JP2001520200A - ウロキナーゼタイプのプラスミノーゲン活性化因子の内在化および分解を促進するための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ウロキナーゼタイプのプラスミノーゲン活性化因子の内在化および分解を促進するための組成物および方法を含む。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 本発明の分野は、細胞接着および細胞遊走の調節である。

【０００２】 発明の背景 プラスミノーゲン活性化因子は、不活性チモーゲンプラスミノーゲンを広域ス
ペクトラムの蛋白質分解酵素、プラスミンに変換する（Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ
ａｌ．，１９９０，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．
３０：９１−１２１；Ｈｏｌｄｅｎ，１９９０，Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １７４：
９９３−１００１；Ｍａｙｅｒ，１９９０，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３：
１９７−２１１）。ある種のプラスミノーゲン活性化因子はウロキナーゼタイプ
のプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）と表示され、これは哺乳類の体の循環
系および他の液性コンパートメント（ｆｌｕｉｄ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）の
一構成成分である。

【０００３】 ｕＰＡは主要な細胞関連（ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）プラスミノーゲ
ン活性化因子であり、かつ血管新生、器官形成、排卵、炎症、癌、腫瘍細胞浸潤
および転移、アテローム性動脈硬化を初めとする幾つかの生物学的プロセス、な
らびに例えばフィブリンや基底膜のような生理学的関門を通過する細胞遊走を特
徴とする他の生物学的および病理学的プロセスにおいて示唆されている（Ｇｙｅ
ｔｋｏ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：１３８
０−１３８７；Ｇｙｅｔｋｏ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．９７：１８１８−１８２６；Ｓｈａｐｉｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７
，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５０：３５９−３６９；Ｄａｄｏ ｅｔ ａｌ．
，１９９４，Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ ８（Ｓｕｐｐｌ．１）：１８９−２０
３）。

【０００４】 ｕＰＡは、一本鎖ｕＰＡ（ｓｃｕＰＡ）として表示される一本鎖チモーゲンと
して合成され、そしてこれはほとんどウロキナーゼ活性を示さない（Ｅｌｌｉｓ
ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：１４９９８−１
５００３；Ｐｅｔｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６３：１１１８９−１１１９５；Ｈｕｓａｉｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ ３０：５７０７−５８０５；Ｃｏｌｌｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１
９８６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１２５９−１２６６）。ｓｃｕＰＡ
の活性化はｓｃｕＰＡの酵素開裂により生じ、二本鎖（ｔｗｏ−ｃｈａｉｎ）ｕ
ＰＡ（ｔｃｕＰＡ）をもたらす。ｓｃｕＰＡからのｔｃｕＰＡの生理学的形成は
主にプラスミンによる触媒反応を受ける（Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９
６７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４２：２３３３−２３４２）。ｓｃｕＰＡは
また、ｓｃｕＰＡの細胞表面レセプター、ｕＰＡＲへの結合により活性化されて
よい。ｓｃｕＰＡのｕＰＡＲへの結合の場合には、ｓｃｕＰＡは一本鎖分子のま
までいるものの、活性を示す（Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１７３７５−１７３８０）。

【０００５】 ｕＰＡの活性は、一部が、蛋白質のセリンプロテアーゼ阻害因子（ＳＥＲＰＩ
Ｎ）ファミリーの一員であるプラスミノーゲン活性化因子阻害因子−１（ＰＡＩ
−１）により調節される（Ｋｒｕｉｔｈｏｆ，１９８８，Ｅｎｚｙｍｅ ４０：
１１３−１２１；Ｐｏｔｅｍｐａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６９：１５９５７−１５９６０；Ｌｉｊｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９
９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２４：５６７−５７４）。ＰＡＩ−１は
、液相におけるｕＰＡ活性の最も適切な阻害剤と考えられており、その原因は阻
害の速度定数が高水準の秒単位である（ｈｉｇｈ ｓｅｃｏｎｄ ｏｒｄｅｒ）
１．７×１０^-8Ｍ^-1・ｓ^-1であり、そしてこの値は他のいずれかのプロテアーゼ
阻害剤よりも大きいためである（Ｈｅｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ａｒ
ｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． ２６２：１９９−２１０）。

【０００６】 ｓｕＰＡＲと表示されるｕＰＡＲの可溶性組換え形態が知られており、そして
これは細胞表面にそのレセプターを連結させるｕＰＡＲの部分を欠失するためｕ
ＰＡＲとは異なる。ｓｕＰＡはｓｃｕＰＡの結合および活性化、ならびにｕＰＡ
−ｕＰＡＲ複合体の接着性亢進に関してはｕＰＡＲと同一の性質を有する（Ｈｉ
ｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１７３
７５−１７３８０；Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８７
：３５４５−３５４９）。

【０００７】 ｓｃｕＰＡのｕＰＡＲへの結合は、ｓｃｕＰＡのウロキナーゼ活性を亢進させ
る（Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ．ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
０：１７３７５−１７３８０）。また、ｓｃｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体の形成は、
ＰＡＩ−１がｔｓｕＰＡ活性を阻害する能力と比較すると、ｓｃｕＰＡ活性を阻
害するＰＡＩ−１の能力を低下させる（Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６
，Ｂｌｏｏｄ ８７：３５４５−３５４９）。また、ｓｃｕＰＡとｕＰＡＲとの
間の複合体の形成は、プラスミンのペプチド基質によるｓｃｕＰＡ酵素活性の調
節を変化させ、かつｓｃｕＰＡのビトロネクチンへの結合を促進させる（Ｈｉｇ
ａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．８４：２４３−２５
２；Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８８：５４２−５５
１；Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３２
３８９−３２３８８；Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７
３：１５５１−１５５５；Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．１３４：１５６３−１５７１；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．
，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ ３８３：４４１−４４３；Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ ｅｔ
ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２：６８９−６９２）。

【０００８】 アミノ酸の位置１７９−１８４の蛋白質配列ＲＨＲＧＧＳを含んでなるｕＰＡ
の領域が、ＰＡＩ−１によるｕＰＡ活性の阻害には必要となる（Ｍａｄｉｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：２１４２３−２
１４２６）。哺乳類ｕＰＡ蛋白質間ではこの配列が保存されていることが示され
ている（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
６：８４７６−８４８２）。異なるプラスミノーゲン活性化因子蛋白質、すなわ
ち組織タイプのプラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）を用いる研究を行うこと
でＭａｄｉｓｏｎらは、ＰＡＩ−１によるｔＰＡの阻害に関与するＰＡＩ−１の
領域を同定している（１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：２１４２３
−２１４２６）。ＰＡＩ−１のこの領域は、アミノ酸３４６−３５６の配列ＲＭ
ＡＰＥＥＩＩＭＤＲを含む。ＰＡＩ−１のこの領域とｔＰＡとの間の静電的相互
作用がｔＰＡ−ＰＡＩ−１複合体の安定化に一役買っているものと仮定されてい
る。同様に、ＰＡＩ−１の一領域とｕＰＡとの間の静電的相互作用がＰＡＩ−１
ｕＰＡ複合体の形成に寄与してよいと仮定されている。しかしながら、ｓｃｕＰ
Ａ−ｕＰＡＲ複合体は、ｔｃｕＰＡもしくはｕＰＡＲに結合したｔｃｕＰＡと比
較すると（Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８７：３５４
５−３５４９；Ｅｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６５：９９０４−９９０８）ＰＡＩ−１による阻害に対する感受性が劣るこ
とが観察されている（Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８
７：３５４５−３５４９）。

【０００９】 ｕＰＡがウロキナーゼ活性を阻害することに加え、ＰＡＩ−１は、α₂−マク ログロブリンレセプター／低密度リポ蛋白質−関連レセプター蛋白質（α₂ＭＲ ／ＬＲＰ；Ｎｙｋｊａｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６９：２５６６８−２５６７６）を必要とするｕＰＡの内在化およびリソソ
ーム分解を亢進させもする。ＰＡＩ−１とｔｃｕＰＡとの間に形成される複合体
は、いずれかの構成成分単独の場合と比較すると一層高目の親和性でα₂ＭＲ／ ＬＲＰに結合する。複合体の親和性増大は、各リガンド内に存在するエピトープ
が個別に関与することによりもたらされることが示されているものの、ｕＰＡに
及ぼすＰＡＩ−１の潜在的立体配座変化効果は未だ解明されていない（Ｎｙｋｊ
ａｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５６６
８−２５６７６）。

【００１０】 ｓｃｕＰＡがｕＰＡＲに結合する際には、ｓｃｕＰＡはＰＡＩ−１による不活
化から保護される。それに加え、ｕＰＡＲへのｓｃｕＰＡの結合はα₂ＭＲ／Ｌ ＲＰへのｓｃｕＰＡの結合およびそういった結合によりもたらされるｓｃｕＰＡ
の内在化を阻害する（Ｎｙｋｊａｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２６９：２５６６８−２５６７６；Ｈｉｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，
１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８７：３５４５−３５４９）。ｕＰＡＲに結合したｓｃ
ｕＰＡのα₂ＭＲ／ＬＲＰに対する親和性減少については２つのメカニズムが仮 定されている。Ｎｙｋｊａｅｒら（上述）は、ｓｃｕＰＡがα₂ＭＲ／ＬＲＰに 接触する部位はｕＰＡＲにより遮蔽されていると提案した。別のメカニズムは、
ｕＰＡＲへのｓｃｕＰＡの結合は、インテグリンリガンドへのｓｃｕＰＡ結合を
促進させ、そしてα₂ＭＲ／ＬＲＰにより認識されるｓｃｕＰＡエピトープの喪 失をもたらすことの両方を行う立体配座変化を誘発するというものである（Ｈｉ
ｇａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８８：５４２−５５１）。後
者として提案されるメカニズムは、可溶性ｓｃｕＰＡはｔｃｕＰＡよりはα₂Ｍ Ｒ／ＬＲＰに対して高い親和性を有するという所見、およびｔｃｕＰＡの活性部
位がリン酸ジイソフルオリルにより占領されている場合にはｔｃｕＰＡはα₂Ｍ Ｒ／ＬＲＰに対する親和性を失うという所見に一致する（Ｎｙｋｊａｅｒ ｅｔ
ａｌ．，１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５６６８−２５６７
６）。

【００１１】 ｕＰＡＲに結合したｓｃｕＰＡは活性を示し、ＰＡＩ−１による不活化から保
護され、そしてｓｃｕＰＡのα₂ＭＲ／ＬＲＰへの結合および後続の分解により 媒介される細胞表面からのクリアランスから保護されている。それに加え、ｕＰ
ＡＲから解離したｓｃｕＰＡは不活化立体配座に逆戻りし、そして本質的にはＰ
ＡＩ−１による不活化に対して感受性を示さなくなる。従って、結合していない
ｓｃｕＰＡはｕＰＡＲに再結合し、そしてその活性立体配座にもう一度立ち戻る
能力をもち続ける。

【００１２】 ヒト組織内でのｕＰＡおよびｕＰＡＲの発現は、良性から新生物状態への細胞
の変換に関連することを示す多くの疫学的データが存在する。それに加え、ｕＰ
ＡおよびｕＰＡＲの発現は広範囲にわたる多種多様の一般的悪性病変に関連して
おり、かつそういった悪性病変が将来進展することの予兆となる。ｕＰＡへの抗
体の結合、ｕＰＡをコードするｍＲＮＡに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオ
チドの発現、もしくはｕＰＡの触媒的不活化形態の過剰発現によりｕＰＡ活性が
妨害されると、ヒト癌のいくつもの実験的マウスモデルにおける腫瘍進行が妨害
される（Ｏｓｓｏｗｓｋｉ，１９８８，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０７：２４
３７−２４４５；Ｏｓｓｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｃａｎｃ．Ｒｅ
ｓ．５１：２７５−２８１；Ｋｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＥＭＢＯ Ｊ
．１３：３９８３−３９９１；Ｃｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５０２１−５０２５；Ｊａ
ｎｋｕｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．５７：５５９−５６３
）。

【００１３】 ｕＰＡ活性を調節する能力があれば、医療従事者は多くの重要なヒト疾患およ
びその症状を調節することが可能となろう。哺乳類、特にヒトにおけるｕＰＡの
活性の調節に有用な組成物、および哺乳類における望ましくないｕＰＡ活性に起
因する病理学的症状を治療するためにそういった組成物を使用する方法について
は、未だ満たされていないかなりの必要性が残されている。特に必要とされるの
は、プラスミンによるｓｃｕＰＡの活性化とは関係なく、ｕＰＡＲへのｓｃｕＰ
Ａの結合とは関係なく、かつＰＡＩ−１による可溶性ｓｃｕＰＡもしくはｕＰＡ
Ｒに結合したｓｃｕＰＡの不活化とは関係なく作用するｓｃｕＰＡの内在化およ
び分解を促進するための組成物および方法である。

【００１４】 発明の要約 本発明は、アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドを含んでなる組成物を含む。

【００１５】 ある態様では、 Ｘ₁は、水素もしくはアミノ末端ブロッキング基であり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＤおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉであり； Ｘ₅は、Ｉであり； Ｘ₆は、Ｍであり； Ｘ₇は、ＤおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基である。

【００１６】 好ましい態様では Ｘ₁は、水素であり； Ｘ₂は、Ｅであり； Ｘ₃は、Ｅであり； Ｘ₄は、Ｉであり； Ｘ₅は、Ｉであり； Ｘ₆は、Ｍであり； Ｘ₇は、Ｄであり；そして Ｘ₈は、水素である。

