JP2002087989A - コラーゲンを主成分とする新陳代謝促進剤、免疫強化剤、生体諸機能低下予防改善剤及びこれらを含有する機能食品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】コラーゲンを大量に摂取しなくとも生体内で高
濃度を維持でき、コラーゲンとの相乗作用により、新陳
代謝機能の低下、免疫機能の低下を予防・改善する新陳
代謝機能促進剤、免疫強化剤、生体諸機能低下予防改善
剤剤及びこれらを含有する機能食品を提供すること。 【解決手段】コラーゲン及び／又はコラーゲンの加水分
解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミ
ンを組み合わせて添加してなる組成物を有効成分とす
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、コラーゲン及び／
又はコラーゲンの加水分解物を主成分とする新陳代謝促
進剤、免疫強化剤、生体諸機能低下予防改善剤及びこれ
らを含有する機能食品に関し、詳しくは、コラーゲン及
び／又はコラーゲンの加水分解物にセラミド、イソマル
トオリゴ糖及び脂溶性ビタミンを組み合わせて添加した
組成物を有効成分とする新陳代謝促進剤、免疫強化剤、
生体諸機能低下予防改善剤及びこれらを含有する機能食
品に関する。

【０００２】

【従来の技術】超高度高齢化社会を迎えつつある今日、
加齢変化に伴って生じ易くなる生活習慣病等の様々な疾
患は医療費を増大させ、また今後の介護に与える影響も
大きく重大な問題であり、また、若年層の日常の不規則
な食生活から生じる免疫機能低下症、若年性痴呆症やア
レルギー性疾患などの発症率の上昇も同様に重大な問題
である。このようなことから、医療技術の更なる向上と
共に、食生活（介護食を含む）の見直しと改善が早急に
要求されている。

【０００３】ところで、加齢変化とは、時間の経過と共
に身体に起こるすべての形態的・生理的変化をいい、年
齢と共に生体恒常性の低下、特に新陳代謝機能や免疫機
能が低下し、その結果、すべての器官と組織中の細胞の
萎縮・消失の増大、脂肪酸酸化の亢進、感染症の発症率
の上昇などを招き、各種の疾患に罹り易くなると共に、
これら疾患からの回復が遅れ、場合によっては死へ転帰
することもある。

【０００４】そのため、従来よりこれら加齢変化に伴う
各種疾患に対し、諸種の植物や動物に由来する乾燥粉末
・抽出物、ホルモン剤、抗酸化剤、ＤＨＡ等の高級不飽
和脂肪酸などに関する研究開発が盛んに行われてきてい
る。一方、ヒトの総蛋白質の約３０％を占めるコラーゲ
ンは、近年の結合組織に関する生化学的研究の著しい進
歩によって、単に生体組織の骨格構造の形成のみでな
く、細胞の接着、細胞の増殖や分化などに特異的な作用
を示す重要な機能因子であることも解明されてきてお
り、さらに加齢と共に新陳代謝機能が低下していくの
は、コラーゲン蛋白の新陳代謝機能の低下が引き金とな
るとの報告もある。このように、コラーゲンは量的にも
質的にも生体にとって重要な成分であるにも拘わらず、
これまでのコラーゲンの使用法は皮膚への塗布、すなわ
ち化粧品や軟膏剤への使用が大半であり、経口摂取用で
は健康食品として僅かに使用されるのみで、中高年者の
生体内コラーゲン合成系を高めるためにコラーゲンを経
口摂取させ高濃度のコラーゲンを生体内で維持させると
いう発想は極めて少なく２、３の報告がされているにす
ぎない。例えば特開平７−２７８０１２号公報には、コ
ラーゲン蛋白もしくはその加水分解物を必須成分とした
新陳代謝促進剤及びこれに杜中葉等の抽出物等を配合し
た食品が開示されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記植
物由来や動物由来の乾燥粉末・抽出物やホルモン剤等か
らは、加齢変化に対し十分な効果が得られていない。ま
た、特開平７−２７８０１２号公報の発明のコラーゲン
では、摂取されたコラーゲンが生体内でコラーゲン本来
の機能発現と共に生体内のコラーゲン分解酵素であるコ
ラゲナーゼによるコラーゲン分解機構が作動することへ
の防御・制御が加味された成分が添加されていないた
め、摂取されたコラーゲンの酵素的分解による消失分を
大量摂取で補わなければならないという問題点があっ
た。さらに、コラーゲンに杜中葉等の抽出物等を配合し
た食品においても、コラーゲンの大量摂取を前提とする
ものであり、また抽出物等とコラーゲンとの相乗作用や
増強作用のメカニズムについて生化学的、生理学的ある
いは免疫学的根拠に基づく解明が何らなされていない。

【０００６】そこで、本発明は従来の加齢変化に特徴的
な新陳代謝機能の低下や免疫機能の低下に対する対応策
の問題点を解決するためになされたものであり、コラー
ゲンを大量に摂取しなくとも生体内で高濃度に維持で
き、コラーゲンとの相乗作用により、新陳代謝機能の低
下、免疫機能の低下を予防・改善する新陳代謝機能促進
剤、免疫強化剤、生体諸機能低下予防改善剤剤及びこれ
らを含有する機能食品を提供することを課題とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために、（１）経口的に摂取されたコラーゲン
に対する酵素学的分解抑制方法の検討（２）新生細胞群
に対する活性酸素による破壊阻止方法の検討（３）免疫
担当細胞群の標的部位への遊走を促進させることによる
新生細胞群に対する不測の感染防御方法の検討などを主
眼として、鋭意これらを十分に満足させる天然成分の探
索を進めた。

