JP2001519785A

JP2001519785A - 局所的障害および創傷の治療のための細菌細胞壁抽出物の使用

Info

Publication number: JP2001519785A
Application number: JP54101798A
Authority: JP
Inventors: アルケメード，スタンレイ，ジェイ．; ヒルデブランド，キャサリン，イー．; フィリップス，ニゲル，シー．; ロガン，ドラガン，アール．
Original assignee: バイオニケライフサイエンシーズインコーポレイテッド
Priority date: 1997-04-02
Filing date: 1998-04-02
Publication date: 2001-10-23
Also published as: NZ338060A; EP0971721A1; BR9807917A; CN1251529A; CA2284932A1; JP2001517223A; CA2284937A1; WO1998043656A1; AU727781B2; EP0971720A1; AU6913398A; WO1998043655A1; CN1153574C; AU6818098A; US6139844A

Abstract

(57)【要約】局所的障害または創傷を有する動物に、局所的障害またはその症状を低減または排除するのに、あるいは創傷治癒を助長または促進するのに十分な量の細菌細胞壁抽出物を投与することによる、動物における局所的障害または創傷の治療方法。好ましくは、細菌細胞壁抽出物は、マイコバクテリア、例えばマイコバクテリウム・フレイ(Mycobacterium phlei)から調製されるマイコバクテリウム細胞壁抽出物である。

Description

【発明の詳細な説明】局所的障害および創傷の治療のための細菌細胞壁抽出物の使用発明の分野本発明は、皮膚科学および免疫学の分野に関し、特に局所的障害を治療し、そして創傷治癒を増強するための非特異的免疫刺激剤としての細菌細胞壁抽出物の治療的使用に関する。発明の背景動物またはヒトにおける局所的障害は、治療が難しい。種々の薬剤が種々の局所的障害を治療するために用いられてきたが、成功例は限られている。これらの薬剤の安全性および有効性は様々で、大部分は投与経路、ならびに局所的障害の種類および重症度によっている。したがって、必要なのは、種々の局所的障害を治療するために有効且つ安全で、そして種々の経路により投与可能な治療薬である。動物またはヒトにおける創傷も治療が難しく、同一のまたは異なる種類の創傷の両方に対して種々の薬剤が用いられてきた。これらの薬剤の安全性および有効性は様々で、大部分が投与経路ならびに創傷の種類および重症度によっている。ウマでは、四肢の遠位部分の創傷の治癒は、創傷拡大、創傷収縮、過度の肉芽形成および治癒時間の長期化という難しさを伴う。したがって、必要なのは、種々の創傷を治療するために有効且つ安全であり、創傷拡大を低減し、創傷収縮を増強し、過度の肉芽形成を防止し、治癒を促進する、種々の経路により投与され得る治療薬である。発明の概要本明細書中で用いる場合、「局所」という用語は、動物またはヒトの皮膚、粘膜および上皮細胞層を含む。本明細書中で用いる場合、「障害」という用語は、正規のまたは正常な構造または機能における外乱または異常を意味する。動物における局所的障害を予防、治療および排除するための、そして創傷を治療するための方法が提供される。本方法にしたがって、細菌細胞壁抽出物は、局所的障害またはその症状を治療するのにあるいは創傷治癒を増強するのに十分な量で、動物に投与される。細菌細胞壁抽出物は安全であり、最小度の副作用を有するかまたは副作用を全く有さず、そして局所的障害または創傷を蒙っている動物に、例えばヒトを含めた哺乳類、鳥類、魚類、両生類、および、甲殻類（これらに限定されない）に投与され得る。免疫応答は全身に関連し、多数の複雑な相互作用により調節され、影響を受けるので、非特異的免疫刺激は多数の免疫応答を促進および増幅可能である。酵母、細菌、ウイルス、植物、バイオテクノロジーおよび化学起源（これらに限定されない）の製剤は、免疫系を非特異的に刺激し得る。あらゆる細菌種を用いて、細菌細胞壁抽出物を調製し得る。マイコバクテリウム属、、コリネバクテリウム属、プロプリオンバクテリウム属、ノカルジア属、ロドコッカス属、ボルデテラ属、リステリア属およびカルメット−ゲラン菌(ＢＣＧ)からの抽出物が好ましいが、これらに限定されない。マイコバクテリウム属菌およびコリネバクテリアからの抽出物がより好ましい。マイクロバクテリウム・フレイ(Mycobacterium phl ei;チモテ菌)が最も好ましい。細菌細胞壁抽出物は、当業者に既知の経路により投与され得る。その例としては、例えば局所、経口、鼻腔、直腸、尿道、膣内、子宮内、静脈内、皮下および筋肉内投与が挙げられるが、これらに限定されない。動物に投与する場合、細菌細胞壁抽出物は、局所的障害、例えば皮膚粘膜および上皮性疾患、例えば表皮、真皮、眼、鼻咽頭、胃腸管および尿生殖管の症状（これらに限定されない）を治療する場合の治療薬として有効である。このような疾患としては、歯肉炎、乾癬、褥瘡性潰瘍、皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、光線性角化症、ざ瘡、副鼻腔炎、扁桃炎、慢性頬潰瘍、胃潰瘍、炎症性腸疾患、慢性胃腸疾患、慢性泌尿生殖性疾患、そして真菌、酵母、ブドウ球菌およびその他の細菌ならびにウイルスおよび真菌性皮膚炎が挙げられるが、これらに限定されない。細菌細胞壁抽出物の投与は、創傷、例えば熱傷、挫傷、擦り傷、切り傷、裂傷、ならびに切除性および全厚性創傷を治療するのにも有効であるが、これらに限定されない。細菌細胞壁抽出物は、創傷の繊維形成、肉芽形成、収縮および上皮形成を促進する。手短に言えば、細菌細胞壁抽出物は以下のように調製される。細菌を液体培地中で増殖させて、回収する。細菌を破砕し、次に遠心分離により沈殿させて破砕細菌を回収することにより細胞壁が調製される。細胞壁画分（遠心分離工程からのペレット）をタンパク質分解酵素で消化することにより除タンパクし、界面活性剤で処理して、洗浄し、凍結乾燥する。この画分は、局所的障害または創傷を蒙った動物に種々の経路により投与するために適切なアジュバント／安定剤中に懸濁された脂質小滴に吸着され得る。好ましくは、細閑細胞壁抽出物は、水中油型エマルション、油中水型エマルション、生理学的に許容可能な緩衝剤、ローションおよびクリーム中に処方される。本明細書中に記載した細菌細胞壁抽出物の投与は、免疫系の活性化を非特異的に生じるという点で、従来の療法とは異なる。これは免疫系の防御能力を増強し、それが次に種々の局所的障害を予防、治療および排除し、そして創傷治癒を促進するよう作用する。したがって、細菌細胞壁抽出物は、感染生物体に対する抗体を有さない動物における局所的障害を治療するのに有効である。細菌細胞壁抽出物は、創傷の原因にかかわらず、創傷を治療して治癒を促進するのにも有効である。