JP2002080391A - アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物 - Google Patents
アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物Info
- Publication number
- JP2002080391A JP2002080391A JP2000266421A JP2000266421A JP2002080391A JP 2002080391 A JP2002080391 A JP 2002080391A JP 2000266421 A JP2000266421 A JP 2000266421A JP 2000266421 A JP2000266421 A JP 2000266421A JP 2002080391 A JP2002080391 A JP 2002080391A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- apoptosis
- protein
- hepatitis
- royal jelly
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ウィルス感染などによって誘導されるアポト
ーシスを抑制する手段を提供する。 【解決手段】下記に示す、ローヤルゼリー中の蛋白質か
らなるアポトーシス抑制剤を食品、医薬品などの肝炎用
の組成物に含有させる。 １）ローヤルゼリー中の蛋白質の非変性ポリアクリルア
ミドゲル電気泳永動において単一バンドを形成する。 ２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンで
ある。 ３）Glu Met Lys Phe Phe Asp Tyr Xaa Aspのアミノ酸
配列を含む。
ーシスを抑制する手段を提供する。 【解決手段】下記に示す、ローヤルゼリー中の蛋白質か
らなるアポトーシス抑制剤を食品、医薬品などの肝炎用
の組成物に含有させる。 １）ローヤルゼリー中の蛋白質の非変性ポリアクリルア
ミドゲル電気泳永動において単一バンドを形成する。 ２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンで
ある。 ３）Glu Met Lys Phe Phe Asp Tyr Xaa Aspのアミノ酸
配列を含む。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は肝炎などに起因す
る、アポトーシスを抑制するアポトーシス抑制剤及びそ
れを含有する医薬や食品などの肝炎用の組成物に関す
る。
る、アポトーシスを抑制するアポトーシス抑制剤及びそ
れを含有する医薬や食品などの肝炎用の組成物に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】近年において、医薬の発達は様々な不治
の病を治療可能なものに変えてきた。天然痘、コレラ、
赤痢、ペストと言った不治であった感染症の多くに、化
学療法の道を開いて来た。しかしながら、感染症におい
ても克服されていない疾病が未だいくつか残っており、
これらの一つにウィルス性肝炎が挙げられる。ウィルス
性肝炎の内、Ｂ型及びＣ型は、現在スタンダード化して
いることもあり、Ａ型に比べて年々急増する傾向にあ
る。これらのウィルス性肝炎は慢性化し肝癌へ移行する
可能性が高いという危険性も脅威であるが、極めて短時
間に重篤な症状に移行し、肝細胞の殆どが死滅し、肝不
全を起こす、所謂劇症肝炎も大きな脅威である。慢性肝
炎については、インターフェロンなどの多少の治療手段
があるが、劇症肝炎については為す術が全くなく、極め
て短時間後に来る死を待つ他はないのが現状である。即
ち、肝細胞が短時間に致死的に死滅することを防ぐ手段
があれば、劇症肝炎を凌ぐことが可能であり、この様な
肝細胞の一斉死滅を防ぐ手段の開発が望まれていた。
の病を治療可能なものに変えてきた。天然痘、コレラ、
赤痢、ペストと言った不治であった感染症の多くに、化
学療法の道を開いて来た。しかしながら、感染症におい
ても克服されていない疾病が未だいくつか残っており、
これらの一つにウィルス性肝炎が挙げられる。ウィルス
性肝炎の内、Ｂ型及びＣ型は、現在スタンダード化して
いることもあり、Ａ型に比べて年々急増する傾向にあ
る。これらのウィルス性肝炎は慢性化し肝癌へ移行する
可能性が高いという危険性も脅威であるが、極めて短時
間に重篤な症状に移行し、肝細胞の殆どが死滅し、肝不
全を起こす、所謂劇症肝炎も大きな脅威である。慢性肝
炎については、インターフェロンなどの多少の治療手段
があるが、劇症肝炎については為す術が全くなく、極め
て短時間後に来る死を待つ他はないのが現状である。即
ち、肝細胞が短時間に致死的に死滅することを防ぐ手段
があれば、劇症肝炎を凌ぐことが可能であり、この様な
肝細胞の一斉死滅を防ぐ手段の開発が望まれていた。
【０００３】この様な、ウィルス性肝炎に於ける肝細胞
の死滅は、ウィルス感染によるアポトーシスの誘導によ
るものであることが知られているが、この様なアポトー
シス誘導を抑制する手段は未だ全く知られていない。
の死滅は、ウィルス感染によるアポトーシスの誘導によ
るものであることが知られているが、この様なアポトー
シス誘導を抑制する手段は未だ全く知られていない。
【０００４】一方、ローヤルゼリー中に、１）ローヤル
ゼリー中の蛋白質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気
泳永動において単一バンドを形成する。２）還元条件下
でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測
定される分子量が約５７キロダルトンである。３）配列