【０００８】すなわち、本発明者らは、コラーゲン分解
酵素のコラゲナーゼ、繊維質エラスチンの分解酵素のエ
ラスターゼあるいは中性脂肪分解酵素のリパーゼなどの
酵素作用を阻止することが報告されている（Ｌａｔｉ，
Ｅ．ＦｒａｇｒａｎｃｅＪ；２３；８１−８９，１９９
５）セラミドに着目した。セラミドは六単糖（特にガラ
クトース）とスフィンゴシンがエーテル結合し、さらに
数種の脂肪酸とアミド結合した糖脂質を約５０％含有す
る脂質で小麦や米ぬかなどに含まれている。フランスを
中心とした近郊欧州諸国では小麦由来のセラミドが化粧
品や健康食品の素材として用いられているが、日本国内
では化学的合成セラミドが主に化粧品の材料として用い
られているにすぎず、天然セラミドを食品素材として経
口摂取する利用法は殆ど行われていないのが現状であ
り、また経口摂取されたコラーゲンとの併用についての
相互作用は十分に解明されていない。なお、セラミドの
その他の生理作用としては、主に血圧上昇抑制剤（特開
昭６０−１８３９５５号公報参照）、免疫機能活性化剤
（特開平３−２１８４６６号公報参照）、癌細胞増殖抑
制剤（特開平７−２５８１００号公報参照）等が挙げら
れる。

【０００９】また、本発明者らは生体が感染した場合に
特異性免疫系が作動するまでの繋ぎの生体防御機構とし
て非特異性免疫系が作動するに際し多糖体が関与してい
るとのこれまでの報告に基づき、イソマルトオリゴ糖に
着目した。イソマルトオリゴ糖はα−１，４を有するマ
ルトースやマルトースオリゴマーとは異なるα−１，６
からなる分子構造を有しており、糖分解酵素群（α−ア
ミラーゼ、α−グルコシダーゼ等）の作用を受けない非
発酵性である点に特徴があり、イソマルトース、パノー
ス、イソマルトトリ・テトラオースなどを約４０％含有
する熱安定性で吸収性に優れたイソオリゴ糖である。な
お、イソマルトオリゴ糖は甘味性が砂糖（スクロース）
の約５０％で、保湿性や吸湿性に優れているため食品の
食感、品質面での食材として幅広く利用されている。

【００１０】さらに、抗酸化作用を有するビタミンに着
目し、コラーゲンにセラミド、イソマルトオリゴ糖の他
脂溶性ビタミンを添加することを検討した。脂溶性ビタ
ミンは、生体の成長と正常な機能維持に不可欠なビタミ
ンで、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋがあり、さらにビタミン
ＤにはＤ_２とＤ_３がある。

【００１１】本発明者らは、以上説明したセラミド、イ
ソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミンを組み合わせてコ
ラーゲンに添加することによる効果を生化学的、生理学
的及び免疫学的な見地から研究を重ねた結果、顕著な新
陳代謝促進効果、免疫強化効果及び生体諸機能低下予防
改善効果を相乗的に発揮することに想到し本発明を完成
した。すなわち、本発明は、コラーゲン及び／又はコラ
ーゲンの加水分解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及
び脂溶性ビタミンから選ばれる１種又は２種以上を添加
してなる組成物を有効成分とする新陳代謝促進剤、コラ
ーゲン及び／又はコラーゲンの加水分解物にセラミド、
イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミンから選ばれる１
種又は２種以上を添加してなる組成物を有効成分とする
免疫強化剤、コラーゲン及び／又はコラーゲンの加水分
解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミ
ンから選ばれる１種又は２種以上を添加してなる組成物
を有効成分とする生体諸機能低下予防改善剤、コラーゲ
ン及び／又はコラーゲンの加水分解物にセラミド、イソ
マルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミンから選ばれる１種又
は２種以上を添加してなる組成物を含有する機能食品に
関する。なお、新陳代謝促進剤とは、生体内の諸物質の
同化・異化などにより主として生体組織の再生・形成な
どを促進する製剤をいい、生体諸機能低下予防改善剤と
は、新陳代謝機能の低下、免疫機能の低下など生体恒常
性の低下により惹起される各種疾患を予防・改善する製
剤をいう。

【００１２】

【発明の実施の形態】コラーゲンは種々の動物の皮膚、
骨、血管、靱帯、腱等の種々の組織から得られるが、本
発明では由来動物の種類の如何を問わず、また取得され
た組織の如何を問わず広く用いることができる。また、
コラーゲンをアルカリ、酸、加圧により、あるいは酵素
により加水分解することで得られるコラーゲンの加水分
解物を用いることもでき、コラーゲンと併用することも
できる。さらに、コラーゲンの熱変性物であるゼラチン
を用いることもできる。

【００１３】セラミドは小麦、米ぬか、麹などに多量に
含まれ、また動物細胞にも含まれている。また、セラミ
ドは化学的合成によっても製造される。本発明では天然
物由来のセラミドを好適に用いることができ、天然物に
由来する限りいずれに由来するセラミドをも用いること
ができる。なお、天然物由来セラミドは市販品を容易に
入手することができる。

