JP2002058480A - アシルＣｏＡ：Ｎ−アシル転移酵素の測定方法、そのためのプローブ及びキット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ヒトにおけるアミノ酸抱合に関与するアシルC
oA：N-アシル転移酵素を分別して定量する新しい測定技
術及びそのためのプローブ及びキットを提供する。 【解決手段】ヒトにおけるアミノ酸抱合に関与する胆汁
酸ＣｏＡ：アミノ酸Ｎ−アシル転移酵素（ＢＡＡＴ）の
測定に用いられるプローブであって、ＢＡＡＴ遺伝子の
６６〜９３の領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオ
チドからなるプローブ；該プローブ、及び前記ＢＡＡＴ
遺伝子の44-63領域及び117-96領域にハイブリダイズす
るオリゴヌクレオチドからなるフォワードプライマーと
リバースプライマーとのプライマー対の組合せからな
る、アシルCoA：N-アシル転移酵素の測定キット；並び
に該測定キットを用いる、アシルCoA：N-アシル転移酵
素の測定方法である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトにおける第II
相反応の一種であるアミノ酸抱合に関与するアシルCo
A：N-アシル転移酵素の測定方法及びそのためのプロー
ブ及びキットに関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒトにおける第II相反応に関与する酵素
には種々のものが知られている。このうち、アシルＣｏ
Ａ：アミノ酸Ｎ−アシル転移酵素、特に胆汁酸ＣｏＡ：
アミノ酸Ｎ−アシル転移酵素（bile acid Coenzyme A:
amino acid N-acyltransferase、以下、ＢＡＡＴとい
う）はアミノ酸抱合に関与する酵素である。

【０００３】ところで、新薬を開発する上で、該新薬を
投与した際の第II相反応に関与する酵素の動き（発現量
の増減）を把握することは重要である。何故なら、第II
相反応に関与する酵素の変動が判らないと、該新薬と併
用される併用薬剤の効力や副作用の増減或いは併用薬剤
や他の摂取物による新薬の効力や副作用の増減が予測で
きず、該新薬の安全性を確認することができないからで
ある。

【０００４】そこで、上記新薬開発等の分野において
は、ヒトにおける第II相反応に関与する酵素に関する情
報、殊に之等各分子種を区別して測定できる測定技術の
開発が要望されている。かかる技術が開発できれば、例
えば、新薬の他剤との相互作用や特殊病態時における影
響等が容易に把握でき、該新薬の副作用に関する有用な
情報を得ることができ、新薬の安全性を確保することが
できる。一方、ポリメラーゼチェインリアクション（Ｐ
ＣＲ）は、核酸の増幅法として広く知られており、例え
ばＲＴ−ＰＣＲ（Reverse Transcription-PCR）、コン
ペティティブＲＴ−ＰＣＲ等が微量のｍＲＮＡの検出、
定量に威力を発揮している。

【０００５】近年、ＰＣＲを利用したリアルタイム定量
検出法が確立された（Taq Man PCR(Genome Res., 6(1
0), 986 (1996)), ABI PRISM^TM Sequence Detection Sy
stem(Applied Biosystems社)）。これは、特定の蛍光標
識プローブ（TaqMan prove）を用いて核酸を測定する方
法である。より詳しくは、例えば５’末端にリポーター
色素及び３’末端にクエンチャー色素を付加して蛍光標
識したプローブをターゲットＤＮＡにアニールさせた状
態で、通常のＰＣＲ反応を行なわせると、伸長反応の進
行に伴って、ＤＮＡポリメラーゼの有する５′−３′エ
キソヌクレアーゼ活性により、上記プローブが５’末端
から加水分解される。その結果、５’末端のリポーター
色素が３’末端のクエンチャー色素から離れ、これによ
り、当初一定の空間的距離を保っていたことによるＦＲ
ＥＴ（Fluoresence Resonance Energy Transfer, 両蛍
光色素の共鳴によるリポーター色素のエネルギー順位の
低下に基づく蛍光強度の低下現象）効果がなくなり、ク
エンチャー色素により制御されていたリポーター色素の
蛍光強度が増加する。従って、この蛍光強度の増加を測
定することによって、ターゲット核酸をリアルタイムに
選択的に定量検出できるのである。この方法によれば、
ＰＣＲ反応後に増幅物を例えばアガロースゲル電気泳動
して、泳動パターンを解析する等の複雑な工程が不要と
なり、短時間で且つ同時に多種のサンプルを定量できる
利点がある。