したがって、局所的障害を予防するのに有効な方法を提供することが本発明の目的である。本発明の別の目的は、進行中の局所的障害を治療するのに有効である方法を提供することである。本発明の別の目的は、局所的障害の再発を予防するのに有効な方法を提供することである。本発明の別の目的は、局所的障害を排除するのに有効な方法を提供することである。本発明の別の目的は、創傷治癒を促進するのに有効な方法を提供することである。本発明の別の目的は、創傷内の感染を防止するのに有効な方法を提供することである。本発明の別の目的は、受容者における副作用を最小度にするかまたは全くなくする方法を提供することである。本発明の別の目的は、受容者に対して非毒性である方法を提供することである。本発明の別の目的は、ツベルクリン皮膚検定に対して受容者を感作しない方法を提供することである。本発明の別の方法は、受容者にアナフィラキシーを引き起こさない方法作用物質を提供することである。本発明のこれらのおよびその他の目的、特徴および利点は、下記の開示された実施の形態の詳細な説明および添付の請求の範囲を検討すれば明らかになる。発明の詳細な説明動物における局所的障害を予防、治療または排除するための、そして創傷治癒を促進するための方法を、本明細書に記載する。本発明の方法にしたがって、細菌細胞壁抽出物は、局所的障害を予防、低減または排除するのにあるいは創傷治癒を促進するのに十分な量で、局所的障害を示すかまたは創傷を有する動物に投与される。細菌細胞壁抽出物は、身体に局所的障害を中和させるかまたは未然に防止させ、創傷治癒を促進させるような方法で動物の免疫系を刺激する。細菌細胞壁抽出物は、局所的障害を治療または予防し、そして創傷治癒を増強するために、ヒトまたはその他の哺乳類、鳥類、魚類、両生類および甲殻類といった動物（これらに限定されない）に投与し得る。細菌細胞壁抽出物は、当業者に既知の経路により投与され得る。その例としては、例えば局所、経口、鼻腔、直腸、尿道、膣内、子宮内、皮下、静脈内および筋肉内投与が挙げられるが、これらに限定されない。動物に投与する場合、細菌細胞壁抽出物は、局所的障害、例えば皮膚および粘膜疾患、例えば表皮、真皮、眼、鼻咽頭、胃腸管および尿生殖管の症状（これらに限定されない）を治療する場合の治療薬として有効である。このような疾患または障害としては、歯肉炎、乾癬、褥瘡性潰瘍、皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、光線性角化症、ざ瘡、副鼻腔炎、扁桃炎、慢性頬潰瘍、胃消瘍、炎症性腸疾患、慢性胃腸疾患、慢性泌尿生殖性疾患、熱傷そして真菌、酵母、ブドウ球菌およびその他の細菌性（ウイルスおよび真菌性）皮膚炎が挙げられるが、これらに限定されない。細菌細胞壁抽出物は、局所的障害の悪症状の重症度を低減し得るし、それらの再発も低減し得る。細菌細胞壁抽出物の投与は、創傷、例えば熱傷、挫傷、擦り傷、切り傷ならびに切除性および全厚性創傷を治療するのにも有効であるが、これらに限定されない。細菌細胞壁抽出物は、創傷の繊維形成、肉芽形成、収縮および上皮形成を促進する。本明細書に記載した方法による創傷の治療は、迅速な治癒を促進し、そして感染および瘢痕形成（これらに限定されない）を含めた悪性合併症を最小限にするかまたは排除する。本明細書中に記載した方法は、局所的障害または創傷を有する動物の免疫系の活性化を非特異的に刺激するかまたは引き起こすという点で、従来の療法とは異なる。この免疫系活性化は免疫系の防御能力を増強し、それにより局所的障害を改善し、そして創傷治癒を促進する。したがって、本方法は、過去に疾病に曝露されていない、そして疾患に対する抗体を未だ保有していない動物における局所的疾患を治療するのに有効である。本発明の方法は、受容者における陽性ツベルクリン反応を引き起こさず、細菌細胞壁抽出物を反復投与した場合でさえアナフィラキシー反応を滅多に引き起こさず、そして最小限の副作用を有するかまたは副作用は全く有さない。細菌細胞壁抽出物の投与は免疫感作工程ではないが、しかし一般的に受容者自身の免疫系が疾患を排除し、創傷を治癒し得るように免疫系を刺激するための過程であると理解される。したがって、本治療方法は、進行中の局所的障害の治療に、そして創傷治癒の促進に理想的に適しており、従来の薬剤を利用しない新規の方法を提供する。細菌細胞壁抽出物調製あらゆる細菌種を用いて細菌細胞壁抽出物を調製し得る。それらの例としては、マイコバクテリウム属(Mycobacterium)、コリネバクテリウム属(Corynebacter ium)、プロプリオンバクテリウム属(Proprionebacterium)、ノカルジア属(Nocar dia)、ロドコッカス属(Rhodococcus)、ボルデテラ属(Bordetella)、リステリア属(Listeria)およびカルメット−ケラン菌(bacille Calmette-Guerin;ＢＣＧ)が挙げられるが、これらに限定されない。マイコバクテリウム属菌およびロドコッカス属菌からの細胞壁抽出物が好ましい。マイクロバクテリウム・フレイ(Mycob acterium phlei)からの細胞壁抽出物が最も好ましい。細菌細胞壁抽出物の好ましい製造方法は、米国特許第４，７４４，９８４号（この記載内容は、参照により本明細書中に含まれる）に記載されている。マイコバクテリウム属菌細胞壁抽出物は、生物学的供給会社、例えばBioniche，Inc．（London，Ontario）から市販品として得ることもできる。手短に言えば、細菌細胞壁抽出物は以下のように調製される。細菌を液体培地中で増殖させて、回収する。細菌を破砕して、次に遠心分離沈殿により破砕細菌を回収することにより細胞壁を調製する。遠心分離工程からのペレットである細胞壁画分をタンパク質分解酵素で消化することにより除タンパクし、界面活性剤で処理して、洗浄し、凍結乾燥する。この分画は、局所的障害または創傷を蒙った動物に投与する前に適切なアジュバント／安定剤中に懸濁された脂質小滴に吸着され得る。細菌細胞壁抽出物は、好ましくは使用前にアジュバント中で乳化される。アジュバントは、当業者に既知の多数のアジュバントのいずれかであり得る。好ましいアジュバントは油と水とのエマルションであり、これは細菌細胞壁抽出物を油と混合し、水性緩衝剤を界面活性剤とともに添加し、そして当業者に既知のいくつかの方法のいずれかにより混合物を乳化することにより調製され得る。これらの方法としては、高速ブレンダーまたはポッター−エルベージェムホモジナイザー中での均質化、音波破砕および微流動化(microfluidization)が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、細菌細胞壁抽出物は、例えば、鉱油(Drakeol 6-VR，Penreco，Butler，PA)、スクアラン、スクアレンおよび合成鉱油ｎ−ヘキサデカンといった多数の、しかしこれらに限定されない油中で乳化され得る。エマルションの製造方法は重要ではない、と当業者は理解するであろう。油および水性相の組成物の多数の変形物、それらの割合及び乳化の手段は当業者には明らかであり、本発明の実施に際して細菌細胞壁抽出物とともに用い得る。