JP2001512463A

JP2001512463A - Ｂ型肝炎ウィルス（ｈｂｖ）感染症を処置するための薬理組成物

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Publication number: JP2001512463A
Application number: JP53604498A
Authority: JP
Inventors: ガルン，エイサン
Original assignee: ハダジットメディカルリサーチサービシズアンドディベロップメントカンパニー，リミティド
Priority date: 1997-02-11
Filing date: 1998-02-10
Publication date: 2001-08-21
Also published as: US6217858B1; NZ336954A; WO1998035694A2; KR20000070960A; US6410009B1; AU8704998A; EP0988049A2; CA2280998A1; WO1998035694A3; WO1998035694A9

Abstract

(57)【要約】本発明はＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物であって、hIL6とpS1との間、並びにhIL6と肝細胞及びその他のHBV許容細胞との間の少なくとも一の結合部位と相互作用する可溶性活性因子を所定量で含んで成り、ここで当該活性因子が少なくとも一の前記部位に競合的に競合するのに十分な量で存在し、かくして肝細胞及びその他のHBV許容細胞のhIL6−媒介HBV感染症を予防する薬理組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】Ｂ型肝炎ウィルス(HBV)感染症を処置するための薬理組成物本発明はＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物に関する。ヒトにおけるHBV感染症は慢性の肝臓病を惹起し、それは時折り肝細胞癌腫へと進行する。細胞に対するHBVの結合及びウィルスゲノムの宿主細胞核に対するウィルスゲノムのターゲッティングの初期段階は未だ解明されていない。細胞侵入又はウィルスレセプターの媒介因子として様々な血清タンパク質及び細胞膜糖タンパク質が提唱されているにもかかわらず、HBVについての特異的なレセプターはまだ同定されていない。HBVエンベロープタンパク質は重合アルブミン〔P． Pontissoら、Journal of Virology，Vol.63，No.1981-1，p.988(1981)〕又は可溶性トランスフェリン〔M．GagliardiらEur ．J．Immunol.，Vol.24，pp.1372-13 76(1994)〕と相互作用する残基を含み、その対応のレセプターを介し、おそらくは非特異的にウィルスの細胞侵入を可能にすると報告されている。 Neurathら〔A．Neurathら、J ．Exp．Med.，Vol.175，pp461-469(1992)〕により報告された研究において、hIL−６はHBVエンベロープのpS1(aa 21-47)セグメントに結合することが示されている。HBVレセプターについての推定の候補、例えばアンネキシンＶ（エンドヘキシンII）〔K．Hertogs，らVirology，Vol.197 ，pp.549-557（1993）〕；アポリポタンパク質Ｈ〔H．Mehdi，らJournal of Vir ology ，Vol.68，pp.2415-2424（1994）〕；及びアシアロ糖タンパク質レセプター〔U．Treichel,らJournal of General Virology，Vol.75，pp.3021-3029（199 4）〕が最近報告されている。結合実験は、ウィルスエンベロープタンパク質のプレ−Ｓ１（pS１）領域が宿主細胞の認識部位を含むことを実証した〔A．R．Neurath,らCell，Vol.46，pp.4 29-436(1986)〕；M．Petit，らVirology，Vol.180，pp.483-491（1990）；M．Pe tit，らVirology，Vol.197，pp.211-222（1992）〕。過去の研究はHepG2細胞〔R ．Bchini,らJournal of Virology，Vol.64，pp.3025-3032（1991）〕及びヒト肝細胞〔P．Gripon,らJournal of Virology，Vol.62，pp.4136-4143（1988）；T． Ochiya,らProc ．Natl．Acad．Sci．U.S.A.，Vol.86，pp.1875-1879（1989）：P ．Gripon,らVirology，Vol.192，pp.534-540（1993）；P．Galle，らGastroente rology ，Vol.106，pp.664-673（1994）〕がHBV感染症をin vitroで維持できることを報告しているが、どの系においても細胞レセプターは特定されておらず、そしてこれらのモデルの実験再現性は低い。現況の報告において、ベージュ／ヌード／Ｘ連結免疫不全(BNX)マウスを利用することにより構築し、全身照射（12Gy）により事前コンディショニングし、且つ重症複合免疫不全（SCID）マウス骨髄（BM）細胞により再構築したキメラマウスが正常Ｔ及びＢ細胞〔I．Lubinら、Science Vol.252，pp.427-431(1991)〕並びに正常ヒト肝組織〔E．Galunら、Journal of Infectious Diseases，Vol.175 ，pp.25-30(1995)〕を許容することが示されている。Ｃ型肝炎ウィルス(HCV)ウィルス血症が、既にHCV感染症をもつヒト肝断片又はHCV陽性血清をもつ移植肝断片とのex-vivoインキュベーションを経た平常ヒト肝組織のいづれかをBNX＞SCID キメラ動物の腎包の下に移植してから２ケ月後までに放出された（E．Galunら、前掲）。当初の研究はヒトインターロイキン６（hIL6）がＢ型肝炎ウィルス(HBV)の認識部位を含むことを示した。ヒトIL−6 cDNAでトランスフェクションされたチャイニーズハムスター卵巣細胞及びヒトIL −6 cDNAで担持する組換バキュロウィルスで感染されたスポンドプテラ・フルギペルダオバリアン(Spondoptera frugiperdaovarian)昆虫細胞はHBVエンベロープタンパク質のプレS921−47）領域を発現し、IL−６配列の発現がHBVエンベロープタンパク質の結合部位を包括することを示唆する。かくして、IL−６上のHBV のレセプター結合部位を擬態するがインタクトIL−６分子の所望されない生物学的効果は示さない抗ウィルス化合物の開発の可能性がもち上がり、その理由はHB Vエンベロープタンパク質のプレＳ１領域と肝起源細胞との相互作用がIL−６及び抗IL−６抗体により阻害されることが認められたからである〔A．