JP2001507789A

JP2001507789A - 流体メジウム中の一酸化窒素の検出方法

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Publication number: JP2001507789A
Application number: JP52146698A
Authority: JP
Inventors: ライ，チン―サン
Original assignee: メデイノックス，インコーポレイテッド; エムシーダブリュリサーチファウンデイション，インコーポレイテッド
Priority date: 1996-11-08
Filing date: 1997-10-20
Publication date: 2001-06-12
Also published as: KR20000053120A; WO1998020336A1; CN1258354A; EP1012597A4; CA2271195A1; AU722709B2; US5885842A; US6306609B1; AU4826597A; EP1012597A1

Abstract

(57)【要約】本発明によれば、様々な流体メジウム中におけるＮＯレベルの測定のための非侵襲的な方法が開発された。本発明は、バッグ内に拡散されたＮＯを捕獲するための一酸化窒素反応物質を含有する半透過性膜のバッグの使用を包含する。選択された膜が一酸化窒素に対しては透過性を示すが、硝酸塩／亜硝酸塩は透過しないことから、本発明の実施にあたり使用される半透過性膜のバッグは、強力に競合する種たとえば硝酸塩／亜硝酸塩の存在下にも、ＮＯの選択的な収集を可能にする。流体メジウム中のＮＯレベルを測定するための本発明の単純な、容易な、非侵襲的な方法には、たとえば多くの炎症性および感染性疾患に関連するＮＯの過剰産生または過少産生の診断およびモニタリングに様々な用途が見出される。

Description

【発明の詳細な説明】流体メジウム中の一酸化窒素の検出方法発明の分野本発明は、流体メジウムたとえば哺乳動物の体液中の一酸化窒素の検出方法、ならびにそのために有用な用具および試薬に関する。一態様においては、本発明は体液中の一酸化窒素の検出のための非侵襲的方法に関する。他の態様においては、本発明は各種流体メジウム中の一酸化窒素の収集および検出のための用具に関する。さらに他の態様においては、本発明は、患者における一酸化窒素の産生過少または産生過剰をモニターする方法に関する。発明の背景気体性の遊離ラジカルである一酸化窒素（ＮＯ）はかって、主として車の排気物ならびに都市のスモッグおよび煙草の煙からの環境汚染物質として考えられていた。一酸化窒素に対するこの考え方は、ＮＯがヒトにおいて産生されることが発見された1987年に変化した（たとえばIgnarroら、Proc.Natl.Acad.Sci．USA 8 4:9265-69，1987およびNature，327:524-26，1987参照）。最初に内皮由来の弛緩因子として同定されたＮＯは現在、多くの哺乳動物細胞および組織の機能を調節する新しい種類の細胞シグナリング分子として認識されるに至っている。ＮＯは、一酸化窒素シンターゼ酵素（ＮＯＳ；たとえば、Rodenbergら、Am.J. Surg．170:292-303，1995およびBredt & Snyder，Ann.Rev.Biochem．63:175-95 ，1994参照）により触媒されるＬ-アルギニンの酵素的切断で発生する。このＮＯＳには３種の異なるアイソフォームが単離され、クローン化され、配列決定され、発現された。すなわち、内皮由来の一酸化窒素シンターゼ（ｅＮＯＳ）、神経細胞由来の一酸化窒素シンターゼ（ｎＮＯＳ）および誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）である。ｅＮＯＳおよびｎＮＯＳアイソフォームは構造的に発現し、両酵素は活性化に細胞内カルシウムの上昇を要求する。生理学的条件下には、内皮細胞およびニューロンを含めて多くの細胞内に存在するｎＮＯＳアイソフォームによって低産生量のＮＯが連続的に産生される。この低レベルの一酸化窒素は多様な調節過程たとえば血管ホメオスターシス、神経の伝達および免疫系機能に関与する。他方、病態生理学的条件では、内皮細胞、平滑筋細胞およびマクロファージを包含する多くの細胞タイプでサイトカインまたはエンドトキシンによる活性化によって発現する誘導性、カルシウム非依存性ＮＯＳアイソフォーム（ｉＮＯＳ）によって、高産生量のＮＯが産生される。これらの高レベルの一酸化窒素の産生（サイトカイン活性化マクロファージによる）は一部、これらの細胞の細菌または腫瘍細胞の殺滅能力に寄与し、したがって宿主の防御に重要な役割を果たす。過剰のＮＯは侵襲微生物の破壊を助けるものの、しかしながら内皮細胞、平滑筋細胞、マクロファージおよび肝細胞を包含する多くのタイプのサイトカイン活性化細胞によるＮＯの全身的な過剰産生は、多様な炎症性および感染性疾患および状態、たとえば、組織傷害、ショック、多重臓器不全および死を招くことがあるカスケード現象を誘発する可能性がある。実際に最近、異常な高レベルの一酸化窒素が、多くの炎症性および感染性疾患および状態たとえば敗血症ショック、サイトカインの過剰産生、糖尿病、同種移植片拒絶反応、非特異性炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、卒中、多発性硬化症等に関連づけられてきた。