用いられて
いたが、Ｖβ８陽性ＴＣＲにおいては、Ｖβ遺伝子とし
てはＶβ８．１／Ｖβ８．２（塩基配列を決定した部分
ではいずれのＶβ遺伝子かは鑑別が不可能）が、Ｊβ遺
伝子としてはＪβ２．３又はＪβ２．７が、Ｃβ遺伝子
としてはＣβ２が用いられていた。

【００４１】また、全てのＶβ７陽性ＴＣＲβ鎖のＣＤ
Ｒ３のアミノ酸配列では、Thr-Gly-Xaa-Xaa-Asn（配列
番号１５）若しくは類似したモチーフが確認できた。こ
のＣＤＲ３のアミノ酸数（ＣＤＲ３長）は健常人由来の
Ｄ２を除いては全て１２〜１３個であった。注目すべき
ことに、３人のＡＰＳ患者（Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５）から全
く同一のアミノ酸配列を持つＴＣＲβ鎖が検出された。
一方、Ｖβ８陽性ＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列
ではPro- Xaa-Ala-Xaa-Xaa-Asp/Glu-Xaa-Gln-Tyr （配
列番号１９）という配列が見られ、かかるアミノ酸配列
も９〜１０個と共通していた。以上のことから、β₂Ｇ
ＰＩ反応性Ｔ細胞には限られたＣＤＲ３のモチーフを有
するＶβ７又はＶβ８陽性のＴＣＲβ鎖が用いられてい
ることがわかった。

【００４２】次に、ＳＳＣＰ法により得られたＴＣＲβ
鎖がβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞由来であることを確認する
ために、ＡＰＳ患者２例（Ｐ４、Ｐ２）から樹立された
β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞株から限界希釈法によりβ₂ＧＰ
Ｉと反応する単一のＴ細胞集団（β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細
胞クローン）を計３株樹立し、この樹立したβ₂ＧＰＩ
反応性Ｔ細胞クローンのＴＣＲβ鎖を、前記と同様に各
Ｖβのプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲ法により検出
し、ＤＮＡシークエンサーを用いて塩基配列を決定し
た。β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞クローンの塩基配列から推
測されるアミノ酸配列を表３に示す。この結果から、Ｐ
４から樹立した２つのクローン（Ｐ１−２、Ｐ１−７）
のＴＣＲβ鎖の塩基配列はＣＤＲ３の塩基配列も含め
て、ＡＰＳ患者３例（Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５）に共通して見
い出された塩基配列と一致していた。また、Ｐ２から樹
立したクローン（Ｐ３−３）の塩基配列及びアミノ酸配
列は、同じ患者からＳＳＣＰ法で検出されたＶβ７陽性
のＴＣＲβ鎖のものと一致していた。これらのことか
ら、これらＴＣＲβ鎖はβ₂ＧＰＩ由来の抗原ペプチド
を認識することが認められた。

【００４３】

【表３】

【００４４】（ＴＣＲＶβ７又はＶβ８陽性Ｔ細胞除去
によるin vitroでの抗リン脂質抗体産生に及ぼす影響の
検討）本発明者らはこれまで、ＡＰＳ患者の末梢血単核
球をリコンビナントβ₂ＧＰＩ存在下で培養すると上清
中に抗リン脂質抗体が産生されることを報告している
（Arthritis Rheum 43, 65-75, 2000）。この反応は抗
原刺激により活性化されたβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞がＢ
細胞を刺激して抗リン脂質抗体産生を誘導することか
ら、ＡＰＳ患者３例（Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４）において、β
₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に用いられているＴＣＲＶβ７、
Ｖβ８陽性Ｔ細胞を除去することで、抗リン脂質抗体の
産生が抑制されるかどうかをin vitroで調べてみた。Ａ
ＰＳ患者３例（Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４）から得られた末梢血
単核球を、ＲＰＭＩ１６４０培地中でヒトＴＣＲＶβ７
又はＶβ８に対するマウス由来モノクローナル抗体、抗
Ｖβ７抗体（Immunotech社製）又は抗Ｖβ８抗体（Immu
notech社製）と室温で３０分間反応させ、さらに微細鉄
粒子結合抗マウスＩｇＧ抗体（Dynal社製）と室温で３
０分間反応させた。反応後、鉄粒子が結合したＴ細胞を
磁気装置（Promega社製）により除去し、Ｖβ７又はＶ
β８陽性Ｔ細胞を除去した末梢血単核球［Ｖβ７
（−）、Ｖβ８（−）］を調製した。また、コントロー
ルとしてβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に用いられていないＶ
β２陽性Ｔ細胞を、ヒトＴＣＲＶβ２に対するマウス由
来モノクローナル抗体、抗Ｖβ２抗体（Immunotech社
製）を用いて除去し、Ｖβ２陽性Ｔ細胞を除去した末梢
血単核球［Ｖβ２（−）］を調製した。