【０００６】一般に、臨床検査センター等で臨床検査を
行う場合には、非常に多数の検体について限られた時間
内に検査をする必要があるため、検査を効率良く行い得
る手法の開発が要望されている。上記リアルタイム検出
法は、このような要望に合致するものとして期待されて
いる。

【０００７】本発明者らは、上記ＰＣＲによるリアルタ
イム検出法に着目し、これがヒト第II相反応、とくにア
ミノ酸抱合に関与する酵素の検出に利用できるのではな
いかとの着想から、鋭意研究を重ねた。

【０００８】しかるに、現在知られている化学物質を代
謝するアミノ酸抱合に関与するＢＡＡＴは、そのｍＲＮ
Ａの配列は知られているものの、これをターゲット遺伝
子としたとき、該ターゲット遺伝子の特定位置にハイブ
リダイズし得る各プライマー対としてのオリゴヌクレオ
チドの検索自体困難であると考えられた。また、かかる
プライマー対に挟まれた特定領域に、同一ＰＣＲ条件下
に之等のプライマーよりも早くハイブリダイズし得、し
かもＢＡＡＴに対して特異的なプローブの構築もまた、
同様に困難であると考えられた。

【０００９】特に、ヌクレオチド配列が既知の２つの核
酸のハイブリダイズのし易さは、融点（Ｔｍ）の計算に
よりある程度推定することはできるものの、この推定に
よって選択したプライマーとプローブとの組合せが、必
ずしもＤＮＡ測定において好結果をもたらすわけではな
いことが知られていることより、ヒトにおけるアミノ酸
抱合に関与するＢＡＡＴについて、上記ＰＣＲによるリ
アルタイム検出用の各プライマー対とプローブとの組合
せの選択には、熟練者の試行錯誤による多大な実験等が
必要となると予想された。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ヒト
におけるアミノ酸抱合に関与するアシルCoA：N-アシル
転移酵素のＰＣＲによる測定法、特にリアルタイム検出
法の確立と、そのためのプローブ及びプライマー対を提
供することにある。

【００１１】本発明者らは、上記目的よりヒトにおける
アミノ酸抱合に関与するＢＡＡＴについて、多大な実
験、研究を繰返し行った結果、当該酵素に対する目的の
プライマー対及びプローブの組合せを提供することに成
功し、ここに下記要旨の本発明を完成するに至った。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、ヒトに
おけるアミノ酸抱合に関与するＢＡＡＴの測定に用いら
れるプローブであって、ＢＡＡＴ遺伝子の６６〜９３の
領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなる
ことを特徴とするプローブ；特にリポーター色素とクエ
ンチャー色素とが結合している該プローブ；塩基配列の
長さが２０〜４０である該プローブ；配列番号１に示さ
れる配列を含む該プローブ；並びに配列番号１に示され
る配列である該プローブが提供される。

【００１３】また、本発明によれば、ヒトにおけるアミ
ノ酸抱合に関与するＢＡＡＴをコードするＢＡＡＴ遺伝
子の44-63領域及び117-96領域にハイブリダイズするオ
リゴヌクレオチドからなるフォワードプライマーとリバ
ースプライマーとのプライマー対、及び上記両プライマ
ーに挟まれた66-93領域にハイブリダイズするオリゴヌ
クレオチドからなるプローブの組合せからなる、アシル
CoA：N-アシル転移酵素の測定キット；特にプローブが
更にリポーター色素とクエンチャー色素とを結合させた
ものである上記測定キットが提供される。

【００１４】上記キットを構成するプライマー対とプロ
ーブとの組合せ（セット）の好ましいものとしては、配
列番号２及び３で示される配列を含むオリゴヌクレオチ
ドからなるプライマー対と配列番号１で示される配列を
含むオリゴヌクレオチドからなるプローブとの組み合わ
せからなるもの、より好ましくは各配列番号で示される
配列のものを挙げることができる。

【００１５】また、上記各セットはアミノ酸抱合に関与
するＢＡＡＴの測定用であることができる。本発明によ
れば、更にヒトにおけるアミノ酸抱合に関与するＢＡＡ
Ｔの遺伝子を含む検体について、上記の測定キットを用
いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲを含
む）を行い、用いたプローブの加水分解の有無を測定す
ることを特徴とするヒトにおけるアミノ酸抱合に関与す
るアシルCoA：N-アシル転移酵素の測定方法、特に上記
加水分解の有無が、励起光照射による蛍光の発色の有無
によりなされる上記測定方法が提供される。