同様に、不十分な量の一酸化窒素の産生も多様な疾患状態、たとえば、新生児持続性肺高血圧症、子癇前症、成人呼吸窮迫症候群、血管形成後狭窄、インポテンツ等を生じることがある。一酸化窒素は強力な血管弛緩剤である（たとえば、Palmer，Arch.Surg．128:3 96-401，1993およびRadomski & Moncada，Thromb．Haemos．70:36-41，1993参照）。たとえば、内皮によって産生されたＮＯは、血中では、すべての方向に等方性に、隣接する組織に拡散する。ＮＯが血管平滑筋に拡散されると、それはｃＧＭＰの産生を触媒するグアニレートシクラーゼ酵素に結合し、血管の拡張を誘発する（たとえば、Ignarro，L．J.，Ann.Rev.Toxicol．30:535-560，1990;Moncad a，S.，Acta Physiol.Scand．145:201-227，1992;およびLowenstein & Snyder， Cell 70:705-707，1992参照）。一酸化窒素の過剰産生は、血圧の著しい低下を引き起こし、不十分な組織漕流および臓器不全、多くの疾患および／または状態を伴う症状（たとえば、敗血症ショック、卒中、サイトカインの過剰発現、同種移植片拒絶反応等）を生じる。一酸化窒素の過剰産生は、多くの刺激、たとえば炎症性サイトカインの過剰産生（たとえば、インターロイキン-1、インターフェロン、エンドトキシン等の過剰産生）によって誘発される。さらに、ＮＯの過剰産生はサイトカイン療法の主要な副作用の一つであることも見出されている（たとえば、Milesら、Eur.J.Clin. Invest．24:287-290，1994;Hibbsら、J.Clin.Invest．89:867-877，1992参照）。すなわち、異常に上昇した一酸化窒素レベルは多くの炎症性および感染性疾患に関連している。インビボにおけるＮＯの半減期は３〜５秒にすぎず、この短い寿命がその検出および定量をきわめて困難にしている。水溶液中のＮＯレベルを測定するための数種の生物物理学的技術が開発されている。これらには、化学ルミネッセンスアッセイ（たとえば、Downesら、Analyst 101:742-748，1976参照）、オキシヘモグロビンアッセイ（たとえば、Kelm & Schrader，Circ.Res．66:1561-1575，199 0参照）、ＧＣ-ＭＳ検出（たとえばPalmerら、Nature（London）327:524-526，1 987参照）、および液体窒素温度での電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）スペクトルによって検出されるニトロシル−ヘモグロビン形成（たとえば、Lancasterら、Proc. Natl.Acad.Sci．USA 87:1223-1227，1990参照）が包含される。ＮＯの産生はまた、その最終産物であるＮＯ₂ ^-/ＮＯ₃ ^-を測定することによって間接的に検出することもできる（たとえばPalmerら、前出参照）。これらの方法はいずれも、現在の形態では、ＮＯ産生のインビボ検出には使用できない。最近、健康なヒトのボランティアの血管におけるＮＯを検出するための非侵襲的電気化学マイクロセンサーが報告された（たとえば、Vallanceら、Lancet 346:153 -154，1995)。ジチオカルバメートは、低分子量含硫化合物のクラスに属する効果的なキレーターである（たとえばShinobuら、Acta Pharmacol．et Toxicol．54:189-194,19 84参照）。たとえばジエチルジチオカルバメート（ＤＥＴＣ）はニッケル中毒の処置に臨床的に用いられている。最近、Ｎ-メチル-Ｄ-グルカミンジチオカルバメート（ＭＧＤ）が第二鉄と2:1で［(ＭＧＤ)₂-Fe］錯体としてキレート化し、一方これはＮＯと強力に相互作用して水溶液中で安定な水溶性の錯体、すなわち［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］を形成することが見出された（たとえば、L ai & Komarov，FEBS Lett．345:120-124，1994参照）。後者の錯体はニトロシル -Fe-ジチオカルバメート錯体に特徴的なｇ_iso＝2.04の鋭い三重線スペクトルを生じ、これは常温でＥＰＲスペクトロスコピーによって容易に検出することができる。リアルタイムで体液中のＮＯを検出するこの方法は最近、Laiによる米国特許第5,358,703号に記載された。しかしながら依然として、本技術分野には、流体メジウムたとえば哺乳動物の体液中の一酸化窒素のさらに迅速な、好ましくは非侵襲性の検出方法の必要性がある。発明の簡単な説明本発明によれば多様な流体メジウムたとえば哺乳動物の体液中のＮＯレベルを測定するための非侵襲的な方法が開発された。本発明は一酸化窒素と反応する物質（たとえば[(ＭＧＤ)₂-Fe]）を含有する半透過性膜のバッグのそのバッグ中に拡散するＮＯを捕獲するための使用およびバッグ中の［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］または他の最終産物のレベルを測定する単純な物理的または化学的検出方法を包含する。