【００４５】末梢血単核球及び各ＴＣＲＶβ鎖を発現す
るＴ細胞（Ｖβ２，７，８陽性Ｔ細胞）を除去した末梢
血単核球を、１０μｇ／ｍｌのリコンビナントβ₂ＧＰ
Ｉを含有したＲＰＭＩ１６４０培地により３７℃で１０
日間培養し、上清中に産生された抗リン脂質抗体をＥＬ
ＩＳＡキット（ヤマサ社製）を用いて測定した。結果を
図２に示す。この結果から、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に
Ｖβ７が用いられていたＡＰＳ患者２例（Ｐ３、Ｐ４）
ではＶβ７陽性Ｔ細胞の除去により抗リン脂質抗体産生
はほぼ完全に抑制された。一方、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細
胞においてＶβ８が用いられていたＡＰＳ患者Ｐ１で
は、Ｖβ７陽性Ｔ細胞除去による抗リン脂質抗体産生抑
制は見られなかったが、Ｖβ８陽性Ｔ細胞除去により抗
リン脂質抗体産生が抑制された。

【００４６】以上のことから、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞
のＴＣＲβ鎖には高頻度にＶβ７が用いられており、Ｖ
β７が検出されなかった例ではＶβ８が用いられていた
ことや、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞のＴＣＲβ鎖のＣＤＲ
３には特定のアミノ酸モチーフが検出されたことや、Ｖ
β７又はＶβ８陽性Ｔ細胞の除去によりＡＰＳ患者末梢
血単核球からの抗リン脂質抗体産生が抑制されることが
わかった。したがって、β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞のＴＣ
Ｒβ鎖には非常に限定された構造が存在し、それらＴＣ
Ｒβ鎖を標的（目印）としてβ₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞を
除去すれば抗リン脂質抗体産生の抑制を介したＡＰＳの
新たな治療法になり得ると考えられる。

【００４７】

【発明の効果】本発明によると、副作用のないＡＰＳの
治療・予防剤として有用なペプチド、すなわちＡＰＳの
原因物質である抗リン脂質抗体の産生を誘導するβ₂Ｇ
ＰＩ反応性Ｔ細胞に対する免疫反応を誘発するペプチド
や、かかるペプチドを有効成分とするＡＰＳ治療予防剤
等を提供することができる。