式１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。の性
質を有するタンパク質が存在することは、本発明者らに
より見いだされたことであるが、かかる蛋白の性質につ
いては全く知られていないのが現状であった。従って、
この様なタンパク質に、細胞のアポトーシスを抑制し、
臓器の構成細胞の一斉死を防ぐ作用があることは全く知
られていなかった。
ゼリー中の蛋白質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気
泳永動において単一バンドを形成する。２）還元条件下
でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測
定される分子量が約５７キロダルトンである。３）配列
式１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。の性
質を有するタンパク質が存在することは、本発明者らに
より見いだされたことであるが、かかる蛋白の性質につ
いては全く知られていないのが現状であった。従って、
この様なタンパク質に、細胞のアポトーシスを抑制し、
臓器の構成細胞の一斉死を防ぐ作用があることは全く知
られていなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、この様な状
況下為されたものであり、ウィルス感染などによって誘
導されるアポトーシスを抑制する手段を提供することを
課題とする。
況下為されたものであり、ウィルス感染などによって誘
導されるアポトーシスを抑制する手段を提供することを
課題とする。
【０００６】
【課題の解決手段】この様な状況に鑑みて、本発明者ら
は、ウィルス感染などによって誘導されるアポトーシス
を抑制する手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、
ローヤルゼリー中に存在する、「１）ローヤルゼリー中
の蛋白質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳永動に
おいて単一バンドを形成する。２）還元条件下でのＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定される
分子量が約５７キロダルトンである。３）配列式１のア
ミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。」と言う性質
を有する、タンパク質にその様な作用があることを見い
だし、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下
に示す技術に関するものである。 （１）下記に示す、ローヤルゼリー中の蛋白質からなる
アポトーシス抑制剤。１）ローヤルゼリー中の蛋白質の
非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳永動において単一
バンドを形成する。２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動により測定される分子量が約
５７キロダルトンである。３）配列式１のアミノ酸番号
１〜８のアミノ酸配列を含む。 （２）アポトーシスの抑制が、肝細胞のアポトーシスで
あることを特徴とする、（１）に記載のアポトーシス抑
制剤。 （３）肝細胞のアポトーシスが、肝細胞の肝炎ウィルス
感染によるものである、（１）又は（２）に記載のアポ
トーシス抑制剤。 （４）（１）〜（３）何れか１項に記載のアポトーシス
抑制剤を含有する、肝炎用の組成物。 （５）肝炎が劇症肝炎であることを特徴とする、（４）
の組成物。 （６）医薬又は食品であることを特徴とする、（４）又
は（５）に記載の組成物。 以下、本発明について、実施の形態を中心に更に詳細に
説明を加える。
は、ウィルス感染などによって誘導されるアポトーシス
を抑制する手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、
ローヤルゼリー中に存在する、「１）ローヤルゼリー中
の蛋白質の非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳永動に
おいて単一バンドを形成する。２）還元条件下でのＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定される
分子量が約５７キロダルトンである。３）配列式１のア
ミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。」と言う性質
を有する、タンパク質にその様な作用があることを見い
だし、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下
に示す技術に関するものである。 （１）下記に示す、ローヤルゼリー中の蛋白質からなる
アポトーシス抑制剤。１）ローヤルゼリー中の蛋白質の
非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳永動において単一
バンドを形成する。２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動により測定される分子量が約
５７キロダルトンである。３）配列式１のアミノ酸番号
１〜８のアミノ酸配列を含む。 （２）アポトーシスの抑制が、肝細胞のアポトーシスで
あることを特徴とする、（１）に記載のアポトーシス抑
制剤。 （３）肝細胞のアポトーシスが、肝細胞の肝炎ウィルス
感染によるものである、（１）又は（２）に記載のアポ
トーシス抑制剤。 （４）（１）〜（３）何れか１項に記載のアポトーシス
抑制剤を含有する、肝炎用の組成物。 （５）肝炎が劇症肝炎であることを特徴とする、（４）
の組成物。 （６）医薬又は食品であることを特徴とする、（４）又