細菌細胞壁抽出物の好ましいエマルションは、約５ｇ〜１５ｇの乾燥除タンパク細菌細胞壁を乾燥した１リットルビーカーに添加することにより調製される。鉱油、スクアレン、スクアランまたはｎ−ヘキサデカンは、細胞壁１ｇ当たり約１０ｍｌ〜５０ｍｌで添加される。懸濁液を覆い、約３０分間から一夜混合する。細胞壁／油混合物の約１０ｍｌのアリコートを１リットルビーカーに移す。滅菌リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）５００ｍｌを各アリコートに添加する。Mi crofluidics Tabletop Microf1uidizer^TMモデルＭ−１１０Ｙを１フロースルーに関して約２０，０００ｐｓｉ〜３０，０００ｐｓｉで用いる微流動化により、約６ｍｌ〜７ｍｌの混合物のアリコートを均質化し、滅菌瓶に移して、４℃で保存する。任意に、水酸化アルミニウム安定剤を細菌細胞壁抽出物エマルションに添加してもよい。水酸化アルミニウムをReheis Chemical Co．（Berkeley Heights，N J）から９．４％圧縮ケルとして入手し、脱イオン水を添加することにより１．３％酸化アルミニウムに水和する。ゲルを、細菌細胞壁抽出物エマルションに添加する前に、オートクレーブ中で１２０℃で２０分間滅菌する。１リットルの最終エマルションは、約９００ｍｌの乳化細菌細胞壁抽出物、５０ｍｌの１．３％酸化アルミニウムおよび４０ｍｌの添加ＰＢＳを含有する。Thimerosal^TM（エチルメルクリチオサリチレート、Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO）および抗生物質、例えばゲンタマイシンおよびアンホテラシンＢ（これらに限定されない）を、細菌細胞壁抽出物エマルションに対する防腐剤として添加し得る。Thimer osal^TMの好ましい濃度は約０．１ｇ／１、ゲンタマイシンは約３０μｇ／ｍｌそしてアンホテラシンＢは約２．５μｇ／ｍｌである。本発明の方法に投与される細菌細胞壁抽出物の既知の活性成分としては、ムラミルジペプチドのファミリー、トレハロースジミコール酸、ならびに細菌の除タンパク細胞壁骨格中に存在し得る任意の未知の活性成分が挙げられる。本発明は、例えば好中球、リンパ球およびマクロファージを含めた、しかしそれらに限定されない身体の免疫成分が存在するあらゆる局所的障害の治療に、そしてあらゆる創傷の治癒の促進に有効である。さらに、細菌細胞壁抽出物は免疫系の細胞に作用して、サイトカインの産生増大を刺激すると考えられる。細菌細胞壁抽出物の処方および投与細菌細胞壁抽出物は、当業者に既知の処方方法を用いて、医薬上許容可能な組成物として提供され得る。処方法の例は、例えばH．C．Ansel，et al.，PHARMAC EUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，6^thedition（Williams & W ilkins，Philadelphia 1995）(参照により本明細書中に含まれる)にある。当業者に既知のその他の処方も用い得る。処方物としては、経口、眼(硝子体内または眼房内を含む)、鼻、局所的(バッカルおよび舌下を含む)、膣、直腸、尿道または非経口的（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、気管内および硬膜外を含む）投与に適したものが挙げられるが、これらに限定されない。処方物は、従来の製薬技法により調製される単位投与形態で提供されると便利である。このような技法には、活性成分および製剤担体または賦形剤を組み合わせる工程が含まれる。概して、処方物は、活性成分を液体担体または微細分割固体担体またはその両方と均一に且つ直接組み合わせて、必要な場合には、次に製品を成形することにより調製される。本方法は、応答免疫細胞に提示するために用いられる担体／ビヒクル（担体としては、例えばリポソーム、種々の非分解性ポリマーおよび浸透圧ミニポンプを含むがそれに限定されない）にかかわらず、その中のいずれか一つ、あるいはすべてのまたは任意の成分の組合せでも用い得る。さらに、その組合せを生分解性ポリマー中に組み入れて化合物を持続性放出させ得るが、ポリマーは薬剤送達(d rug delivery)が望ましい場所の付近に埋め込まれる。生分解性ポリマーおよびその使用は、例えばBrem，e tal．1991，Journal of Neurosurqery，74:441-446 （参照により本明細書中に含まれる）に記載されている。経口投与に適した本方法の処方物は、個別の単位、例えば各々が所定量の活性成分を含有するカプセル、カシェ剤または錠剤；粉末または顆粒；水性液または非水性液中の溶液または懸濁液；水中油液体エマルションまたは油中水エマルション、そして巨丸剤として提供され得るが、これらに限定されない。錠剤は、任意に１つ又はそれ以上の副成分とともに圧縮または成形することにより製造し得る。圧縮錠剤は、適切な機械で圧縮することにより調製し得る。易流動性形態の、例えば粉末または顆粒のような活性成分を、結合剤、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と必要に応じ一緒に混合し得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤化した粉末化化合物の混合物を適切な機械で成形することにより、製造し得る。錠剤は、任意にコーティングするかまたは刻み目を付け得るし、ならびにその中の活性成分が徐々にまたは制御されて放出されるよう処方し得る。口腔に局所投与するのに適した本方法の処方物としては、風味付けした基剤、通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴム中に活性成分を含むロゼンジ；不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアゴム中に活性成分を含む香錠；そして適切な液体担体中で投与される活性成分を含むうがい薬が挙げられる。皮膚に局所投与するのに適した本方法の方法の処方物は、医薬上許容可能な担体中に投与される活性成分を含むエマルション、軟膏、クリーム、ゲル、ローションおよびペーストとして提供され得る。直腸投与するための本方法の処方物は、適切な基剤、例えばココアバターまたはサリチレートとともに活性成分を含む坐薬として提供される。鼻腔内投与するのに適した本方法の、担体が固体である処方物は、粒子サイズが例えば２０〜５００μの範囲の粗粉末で、これは、鼻に近く保持される粉末の容器から鼻道を通して迅速に吸入することにより嗅剤が投与される方法で投与される。例えば鼻腔スプレーまたは点鼻薬として投与するための、担体が液体である適切な処方物には、活性成分の水性または油性溶液が含まれる。膣投与に適した本方法の処方物は、活性成分の他に、当業界で適切であることが既知の担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、発泡体またはスプレー処方物として提供され得る。