【００４８】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> KEIO UNIVERSITY <120> A variable region of Tcell receptor for the treatment of anti-phospholipid syndrome <130> 000000087 <140> <141> <160> 19 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 309 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 cctgaatgcc ccaacagctc tctcttaaac cttcacctac acgccctgca gccagaagac 60 tcagccctgt atctctgcgc cagcagccaa ttttggacag ggaggaacgg cggctacacc 120 ttcggttcgg ggaccaggtt aaccgttgtg gaggacctga acaaggtgtt cccacccgag 180 gtcgctgtgt ttgagccatc agaagcagag atctcccaca cccaaaaggc cacactggtg 240 tgcctggcca caggtatctt ccctgaccac gtggagctga gctggtgggt gaatgggaag 300 gaggtgcac 309 <210> 2 <211> 312 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 cctgaatgcc ccaacagctc tctcttaaac cttcacctac acgccctgca gccagaagac 60 tcagccctgt atctctgcgc cagcagccaa gctggacgga caggaggtga tcagccccag 120 cattttggtg atgggactcg actctccatc ctagaggacc tgaacaaggt gttcccaccc 180 gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca gagatctccc acacccaaaa ggccacactg 240 gtgtgcctgg ccacaggtat cttccctgac cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg 300 aaggaggtgc ac 312 <210> 3 <211> 309 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 cctgaatgcc ccaacagctc tcacttattc cttcacctac acaccctgca gccagaagac 60 tcggccctgt atctctgtgc cagcagccat gacacagggg cctctaacta tggctacacc 120 ttcggttcgg ggaccaggtt aaccgttgta gaggacctga acaaggtgtt cccacccgag 180 gtcgctgtgt ttgagccatc agaagcagag atctcccaca cccaaaaggc cacactggtg 240 tgcctggcca caggtatctt ccctgaccac gtggagctga gctggtgggt gaatgggaag 300 gaggtgcac 309 <210> 4 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 cctgaatgcc ccaacagctc tcacttattc cttcacctac acaccctgca gccagaagac 60 tcggccctgt atctctgtgc cagcagccaa gatctggaga cagggggctc aaactataat 120 tcacccctcc actttgggaa tgggaccagg ctcactgtga cagaggacct gaacaaggtg 180 ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 240 gccacactgg tgtgcctggc cacaggtatc ttccctgacc acgtggagct gagctggtgg 300 gtgaatggga aggaggtgca c 321 <210> 5 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 tggtacagac agaccatgat gcggggactg gagttgctca tttactttaa caacaacgtt 60 ccgatagatg attcagggat gcccgaggat cgattctcag ctaagatgcc taatgcatca 120 ttctccactc tgaagatcca gccctcagaa cccagggact cagctgtgta cttctgtgcc 180 agcaggccca gcgcgggggc agatacgcag tattttggcc caggcacccg gctgacagtg 240 ctcgaggacc tgaaaaacgt gttcccaccc gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca 300 gagatctccc acacccaaaa ggccacactg gtgtgcctgg ccacaggctt ctaccccgac 360 cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg aaggaggtgc ac 402 <210> 6 <211> 399 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 tggtacagac agaccatgat gcggggactg gagttgctca tttactttaa caacaacgtt 60 ccgatagatg attcagggat gcccgaggat cgattctcag ctaagatgcc taatgcatca 120 ttctccactc tgaagatcca gccctcagaa cccagggact cagctgtgta cttctgtgcc 180 agcagtcccc gggccgacta cgagcagtac ttcgggccgg gcaccaggct cacggtcaca 240 gaggacctga aaaacgtgtt cccacccgag gtcgctgtgt ttgagccatc agaagcagag 300 atctcccaca cccaaaaggc cacactggtg tgcctggcca caggcttcta ccccgaccac 360 gtggagctga gctggtgggt gaatgggaag gaggtgcac 399 <210> 7 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 tggtacagac agaccatgat gcggggactg gagttgctca tttactttaa caacaacgtt 60 ccgatagatg attcagggat gcccgaggat cgattctcag ctaagatgcc taatgcatca 120 ttctccactc tgaagatcca gccctcagaa cccagggact cagctgtgta cttctgtgcc 180 agcgggccca gcgcgggggc agatacgcag tattttggcc caggcacccg gctgacagtg 240 ctcgaggacc tgaaaaacgt gttcccaccc gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca 300 gagatctccc acacccaaaa ggccacactg gtgtgcctgg ccacaggctt ctaccccgac 360 cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg aaggaggtgc ac 402 <210> 8 <211> 103 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser Leu Leu Asn Leu His Leu His Ala Leu 1 5 10 15 Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Gln Phe Trp 20 25 30 Thr Gly Arg Asn Gly Gly Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Thr 35 40 45 Val Val Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe 50 55 60 Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val 65 70 75 80 Cys Leu Ala Thr Gly Ile Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp 85 90 95 