ＮＯは中性の気体分子であり、広範囲の生物適合性ポリマーの膜たとえばポリジアルキルシロキサン（シリコンゴム）、ポリイソプレンおよびポリブタジエンを通過し自由に拡散することができる（たとえばRobb，Ann.N.Y.Acad.Sciences 146:119-137，1968参照）。ポリマー膜中とくにシリコン膜は、水溶液中において、一酸化窒素ならびに他の中性気体分子たとえば酸素および二酸化炭素に対して高い透過性を発揮するが、荷電分子たとえば硝酸イオン（ＮＯ₃ ^-）または亜硝酸イオン（ＮＯ₂ ^-）に対しては透過性を示さない（たとえばTamirら、Chem.Res. Toxicol．6:895-899，1993参照）。後者の２種の化合物、硝酸塩および亜硝酸塩は体液たとえば唾液、血液および尿中に普遍的に存在し、標準的ＮＯレベルの測定を妨害することが多い。一酸化窒素には高い透過性を示すが、硝酸塩／亜硝酸塩は透過しないユニークな性質は、本発明の実施に際して用いられる半透過性膜のバッグの設計に優れた選択を提供する。以前にヒト唾液中でＮＯは検出可能である旨報告されていたが、唾液中のＮＯレベルはグリース反応を用いて硝酸塩／亜硝酸塩を測定することによって評価された（たとえばBodis & Haregewoin，Biochem.Biophys.Res.Commun．194:347-35 0,1993）。ヒト唾液が高レベルの硝酸塩／亜硝酸塩を含有し、これは個体間で彼らの健康状態、食餌および他の因子により変動することはよく知られていることから（たとえばTannenbaumら、Fd.Cosmet.Toxicol．14:549-552，1976参照）、そのため、唾液中の硝酸塩／亜硝酸塩レベルの測定値をヒト唾液中のＮＯレベルの測定値に外挿することはできない。これに反して、本発明によれば、ＮＯを自由に透過する（ただし硝酸塩／亜硝酸塩は透過しない）半透過性膜を含有する容器の使用により、硝酸塩／亜硝酸塩のような夾雑物が本発明の容器中に侵入することは防止され、それによって唾液中ならびに他の体液および液体メジウム中の標準ＮＯレベルの測定が可能になる。臨床診断的使用のためには、たとえば、適当なＮＯ捕獲物質を含有する本発明の容器は患者の舌の下部に配置するのが便利であり、または外科的に皮下に導入することができる。容器内に含まれるＮＯ捕獲物質を適当な時間ＮＯ含有メジウムに暴露し、メジウム中に含有されるＮＯを捕獲し、ついでエキソビボで測定が行われる。液体メジウム中のＮＯレベルの測定のための本発明の単純で、容易な非侵襲的方法には様々な用途、たとえば、多くの炎症性および感染性疾患に伴うＮＯの過剰産生（および産生過少）の診断およびモニタリングが見出される。図面の簡単な説明図１は［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］錯体の22℃におけるＥＰＲスペクトルを示す。シリコン膜バッグ（寸法：2cm×2cm×0.025cm）には同側にシリコンチューブ（長さ：4mm、外径：3mm、内径：1mm）で作成された２個の開口部を有し、20ｍＭのＭＧＤおよび4ｍＭの硫酸第一鉄を含有する0.5mlの水溶液を満たした。図１Ａは、バッグをヒトボランティアの舌の下に１時間置き、ついでその内容物のＮＯの取り込みについて分析した結果を提供する。図１Ｂは、バッグを実験室のベンチ上に１時間放置したのち、ついでその内容物のＮＯの取り込みについて分析した結果を提供する。図１Ｃは、バッグを１ｍＭの亜硝酸塩50mlを含む100-mlのビーカー中に１時間浸漬したのち、ついでその内容物のＮＯの取り込みについて分析した結果を提供する。それぞれ図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃと表示したスペクトルは、Ｘ-バンドのマイクロ波ブリッジおよびＴＥ102空洞部を装着し、9.5ＧＨｚで操作したたＥＰＲスペクトロメーターにより記録した。１時間後、室温でのＥＰＲの測定のためにサンプルを石英ＥＰＲフラッドセルに移した。装置のセッティングは、走査範囲20 0Ｇ、時間定数0.5秒、修飾増幅2.5Ｇ、修飾振動数100kHz、マイクロ波電力100ｍＷとする。図２は亜硝酸塩レベルと蛍光強度の間の直線関係を例示する。0.62ＮのHCl中0 .2mg/ml濃度の2,3-ジアミノナフタレン（ＤＡＮ）のアリコートを、範囲０〜１ μＭの様々な濃度の亜硝酸塩水溶液の系列滴定に添加した。反応は22℃で30分間進行させ、ついで１Ｎ NaOH溶液のアリコートを加えて停止させた。サンプルの蛍光強度は蛍光検出法（Fluoro-Tech 2001Ａ型）を用いて測定した。装置のセッティングは、感度100、高ダンピング、電圧450Ｖとした。発明の詳細な説明本発明によれば、流体メジウム中の一酸化窒素の検出方法が提供される。本発明の方法は、流体メジウムを、容器内に実質的に含有される一酸化窒素捕獲剤からなる用具と接触させ、この場合、容器の内容は半透過性の膜を介して液体メジウムと連結し、上記接触は一酸化窒素を半透過性の膜を通過して流体メジウム中に拡散させるのに適当な条件下に行い、ついで一酸化窒素捕獲剤によって捕獲された一酸化窒素の量を測定することから構成される。本発明の他の実施態様によれば、一酸化窒素の過剰産生を包含する疾患状態または条件を検出する方法を提供する。