非経口投与に適した処方物としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤および処方物を意図された受容者の血液と等張にする溶質を含有し得る水性および非水性滅菌注入溶液；そして沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。処方物は、単位用量または多用量容器中に、例えば密封アンプルおよびバイアル中に提供され得るし、そして使用直前に滅菌液体担体、例えば注入用の水だけを必要とする、冷凍乾燥（凍結乾燥）条件で保存され得る。即時調合する注射溶液および懸濁液は、前記の種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製し得る。投与される細菌細胞壁抽出物の最適用量は、治療される動物のサイズにより、そして投与方法によって変わる。免疫系を刺激するのに十分な量が必要なだけである。１回用量は、細菌細胞壁抽出物約０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは約０．０５〜６ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０．１〜４．０ｍｇ／ｍｌである。細菌細胞壁抽出物は、約０．０１〜１０ｍｌ、さらに好ましくは約０．０５〜７．５ｍｌ、最も好ましくは約０．１〜５．０ｍｌの総用量で投与される。局所使用に関しては、細菌細胞壁抽出物はエマルションとして投与されるか、あるいはローション、クリーム、ゲルまたはその他の当業者に既知の担体中に懸濁される。本発明の細菌細胞壁抽出物は、１回または数回、同一受容者に投与し得る。投与量および投与計画は、当業者により容易に決定され得る。好ましい投与処方物は、本発明に記載した（それらに限定されないが）処方物中に１用量または１単位、亜用量または亜単位、あるいはその分数分の細菌細胞壁抽出物を含有するものである。さらに、本明細書中に具体的に記載した成分の他に、本方法は、用いられる処方物の種類に関係がある業界で慣用的なその他の作用物質を含み得る、と理解されるべきである。以下の実施例で本発明をさらに説明するが、同時に本発明はそれらに限定されないものとする。実施例１細菌細胞壁抽出物の調製実施例１に記載するようなマイクロバクテリウム・フレイ(Mycobacterium phl ei)細胞壁抽出物の調製は、その他の細菌種からの細胞壁抽出物の調製を代表する。 Mycobacterium phleiは、Institut fur Experimental Biologie and Medizin ，Borstel，West Germanyから入手し、滅菌乳汁中の懸濁液として−６０℃で保存した。修飾細胞壁の生物活性のいかなる減損も伴わずに、１９７６〜１９８５年の間に、単離物は約１１回移転された。M．phleiは、Petrag nani培地（Difco Labs，Detroit，MI）で培養した。ヒートシステム音波処理機（従来はBranson音波処理機と呼ばれていた）ＸＬ２０１５型を用いて、Mycobacterium phlei細胞壁を調製した。約４００ｇの湿った細胞塊を、約１２００ｍ１の容量を有する消浄なブレンダーに入れた。細胞塊を高速で３０〜６０秒間混合した。混合後、６ｍｌのTween 80および２００〜４００ｍｌの滅菌水を細胞混合物に添加した。次に、全細胞懸濁液を、低速で約１０秒間、ブレンダー中で混合した。ヒートシステム音波処理機と３／４タップホーン(tapped horn)を用いて、超音波細胞破砕により細胞破砕を行った。細胞が容量の約５０％〜７０％を構成する細胞懸濁液５００ｍｌを１リットルビーカーに入れて、８の設定で約５分間、音波処理した。音波処理物は、分画工程中は氷上の滅菌フラスコ内に保存した。音波処理物を２５０ｍｌの遠心分離瓶に移して、ＧＳＡローターを備えた中速遠心分離器中で、１５℃において２７，５００×ｇで１時間、遠心分離した。遠心分離からの上清液をデカントし、廃棄した。破損していない細胞の、最下層白色ペレットを廃棄した。沈殿粗細胞壁画分をブレンダーに移して、低速で混合することにより、滅菌脱イオン水中に懸濁した。粗細胞壁画分を、再懸濁および１５℃において２７，５００×ｇで１時間の遠心分離により洗浄した。再び、破損していない細胞の、最下層白色ペレットを廃棄した。粗細胞壁画分を洗浄後、ペレットを滅菌脱イオン水中に再懸濁し、３５０×ｇで５分間回転して非破損細胞を沈殿させる一方で細胞壁は上清液中に保持させた。上清液をデカントし、１５℃において２７，５００×ｇで１時間遠心分離して、粗細胞壁画分を沈殿させた。粗細胞壁画分を、タンパク質分解酵素で消化することにより除タンパクした。約４００ｇの全細胞から得られた粗細胞壁画分を、低速で混合することにより、１リットルの０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中に再懸濁した。粗細胞壁画分がトリス緩衝液中に十分に再懸濁された後、５０ｍｇのトリプシン（膵臓トリプシン、Siqma Chemical Co.，St．Louis，MO）を添加し、磁気攪拌棒を用いて３５℃で６時間、懸濁液を攪拌した。トリプシン処理後、５０ｍｇのプロナーゼ（Streptomyces griseusプロテアーゼ、Sigma Chemical Co.，St．Louis ，MO）を１リットル毎のトリプシン処理細胞壁懸濁液に添加した。磁気攪拌棒を用いて３５℃で１２〜１８時問、懸濁液を攪拌した。プロテアーゼ消化細胞壁画分を、界面活性剤およびフェノールで処理した。１リットル毎の細胞壁懸濁液に、６０ｇの尿素（J．T．Baker Chemical Co.，Phil lipsburg，NJ)、２．０ｍｌの１００％トリトンＸ−１００（ポリオキシエチレンエーテル、Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO）および１００ｇのフェノール結晶（Fisher Scientific，Fair Lawn，NJ）を添加した。懸濁液を含むフラスコをアルミホイルで軽く覆い、６０℃〜８０℃に加熱して、１時間攪拌した。除タンパク細胞壁画分を、ＧＳＡローターにより１６，０００×ｇで１０分問回転させた。上清画分をデカントして、廃棄し、ペレットの下の暗色流体を使い捨てピペットを用いて除去した。約１リットルの滅菌水中に再懸濁して細胞壁ペレットを３回洗浄し、ＧＳＡローターにより１６，０００×ｇで１０分間遠心分離した。洗浄し、修飾したマイコバクテリウム属細菌の細胞壁抽出物（ＭＣＷＥ）または細胞壁ペレットを、少量の脱イオン化滅菌水を含む凍結乾燥フラスコに懸濁液を移すことにより、凍結乾燥させた。３０ｇ毎の湿潤細胞壁出発物質に対して、３００ｍｌ凍結乾燥フラスコ１本を用いた。固体二酸化炭素で冷却しておいたエタノール中でフラスコを回転することにより、細胞壁懸濁液をシェル凍結させた。フラスコの内容物を凍結後、フラスコを凍結乾燥装置（Virtis Co.