【００１４】イソマルトオリゴ糖はイモ、米、麦芽など
のデンプンに特殊な糖転移酵素を作用させて製造され、
市販品を容易に入手できる。

【００１５】脂溶性ビタミンは、ビタミンＡ、Ｄ_３及び
Ｅを併用することが好ましく、ビタミンＡ、Ｄ_３、Ｅは
各々の単品を用いてもよいが、以下に述べるビタミンＭ
Ｖを用いることがさらに好ましい。すなわち、ビタミン
ＭＶとは３種の脂溶性ビタミンＡ、Ｄ_３、Ｅを含む複合
ビタミンで、特殊な可溶化液で粒子内に封入（粒径：平
均０．０１μｍ）し、水に容易に溶解でき（可溶化油溶
性ビタミン）、しかもドライ脂溶性ビタミン類よりも自
然酸化に対する安定性に優れ、加熱滅菌や長期保存でも
ビタミン残有率に優れている。また、ビタミンＭＶはビ
タミンＡ、Ｄ_３、Ｅを各々３０００ＩＵ／ｇ、２５０Ｉ
Ｕ／ｇ、１３．５ｍｇ／ｇ含み、例えば、１日当たり
０．６ｇのビタミンＭＶを摂取すれば、第５次日本人の
栄養所要量（ビタミンＡ：１８００ＩＵ／日、ビタミン
Ｄ３：１５０ＩＵ／日、ビタミンＥ：８ｍｇ／日）に十
分に達することになる。そこで、以下の説明における脂
溶性ビタミンはビタミンＭＶにより行うこととする。

【００１６】コラーゲンにセラミド、イソマルトオリゴ
糖及びビタミンＭＶを組み合わせ添加されてなる組成物
を有効成分とする本発明の新陳代謝促進剤、免疫強化剤
及び生体諸機能低下予防改善剤の投与形態は、経口投与
が一般的であるがこれに限定されない。また、剤型も用
途に応じて適宜選択でき、薬学的に許容される賦形剤、
結合剤、崩壊剤、軟膏基剤などを用いて散剤、顆粒剤、
錠剤、カプセル剤、座剤、軟膏剤などの剤型とできる。
さらに、本発明の新陳代謝促進剤、免疫強化剤及び生体
諸機能低下予防改善剤はそれらの薬効を失わない限り他
の薬効を有する製剤（動植物由来を含む）を配合して医
療用製剤として供することができる。例えば、本発明の
免疫強化剤に抗菌剤、制癌剤あるいはサイトカイン類を
配合したり、また、本発明の新陳代謝促進剤に動物由来
コンドロイチンを添加して皮膚のシミ・シワ形成予防・
消去促進軟膏剤や化粧品として供することができる。ま
た、植物性抗菌成分や抗生剤を添加した軟膏剤や湿布剤
を床ずれ、皮膚炎、外傷治療剤として供することもでき
る。

【００１７】また、本発明の新陳代謝促進剤、免疫強化
剤及び生体諸機能低下予防改善剤の有効成分を含有させ
て機能食品を供することができる。これらの機能食品を
摂取することにより新陳代謝機能が促進され、また免疫
機能の強化が図られると共に、特に加齢変化に顕著な生
体恒常性の低下を予防・改善でき、介護食や栄養補給食
・補給液に配合してもよい。また、ゼリー、キャンディ
ー、ビスケット、チョコレートなどに添加することもで
き、さらにこれらにＬ−酒石酸、結晶クエン酸、クエン
酸ナトリウム、ソルビット、果実香料、麦芽水飴などを
適宜添加することもでき、また飲料として供することも
できる。

【００１８】本発明のコラーゲンにセラミド、イソマル
トオリゴ糖及びビタミンＭＶの３種が添加された組成物
における各成分の配合割合は、コラーゲン及び／又はコ
ラーゲンの加水分解物１００重量部に対し、セラミド
０．２〜０．６重量部、イソマルトオリゴ糖２０〜６０
重量部、ビタミンＭＶ２〜６重量部が好ましく、コラー
ゲン及び／又はコラーゲンの加水分解物１００重量部に
対し、セラミド０．３〜０．５重量部、イソマルトオリ
ゴ糖３０〜５０重量部、ビタミンＭＶ３〜５重量部がさ
らに好ましい。各成分が下限を下回ればコラーゲン及び
／又はコラーゲンの加水分解物との十分な相乗性が得ら
れないことがあり、また上限を上回れば抗原が飽和状態
になりマクロファージが十分に機能しなくなる虞がある
からである。コラーゲンは必須アミノ酸のトリプトファ
ンを殆ど含んでいないため、過剰に摂取すると必須アミ
ノ酸のバランスを崩す虞がある。そこで、このことを勘
案した上、本発明が新陳代謝促進剤、免疫強化剤及び生
体諸機能低下予防改善剤として所期の効果を十分に発揮
し得るためには、コラーゲン及び／又はコラーゲンの加
水分解物の摂取量は１日当たり５〜１０ｇが好ましい
が、もちろん適用される患者の病状や剤型などに応じ適
宜増減でき、例えば熱傷患者であれば大用量を摂取させ
ることができる。また、上記ではコラーゲンにセラミ
ド、イソマルトオリゴ糖及びビタミンＭＶの３種を添加
する場合の配合割合について説明したが、コラーゲンに
セラミド、イソマルトオリゴ糖、ビタミンＭＶの１種又
は２種を添加する各組成物においても、コラーゲンに対
する各成分の配合割合は上記の配合割合が好適である。
なお、脂溶性ビタミンを各々単品で添加する場合には、
既述のビタミンＭＶの含有単位から換算して計算量を添
加する。