このような方法は、上述のような疾患状態に冒されているおそれのある患者からの流体メジウムを本明細書に記載の本発明の用具と接触させ、この場合、上記接触は一酸化窒素を半透過性の膜を通過して液体メジウム中に拡散させるのに適当な条件下に行い、ついで一酸化窒素捕獲剤によって捕獲された一酸化窒素の量を測定することから構成される。ＮＯの過剰産生を伴い、したがって本発明によるモニタリングおよび／または処置が意図される疾患状態には、敗血症ショック、虚血、サイトカインの投与、サイトカインの過剰発現、潰瘍、炎症性腸疾患（たとえば、潰瘍性大腸炎またはクローン病）、糖尿病、関節炎、喘息、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、肝硬変、同種移植片拒絶反応、脳脊髄炎、髄膜炎、膵炎、腹膜炎、血管炎、リンパ球性脈絡炎、糸球体腎炎、ブドウ膜炎、回腸炎、肝臓炎症、腎臓炎症、出血性ショック、アナフィラキシー性ショック、火傷、感染症（たとえば細菌、ウイルス、カビおよび寄生虫感染）、血液透析、慢性疲労症候群、卒中、癌（たとえば、乳癌、メラノーマ、悪性腫瘍等）、心肺バイパス、虚血／再循環傷害、炎症、中毒性ショック症候群、胃炎、成人呼吸窮迫症候群、悪液質、心筋炎、自己免疫疾患、湿疹、乾癬、心不全、心疾患、動脈硬化症、皮膚炎、じんま疹、脳虚血、全身性エリテマトーデス、ＡＩＤＳ、ＡＩＤＳ痴呆、慢性神経変性疾患、慢性疼痛、プリアピズム、嚢胞性線維症、筋萎縮性側索項硬化症、精神分裂病、神経変性疾患、胃腸運動障害、肥満、過食症、固形腫瘍（たとえば、神経芽腫）、マラリア、血液学的癌、骨髄線維症、肺損傷、移植片対宿主病、頭部損傷、ＣＮＳ外傷、肝炎、腎不全、肝疾患（たとえばＣ型慢性肝炎）、薬物誘導性肺損傷（たとえばパラコート）、筋無力症（ＭＧ）、眼疾患等が包含される。本発明のさらに他の態様によれば、一酸化窒素の過少産生が関与する疾患状態の検出方法が提供される。このような方法は、このような疾患状態が疑われるまたは冒されている患者からの流体メジウムを本明細書に記載の本発明の用具と接触させ、この場合、上記接触は一酸化窒素を半透過性の膜を通過して流体メジウム中に拡散させるのに適当な条件下に行い、ついで一酸化窒素捕獲剤によって捕獲された一酸化窒素の量を測定することから構成される。一酸化窒素の過少産生と関連づけられている疾患状態には、新生児持続性肺高血圧症、子癇前症、成人呼吸窮迫症候群、血管形成後再狭窄、インポテンツ、動脈硬化症等が包含される。本発明のさらに他の態様によれば、実質的に容器内に含有された一酸化窒素捕獲剤からなる用具が提供される。この場合、容器の少なくとも一部は半透過性の膜からなり、容器の内容物は半透過性の膜を介して容器と接触する流体メジウムと連結することができる。本技術分野の熟練者には容易に認識されるように、本発明の用具は広範囲の形状およびサイズに構築することができる。たとえば、本発明の用具の構築に用いられる容器は、実質的に全体が半透過性膜に使用される材料によって構築された可撓性のバッグとすることができる。別法として、本発明の用具の構築に用いられる容器は、剛性または半剛性、実質的に非孔性の、一酸化窒素捕獲剤のための収容部を含み、この場合、収容部内には少なくとも１個の開口部があり、一酸化窒素捕獲剤は半透過性膜によって収容部内に保持される。さらに他の別法によれば、本発明の用具の構築に用いられる容器は一酸化窒素捕獲剤を含有するパウチからなり、この場合、少なくとも一部の一酸化窒素捕獲剤は容器に接触する流体メジウムと半透過性膜を介して流体連結状態にある。本技術分野の熟練者には容易に認識されるように、本発明の用具は実際上、任意の形状またはサイズたとえば円形、楕円、四角、長方形、管状、球状等とすることができる。与えられた用具に実際に選択されるサイズは、分析される流体サンプルとの接触（たとえば分析されるのが唾液中のＮＯの場合には患者の口内に置くのに適当な）、要求される一酸化窒素捕獲剤の容量（約1μlから約1mlの間で変動できる）等のようなパラメーターによって指定されることになる。本発明の用具の厚さは広範囲に変動させることが可能で、通常、サンプルの収集を容易にするのに必要な容器の可撓性、要求される透過性の程度、サンプルの収集に使用できる時間等のようなパラメーターによって指定されることになる。用具の厚さは通常、約0.001cm〜約0.2cmの範囲である。本技術分野の熟練者には容易に認識されるように、本発明の用具の製造に使用される半透過性膜の調製には、様々な材料を使用することができる。中性の気体分子を透過できるが荷電分子には非透過性である任意の材料がこの場合の使用に適している。これらの基準を満足する材料の例としては、ポリジオルガノシロキサン、ポリオレフィン、ポリアルカジエン、ポリビニルベンゼン、ハロゲン化ポリオレフィン、ハロゲン化ポリアルカジエン、ポリカルボネート、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリアクリレート、ポリウレタン等、ならびに任意の２種またはそれ以上の混合物を挙げることができる。この場合に使用が意図される適当なポリジオルガノシロキサンには、ポリジアルキルシロキサン（たとえば、ポリジメチルシロキサン、ポリジエチルシロキサン等）、ポリジアリールシロキサン（たとえば、ポリジフェニルシロキサン、ポリジトリルシロキサン等）、ポリアルキルアリールシロキサン（たとえば、ポリメチルフェニルシロキサン、ポリメチルトリルシロキサン等）、ポリジアルケニルシロキサン（たとえば、ポリジビニルシロキサン）、ポリアルケニルアルキルシロキサン（たとえば、ポリビニルメチルシロキサン）、ポリアルケニルアリールシロキサン（たとえば、ポリビニルフェニルシロキサン）等が包含される。