，Inc.，G ardiner，NY）に取り付けて、凍結乾燥した。凍結乾燥後、試料を滅菌ねじ蓋容器に移して、無水硫酸カルシウムを含むデシケーター中で−２０℃で保存した。実施例２細菌細胞壁抽出物の乳化マイコバクテリウム属細菌細胞壁抽出物（ＭＣＷＥ）のエマルションを４工程で調製した。即ち、（１）乾燥除タンパクマイコバクテリウム属細菌細胞壁抽出物およびスクアランの乳化容器への添加、（２）油中での細胞壁抽出物の懸濁、（３）界面活性剤を含有する緩衝化生理食塩溶液の、細胞壁抽出物および油の混合物への添加、そして（４）油−細胞壁抽出物複合体の水性界面活性剤生理食塩溶液中での乳化の工程であった。 Microfluidics Tabletop Microfluidizer^TMモデルＭ−１１０Ｙを１フロースルーに関して約１０，７００〜２３，０００ｐｓｉで用いる微流動化により乳化を行った。典型的工程容量は、約６〜７ｍｌ／行程であった。数グラムの凍結乾燥ＭＣＷＥ（前記の実施例１に記載されたように調製）を、乾燥滅菌済の１リットルビーカーに添加した。スクアランを１ｇのＭＣＷＥ当たり２０ｍ１の濃度で添加し、混合物を被覆して、一夜放置した。油と水との懸濁液中の油の最適濃度は、約１％〜7％であった。油−ＭＣＷＥ混合物の１０ｍｌアリコートを滅菌１リットルビーカーに移した。５００ｍｌの滅菌リン酸緩衝化生理食塩水（０．０５Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２、９ｇのＮａＣ１および２ｍｌのTween-80／脱イオン水１リットル）を油−ＭＣＷＥＥの各１０ｍｌアリコートに添加した。混合物を微流動化により均質化し、４℃で保存のために滅菌蓋付瓶に移した。エマルションの試料を、光学顕微鏡を用いてカバーガラス下で検査して、油小滴が透明で暗色の縁を有するというよりむしろ、小さく、粒状の外見であることを確認した。粒状の外見の小滴は、細胞壁の油担体への適正な吸着を示す。水中油型エマルション中の細胞壁調製物の瓶を滅菌混合容器中にプールし、３０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンおよび２．５μｇ／ｍｌのアンホテラシンＢを、１リットル毎の細胞壁抽出物エマルションに防腐剤として添加した。Filamatic Vial Filler（National Instrument Co.，Baltimore，MD）を用いて滅菌層状空気流下で、滅菌Ｉ型ガラス瓶およびプラスチック注射器に１．５ｍｌ〜１０ｍｌの安定化エマルションを充填した。バイアルおよび注射器に蓋をして、密封し、４℃で保存した。実施例３局所ＭＣＷＥによる単純ヘルペスの治療本試験では、４名の単純ヘルペス（口辺ヘルペス）患者を、１ｍｇ／ｍｌのＭＣＷＥを含有するＭＣＷＥエマルション（実施例３に前記）で処置した。本試験に関する結果判定基準は、口辺ヘルペスの症状および再発の消散に関する。被験者１−患者ＧＭＧＭ（男性）は、再発性口辺ヘルペスの病歴を有する。一般用医薬は、彼の症状の最小度の消散を提供し、口辺ヘルペスの再発の低減は提供しなかった。ＭＣＷＥエマルションの薄膜を１日２〜３回、口辺ヘルペスに直接適用した。ＧＭは、口辺ヘルペスの迅速な消散と、再発が１年またはそれ未満に１回に低減したことを報告した。口辺ヘルペスが始まったと例えば彼が感じた時に、口辺ヘルペス域に局所ＭＣＷＥを適用すると、口辺ヘルペスの迅速な消散が生じたとも報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。被験者２−患者ＧＯ患者ＧＯ（女性）は、ストレス関連性である再発性口辺ヘルペスの病歴を有する。一般用医薬は、彼女の口辺ヘルペスにまたはその再発に影響を及ぼさなかった。ＭＣＷＥエマルションの薄膜を１日２〜３回、彼女の口辺ヘルペスに直接適用した。ＧＯは、３日以内の口辺ヘルペスの消散と、その再発の低減を報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。被験者３−患者ＳＭ患者ＳＭ（女性）は、再発性口辺ヘルペスの病歴を有する。５％アシクロビル軟膏を含めた治療は、彼女の口辺ヘルペスに最小度の効果を及ぼし、その再発には全く影響を及ぼさなかった。ＭＣＷＥエマルションの薄膜を１日２〜３回、彼女の口辺ヘルペスに直接適用した。ＳＭは、口辺ヘルペスの消散と、その再発の低減を報告した。口辺ヘルペスが最初に開始したときにＭＣＷＥエマルションを局所的に用いて、その発生を防止したとも、彼女は報告した。被験者４−患者ＲＢ患者ＲＢ（男性）は、口辺ヘルペス、熱性疱疹および口唇周囲の病変の病歴を有する。ＭＣＷＥエマルションを３日間、罹患領域に直接適用した。ＲＢは、２４時間以内の病変の乾燥および退行と、７２時間後の病変の完全消散を報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。まとめ前記のデータは、局所ＭＣＷＥによる単純ヘルペス（口辺ヘルペス）の処置が口辺ヘルペスの症状の消散と、口辺ヘルペスの再発の低減を生じることを示す。さらに、これらのデータは、局所ＭＣＷＥの適用か副作用を全く引き起こさないが、起こしても最小度であることを示す。実施例４局所ＭＣＷＥによる皮膚炎の処置本試験では、皮膚炎患者１０名を、１ｍｇ／ｍｌのＭＣＷＥを含有する局所ＭＣＷＥエマルションで、または１８ｇのテフォース６３、８ｇのイソステアリルイソステアレート、６ｇのラブラフィルＭ１９４４、０．０５ｇのビオックス、０．１０ｇのニパジン、０．０２ｇのニパゾール、２０ｇのグリセロールおよび全量を１００ｇにする精製水(Belapharm，Milan，Italy)を含むベルタファーム( Beltapharm)クリーム１ｍｌ中にＭＣＷＥ１００ｍｇを含有するＭＣＷＥマイクロエマルションで処置した。本試験に関する結果判定基準は、皮膚炎の症状および再発の消散に関する。患者１−ＪＭＪＭ（２５歳、男性）は、化学的曝露により引き起こされる彼の右腕の接触性皮膚炎（発疹）を報告した。ＭＣＷＥエマルションの薄膜を１日３回、発疹に直接適用した。ＪＭは、２４時間以内の発疹の消散と、皮膚炎の再発なしを報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者２−ＭＨＭＨ（１８ヶ月、男児）は、界面活性剤に対するアレルギー反応による皮膚炎（発疹）を有した。局所コルチゾンクリームを液体抗ヒスタミン薬と組合せて２週間使用したが、効果はなかった。ＭＣＷＥエマルションの薄膜を７日間、１日２回、発疹に適用した。発赤および炎症は４８時間以内に消失した。しかしながら、「痒み」は、治療完了後３日目まで消散しなかった。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者３−ＭＦ患者ＭＦ（１８歳、女性）は、ストレスにより生じた重症ざ瘡の病歴を有する。ビタミンＡおよび抗生物質の使用は無効であった。ＭＣＷＥエマルションを１日２回、ざ瘡に直接適用した。