は（５）に記載の組成物。 以下、本発明について、実施の形態を中心に更に詳細に
説明を加える。
【０００７】（１） 本発明のアポトーシス抑制剤であ
るタンパク質 本発明のアポトーシス抑制剤であるタンパク質は、ロー
ヤルゼリー中に存在し、以下の性質を有することを特徴
とする。尚、このタンパク質について、以後、単に５７
キロダルトンのタンパク質と表現することがある。 １）ゲル電気泳動において単一バンドを形成する。 ２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンで
ある。 １） 配列式１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を
含む。この様な本発明の細胞増殖促進剤であるタンパク
質は、次に示す手段によってその存在或いは含有量を確
認したり、分離精製したりすることができる。
るタンパク質 本発明のアポトーシス抑制剤であるタンパク質は、ロー
ヤルゼリー中に存在し、以下の性質を有することを特徴
とする。尚、このタンパク質について、以後、単に５７
キロダルトンのタンパク質と表現することがある。 １）ゲル電気泳動において単一バンドを形成する。 ２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンで
ある。 １） 配列式１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を
含む。この様な本発明の細胞増殖促進剤であるタンパク
質は、次に示す手段によってその存在或いは含有量を確
認したり、分離精製したりすることができる。
【０００８】１．本発明のアポトーシス抑制剤であるタ
ンパク質の分離 凍結乾燥したローヤルゼリーを０．７重量％で１０ｍＭ
のトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、ＵＦ１０
万（Ｍｉｎｉｐｌａｔｅ１００；限外濾過）で６倍濃
縮、７回脱塩を行い、その濾液をさらにＵＦ３万（Ｍｉ
ｎｉｐｌａｔｅ３０；限外濾過）で８倍濃縮、１回脱塩
を行い、分子量１０万〜３万の分画を得た。上記の分子
量１０万〜３万のサンプルは、陰イオン交換クロマトグ
ラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーによって分画す
ることで、分子量５７キロダルトンタンパク質を分離で
きる。陰イオン交換クロマトグラフィーとしては、通常
に知られている方法に従って行えば良く、例えば東ソー
株式会社製ＤＥＡＥーＴｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｍをカ
ラムとして用いて、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．０）を展開液Ａ、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．０）と１ＭＮａＣｌを展開液Ｂとしてグラジェント
により、流速を５ｍｌ／ｍｉｎ、２８０ｎｍの吸光度で
検出し、２．５ｍｌ／チューブで分画したフラクション
Ｎｏ．１１９〜１２７に分子量５７キロダルトンのタン
パク質画分を検出することができる。さらにこの画分を
ゲル濾過クロマトグラフィーにより更に精製することが
でき、これは通常に知られている方法に従って行えば良
く、この様な好ましい例としては、例えば、ファルマシ
ア株式会社製ＨｉＬｏａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ
２００をカラムとして用いて、０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム含有５０ｍＭリン酸カリウムバッファーｐＨ７．０を
展開液とし、流速を１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を
３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出し、２．０
ｍｌ／チューブで分画したフラクションＮｏ．３５〜４
３に分子量５７キロダルトンのタンパク質を検出するこ
とが出来る。（電気泳動にて同一タンパク質を確認）ま
た、既知分子量のゲル濾過分析の結果より、上記タンパ
ク質は、分子量５７キロダルトンモノマータンパク質で
あると確定された。又、このタンパク質は、Ｎ−グルコ
シダーゼＦによって消化され、消化後の分子量が４８キ
ロダルトンになるため糖タンパク質であることを本発明
者は見出している。
ンパク質の分離 凍結乾燥したローヤルゼリーを０．７重量％で１０ｍＭ
のトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、ＵＦ１０
万（Ｍｉｎｉｐｌａｔｅ１００；限外濾過）で６倍濃
縮、７回脱塩を行い、その濾液をさらにＵＦ３万（Ｍｉ
ｎｉｐｌａｔｅ３０；限外濾過）で８倍濃縮、１回脱塩
を行い、分子量１０万〜３万の分画を得た。上記の分子
量１０万〜３万のサンプルは、陰イオン交換クロマトグ
ラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーによって分画す
ることで、分子量５７キロダルトンタンパク質を分離で
きる。陰イオン交換クロマトグラフィーとしては、通常
に知られている方法に従って行えば良く、例えば東ソー
株式会社製ＤＥＡＥーＴｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｍをカ
ラムとして用いて、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．０）を展開液Ａ、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．０）と１ＭＮａＣｌを展開液Ｂとしてグラジェント