【００１７】 他の態様では、本発明の組成物は薬剤学的に許容される担体を更に含む。

【００１８】 更には、生理学的関門を通過する異常細胞遊走を特徴とする生物学的プロセス
に悪影響を及ぼす方法も本発明に含まれる。この方法は、本発明の組成物を、そ
の生物学的プロセスを体験する哺乳類に対して、その生物学的プロセスに悪影響
を及ぼす量で投与することを含む。

【００１９】 ある態様では、この生物学的プロセスは、血管新生、器官形成、排卵、炎症、
癌、腫瘍細胞浸潤および転移、ならびにアテローム性動脈硬化からなる群より選
択される。

【００２０】 好ましい態様では、哺乳類はヒトである。

【００２１】 本発明は更に、哺乳類の組織に対する細胞のＰＡＩ−１−依存的接着を阻害す
る方法を含み、その方法は、その組織に対して本発明の組成物をその組織への細
胞の接着を阻害する量で投与することを含む。

【００２２】 ある態様では、組織は哺乳類内でのインビボの状態をとる。

【００２３】 好ましい態様では、哺乳類はヒトである。

【００２４】 哺乳類細胞の表面からのｓｃｕＰＡのクリアランスを促進する方法も本発明に
含まれ、この方法は、請求項１の組成物を、細胞からのｓｃｕＰＡのクリアラン
スを促進させる量で細胞に投与することを含む。

【００２５】 ある態様では、細胞はヒト細胞である。

【００２６】 好ましい態様では、組成物はヒトにインビボで投与される。

【００２７】 更には、本発明は、哺乳類における細胞の病理学的遊走を妨げる方法を含む。
この方法は、細胞の病理学的遊走を妨げるのに効果的な量で本発明の組成物を哺
乳類に投与することを含む。

【００２８】 ある態様では、組成物は、哺乳類の腫瘍の部位で哺乳類に投与される。

【００２９】 好ましい態様では哺乳類はヒトである。

【００３０】 本発明は更に、哺乳類の組織内のＰＡＩ−１活性を阻害する方法をも含む。こ
の方法は、組織内のＰＡＩ−１活性を阻害するのに効果的な量で本発明の組成物
を組織に投与することを含む。

【００３１】 ある好ましい態様では、哺乳類はヒトである。

【００３２】 別の好ましい態様では、組成物はヒトにインビボで投与される。

【００３３】 本発明は更には、アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドを含んでなるキット、ならびにそのキットを使用するための説
明用資料をも含む。

【００３４】 更には、アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドと、 血栓溶解薬 との組み合わせ物を含む組成物も含まれる。

【００３５】 ある態様では血栓溶解薬は、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキ
ナーゼ、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ誘導体、およびスタフィロキナーゼ
からなる群より選択される。

【００３６】 更には、アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドと、 抗凝血剤 との組み合わせ物を含む組成物が本発明に含まれる。

【００３７】 ある態様では抗凝血剤は、血小板機能を阻害する試薬、トロンビンの活性を阻
害する試薬、および活性化された蛋白質キナーゼＣの活性を促進する試薬、抗−
トロンビンＩＩＩ試薬、ならびに組織因子経路阻害剤からなる群より選択される
。

【００３８】 詳細な記述 本発明は、ＬＭ−ＴＭ^-細胞へのｓｃｕＰＡの結合を促進させ、そしてそれに よりそれらの細胞によるｓｃｕＰＡの内在化および分解を促進させるペプチドの
発見に基づく。本発明のペプチドは、精製されたα₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰ Ａの結合も促進する。従って本発明のペプチドは、ｓｃｕＰＡの生理学的有用性
に影響を及ぼすのには有用であり、そしてそのため生理学的関門を通過する異常
な細胞遊走を特徴とする生物学的プロセスに影響を及ぼすのに有用であり、そう
いった生物学的プロセスは制約される訳ではないが、血管新生、器官形成、排卵
、炎症、癌、腫瘍細胞浸潤および転移、ならびにアテローム性動脈硬化を含む。

【００３９】 α₂ＭＲ／ＬＲＰへのｕＰＡの結合により媒介される細胞内ｕＰＡの内在化お よび分解は、プラスミン形成の生理学的調節における重要な段階を意味する。ｔ
ｃｕＰＡとＰＡＩ−１との間に形成される複合体は迅速に分解される。それとは
対照的に、ＰＡＩ−１に対してｓｃｕＰＡが感受性を示さなければ、ＰＡＩ−１
不活化によるクリアランスが妨げられ、そしていずれかの感知可能な程度での細
胞表面からのｓｃｕＰＡのクリアランスが生じることが妨げられる。これらの所
見により、α₂ＭＲ／ＬＲＰはｓｃｕＰＡ内の特異的エピトープの存在を、その 効果的内在化および分解のために必要とすることが示唆される。

【００４０】 本明細書に示されるデータによると、α₂ＭＲ／ＬＲＰを含むがｕＰＡＲを欠 くＬＭ−ＴＭ^-細胞へのｓｃｕＰＡの結合はヘキサペプチドＥＥＩＩＭＤの細胞 外培地内での存在により刺激された。ペプチドＥＥＩＩＭＤの存在は、ｓｃｕＰ
Ａ結合についてのＢ_max定数の値を４倍増加させ、そして半最大効果（ｈａｌｆ −ｍａｘｉｍａｌ ｅｆｆｅｃｔ）は約５０マイクロモルのペプチド濃度で達成
された。Ｂ_maxは、飽和時点での細胞表面の結合部位の最大数を表す。最大結合 速度の増加の程度はＣ−末端アミノ酸の荷電に依存したが、そのペプチドのＮ−
末端アミノ酸の荷電には依存しなかった。

【００４１】 ペプチドＥＥＩＩＭＤは精製されたα₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｕｃＰＡの結合を 促進させた。ペプチドＥＥＩＩＭＤは、ＬＭ−ＴＭ^-細胞によるｓｃｕＰＡの内 在化および分解の速度を亢進させもした。ＬＭ−ＴＭ^-細胞へのｓｃｕＰＡの結 合およびペプチドＥＥＩＩＭＤの存在下でのこれらの細胞によるｓｃｕＰＡの内
在化は、ｒＲＡＰもしくは抗−α₂ＭＲ／ＬＲＰ抗体のいずれかの存在により阻 害された。ペプチドＥＥＩＩＭＤはＬＭ−ＴＭ^-細胞もしくは精製されたα₂ＭＲ
／ＬＲＰのいずれかへのｔｃｕＰＡの結合に対しては何の効果も示さず、そして
ｓｃｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形成にも影響を及ぼさなかった。従って、ペプチド
ＥＥＩＩＭＤはα₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡの結合を調節し、そしてα₂ＭＲ
／ＬＲＰへのＥＥＩＩＭＤにより促進されるｓｃｕＰＡの結合は、プラスミンに
よるｓｃｕＰＡの活性化およびｕＰＡＲへのｓｃｕＰＡの結合の両方共と無関係
にα₂ＭＲ／ＬＲＰを含む細胞によるｓｃｕＰＡの内在化および分解を促進する 方法を表す。細胞によるｓｃｕＰＡの内在化および分解の促進は、生理学的関門
を通過する異常な細胞遊走を特徴とする生物学的プロセスを阻害する。

【００４２】 細胞内ｓｃｕＰＡの存在は、ペプチドＥＥＩＩＭＤにＬＭ−ＴＭ^-細胞を晒す ことにより調節されており、そしてこのペプチドＥＥＩＩＭＤの配列は、ＰＡＩ
−１のアミノ酸３５０〜３５５であるＰＡＩ−１のアミノ酸配列の一部分と相同
である。ペプチドＥＥＩＩＭＤは、ｔｃｕＰＡへのＰＡＩ−１結合の競合的阻害
剤であることが観察された。このペプチドは、ＰＡＩ−１がｓｃｕＰＡに結合し
なかった実験条件下でもｓｃｕＰＡに結合した。ペプチドＥＥＩＩＭＤは、細胞
性α₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡの結合という手段によりｓｃｕＰＡの内在化 および分解を促進することが観察された。

【００４３】 従って、制約されるわけではないが、ペプチドＥＥＩＩＭＤならびにそれに由
来するペプチドおよびペプチド類似作用薬（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）
を初めとする本明細書に記載される本発明のペプチドを用いて、細胞表面からの
ｓｃｕＰＡのクリアランスを促進させ、そしてそのことによる病理学的細胞遊走
を妨害してよい。更に本発明のペプチドを、ｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形成の阻害
剤と協同的に用いてよい。ｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形成の阻害剤は当該技術分野
で知られており、そしてペプチドに基づくものもしくは抗体に基づくもの、ｕＰ
ＡもしくはｕＰＡＲのいずれかにおける結合性配列に対するもの、ｕＰＡ−ｕＰ
ＡＲ複合体と相互作用すると考えられる他の蛋白質からの配列に基づくもの、有
機阻害剤、およびアンチセンスに基づく阻害剤などを含む。例えば、スラミン（
Ｓｕｒａｍｉｎ）が複合体形成を阻害するのに用いられてよい。ｕＰＡ−ｕＰＡ
Ｒ複合体形成の阻害剤が、生理学的関門を通過する異常な細胞遊走を特徴とする
生物学的プロセスを被る被検体内で単独で用いられる場合には、生物学的に適切
な量のｓｃｕＰＡは、ｕＰＡＲに結合したままとなるか、もしくはｕＰＡＲ付近
の細胞環境内に留まる。生物学的に適切な量のｓｃｕＰＡは更には、ｓｃｕＰＡ
の局所合成が持続するためｕＰＡＲに結合することができてよい。ｓｃｕＰＡの
生物学的に適切な量は、生理学的関門を通過する細胞の遊走に影響を及ぼすこと
ができるｓｃｕＰＡの量を意味する。従って、ｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形成の阻
害剤の単独での使用は細胞表面からのｓｃｕＰＡの完全なクリアランスをもたら
すには不十分となるため、ｓｃｕＰＡの生物学的に適切な量は細胞表面には残ら
ない。

【００４４】 単独もしくはｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形成の阻害剤と組み合わせて用いられる
際には本発明のペプチドは、細胞表面からのｓｃｕＰＡのクリアランスを効率的
に促進するのに用いられてよい。本発明のペプチドとｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形
成の阻害剤とを組み合わせて用いる場合には協同効果がもたらされ、これはすな
わち本発明のペプチドがα₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡの結合という手段によ りｓｃｕＰＡの内在化を、そしてその後のｓｃｕＰＡの内在化および分解を引き
起こし、そしてｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体形成の阻害剤はｕＰＡＲに結合する生物
学的に適切な量のｓｃｕＰＡの分離（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ）を阻害する
ということである。

【００４５】 制約される訳ではないがペプチドＥＥＩＩＭＤを初めとする本発明のペプチド
は、ＰＡＩ−１活性の阻害剤としても有用である。ＰＡＩ−１活性を血栓に結び
付けるヒトの病因学的および実験的データは数多く存在する。一例として、動脈
血栓は血栓溶解剤に対して比較的耐性を示すが、その理由の一部はフィブリンに
結合するスロンビンが、フィブリン綱内に捕獲される活性化された血小板による
ＰＡＩ−１の放出を促進するためである。最近得られた別の重要な所見は、ＰＡ
Ｉ−１はｕＰＡ−ｕＰＡＲ複合体により媒介される細胞接着を調節するというも
のである。制約されるわけではないが、ペプチドＥＥＩＩＭＤならびにそれに由
来するペプチドおよびペプチド類似作用薬（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）
を初めとする本発明のペプチドは、ｓｃｕＰＡおよびｔｓｕＰＡへのＰＡＩ−１
結合の競合的阻害剤である。細胞外環境における本発明のペプチドの存在は、ｓ
ｃｕＰＡを除去することにより細胞表面ｓｃｕＰＡのクリアランスを阻害するた
め、ｓｃｕＰＡはｔｃｕＰＡには変換されない。従って本発明のペプチドは内因
性血栓溶解を亢進させ、哺乳類における血栓症のリスクを減らす。内因性血栓溶
解の亢進は、血栓形成を伴う多種多様の疾患および障害を患う個別の被検体の有
用な治療学的および予防的治療法である。こういった疾患および障害は、制約さ
れる訳ではないが、心臓発作、脳卒中、深部静脈血栓症、肺塞栓、および一個人
中の異常なほど大量なＰＡＩ−１の存在を含む。被検体はいずれかの哺乳類であ
ってよく、そして好ましくはヒト被検体である。

【００４６】 本発明のペプチドは単独もしくは既知の血栓溶解剤と組み合わせて用いられて
よく、そのことにより遥かに低量かつ一層安全な濃度での既知の血栓溶解剤の使
用が可能になる。既知の血栓溶解剤は、一例として、組織プラスミノーゲン活性
化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ誘導体ＡＰＳ
ＡＣ、およびスタフィロキナーゼを含む。

【００４７】 本発明のペプチドは更には既知の抗凝血剤と協同的に用いてもよい。本発明の
ペプチドを一緒に用いてよい抗凝血剤は、制約される訳ではないが、血小板機能
を阻害するもの、トロンビンの活性を阻害するもの、例えば活性化された蛋白質
キナーゼＣの活性を促進するもの、抗−トロンビンＩＩＩ、および組織因子経路
阻害剤等を含む。本発明のペプチドと既知の抗凝血剤との組み合わせ使用は、血
栓形成を妨げ、かつ既存の血栓の血栓溶解を促進させるのに有効である。