ＭＦは、病変が２４時間以内に乾燥し、剥がれ落ちた、と報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者４−ＪＫ患者ＪＫ（女性）は、手の皮膚炎（発疹）の３年の病歴を有した。ステロイドクリームの局所投与による治療は、軽減を提供しなかった。ＭＣＷＥエマルションの薄膜を７日間、１日１回、彼女の手に直接適用した。彼女の症状は、７日以内に消失した。ＪＫは、発疹の数回の再発を局所ＭＣＷＥで処置し、その後症状が消散した、と報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者５−ＪＴ患者ＪＴ（３０歳、女性）は、彼女の手の皮膚のひび割れおよび出血を引き起こす界面活性剤および化学物質との接触により引き起こされる皮膚炎（発疹）と診断された。ヒドロコルチゾンクリームで２週間、１日３回の処置は、最小度の軽減を提供した。ＭＣＷＥクリームを、７日間、１日２回彼女の手に直接適用した。初期改善は最小度であった。局所ＭＣＷＥの中止後、発疹は消散し始め、６週間再発しなかった。発疹が再発した場合、局所ＭＣＷＥの適用は少なくともさらに６週間、症状を軽減した、とＪＴは報告した。少なくとも８回、局所ＭＣＷＥを用いた、とＪＴは報告した。唯一の副作用は、ＭＣＷＥクリームを発疹に適用した場合の灼熱感であった。患者６−ＨＢ患者ＨＢ（女性）は、高度ストレスの期間中、ならびにある種の食品の摂取および／または界面活性剤との接触後に生じる湿疹を有する。コルチゾンベースのクリームの使用およびその他のコルチゾン処置は、最小度の軽減を提供した。ＭＣＷＥクリームの薄膜を、７日間、１日１回、湿疹に適用した。局所ＭＣＷＥは、湿疹の進行を阻止し、湿疹の迅速な治癒を促した。その後少なくとも１２回、局所ＭＣＷＥを用い、副作用は認められなかった、とＨＢは報告した。患者７−ＲＷ患者ＲＷ（男性）は、彼の全身に膿性(puritic)紅斑性落屑性病変として現れる重症皮膚炎を有した。彼は、フロリダ州のジャクソンビルのマヨクリニック(M ayo Clinic)で１ヶ月を費やしたが、満足すべき結果は得られなかった。防腐剤に対するアレルギー反応に起因する接触性皮膚炎を有する、と彼は診断された。局部的調製製剤クリームの局所適用による治療は、彼の皮膚炎の最小度の消散を提供した。局部的調製製剤クリームに混合したＭＣＷＥエマルション（１００ｇＭＣＷＥ／クリーム１ｍｌ）を皮膚炎に直接適用し、彼の症状は１時間以内に改善した。ＲＷは、皮膚炎再発の頻度は変わらない、と報告した。しかしながら、局所ＭＣＷＥクリームの使用は、１時間以内の彼の症状の軽減を継続した。局所ＭＣＷＥクリームの副作用は報告されなかった。患者８−ＤＴ患者ＤＴ（３歳、男児）は、寒冷乾燥気候中、頬に皮膚炎様発疹を有した。罹患領域をＭＣＷＥクリームの薄層で２日間、１日１回処置した。局所ＭＣＷＥは、即時軽減と２４時間以内の発疹消失を提供した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者９−ＢＴ患者ＢＴ（１８ヶ月、男児）は、臀部に広範に生じる赤色発疹を有した。罹患領域をＭＣＷＥクリームの薄層で３日間、１日１回処置した。処置領域は炎症を起こしたので、処置を中止すると、炎症はおさまった。その後の治療効果は報告されなかった。局所ＭＣＷＥに対するこの副作用は説明できない。患者１０−ＳＡ患者ＳＡ（５０歳、男性）は、左上頬部の毛の生え際に、直径１ｃｍの光線性角化症を有した。罹患領域をベルタファーム(Beltapharm)クリーム１ｍｌ中のＭＣＷＥ１ｍｇで、１４日間、１日２回処置した。病変が乾燥し始め、２５日目までに完全に消失した、とＳＡは報告した。病変は完全に治癒し、結果的に生じる瘢痕は認められなかった。病変は、少なくとも３年間は再発していない。ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。まとめこれらのデータは、局所ＭＣＷＥによる皮膚炎の治療が、処置した１０名の患者のうち９名において、皮膚炎の症状の消散および皮膚炎の再発の低減を生じることを示す。さらにこれらのデータは、局所ＭＣＷＥの適用が、処置した１０名の患者のうち９名において、副作用を全く引き起こさないか、引き起こしても最小度であることを示す。実施例４局所ＭＣＷＥによる創傷の治療本試験では、５つの異なる種類の創傷を有する５名の患者を、１ｍｇＭＣＷＥ／ｍｌを含有するＭＣＷＥエマルションで、または実施例３に記載したようなクリーム１ｍｌ中に１００ｇまたは５００ｇのＭＣＷＥを含有するＭＣＷＥマイクロエマルションで処置した。本試験に関する結果判定基準は、創傷の治癒に必要な時間、創傷内の感染の発生、および創傷治癒後に残る瘢痕組織の量に関連する。患者１−ＧＨ患者ＧＨ（高齢男性）は、非常に大きい褥瘡を有した。抗生物質クリームおよび経口抗生物質の使用は無効であった。ＭＣＷＥクリーム（１００ｇ／ｍｌ）の層を、１日２回、褥瘡に直接適用した。褥瘡の治癒の顕著な改善が４日以内に生じた、とＧＨは報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者２−ＫＰ患者ＫＰ（男性）は、自転車事故で片側の足に大きい深傷を蒙った。ＭＣＷＥクリーム（１００ｇ／ｍｌ）を７日間、１日２回、深傷に直接適用した。創傷は完全に治癒し、感染および瘢痕は伴わなかった、とＫＰは報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者３−ＭＦ患者ＭＦ（男性）は、はんだ付け事故で下唇に熱傷を蒙った。ＭＣＷＥクリーム（１００ｇ／ｍｌ）を１４日間、１日３回、熱傷唇に直接適用した。唇は完全に治癒し、感染および瘢痕は伴わなかった、とＭＦは報告した。局所ＭＣＷＥの副作用は報告されなかった。患者４−ＩＲ患者ＩＲ（女性）は、前頭部および頭皮の帯状疱疹と診断された。５００ｍｇの経口セファレックスでの５日間１日４回の治療は効果がなかった。６日目に、彼女の眼および頬が腫脹し始め、病変が接触に対して感受性になった。１３日目に、ＩＲは、ＭＣＷＥの１回経口投与を受け、ＭＣＷＥクリーム（５００ｍｇ／ｍｌ）を帯状疱疹に１日２回適用し始めた。１５日目に、病変は開いて、排液し、接触に対する感受性は低減した。１８日目に、ＩＲは、頭痛およびインフルエンザ様症状を発症した。１９日目に、頭痛およびインフルエンザ様症状は消失した。２０日目に、ＩＲは局所ＭＣＷＥを停止した。２５日目に、瞼および頬の腫脹はなくなり、病変のほとんどが消散していた。患者５−ＶＯ患者ＶＯ（男性）は、下唇全体に進行性潰瘍病変を有し、生検して、細菌感染と診断された。ＶＯの病変は、局所抗ウイルスおよび抗細菌薬の個別のまたは組合せての６週間の治療に反応しなかった。ＭＣＷＥエマルション（１ｍｇ／ｍｌ）による局所治療は、病変が最初に現れてから約６週間後に開始された。病変はその縁部で縮小し始め、そのサイズか低減し始めた。２週間の局所ＭＣＷＥ後、病変は最初の長さおよび幅の３分の１になった。ＶＯは重症筋無力症を有するが、これは局所ＭＣＷＥにより悪化はしなかった。まとめこれらのデータは、局所ＭＣＷＥによる創傷の治療が、創傷の治癒を生じることを示す。