により、流速を５ｍｌ／ｍｉｎ、２８０ｎｍの吸光度で
検出し、２．５ｍｌ／チューブで分画したフラクション
Ｎｏ．１１９〜１２７に分子量５７キロダルトンのタン
パク質画分を検出することができる。さらにこの画分を
ゲル濾過クロマトグラフィーにより更に精製することが
でき、これは通常に知られている方法に従って行えば良
く、この様な好ましい例としては、例えば、ファルマシ
ア株式会社製ＨｉＬｏａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ
２００をカラムとして用いて、０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム含有５０ｍＭリン酸カリウムバッファーｐＨ７．０を
展開液とし、流速を１．０ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を
３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出し、２．０
ｍｌ／チューブで分画したフラクションＮｏ．３５〜４
３に分子量５７キロダルトンのタンパク質を検出するこ
とが出来る。（電気泳動にて同一タンパク質を確認）ま
た、既知分子量のゲル濾過分析の結果より、上記タンパ
ク質は、分子量５７キロダルトンモノマータンパク質で
あると確定された。又、このタンパク質は、Ｎ−グルコ
シダーゼＦによって消化され、消化後の分子量が４８キ
ロダルトンになるため糖タンパク質であることを本発明
者は見出している。
【０００９】２．高速液体クロマトグラフィーによるロ
ーヤルゼリー中の分子量５７キロダルトンタンパク質の
分析 上記の分子量５７キロダルトンタンパク質は、高速液体
クロマトグラフィーによるゲル濾過でも識別・定量する
ことが出来る。従って、この様な分析結果をもって、品
質管理や効果の鑑別・評価に使用することもできる。か
かるゲル濾過分析は、通常に知られている方法に従って
行えば良く、この様な好ましい例としては、例えば、ト
−ソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムと
して用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ
化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を
展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を
３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出した結果、
このタンパク質を求めることが挙げられる。この分析条
件下では、上記分子量５７キロダルトンタンパク質は、
保持時間２５分〜３０分にピークとして現れる。（電気
泳動にて同一蛋白質を確認）また、既知分子量のゲル濾
過分析の結果より、５７キロダルトンと確定された。従
って、本発明の細胞増殖促進剤である、この５７キロダ
ルトンのタンパク質について定性或いは定量分析を行う
場合には、この様な高速液体クロマトグラフィーを用い
れば良い。
ーヤルゼリー中の分子量５７キロダルトンタンパク質の
分析 上記の分子量５７キロダルトンタンパク質は、高速液体
クロマトグラフィーによるゲル濾過でも識別・定量する
ことが出来る。従って、この様な分析結果をもって、品
質管理や効果の鑑別・評価に使用することもできる。か
かるゲル濾過分析は、通常に知られている方法に従って
行えば良く、この様な好ましい例としては、例えば、ト
−ソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムと
して用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ
化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を
展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を
３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出した結果、
このタンパク質を求めることが挙げられる。この分析条
件下では、上記分子量５７キロダルトンタンパク質は、
保持時間２５分〜３０分にピークとして現れる。（電気
泳動にて同一蛋白質を確認）また、既知分子量のゲル濾
過分析の結果より、５７キロダルトンと確定された。従
って、本発明の細胞増殖促進剤である、この５７キロダ
ルトンのタンパク質について定性或いは定量分析を行う
場合には、この様な高速液体クロマトグラフィーを用い
れば良い。
【００１０】３．電気泳動によるローヤルゼリー中の分
子量５７キロダルトンのタンパク質の定性方法 本発明のローヤルゼリー中の分子量５７キロダルトンの
タンパク質は、電気泳動によりタンパク質の構成を分析
し、有効成分であるタンパク質の分子量を特定すること
を特徴とする。電気泳動の方法としては、該有効タンパ
ク質が特定できれば特段の限定は受けないが、好ましい
方法は、水溶性ローヤルゼリータンパク質（１０％ロー
ヤルゼリー水溶液（Ｗ／Ｖ））をポリアクリルアミドゲ
ル（１０％均一）にて、電流２０ｍＡで電気泳動し、ク
マシーブリリアントブルーにより染色して、タンパク質
を特定する方法である。この様な電気泳動に於ける本発
明の蛋白質の分子量はその精製タンパク質のＳＤＳ−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動により、５７キロダルト
ンと決定された。
子量５７キロダルトンのタンパク質の定性方法 本発明のローヤルゼリー中の分子量５７キロダルトンの
タンパク質は、電気泳動によりタンパク質の構成を分析
し、有効成分であるタンパク質の分子量を特定すること