Neurathら、J ．Exp．Med ．Vol.176，pp.1561-1569（1992）〕。今まで、HBV感染症の初期段階の解明及び抗ウィルス剤の評価における第一の障害は小動物モデルの欠如にあった。上記の技術を利用し、肝臓組織によるex-v ivo HBV DNA陽性血清インキュベーション移植を経てHBVウィルス血症を維持する SCID＞BNX動物を開発することが可能となった。本明細書に記載の実験及び移植のための外科技術のために動物を調製する方法は今までに報告されたものと似かよっている〔E．Galunら、前掲〕。例えばPCT／US94／05410に記載の通り、キメラ動物モデルを用い、ヒトインターロイキン６（hIL6）がHBV感染症のために必須であることが見い出された。hIL 6がHBV感染症のための必須の橋渡しを担うことが同定されることで、本発明はＢ型肝炎ウィルス感染症の処置のための薬理組成物を提供し、それはhILPとpS1との間の、並びにhIL6と肝細胞及びその他のHBV許容細胞との間の少なくとも一の結合部位に相互作用する所定量の可溶性活性因子を含んで成り、ここでこの活性因子は少なくとも一の前記結合部位に対して競合的に結合するのに十分な量で存在し、かくして肝細胞及びその他の HBV許容細胞のhIL6−媒介HBV感染症を阻止する。本発明の第一の好適な態様において、Ｂ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物であって、肝細胞及びその他のHBV許容細胞に対するhIL6の結合を阻害するのに十分な量の可溶性gp80及び／又はgp130レセプター部位を含んで成る薬理組成物を提供する。本発明の第二の好適な態様において、HBV感染症の処置のための薬理組成物であって、HBVとhIL6との相互作用をブロッキングする量のpS1のアミノ酸21〜46に対応する可溶性アミノ酸配列を含んで成る薬理組成物を提供する。本発明の第三の好適な態様において、HBV感染症の処置のための薬理組成物であって、hIL6と肝細胞及びその他のHBV許容細胞との相互作用をブロッキングする量のペプチドLYS41−ALA56、GLY77−GLU95及びGLN153−HIS165から成る群より選ばれる可溶性リガンドを含んで成る薬理組成物を提供する。本発明の第四の好適な態様において、抗ウィルス因子と接合されたhIL6を含んで成るHBV感染症の処置のための薬理組成物を提供する。本発明の更なる別の好適な態様において、肝細胞のＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物を提供し、これはヒトインターロイキン６（hIL6 ）と肝細胞との間での少なくとも一の結合部位と競合的に相互作用する可溶性活性因子を含んで成り、当該可溶性活性因子はhIL6と相互作用するレセプター部位を有する糖タンパク質80（gp80）、hIL6と相互作用するレセプター部位を有する可溶性糖タンパク質130（gp130）、hIL6誘導化ペプチドLYS41−ALA56、hIL6誘導化ペプチドGLY77−GLU95、hIL6誘導化ペプチドGLN153−HIS165、β１及びβ２hI L6突然変異体(mhIL6β１＋β２)の組合せ、並びにmhIL6β１＋β２であってphe171がleu、そしてser177がargへと置換されたもの、並びにそれらの任意の混合物から成る群より選ばれる。一定の好適な態様において、かかる薬理組成物はHBVによる肝細胞の感染症を処置するために有効な量の当該可溶性活性因子を含む。本発明の更なる別の好適な態様において、肝細胞のＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物であって、hIL6／hIL6RαとhIL6Rβとの複合体を破壊する可溶性活性因子を含んで成る薬理組成物を提供する。本発明の更なる別の好適な態様において、肝細胞のＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物であって、hIL6と相互作用するレセプター部位を有する糖タンパク質80（gp80）、hIL6と相互作用するレセプター部位を有する可溶性糖タンパク質130（gp130）、hIL6誘導化ペプチドLYS41−ALA56、hIL6誘導化ペプチドGLY77−GLU95、hIL6誘導化ペプチドGLN153−HIS165、β１とβ２hIL6突然変異体との組合せ(mhIL6β１＋β２)、mhIL6β１＋β２であってphe171がleu 、そしてser177がargに置換されたもの、hIL6／hIL6RαとhIL6Rβとの複合体を破壊する可溶性活性因子、並びにこれらの任意の混合物から成る群より選ばれる可溶性活性因子を含んで成る薬理組成物を提供する。一般に上記の薬理組成物に関して、その可溶性活性因子は肝細胞のHBV感染症を処置するために有効な量で含まれており、例えばこの可溶性活性因子は患者の体重に基づき約100ng／kg〜約100mg／kgの量で存在する。好適な態様において、かかる薬理組成物は患者の体重に基づき可溶性活性因子を約10μｇ／kg〜約10mg ／kgの量で含む。本発明は更にHBVによる肝細胞の感染症の処置のための方法に関連し、この方法はヒト患者にヒトインターロイキン６（hIL6）と肝細胞との相互作用を阻害する可溶性活性因子を投与することを含んで成る。本方法の一定の好適な態様において、当該活性因子は少なくとも一の結合部位と競合的に相互作用する。かかる好適な態様において、この可溶性活性因子はhIL6に結合し、そして hIL6と肝細胞との相互作用を競合的に阻害するレセプター部位を有する可溶性糖タンパク質80（gp80）及び／又は可溶性糖タンパク質130（gp130）を含んで成ることが更に好ましい。本方法のその他の好適な態様において、当該可溶性活性因子はペプチドLYS41−ALA56、GLY77−GLU95及びGLN153−HIS165から成る群より選ばれ、しかもhIL6と肝細胞との相互作用を競合的にブロッキングする可溶性リガンドを含んで成ることが更に好ましい。本方法の更なる別の好適な態様において、当該可溶性活性因子はhIL6／hIL6RαとhIL6Rβとの複合体を破壊することが更に好ましい。本方法の別の好適な態様において、当該可溶性活性因子はhIL6誘導化ペプチドLYS41−ALA56、hIL6誘導化ペプチドGLY77−GLU95、hIL6誘導化ペプチドGLN153−HIS165、β１及びβ２hIL6突然変異体の組合せ(mhIL6β１＋β２)、並びにmhIL6β１＋β２であってphe171がleu、そしてser177がargに置換されているもの、並びにこれらの任意の混合物から成る群より選ばれることが更に好ましい。この任意の好適な態様において、当該可溶性活性因子１日当り約100ng／k g〜約100mg／kgの量で投与し、そして一定の態様においては患者の体重に基づき約10μｇ／kg〜約10mg／kgで投与する。本発明は更にHBVによる肝細胞の感染症の処置のためのヒトインターロイキン６（hIL6）と肝細胞との相互作用を阻害する可溶性活性因子の利用に更に関連する。