さらにこれらのデータは、局所ＭＣＷＥの適用が副作用を全く引き起こさないか、生じても最小度であることを示す。実施例５全身性ＭＣＷＥによる創傷の治療本試験では、８頭の健常成馬（年齢３〜１２歳）を麻酔し、各動物（Ｎ＝１６）の前肢の球節に近位の中手の背側面に、そして後肢の対側性中足領域から２．５ｃｍ²全厚の創傷を外科的に作製した。創傷に包帯をして、ウマを麻酔から回復させた。術後６時間目に、８頭のうち４頭のウマに、実施例２で記載したように調製した１．５ｍｇのＭＣＷＥエマルションを静注した(実験)。他の４頭は、等容量の生理食塩水が投与された(対照)。手術の１日後に包帯を取り外し、滅菌生理食塩水で清浄にして、再び包帯をした。その後、創傷が治癒するまで、２日毎に包帯を取り換えた。総創傷面積、上皮形成＋非上皮形成面積および非上皮形成面積を、デジタル化写真の平面外形測定を用いて測定した。本試験に関する結果判定基準は、６．２５ｃｍ²の創傷の総創傷面積、収縮による治癒、および上皮形成による治癒であった。完全治癒は、完全上皮形成と定義された。ウマは創傷治癒の個体差を示すが、しかし従来の試験により、完全治癒には約６０日を要することが示されている。対照創傷術後５日目に、８つの対照創傷は、良好な平坦フィブリン層を示した。術後１５日目に、対照創傷は良好に治癒を継続した。術後２７日目、対照創傷は良好に治癒を継続した。術後１８日目、対照創傷は収縮が認められなかった。術後２５日目までに、対照創傷は３０％が収縮していた。術後４１日目には、対照創傷は良好に治癒し続けたが、しかし完全に治癒したものはなかった。術後５６日目に、４頭の未処置ウマの８つの対照創傷のうちの５つが完全治癒ではなかった。未処置対照に関するその他の実験では、個体差が認められたが、しかし完全治癒には約６０日を要した。処置ウマ術後５日目に、８つのＭＣＷＥ処置創傷は良好な平坦フィブリン層を示した。術後１５日目、創傷は良好に治癒を継続した。術後１８日目、ＭＣＷＥ処置創傷は平均して３０％が収縮した。術後２７日目に、ＭＣＷＥ処置創傷は良好に治癒を継続し、２頭のウマの創傷はほぼ完全に治癒していた。術後３８日目には、１頭の創傷は完全に治癒し、他の３頭のＭＣＷＥ処置ウマの創傷はほぼ完全に治癒していた。術後４１日目には、２頭のＭＣＷＥ処置ウマが完全に治癒し、他の２頭もほぼ完全に治癒した。術後５６日目に、４頭のＭＣＷＥ処置ウマの８つの創傷のうちの８つが完全治癒した。まとめ創傷治癒の変動は、年齢または性別の影響を受けなかった。術後初めの７２時間以内に、実験群ウマ（６．６３ｃｍ²）は、対照群ウマ（７．３１ｃｍ²）と比較して、創傷拡大を低減した。さらに、実験群ウマは創傷収縮による(Ｐ＝０．０６６)、そして非上皮形成表面積のより迅速な低減による（Ｐ＝０．０５８）創傷治癒の増大を示した。創傷３６日後では、実験ウマは平均総創傷面積が２．２８ｃｍ²であったが、一方対照ウマでは平均総創傷面積は２．８４ｃｍ²であり、非上皮形成平均面積は０．７８ｃｍ²と１．４３ｃｍ²であった。これらのデータは、全身性ＭＣＷＥによる創傷の治療が創傷拡大の低減、創傷収縮の増大、そして治癒時間の低減をもたらすことを示す。さらに、これらのデータは、ＭＣＷＥの全身送達が副作用を引き起こさないことを示す。実施例６ロドコッカス・エクイ(Rhodococcus equi)細胞壁抽出物（ＲＣＷＥ）の調製従来はコリネバクテリウム・エクイ(Corynebacterium equi)と呼ばれていたコリネ型生物であるR.equiの細胞壁抽出物を、実施例１と同様に調製した。実施例７ＲＣＷＥの免疫刺激特性３２匹のＣＤ１異系交配マウスに、０．５ｍｌの生理食塩水エマルション中の２％油中の２００μｇのＲＣＷＥを腹腔内注入した（ＲＣＷＥマウス）。１６匹のＣＤ１異系交配マウスに、０．５ｍｌの生理食塩水を腹腔内注入し(生理食塩水対照マウス)、８匹のＣＤ１マウスは環境対照として維持した(環境対照マウス )。７２時間後、１６匹のＲＣＷＥマウスと８匹の生理食塩水対照マウスを５× ＬＤ₅₀のパスツレラ・マルトシダ(pasteurella multocida)を投与し、１６匹のＲＣＷＥマウスと８匹の生理食塩水対照マウスを２０×ＬＤ₅₀の脳心筋炎（ＥＭＣ）ウイルスを投与した。投与後１４日目に、ＲＣＷＥマウスは３２匹中１０匹が、生理食塩水対照マウスは１６匹中０匹が、そして環境対照マウスは８匹中８匹が生き残った。これらのデータは、ＲＣＷＥが非特異的免疫刺激剤であることを実証する。実施例８ＲＣＷＥおよびＭＣＷＥによる一酸化窒素産生の刺激ネズミマクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４．７細胞を、２４ウエル組織プレートにプレートした。細胞がコンフルエント単層を形成した時に、培地をウエルから除去し、５〜８０μｇのＲＣＷＥまたは５〜８０μｇのＭＣＷＥを含有する新鮮な培地１ｍｌと取り換えた。５％ＣＯ₂を含む雰囲気中で３７℃で２４時間インキュベーション後、Griessの比色反応(Griess，P．Demerkunqen zu der Abhan dlung der HH．Wesdlsky und Benedikt，UEBER EINIGE AZOVERDINDUNGEN，C hem．Ber．12:426-428，1987)を用いて、一酸化窒素（ＮＯ）産生を測定した。表１平均一酸化窒素（ＮＯ）産生（nmol/10⁶細胞／24時間） ¹ ＲＣＷＥに関する全試料の平均² ＭＣＷＥに関する全試料の平均表１のデータは、非特異的免疫刺激剤ＲＣＷＥが、ＲＡＷ２６４．７細胞によるＮＯの発生の促進において、非特異的免疫刺激剤であるＭＣＷＥと同様の非特異的免疫刺激特性を有することを立証する。プロプリオネバクテリウム・アクネ(Proprionebacterium acne) ＣＧ)、ボルデテラ・ペルツスシス(Bordetella pertussis)およびその他のボルデテラ亜種(Bordetella spp.)の細菌細胞調製物、ならびに、麻疹ウイルス生成物ＲＶＩ（Eudaemonic，Omaha，NE）は非特異的免疫刺激剤として用いられており、非特異的免疫刺激剤ＲＣＷＥおよびＭＣＷＥと同様の非特異的免疫刺激特性を有する。もちろん、前記は本発明の好ましい実施の形態に関するだけのものであり、添付の請求の範囲に記載したような本発明の精神および範囲を逸脱しない限り、多数の修正または変更が成され得る、と理解されるべきである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年６月１１日（１９９９．６．１１）【補正内容】請求の範囲１．動物の免疫系を刺激して局所的障害を治療する方法であって、局所的障害の表面に有効な量の細菌細胞壁抽出物を適用することによって、動物の免疫系を刺激して局所的障害を治療することを含む前記方法。２．前記細菌細胞壁抽出物が、マイコバクテリウム種由来の細菌細胞壁抽出物およびロドコッカス種由来の細菌細胞壁抽出物から成る群から選択される請求の範囲第１項に記載の方法。３．前記マイコバクテリウム種がマイコバクテリウム・フレイ(Mycobacterium phlei)である請求の範囲第２項に記載の方法。