Val Asn Gly Lys Glu Val His 100 <210> 9 <211> 104 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser Leu Leu Asn Leu His Leu His Ala Leu 1 5 10 15 Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Gln Ala Gly 20 25 30 Arg Thr Gly Gly Asp Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu 35 40 45 Ser Ile Leu Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val 50 55 60 Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu 65 70 75 80 Val Cys Leu Ala Thr Gly Ile Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp 85 90 95 Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His 100 <210> 10 <211> 103 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser His Leu Phe Leu His Leu His Thr Leu 1 5 10 15 Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser His Asp Thr 20 25 30 Gly Ala Ser Asn Tyr Gly Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Thr 35 40 45 Val Val Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe 50 55 60 Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val 65 70 75 80 Cys Leu Ala Thr Gly Ile Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp 85 90 95 Val Asn Gly Lys Glu Val His 100 <210> 11 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser His Leu Phe Leu His Leu His Thr Leu 1 5 10 15 Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Gln Asp Leu 20 25 30 Glu Thr Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Ser Pro Leu His Phe Gly Asn Gly 35 40 45 Thr Arg Leu Thr Val Thr Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu 50 55 60 Val Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys 65 70 75 80 Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Ile Phe Pro Asp His Val Glu 85 90 95 Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His 100 105 <210> 12 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Trp Tyr Arg Gln Thr Met Met Arg Gly Leu Glu Leu Leu Ile Tyr Phe 1 5 10 15 Asn Asn Asn Val Pro Ile Asp Asp Ser Gly Met Pro Glu Asp Arg Phe 20 25 30 Ser Ala Lys Met Pro Asn Ala Ser Phe Ser Thr Leu Lys Ile Gln Pro 35 40 45 Ser Glu Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Arg Pro Ser 50 55 60 Ala Gly Ala Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 65 70 75 80 Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu 85 90 95 Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys 100 105 110 Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val 115 120 125 Asn Gly Lys Glu Val His 130 <210> 13 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Trp Tyr Arg Gln Thr Met Met Arg Gly Leu Glu Leu Leu Ile Tyr Phe 1 5 10 15 Asn Asn Asn Val Pro Ile Asp Asp Ser Gly Met Pro Glu Asp Arg Phe 20 25 30 Ser Ala Lys Met Pro Asn Ala Ser Phe Ser Thr Leu Lys Ile Gln Pro 35 40 45 Ser Glu Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Pro Arg 50 55 60 Ala Asp Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Thr 65 70 75 80 Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 85 90 95 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 100 105 110 Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 115 120 125 Gly Lys Glu Val His 130 <210> 14 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Trp Tyr Arg Gln Thr Met Met Arg Gly Leu Glu Leu Leu Ile Tyr Phe 1 5 10 15 Asn Asn Asn Val Pro Ile Asp Asp Ser Gly Met Pro Glu Asp Arg Phe 20 25 30 Ser Ala Lys Met Pro Asn Ala Ser Phe Ser Thr Leu Lys Ile Gln Pro 35 40 45 Ser Glu Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Pro Ser 50 55 60 Ala Gly Ala Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 65 70 75 80 Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu 85 90 95 Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys 100 105 110 Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val 115 120 125 Asn Gly Lys Glu Val His 130 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Thr Gly Xaa Xaa Asn 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Thr Gly Ala Ser Asn 1 5 <210> 17 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 agccatgaca caggggcctc taactatggc tacacc 36 <210> 18 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ser His Asp Thr Gly Ala Ser Asn Tyr Gly Tyr Thr 1 5 10 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Pro Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Tyr 1 5