【００１９】

【実施例】次に本発明を実施例を挙げて説明するが、本
発明は以下の実施例に限定されるものではない。

【００２０】参考例１（熱傷マウス創傷部位の作製法と
熱傷創傷面積の測定法）７週齢の正常ｄｄＹ系雌マウス
（平均体重：３０ｇ）の腹腔内に、チオペンタールナト
リウム麻酔剤（ラボナール、万有製薬社製）の０．１ｍ
ｌ（２４ｍｇ／ｍｌ）を投与した後、電気バリカンにて
背部の毛を剃り、電気ゴテ（２ｃｍ×３ｃｍ、１００Ｖ
／１００Ｗ）を除毛表皮面に３秒間当て、熱傷創傷部位
（６ｃｍ ^２、１０％／体表面積）を作製した。この熱創
傷はヒトでの生存限界である３度熱傷に相当する。熱傷
直後及び熱傷後７日毎、２８日間に亘り、麻酔下のマウ
ス背部創傷面にセロファン紙を当てて、セロファン紙上
に創傷面をマーカーでトレースした後、画像解析装置
（Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ、ＭＯＰ−ＡＭ０
３、コントロン社製、ドイツ）にて創傷面積を計測し
た。

【００２１】実施例１（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌
（以下、ＭＲＳＡ菌）の熱傷創傷面における生菌数の推
移と感染抵抗性増強作用） ＭＲＳＡ菌感染実験系は、（１）非摂取対照群（純水摂
取群）（２）コラーゲン（Ｇｅｌａｔｉｎ Ｆａｂｒｉ
ｋｅｎ社製）（以下、ＣＰＨと略すこと有り）単独摂取
群（３）ＣＰＨ＋セラミド（日本油脂社製）（以下、Ｓ
ＧＬと略すこと有り）摂取群（４）ＣＰＨ＋イソマルト
オリゴ糖（三重化糧社製）（以下、ＩＭＯと略すこと有
り）摂取群（５）ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ビタミンＭ
Ｖ（日本油脂社製）（以下、ＦＳＭＶと略すこと有り）
摂取群の計５群（各群３匹宛）を準備し、以下の実験的
ＭＲＳＡ菌の感染実験を行った。マウスに摂取させる摂
取量は、マウスにヒトでの熱傷生存限界度数である３度
に相当する熱傷を付加させたことを考慮し、ヒトの体重
当たりの摂取量の１０倍量にてＣＰＨ（３０ｍｇ／マウ
ス／日）、ＳＧＬ（１０８μｇ／マウス／日）、ＩＭＯ
（１０．８ｍｇ／マウス／日）及びＦＳＭＶ（１．０８
ｍｇ／マウス／日）の各々を調合することとし、熱傷１
日前から熱傷後２１日間（計２２日間）に亘って吸水瓶
からの吸水（１０〜１５ｍｌ／マウス／日）により摂取
させた。なお、この摂取量は以下の各実施例においても
同様である。

【００２２】熱傷２４時間後に熱傷創傷壊死表皮部分を
剥離し、剥離した創傷面にＭＲＳＡ菌液０．１ｍｌ（１
０^８生菌単位＝ＣＦＵ／ｍｌ）を滅菌綿棒で塗布感染さ
せた後、感染直後、７、１４、２１及び２８日目に滅菌
生理食塩水を浸した綿棒にて感染創傷面を拭き取り、綿
棒を０．５ｍｌの滅菌生理食塩水加試験管に移し、創傷
面積当たりの還元生菌数（ＣＦＵ／ｃｍ^２）をスタフィ
ロコッカスＮｏ．１１０寒天培地にて定量した。

【００２３】その結果、図１に示すように、ＣＰＨ単独
摂取群におけるＭＲＳＡ菌感染創傷面からの還元生菌数
（ＣＦＵ／ｃｍ^２）の減少を非摂取対照群のそれと比較
した場合、感染後７〜２８日間に亘って有意差（検定
法：Ｓｔｕｄｅｎｔｔ−ｔｅｓｔ法）は全く認められな
かった。これに対して、ＣＰＨ＋ＳＧＬあるいはＣＰＨ
＋ＩＭＯの摂取群でのＭＲＳＡ菌の還元生菌数の減少推
移は、非摂取対照群よりも良好であり、感染１４日目以
降では有意差のある減少推移が認められた。また、１４
日目におけるＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群の非摂取対照群に対
する有意差（危険率１％以下）は、ＣＰＨ＋ＩＭＯ摂取
群の有意差（危険率５％以下）よりも顕著であった。一
方、ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ摂取群と非摂取
対照群間におけるＭＲＳＡ菌の還元生菌数の有意差は、
感染後７日目からみられ（危険率５％以下）、感染後２
１日目における両者間の有意差は、極めて顕著であった
（危険率０．１％以下）。以上の結果より、創傷面から
のＭＲＳＡ菌排除促進効果を示さなかったコラーゲン
に、セラミド、イソマルトオリゴ糖及びビタミンＭＶを
組み合わせて添加することにより、免疫強化によって熱
傷皮下組織のＭＲＳＡ菌排除促進効果が促進され、特に
コラーゲンにセラミド、イソマルトオリゴ糖及びビタミ
ンＭＶの３種を添加する組成物では極めて顕著な相乗的
作用を示すことが明らかとなった。