【００４８】 本発明のペプチドを用いて、組織を通過する細胞遊走中の重要制御地点である
ＰＡＩ−１依存的細胞接着を阻害してよい。従って本発明のペプチドを用いて、
血管新生、転移、アテローム斑への平滑筋細胞の内植、炎症を伴うもしくは損傷
を受けた組織への白血球細胞の浸潤、排卵、精子の卵子への結合、胎盤発達、お
よび他の種類の細胞遊走、特に望ましくない細胞遊走を阻害してよい。本明細書で用いられる略称の表 ｕＰＡ ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子 ｓｃｕＰＡ 一本鎖ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子 ｔｃｕＰＡ 二本鎖ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子 ｕＰＡＲ ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子レセプター ｓｕＰＡ 可溶性ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子レセ プター ｔＰＡ 組織タイププラスミノーゲン活性化因子 ＰＡＩ−１ プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−１ α₂ＭＲ／ＬＲＰ α₂−マクログロブリンレセプター／低密度リポ蛋白質関連 レセプター蛋白質 ｒＲＡＰ 組換え３９キロダルトンα₂ＭＲ／ＬＲＰ ＰＢＳ リン酸緩衝化食塩水 ＴＢＳ トリス塩酸緩衝化食塩水 ＤＭＥＭ ダルベッコー改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍ ｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ） ＢＳＡ ウシ血清アルブミン 本明細書で用いられる際にはアミノ酸は、以下の表に示されるように、その完
全な名称、それに対応する三文字コード、もしくはそれに対応する一文字コード
により表される：

【００４９】

【表１】

【００５０】 本発明は、本明細書に記載されるペプチドのアナログも提供する。アナログは
、保存アミノ酸配列差によるか、もしく配列に影響を及ぼさない改変によるか、
またはその両者により、本明細書に記載されるペプチドとは異なり得る。

【００５１】 例えば、蛋白質もしくはペプチドの一次配列を変化させはするものの通常はそ
の機能は変化させない保存アミノ酸変化を作成してよい。保存アミノ酸置換は典
型的には以下の群に含まれる置換を含む： グリシン、アラニン； バリン、イソロイシン、ロイシン； アスパラギン酸、グルタミン酸； アスパラギン、グルタミン； セリン、スレオニン； リシン、アルギニン；および フェニルアラニン、チロシン。

【００５２】 本発明のペプチドの一次配列を変化させない改変を、本明細書に記載される組
成物および方法に用いてよい。一次配列を変化させない改変は、例えばアセチル
化またはカルボキシル化のようなポリペプチドのインビボもしくはインビトロの
化学的誘導化を含む。更に、一例ではポリペプチドのグリコシル化パターンの、
その合成中での改変およびプロセシングもしくは更に進んだプロセシング段階に
より作成されるもの；そして例えば一例では哺乳類のグリコシル化もしくは脱グ
リコシル化酵素のようにグリコシル化に影響を及ぼす酵素にポリペプチドを晒す
ことによるような、グリコシル化の改変も含む。また、例えばホスホチロシン、
ホスホセリン、もしくはホスホスレオニンのようなホスホリル化されたアミノ酸
残基を有する配列も包含される。

【００５３】 更には、蛋白質分解に対する耐性を改善するため、または溶解性特性を至適化
させるため、または薬剤学的試薬として一層適切なものにするために、通常の化
学的もしくは分子生物学的技術を用いて改変されているポリペプチドも含まれる
。そう言ったポリペプチドのアナログは、天然に存在するＬ−アミノ酸以外の残
基、例えばＤ−アミノ酸もしくは天然には存在しない合成アミノ酸を含むものを
含む。本発明のペプチドは、本明細書に列挙される具体的な例示的プロセスの内
のいずれかの産物に限定はされない。

【００５４】 本発明のペプチドは、一般式 Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有する。

【００５５】 好ましくは、Ｘ₁は水素もしくはアミノ末端ブロッキング基であり、Ｘ₂はＤ、
Ｅ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり、Ｘ₃はＤおよびＥから なる群より選択されるアミノ酸であり、Ｘ₄はＩであり、Ｘ₅はＩであり、Ｘ₆は Ｍであり、Ｘ₇はＤおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり、そして Ｘ₈は水素もしくはカルボキシル末端ブロッキング基である。一層好ましくは、 Ｘ₁は水素であり、Ｘ₂はＥであり、Ｘ₃はＥであり、Ｘ₄はＩであり、Ｘ₅はＩで あり、Ｘ₆はＭであり、Ｘ₇はＤであり、そしてＸ₈は水素である。

【００５６】 最も好ましくは、本発明のペプチドはＥＥＩＩＭＤである。

【００５７】 本発明のペプチドは更には、本明細書では「ＰＡＩ−１」ペプチドとしても引
用される。

【００５８】 本発明は、有効成分として本発明のペプチドを含んでなる薬剤学的組成物の調
製および使用を包含する。こういった薬剤学的組成物は、単独の有効成分からな
ってよいか、被検体への投与に適する形態をとってよいか、あるいは薬剤学的組
成物は、有効成分、および一つもしくは複数の薬剤学的に許容される担体、一つ
もしくは複数の追加成分、またはそれらのなんらかの組み合わせ物を含んでよい
。被検体へのこれらの薬剤学的組成物の内の一つの投与は、本明細書のいずれか
別の場所に記載される様々な疾患もしくは障害を治療するのに有効である。有効
成分は、生理学的に許容されるエステルもしくは塩の形態をとる薬剤学的組成物
として、当該技術分野でよく知られているように例えば生理学的に許容されるカ
チオンもしくはアニオンとの組み合わせ物として存在してよい。

【００５９】 本明細書で用いられる場合には用語「薬剤学的に許容される担体」は、有効成
分を合わせてよく、かつその組み合わせの後には被検体に有効成分を投与するの
に用いることができる化学的組成物を意味する。

【００６０】 本明細書で用いられる場合は用語「生理学的に許容される」エステルもしくは
塩は、薬剤学的組成物の他のいずれかの成分と適合し、その組成物が投与される
予定の被検体に対して有害ではない有効成分のエステルもしくは塩形態を意味す
る。

【００６１】 本明細書に記載される薬剤学的組成物の製剤は、薬理学の技術分野で知られて
いるか、もしく今後開発されるいずれかの方法により調製されてよい。一般的に
はこういった調製法は、有効成分を一担体または一つもしくは複数の他の補助成
分との組み合わせ物にさせ、そしてその後に必要に応じ、もしくは所望される場
合にはその製品を所望される単一もしくは複数用量単位に成型するかもしくはそ
ういった投与用量で梱包する段階を含む。

【００６２】 本明細書に提供される薬剤学的組成物の記載は本質的にはヒトへの倫理的投与
に適する薬剤学的組成物を指示するものの、当業者は、こういった組成物が一般
的には全ての種類の動物に適することを理解する。様々な動物への投与に適する
組成物にさせる目的でのヒトへの投与に適する組成物を改変することはよく理解
されており、そして獣医学の薬理学者の当業者は、あるとしても単なる通常の実
験を用いてそういった改変を設計および実行することができる。本発明の薬剤学
的組成物の投与が企図される被検体は、制約される訳ではないが、ヒトおよび他
の霊長類、哺乳類（商業に関連する哺乳類、例えば乳牛、ブタ、ウマ、ヒツジ、
ネコ、およびイヌを含む）、鳥類（商業に関連する鳥類、例えばニワトリ、アヒ
ル、ガチョウ、および七面鳥を含む）、魚類（養殖場で育成された魚類およびア
クアリウム用魚類を含む）、ならびに甲殻類（例えば、養殖場で育成された貝類
）を含む。

【００６３】 本発明の方法で有用な薬剤学的組成物は、経口、直腸、経膣、非経口、局所、
肺、鼻内、口内、眼科、もしくは他の経路の投与に適する製剤として調製、梱包
、もしくは販売されてよい。他の企図される製剤は、押し出されたナノ粒子（ｐ
ｒｏｊｅｃｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ）、リポソーム調製物、有効成
分を含む放出された赤血球（ｒｅｌｅａｓｅｄ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ）、
および免疫学を基にする製剤を含む。

【００６４】 本発明の薬剤学的組成物は、単一単位用量として、もしくは複数単一単位用量
として大量に調製、梱包、もしくは販売されてよい。本明細書内で用いられる場
合には「単位用量」は、有効成分の予め決定された量を含む薬剤学的組成物の個
別（ｄｉｓｃｒｅｔｅ）の量である。有効成分の量は一般的には、被検体に投与
されるであろう有効成分の一回分の投与量、または例えばそういった一回の投与
量の半量もしくは３分の１量のような、一回の投与量の便利な分数量に等しい。

【００６５】 本発明の薬剤学的組成物中の有効成分、薬剤学的に許容される担体、およびい
ずれかの追加有効成分の相対量は、治療を受ける被検体の身元（ｉｄｅｎｔｉｔ
ｙ）、サイズ、および症状に依存して、そして更にはその組成物が投与される経
路に依存して変化する。一例としては、組成物は０．１％と１００％（ｗ／ｗ）
の間の有効成分を含んでよい。

【００６６】 有効成分に加え本発明の薬剤学組成物は、一つもしくは複数の追加的薬剤学的
に活性な試薬を含んでよい。具体的に企図される追加試薬は、抗−嘔吐剤、なら
びにシアニドおよびシアナート補足剤のような補足剤を含む。

【００６７】 本発明の薬剤学的組成物の制御放出性（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｒｅｌｅａｓ
ｅ）もしくは徐放性製剤は通常の技術を用いて作成されてよい。

【００６８】 経口投与に適する本発明の薬剤学的組成物の製剤は、制約される訳ではないが
、錠剤、硬カプセルもしくは軟カプセル剤、カシェ剤、トローチ剤、もしくはロ
ゼンジ（各々有効成分の予め決められた量を含む）を初めとする個別の固形用量
の形態で調製、梱包、もしくは販売されてよい。経口投与に適する他の製剤は、
制約される訳ではないが、粉末状もしくは顆粒状製剤、水性もしくは油状懸濁剤
、水性もしくは油状水剤、または乳剤を含む。

【００６９】 本明細書に用いられる際には「油状」液体は、炭素含有性液体分子を含み、か
つ水よりも極性特性が低いものである。

【００７０】 有効成分を含有する錠剤は例えば、有効成分を、場合によっては一つもしくは
複数の追加成分と一緒に圧縮もしくは成形することにより作成してよい。圧縮錠
剤は、適切な装置内で有効成分を例えば粉末もしくは顆粒調製物のような自由流
動性（ｆｒｅｅ−ｆｌｏｗｉｎｇ）形態に、場合によっては一つもしくは複数の
結合剤、潤滑剤、賦形剤、界面活性剤、および分散剤と混ぜて圧縮することによ
り調製されてよい。成形錠剤は、適切な装置内で、有効成分、薬剤学的に許容さ
れる担体、および少なくともその混合物を湿らすのに十分な液体の混合物を成形
することにより作成されてよい。錠剤の製造に用いられる薬剤学的に許容される
賦形剤は、制約される訳ではないが、不活性稀釈剤、造粒および崩壊剤、結合剤
、ならびに潤滑剤を含む。既知の分散剤は、制約される訳ではないが、ジャガ芋
のデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｓｔａｒｃ
ｈ ｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ）を含む。既知の界面活性剤は、制約される訳ではな
いが、ラウリル硫酸ナトリウムを含む。既知の稀釈剤は、制約される訳ではない
が、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、微細結晶セルロース、リン
酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、およびリン酸ナトリウムを含む。既知の
造粒および崩壊剤は、制約される訳ではないが、コーンスターチおよびアルギン
酸を含む。既知の結合剤は、制約される訳ではないが、ゼラチン、アカシア、ゼ
ラチン化前のトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、およびヒドロキシ
プロピルメチルセルロースを含む。既知の潤滑剤は、制約される訳ではないが、
ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ケイ酸、およびタルクを含む。

【００７１】 錠剤はコートされていなくてよいか、もしくは被検体の胃腸管内での遅延崩壊
を達成するために既知の方法を用いてコートされてよく、そのことにより有効成
分の持続放出性および吸収が提供される。一例として、例えばモノステアリン酸
グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリルのような物質を用いて錠剤をコー
トしてよい。更に別の例として、浸透性制御放出錠剤（ｏｓｍｏｔｉｃａｌｌｙ
−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｔａｂｌｅｔｓ）を形成するために
は、米国特許第４，２５６，１０８号；第４，１６０，４５２号；および第４，
２６５，８７４号に記載される方法を用いてコートしてよい。錠剤は更には、甘
味料、矯味・矯臭剤、着色料、保存料、もしくはそれらの何らかの組み合わせ物
を、薬剤学的に精密かつ簡潔であり、そして口に心地よい調製物を提供する目的
で含んでよい。

【００７２】 有効成分を含んでなる硬カプセル剤は、例えばゼラチンのような生理学的に分
解可能な組成物を用いて作成されてよい。こういった硬カプセル剤は有効成分を
含み、そして例えば一例では炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、もしくはカオ
リンのような不活性固形稀釈剤を初めとする追加的成分を更に含んでよい。

【００７３】 有効成分を含んでなる軟カプセル剤は、例えばゼラチンのような生理学的に分
解可能な組成物を用いて作成されてよい。こういった軟カプセル剤は、水、また
は例えばピーナッツ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油のような油状媒体
と混合してよい有効成分を含む。

【００７４】 経口投与に適する本発明の薬剤学的組成物の液体製剤は、液体形態か、または
使用前に水もしくは他の適切な賦形剤で再構成することを意図する乾式製品の形
態のいずれかで調製、梱包、および販売されてよい。