【図面の簡単な説明】

【図１】ＴＣＲＶβ７（７．１、７．２）及びＶβ８
（８．１、８．２）のアミノ酸配列を示す図である。

【図２】Ｖβ７及びＶβ８陽性Ｔ細胞除去のin vitroで
の抗リン脂質抗体産生の抑制効果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０８５ 45/00 Ａ６１Ｐ 9/00 ４Ｃ０８７ 48/00 15/06 ４Ｈ０４５Ａ６１Ｐ 9/00 43/00 15/06 Ｃ０７Ｋ 14/705 43/00 16/28 Ｃ０７Ｋ 14/705 19/00 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 19/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/21 33/50 Ｚ 5/10 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/15 33/577 Ｂ 33/50 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 33/53 21/08 33/577 Ｃ１２Ｒ 1:91） // Ｃ１２Ｐ 21/02 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｒ 1:91）Ａ６１Ｋ 37/02 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＡＣ１２Ｒ 1:91）ＢＣ１２Ｒ 1:91）Ｆターム(参考） 2G045 AA29 AA40 CA18 CA25 CB17 DA13 DA36 DA77 FB03 4B024 AA01 AA11 BA44 BA63 CA04 DA02 EA04 GA14 HA01 4B064 AG01 AG20 AG27 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA91X AA93Y AB01 BA02 BA03 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA13 AA16 BA01 BA16 BA17 BA18 BA21 NA14 ZA362 ZA812 ZC412 4C085 AA13 AA14 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 NA14 ZA36 ZA81 ZC41 4H045 AA10 AA11 BA10 BA41 CA42 DA50 DA76 EA20 EA50 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗リン脂質抗体産生を誘導するベータ２
グリコプロテインＩ（β₂ＧＰＩ）反応性Ｔ細胞に対す
る免疫反応を誘発するペプチドであって、β₂ＧＰＩ反
応性Ｔ細胞の表面に存在するＴ細胞レセプター（ＴＣ
Ｒ）のアミノ酸配列を有することを特徴とする実質的に
純粋な単鎖ペプチド。
【請求項２】 β₂ＧＰＩ反応性Ｔ細胞に対する免疫反
応を誘発するペプチドが、ＴＣＲのＣＤＲ３のアミノ酸
配列を含むペプチドであることを特徴とする請求項１記
載の実質的に純粋な単鎖ペプチド。
【請求項３】ＴＣＲのＣＤＲ３が、ＴＣＲβ鎖のＣＤ
Ｒ３であることを特徴とする請求項２記載の実質的に純
粋な単鎖ペプチド。
【請求項４】ＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３が、ＴＣＲＶβ７
のＣＤＲ３であることを特徴とする請求項３記載の実質
的に純粋な単鎖ペプチド。
【請求項５】ＴＣＲＶβ７のＣＤＲ３のアミノ酸配列
が、Thr-Gly-Xaa-Xaa-Asn （Xaa は任意のアミノ酸を表
す。）を含むアミノ酸配列であることを特徴とする請求
項４記載の実質的に純粋な単鎖ペプチド。
【請求項６】 Thr-Gly-Xaa-Xaa-Asn を含むアミノ酸配
列が、Thr-Gly-Ala-Ser-Asn を含むアミノ酸配列である
ことを特徴とする請求項５記載の実質的に純粋な単鎖ペ
プチド。
【請求項７】 Thr-Gly-Ala-Ser-Asn を含むアミノ酸配
列が、Ser-His-Asp-Thr-Gly-Ala-Ser-Asn-Tyr-Gly-Tyr-
Thr を含むアミノ酸配列であることを特徴とする請求項
６記載の実質的に純粋な単鎖ペプチド。
【請求項８】ＴＣＲβ鎖のＣＤＲ３が、ＴＣＲＶβ８
のＣＤＲ３であることを特徴とする請求項３記載の実質
的に純粋な単鎖ペプチド。
【請求項９】ＴＣＲＶβ８のＣＤＲ３のアミノ酸配列
が、Pro- Xaa-Ala-Xaa-Xaa-Asp/Glu-Xaa-Gln-Tyr （Xaa
は任意のアミノ酸を表す。）を含むアミノ酸配列であ
ることを特徴とする請求項８記載の実質的に純粋な単鎖
ペプチド。
【請求項１０】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドをコードするＤＮＡ又はその相補的配列。
【請求項１１】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドと、マーカータンパク質及び／又はペプチドタグとを
結合させた融合ペプチド。
【請求項１２】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドに特異的に結合する抗体。
【請求項１３】抗体がモノクローナル抗体であること
を特徴とする請求項１２記載の抗体。
【請求項１４】請求項１２又は１３記載の抗体が特異
的に結合する組換えペプチド。
【請求項１５】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドをコードするＤＮＡが組み込まれたことを特徴とする
発現ベクター。
【請求項１６】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドを発現することができる発現系を含んでなる細胞。
【請求項１７】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドをコードする遺伝子機能が染色体上で欠損したことを
特徴とする非ヒト動物。
【請求項１８】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドを過剰発現することを特徴とする非ヒト動物。
【請求項１９】非ヒト動物が、マウス又はラットであ
ることを特徴とする請求項１７又は１８記載の非ヒト動
物。
【請求項２０】被検物質と、β₂ＧＰＩと、Ｖβ７及
び／又はＶβ８をもつＴＣＲを有するβ₂ＧＰＩ反応性
Ｔ細胞とを用い、該Ｔ細胞における抗リン脂質抗体産生
誘導活性を測定・評価することを特徴とする抗リン脂質
抗体産生誘導活性抑制又は促進物質のスクリーニング方
法。
【請求項２１】請求項１７〜１９のいずれか記載の非
ヒト動物に被検物質を投与し、該非ヒト動物の血中にお
ける抗リン脂質抗体産生量を測定・評価することを特徴
とする抗リン脂質抗体産生誘導活性抑制又は促進物質の
スクリーニング方法。
【請求項２２】請求項２０又は２１記載のスクリーニ
ング方法により得られる抗リン脂質抗体産生誘導活性抑
制物質。
【請求項２３】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドを有効成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症
候群治療予防剤。
【請求項２４】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドとアジュバンドとを有効成分とすることを特徴とする
抗リン脂質抗体症候群治療予防剤。
【請求項２５】請求項１２又は１３記載の抗体を有効
成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治療
予防剤。
【請求項２６】請求項１５記載の発現ベクターを有効
成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治療
予防剤。
【請求項２７】請求項１６記載の細胞を有効成分とす
ることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治療予防剤。
【請求項２８】請求項１〜９のいずれか記載のペプチ
ドを抗原として提示することができる樹状細胞を有効成
分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体症候群治療予
防剤。
【請求項２９】ＴＣＲＶβ７又はＴＣＲＶβ８の可変
領域（ＣＤＲ１，ＣＤＲ２）のアミノ酸配列を含むペプ
チドを有効成分とすることを特徴とする抗リン脂質抗体
症候群治療予防剤。