【００１６】より詳しくは、フォーワードプライマー及
びリバースプライマーのプライマー対並びにレポーター
色素とクエンチャー色素を有し上記両プライマーに挟ま
れた領域内で鋳型核酸とハイブリダイズするプローブを
用いて、５′−３′エキソヌクレアーゼ活性を有するＤ
ＮＡポリメラーゼによりポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ
Ｒ）を行うことによって、ヒトにおけるアミノ酸抱合に
関与するアシルCoA：N-アシル転移酵素の遺伝子を測定
するリアルタイム検出方法が提供される。

【００１７】本発明に係わるアシルCoA：N-アシル転移
酵素のリアルタイム検出方法は、同一ＰＣＲ乃至ＲＴ−
ＰＣＲ反応条件下にリアルタイムで簡便且つ迅速に、当
該酵素を分別定量できるものであり、その確立は、臨床
分野、医薬品分野において非常に有益である。例えば、
本発明方法によって、医薬品開発における動態試験にお
いて重要な位置を占める薬物代謝のアミノ酸抱合に関与
するアシルCoA：N-アシル転移酵素のヒト試料中でのｍ
ＲＮＡの発現を容易に定量することができる。これによ
って、医薬品等の化学物質に曝露された場合の上記アシ
ルCoA：N-アシル転移酵素の変化を知ることができる。

【００１８】また、手術で摘出した組織やバイオプシー
により摘出した組織中のアシルCoA：N-アシル転移酵素
のｍＲＮＡ発現を見る上で、迅速且つ多種の試料を処理
でき、また、僅かな組織片から抽出した全ＲＮＡで検出
可能である。

【００１９】更に、アシルCoA：N-アシル転移酵素にお
いては、肝臓、腎臓等での酵素誘導などによる発現量の
変化が血液中（血液に含まれる核を有する細胞）の値の
変化と相関する可能性が考えられるが、この血液中の発
現量は小さく、測定には多くの血液を必要とする。しか
し、本発明者の設計したプライマーとプローブを用いれ
ば少ないサンプルで測定が可能である機器での測定が可
能であり、血液中の発現量を測定することに有用であ
る。また、アシルCoA：N-アシル転移酵素は、肝臓、腎
臓等での酵素誘導などによる発現量の変化が唾液中など
分泌液中に含まれる核を有する細胞の値の変化と相関す
る可能性が考えられるが、この唾液中など分泌液中に含
まれる核を有する細胞中の発現量は小さく、測定には多
くの唾液などの分泌液を必要とする。しかし、本発明者
の設計したプライマーとプローブを用いれば少ないサン
プルで測定が可能である機器での測定が可能であり、唾
液中などの発現量を測定することに有用である。

【００２０】以下、本発明方法に利用するプローブ及び
プライマー対につき詳述すれば、各プローブ及びプライ
マーは、上述した通り、ＢＡＡＴの遺伝子の特定領域に
ハイブリダイズするオリゴヌクレオチドから選択され
る。

【００２１】ここで「ハイブリダイズする」とは、後述
するＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）の条件でハイブリダイズす
ることをいう。

【００２２】本発明に係わるプローブ及びプライマーに
共通する要件としては、増幅生成物が５０〜４００塩基
対の長さであること、プライマーとプローブができる限
り近接していること、配列に含まれるＧ（グアニン）及
びＣ（シトシン）の割合がなるべく５０％前後であるこ
と、Ｇ（グアニン）が４つ以上連続していないことを挙
げることができる。また、その他の本発明プローブにみ
られる要件としてはＴｍ値が７０℃前後であることを挙
げることができ、同様にプライマーにはＴｍ値が６０℃
前後であることを挙げることができる。

【００２３】ＢＡＡＴのｍＲＮＡ配列は公知であり、ジ
ーンバンク（GenBank）にＢＡＡＴ遺伝子；ＮＭ＿００
１７０１の登録番号で登録されている。

【００２４】本明細書において、ＢＡＡＴの特定領域の
表示は、上記登録番号で登録された遺伝子の配列に従う
ものである。

【００２５】前記プライマー及びプローブ用のオリゴヌ
クレオチドのヌクレオチド数は、少なくとも１５個、通
常１５〜５０個、好ましくは２０〜４０個の範囲にある
のがよい。之等プライマー及びプローブのヌクレオチド
数が上記よりあまりに多くなりすぎると、１本鎖ＤＮＡ
にハイブリダイズしにくくなり、逆にあまりに小さすぎ
ると、ハイブリダイゼーションの特異性が低下する。