【００２４】実施例２（ＭＲＳＡ菌感染創傷面の真皮層
・皮下組織層内の浸潤細胞数と細胞分類） 実施例１に記載した感染実験系５群（非摂取対照群及び
摂取４群）の感染７日目における創傷面の真皮層と皮下
組織層間に１０％胎児牛血清添加イーグルＭＥＭ培養液
（ヘパリン：４単位／ｍｌ）５ｍｌを注入し、背部を十
分に揉みほぐした後、注入培養液を注射器で回収し、そ
の１ｍｌをプラスチックマイクロプレート（６ウエル：
直径３０ｍｍ）に移した。マイクロプレートを２時間保
温後（３７℃、５％ＣＯ_２下）、培養液を静かに除去
し、メタノール固定、ギムザ染色後マイクロプレートの
ウエル上の浸潤細胞分類を顕微鏡下で算定した。

【００２５】表１に示すように、非摂取対照群の浸潤総
細胞数に比べて、摂取４群の浸潤総細胞数はいずれも高
い有意性が観察され、中でもＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋
ＦＳＭＶ摂取群と共に、ＣＰＨ＋ＩＭＯ摂取群における
有意性（危険率０．１％以下）が極めて著しかったこと
から、イソマルトオリゴ糖による結合組織の再生への寄
与が示唆された。なお、非摂取対照群に対するＣＰＨ単
独摂取群の危険率は５％以下で、ＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群
の危険率は１％以下であった。

【００２６】

【表１】

【００２７】また、これら浸潤細胞の細胞分類を行った
ところ、表２に示すように非摂取対照群ではリンパ系細
胞の比率が最も高く（平均９０．５％）、マクロファー
ジ等の網内系細胞は６．１％、上皮性及び繊維芽細胞群
は３．４％にすぎなかった。これに対して、ＣＰＨ単独
摂取群では網内系細胞（マクロファージ様）が約１０％
に増加していたものの、全般的に非摂取対照群の細胞分
類と大差がなかった。他方、ＣＰＨ＋ＩＭＯ摂取群にお
ける網内系細胞とリンパ系細胞の比率は、それぞれ約４
６％、４９％を示し、これら細胞の著しい上昇がみられ
た。特に、マクロファージ様網内系細胞の増加は、ＣＰ
Ｈ＋ＳＧＬ摂取群のそれ（約２５％）よりも極めて顕著
であった。これらの結果は、実施例１で得られたＣＰＨ
＋ＩＭＯ摂取群の１４日目以降にみられた有意性のある
ＭＲＳＡ菌排除促進作用の結果とよく一致していたこと
から、イソマルトオリゴ糖には免疫担当細胞群（マクロ
ファージ等の網内系、リンパ球、ＮＫ細胞等のリンパ
系、好中球等の顆粒球系細胞）の損傷部位や患部への遊
走促進作用、ひいてはこれら細胞群に対する機能増強能
（免疫強化能）を有することが示唆された。他方、ＣＰ
Ｈ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ摂取群で観察されたこれ
ら細胞の分類比率は、正常皮膚組織の有する自然的再生
機構の第一次機転システムにみられる浸潤細胞群の比率
に極めて近い値であったことから、熱傷によって損傷を
受けた皮下組織の再生準備機構はコラーゲンの投与によ
って促進されると共に、コラーゲンにセラミド、イソマ
ルトオリゴ糖及びビタミンＭＶを組み合わせて添加する
ことにより、再生準備機構は相乗的に亢進されることが
細胞学的実験結果から確認された。

【００２８】

【表２】

【００２９】実施例３（熱傷創傷面治癒実験系における
熱傷創傷面積の縮小推移及び創傷面の治癒経過） 熱傷マウスにおける熱傷創傷面治癒実験系は、実施例１
に記載したのと同様の５群のマウス（各群：１０匹）を
準備し、熱傷直後、熱傷後７、１４、２１、及び２８日
目の創傷面積を参考例１の方法で計測した。その結果、
表３に示すように、熱傷直後の創傷面積は６．２３±
０．３６ｃｍ^２で電気ゴテの面積（６ｃｍ ^２）に近い創
傷面が得られた。ＣＰＨ単独摂取群における７、１４、
２１及び２８日目の創傷面積は各々平均５．９８、４．
９３、２．５３及び０．７７ｃｍ^２であり、日数と共に
縮小し、非摂取対照群の７〜２８日目の平均創傷面積よ
りも低い値を示したものの、有意性は実験期間中全く認
められなかった。これに対して、ＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群
では熱傷後７日目（５．６１±０．４２ｃｍ^２）に有意
差（危険率５％以下）が認められ、ＣＰＨ ＋ＩＭＯ摂
取群においても熱傷後１４日目（４．６９±０．６４ｃ
ｍ^２）に有意差（危険率５％以下）が認められた。一
方、ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ摂取群における
創傷面積の縮小推移は、他の摂取群よりも著しく、熱傷
後７日目での創傷面積は５．０１±０．４５ｃｍ^２（危
険率１％以下）であり、１４日目ですでに高い有意性
（危険率０．１％以下）のある創傷面の縮小（２．４３
±０．８４ｃｍ^２）がみられた。なお、ＣＰＨ＋ＳＧＬ
摂取群の上記以外の有意差における危険率は、１４日で
１％以下、２１日で０．１％以下であり、ＣＰＨ＋ＩＭ
Ｏ摂取群では、２１日で５％以下、２８日で１％以下で
あった。