一定の好適な態様において、この活性因子は少なくとも一の結合部位と競合的に相互作用する。かかる好適な態様において、この可溶性活性因子はhIL6に結合し、そしてhIL6と肝細胞との相互作用を競合的に阻害するレセプター部位を有する可溶性糖タンパク質80 （gp80）及び／又は可溶性糖タンパク質130（gp130）を含んで成ることが更に好ましい。他方、又はこれに加えて、当該可溶性活性因子はペプチドLYS41−ALA56 、GLY77−GLU95及びGLN153−HIS165から成る群より選ばれ、しかもhIL6と肝細胞との相互作用を競合的にブロッキングする可溶性リガンドを含んで成ることが更に好ましい。更なる別の好適な態様において、当該可溶性活性因子はhIL6／hIL6 RαとhIL6Rβとの複合体を破壊することが更に好ましい。他に、又はこれに加えて、別の好適な態様において、当該可溶性活性因子はhIL6誘導化ペプチドLYS41 −ALA56、hIL6誘導化ペプチドGLY77−GLU95、hIL6誘導化ペプチドGLN153−HIS16 5、β１及びβ２hIL6突然変異体の組合せ(mhIL6β１＋β２)、並びにmhIL6β１＋β２であってphe171がleu、そしてser177がargに置換されているもの、並びにこれらの任意の混合物から成る群より選ばれることが更に好ましい。上記章に特定する競合的に活性な可溶性活性因子の他に、当該可溶性活性因子はHBVを阻害するhIL−６に接合された抗ウィルス剤（例えば、３TC、ファムシクロビル及びF IAU類似体）；IL−6Rを発現する細胞に対してのみ細胞毒性を発揮する毒素（例えばキメラ融合毒素DAB₃₈₉−IL−６）；IL−６タンパク質上の部位Ｉ又は部位II のいづれかに結合するhIL−６に特異的なモノクローナル抗体；hIL−６にしっかりと且つ特異的に結合し、しかもサイトカイン生物活性の有効なインヒビターであるミニボディーポリペプチド（例えばMB02）；抗−IL−6R mAb、並びにこれらの任意の混合物を含んで成りうる。本章に記載の任意の態様において、当該可溶性活性因子は肝細胞のHBV感染症を処置するのに有効な量で投与するのが好ましい。この有効量は一般に１日当り約100ng／kg〜約100mg／kgの量であり、そして所望の態様においては患者の体重に基づき約10μｇ／ｋｇ〜約10mg／kgであろう。更に、本章において供与される例示は限定を意味するものではない。数多くのその他の可溶性活性因子が本明細書の通読により当業者に明らかとなるであろう。本発明の目的のため、hIL−６なる語はヒトインターロイキン６であり、pS1なる語はプレ−Ｓ１を意味し；gp80は糖タンパク質80であり（更には、hIL−6R又はhIL−6Rαともいう）；そしてgp130は糖タンパク質130であり、hIL−6Rβ（ヒトインターロイキン６レセプターベーター）として知られる。本発明の目的のため、「結合」及び「相互作用」なる語は同義語である。図面：図１は本明細書において考慮するhIL6シグナル伝達カスケードのメカニズムを示す；図２はHBsAgで染色した、SCID＞BNXキメラマウスにおいて包下移植して１ケ月後のHBV DNA陽性患者由来の予備感染肝臓断片を示す；図３はヒト組織で移植されたSCID＞BNXキメラマウスにおいてhIL6がHBVウィルス血症を媒介することを示す；図４はSCID＞BNXキメラマウス（Ｈ及びＥ染色）に脾内注射して１ケ月後に発症したHepG2−hIL−6R腫瘍の肝組織学検査を示す；図５はhIL−６ mRNAのヌクレオチド配列を示す；図６及び６ａはhIL−６レセプターmRNAのヌクレオチド配列を示す；図７はIL−６レセプターのヌクレオチド配列を示す；図８及び８ａはgp130のヌクレオチド配列を示す；そして図９はhIL−６レセプターアルファーのヌクレオチド配列を示す。宿主細胞へのHBVの侵入メカニズムの研究は、莫大な数のウィルス結合部位、ウィルス又は標的細胞膜と相互作用する介在分子、及び宿主細胞表層分子を示している。全てHBV感染症に一役担っていると考えられている。細胞に対するHBV結合に関与する因子についての公開データーのまとめを表１に示す。表１に示す情報はHBV宿主細胞結合に関与する既知のウィルス及び細胞膜因子の全てではないにしてもほとんどをまとめている。しかしながら、表１に特定する文献の基礎研究及び引用する研究者により報告されているその他の研究において供与される情報はHBV融合の任意の実験、ウィルス侵入又は任意の考えられている特異的なウィルス性、介在性もしくは細胞性因子を通じての感染症の初期工程を、組織培養に限って、再現良く示している。標的細胞に対する結合に関与するウィルス構造は同定されているが、HBVについての細胞レセプターは未だ決定されておらず、そして感染症に至る生化学的現象は本発明がなされるまで不明であり続けた。HBV結合及び内在化の初期段階についての知識の欠如の主たる理由の一つはほとんどの研究グループがヒト肝細胞又はヒト肝癌細胞系を感染させることができなかったことにある。即ち、莫大な数の公開物が介在因子を伴って及び伴わないで様々な細胞表層結合部位を教示しているにもかかわらず、どの公開物も感染症に至る相互作用は教示していない。本発明は初めて、hIL−６が肝細胞に対するhIL−６結合を通じてHBV感染症の必須の介在因子であり、そして任意の前記成分間の相互作用のブロッキングが感染症のブロッキングに足りることを教示する。本発明に従うと、標的細胞に対するウィルス結合は全てのパートナーが常に融合及び感染症にとって必須ではない多段階工程であるにちがいないことが認識される。ウィルスの向性はウィルスと細胞との相互作用に影響を及ぼす様々な因子に依存する。HIV及びその他のウィルスに関して示されている通り、推定ウィルスレセプターの存在では宿主細胞にウィルスが侵入できるのに不十分である。更に、多くのウィルスに関し、細胞表層上で発現される一より多くのレセプターが標的化細胞の生産的感染にとって必須であることが見い出された。標的細胞に対するこのウィルス結合及び細胞膜貫通はおそらくは多段階カスケード現象であろう。ウィルスは細胞膜結合の第一段階のために複数のレセプター分子と相互作用する。エンベロープウィルス、例えばHBVの群のウィルス結合後、細胞質膜の貫通がウィルスエンベロープと細胞膜との融合を経て起こる。図１は本発明において考慮されるhIL6シグナル伝達カスケードのメカニズムを示す。HBVエンベロープは一本のenv遺伝子によりコードされる３種の相接(conte rminal)タンパク質から成る。ウィルスゲノムのプレ−Ｓ領域によりコードされるこれらのタンパク質のドメインはhIL6に対するHBVの潜在的な結合部位を示す（そして感染症を及ぼすことなく肝細胞に直接結合することが既に報告されている）。重要なHBV結合部位はプレ−Ｓ１ドメインのアミノ酸21〜47内に位置していることが報告され、そしてその補助結合部位はプレ−Ｓ２ドメインのアミノ酸配列120〜145内にある。