【００２６】プライマー及びプローブの特定のヌクレオ
チド配列の好ましい具体的配列の例は、前述したとお
り、配列番号１（プローブの場合）並びに配列番号２お
よび３（プライマーの場合）に示されるとおりである。

【００２７】尚、例えば２０ヌクレオチドからなるプラ
イマー又はプローブは、鋳型鎖との間に少数のミスマッ
チが存在してもハイブリダイズし、ＰＣＲのプライマー
として又は検出用プローブとして機能し得ることが知ら
れている。従って本発明プライマー及びプローブもま
た、上記の特定のヌクレオチド配列を有するものに限定
されず、これをその一部として含むものや、この配列中
の例えば２個以下のヌクレオチドの置換、欠失及び／又
は付加による修飾のなされた配列を包含することができ
る。

【００２８】上記本発明プローブ及びプライマーとして
の前記オリゴヌクレオチドは、常法に従い、自動合成
機、例えばＤＮＡシンセサイザー（パーキンエルマー
社）等を用いて容易に合成することができ、得られるオ
リゴヌクレオチドは更に必要に応じて、市販の精製用カ
ートリッジ等を用いて精製することもできる。

【００２９】本発明のリアルタイム検出用プローブは、
その一端、例えば５′−末端にレポーター色素を結合し
ており、そして他端、例えば３′−末端にクエンチャー
色素を結合している。レポーター色素は、例えば励起光
の照射によって蛍光を発する物質であり、クエンチャー
は、該レポーター色素に距離的に接近して存在する場合
レポーター色素に作用してその蛍光の発生を消去する作
用を有するものであることができる。該レポーター色素
の例としては、例えば６−カルボキシ−フルオレッセイ
ン（ＦＡＭ）、テトラクロロ−６−カルボキシフルオレ
ッセイン（ＴＥＴ）、２，７−ジメトキシ−４，５−ジ
クロロ−６−カルボキシフルオレッセイン（ＪＯＥ）、
ヘキソクロロ−６−カルボキシフルオレッセイン（ＨＥ
Ｘ）等が挙げられる。クエンチャー色素の例としては、
例えば６−カルボキシ−テトラメチル−ローダミン（Ｔ
ＡＭＲＡ）等が挙げられる。

【００３０】本発明プローブは、前記特定配列のプロー
ブ用オリゴヌクレオチドにレポーター色素及びクエンチ
ャー色素を結合させることにより調製できる。例えばプ
ローブの５′側は、通常数個のメチレン鎖をリンカーと
し、末端のリン酸基にＦＡＭ分子をリン酸エステルの形
で結合させることができる。また、３′側には、下に示
す構造単位を介してアミド結合によりＴＡＭＲＡ分子を
結合させ得る。

【００３１】

【化１】

【００３２】以下、本発明プライマー対及びプローブを
利用したＰＣＲによるリアルタイム検出法につき詳述す
る。

【００３３】本発明方法は、前述した本発明プライマー
対及びプローブを利用することを必須として、他は公知
のＰＣＲ法（例えば、Science, 230, 1350 (1985)参
照）、ＲＴ−ＰＣＲ（Genome Res., 6(10), 986 (1996)
参照）等、特にリアルタイム検出法（例えばTaqMan PC
R, ABI PRISMTM 7700 SEQUENCE DETECTION SYSTEM, App
lied Biosystems, Ver1, June 1996参照）に従い実施す
ることができる。

【００３４】該方法は、特に本発明が対象とするＢＡＡ
Ｔの発現量の測定方法として、ｍＲＮＡを測定する場合
に有用である。この場合、ＢＡＡＴを発現している生体
組織を採取し、常法に従って全ＲＮＡを抽出し、次にそ
れに対して相補性のｃＤＮＡを常法に従って合成した
後、本発明プライマー対とプローブとを用いて、ＰＣＲ
を行えばよい。また、常法に従って全ＲＮＡを抽出後、
本発明プライマーとプローブとを用いて、直接ＲＴ−Ｐ
ＣＲを行なうこともできる。

【００３５】ＰＣＲ反応、ＲＴ−ＰＣＲ反応は、基本的
には公知の方法に従うことができる。それらの反応条件
も公知の方法に準じて適宜決定することができ、特に異
なるものではない。具体的には、後記実施例に示す条件
を好ましく採用できる。

【００３６】検出も、基本的には常法に従って、例え
ば、アルゴンレーザ光をＰＣＲ反応液に照射し、放射さ
れる蛍光をＣＣＤカメラを用いて検出することにより行
なうことができる。