【００７５】 液体懸濁剤は、水性もしくは油性賦形剤中の有効成分の懸濁を達成するための
通常の方法を用いて調製されてよい。水性賦形剤は例えば水および等張食塩水を
含む。油性賦形剤は例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、
一例ではラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、もしくはココナッツ油のような植
物油、分画化した植物油、および流動パラフィンのような鉱油を含む。液体懸濁
剤は更に、制約される訳ではないが、懸濁用試薬、分散もしくは湿潤剤、乳化剤
、粘滑剤、保存料、緩衝剤、塩、矯味・矯臭剤、着色料、および甘味料を含む一
つもしくは複数の追加成分を含んでよい。油性懸濁剤は更に増粘剤を含んでよい
。既知の懸濁用試薬は、制約される訳ではないが、ソルビトールシロップ、硬化
食用油脂、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、
アラビアゴム、および例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのようなセルロース誘導体を含
む。既知の分散もしくは湿潤剤は、制約される訳ではないが、例えばレクチンの
ような天然に存在するホスファチド、酸化アルキレンと脂肪酸、長鎖脂肪アルコ
ール、脂肪酸とヘキシトールから得られる部分エステル、もしくは脂肪酸と無水
ヘキシトールから得られる部分エステルとの凝縮産物（例えば、各々ステアリン
酸ポリオキシエチレン、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、ソルビトールモ
ノステアリン酸ポリオキシエチレン、およびモノオレイン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン）を含む。既知の乳化剤は、制約される訳ではないが、レシチンおよ
びアカシアを含む。既知の保存料は、制約される訳ではないが、メチル、エチル
、もしくはｎ−プロピル−パラ−ヒドロキシ安息香酸、アスコルビン酸、および
ソルビン酸を含む。既知の甘味料は例えば、グリセロール、プロピレングリコー
ル、ソルビトール、スクロース、およびサッカリンを含む。油性懸濁剤のための
既知の増粘剤は例えば、密蝋、固形パラフィン、およびセチルアルコールを含む
。

【００７６】 水性もしくは油性溶剤中の有効成分の溶液は、実質的には液体懸濁剤と同一の
様式で調製されてよく、主な違いは、有効成分が溶剤中に懸濁されているのでは
なくむしろ溶解していることである。本発明の薬剤学的組成物の溶液は、液体懸
濁剤に関して記載された各組成物を含んでよく、そして懸濁用試薬は溶剤中の有
効成分の溶解を必ずしも補助する訳ではないことが理解される。水性溶剤は例え
ば、水および等張食塩水を含む。油性溶剤は例えば、アーモンド油、油性エステ
ル、エチルアルコール、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、もしくはコ
コナッツ油のような植物油、分画化された植物油、および例えば流動パラフィン
のような鉱油を含む。

【００７７】 本発明の薬剤学的調製物の粉末状および顆粒状製剤は既知の方法を用いて調製
されてよい。例えば錠剤を形成するため、カプセル剤を充填するため、または水
性もしくは油性賦形剤を添加することにより水性もしくは油性の懸濁剤もしくは
溶液を調製するために用いられるこうした製剤は、被検体に直接投与されてよい
。これらの製剤の各々は、更に一つもしくは複数の分散もしくは湿潤剤、懸濁用
試薬、および保存料を含んでよい。例えば充填剤および甘味料、矯味・矯臭剤、
もしくは着色料のような追加賦形剤もこれらの製剤に含まれてよい。

【００７８】 本発明の薬剤学的組成物は、水中油型乳剤もしくは油中水型乳剤の形態で調製
、梱包、もしくは販売されてもよい。油層は例えばオリーブ油もしくはラッカセ
イ油のような植物油、例えば流動パラフィンのような鉱油、またはこれらの組み
合わせ物であってよい。こういった組成物は更に、例えばアラビアゴムもしくは
トラガカントゴムのような天然に存在するゴム、例えばダイズもしくはレクチン
のホスファチドのような天然に存在するホスファチド、例えばモノオレインさん
ソルビトールのような脂肪酸と無水ヘキシトールとの組み合わせ物により得られ
るエステルもしくは部分エステル、および例えばモノオレイン酸ポリオキシエチ
レンソルビタンのような、そういった部分エステルと酸化エチレンとの凝縮産物
のような一つもしくは複数の乳化剤を含んでよい。これらの乳剤は更には例えば
甘味料もしくは矯味・矯臭剤を初めとする追加成分を含んでよい。

【００７９】 本発明の薬剤学的組成物は直腸投与に適する製剤で調製、梱包、もしくは販売
されてよい。こういった組成物は例えば、座薬、停留浣腸調製物、および直腸も
しくは結腸洗浄法用の水剤の形態をとってよい。

【００８０】 座薬製剤は、有効成分を、通常の室温（すなわち、約２０℃）では固形であり
、そして被検体の直腸温度（すなわち、健常なヒトでは約３７℃）で液体となる
非刺激性の薬剤学的に許容される賦形剤と合わせることにとり作成されてよい。
適切で薬剤学的に許容される賦形剤は、制約される訳ではないが、ココアバター
、ポリエチレングリコール、および様々なグリセリドを含む。座薬製剤は更には
、制約される訳ではないが、酸化防止剤および保存料を初めとする様々な追加成
分を含んでよい。

【００８１】 停留浣腸調製物または直腸もしくは結腸洗浄法のための水剤は、有効成分を薬
剤学的に許容される液体担体と合わせることにより作成されてよい。当該技術分
野ではよく知られているように、浣腸調製物は、被検体の直腸の解剖学的特徴に
合わせた輸送用装置を用いて投与されてよく、そしてそういった装置内に梱包さ
れてよい。浣腸調製物は更には、制約される訳ではないが、酸化防止剤および保
存料を初めとする様々な追加成分を含んでよい。

【００８２】 本発明の薬剤学的組成物は、経膣投与に適する製剤として調製、梱包、もしく
は販売されてよい。こういった組成物は例えば、座薬、一例ではタンポンのよう
な含浸（ｉｍｐｒｅｇｎａｔｅｄ）もしくはコーティング膣挿入用物質、灌注調
製物（ｄｏｕｃｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）、または膣洗浄法用水剤の形態
をとってよい。

【００８３】 ある物質を、ある化学組成物で含浸もしくはコーティングするための方法は当
該技術分野で知られており、そして制約される訳ではないが、表面に化学組成物
を沈着もしくは結合させる方法、ある物質の合成中にその物質の構造内に化学組
成物を取り込ませる方法（すなわち、例えば生理学的に分解可能な物質を用いる
）、ならびに水性もしくは油性水剤もしくは懸濁剤を吸収材料に吸収させる（そ
の後に乾燥させる、もしくはさせない）方法を含む。

【００８４】 灌注調製物もしくは膣洗浄法用水剤は、有効成分を薬剤学的に許容される液体
担体と合わせることにより作成されてよい。当該技術分野では良く知られるよう
に、灌注調製物は、被検体の直腸の解剖学的特徴に合わせた輸送用装置を用いて
投与されてよく、そしてそういった装置内に梱包されてよい。灌注調製物は更に
は、制約される訳ではないが、酸化防止剤、抗生物質、抗菌剤、および保存料を
初めとする様々な追加成分を含んでよい。

【００８５】 本明細書で用いられる際は、薬剤学的組成物の「非経口投与」は、被検体の組
織の物理的裂傷作成（ｐｈｙｓｉｃａｌ ｂｒｅａｃｈｉｎｇ）およびその組織
の裂傷を通しての薬剤学的組成物の投与を特徴とするいずれかの投与経路を含む
。従って非経口投与は、制約される訳ではないが、組成物の注入、外科的切開を
通しての組成物の適用、および組織を貫通する非外科的創傷を通しての組成物の
適用等による薬剤学的組成物の投与を含む。特に、非経口投与は、制約される訳
ではないが、皮下、腹膜内、筋肉内、胸骨内注射、および腎臓透析灌流技術を含
むことが企図される。

【００８６】 非経口投与に適する薬剤学的組成物の製剤は、例えば滅菌水もしくは滅菌等張
食塩水のような薬剤学的に許容される担体と合わせた有効成分を含む。このよう
な製剤は、口腔投与もしくは持続投与に適する形態で調製、梱包、もしくは販売
されてよい。注入用製剤は、アンプル内、もしくは保存料を含む複数用量用容器
内の単位用量形態で調製、梱包、もしくは販売されてよい。非経口投与の製剤は
、制約される訳ではないが、懸濁剤、水剤、油性もしくは水性賦形剤中の乳剤、
ペースト剤、および移植用徐放性もしくは生物分解性製剤を含む。こうした製剤
は更には、制約されるわけではないが、懸濁用試薬、安定化剤、もしくは分散剤
を初めとする一つもしくは複数の追加成分を含んでよい。非経口投与用の製剤の
一つの態様では有効成分は、再構築組成物の非経口投与前に適切な賦形剤（例え
ば、滅菌した発熱性物質非含有水）での再構築のための乾式（すなわち、粉末も
しくは顆粒）形態で提供される。

【００８７】 薬剤学的組成物は、滅菌した注射用水性もしくは油性懸濁剤もしくは水剤の形
態として調製、梱包、もしくは販売されてよい。この懸濁剤もしくは水剤は、当
該技術分野で知られる技術に従って製剤されてよく、そして有効成分に加え、例
えば本明細書に示される分散剤、湿潤剤、もしくは懸濁用試薬のような追加成分
を含んでよい。こういった滅菌注射用製剤は、例えば一例では水もしくは１，３
−ブタンジオールのような無毒性の非経口的に許容される稀釈剤もしくは溶剤を
用いて調製してよい。他の許容される稀釈剤および溶剤は、制約される訳ではな
いが、リンゲル（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ）液、等張塩化ナトリウム溶液、ならびに例
えば合成モノ−もしくはジ−グリセリドのような不揮発性油を含む。有用である
他の非経口投与用製剤は、微細結晶形態で、リポソーム性調製物中に、もしくは
生物分解性高分子系の構成成分として、有効成分を含むものを含む。持続放出も
しくは移植のための組成物は、例えば乳化物、イオン交換樹脂、やや可溶性を示
す高分子、もしくはやや可溶性を示す塩のような薬剤学的に許容される高分子性
もしくは疎水性物質を含んでよい。

【００８８】 局所投与に適する製剤は、制約される訳ではないが、例えばリニメント剤、ロ
ーション剤、例えばクリーム剤のような水中油型もしくは油中水型の乳剤、軟膏
もしくはペースト剤、および水剤もしくは懸濁剤のような液体もしくは半液体の
調製物を含む。局所投与用製剤は例えば、約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の有効成
分を含んでよいが、有効成分の濃度は溶剤中の有効成分の可溶性限界程度に高く
てもよい。局所投与用の製剤は更には、本明細書に記載される一つもしくは複数
の追加成分を含んでよい。

【００８９】 本発明の薬剤学的組成物は、口腔前庭を通しての肺投与に適する製剤として調
製、梱包、もしくは販売されてよい。そういった製剤は、有効成分を含み、かつ
約０．５〜約７ナノメーター、そして好ましくは約１〜約６ナノメーターの範囲
の直径を有する乾式粒子を含んでよい。こういった組成物は、噴射剤の流れが粉
末剤を散乱させるように向けられていてよい乾式粉末剤レザバーを含む装置を用
いるか、または例えば密封容器内の低沸点噴霧剤中に溶解もしくは懸濁された有
効成分を含む装置のような自己噴霧溶剤／粉末剤分配用容器を用いて、簡便に投
与のための乾式粉末剤の形態とされる。好ましくはこのような粉末剤は、少なく
とも９８重量％の粒子が０．５ナノメーターを上回る直径を有し、そして数の上
で少なくとも９５％の粒子が７ナノメーターを下回る直径を有する粒子を含む。
一層好ましくは、少なくとも９５重量％の粒子が１ナノメートルを上回る直径を
有し、そして数の上で少なくとも９０％の粒子が６ナノメーターを下回る直径を
有する。乾式粉末剤組成物は好ましくは例えば糖のような固形の微細粉末剤用稀
釈剤を含み、そして単位用量形態で簡便に提供される。

【００９０】 低沸点噴霧剤は一般的には、大気圧下で６５゜Ｆ以下の沸点を有する液体噴霧
剤を含む。一般的には噴霧剤は組成物の５０〜９９％（ｗ／ｗ）を構築してよく
、そして有効成分は組成物の０．１〜２０％（ｗ／ｗ）を構成してよい。噴霧剤
は更には、例えば液体非イオン性もしくは固形アニオン性界面活性剤、または固
形稀釈剤のような追加成分（恐らくは、有効成分を含む粒子と同じ桁の粒子サイ
ズを有する）を含んでよい。

【００９１】 肺輸送のために製剤された本発明の薬剤学的組成物は、水剤もしくは懸濁剤の
小滴の形態で有効成分を提供してもよい。こういった製剤は、場合によっては滅
菌され、有効成分を含む水性もしくは稀釈アルコール溶液もしくは懸濁物として
調製、梱包、もしくは販売されてよく、そしていずれかの噴霧器もしくは噴霧化
装置を用いて簡便に投与されてよい。こうした製剤は更には、制約される訳では
ないが、例えばサッカリンナトリウムのような矯味・矯臭剤、揮発油、緩衝化試
薬、界面活性剤、もしくは例えばメチルヒドロキシ安息香酸のような保存料を初
めとする一つもしくは複数の追加成分を含んでよい。この経路の投与により提供
される小滴は好ましくは、約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均直径を
有する。

【００９２】 肺輸送に有用であるとして本明細書に記載される製剤は更に、本発明の薬剤学
的組成物の鼻内輸送にも有用である。

【００９３】 鼻内投与に適する他の製剤は、有効成分を含み、かつ約０．２〜５００ナノメ
ートルの平均直径を有する粗末剤である。こういった製剤は、鼻から吸入する薬
用粉末を吸入する様式、すなわち外鼻孔近くに保たれる粉末剤の容器からの鼻経
路を通しての迅速な吸引により投与される。