この場合に使用が意図される適当なポリオレフィンの例にはポリプロピレン、ポリイソブチレン、ポリ（プロピレン-ＣＯ-エチレン）、ポリ（イソブチレン- ＣＯ-イソプレン）、ポリ（イソブチレン-ＣＯ-マレイン酸）等が包含される。この場合に使用が意図される適当なポリアルカジエンの例には、ポリブタジエン、ポリ（ジメチルブタジエン）、ポリイソプレン等が包含される。この場合に使用が意図される適当なポリビニルベンゼンの例には、ポリスチレン、ポリ（α-メチルスチレン）、ポリ（ブタジエン-スチレン）、ポリ（アリルアルコール-スチレン）、ポリ（ジビニルベンゼン-スチレン）、ポリ（マレイン酸-スチレン）等が包含される。この場合に使用が意図される適当なハロゲン化ポリオレフィンまたはハロゲン化ポリアルカジエンの例には、ポリ（ビニルクロリド）、ポリクロロプレン、ポリトリフルオロクロロエチレン、ポリテトラフルオロエチレン等が包含される。この場合に使用が意図される適当なポリアクリレートの例には、ポリアクリル酸、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸メチル-ＣＯ-アクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸メチル-ＣＯ-メタクリル酸）等が包含される。定常状態の条件下において溶液中から半透過性バッグへのＮＯの輸送は、以下の式（Tamirら、前出）によって表すことができる。ＮＯ輸送速度（mol/s）＝(πdL/δ)(αＤ_NO)(ΔＰ_NO)ｆ式中、 πdＬ/δは、バッグの表面積を壁厚で除した値を表し、 αＤ_NOはＮＯの透過性すなわち、膜内におけるＮＯの溶解度（α）と拡散性（Ｄ_NO）の積を表し、 ΔＰ_NOは体液とバッグの間のＮＯの分圧の差を表し、因数ｆは、膜を通過するＮＯ輸送の低下に影響する境界層の程度に依存して０〜１の値を有する。バッグの寸法を２cm×2cm×0.025cmと仮定すると、ＮＯの透過性は分子酸素の場合に類似する5×10^-12mol・cm^-1s^-1cmHg^-1となり、ｆ値は0.3〜1であって、膜を横切るＮＯの輸送量は体液とバッグの間のＮＯの分圧の差にもっぱら支配される。バッグ内部のＮＯの分圧は［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］のような付加物の形成またはその最終産物、硝酸塩もしくは亜硝酸塩への変換により非拡散性の形態に変換されると著しく低下する。バッグ内の遊離ＮＯの連続的な除去により（したがってＮＯ分圧の低下により）、常に有利なＮＯのバッグ内への輸送が起こり、バッグ外へのＮＯの輸送は生じない。ジチオカルバメート錯体の形態として［たとえば(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］捕獲されたＮＯは電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）スペクトロスコピー（たとえば、Lai & Komarov，前出参照）により容易に測定が可能であり、また硝酸塩／亜硝酸塩に変換されたＮＯは単純なグリース反応（Griess，Be r.Dtsch.Chem.Ges．12:426-428，1879）によって容易にアッセイできる。本発明の方法を使用して、様々な液体メジウムを試験することができる。たとえば、体液、成長および維持メジウム、エ業排液、環境大気等を試験することができる。本発明の方法を用いて試験できる体液の例には唾液、血液、涙液、尿、滑液、腹水等が包含される。本発明の方法を用いて試験できる成長および維持メジウムの例には、臓器保存メジウム、組織培養メジウム、細胞培養メジウム、再潅流メジウム等がある。本発明の方法を用いて試験できる工業排液の例には、水性または非水性のメジウム、たとえば都市排液、石油精製廃液、有機合成メジウム等が包含される。本発明の方法を用いて試験できる環境大気の例には大気ガス、車両排気ガス、工業排気ガス等が包含される。様々な一酸化窒素捕獲剤が本発明の実施に際しての使用に適当である。例としては、キレート剤、カルボキシ-2-フェニル-4,4,5,5-テトラメチルイミダゾリン -オキシル-1-オキシル-3-オキシド、ニトロン、酸素、チオール化合物、生理学的適合性を有する水性メジウム、非極性酸素化溶媒、グアニレートシクラーゼ／ＧＴＰ系、スーパーオキシド陰イオンラジカル、ペルオキシニトリル、キサンチン（ヒポキサンチン）／キサンチンオキシダーゼ系、過酸化物、スーパーオキシドジスムターゼ、遊離ラジカル付加物に対する抗体、グリース試薬等が包含される。本発明において使用が意図されるキレート剤の例には、ジチオカルバメートの金属イオン含有錯体、ヒドロキサム酸親鉄剤フェリオキサミンＢおよびその誘導体，ジエチレントリアミン五酢酸の金属イオン含有錯体、ヘモグロビン、コバラミン（ビタミンＢ₁₂）およびその誘導体、ポルフィリン、ヘム、ミオグロビン、メソ-2,3-ジメルカプトコハク酸等がある。上述の金属イオン含有錯体中における使用が意図される金属イオンには鉄イオン、銅イオン、コバルトイオン、亜鉛イオン、マンガンイオン等が包含される。