を特徴とする。電気泳動の方法としては、該有効タンパ
ク質が特定できれば特段の限定は受けないが、好ましい
方法は、水溶性ローヤルゼリータンパク質（１０％ロー
ヤルゼリー水溶液（Ｗ／Ｖ））をポリアクリルアミドゲ
ル（１０％均一）にて、電流２０ｍＡで電気泳動し、ク
マシーブリリアントブルーにより染色して、タンパク質
を特定する方法である。この様な電気泳動に於ける本発
明の蛋白質の分子量はその精製タンパク質のＳＤＳ−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動により、５７キロダルト
ンと決定された。
【００１１】本発明のアポトーシス抑制剤である５７キ
ロダルトンのタンパク質は、上記のような性質を有しロ
ーヤルゼリーそれも新鮮なローヤルゼリー中に含まれて
いるが、このものを後記に示す組成物に含有させる場合
には、ローヤルゼリー中より、上記のゲル濾過の手法に
従って分離し、純粋なタンパク質として含有させること
もできるし、ローヤルゼリーの形態で含有させることも
できる。通常は単離コストが高いため、ローヤルゼリー
そのままの形で、或いは水可溶分を限外濾過などの精製
を加えた画分として含有させることが好ましく、この様
な場合においては、該タンパク質の含有量がローヤルゼ
リー全蛋白質当たり９重量％以上であるローヤルゼリー
を用いることが好ましい。これは、このような５７キロ
ダルトンのタンパク質が分解しやすいため、この量を充
分に含んだ新鮮なものを用いることが、効果の安定性の
維持に好ましいからである。後記本発明の組成物に於け
る、本発明のアポトーシス抑制剤の好ましい含有量は、
このものが１日あたり、１〜１０００ｍｇ、更に好まし
くは、１〜１００ｍｇ摂取するように設計するのが好ま
しい。かかる本発明のアポトーシス抑制剤は、肝細胞が
短時間にアポトーシスを起こして死滅し、肝不全を起こ
すのを防ぐ作用を有する。この様なアポトーシスによ
り、急速に、構成細胞が死滅し臓器不全を起こすような
症状であれば、肝臓のみならず臓器不全を防ぐことが出
来る。
ロダルトンのタンパク質は、上記のような性質を有しロ
ーヤルゼリーそれも新鮮なローヤルゼリー中に含まれて
いるが、このものを後記に示す組成物に含有させる場合
には、ローヤルゼリー中より、上記のゲル濾過の手法に
従って分離し、純粋なタンパク質として含有させること
もできるし、ローヤルゼリーの形態で含有させることも
できる。通常は単離コストが高いため、ローヤルゼリー
そのままの形で、或いは水可溶分を限外濾過などの精製
を加えた画分として含有させることが好ましく、この様
な場合においては、該タンパク質の含有量がローヤルゼ
リー全蛋白質当たり９重量％以上であるローヤルゼリー
を用いることが好ましい。これは、このような５７キロ
ダルトンのタンパク質が分解しやすいため、この量を充
分に含んだ新鮮なものを用いることが、効果の安定性の
維持に好ましいからである。後記本発明の組成物に於け
る、本発明のアポトーシス抑制剤の好ましい含有量は、
このものが１日あたり、１〜１０００ｍｇ、更に好まし
くは、１〜１００ｍｇ摂取するように設計するのが好ま
しい。かかる本発明のアポトーシス抑制剤は、肝細胞が
短時間にアポトーシスを起こして死滅し、肝不全を起こ
すのを防ぐ作用を有する。この様なアポトーシスによ
り、急速に、構成細胞が死滅し臓器不全を起こすような
症状であれば、肝臓のみならず臓器不全を防ぐことが出
来る。
【００１２】（２）本発明の肝炎用の組成物 本発明の肝炎用の組成物は、上記アポトーシス抑制剤を
含有することを特徴とする。本発明の組成物としては、
肝機能を維持或いは改善する目的で使用されるものであ
れば特段の限定無く適用でき、例えば、医薬組成物或い
は食品などが特に好適に例示できる。これは、本発明の
組成物が有する作用が、他の医薬品では解決されていな
い、臓器不全と言う症状を解決することが出来、しかも
副作用無く習慣的な摂取が可能な為である。臓器不全の
内、本発明の組成物が特に好適に適用されるのは、上記
の如く肝不全であり、中でもウィルス性肝炎、取り分け
劇症肝炎時に起こる肝不全に有効である。又、ウィルス
性慢性肝炎において、肝機能が極端に低下した場合に更
なる低下を予防するために投与することも極めて有用な
使用法である。更には、ウィルス性肝炎患者などに、更
に肝臓の障害が広がらないように予防的に投与すること
も有用である。又、この様な症状に適用することから、
本発明の組成物の投与経路としては、経口乃至は注射に
よる投与が好ましい。
含有することを特徴とする。本発明の組成物としては、
肝機能を維持或いは改善する目的で使用されるものであ
れば特段の限定無く適用でき、例えば、医薬組成物或い
は食品などが特に好適に例示できる。これは、本発明の
組成物が有する作用が、他の医薬品では解決されていな
い、臓器不全と言う症状を解決することが出来、しかも
副作用無く習慣的な摂取が可能な為である。臓器不全の
内、本発明の組成物が特に好適に適用されるのは、上記
の如く肝不全であり、中でもウィルス性肝炎、取り分け
劇症肝炎時に起こる肝不全に有効である。又、ウィルス
性慢性肝炎において、肝機能が極端に低下した場合に更
なる低下を予防するために投与することも極めて有用な
使用法である。更には、ウィルス性肝炎患者などに、更
に肝臓の障害が広がらないように予防的に投与すること
も有用である。又、この様な症状に適用することから、
本発明の組成物の投与経路としては、経口乃至は注射に
よる投与が好ましい。
【００１３】本発明の組成物においては、上記本発明の
アポトーシス抑制剤以外に、通常医薬組成物や食品組成
物で使用される任意成分を含有することが出来る。この
様な任意成分としては、例えば、賦形剤、被覆剤、結合
剤、嬌味嬌臭剤、分散剤、崩壊剤、乳化剤、抗酸化剤、
紫外線吸収剤、着色剤、滑沢剤、ｐＨ調整剤等が好まし
く例示できる。これらの必須成分と任意成分とを常法に
従って処理することにより、本発明の組成物は製造する