【００９４】 経鼻投与に適する製剤は例えば、０．１％（ｗ／ｗ）という少量から１００％
（ｗ／ｗ）という大量の有効成分を含んでよく、そして更には本明細書に記載さ
れる一つもしくは複数の追加成分を含んでよい。

【００９５】 本発明の薬剤学的組成物は、口腔投与に適する製剤として調製、梱包、もしく
は販売されてよい。こういった製剤は例えば通常の方法を用いて作成される錠剤
もしくはトローチ剤の形態を取ってよく、そして例えば０．１〜２０％（ｗ／ｗ
）の有効成分（口内で溶解するもしくは分解する組成物を含む均衡量）および場
合によっては一つもしくは複数の本明細書に記載される追加成分を含んでよい。
別法では、口腔投与に適する製剤は、有効成分を含む粉末剤またはエアロゾル化
されたかもしくは噴霧化された水剤もしくは懸濁剤を含んでよい。こういった粉
末化、エアロゾル化、もしくはエアロゾル化された製剤は、分散される際には好
ましくは約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均粒子もしくは小滴サイズ
を有し、そして更には一つもしくは複数の本明細書に記載される追加成分を含ん
でよい。

【００９６】 本発明の薬剤学的組成物は、眼科投与に適する製剤として調製、梱包、もしく
は販売されてよい。こういった製剤は例えば、一例では水性もしくは油性液体担
体中の活性成分の０．１〜１．０％（ｗ／ｗ）水剤もしくは懸濁剤を初めとする
目薬の形態を取ってよい。こういった目薬は更には、緩衝用試薬、塩、または一
つもしくは複数の本明細書に記載される他の追加成分を含んでよい。有用とされ
る他の眼科用投与用製剤は、微細結晶形態を取るかもしくはリポソーム調製物中
に有効成分を含むものを含む。

【００９７】 本明細書で用いられる場合には「追加成分」は、制約される訳ではないが、一
つもしくは複数の以下のものを含む：賦形剤；界面活性剤；分散剤；不活性稀釈
剤；顆粒化もしくは崩壊剤；結合剤；潤滑剤；甘味料；矯味・矯臭剤；着色料；
保存料；例えばゼラチンのような生理学的分解可能な組成物；水性賦形剤および
溶剤；油性賦形剤および溶剤；懸濁用試薬；分散用もしくは湿潤用試薬；乳化剤
、粘滑剤；緩衝剤；塩；増粘剤；充填剤；乳化剤；酸化防止剤；抗生物質；抗菌
剤；安定化剤；および薬剤学的に許容される高分子性もしくは疎水性物質。本発
明の薬剤学的組成物中に含まれてよい他の「追加成分」は当該技術分野に知られ
ており、そして例えば、Ｇｅｎａｒｏ、ｅｄ．、１９８５、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ，Ｍａｒｋ Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（これは引用により本明細書に取り
込まれる）に記載される。

【００９８】 典型的には、動物、好ましくはヒトに投与されてよい本発明のペプチドの用量
は、その動物の体重のキログラム当たり１μｇ〜約１００ｇの量の範囲となる。
投与される正確な用量は、制約される訳ではないが、動物の種類、治療を受ける
疾患状況の種類、動物の年齢、および投与経路を初めとするいずれかの数の要素
に依存して変化する。好ましくは、化合物の用量は動物の体重のキログラム当た
り約１ｍｇ〜約１０ｇまで変化する。一層好ましくは、用量は動物の体重のキロ
グラム当たり約１０ｍｇ〜約１ｇまで変化する。

【００９９】 化合物は一日数回というほど頻繁に動物に投与されてよいか、あるいは例えば
一日一回、一週間に一回、二週間に一回、一カ月に一回、あるいは例えば数カ月
に一回または一年もしくはそれ以内に一回のように一層低い頻度で投与されてよ
い。用量の頻度は当業者には容易に明らかになるであろうし、そして例えば制約
される訳ではないが、治療を受ける疾患の種類および重度、動物の種類および年
齢などのようないずれかの数の要素に依存するであろう。

【０１００】 本発明は更に、本発明のペプチドを含んでなるキットおよびそのペプチドを哺
乳類の細胞もしくは組織に外膜を通して投与することを記載する説明用資材を含
む。他の態様ではこのキットは、動物の化合物を投与する前に本発明のペプチド
を可溶化もしくは懸濁させるのに適する（好ましくは滅菌されている）溶剤を含
む。

【０１０１】 本明細書で用いられる場合には「説明用資材」は、刊行物、記録、図、または
本明細書に引用される様々な疾患もしくは障害の軽減をもたらすためのキット中
の、本発明のペプチドの有効性を通報するのに用いることができるいずれかの他
の表現手段を含む。場合によっては、もしくは別法では、説明用資材は、哺乳類
の細胞もしくは組織内の疾患もしくは障害の緩和の一つもしくは複数の方法を記
載してよい。本発明のキットの説明用資材は例えば、本発明のペプチドを含む容
器に添付されるか、またはそのペプチドを含む容器と共に出荷されてよい。別法
では説明用資材は、その説明用資材と化合物とが受取人により協同的に用いられ
ることを意図した上で容器とは個別に出荷されてよい。

【０１０２】 本発明はここで、以下の実験的詳細を引用することで記載される。実験的詳細
は説明目的のみのために提供され、かつ本発明は本明細書に記載される態様に制
約されるとは決して解釈されるべきではなく、むしろ本明細書に提供される教示
の結果として明らかとなるいずれかのおよび全ての変法を包含するものと解釈さ
れるべきである。実施例１：本発明のペプチドによるｓｃｕＰＡの調節 ｕＰＡがα₂ＭＲ／ＬＲＰに結合する機構を調べるために、ｓｃｕＰＡ、ｓｃ ｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体及びｔｃｕＰＡの細胞結合、インターナリゼーション
及び分解に対するペプチドＥＥＩＩＭＤの存在の影響を調べた。ペプチドはα₂ ＭＲ／ＬＲＰによるｓｃｕＰＡの認識を増大したが、ｔｃｕＰＡの認識は増大し
なかった。そのデータは、ＰＡＩ−１の一部とｓｃｕＰＡの相互作用が、その活
性を調節するｓｃｕＰＡの構造変化をもたらすことを示す。本発明のペプチドは
、α₂ＭＲ／ＬＲＰを発現する細胞によるｓｃｕＰＡのインターナリゼーション 及び分解を促進することが見い出された。

【０１０３】 ここで、本実施例の実験に用いる材料及び方法を記述する。 組換えｓｃｕＰＡ及び組換えｓｕＰＡＲは報告されたように精製され、それらを
Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ；Ｈｉ
ｇａｚｉ等、１９９６、Ｂｌｏｏｄ ８７：３５４５−３５４９；Ｈｉｇａｚｉ 等、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：５３４８−５３５３）から入
手した。ペプチドＥＥＩＩＭＤ、ＲＥＩＩＭＤ及びＥＥＩＩＭＲをペプチド合成
の当該技術分野で周知の方法を用いて合成した。Ｇｌｕ−プラスミノーゲン、ｔ
ｃｕＰＡ、ＰＡＩ−１及びプラスミン発色性基質Ｓｐｅｃｔｒａｚｙｍｅ ＰＬ^{T M} （商標）をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ，Ｉｎｃ．（Ｇｒｅｅｎ
ｗｉｃｈ、ＣＴ）から入手した。精製されたα₂ＭＲ／ＬＲＰ及びｒＲＡＰを記 述されたように（Ｗｉｌｌｉａｍｓ等、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
６７：９０３５−９０４０）調製した。ＬＭ−ＴＫ^-細胞系をＡｍｅｒｉｃａｎ
Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（カタログ番号ＣＣＬ １．３ Ｌ
−Ｍ（ＴＫ^-）Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から入手した。Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）から入手したヨードビ ーズ（Ｉｏｄｏ−ｂｅａｄｓ）を用いて記述されたように（Ｂａｒｎａｔｈａｎ
等、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：２８６５−２８７２）ｓｃｕ
ＰＡ、ｓｕＰＡＲ及びｔｃｕＰＡを¹²⁵Ｉで放射性標識した。蛋白質複合体の調製 ｓｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体を調製するために、（１．５％（ｗ／ｖ）ＢＳ
Ａを追加したＰＢＳを含んでなる）結合バッファー中で所望する最終濃度の１０
倍で、ｓｕＰＡＲ及びｓｃｕＰＡをそれぞれ１．２５：１のモル比で一緒に３７
℃で１時間インキュベートした。

【０１０４】 ＰＡＩ−１との複合体を形成するために、結合バッファー及びｓｃｕＰＡ、ｔ
ｃｕＰＡ、ｓｃｕＰＡ／ｓｕＰＡＲ複合体またはｔｃｕＰＡ／ｓｕＰＡＲ複合体
を含んでなる溶液にＰＡＩ−１を１：１のモル比で添加し、溶液を３７℃で３０
分間インキュベートした。

【０１０５】 蛋白質複合体を使用直前に所望する使用濃度に希釈した。プラスミノーゲンアクチベーター活性の評価 ５ナノモルのｔｃｕＰＡ、０または２００マイクロモルのペプチドＥＥＩＩＭ
Ｄ及び０または２００マイクロモルのペプチドＲＥＩＩＭＤを含んでなる溶液を
３０分間インキュベートした。次に、２５ナノモルのＰＡＩ−１、５０ナノモル
のＧｌｕ−プラスミノーゲン及び５０マイクロモルの発色性基質を含んでなる反
応混合物に溶液を添加し、記述されたように（Ｈｉｇａｚｉ等、１９９６、Ｂｌ
ｏｏｄ ８７：３５４５−３５４９）、４０５ｎｍでの混合物の光学密度を連続 的に測定した。リガンド結合アッセイ ｓｃｕＰＡ及びｔｃｕＰＡ含む、放射性標識したリガンドの細胞への結合を記
述されたように（Ｈｉｇａｚｉ等、１９９６、Ｂｌｏｏｄ ８８：５４２−５５ １）測定した。簡潔に言えば、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清を含有するＤＭＥ
Ｍ（ＧＩＢＣＯ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）中にＬＭ−ＴＫ^-細胞を懸濁
し、９６穴ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）^TM（商標）マルチウェル組織培養皿（Ｂ
ｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ、NJ）中で融合する
まで３７℃で一晩増殖させた。それらの細胞を氷上で１時間冷却し、冷却した結
合バッファーで２回洗浄した。５０倍モル過剰の非標識リガンドと共にまたはそ
れなしに、¹²⁵Ｉ−標識したリガンドを０−３００マイクロモルのペプチドの存 在下または非存在下で細胞に添加し、細胞培養物を４℃で２時間インキュベート
した。細胞を結合バッファーで４回洗浄し、０．１Ｎ ＮａＯＨ中で可溶化し、 細胞抽出物の放射能を評価した。別の実験では、４ミリモルのＣａ²⁺を含有する
ＴＢＳ中に希釈した４００ナノモルのｒＲＡＰの非存在下もしくは存在下で、ま
たは１００μｇ／ｍｌのアフィニティー精製したＩｇＧ抗α₂ＭＲ／ＬＲＰ抗体 の存在下で、標識したリガンドの結合を実施した。アッセイを少なくとも３回繰
り返し、そして本明細書に示すデータは平均及び標準偏差を表す。固相結合アッセイ α₂ＭＲ／ＬＲＰへの標識したリガンドの結合を測定するために、４ミリモル のＣａ²⁺を含有するＴＢＳ中３μｇ／ｍｌの精製したα₂ＭＲ／ＬＲＰまたは３ μｇ／ｍｌのＢＳＡと９６穴マイクロタイタープレートを４℃で一晩インキュベ
ートした。バッファーを除き、ＴＢＳ、４ミリモルのＣａ²⁺、０．０５％（ｖ／
ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０及び３％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含んでなるブロッキング溶液
を用いてプレート上の未反応部位をブロックした。プレートのウェルにブロッキ
ング溶液を満たし、４℃で１時間インキュベートした。次に、ブロッキング溶液
を除き、ブロッキング溶液及び０または２００ナノモルのｒＲＡＰを含んでなる
溶液を各ウェルに満たし、プレートを４℃でもう１時間インキュベートした。固
定されたα₂ＭＲ／ＬＲＰへの¹²⁵Ｉ−標識したリガンドの結合を記述されたよう
に（Ｈｉｇａｚｉ等、１９９６、Ｂｌｏｏｄ ８８：５４２−５５１；Ｎｙｋｊ ａｅｒ等、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１５０４８−１５０５
５）測定した。ＬＭ−ＴＫ^-細胞によるｓｃｕＰＡのインターナリゼーション及び分解の評価 ４８穴ファルコン^TM（商標）マルチウェル組織培養皿（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃ ｋｉｎｓｏｎ、Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ、NJ）中で融合するまでＬＭ−ＴＫ^-細
胞を３７℃で一晩増殖させた。細胞を氷上で１時間予め冷却し、ＴＢＳ、４ミリ
モルのＣａ²⁺及び３％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含んでなるバッファーで２回洗浄し、
同じバッファーまたは４００ナノモルのｒＲＡＰもしくは１００μｇ／ｍｌのＩ
ｇＧ抗α₂ＭＲ／ＬＲＰのいずれかを追加したバッファーと室温で１時間インキ ュベートした。バッファーを除き、¹²⁵Ｉ−ｓｃｕＰＡを細胞に添加し、０−３ ００マイクロモルのペプチド、０または４００ナノモルのｒＲＡＰ及び０または
１００μｇ／ｍｌの抗α₂ＭＲ／ＬＲＰの存在下で細胞を４℃で２時間インキュ ベートした。結合していないリガンドを除き、細胞をバッファーで５回洗浄した
。４ミリモルのＣａ²⁺、０または４００ナノモルのｒＲＡＰ及び０または１００
μｇ／ｍｌの抗α₂ＭＲ／ＬＲＰを含んでなるＤＭＥＭを細胞に添加し、細胞を ３７℃で１８時間インキュベートした。ｓｃｕＰＡのインターナリゼーション及
び分解を記述されたように（Ｋｏｕｎｎａｓ等、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２６８：２１８６２−２１８６７；Ｌｉ等、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６９：８１５３−８１５８）測定した。簡潔に言えば、インターナリ
ゼーションを測定するために、細胞をバッファーで２回洗浄し、５０ミリモルの
グリシン、１５０ミリモルのＮａＣｌを含んでなるｐＨ ３．０の溶液を細胞に 添加し、細胞を４℃で１５分間インキュベートして細胞表面に結合したリガンド
を解離させた。細胞を含有する溶液に０．１Ｎ ＮａＯＨを添加し、溶液を１０ 分間インキュベートすることにより細胞を可溶化した。細胞抽出物の放射能を評
価した。ｓｃｕＰＡ分解を測定するために、１８時間のインキュベーション期間
の後に各細胞培養物から培地を除き、トリクロロ酢酸を１０％（ｖ／ｖ）の最終
濃度に添加し、沈殿した蛋白質を遠心分離により分離し、上清中の放射能を評価
した。