【００３７】かくして、本発明方法の実施によって、所
期のアミノ酸抱合に関与するＢＡＡＴを容易且つ迅速に
検出することができる。

【００３８】本発明は更に、上記方法の実施のためのキ
ットをも提供する。このキットは上記プライマー対及び
プローブを含んでなる。本発明キットには、対照として
使用することのできる既知の核酸や、該核酸を測定する
ためのプライマー対及びプローブを更に含んでいてもよ
い。

【００３９】本発明方法によれば、ＢＡＡＴの遺伝子を
測定、検出できるため、これによってＢＡＡＴの定量を
迅速に精度よく行なうことができる。かくして、新薬の
他剤との相互作用や配合禁忌等に関連する基礎データー
を効率よく得ることができる。

【００４０】

【実施例】以下、試験例を挙げて本発明をより詳細に説
明する。

【００４１】

【試験例１】リアルタイム検出法による検量線の作成 本試験で採用したリアルタイムワンステップＲＴ−ＰＣ
Ｒ法は、９６ウエルを用いて、最大９６の異なった反応
を同時に実施して、一度に最大９６の検体を測定できる
ものである。また、１チューブ内でＲＴ反応とＰＣＲ反
応とを行なうことができる。

【００４２】本定量の原理は、隣接した２種類の蛍光色
素を用いて、一方の色素（リポーター色素）の蛍光波長
と他方の色素（クエンチャー色素）の励起光波長との間
で、波長領域が重なる場合に生じるＦＲＥＴを利用した
ものである。ＦＲＥＴを生じる２種の蛍光色素を両末端
に結合させたプローブ（TaqMan probe）がＰＣＲで増幅
したＢＡＡＴ由来のｃＤＮＡにハイブリダイゼーション
し、この状態でＰＣＲの伸長反応が始まり、Ｔａｑ Ｄ
ＮＡポリメラーゼの有する５’−３’エンドヌクレアー
ゼ活性によってＴａｑＭａｎプローブが加水分解され、
リポーター色素が脱離し、クエンチャー色素との間の物
理的距離が生じ、ＦＲＥＴによって抑制されていたリポ
ーター色素の蛍光強度が増加し、この蛍光強度の増加は
ＰＣＲの増幅産物の増加量に比例するため、これをＰＣ
Ｒ反応毎に測定することによって、所望の定量が可能と
なる。

【００４３】本試験では、プローブの５’末端側にはリ
ポーター色素としてＦＡＭを、３’末端側にはクエンチ
ャー色素としてＴＡＭＲＡを使用した。之等各色素の結
合及びこれによるＴａｑＭａｎプローブの作成は、文献
記載の方法（Genome Res., 6(10), 986 (1996)）に従っ
て行なった。

【００４４】また、各プライマー及びプローブとしての
オリゴヌクレオチドは、自動シンセサイザーとしてＡＢ
Ｉ社製のＤＮＡ／ＲＮＡ合成機を利用して、基質（ｄＮ
ＴＰ）及び規定の試薬を用いて合成した。

【００４５】検体ＲＮＡとしては、成人の脳、成人の腎
臓、成人の肺、成人の小腸、胎児の肝臓、成人の肝臓プ
ールより精製された全ＲＮＡを用いた。尚、之等の全Ｒ
ＮＡはいずれもクローンテック社（Clontech Laborator
ies, Inc.）より購入した。

【００４６】成人の脳、成人の腎臓、成人の肺、成人の
小腸、胎児の肝臓、成人の肝臓プールより精製された全
ＲＮＡは、ＲＮａｓｅフリーの水で希釈し、２０μｇ／
ｍＬとした。その後、これら６種類を等量ずつ混合し、
検量線作成用とした。以後は、５０μｇ／ｍＬのイース
トｔＲＮＡ（Yeast tRNA, GIBCO社製）を用いて、５倍
公比で希釈した。測定には５μＬを使用した。

【００４７】ＲＴ−ＰＣＲ反応は、３００ｎＭフォーワ
ードプライマー、９００ｎＭリバースプライマー及び２
００ｎＭ TaqManプローブを含むTaqMan One-Step RT-PC
R Master Mix Reagents Kit (PE Applied Biosystems)
を用いて、５０μＬ／チューブの系で、ＡＢＩ ＰＲＩ
ＳＭ^TM７７００ Sequence Detection System（PE Appl
ied Biosystems）にて行なった。