hIL−６は特異的なhIL−６−結合タンパク質(hIL−6R) 及びシグナル伝達サブユニット(gp130)から成るレセプター複合体を通じて作用することにより標的細胞（肝細胞を含む）に対してその作用を発揮する。IL−6R (sIL−6R)及びgp130(sgp130)の可溶性形態は様々な体液の中で見つかっている。 hIL−６／hIL−6R複合体は２個のgp130分子のホモ二量化を誘導し、いくつかの細胞内シグナル形成現象を招き、報告によればそれはおそらくはras−微小管会合タンパク質(MAP)キナーゼカスケード及びJak／STATシグナル形成経路の活性化を介する転写因子NF−IL−６活性化が含まれる。gp130に対するhIL−６／hIL−6 Rの複合体の結合は２個のhIL−６、２個のhIL−6Rα及び２個のgp130サブユニットから成る六量体レセプター複合体をもたらす。この複合体（hIL6に結合しているHBVを含む）は肝細胞の中に内在化され、かくして感染症を惹起すると信じられている。Ａ１，Ａ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｃ３及びＢと称する部位の任意の一つでの結合（相互作用）の妨害は本発明に従ってHBV感染症を処置及び／又は予防するであろう。従って、抗ウィルス剤の図１に示すカスケード相互作用を経て内在化するIL− ６複合体の任意の一つの成分に対する接合は感染症を抑制するために利用できる。かくして、例えば表２に挙げる下記の因子が抗HBV剤として導入されうる。図１と共に参照する以下の表２は妨害因子及び相互作用の部位／化合物に関連する。 hIL6がHBV感染症を媒介するのに作用するとの当該発見に基づき、抗ウィルス／抗−HBV剤を調製することが可能となる。hIL6と類似のアミノ酸配列を有する活性成分を含んで成るHBV感染症の処置及び／又は予防のための薬理組成物がかくして開発される。hIL6Rα（Ｒはレセプター）及び／又はhIL6Rβ(アミノ酸残基：40〜60，70〜100及び135〜175)と相互作用するhIL6ドメインはhIL6相互作用と拮抗し、HBV感染症を予防する。本発明はHBV感染症におけるhIL6の役割を初めて認識したという事実との関連で、hIL6とpS1との間、並びにhIL6と肝細胞及びその他のHBV許容細胞との間の少なくとも一の結合部位と相互作用する可溶性活性因子、例えば本明細書において列挙する活性因子の投与がhIL6媒介HBV感染症を予防できることが当業者にとって自明となる。例えば、ヌクレオシド類似体がHBVを阻害する抗ウィルス剤であることは論文で周知となっている（例えば、３TC、ファムシクロビル及びFIAU 類似体）。更に、IL6に対する因子の接合も本願出願時に当業界において周知である。例えば、天然レセプター結合ドメインをコードする領域が除去され、そしてIL −６をコードする遺伝子で置き換えられているトランケーションジフテリア毒素構造遺伝子の融合により操作されたキメラ融合毒素DAB₃₈₉−IL−６はIL−6Rを発現する細胞に対してのみ細胞毒性を発揮する〔R．Masoodら、Aids Research and Human Retroviruses，Vol.10，No.8（1994）〕。従って、DAB₃₈₉−IL−６及び類似の機能性因子が本発明において有用である。更に、hIL−６に特異的な中和モノクローナル抗体はIL−６タンパク質上の二つの異なる部位（部位Ｉ及びII）に結合することが知られている。部位ＩはIL− ６のレセプター結合部位であると報告され、一方部位IIはシグナル伝達のために重要であると報告されている。部位IIの突然変異誘発はそれ故IL−６レセプター拮抗因子の単離を供しうる。この突然変異タンパク質は不活性であり、なぜなら gp80レセプターとこの突然変異タンパク質との複合体はシグナル伝達因子gp130 と結合しないからである〔J．Brakenhoffら、J.Biological Chemistry，Vol.269 ，pp.86-93(1994)〕。かくして、hIL−６拮抗タンパク質は本発明において有用であろう。その他の研究者はhIL−６変異体を同定し、それは部位IIのみでの、又は部位I I及びIIIの双方でのgp130との相互作用を消失させる置換を担持する潜在的なサイトカインレセプター超拮抗因子として挙動する（更にそれはシグナル伝達に関与すると報告されている）〔E．Sporenoら、Blood，Vol.87，No.11；pp.4510-45 19（1996）〕。かかる因子は本発明において有用である。その他の研究者はhIL−６にしっかりと、且つ特異的に結合し、しかもサイトカイン生物活性の有効なインヒビターであるミニボディーポリペプチド（MB02）を同定している〔F．Martinら、EMBO Journal Vol.13，No.22：pp 5303-5309(1994)〕。かかる因子は本発明において有用である。更にまた、抗−IL−６ mAb又は抗−IL−6R mAbが本発明の組成物及び方法において有用であろう。抗−hIL−６ mAb（MH166）はIL−6活性を中和できることが示されている。抗−hIL−6R mAbはレセプターに対するIL−６の結合を阻害することが示されている〔Y．Mizutaniら、Cancer Research 55，590-596(1995)〕。 hIL−６又はhIL−6Rに対するモノクローナル抗体は本発明の組成物及び方法において有用であろう。 gp130及びgp80とのhIL6結合部位の分子分析はhIL6拮抗因子を担うことのできるhIL6上のいくつかの構造標的を示す。hIL6拮抗因子についての好適な標的はhI L6／hIL6RαとhIL6Rβとの複合体を破壊する。先行文献に基づき、hIL6活性に必須のいくつかのドメインを報告する：１．Lys41−ala56(部位２ａ、またの名はβ２)はシグナル伝達の活性化に関与する。２．Gly77−glu95(部位２ｃ)はhIL6Rαサブユニットgp80との相互作用に重要である。３．trp158がarg又はgln160がgluに、またthr163がproに置換されたGln153−his 165（部位β１）はhIL6の生物活性と拮抗する。４．β１とβ２hIL6突然変異体の組合せ(mhIL6β１＋β２)はXG−ｌ hIL6応答細胞に対して不活性であり、若干の拮抗活性を有する。５．mhIL6（ｍは突然変異体）β１＋β２へのphe171からleu及びser177からarg への２つの置換の付加はhIL6Rαに対する親和力を強め、しかもXG−１細胞に対するその活性を阻害する。当業者に周知の技術に基づき、本発明の薬理組成物において利用するためのタンパク質及びペプチドは例えば下記の技術及び工程により簡単に調製できる。 pGEX−2T(Pharmacia，Uppsala，Sweden，Catalogue No.27-4801-01)挿入部位に適合するBamHＩ及びEcoRＩ部位を導入するために構築したプライマーを用いての、PCRによるHBV DNA(adw2)−adw HTDを含むプラスミドからのDNAの選定のセグメントの増幅。