【００３０】

【表３】

【００３１】これらの結果から、コラーゲンにコラゲナ
ーゼやエラスターゼ等の酵素活性阻止作用を有するセラ
ミドを添加したことによって、生体内に摂取されたコラ
ーゲンの酵素的分解が抑制され、さらには免疫担当細胞
群の熱傷創傷面皮下組織への浸潤を促進させたイソマル
トオリゴ糖の添加、あるいは活性酸素消去作用を有する
ビタミンＭＶの添加により熱傷創傷面の治癒促進が極め
て効率良く、かつ速やかに行われたものと考えられる。

【００３２】実施例４（創傷皮下組織の病理組織学的検
討） 上記実施例３で述べた推論を立証するために、以下の検
討を行った。実施例３に記載した５群の実験中、ＣＰＨ
＋ＩＭＯ摂取群を除く４群の１４日目における平均創傷
面積値に最も近いマウス創傷面の皮膚組織を切除し、常
法に準じて処理した。すなわち、脱水（アルコールシリ
ーズ）、固定（１％グルタルアルデヒド、１％パラホル
ムアルデヒド）、パラフィン包理した後、組織切片を作
製した。さらに、スライドグラスに標簿切片を付着・固
定させた後、結合組織繊維を特異的に染め分けられるエ
ラスチカ ファンギーソン染色液にて染色し、皮下組織
内の結合組織（膠原繊維、弾力繊維、その他エラスチン
等の繊維質）の再生・形成の程度を顕微鏡下で観察し
た。

【００３３】その結果は図２に示す通りで、熱傷直後の
皮下組織切片を結合組織の状態、存在部位及び質量につ
いての顕微鏡的観察が可能なエラスチカ ファンギーソ
ン染色液で染色したところ、桃紅色に染色されている層
は全くみられず、組織そのもが壊死状態に陥っており、
ヒトの３度の熱傷に相当する熱傷の影響が真皮層のみな
らず皮下組織層にまで達していた。これに対して、熱傷
１４日目における非摂取対照群の皮下組織切片像では、
繊維芽細胞や上皮性（円形）細胞の真皮層内への浸潤が
著しく、桃紅色に染まった膠原繊維、弾力繊維も僅かで
はあるが認められたが、表皮層再生の進展は殆どみられ
なかった。熱傷１４日目のＣＰＨ単独摂取群では、皮下
組織層の桃紅色に染色された結合組織繊維分は極めて少
量であるものの、非摂取対照群の皮下組織層の染色性よ
りも僅かながら優れており、表皮層の再生も順調である
ものの、なお繊維芽細胞や上皮性細胞の浸潤は皮下組織
全体に認められ、皮下組織再生の初期段階であることが
観察された。これに対して、ＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群での
皮下組織切片を観察したところ、表皮層の再生はほぼ完
了しており、鮮やかな桃紅色に染色された染色部位は表
皮層から皮下組織層に全体的にみられ、繊維芽細胞や上
皮性細胞も僅かであったが、染色された皮下組織層は網
目状が目立っており、皮下組織の完全な再生には至って
いなかった。一方、ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ
摂取群での皮下組織像を観察したところ、真皮層と皮下
組織層の前面が濃桃紅色に染色されており、しかも染色
された膠原繊維の緻密性は、ＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群のそ
れよりも顕著であった。以上のことから、コラーゲンに
セラミド、イソマルトオリゴ糖及びビタミンＭＶを組み
合わせて添加することにより結合組織の再生、ひいては
生体組織の新陳代謝が相乗的に促進されることが病理組
織学的にも明らかになった。

【００３４】実施例５（熱傷創傷面の完全治癒マウス百
分率の推移） 実施例３に記載した５群の熱傷後２１及び２８日目にお
けるマウスの創傷面が完全に治癒した匹数から、完全治
癒マウス百分率の推移を調べた。その結果、表４に示す
ように、ＣＰＨ単独摂取群での熱傷創傷面の完全治癒は
熱傷後（摂取後）２８日目にみられたものの、僅かに１
０％にすぎなかった。これに対して、ＣＰＨ＋ＩＭＯ摂
取群、ＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群及びＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭ
Ｏ＋ＦＳＭＶ摂取群の２１日目における創傷面完全治癒
率は、各々２０％、４０％及び６０％であり、実施例３
と実施例４の実験結果と極めて一致した傾向がみられ
た。また、２８日目のＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群あるいはＣ
ＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ摂取群における完全治
癒率は、５０％及び７０％にまで達した。この実験系か
らも、コラーゲンにセラミド、イソマルトオリゴ糖及び
ビタミンＭＶを組み合わせて添加することにより結合組
織の再生が確実かつ迅速に行われ、生体組織の新陳代謝
が相乗的に促進されることが明らかとなった。