【００４８】温度条件は、４８℃で３０分間、９５℃で
１０分間で保温した後、９５℃で１５秒間、６０℃で１
分間のサイクルを５０回行い、各サイクルごとに蛍光強
度を測定した。

【００４９】ＢＡＡＴに対して配列番号２及び３に示さ
れる配列のプライマー対及び配列番号１に示される配列
のプローブを用いて上記試験を行なった。その結果、得
られた検量線は、傾き−３．２８、切片３９．０７であ
り、相関係数１．００、定量限界６．４ｐｇ全RNA/５０
μL反応液量であった。

【００５０】このことから、１０００００ｐｇ全ＲＮＡ
／５０μＬ反応液量から５倍公比で希釈された検量線を
作成したところ、ＢＡＡＴについては、６．４ｐｇ全Ｒ
ＮＡ／５０μＬ反応液量まで定量性を有していることが
わかる。

【００５１】

【配列表】SEQUENCE LISTING <110> Ostuka Pharmaceutical Factory Inc. <120> アシルCoA：N-アシル転移酵素の測定方法、その
ためのプローブ及びキット <130> 00P1069 <160> 3 <210> 1 <211> 28 <212> DNA <213> human BAAT gene <400> 1 aggcctgatt ccctttcaga tggtgagt 28 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> human BAAT gene <400> 2 agccagtgca tatccgagct 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> human BAAT gene <400> 3 ttcatcttcc agtgatgcct ga 22

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｆターム(参考） 2G043 AA06 BA16 DA02 EA01 2G054 CA22 CA28 EA03 GA04 4B024 AA11 AA20 CA09 HA11 4B063 QA01 QA13 QA18 QQ02 QQ42 QQ53 QR08 QR32 QR55 QR62 QR66 QS02 QS25 QS34 QX02

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒトにおけるアミノ酸抱合に関与する胆
   汁酸ＣｏＡ：アミノ酸Ｎ−アシル転移酵素（ＢＡＡＴ）
   の測定に用いられるプローブであって、ＢＡＡＴ遺伝子
   の６６〜９３の領域にハイブリダイズするオリゴヌクレ
   オチドからなるプローブ。
2. 【請求項２】リポーター色素とクエンチャー色素とが結
   合している請求項１記載のプローブ。
3. 【請求項３】 塩基配列の長さが２０〜４０である請求
   項１記載のプローブ。
4. 【請求項４】 配列番号1に示される配列を含むものであ
   る請求項１〜３のいずれかに記載のプローブ。
5. 【請求項５】 配列番号１に示される配列である請求項
   １〜３のいずれかに記載のプローブ。
6. 【請求項６】ヒトにおけるアミノ酸抱合に関与する胆汁
   酸ＣｏＡ：アミノ酸Ｎ−アシル転移酵素（ＢＡＡＴ）を
   コードするＢＡＡＴ遺伝子の44-63領域及び117-96領域
   にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなるフォ
   ワードプライマーとリバースプライマーとのプライマー
   対、及び上記両プライマーに挟まれた66-93領域にハイ
   ブリダイズするオリゴヌクレオチドからなるプローブの
   組合せからなる、アシルCoA：N-アシル転移酵素の測定
   キット。
7. 【請求項７】 プローブが、更にリポーター色素とクエ
   ンチャー色素とを結合させたものである請求項６記載の
   測定キット。
8. 【請求項８】配列番号２及び３で示される配列を含むオ
   リゴヌクレオチドからなるプライマー対と配列番号１で
   示される配列を含むオリゴヌクレオチドからなるプロー
   ブとの組み合わせからなる請求項７記載の測定キット。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の測定キットであって、
   前記セットがＢＡＡＴの測定用である測定キット。
10. 【請求項１０】 請求項８に記載の配列番号で示される
    配列を有するオリゴヌクレオチドからなるプライマー対
    とプローブとの組合せからなる請求項９記載の測定キッ
    ト。
11. 【請求項１１】 ヒトにおけるアミノ酸抱合に関与する
    胆汁酸ＣｏＡ：アミノ酸Ｎ−アシル転移酵素（ＢＡＡ
    Ｔ）を含む検体について、請求項６〜１０のいずれかに
    記載の測定キットを用いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ
    Ｒ）を行い、用いたプローブの加水分解の有無を測定す
    ることを特徴とする、アシルCoA：N-アシル転移酵素の
    測定方法。
12. 【請求項１２】加水分解の有無が、励起光照射による蛍
    光の発色の有無によりなされる請求項１１記載の測定方
    法。