このGST融合ベクターは、融合タンパク質が細菌リゼートから容易に精製でき、そして融合タンパク質として直接、又は部位特異的プロテアーゼによる切断を経て検出できる系を供する。pGEX−2TへのDNAの導入後、コンピテントE．コリ(E．coli)（JM109）を形質転換せしめ、そしてクローニングする（L B＋10μg／mlのアンピシリン）。タンパク質発現はIPTG(0.1mM、イソプロピル− １−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトシド)を１〜２時間加えておくことにより誘導する。融合タンパク質は溶解（音波処理）細胞からグルタチオン−アガロースビーズ (Pharmacia)上での回収により取り出し、そして還元グルタチオン（50mMのトリス−Cl、PH8.0中で５mM）を用いてビーズから溶出させる。タンパク質の同定及び決定はGSTに対する抗体の利用により、又は挿入タンパク質の特異的な認識により行ってよい。完全HBV pS1タンパク質（aa１〜aa119、センス及びアンチセンスプライマー５’−CGGGATCCATGGGAGGTTGGTCATC−３’〔NT８＋2856−2876、nt 番号の開始部位はEcoRＩ〕及び５’−GGAATTCCACTGCATGGC−３’〔nt 6-3210〕のそれぞれによるPCRを適用）並びにpS1結合部位aa21〜aa46構築体をデザインし、そしてpGEX−2T系において作った（図１の化合物Ｂ）。 gp80及びgp130のトランケーション可溶性形態はpS1の調製について記載したpGEX−2T系（化合物Ａ２及びＡ１のそれぞれ）を用いて合成する。 hIL6誘導化ペプチド(Lys41−ala56、Gly77−glu95及びGln153−his165、それぞれ図１でＣ１，Ｃ３及びＣ２と命名)はMerrifield固相合成及び誘導方法又はその他の許容されている遺伝子操作方法を含む様々な方法を適用することにより合成される。製造される化合物は線形もしくは環状ペプチド、又は巨大タンパク質の一部である。図５に記載してあるのはヒトロイキン６mRNAのヌクレオチド配列であり（SEQ ID NO １）、L．T．May，ら「Anti-beta Interferon Antibodies Inhibit the I ncreased Expression of HLA-B7 mRNA in Tumor Necrosis Factor-Treated Huma n Fibroblasts：Structural Studies of the beta-2 Interferon Involved」Pro c．Nat'l Acad．Sci．U.S.A．83(23)，8957-8960（1986）により公開されている。図６及び６ａに記載されているのはヒトインターロイキン６レセプターmRNAのヌクレオチド配列であり（SEQ ID NO ２）、K．Yamasaki，ら「Cloning and Exp ression of the Human Interleukin 6（BSF-2/ISN beta２）Receptor」Science 241(4867)，825-828(1988)により公開されている。図７に記載されているのはインターロイキン−６レセプターのヌクレオチド配列であり（SEQ ID NO３）、H．Schooltink,ら「Structural and Functional Stu dies on the Human Nepatic Interleukin-６ Receptor」Biochem．J．277：659- 664(1991)により公開されている。図８及び８ａに記載されているのはgp130インターロイキン６レセプターのヌクレオチド配列であり（SEQ ID NO４）、Hibi,ら「Molecular Cloning and Expr ession of an IL-6 Signal Transduce r，gp130」Cell 63(6)，1149-1157（1990）により公開されている。図９に記載されているのはヒトインターロイキン６レセプターアルファー（IL −6Rアルファー）のヌクレオチド配列であり（SEQ ID NO５）、K．Yamasaki,ら「Cloning and Expression of the Human Interleukin 6（BSF-2/ISN beta 2）R eceptor」Science 241(4867)，825-828(1988)により公開されている。本発明に係る組成物は経口又は非経口的に、例えば静脈内、腹腔内、鼻内及び皮下投与で投与してよい。化合物の移植も有用である。本発明のタンパク質は良好な医療行為に従いその他の薬剤と組合せて、又は単独で投与する。この組成物は個々の患者の臨床的状況、投与の部位及び方法、投与のスケジュール、及び医師に公知のその他の要因を考慮して、良好な医療行為に従って投与及び服用する。本発明における目的のための「有効量」はかくして当業界において公知のかかる考慮により決定される。当該組成物を非経口投与する場合、注射のためと適当な薬理製剤には無菌水性溶液又は分散体、及び無菌注射溶液又は分散体の中に再構築するための無菌粉末が挙げられる。担体は溶媒又は分散媒体であってよく、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、その適当な混合物、及び植物油が挙げられうる。適正な流動性は例えばレシチンの如きコーティングの利用により、分散体の場合には必要たる粒径の維持により、及び界面活性剤の利用により維持できうる。非水性ビヒクル、例えば綿実油、ごま油、オリーブ油、ダイズ油、コーン油、ヒマワリ油、又はピーナッツ油、及びエステル、例えばミリスチン酸イソプロピルも組成物の配合のための溶媒系として使用してよい。更に、組成物の安定性、無菌性及び等張性を高める様々な添加剤、例えば抗微生物保存剤、酸化防止剤、キレート剤及び緩衝剤を加えてよい。微生物の作用の防止は様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等により確保されうる。多くの場合、等張剤、例えば糖、塩化ナトリウム等を含ませることが所望されるであろう。注射用薬理形態の遅延式吸収は吸収を遅らせる試薬、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの利用により供されうる。しかしながら本発明に従い、使用する任意のビヒクル、希釈剤、又は添加剤は当該化合物と適合するものであろう。無菌注射用溶液は本発明の実施において用いる当該タンパク質を所望に従い様々なその他の成分と共に必要量の適当な溶媒の中に含ませることにより調製できる。本明細書に記載の薬理製剤は任意の適合性担体、例えば様々なビヒクル、アジュバント、添加剤及び希釈剤を含む注射用製剤において患者に投与してよく、又は本発明において利用する化合物は徐放皮下移植体の形態で又はターゲッティングデリバリーシステム、例えばポリマーマトリックス、リポソーム及びマイクロスフィアとして患者に非経口式に投与してよい。