【００３５】

【表４】

【００３６】実施例６（ヒト由来正常皮膚上皮細胞・皮
膚繊維芽細胞の増殖促進作用） 表皮層、真皮層及び皮下組織内の主要細胞である上皮性
細胞や繊維芽細胞の分裂と増殖を亢進させることは、シ
ミ、シワあるいは老化細胞等に対する皮膚・皮下組織の
新陳代謝の促進や細胞の再生・新生の亢進につながるこ
とは容易に考えられる。そこで、以下の実験系によりヒ
ト由来正常皮膚上皮細胞・皮膚繊維芽細胞の増殖促進作
用について検討した。

【００３７】１０％胎児牛血清（以下、ＦＢＳと略すこ
と有り）添加イーグルＭＥＭ培養液にヒト由来正常皮膚
上皮細胞（ＮＣＴＣ２５４４株）及びヒト由来正常皮膚
繊維芽細胞（ＣＲＬ−２０９０株）の１×１０^４コ／ｍ
ｌを浮遊させ、これら細胞浮遊液の各２ｍｌをプラスチ
ックマイクロプレート（６ウエル：３０ｍｍ）に移した
後、２時間保温（３７℃、５％ＣＯ_２下）した。保温
後、ウエル内をリン酸生食緩衝液（ＰＢＳ）で洗浄し、
ミリポアーフイルターにより滅菌済の（１）ＣＰＨ（２
５０μｇ／ｍｌ）単独添加（ＦＢＳ無添加）イーグルＭ
ＥＭ液（２）ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ（ＣＰ
Ｈ：２５０μｇ／ｍｌ、ＳＧＬ：０．９μｇ／ｍｌ、Ｉ
ＭＯ：９０μｇ／ｍｌ、ＦＳＭＶ：９μｇ／ｍｌ）添加
イーグルＭＥＭ液（ＦＢＳ無添加）（３）５％ＦＢＳ添
加イーグルＭＥＭ液（実験対照群）の各４ｍｌを各々ウ
エルに加え、３７℃（５％ＣＯ_２下）で１４日間培養し
た。培養直後、培養後３、７、１０及び１４日目に
（１）、（２）の実験群及び（３）の実験対照群のウエ
ル上の培養細胞を０．２％エチレンジアミン四酢酸ナト
リウム液で剥離し、ウエル当たりの細胞数を顕微鏡下で
計測した。また、ウエル上の７日間培養細胞をメタノー
ル固定、ギムザ染色した後、培養細胞の増殖状態と細胞
形態を顕微鏡下で観察した。

【００３８】その結果、図３に示すように実験対照群に
おける上皮細胞及び繊維芽細胞の増殖推移は、いずれも
培養後３日目からみられ、培養後７日目にほぼ最高閾値
に達した。これに対して、ＣＰＨ単独添加イーグルＭＥ
Ｍ液での上皮細胞の増殖は、培養１４日間を通して殆ど
みられず、繊維芽細胞で培養７〜１０日目に僅かな増殖
がみられたにすぎなかった。一方、ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋Ｉ
ＭＯ＋ＦＳＭＶ添加イーグルＭＥＭ液での上皮細胞と繊
維芽細胞の増殖の程度は実験対象群でのそれよりも多少
とも劣るものの、細胞増殖の推移パターンは殆ど同様で
あった。このように、コラーゲンのみを水溶性ビタミン
類、アミノ酸類、ブドウ糖及び数種のトリカルボン酸を
含むイーグルＥＭＥ液に加えた場合には、上皮細胞や繊
維芽細胞の崩壊や壊死こそみられなかったものの、これ
ら細胞の分裂・増殖過程にまで至らすことは不可能であ
った。この結果から、コラーゲンそのものは複数の増殖
因子を多量に含有している胎児牛血清の代用にはならな
いこと、そしてコラーゲンはこれら細胞に対して、単な
る蛋白源あるいは細胞形態維持等の機能のみ有すること
が示された。これに対して、コラーゲンにセラミド、イ
ソマルトオリゴ糖及びビタミンＭＶをイーグルＭＥＭ液
に添加することによって、培養細胞の増殖は胎児牛血清
添加イーグルＭＥＭ液での増殖とほぼ同様の結果が得ら
れたことから、（ａ）セラミドは全ての生体細胞の細胞
膜上に存在する増殖因子受容体（成分：ホスファチジル
イノシトールリン脂質）に何らかの作用、例えば拮抗的
受容体成分として作用し、コラーゲンの細胞への働きを
何らかの形で促進させる、（ｂ）細胞増殖因子の多くは
糖蛋白であることから、イソマルトオリゴ糖とコラーゲ
ン間で増殖因子的構造成分として細胞膜受容体に作用す
る、（ｃ）脂溶性ビタミン類が含まれていないイーグル
ＭＥＭ液にビタミンＭＶを加えることにより、細胞増殖
機構に何らかの影響を及ぼす、ことが推測された。