【０１０６】 ここで、本実施例に示した実験の結果を記述する。

【０１０７】 ペプチドＥＥＩＩＭＤは、ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡの結合を促進した 。本明細書において図１Ａに示すデータは、ｓｃｕＰＡが細胞外培地中に存在す
る場合に以前の報告（Ｈｉｇａｚｉ等、１９９６、Ｂｌｏｏｄ ８８：５４２− ５５１）と一致して、ほんの最低量のｓｃｕＰＡがＬＭ−ＴＫ^-細胞に結合した ことを示す。これらの細胞へのｓｃｕＰＡの結合は、図１Ａに示されるようにｓ
ｃｕＰＡ濃度及び図１Ｂに示されるようにペプチド濃度の両方に関して投与量依
存的に且つ飽和できるようにペプチドＥＥＩＩＭＤの存在により促進された。

【０１０８】 ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結合の促進は、試験した全てのｓｃｕＰＡ濃 度で明白であり、そしてペプチドＥＥＩＩＭＤの存在下でのｓｃｕＰＡ結合の増
加は、主としてＢ_max値の４倍増加の結果であった。スキャッチャード分析を用 いて、ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡの特異的結合はペプチドＥＥＩＩＭＤの 非存在下ではほとんど起こらず、ｓｃｕＰＡのＫ_d値はペプチドの非存在下では １マイクロモルより大きいことが確認された。それに反して、ペプチドの存在下
でｓｃｕＰＡのＫ_d値は約３５ナノモルであった。図１Ｂに示されるように、Ｌ Ｍ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結合の最大刺激の半分は約５０マイクロモルに等 しいペプチドＥＥＩＩＭＤ濃度を用いて得られ、ほぼ最大の効果は約３００マイ
クロモルのペプチドを用いて見られた。

【０１０９】 ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結合の刺激に関与する本発明のペプチドの配 列条件を同定するために研究を実施した。ペプチドＥＥＩＩＭＤはこれらの研究
における指標化合物であった。アミノ酸配列ＲＥＩＩＭＤ及びＥＥＩＩＭＲを有
する２個のペプチドを製造し、本明細書に記述されるＥＥＩＩＭＤの存在の影響
の研究と同様に、ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡの結合に対するこれらのペプ チドの存在の影響を調べた。図１Ａに示されるように、ペプチドＲＥＩＩＭＤは
、ペプチドＥＥＩＩＭＤとほぼ同等に有効なＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結 合の促進剤であることが見い出された。それに反して、ペプチドＥＥＩＩＭＲは
、ペプチドＥＥＩＩＭＤにより示されるｓｃｕＰＡ結合促進活性の約２０％を示
した。

【０１１０】 従って、ペプチドＥＥＩＩＭＤのアミノ末端のアミノ酸残基の電荷が重要でな
いことは明らかである。このＧｌｕ残基のＡｒｇでの置換は、ＬＭ−ＴＫ^-細胞 へのｓｃｕＰＡ結合の有効な促進剤であるペプチドをもたらすことが示されてい
る。それ故、ペプチドＥＥＩＩＭＤのアミノ末端のＧｌｕ残基をＡｒｇ、Ｈｉｓ
、ＬｙｓまたはＡｓｐで置換してペプチドを生成することができ、それらは本発
明に含まれる。従って、ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結合の有効な促進剤と して、一般式ＸＥＩＩＭＤ、式中、ＸはＤ、Ｅ、Ｈ、Ｋ及びＲよりなる群から選
択されるアミノ酸残基である、を有するペプチドを用いることができる。好まし
くは、ＸがＤ、ＥまたはＲである。また好ましくは、ＸがＤまたはＥである。最
も好ましくは、ＸがＥである。

【０１１１】 さらに、ペプチドＥＥＩＩＭＤのカルボキシル末端のアミノ酸残基の電荷は、
ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結合を促進するペプチドの能力の大きさにとっ て重要であるが、その存在にとっては重要でないことが明らかである。カルボキ
シル末端のアミノ酸残基が正の電荷を有する場合、そのペプチドは、ペプチドＥ
ＥＩＩＭＤに比べてＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ結合を促進する能力が減少 しているがごくわずかではないことが本明細書において示されている。従って、
一般式ＥＥＩＩＭＺ、式中、ＺはＤ、Ｅ、Ｈ、Ｋ及びＲよりなる群から選択され
るアミノ酸残基である、を有するペプチドは本発明に含まれ、ＬＭ−ＴＫ^-細胞 へのｓｃｕＰＡ結合の有効な促進剤として用いることができる。好ましくは、Ｚ
がＤ、ＥまたはＲである。また好ましくは、ＺがＤまたはＥである。最も好まし
くは、ＺがＥである。

【０１１２】 ＰＡＩ−１のアミノ酸位置３５０のグルタミン酸残基をアルギニン残基で置換
することにより、ｔＰＡの蛋白質分解活性を阻害するＰＡＩ−１の能力は影響を
受けず、そしてＰＡＩ−１のアミノ酸位置３５５のアスパラギン酸残基をアルギ
ニン残基で置換することにより、ＰＡＩ−１がｔＰＡの蛋白質分解活性を阻害す
るのが妨げられることが報告されている（Ｍａｄｉｓｏｎ等、１９９０、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：２１４２３−２１４２６）。Ｍａｄｉｓｏｎ等は異
なる蛋白質、すなわちｔＰＡとＰＡＩ−１の相互作用を調べ、そして本発明の新
規なペプチドよりむしろ全長のＰＡＩ−１蛋白質を用いたが、Ｍａｄｉｓｏｎ等
の報告は本明細書に記述される結果と一致する。

【０１１３】 ＰＡＩ−１の存在下でＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡの結合に対するペプチ ドＥＥＩＩＭＤの存在の影響を調べた。図２に示されるように、ペプチドＥＥＩ
ＩＭＤの添加前のＰＡＩ−１とｓｃｕＰＡのプレインキュベーションは、ＬＭ−
ＴＫ^-細胞への¹²⁵Ｉ−ｓｃｕＰＡの結合を最低限に増加した。この結果は、報告
されている（Ｋｒｕｉｔｈｏｆ、１９８８、Ｅｎｚｙｍｅ ４０：１１３−１２ １；Ｌｉｊｎｅｎ等、１９９４、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２４：５６７
−５７４；Ｋｒｕｉｔｈｏｆ等、１９８４、Ｂｌｏｏｄ ６４：９０７−９１３ ；Ａｎｄｒｅａｓｅｎ等、１９８６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：７６４
４−７６５１；Ｍａｎｃｈａｎｄａ等、１９９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
７０：２００３２−２００３５）ｓｃｕＰＡに対するＰＡＩ−１の低い親和性と
一致する。ＰＡＩ−１の存在下でのペプチドＥＥＩＩＭＤのｓｃｕＰＡ結合促進
効果は、ＰＡＩ−１の非存在下で見られた効果と同一であった。従って、ＰＡＩ
−１はｓｃｕＰＡからペプチドを置き換えなかったことが明らかである。

【０１１４】 ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体及びｔｃｕＰＡの結合に 対するＰＡＩ−１及びペプチドＥＥＩＩＭＤの影響を調べた。図３に示されるよ
うに、ＰＡＩ−１及びペプチドＥＥＩＩＭＤの存在は各々、ＬＭ−ＴＫ^-細胞へ のｓｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体の結合の最小限の増加をもたらした。他者によ
り報告されたように（Ｎｙｋｊａｅｒ等、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６９：２５６６８−２５６７６；Ｎｙｋｊａｅｒ等、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２６７：１４５４３−１４５４６）、ＰＡＩ−１はｔｃｕＰＡの結
合を明らかに刺激した。それに反して、図３に示されるように、ペプチドＥＥＩ
ＩＭＤは、ＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｔｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体の結合に対して いかなる影響もなかった。また、ペプチドＥＥＩＩＭＤの存在は、ＬＭ−ＴＫ^- 細胞へのｔｃｕＰＡの結合も刺激できなかった。ペプチドＥＥＩＩＭＤがＬＭ−
ＴＫ^-細胞へのｔｃｕＰＡもしくはｔｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体の結合を刺激 できないかまたはＬＭ−ＴＫ^-細胞へのｓｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体の結合を 最低限以上に刺激できないことは、おそらく、ＰＡＩ−１が結合するｓｃｕＰＡ
蛋白質の部位にペプチドが結合できないことかまたはｓｃｕＰＡの構造状態のい
ずれかに起因する。ＰＡＩ−１が結合するｕＰＡ蛋白質の部位にペプチドＥＥＩ
ＩＭＤが結合できるかどうかという問題を検討するために、ＰＡＩ−１の基質と
してｔｃｕＰＡを用いてＰＡＩ−１活性を競合的に阻害するペプチドの能力を評
価した。図４に示されるデータは、ペプチドＥＥＩＩＭＤがＰＡＩ−１活性を阻
害することを示す。コントロールペプチドＥＥＩＩＭＲはＰＡＩ−１活性を阻害
しなかった。従って、ペプチドＥＥＩＩＭＤ及びＰＡＩ−１はｓｃｕＰＡの少な
くとも１つの共通部分と相互作用するようである。

【０１１５】 ｔｃｕＰＡとＰＡＩ−１の間の複合体は、ｔｃｕＰＡ−ＰＡＩ−１複合体がα ₂ ＭＲ／ＬＲＰに結合した後にインターナリゼーションされ、分解されることが 分かっている（Ｌｉ等、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：８１５３
−８１５８；Ｎｙｋｊａｅｒ等、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：
１４５４３−１４５４６）。ペプチドＥＥＩＩＭＤの存在がこの経路によるｓｃ
ｕＰＡの結合、インターナリゼーション及び分解を増大するかどうかを決定する
ために研究を実施した。

【０１１６】 図５Ａに示されるように、ペプチドＥＥＩＩＭＤは精製したα₂ＭＲ／ＬＲＰ へのｓｃｕＰＡの結合を促進し、そしてペプチドＥＥＩＩＭＤの促進作用はｒＲ
ＡＰの存在により阻害された。さらに、図５Ｂに示されるように、ＬＭ−ＴＫ^- 細胞へのｓｃｕＰＡ結合のペプチドＥＥＩＩＭＤによる促進は、４００ナノモル
のｒＲＡＰの存在により約７０％、そしてアフィニティー精製した抗α₂ＭＲ／ ＬＲＰ ＩｇＧの存在により約８５％阻害された。さらに、図６に示されるよう に、ＥＥＩＩＭＤはＬＭ−ＴＫ^-細胞によるｓｃｕＰＡのインターナリゼーショ ン及び分解の両方を促進した。ＬＭ−ＴＫ^-細胞によるｓｃｕＰＡインターナリ ゼーション及び分解の促進は、４００ナノモルのｒＲＡＰの存在により約７０％
、そして１００μｇ／ｍｌの抗α₂ＭＲ／ＬＲＰ ＩｇＧの存在により約８０％阻
害された。

【０１１７】 α₂ＭＲ／ＬＲＰへのｔｃｕＰＡ−ＰＡＩ−１複合体の結合は、ｔｃｕＰＡ及 びα₂ＭＲ／ＬＲＰ中の別個のエピトープによりもたらされることが仮定されて いるが（Ｎｙｋｊａｅｒ等、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５
６６８−２５６７６）、そのような機構は、本明細書に記述されているα₂ＭＲ ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡ結合に対するペプチドＥＥＩＩＭＤの存在の刺激作用を
説明しない。本発明のペプチドは、ｓｃｕＰＡ及びα₂ＭＲ／ＬＲＰの両方に同 時に作用するために十分大きくない。さらに、ペプチドＥＥＩＩＭＤは、ＰＡＩ
−１活性の阻害により示されるように、ｔｃｕＰＡに結合したが、α₂ＭＲ／Ｌ ＲＰへのｔｃｕＰＡ結合を増大しなかった。従って、ペプチドＥＥＩＩＭＤの存
在がα₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡ結合のＢ_max値を増大したという結果は、そ
のペプチドが、天然分子の構造状態に対して、α₂ＭＲ／ＬＲＰにより特異的に 認識されるｓｃｕＰＡの二次構造の以前に認められていない改変を誘導すること
を示唆する。言い換えれば、本明細書に記述される結果は、ペプチドＥＥＩＩＭ
Ｄが結合するｓｕｃＰＡ上の部位が「アロステリックな」部位として機能するこ
とを示唆する。この考えと一致して、ペプチドＥＥＩＩＭＤの存在は、α₂ＭＲ ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡの結合を刺激したが、α₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡ −ｓｕＰＡＲ複合体またはｔｃｕＰＡのいずれかの結合に対していかなる影響も
なかった。これらの結果は、α₂ＭＲ／ＬＲＰと相互作用するｓｃｕＰＡ、ｓｃ ｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体及びｔｃｕＰＡの能力の報告された違いと一致する（
Ｎｙｋｊａｅｒ等、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５６６８−
２５６７６）。