本発明における使用に適当な移植体は移植されるとゆっくり溶け出すペレットの形態にしてよく、又は当業者に周知の生体適合性デリバリーモジュールにしてよい。かかる周知の投与形態及びモジュールは活性成分が数日から数週間かけて徐放されるように設計する。本発明において有用な周知の移植体及びモジュールの例には、医薬品を制御された速度で分注する移植用マイクロ点滴ポンプを開示する米国特許第4,487,603 号；皮膚を通じて医薬品を投与するための治療器具を開示する米国特許第4,486, 194号；正確な点滴速度で医薬品を送出するための医薬品点滴ポンプを開示する米国特許第4,447,233号；連続薬剤送出のための可変式フロー移植用点滴装置を開示する米国特許第4,439, 196号；及び浸透圧薬剤デリバリーシステムを開示する米国特許第4,475,196号が挙げられる。これらの特許は引用することで本明細書に組入れる。数多くのその他の移植体、デリバリーシステム、及びモジュールが当業者に周知である。本発明の薬理製剤は患者に経口投与してよい。慣用の方法、例えば錠剤、懸濁物、溶液、エマルション、カプセル、粉末、シロップ等での当該化合物の投与が有用である。新規の組成物を経口又は静脈輸送し、しかも生物活性を保持する既知の技術が好ましい。一の態様において、この新規の組成物は静脈注射によりまず投与してよい。投与する可溶性活性因子の量は肝細胞のHBV感染症を処置するのに必要な量とする。この有効な量は処置すべき患者及び使用する特定の因子により変動し、そして１日当り体重１kgにつき約100ng〜100mg、そして好ましくは１日当り10μｇ／kg 〜10mg／kgであろう。本発明の教示に基づき、上記の部位の少なくとも一つに競合的に相互作用又は結合するのに必要な様々な成分の濃度は当業者により容易に決定でき、そして特に本発明の発明日の前に有用な関連情報、例えばCancer Research 55；pp 590-5 96（1995）；EMBO Journal Vol.13，No.22：pp.5303-5309（1994）；J．Exp．Me d．Volume 183；pp.1399-1406（1996）；及びBlood，Vol87，No.11；pp.4510-45 19(1996)の公開物により容易に決定される。実施例ヒト肝臓組織を、肝臓組織の中に陽性HBV DNAをもつ10⁷〜10⁹粒子／mlのHBVウィルス血症を患う肝臓病のための肝臓手術を受けている患者から採取した。この肝臓組織をキメラ動物の腎包の下に移植した。HBsAgは予備感染させたHBV DNA陽性／HBeAg陽性移植組織の中では容易に検出されたが（図２）、肝臓断片移植をして１〜３ヶ月してもHBV配列はどの実験においてもPCR（ウィルコスコア領域及びエンベロープ領域をまたぐプライマーをHBsAgのａ決定基において適用）により検出できなかった。更に、正常ヒト肝臓断片を移植してからの200μｌの高力価HBV粒子（＞10⁸／ml）の静脈内又は腹膣内（i.p.）注射はその30日後にわたりHBV DNA配列を構築しなかった（データーは示さない）。ドットブロットハイブリダイゼーションによりHBV DNAが陽性であるリンパ球をリンパ泳動(lymphopheresis)(Baxter Fenwell CS-3000 Pulse Blood Cell Sep arators，Deerfield，Illinois，U.S.A)により、血清がHBV DNA及びHBeAgについて陽性であるHBV関連慢性肝臓病患者から分離した。４千万個のHBV DNA陽性リンパ球を各マウスに、腎臓の被膜下部位での正常ヒト肝臓の移植後にi.p.注射した。HBV配列はその後21日間にわたりこれらの動物の血清において検出されなかった。 HBVについての一次感染部位を肝細胞としたにもかかわらず、リンパ球及び内皮細胞は共にHBV転写物及びウィルス関連タンパク質を担持することが示され〔J .Romet-Lemonne,らScience，Vol.221，pp.667-669(1983)；H.Blum，ら、Proc.Na tl.Acad.Sci.U.S.A ，Vol.80，pp.6685-6688（1983）；E Galun,らAmerican Jour nal of Pathology ，Vol.145,pp.1001-1007（1994）〕ウィルス侵入を助ける共通の特異的な細胞膜レセプターメカニズムが示唆された。このメカニズムは、それらがトランスフェクションによるHBV被覆を許容するにもかかわらず、レセプター陰性細胞の感染を阻止するであろう〔E.Galunら、Journal of General Virolo gy ，Vol.73，pp.173-178(1992)〕。HBVを天然に宿している三種の一次細胞タイプ、即ち、肝細胞、リンパ球及び内皮細胞は全てその細胞膜上で発現するヒトIL6レセプター(hIL6R)を介してhIL6に応答する〔A.Mackiewicz，らThe Journal of Immu nology ，Vol.149，pp.2021-2027(1992)，J.Bauer,らFEBS Letter，Vol.249，pp. 27-30(1989)；T.Kishimoto,らScience，Vol.258，p.593（1992）〕。更に、前述の通り、hIL6はpS1を介してHBVに結合する。 HBV関連マーカー又は病気を全く示していない患者由来の正常ヒト肝臓の断片を、キメラ動物の腎包の下に移植する前に高力価HBV DNA陽性血清とex-vivoインキュベーションした。HBV DNA配列は移植して一ヶ月にわたりこれらのどの動物においてもPCRにより２種類のゲノム領域から検出されなかった。結果を図３Ａに示す。これらの結果は、４種類のHBV DNA陽性血清を利用する50匹のマウスでの追加の実験において再現された。しかしながら、同じ患者に由来する肝臓組織をhIL6と共に上記のHBV DNA陽性血清とex-vivoでインキュベーションすると、移植を施した動物の約50％の血清において16日〜31日目にHBV DNA配列が検出された。これらの結果を図３Ｂに示す。似たような結果が様々な起源に由来する更なるHBV DNA血清及び肝臓組織を利用する上記の条件下で行う実験において得られた。これらの実験において、HBV DNA配列は移植して60日まで検出できた（結果は示さない）。 HBVとのex-vivoでのインキュベーション前でのhIL6に対する肝臓組織の事前曝露は感染症を約90％の動物にまで上昇させた。31日目の血清においてHBV配列が陽性な動物は、図３Ｄに示すように、移植肝細胞においてもHBsAgについて陽性であった。上記の条件下でHBVとex-vivoインキュベーションし、且つ移植前に免疫組織化学分析のために固定しておいた肝臓断片はHBsAgについて陰性であった（結果は示さず）。 