本発明において使用が意図されるジチオカルバメートの例には、構造： (Ｒ)₂Ｎ-Ｃ(Ｓ)-ＳＨ …（Ｉ）（式中、それぞれのＲは独立に、Ｃ₁からＣ₁₈までのアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アリールアルケニル、置換アリールアルケニル、アリールアルキニル、置換アリールアルキニル、アロイル、置換アロイル、アシルもしくは置換アシルから選択されるか、または２つのＲ基は両者でＮおよび２個のＲ基を包含する5-，6-もしくは7-員の環を形成する）を有する化合物が包含される。本明細書で用いられる「置換アルキル」の語は、さらに１個もしくは２個以上のヒドロキシ、アルコキシ（低級アルキル基の）、メルカプト（低級アルキル基の）、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、ニトロン、アミノ、アミド、−Ｃ(Ｏ)Ｈ、アシル、オキシアシル、カルボキシル、カルバメート、スルホニル、スルホンアミド、スルフリル等を有するアルキル基からなる基を意味する。本明細書で用いられる「シクロアルキル」の語は約３個から８個までの範囲の炭素原子中に脂環式基を含む基を意味し、「置換シクロアルキル」の語は上述の置換基１個または２個以上をさらに含有するシクロアルキル基を意味する。本明細書で用いられる「ヘテロ環」の語は、環構造の一部として１個または２個以上のヘテロ原子（たとえば、Ｎ、Ｏ、Ｓ等）を含有し、３個から14個までの範囲の炭素原子を有する環状（すなわち、環を含有する）基を意味し、「置換ヘテロ環」の語は、上述の置換基１個または２個以上をさらに含有するヘテロ環基を意味する。本明細書で用いられる「アルケニル」の語は少なくとも１個の炭素-炭素二重結合を有し、約２個から12個までの範囲の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のヒドロカルビル基を意味し、「置換アルケニル」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアルケニル基を意味する。本明細書で用いられる「アルキニル」の語は少なくとも１個の炭素-炭素三重結合を有し、約２個から12個までの範囲の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のヒドロカルビル基を意味し、「置換アルケニル」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアルケニル基を意味する。本明細書で用いられる「アリール」の語は６個から14個までの範囲の炭素原子を有する芳香族基を意味し、「置換アリール」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアリール基を意味する。本明細書で用いられる「ヘテロアリール」の語は環構造の一部として１個または２個以上のヘテロ原子（たとえば、Ｎ、Ｏ、Ｓ等）を含有し、３個から14個までの範囲の炭素原子を有する芳香族基を意味し、「置換ヘテロアリール」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するヘテロアリール基を意味する。本明細書で用いられる「アルキルアリール」の語はアルキル置換アリール基を意味し、「置換アルキルアリール」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアルキルアリール基を意味する。本明細書で用いられる「アリールアルキル」の語はアリール置換アルキル基を意味し、「置換アリールアルキル」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアリールアルキル基を意味する。本明細書で用いられる「アリールアルケニル」の語はアリール置換アルケニル基を意味し、「置換アリールアルケニル」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアリールアルケニル基を意味する。本明細書で用いられる「アリールアルキニル」の語はアリール置換アルキニル基を意味し、「置換アリールアルキニル」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアリールアルキニル基を意味する。本明細書で用いられる「アロイル」の語はアリールカルボニル基たとえばベンゾイルを意味し、「置換アロイル」の語は上掲の置換基１個または２個以上をさらに有するアロイル基を意味する。本明細書で用いられる「アシル」の語はアルキルカルボニル基を意味する。本明細書で用いられる「ハロゲン」の語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。本発明の実施に際して使用が意図される現時点で好ましいジチオカルバメートは、構造Ｉ（式中、Ｒ基の一方はＣ₁からＣ₁₂までのアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニルまたは置換アルキニルから選択され、この場合、置換基はカルボキシル、-Ｃ(Ｏ)Ｈ、オキシアシル、フェノール、フェノキシ、ピリジニル、ピロリジニル、アミノ、アミド、ヒドロキシ、ニトロもしくはスルフリルから選択され、Ｒ基の他方は、Ｃ₁からＣ₄までのアルキルもしくは置換アルキルキルから選択される）を有する化合物である。