４．前記ロドコッカス種がロドコッカス・エクイ(Rhodoccocus equii)である請求の範囲第２項に記載の方法。５．前記局所的障害が、皮膚炎、乾癬、褥瘡性潰瘍、ざ瘡、光線性角化症、頬潰瘍、口辺ヘルペスおよび湿疹から成る群から選択される請求の範囲第１項に記載の方法。６．動物の免疫系を刺激して局所的障害の再発を防止する方法であって、局所的障害の表面に有効な量の細菌細胞壁抽出物を投与することによって、動物の免疫系を刺激して局所的障害の再発を防止することを含む前記方法。７．前記細菌細胞壁抽出物が、マイコバクテリウム種由来の細菌細胞壁抽出物およびロドコッカス種由来の細菌細胞壁抽出物から成る群から選択される請求の範囲第６項に記載の方法。８．前記マイコバクテリウム種がマイコバクテリウム・フレイ(Mycobacterium phlei)である請求の範囲第７項に記載の方法。９．前記ロドコッカス種がロドコッカス・エクイ(Rhodoccocus equii)である請求の範囲第７項に記載の方法。１０．前記細菌細胞壁抽出物が、クリーム、エマルション、ローションおよび軟膏から成る群から選択される処方物で適用される請求の範囲第６項に記載の方法。１１．前記局所的障害が、皮膚炎、乾癬、褥瘡性潰瘍、ざ瘡、光線性角化症、頬潰瘍、口辺ヘルペスおよび湿疹から成る群から選択される請求の範囲第６項に記載の方法。１２．動物の免疫系を刺激して動物の創傷の治癒を促進する方法であって、動物に有効な量の細菌細胞壁抽出物を投与することによって、動物の免疫系を刺激して創傷の治癒を促進することを含む前記方法。１３．前記細菌細胞壁抽出物が、マイコバクテリウム種由来の細菌細胞壁抽出物およびロドコッカス種由来の細菌細胞壁抽出物から成る群から選択される請求の範囲第１２項に記載の方法。１４．前記マイコバクテリウム種がマイクロバクテリウム・フレイ(Mycobacte rium phlei)である請求の範囲第１３項に記載の方法。１５．前記ロドコッカス種がロドコッカス・エクイ(Rhodoccocus equii)である請求の範囲第１３項に記載の方法。１６．前記細菌細胞壁抽出物が、局所的処方物および非経口処方物から選ばれる処方物で投与される請求の範囲第１２項に記載の方法。１７．前記細菌細胞壁抽出物が局所的処方物で投与される請求の範囲第１６項に記載の方法。１８．前記局所的処方物が、クリーム、エマルション、ローションおよび軟膏から選択される請求の範囲第１７項に記載の方法。１９．前記細菌細胞壁抽出物が非経口処方物で投与される請求の範囲第１５項に記載の方法。２０．前記非経口処方物が全身的処方物である請求の範囲第１９項に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者フィリップス，ニゲル，シー. カナダ，エイチ９アール１ジェイ６ケベック，ポイント―クレール，サイナリーアベニュー 101 (72)発明者ロガン，ドラガン，アール. カナダ，エヌ５ヴイ４エヌ１オンタリオ，ロンドン，サディアベニュー 138

Claims

【特許請求の範囲】１．局所的障害の治療が必要な動物に、動物の局所的障害を治療するのに有効な量の細菌細胞壁抽出物を投与することを含む、動物における局所的障害の治療方法。２．前記細菌細胞壁抽出物が、マイコバクテリウム種由来の細胞壁抽出物およびロドコッカス種由来の細胞壁抽出物から成る群から選択される請求の範囲第１項に記載の方法。３．前記マイコバクテリウム種がマイコバクテリウム・フレイ(Mycobacterium phlei)である請求の範囲第２項に記載の方法。４．前記ロドコッカス種がロドコッカス・エクイ(Rhodoccocus equii)である請求の範囲第２項に記載の方法。５．前記細菌細胞壁抽出物が、エマルション、クリーム、ローションおよび軟膏から成る群から選択される処方物で適用される請求の範囲第３項に記載の方法。６．前記細菌細胞壁抽出物が、クリームを含む処方物で適用される請求の範囲第５項に記載の方法。７．前記細菌細胞壁抽出物が、エマルションを含む処方物で適用される請求の範囲第５項に記載の方法。８．前記エマルションが、油と水とのエマルションである請求の範囲第７項に記載の方法。９．前記油が、鉱油、スクアラン、スクアレンおよびｎ−ヘキサデカンから成る群から選択される請求の範囲第８項に記載の方法。１０．前記局所的障害が、皮膚炎、乾癬、褥瘡性潰瘍、ざ瘡、光線性角化症、頬潰瘍、単純ヘルペスおよび湿疹から成る群から選択される請求の範囲第１項に記載の方法。１１．局所的障害の再発防止が必要な動物に、動物における局所的障害の再発を防止するのに有効な量の細菌細胞壁抽出物を投与することを含む、動物における局所的障害の再発防止方法。１２．前記細菌細胞壁抽出物が、マイコバクテリウム種由来の細胞壁抽出物およびロドコッカス種由来の細胞壁抽出物から成る群から選択される請求の範囲第１１項に記載の方法。１３．前記マイコバクテリウム種がマイコバクテリウム・フレイ(Mycobacteri um phlei)である請求の範囲第１２項に記載の方法。１４．前記ロドコッカス種がロドコッカス・エクイ(Rhodoccocus equii)である請求の範囲第１２項に記載の方法。１５．前記細菌細胞壁抽出物が、エマルション、クリーム、ローションおよび軟膏から成る群から選択される処方物で適用される請求の範囲第１３項に記載の方法。１６．前記細菌細胞壁抽出物が、クリームを含む処方物で適用される請求の範囲第１５項に記載の方法。１７．前記細菌細胞壁抽出物が、エマルションを含む処方物で適用される請求の範囲第１５項に記載の方法。１８．前記エマルションが、油と水とのエマルションである請求の範囲第１７項に記載の方法。１９．前記油が、鉱油、スクアラン、スクアレンおよびｎ−ヘキサデカンから成る群から選択される請求の範囲第１８項に記載の方法。２０．前記局所的障害が、皮膚炎、乾癬、褥瘡性潰瘍、ざ瘡、光線性角化症、頬潰瘍、単純ヘルペスおよび湿疹から成る群から選択される請求の範囲第１１項に記載の方法。２１．創傷を有する動物に、動物における創傷の治癒を促進するのに有効な量の細菌細胞壁抽出物を投与することを含む、創傷を有する動物における創傷の治瘡の促進方法。２２．前記細菌細胞壁抽出物が、マイコバクテリウム種由来の細胞壁抽出物およびロドコッカス種由来の細胞壁抽出物から成る群から選択される請求の範囲第２１項に記載の方法。２３．前記マイコバクテリウム種がマイクロバクテリウム・フレイ(Mycobacte rium phlei)である請求の範囲第２２項に記載の方法。２４．前記ロドコッカス種がロドコッカス・エクイ(Rhodoccocus equii) である請求の範囲第２２項に記載の方法。２５．前記細菌細胞壁抽出物が全身的に適用される請求の範囲第２１項に記載の方法。２６．全身的に適用される前記細菌細胞壁抽出物がエマルションである請求の範囲第２５項に記載の方法。２７．前記エマルションが、油と水とのエマルションである請求の範囲第２６項に記載の方法。２８．前記油が、鉱油、スクアラン、スクアレンおよびｎ−ヘキサデカンから成る群から選択される請求の範囲第２７項に記載の方法。