HBV感染症を支持するうえでのhIL6の役割を更に調べるため、ヒト肝芽腫細胞系、HepG2（ATCC HB8065）、HepG2由来の安定的にトランスフェクションされたh IL6R細胞系、HepG2-PD1と呼ばれるヌルhIL6R（hILR6を発現しない細胞系）及びH epG2-hIL6と呼ばれるhIL6産生系〔S.Rose-Johnら、The Journal of Biological Chemistry ，Vol.268，pp.22084-22091（1993）〕をhIL6を伴って又は伴わないで HBV DNA陽性血清とインキュベーションした。インキュベーション後、様々な混合物をキメラマウスに脾内注射し、図４に示すように肝臓の中にHCCフォーカスを構築させた。これらの実験の結果を表３にまとめる。本実験において、４種類の独立の細胞系を調製した。この４種類の独立の細胞系を表３において左から右に列挙する。第一の細胞系はヒトインターロイキン６レセプター（「hIL6R」）を発現するヒト肝芽腫細胞系、（HepG2）を含む。第二の細胞系HepG2-PDIはhIL6Rを発現しない。第三の細胞系HepG2はhIL6を産生しない。HepG2-hIL6として知られる第四の細胞系はhIL6を産生しない。これらの細胞系を２組のHBV陽性DNA血清とインキュベーションし、一組目は hIL6を有し、表１に「＋」として示し、他方の組はhIL6を有さず、そして「−」で示す。これらの細胞系をキメラマウスに脾内注射した。その結果は、HBV-DNA がhIL6を有するDNAをもつ４種の細胞系を有するマウスにおいて検出されることを示した。DNA hIL6とインキュベーションしたこれらの細胞系において、HBV-DN Aは細胞系HepG2及びHepG2 hIL6を注射したマウスにおいてのみ存在していた。He pG2 hIL6細胞系はhIL6を発現する。表３に示す結果はHBV感染症とHBVウィルスエンベロープのプレＳ１ペプチド領域、gp80及びgp130レセプター部位、並びにヒトインターロイキン６（「hIL6」）との間での関係を樹立し、そしてHBVがhIL6により媒介されることを樹立する。方法：細胞系は全て10％の胎児牛血清に富むDMEM培地の添加されたＴ25フラスコの中で増殖させた。感染実験のため、細胞をトリプシン処理し、そしてPBSで２回洗い、次いで１〜２mlのDMEMの中でhIL6(500ng／ml)の存在下又は非存在下でHBV陽性ヒト血清（10⁸ビリオン／ml）とインキュベーションした。37℃で２〜４ｈのインキュベーション後、４×10⁶細胞／mlを0.5ml／マウスで各グループにつき8 〜10匹のSCID＞BNXマウスに脾内注射した。動物を注射の後に脾臓切除にかけた。マウスを３ヶ月にわたり２週間毎に採血し、そしてDNAを100μｌの血清から抽出した。DNAをPCR増幅にかけた。適用したDNA抽出及びPCR法は図３の備考に記載されている。表３は３回の実験をまとめる。 hIL6の存在下でのHBVとのインキュベーションを経たHepG2-hIL6R細胞（これは HepG2細胞よりも約１Log高いレセプター発現率をもつ）で移植されたマウスにおいて、HBV-DNA配列は移植して13日後の血清の中で検出でき、一方HBV配列はhIL6の存在なしで同じ手順を経たマウスの血清においては検出されなかった。似たような結果がHepG2-PDI細胞を用いる実験において得られた。これらの細胞はその細胞膜上にhIL6Rのgp80結合タンパク質サブユニットは発現せず〔S.Rose-Johnら前掲；M.Ehlersら、The Journal of Immunology ，Vol.153，p.1744（1994）〕、しかしながらhIL6の効率的な内在化にとって必須であるレセプターのシグナル伝達gp130を発現する〔E.Dittric hら、The Journal of Biological Chemistry，Vol.269，pp.10914-19020（1994 ）〕。 hIL6の存在下そして更には非存在下でHepG2細胞を用いる同じデザインの実験において、HBV配列は数多くのマウス血清において検出できる。これらの結果はP etitら〔R.Bchiniら、前掲〕により既に報告されているものと似ており、HBV DN A陽性患者から採取した全部で55種類の血清サンプルのうち、わずか３種の血清がHepG2細胞in vitro HBV感染を支持する低い再現性を示した。hIL6を産生するH epG2-hIL6細胞系はhIL6の外的補給を伴って又は伴わないウィルスとのインキュベーションを経てマウス血清においてHBV配列を構造した。肝臓フラグメントを市販のヒトポリクローナル抗HBsウィルス中和抗体（HBIG ，Hepatect（登録商標）Biotest Pharma GmbH，Dreieich，Germany）の存在下で HBV-DNA陽性血清とインキュベーションすると、HBV-DNAは、未処置のマウスグループの78％（14／18）と比べ、マウスのわずか48％（10／21）において移植後11 日目に観察された（表４）。方法：抗体処置のため、HBV-DNA陽性血清(0.5ml)を100IVのHBIGと25℃で２時間インキュベーションした。ヒト肝臓断片を次に上記と同じプロトコールに従って未処置又はHBIG処置HBV-DNA陽性血清に加え、次いでキメラ動物の腎包の下に移植した。マウス血清を移植の11日後にHBV-DNA配列の存在について分析した。図面を再び参照すると、図２はHBsAgで染色したSCID＞BNXキメラマウスにおける被膜下移植の１ヶ月後のHBV DNA陽性患者由来の予備感染肝臓断片を示す。図３から、hIL6はヒト組織の移植されたSCID＞BNXキメラマウスにおいてHBVウィルス血症を媒介することがわかる。正常ヒト肝臓断片を被膜下腎臓移植して16 及び31日後でのマウス血清からDNA抽出したHBVプレコア／コア領域のPCR増幅産物。ヒト肝臓断片を移植前にex-vivoで、ヒトHBV陽性血清（図３Ａ）とインキュベーションする、同時にHBV血清及びhIL6（図３Ｂ）とインキュベーションする、又はhIL6と予備インキュベーションし、その後HBV血清とインキュベーションした（図３Ｃ）。図３Ａ〜３Ｃのそれぞれにおいて、上パネルはEtBr染色であり、そして下パネルは同じゲルの³²P HBV線形インサートハイブリダイゼーション結果である。分子マーカーサイズ（ｍ）は矢印で示し；各パネルの頭にある数字はマウス同定数を示し；＋は陽性血清コントロール、そして一は陰性血清コントロールを示す。図３ＤはSCID＞BNXマウスの腎包の下での移植の１ヶ月後のhI16との正常肝臓断片のex vivo HBVインキュベーションのHBsAg染色を示す。約10⁸ビリオン／mlを包むHBV陽性患者由来の血清を感染のために用いた。正常ヒト肝臓の小断片を37℃で２〜４ｈインキュベーションしたhIL6(500ng／ml)の非存在下（グループＡ）又は存在下（グループＢ）での２μｇ／mlのポリブレンの添加された１mlのDMEM中の400μｌの血清とインキュベーションした。グループＣでは、HBV陽性血清及びポリブレンの添加の前に肝臓断片をhIL6で37℃で２ｈ処理した。