【０１１８】 ｔｃｕＰＡへのペプチドＥＥＩＩＭＤの結合は、α₂ＭＲ／ＬＲＰにより認識 される部位を含む二次構造をとるようにｔｃｕＰＡを誘導しないので、ペプチド
ＥＥＩＩＭＤは、たとえこのペプチドがｔｃｕＰＡに結合しても、ｔｃｕＰＡの
細胞結合を刺激することができないと思われる。また、同様な機構により、ペプ
チドＥＥＩＩＭＤがα₂ＭＲ／ＬＲＰへのｓｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体の細胞 結合を誘導できないことも説明することができる。あるいはまた、α₂ＭＲ／Ｌ ＲＰとｓｃｕＰＡ及びｔｃｕＰＡ−ＰＡＩ−１複合体の相互作用を妨げるｕＰＡ
Ｒの能力（Ｎｙｋｊａｅｒ等、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２
５６６８−２５６７６；Ｈｉｇａｚｉ等、１９９６、Ｂｌｏｏｄ ８８：５４２ −５５１）と一致して、ｓｃｕＰＡ上のα₂ＭＲ／ＬＲＰの結合部位は、ｕＰＡ Ｒにより誘導され、隠される可能性がある。従って、ｔｃｕＰＡへのｓｃｕＰＡ
の転化は、おそらく分子の異なる部分の間の同等な相互作用の喪失の結果として
、α₂ＭＲ／ＬＲＰにより認識される構造を誘導するペプチドＥＥＩＩＭＤの能 力を失うことと関連する。この解釈の裏付けは、ｕＰＡＲがｔｃｕＰＡの酵素活
性に対して（Ｈｉｇａｚｉ等、１９９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１
７３７５−１７３８０）またはＰＡＩ−１による不活性化に対するその感受性に
対して（Ｈｉｇａｚｉ等、１９９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１７３
７５−１７３８０；Ｅｌｌｉｓ等、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５
：９９０４−９９０８）ほとんどまたは全く影響がないという結果から得られる
。これらの結果は、ｔｃｕＰＡへのｓｃｕＰＡの転化がｓｃｕＰＡの不活性化及
び分解の第一段階であるという考えにさらなる裏付けを与える。

【０１１９】 事象の順序にかかわらず、ペプチドＥＥＩＩＭＤの存在がｓｃｕＰＡの細胞結
合を刺激する能力は、蛋白質のインターナリゼーション及び分解が加速される結
果として、ｓｃｕＰＡの構造を改変することによりその生理学的活性を調節する
ことができるという考えにさらなる裏付けを与える。従って、本明細書に記述さ
れる組成物及び方法を用いて、ｓｃｕＰＡをｔｃｕＰＡにまず転化する必要なし
に、ｓｃｕＰＡをα₂ＭＲ／ＬＲＰによる結合を受けやすくすることができる。 本明細書に記述されるように、ペプチドＥＥＩＩＭＤにより示される活性のいか
なる生理学的類似体も報告されていない。実施例２：インビボでＰＡＩ−１ペプチドの効能を試験するためのモデル 本発明のＰＡＩ−１ペプチドをインビボで評価するために３つのモデルを開発
した。

【０１２０】 １）インビボでｕＰＡによりもたらされる繊維素溶解に対するＰＡＩ−１ペプ チドの効果 クロット溶解のインビボモデルを開発した。このモデルでは、放射性標識した
微小塞栓の均質な調製物をマウスの尾静脈中に注入した。次に、時間にわたるク
ロットの自然及びｕＰＡによりもたらされるクリアランスを評価した。

【０１２１】 ここで、本実施例に示す実験に用いる材料及び方法を記述する。微小塞栓の調製 ． プラスミノーゲンを枯渇させたヒトフィブリノーゲンをヨー ドビーズを用いて¹²⁵Ｉで放射性標識し、ＰＤ−１０カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉ ａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて遊離ヨウ素を除いた。微小塞栓を形
成する前に¹²⁵Ｉ−フィブリノーゲン（〜４０ｘ１０⁶ｃｐｍ）を１．２ｍＬの非
標識フィブリノーゲン（３５ｍｇ／ｍｌの最終濃度）に添加した。クロットを形
成するために、健康な志願者からの全血をクエン酸塩（０．３２％の最終濃度）
中に集めた。１２００ｘ ｇでの遠心分離により血漿を単離した。血漿（２．５ ｍＬ）を０．１ｍＬのトレース（ｔｒａｃｅ）標識した¹²⁵Ｉ−フィブリノーゲ ン（４０ｍｇ；ガラス管中１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度）と混合した。ＣａＣｌ₂ （２０ｍＭの最終濃度）及びヒトトロンビン（Ｓｉｇｍａ；０．２Ｕ／ｍＬ、最
終濃度）を室温で１時間添加し、４℃で一晩保った。全ての次の工程を同様に４
℃で実施した。クロットをプラスチック蓋上でデカントし、小片に切断し、２ｍ
Ｌのクレブス・リンガー（Ｋｒｅｂ’ｓ Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ）バッファー（ＫＲ Ｂ）中に再懸濁した。ＰＴ−１０／３５ポリトロン（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）ホモジ
ナイザー（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ Ｉｎｓｔｒ．、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）を中 間速度で用いてクロットを３０秒間均質化した。均質化後、サンプルを２０００
ｘ ｇで１５分間遠心分離した。上清を除き、ペレットをＫＲＢ中に再懸濁した 。２回目の均質化をより高速で３０秒間実施し、ペレットを記述したように洗浄
した。最後の均質化後、微小塞栓を１３ｍＬのＫＲＢ−ウシ血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）（３ｍｇ／ｍＬ）中に懸濁した。¹²⁵Ｉ−微小塞栓アリコートを４℃で保 存し、２４時間以内に使用した。残っているあらゆるより大きい粒子を除くため
に使用直前に調製物を反復的ピペッティングにより混合し、５分間沈殿させた。
注入直前に上清を２００μｌのアリコートに分けた。任意のアリコートを選択し
てＺＭ Ｃｏｕｌｔｅｒ計数装置（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｌ
ＴＤ．、Ｈｉａｌｅｓｈ、ＦＬ）を用いて微小塞栓の大きさ分布を特性化した。

【０１２２】 マウス． 各々２５％ Ｓｗｉｓｓ／７５％ Ｃ５７／ブラックバックグラウン ドで、組織型プラスミノーゲンアクチベータ−（ｔＰＡ^-/-）、ウロキナーゼ型 プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ^-/-）及びウロキナーゼ受容体（ｕＰ ＡＲ^-/-）に遺伝子欠失を有するマウス及びそれらのそれぞれの同腹子コントロ ールを用いた（Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ等、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３６９：４１ ９−４２４；Ｄｗｅｒｃｈｉｎ等、１９９６、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９
７：８７０−８７８）。Ｃ５７／ブラックバックグラウンドのｔＰＡ^-/-、野生 型Ｃ５７／ブラックマウス及び野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から入手した。全ての マウスは研究時に２０−３０ｇの重さであった。内因的繊維素溶解に関して野生
型マウスの異なる遺伝的バックグラウンドの影響はなかった。

【０１２３】 血漿クリアランス． ２１ゲージ注射器に添加する直前に¹²⁵Ｉ−微小塞栓（１
５−３０，０００ｃｐｍを含有する２００μｌアリコート）を数回のピペッティ
ングにより再懸濁した。尾静脈によりマウスに注入し、屠殺するまでそれらの檻
に戻した。注入後の様々な時間（１０分、１、３及び５時間）で、メトファンを
用いてマウスに麻酔をかけ、後部眼窩穿刺によりヘパリン添加した毛管ピペット
中に１００μｌの血液を抜き取った。マウスを頸部脱臼により屠殺した。主要器
官をすぐに摘出し、生理食塩水ですすぎ、ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）濾紙上
で乾燥させ、各組織中の放射能を測定した。注入後に管及び注射器に残っている
残留放射能を引くことにより、各マウスに注入した正確な投与量（ｃｐｍ）を計
算した。各マウスの尾の放射能を計数して注入が完全であったことを確かめた。
ある実験では、注入の１０分後に肺を得、免疫組織化学染色のためにホルマリン
中で固定した。別の組の実験では、それらの肺をＸ線フィルムに感光して放射能
の分布を測定した。第三シリーズの実験では、各肺からの個々の葉を単離し、そ
の中の放射能を評価した。

【０１２４】 回復実験． ２鎖ウロキナーゼ（ｔｃｕＰＡ）をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃａ（Ｇｒｅｅｎｗｉｃｈ、ＣＴ）から入手した。ネンブタール（５０
ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によりｕＰＡ^-/-マウスに麻酔をかけた。Ｓｉｇｍａ ｃｏｔ溶液（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）
でシリコン処置したポリエチレンカテーテルをＰＢＳで洗浄し、頸静脈に挿入し
た。ＰＨＤ ２０００複数注射器（ｍｕｌｔｉ−ｓｙｒｉｎｇｅ）ポンプを１５ μＬ／分の速度でまず５分間、次に５μＬ／分で６０分間用いてｔｃｕＰＡまた
はＰＢＳを注入した。注入を開始した５分後に上記のように¹²⁵Ｉ−微小塞栓を 尾静脈中に注入した。全実験中マウスを麻酔下に保った。注入の完了時にマウス
を屠殺し、組織を摘出し、計数した。

【０１２５】 ここで、本実施例に示した実験の結果を記述する。 図７に、標識したフィブリン微小塞栓及び放射性標識したフィブリノーゲンの分
布の比較を示す。データは、フィブリノーゲンは主に血液中に見られたが、フィ
ブリンクロットは主として肺内に局在化したことを示す。これは肺のオートラジ
オグラフィー及び免疫組織化学染色により確かめられた。両方のアッセイにより
、全ての葉にわたる微小血管系において放射性標識したフィブリンクロットの均
質な分布が示された。

【０１２６】 図８に、野生型動物並びに組織型プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ^{-/ -} ）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ^-/-）及びウロキ
ナーゼ受容体（ｕＰＡＲ^-/-）に様々な欠失突然変異を有する動物の肺からの微 小塞栓のクリアランスを示す。データは明らかに、ウロキナーゼまたはｔＰＡの
いずれかを欠いているマウスでは繊維素分解が正常に機能しなかったことを示す
。これはｕＰＡ^-/-マウスにおける内因的肺繊維素溶解の欠損の初めて分かった 実例である。

【０１２７】 図９に、２鎖ｕＰＡの注入によりｕＰＡ^-/-マウスの表現型をレスキューした 場合の結果を示す。ｕＰＡ^-/-マウスにおけるクロット溶解は完全であった。

【０１２８】 このモデルは、ヒトクロットを用いた小動物モデルにおける迅速な、すなわち
１時間の、非致死的な再現できる生物学的に関連したｓｃｕＰＡ依存的終点を提
供する。

【０１２９】 ＰＡＩ−１ペプチドがｔｃｕＰＡと相乗的に作用して繊維素溶解を促進するか
どうかを決定するために、内在性ＰＡＩ−１を用いた競合実験を実施することが
できる。マウスまたはヒトＰＡＩ−１とクロット及び／またはマウス血漿を与え
ることにより野生型動物において、そしてヒトＰＡＩ−１を過剰発現するマウス
（Ｅｉｔｚｍａｎ等、１９９６、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：２３２−
２３７）において実験を実施する。そのような実験を実施するために、一定量の
ｔｃｕＰＡ及びＰＡＩ−１の存在下でＰＡＩ−１ペプチド及びスクランブルした
ペプチドコントロールを用いて量反応実験を実施する。ペプチドをｔｃｕＰＡの
直前またはそれと一緒に注入する。また、ＰＡＩ−１ペプチドの存在下で¹²⁵Ｉ −ｔｃｕＰＡのクリアランスを測定することもできる。¹²⁵Ｉ−ｔｃｕＰＡの除 去の主要経路はＰＡＩ−１上の決定基によりもたらされるのでこのクリアランス
は妨げられことが仮定される。また、ＰＡＩ−１ペプチドはクロット溶解のため
に必要なウロキナーゼの量を劇的に減少するはずであることも仮定される。さら
に、最近、クロットに結合したビトロネクチンがＰＡＩ−Ｉに結合し、それを活
性構造で安定させることが報告されている。従って、ＰＡＩ−１ペプチドがビト
ロネクチン結合に関して競合し、それによりクロットから活性インヒビターを除
くことにより繊維素溶解を促進するかどうかを決定するために考案される実験を
実施することができる。

【０１３０】 ２）腫瘍細胞接着及び転移形成に対するＰＡＩ−１ペプチドの影響 ＰＡＩ−１は、腫瘍細胞接着の調節及びそれにより腫瘍転移の調節において重要
な役割を果たす。この作用は、ある種のβ−インテグリンの重要なメディエータ
ーであるウロキナーゼ受容体に対するＰＡＩ−１とビトロネクチン間の競合によ
りもたらされることを示唆する証拠がある（Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ等、１９９６
、Ｎａｔｕｒｅ ３８３：４４１−４４３；Ｄｅｎｇ等、１９９６、Ｊ．Ｃｅｌ ｌ Ｂｉｏｌ．１３４、１５６３−１５７１）。最近のデータは、ＰＡＩ−１に 選択的欠失を有するマウスが、損なわれた腫瘍接着の結果としてより少ない転移
を示すことを指摘している（Ｂａｊｏｕ等、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ４：９２３−９２８）。ＰＡＩ−１ペプチドは天然のＰＡＩ−１と競合し、それ
により細胞に対する抗転移作用を有すると仮定される。さらに、本明細書に示さ
れるデータが立証するように、ＰＡＩ−１ペプチドは、抗転移活性の別の根源に
相当するα₂ＭＲ／ＬＲＰによるｕＰＡのインターナリゼーションを加速する。