【００３９】実施例７（毒性試験・抗原性試験） ｄｄＹ系雌及び雄マウス（５週齢）を１群５匹宛準備
し、コラーゲンにセラミド、イソマルトオリゴ糖及びビ
タミンＭＶを添加した製剤（２倍段階希釈）の経口投
与、皮下投与及び腹腔内投与によりマウスの死亡数を５
日間に亘り記録し、これら投与法における製剤のＬＤ
_５０値をベーレンス・カーバー法に従って求めた。経口
投与及び皮下投与によるＬＤ_５０値は雌雄共に同じ値を
示し、４２００ｍｇ／ｋｇ以上及び６７００ｍｇ／ｋｇ
以上であった。一方、腹腔内投与によるＬＤ_５０値は、
経口投与あるいは皮下投与のそれらよりも４〜６倍も低
い値を示し、雌に対しては１１８０ｍｇ／ｋｇ、雄に対
しては１０４２ｍｇ／ｋｇであった。

【００４０】ｄｄＹ系雌マウス（５週齢）を１群３匹宛
準備し、マウス１匹当たり、上記製剤１００ｍｇ／マウ
ス（約３３３０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に１回接種した
後、１４日目に血液を眼球摘出によって採取分離し、血
清中の製剤（抗原）に対する抗体産生の有無について、
沈降凝集包（抗原抗体反応）にて調べた結果、沈降線と
抗原抗体反応凝集像は、寒天ゲル、ゼラチンゲル層のい
ずれにおいても認められず、抗体の産生は陰性であっ
た。

【００４１】実施例８（軟膏剤） コラーゲン １２ｇ セラミド ６０ｍｇ イソマルトオリゴ糖 ４．５ｇ ビタミンＭＶ ５００ｍｇ に適量の白色ワセリンを加えて全量１００ｇのシミ・シ
ワ形成予防・消去促進軟膏剤を製した。

【００４２】実施例９（機能食品） コラーゲン ５ｇ セラミド ２０ｍｇ イソマルトオリゴ糖 ２ｇ ビタミンＭＶ ２００ｍｇ に果糖ブドウ糖液糖及び香料を加え精製水にて１００ｍ
ｌの飲料を製した。

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、摂取されたコラーゲン
は生体内で高濃度を維持すると共に、コラーゲンとセラ
ミドなどの添加物が相乗的に作用して、顕著に新陳代謝
機能の促進と免疫機能の強化ができるので、熱傷患者の
皮膚組織の再生、シミ・シワの予防・改善などの他、加
齢変化に伴い発症し易くなる生活習慣病や感染症などの
疾患の予防と改善を図ることができる。また、本発明の
コラーゲンにセラミドなどを添加した組成物は安全性に
優れるので、機能食品として日常的に摂取することがで
き、加齢変化に伴う生体恒常性の低下を未然に予防する
ことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】メチシリン耐性黄色ブドウ球菌の熱傷創傷面に
おける生菌数の推移及び感染抵抗性増強作用を示すグラ
フである。 ●印実験系の危険率（７日目：５％以下、１４日目：１
％以下、２１日、２８日：０．１％以下の有意差あり） △印実験系の危険率（１４日、２１日目：５％以下、２
８日目１％以下の有意差あり） ▲印実験系の危険率（１４日、２１日目：１％以下、２
８日目：０．１％以下の有意差あり） ◆印実験系の危険率（７〜２８日目：有意差なし）

【図２】創傷皮下組織の切片像を示す。 １：非摂取対照群 ２：ＣＰＨ単独摂取群 ３：ＣＰＨ＋ＳＧＬ摂取群 ４：ＣＰＨ＋ＳＧＬ＋ＩＭＯ＋ＦＳＭＶ摂取群

【図３】ヒト由来正常皮膚上皮細胞及び皮膚繊維芽細胞
の増殖促進作用を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/164 Ａ６１Ｋ 31/355 31/355 31/593 31/593 31/702 31/702 Ａ６１Ｐ 3/02 １０２ 38/00 37/04 Ａ６１Ｐ 3/02 １０２ 43/00 １０７ 37/04 Ａ２３Ｌ 2/38 Ｄ 43/00 １０７ Ａ６１Ｋ 37/12 // Ａ２３Ｌ 2/52 37/18 2/38 Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ Ｆターム(参考） 4B017 LC03 LK11 LK15 LK16 LL09 4B018 MD20 MD22 MD23 MD27 MD31 ME07 4C084 AA02 BA01 BA08 BA22 CA25 MA02 MA52 NA05 NA06 ZA892 ZB092 ZB222 ZC232 ZC751 4C086 AA01 AA02 EA01 MA03 MA04 NA05 NA06 ZB09 ZB22 ZC23 ZC78 4C206 AA01 AA02 CA08 GA03 GA25 MA03 MA04 MA72 NA05 NA06 ZB09 ZB22 ZC23 ZC75

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】コラーゲン及び／又はコラーゲンの加水分
   解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミ
   ンから選ばれる１種又は２種以上を添加してなる組成物
   を有効成分とする新陳代謝促進剤。
2. 【請求項２】コラーゲン及び／又はコラーゲンの加水分
   解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミ
   ンから選ばれる１種又は２種以上を添加してなる組成物
   を有効成分とする免疫強化剤。
3. 【請求項３】コラーゲン及び／又はコラーゲンの加水分
   解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミ
   ンから選ばれる１種又は２種以上を添加してなる組成物
   を有効成分とする生体諸機能低下予防改善剤。
4. 【請求項４】コラーゲン及び／又はコラーゲンの加水分
   解物にセラミド、イソマルトオリゴ糖及び脂溶性ビタミ
   ンから選ばれる１種又は２種以上を添加してなる組成物
   を含有する機能食品。