本発明の実施に際して使用が意図されるとくに好ましいジチオカルバメートは構造Ｉ（式中、Ｒ基の一方はＣ₂からＣ₈までのアルキルまたは置換アルキルから選択され、この場合置換基はカルボキシル、アセチル、ピリジニル、ピロリジニル、アミノ、アミド、ヒドロキシまたはニトロから選択され、Ｒ基の他方はメチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される）を有する化合物である。本発明の実施に際し使用が意図される現時点で最も好ましいジチオカルバメートは構造Ｉ（式中、Ｒ基の一方は、Ｃ₂からＣ₈までのアルキルまたは置換アルキルから選択され、この場合、置換基はカルボキシル、ア七チル、アミドまたはヒドロキシから選択され、Ｒ基の他方はメチル、エチル、プロピルまたはブチルから選択される）を有する化合物である。本発明において使用が意図されるチオール化合物の例には、チオール含有アミノ酸（たとえば、システイン、Ｎ-アセチルシステイン等）、チオール含有ペプチド、チオール含有タンパク質（たとえば、アルブミン、インスリン、ヘモグロビン、リゾチーム、免疫グロブリン、α₂-マクログロブリン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン等）、グルタチオン、チオール含有炭水化物、チオール含有ヌクレオチド等が包含される。本発明において一酸化窒素捕獲剤としての使用が意図される適当な生理学的適合性を有する水性メジウムには、食塩溶液、滅菌水、リン酸緩衝食塩溶液、培養培地、平衡塩溶液等が包含される。本発明において一酸化窒素捕獲剤としての使用が意図される適当な非極性酸素化溶媒には、フッ素化脂環式化合物（たとえば、ペルフルオロアダマンタン、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロヘキサン等）、フッ素化芳香族化合物（たとえば、ペルフルオロベンゼン、ペルフルオロトルエン等）、フッ素化カルボン酸（たとえば、ペルフルオロラウリン酸）などが包含される。本発明の実施に際し一酸化窒素捕獲剤として有用な他の物質にはスーパーオキシド陰イオンラジカル、ペルオキシニトリル、キサンチン（ヒポキサンチン）／キサンチンオキシダーゼ系、過酸化物、スーパーオキシドジスムターゼ、遊離ラジカル付加物に対する抗体、グリース試薬等が包含される。本発明における使用が意図される遊離ラジカル付加物に対する抗体には、モノニトロシル-金属錯体、Ｓ-ニトロソタンパク質（たとえば、Ｓ-ニトロソアルブミン）、Ｓ-ニトロソグルタチオン、Ｓ-ニトロソ-Ｌ-システイン、ニトロチロシン含有タンパク質およびペプチド等が包含される。本発明の用具はアッセイすべき流体メジウムと様々な方法で接触させることができる。たとえば、その用具は患者に舌下に、半透過性膜を通して一酸化窒素が拡散し、一酸化窒素捕獲剤によって収集されるのに十分な時間、配置することができる。すなわち、この例で使用される用具は患者の舌下に導入するのに適したサイズおよび形状としなければならない。別法として、本発明の用具は、様々な体液中における一酸化窒素の連続的または間欠的検出が可能なように、患者に外科的に導入することもできる。本発明の用具は患者の皮下に導入するのが便利である。さらに他の方法として、本発明の用具は細胞培養容器内の培養メジウム中に配置して、このメジウムによる一酸化窒素の産生をモニターすることができる。本発明の用具によって捕獲された一酸化窒素は、様々な方法により、たとえば電子常磁性共鳴スペクトル、核磁気共鳴、放射性同位元素トレース、ＵＶ-可視光線分光光度法、免疫組織学的方法、蛍光法、免疫学的方法、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、質量スペクトル、液体シンチレーションカウンティング、赤外スペクトル等により容易に測定することができる。本発明を次に以下の非限定的実施例を参照しながらさらに詳細に説明する。実施例１ヒト唾液中におけるＮＯ産生のＥＰＲ検出［(ＭＧＤ)₂-Fe］溶液（40/8ｍＭ）を充填したシリコン膜のバッグを、ボランティアの舌下に配置した。１時間後、バッグを蒸留水で完全に濯ぎ、バッグ中の溶液をＥＰＲ石英フラッドセルに移した。Ｘ-バンドＥＰＲの測定は室温で実施した。図１Ａに示すように２つの重複成分、すなわち［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］錯体に特徴的な３本線の成分（黒丸；ａ^N＝12.5Ｇおよびｇ_iso＝2.04）および強力な広いシグナル（白丸）からなるＥＰＲスペクトルが得られる。強力な広いシグナルは、［(ＭＧＤ)₂-Cu］錯体のＥＰＲスペクトルの一部であり、溶液中に銅イオンの存在が示唆される。サンプル中に検出される［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］錯体の濃度は約５μＭと評価された。これに反し、［(ＭＧＤ)₂-Fe］錯体を含むシリコン膜のバッグを実験室のベンチに１時間放置した場合は、図１Ｂに示すように［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］錯体のＥＰＲシグナルは検出できなかった。すなわち、図１Ａに示されるヒト唾液から得られたＮＯは、大気中におけるＮＯの存在によるものとは考えられない。