インキュベーション後、４〜５mlのポリブレンDMEMを加え、そして肝臓断片をグループＡ、及びＣのSCID＞BNXキメラマウスに腎包の下にて移植した（それぞれ10，19及び11匹のマウス）。４ヶ月にわたり２週間毎に、各マウスから血液を延髄後採取した。100μｌの血清サンプルを10mlのEDTA及び0.25％のS DSの中で0.5mg／mlのプロテイナーゼＫにより55℃で２ｈ又は37℃で一夜かけて処理し、フェノールで２回抽出し、フェノール−CHCl₃で１回抽出し、そしてCHC l₃で１回抽出した。DNAを0.5ＭのNaCl及びDNAマイクロキャリヤーを用いてエタノールで沈殿させた。DNAを30μｌのトリス−EDTA，pH8.0に溶かし、そしてPCR 増幅にかけた。 50μｌのPCR反応容量は反応バッファー（10mMのトリス−HCl，pH8.3，50mMのK Cl，2.0mMのMgCl₂，0.01％のゼラチン（ｗ／ｖ），250μＭのATP，dGTP，dCTP， dTTP及び0.5μのTaqポリメラーゼ）中10pmdeずつのオリゴヌクレオチドプライマーを含む。この反応混合物に30μｌの鉱物油をかぶせた。PCRサイクルは94℃で１分、55℃で１分及び72℃で３分の35反復サイクルを含んだ。10μｌの反応混合物を２％のアガロースゲル上で分析した。プレコア／コア増幅のために用いたオリゴヌクレオチドは：オリゴ１，センス(nt 1778〜1806)： 5’GGA−GGC−TGT−AGG−CAT−AAA−TTG−GTC−TGC−GC−3’オリゴ２，アンチセンス(nt 2446〜2408)： 5’CCC-GAG-ATT-GAG-ATC-TTC-TGC-GAC-GCG-GCG-ATT-GAG-ACC-3’ とした。配列はadwサブタイプに由来する。ntはEcoRI部位から出発する。PCR DNA産物の予想サイズは668bpである。このPCRサンプルを２％のアガロースゲル上で電気泳動し、そしてナイロン膜（Biodynen）に転写し、ニックトランスレーションプローブとハイブリダイゼーションさせた。そのオートラジオグラフィーを増強スクリーンに−70℃で７時間曝露した。PCRの結果を確認するため、マウス血清サンプルをエンベロープ遺伝子領域をまたぐプライマーによるPCR増幅にもかけ、同じ結果が示された（データーは示さない）。再現性のある結果が４通りの類似の実験から得られ、そこでは各グループにつき10〜20匹のマウスとした。本発明を詳細に説明してきたが、本発明は実施例等の特定の態様に限定されることはない。当業者は本発明の範囲から逸脱することなく様々な改良を本明細書に開示の態様に施すことができるであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．肝細胞のＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物であって、ヒトインターロイキン６（hIL6）と肝細胞との間の少なくとも一の結合部位と競合的に相互作用する可溶性活性因子を含んで成り、ここで当該可溶性活性因子はhIL6と相互作用するレセプター部位を有する糖タンパク質80（gp80），hIL6 と相互作用するレセプター部位を有する可溶性糖タンパク質130(gp130)，hIL6誘導化ペプチドLYS41-ALA56，hIL6誘導化ペプチドGLY77-GLU95，hIL6誘導化ペプチドGLN153-HIS165、１及び２hIL6突然変異体の組合せ（mhIL6 １＋２）、並びにp he 171がleu、そしてser 177がargに置換されたmhIL6 １＋２、並びに任意のこれらの混合物から成る群より選ばれる、当該薬理組成物。２．hIL6RとのhIL6／hIL6R複合体を破壊する可溶性活性因子を含んで成る、肝細胞のＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物。３．肝細胞のＢ型肝炎ウィルス(HBV)感染症の処置のための薬理組成物であって、hIL6と相互作用するレセプター部位を有する糖タンパク質80（gp80），hIL6 と相互作用するレセプター部位を有する可溶性糖タンパク質130(gp130)，hIL6誘導化ペプチドLYS41-ALA56，hIL誘導化ペプチドGLY77-GLU95，hIL6誘導化ペプチドGLN153-HIS165、１及び２hIL6突然体の組合せ(mhIL6 １＋２)，phe 171がleu 、そしてser 177がargに置換されたmhIL6 １＋２，hIL6RとのhIL6／hIL6R複合体を破壊する可溶性活性因子、並びに任意のこれらの混合物から成る群より選ばれる可溶性活性因子を含んで成る、当該薬理組成物。４．前記可溶性活性因子が患者の体重に基づき、約100ng／kg〜約100mg／kg、好ましくは約10ｇ／kg〜約10mg／kgの量に含まれている、請求項１記載の薬理組成物。５．注射のための薬理学的に許容される担体を更に含んで成る、請求項１〜４のいずれか１項記載の薬理組成物。６．HBVによる肝細胞の感染症の処置のためのヒトインターロイキン６（hIL6 ）と肝細胞との相互作用を阻害する可溶性活性因子の利用。７．前記可溶性活性因子が少なくとも一の結合部位と競合的に相互作用する請求項６記載の可溶性活性因子の利用。８．前記可溶性活性因子がhIL6と結合するレセプター部位を有し、且つhIL6と肝細胞との相互作用を競合的に阻害する可溶性糖タンパク質80（gp80）及び／又は可溶性糖タンパク質130(gp130)を含んで成る、請求項７記載の可溶性活性因子の利用。９．前記可溶性活性因子がhIL6RとのhIL6／hIL6R複合体を破壊する、請求項７記載の可溶性活性因子の利用。 10．前記可溶性活性因子がhIL6誘導化ペプチドLYS4l-ALA56，hIL6誘導化ペプチドGLY77-GLU95，hIL6誘導化ペプチドGLN153-HIS165、１及び２hIL6突然変異体の組合せ(mhIL6 １＋２),並びにphe 171がleu、そしてser 177がargに置換されたmhIL6 １＋２、並びに任意のこれらの混合物から成る群より選ばれる、請求項７記載の可溶性活性因子の利用。 11．前記可溶性活性因子が、HBVを阻害するhIL-6と接合した抗ウィルス剤；IL -6Rで発現する細胞に対してのみ細胞毒性を発揮する毒素；IL-6タンパク質上の部位Ｉ又は部位IIのいずれかに結合し、且つサイトカイン生物活性の有効なインヒビターであるhIL-6に特異的なモノクローナル抗体；抗−IL-6R mAb、並びに任意のこれらの混合物を含んで成る、請求項６記載の可溶性活性因子の利用。 12．前記可溶性活性因子が患者の体重に基づき約100ng／kg〜約100mg／kg／日の量、好ましくは約10g／kg〜約10mg／kgの量で投与される、請求項６〜10のいずれか１項記載の可溶性活性因子の利用。 13．HBVによる肝細胞の感染症の処置のための方法であって、ヒトインターロイキン６（hIL6）と肝細胞との相互作用を阻害する可溶性活性因子をヒト患者に投与することを含んで成る方法。