【０１３１】 インビトロで細胞接着に対するＰＡＩ−１ペプチドの影響を調べるために実験
を行うことができる。Ｌｉ等により記述された方法（１９９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２７０：３０２８２−３０２８５）のわずかな改変によりＵ９３７細
胞の接着を測定することができる。簡潔に言えば、ＴＮＦαで刺激し、³Ｈ−チ ミジンで標識したＵ９３７細胞をビトロネクチンで前処理したまたは未処理のプ
ラスチックウェルにｓｃｕＰＡ（１ｎＭ）の存在下で添加する。抗接着作用を調
べるために、ＰＡＩ−１由来のペプチド（０−１００μＭ）またはスクランブル
したペプチドコントロールをｕＰＡと同時に添加する。様々な時間で、ウェルを
洗浄し、細胞を溶解し、遊離した放射能を測定する。抗接着作用の効能は、１ｎ
ＭのｓｃｕＰＡに対するＩＣ５０の比較に基づく。

【０１３２】 第二段階として、異常な血管新生のモデルとしてコラーゲン被覆膜を通した内
皮細胞の遊走に対するＰＡＩ−１ペプチドの影響を調べることができる。受容体
に会合したｓｃｕＰＡは、内皮細胞及び他の細胞型に対するウロキナーゼ活性を
招くことができる（Ｂａｒｎａｔｈａｎ等、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６５：２８６５−２８７２；Ｍａｎｃｈａｎｄａ等、１９９１、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４５８０−１４５８４）。本明細書に示すデータは、
ＰＡＩ−１ペプチドがｓｃｕＰＡクリアランスを促進し、そしてＰＡＩ−１の親
接着活性と競合することを立証している。従って、このモデルはＰＡＩ−１ペプ
チドの抗接着及び抗蛋白質分解作用の両方を試験するために有効である。

【０１３３】 第三段階では、インビボでのＰＡＩ−１ペプチドの抗転移能力を示すことがで
きる。これを成し遂げるために、ＰＡＩ−１抵抗性であるｕＰＡを発現する安定
な腫瘍細胞系を作製した。具体的には、ヒトｕＰＡＲ及びプラスミン非感受性ｓ
ｃｕＰＡ（ｓｃｕＰＡ−ｇｌｕ¹⁵⁸）を同時発現する同系細胞系を開発した。こ の突然変異は２鎖ウロキナーゼへのｕＰＡの転化を妨げ、それによりこの分子の
あらゆる生物学的活性が、受容体に結合して活性化した一本鎖ｕＰＡによること
を保証する。ｕＰＡＲに結合したｓｃｕＰＡ−ｇｌｕ¹⁵⁸はインビトロで酵素的 に活性があり、ＰＡＩ−１に非感受性であることを立証するデータが得られた。
ＰＡＩ−１ペプチドまたはスクランブルしたペプチドコントロールの存在／非存
在下で腫瘍細胞を同系ラットに注入した。続く１４日にわたって原発性腫瘍の増
殖及び肺転移の形成をモニターした。これらの腫瘍細胞はＰＡＩ−１ペプチドの
非存在下では容易に転移するが、ペプチドは、ｕＰＡによりもたらされる細胞接
着及び蛋白質分解に対する作用によりそれらの局所的増殖及び転移能力の両方を
阻害することが予測される。

【０１３４】 本明細書に引用される各々及びあらゆる特許、特許出願及び公開の開示は引用
することにより本明細書に全部組み込まれる。

【０１３５】 本発明は特定の態様に関して開示されているが、本発明の真の趣旨及び範囲か
らそれずに当業者が本発明の他の態様及び変形を考案できることは明らかである
。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａおよび１Ｂからなる図１は、ｓｕｃＰＡのＬＭ−ＴＭ^-細胞（α₂ＭＲ⁺ ／ＬＲＰ、ｕＰＡＲ^-）への結合の際に個々のペプチドが及ぼす影響を示す一対 のグラフであり、この場合、各々個別のペプチドは、ＥＥＩＩＭＤ、ＲＥＩＩＭ
Ｄ、およびＥＥＩＩＭＲからなる群より選択される配列を有していた。図１Ａで
は、示されるペプチドの存在の影響が示されており、この場合「無添加」は、３
本のペプチドの内のどれもが反応混合物に添加されなかったことを意味する。図
１Ｂでは示される濃度のペプチドＥＥＩＩＭＤの存在の影響が示される。

【図２】 図２は、ｓｃｕＰＡの、ＰＡＩ−１の存在もしくは非存在下でのＬＭ−ＴＭ^- 細胞への結合におけるペプチドＥＥＩＩＭＤの影響を示す棒グラフである。

【図３】 図３は、ｓｕｃＰＡ−ｓｕＰＡＲおよびｔｃｕＰＡ−ｓｕＰＡＲ複合体のＬＭ
−ＴＭ^-細胞への結合に対するＰＡＩ−１の影響およびペプチドＥＥＩＩＭＤの 影響を示す棒グラフである。

【図４】 図４は、ＰＡＩ−１の活性に対するペプチドＥＥＩＩＭＤの存在の効果を示す
グラフである。

【図５】 図５Ａおよび５Ｂからなる図５は、α₂ＭＲ／ＬＲＰおよびＬＭ−ＴＭ^-細胞へ
のｓｃｕＰＡの結合に対するペプチドＥＥＩＩＭＤの存在の効果を示す一対の棒
グラフである。図５Ａに示される結果は、ｒＲＡＰの存在もしくは非存在下およ
びペプチドの存在もしくは非存在下での精製されたα₂ＭＲ／ＬＲＰへのラベル 化ｓｃｕＰＡの結合を評価することにより取得した。白四角はｒＲＡＰの非存在
下で収集したデータを表し、そして斜線四角はｒＲＡＰの存在下で収集したデー
タを表す。図５Ｂに示されるデータは、ペプチドの存在もしくは非存在下でのＬ
Ｍ−ＴＭ^-細胞へのラベル化ｓｃｕＰＡの結合を評価することにより取得した。 ４ミリモルのＣａ²⁺の存在下での結合を示すデータは白四角により示される。４
００ナノモルのｒＲＡＰの存在下での結合を示すデータは灰色四角により示され
る。１００マイクログラム／ミリリットルの抗−α₂ＭＲ／ＬＲＰ ＩｇＧの存 在下での結合を表すデータは黒塗り四角により示される。

【図６】 図６は、ＬＭ−ＴＭ^-細胞によるｓｃｕＰＡの内在化および分解におけるペプ チドＥＥＩＩＭＤの存在の影響を示す棒グラフである。「対照」は、ｒＲＡＰお
よび抗−α₂ＭＲ／ＬＲＰの非存在下で細胞をインキュベートした実験において 収集されたデータを意味する。「ｒＲＡＰ」は、ｒＲＡＰの存在下で細胞をイン
キュベートした実験で収集されたデータを意味する。「Ａｂ」は、抗−α₂ＭＲ ／ＬＲＰ抗体の存在下で細胞をインキュベートした実験で収集されたデータを意
味する。ペプチドの非存在下で実施された実験で収集されたデータは白抜き四角
により示される。ペプチドの存在下で実施された実験で収集されたデータは斜線
四角により示される。

【図７】 図７は、ラベル化フィブリン微小塞栓および放射ラベル化フィブリノーゲンの
分布の比較を示すグラフである。

【図８】 図８は、野生型動物、ならびに組織タイププラスミノーゲン活性化因子（ｔＰ
Ａ^-/-）、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ^-/-）、およ
びウロキナーゼレセプター（ｕＰＡＲ^-/-）に欠失突然変異を有する様々な動物 の肺からの微小血栓のクリアランスを示すグラフである。

【図９】 図９は、ウロキナーゼタイププラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ^-/-）マウ スの表現型が２本差ｕＰＡの注入により救済された場合に取得されたデータを示
すグラフである。ｕＰＡ^-/-マウスにおける血栓溶解は完全であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｐ 35/04 15/00 43/00 １０５ 35/00 Ｃ０７Ｋ 7/06 ＺＮＡ 35/04 Ａ６１Ｋ 37/02 43/00 １０５ 37/547 Ｃ０７Ｋ 7/06 ＺＮＡ 37/64 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA03 AA18 BA01 BA17 BA18 BA19 DC05 DC21 MA02 NA05 NA13 ZA452 ZA542 ZB112 ZB262 ZC202 4H045 AA10 AA30 BA14 EA22 EA26 EA28

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドを含んでなる組成物。
2. 【請求項２】 Ｘ₁は、水素もしくはアミノ末端ブロッキング基であり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＤおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉであり； Ｘ₅は、Ｉであり； Ｘ₆は、Ｍであり； Ｘ₇は、ＤおよびＥからなる群より選択されるアミノ酸であり；そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基である： 請求項１の組成物。
3. 【請求項３】 Ｘ₁は、水素であり； Ｘ₂は、Ｅであり； Ｘ₃は、Ｅであり； Ｘ₄は、Ｉであり； Ｘ₅は、Ｉであり； Ｘ₆は、Ｍであり； Ｘ₇は、Ｄであり；そして Ｘ₈は、水素である： 請求項１の組成物。
4. 【請求項４】 薬剤学的に許容される担体を更に含む、請求項１の組成物。
5. 【請求項５】 生理学的関門を通過する異常な細胞遊走を特徴とする生物学
   的プロセスに影響を及ぼす方法であって、請求項１の組成物を前記生物学的プロ
   セスに影響を及ぼすための量で前記生物学的プロセスを経験する哺乳類に投与す
   ることを含んでなる方法。
6. 【請求項６】 前記生物学的プロセスが、血管新生、器官形成、排卵、炎症
   、癌、腫瘍細胞浸潤および転移、ならびにアテローム性動脈硬化症からなる群よ
   り選択される、請求項５の方法。
7. 【請求項７】 前記哺乳類がヒトである、請求項５の方法。
8. 【請求項８】 哺乳類の組織への細胞のＰＡＩ−１依存性接着を阻害する方
   法であって、前記組織への前記細胞の接着を阻害するための量で請求項１の組成
   物を前記組織に投与することを含んでなる方法。
9. 【請求項９】 前記組織が前記哺乳類内でのインビボの状態をとる、請求項
   ８の方法。
10. 【請求項１０】 前記哺乳類がヒトである、請求項８の方法。
11. 【請求項１１】 哺乳類細胞の表面からのｓｃｕＰＡのクリアランスを促進
    する方法であって、前記細胞からの前記ｓｃｕＰＡのクリアランスを促進するた
    めの量で前記細胞に請求項１の組成物を投与することを含んでなる方法。
12. 【請求項１２】 前記細胞がヒト細胞である、請求項１１の方法。
13. 【請求項１３】 前記組成物が前記ヒトにインビボで投与される、請求項１
    ２の方法。
14. 【請求項１４】 哺乳類内の細胞の病理学的遊走を妨げる方法であって、前
    記細胞の病理学的遊走を妨げるのに有効な量で請求項１の組成物を前記哺乳類に
    投与することを含んでなる方法。
15. 【請求項１５】 前記組成物が前記哺乳類の腫瘍の部位で前記哺乳類に投与
    される、請求項１４の方法。
16. 【請求項１６】 前記哺乳類がヒトである、請求項１４の方法。
17. 【請求項１７】 哺乳類の組織内のＰＡＩ−１活性を阻害する方法であって
    、前記組織内のＰＡＩ−１活性を阻害するのに有効な量で請求項１の組成物を前
    記組織に投与することを含んでなる方法。
18. 【請求項１８】 前記哺乳類がヒトである、請求項１７の方法。
19. 【請求項１９】 前記組成物が前記ヒト内にインビボで投与される、請求項
    １８の方法。
20. 【請求項２０】 アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドを含んでなるキット、ならびにそのキットを使用するための説
    明用資材。
21. 【請求項２１】 アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドと、 血栓溶解薬 との組み合わせ物を含んでなる組成物。
22. 【請求項２２】 前記血栓溶解薬が、組織プラスミノーゲン活性化因子、ス
    トレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼの誘導体、およびスタフ
    ィロキナーゼからなる群より選択される、請求項２１の組成物。
23. 【請求項２３】 アミノ酸配列Ｘ₁Ｘ₂Ｘ₃Ｘ₄Ｘ₅Ｘ₆Ｘ₇Ｘ₈ ［式中、 Ｘ₁は、水素、アミノ末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸残基で あり； Ｘ₂は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₃は、ＥおよびＤからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₄は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₅は、Ｉ、Ｌ、およびＶからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₆は、Ｍからなる群より選択されるアミノ酸であり； Ｘ₇は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、およびＲからなる群より選択されるアミノ酸であり； そして Ｘ₈は、水素、カルボキシル末端ブロッキング基、もしくは１〜２０のアミノ酸 残基である］ を有するペプチドと、 抗凝血剤 との組み合わせ物を含んでなる組成物。
24. 【請求項２４】 前記抗凝血剤が、血小板機能を阻害する試薬、トロンビン
    の活性を阻害する試薬、および活性化された蛋白質キナーゼＣの活性を促進する
    試薬、抗−トロンビンＩＩＩ試薬、ならびに組織因子経路阻害剤からなる群より
    選択される、請求項２３の組成物。