ことが出来る。
アポトーシス抑制剤以外に、通常医薬組成物や食品組成
物で使用される任意成分を含有することが出来る。この
様な任意成分としては、例えば、賦形剤、被覆剤、結合
剤、嬌味嬌臭剤、分散剤、崩壊剤、乳化剤、抗酸化剤、
紫外線吸収剤、着色剤、滑沢剤、ｐＨ調整剤等が好まし
く例示できる。これらの必須成分と任意成分とを常法に
従って処理することにより、本発明の組成物は製造する
ことが出来る。
【００１４】
【実施例】以下に、実施例を挙げて、本発明について更
に詳細に説明を加えるが、本発明がこれら実施例にのみ
限定を受けないことは言うまでもない。
に詳細に説明を加えるが、本発明がこれら実施例にのみ
限定を受けないことは言うまでもない。
【００１５】＜実施例１＞本発明のアポトーシス抑制剤
である、５７キロダルトンのタンパク質及びこのタンパ
ク質をローヤルゼリー中の全タンパク質量に対して１
１．２％含有するローヤルゼリーについて、アポトーシ
ス抑制作用を調べた。即ち、ウィスター系雄性ラットか
ら、コラゲナーゼ灌流法により無菌的に肝細胞を摘出
し、無血清培地下で初代培養した。培養はメディウムＩ
Ｉで、３７℃３時間の条件で前培養し、その後アポトー
シス培地に交換し、サンプルを添加して、３７℃２４時
間〜４８時間の条件で培養した。培養後、細胞をコラゲ
ナーゼ溶液で分散させて回収し、図１に示す断片化デオ
キシリボ核酸（ＤＮＡ）抽出法にて、断片化ＤＮＡを調
整し、１．５％アガロース電気泳動を行って、アポトー
シスの有無を確認した。この結果を図２に示す。図中左
端のレーン１はサンプルを添加せず、その右隣のレーン
２は５７キロダルトンのタンパク質（本発明のアポトー
シス抑制剤１）を０．１ｍｇ／ｍｌ添加したものであ
り、その右隣のレーン３はローヤルゼリー（アポトーシ
ス抑制剤１を１１．２％含む；アポトーシス抑制剤２）
を１．５ｍｇ／ｍｌを添加したものであり、その右隣の
レーン４はポジティブコントロールのヘパトサイト・グ
ロース・ファクター（ＨＧＦ）を１０ｎｇ／ｍｌ添加し
たものである。又、レーンＭはラダー・マーカーであ
る。これより、本発明のアポトーシス抑制剤のレーン及
びＨＧＦのレーンは何れもアポトーシスの特徴であるラ
ダー構造が見られず、肝細胞のアポトーシスが抑制され
ていることが判る。これより、本発明のアポトーシス抑
制剤は、ウィルス性肝炎などに由来して起こる肝細胞の
アポトーシスを抑制し、肝不全などに陥ることを防ぐ作
用を有することが判る。
である、５７キロダルトンのタンパク質及びこのタンパ
ク質をローヤルゼリー中の全タンパク質量に対して１
１．２％含有するローヤルゼリーについて、アポトーシ
ス抑制作用を調べた。即ち、ウィスター系雄性ラットか
ら、コラゲナーゼ灌流法により無菌的に肝細胞を摘出
し、無血清培地下で初代培養した。培養はメディウムＩ
Ｉで、３７℃３時間の条件で前培養し、その後アポトー
シス培地に交換し、サンプルを添加して、３７℃２４時
間〜４８時間の条件で培養した。培養後、細胞をコラゲ
ナーゼ溶液で分散させて回収し、図１に示す断片化デオ
キシリボ核酸（ＤＮＡ）抽出法にて、断片化ＤＮＡを調
整し、１．５％アガロース電気泳動を行って、アポトー
シスの有無を確認した。この結果を図２に示す。図中左
端のレーン１はサンプルを添加せず、その右隣のレーン
２は５７キロダルトンのタンパク質（本発明のアポトー
シス抑制剤１）を０．１ｍｇ／ｍｌ添加したものであ
り、その右隣のレーン３はローヤルゼリー（アポトーシ
ス抑制剤１を１１．２％含む；アポトーシス抑制剤２）
を１．５ｍｇ／ｍｌを添加したものであり、その右隣の
レーン４はポジティブコントロールのヘパトサイト・グ
ロース・ファクター（ＨＧＦ）を１０ｎｇ／ｍｌ添加し
たものである。又、レーンＭはラダー・マーカーであ
る。これより、本発明のアポトーシス抑制剤のレーン及
びＨＧＦのレーンは何れもアポトーシスの特徴であるラ
ダー構造が見られず、肝細胞のアポトーシスが抑制され
ていることが判る。これより、本発明のアポトーシス抑
制剤は、ウィルス性肝炎などに由来して起こる肝細胞の
アポトーシスを抑制し、肝不全などに陥ることを防ぐ作
用を有することが判る。
【００１６】（メディウムＩＩ） Ｌ−１５培地 ５％新生ウシ血清 １００ｍｇ／ｌペニシリンＧ １００ｍｇ／ｌストレプトマイシン １×１０−６Ｍ（１０のマイナス６乗）インスリン １×１０−５Ｍ（１０のマイナス５乗）デキサメタゾン ２ｇ／ｌ炭酸ナトリウム
【００１７】 （アポトーシス培地） インスリン １０-7（１０のマイナス７乗）Ｍ デキサメタゾン １０-7（１０のマイナス７乗）Ｍ アプロチニン ０．７μｇ／ｍｌ
【００１８】＜実施例２＞下記に示す処方に従って、健
康食品を作成した。即ち、処方成分をフローコーターに
仕込み、２０重量部の水を噴霧しながら、送風して造粒
し、７０℃の温風を送風して乾燥させ顆粒を得た。この
顆粒を打錠し、素錠を得、これに１０重量部のセラック
を８０％エタノール水溶液にとかしてコーティングし、
１０重量部の白糖と１重量部のゼラチンで糖衣を施し、
健康食品用の錠剤を得た。このものをＧＰＴ値が３００
の肝炎が疑われる人に、１日１ｇ１ヶ月食してもらった
ところ、２１３に軽快した。 結晶セルロース ４０重量部 デンプン ２０重量部 ヒドロキシプロピルセルロース １０重量部 ５７キロダルトンのタンパク質 １重量部 乳糖 ８重量部
康食品を作成した。即ち、処方成分をフローコーターに
仕込み、２０重量部の水を噴霧しながら、送風して造粒
し、７０℃の温風を送風して乾燥させ顆粒を得た。この
顆粒を打錠し、素錠を得、これに１０重量部のセラック
を８０％エタノール水溶液にとかしてコーティングし、
１０重量部の白糖と１重量部のゼラチンで糖衣を施し、
健康食品用の錠剤を得た。このものをＧＰＴ値が３００
の肝炎が疑われる人に、１日１ｇ１ヶ月食してもらった
ところ、２１３に軽快した。 結晶セルロース ４０重量部 デンプン ２０重量部 ヒドロキシプロピルセルロース １０重量部 ５７キロダルトンのタンパク質 １重量部 乳糖 ８重量部
【００１９】＜実施例３＞下記に示す処方に従って、健
康食品を作成した。即ち、処方成分をフローコーターに
仕込み、２０重量部の水を噴霧しながら、送風して造粒
し、７０℃の温風を送風して乾燥させ顆粒を得た。この
顆粒を打錠し、素錠を得、これに１０重量部のセラック
を８０％エタノール水溶液にとかしてコーティングし、
１０重量部の白糖と１重量部のゼラチンで糖衣を施し、
健康食品用の錠剤を得た。このものをＧＰＴ値が２６５
の肝炎が疑われる人に、１日１ｇ１ヶ月食してもらった
ところ、２０１に軽快した。 結晶セルロース ３０重量部 デンプン ２０重量部 ヒドロキシプロピルセルロース １０重量部 ローヤルゼリー １１重量部 （５７Ｋｄのタンパク質を１１．２％含有） 乳糖 ８重量部
康食品を作成した。即ち、処方成分をフローコーターに
仕込み、２０重量部の水を噴霧しながら、送風して造粒
し、７０℃の温風を送風して乾燥させ顆粒を得た。この
顆粒を打錠し、素錠を得、これに１０重量部のセラック
を８０％エタノール水溶液にとかしてコーティングし、
１０重量部の白糖と１重量部のゼラチンで糖衣を施し、
健康食品用の錠剤を得た。このものをＧＰＴ値が２６５
の肝炎が疑われる人に、１日１ｇ１ヶ月食してもらった
ところ、２０１に軽快した。 結晶セルロース ３０重量部 デンプン ２０重量部 ヒドロキシプロピルセルロース １０重量部 ローヤルゼリー １１重量部 （５７Ｋｄのタンパク質を１１．２％含有） 乳糖 ８重量部
【００２０】
【発明の効果】本発明によれば、ウィルス感染などによ
って誘導されるアポトーシスを抑制する手段を提供する
ことが出来る。
って誘導されるアポトーシスを抑制する手段を提供する
ことが出来る。
【００２１】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> ポーラ化成工業株式会社 <120> アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物 <130> Ｐ２０００１１０ <140> <141>2000-09-04- <160> 1 <170> PatentIn Ver.2.0
【００２２】 <210> 1 <211> 25 <212> PRT <213> Apis mellifera <220> <221> UNSURE <222> (24) <223> Xaa=unknown <BR> <400> 1 Asn Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Leu Lys Lys Leu Pro Ile Leu His 1 2 10 10 Glu Met Lys Phe Phe Asp Tyr Xaa Asp 20 25
【図１】 断片化ＤＮＡ抽出法のフローを示す図であ
る。
る。
【図２】 アガロース電気泳動の結果を示す図である。
（図面代用写真）
（図面代用写真）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｋ 14/435 ＺＮＡ // Ｃ０７Ｋ 14/435 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 宮崎 博隆 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町560番地 ポ ーラ化成工業株式会社戸塚研究所内 Ｆターム(参考） 4B018 LB10 LE01 MD20 MD34 MD35 MD77 4C084 AA02 BA02 BA05 BA08 BA17 BA23 CA49 DC50 NA14 ZA751 ZC022 4C087 AA01 AA02 BB22 CA06 CA16 CA22 CA23 CA44 NA14 ZA75 ZC02 4H045 AA10 BA10 BA53 CA51 EA20 GA10 GA22 GA23
Claims (6)
- 【請求項１】 下記に示す、ローヤルゼリー中の蛋白質
からなるアポトーシス抑制剤。 １）ローヤルゼリー中の蛋白質の非変性ポリアクリルア
ミドゲル電気泳永動において単一バンドを形成する。 ２）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンで
ある。 ３）配列式１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含
む。 - 【請求項２】 アポトーシスの抑制が、肝細胞のアポト
ーシスであることを特徴とする、請求項１に記載のアポ
トーシス抑制剤。 - 【請求項３】 肝細胞のアポトーシスが、肝細胞の肝炎
ウィルス感染によるものである、請求項１又は２に記載
のアポトーシス抑制剤。 - 【請求項４】 請求項１〜３何れか１項に記載のアポト
ーシス抑制剤を含有する、肝炎用の組成物。 - 【請求項５】 肝炎が劇症肝炎であることを特徴とす
る、請求項４の組成物。 - 【請求項６】 医薬又は食品であることを特徴とする、
請求項４又は５に記載の組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000266421A JP2002080391A (ja) | 2000-09-04 | 2000-09-04 | アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000266421A JP2002080391A (ja) | 2000-09-04 | 2000-09-04 | アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002080391A true JP2002080391A (ja) | 2002-03-19 |
| JP2002080391A5 JP2002080391A5 (ja) | 2007-07-19 |
Family
ID=18753508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000266421A Pending JP2002080391A (ja) | 2000-09-04 | 2000-09-04 | アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002080391A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000143530A (ja) * | 1998-09-08 | 2000-05-23 | Gogaku Reishi Honpo:Kk | 抗ガン剤、マクロフゼジ活性付与剤及び機能性食品 |
| JP2000199753A (ja) * | 1998-10-29 | 2000-07-18 | Pola Chem Ind Inc | ロ―ヤルゼリ―の品質評価法 |
-
2000
- 2000-09-04 JP JP2000266421A patent/JP2002080391A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000143530A (ja) * | 1998-09-08 | 2000-05-23 | Gogaku Reishi Honpo:Kk | 抗ガン剤、マクロフゼジ活性付与剤及び機能性食品 |
| JP2000199753A (ja) * | 1998-10-29 | 2000-07-18 | Pola Chem Ind Inc | ロ―ヤルゼリ―の品質評価法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3100005B2 (ja) | ヒト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤 | |
| JPS6016407B2 (ja) | 静注用ガンマグロブリン製造の改良方法 | |
| CA1312823C (en) | Anti viral composition | |
| JP2001520238A5 (ja) | ||
| JPH07503851A (ja) | 改良インターフェロン及びヒトの末梢血液白血球からのその製造方法 | |
| US5055296A (en) | Method of treating chronic fatigue syndrome | |
| JP2005508848A6 (ja) | コンセンサスインターフェロンのＢ型肝炎表面抗原とｅ抗原の抑制剤としての応用 | |
| JPS6051120A (ja) | 単純ヘルペスサブユニットワクチン | |
| US10413586B2 (en) | Antiviral agent comprising recombinant mistletoe lectins | |
| FI72143C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon. | |
| JPS5948422A (ja) | 新規なポリペプチドおよびその単離および精製方法 | |
| US3256152A (en) | Concentration and purification of interferons, viral inhibiting substances (vis), viral inhibiting factors (vif), or viral inhibitory material | |
| JP2579771B2 (ja) | 胸腺抽出物、その製造方法及びそれを含む薬剤組成物 | |
| JP2002080391A (ja) | アポトーシス抑制剤及びそれを含有する肝炎用の組成物 | |
| Stewart et al. | Interferoids: In vitro and in vivo conversion of native interferons to lower molecular weight forms | |
| WO2000009158A1 (en) | Assay for assembly of herpes simplex virus capsid | |
| NZ235153A (en) | Stabilised alpha-interferon compositions | |
| JP2000336038A (ja) | 肝臓保護剤 | |
| JPH10330284A (ja) | 肝細胞保護剤 | |
| CN101244263A (zh) | 包含混合干扰素-α亚型的混合物 | |
| US5316775A (en) | Method of treating hepatitis B infection | |
| JP2787220B2 (ja) | ウィルス感染防御剤 | |
| JPS6019720A (ja) | ヒト内来性癌制御因子およびその製造法 | |
| JPS63130539A (ja) | ヒト白血球インターフエロン含有局所用組成物 | |
| JP2002080391A5 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070605 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070605 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20070605 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100608 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20101019 |