さらに、［(ＭＧＤ)₂-Fe］錯体を含むシリコン膜のバッグを１ｍＭの亜硝酸塩を含有する溶液中に１時間浸漬した場合も［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］錯体のＥＰＲシグナルは認められず、結果は使用したシリコン膜のバッグは亜硝酸塩に透過され得ないことを指示した。これらを合わせて考慮すると、図１における結果は、バッグ内部の［(ＭＧＤ)₂-Fe］錯体によって捕獲されたＮＯがヒト唾液中に存在する真正のＮＯであり、シリコン膜を通して拡散され、［(ＭＧＤ)₂-Fe］錯体によって捕獲されたものであることを明瞭に示している。これはヒト唾液中におけるＮＯの存在をはじめて明確に証明するものである。実施例２ヒト唾液中におけるＮＯ産生の蛍光検出 2,3-ジアミノナフタレン（ＤＡＮ）が亜硝酸塩と反応して、蛍光スペクトルにより容易に検出および定量が可能な蛍光原の2,3-ナフトトリアゾールを形成することは知られている。図２に示すように、亜硝酸塩のレベルと蛍光強度の間に直線関係がみられることは、この蛍光的アプローチがマイクロモル以下の範囲の亜硝酸塩レベルの測定に十分な感度を有することを示唆する。ＮＯが以下に示す式（１）に従って水溶液中で分子状酸素と反応して亜硝酸塩を産生することも知られている。したがって、亜硝酸塩レベルの測定は水溶液中におけるＮＯの存在の化学量論的定量化を可能にするはずである。４・ＮＯ＋Ｏ₂＋２Ｈ₂Ｏ→４ＮＯ₂ ^-＋４Ｈ⁺（１）リン酸緩衝食塩溶液（ＰＢＳ）を充填したシリコン膜のバッグを５例のボランティアの舌下に置いた。１時間後に、バッグの内容物を回収し、亜硝酸塩の形成の有無を2,3-ジアミノナフタレンによる蛍光の検出によってアッセイした。サンプル中の亜硝酸塩の濃度は0.5±0.2μＭであることが見出された。サンプル中に検出された亜硝酸塩レベルは多分、ＮＯがシリコン膜を通して拡散し、分子状酸素（0.25ｍＭ）と上述の式に示すように反応して亜硝酸塩を形成することによるものと考えられる。ＰＢＳ溶液を充填したシリコン膜のバッグを１ｍＭの亜硝酸塩を含む溶液中に１時間浸漬した場合は、サンプル中に蛍光シグナルは検出されなかった。この結果は、サンプル中に検出された亜硝酸塩が、唾液中の亜硝酸塩の夾雑によるものではなく、バッグ中に拡散されたＮＯから酸素との反応で形成されたとの主張をさらに確認するものである。ＥＰＲ法によって検出されるヒト唾液中のＮＯレベルが蛍光法によって検出される値より約10倍高かったことは興味深い。この差はこれらの２つの異なるシステムにおけるＮＯの捕獲の本質に帰することができた。バッグ中に拡散するＮＯが［(ＭＧＤ)₂-Fe］と速やかに反応して非拡散性の［(ＭＧＤ)₂-Fe-ＮＯ］錯体を形成する［(ＭＧＤ)₂-Fe］捕獲法では、バッグ内のＮＯ分圧の低下によりＮＯの輸送はさらに促進される。他方、ＰＢＳ捕獲法では、バッグ中に拡散するＮＯは溶解した酸素と、10⁶Ｍ^-2ｓ^-1の反応速度、ＮＯに関しては二次、酸素に関しては一次の反応速度で反応する。この反応は緩徐に進行し、これによりＰＢＳ捕獲システムにおける低い捕獲効率が説明できるものと考えられる。以上本発明をその一部の好ましい実施態様を参照しながら説明したが、記載し請求された本発明の精神および範囲内において、多くの修飾および改変が可能なことは容易に理解される通りである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】 1. 流体メジウム中の一酸化窒素の検出方法において、流体メジウムを、容器内に実質的に含有される一酸化窒素捕獲剤からなる用具と接触させ、この場合、容器の内容は半透過性の膜を介して流体メジウムと連結し、上記接触は一酸化窒素を半透過性の膜を通過して流体メジウム中に拡散させるのに適当な条件下に行い、ついで一酸化窒素捕獲剤によって捕獲された一酸化窒素の量を測定することから構成される方法。 2. 流体メジウムは、体液、成長および維持メジウム、工業的液体または環境大気からなる群より選択される請求項１記載の方法。 3. 液体メジウムは、体液は唾液、血液、涙液、尿、滑液または腹水からなる群より選択される体液である請求項２記載の方法。 4. 流体メジウムは、臓器保存メジウム、組織培養メジウム、細胞培養メジウムまたは再灌流メジウムから選択される成長および維持メジウムである請求項２記載の方法。 5. 流体メジウムは、水性または非水性の工業廃液である請求項２記載の方法。 6. 流体メジウムは周辺大気、車両排気ガスまたは工業的排気ガスから選択される環境大気である請求項２記載の方法。 7. 一酸化窒素捕獲剤は、キレート剤、カルボキシ-2-フェニル-4,4,5,5-テトラメチルイミダゾリン-オキシル-1-オキシル-3-オキシド、ニトロン、酸素、チオール化合物、生理学的適合性を有する水性メジウム、非極性酸素化溶媒、グアニレートシクラーゼ／ＧＴＰ系、スーパーオキシド陰イオンラジカル、ペルオキシニトリル、キサンチン（ヒポキサンチン）／キサンチンオキシダーゼ系、過酸化物、スーパーオキシドジスムターゼ、遊離ラジカル付加物に対する抗体またはグリース試薬から選択される請求項１記載の方法。 8. キレート剤は、ジチオカルバメートの金属イオン含有錯体、ヒドロキサム酸親鉄剤フェリオキサミンＢおよびその誘導体、ジエチレントリアミン五酢酸の金属イオン含有錯体、ヘモグロビン、コバラミン（ビタミンＢ₁₂）およびその誘導体、ポルフィリン、ヘム、ミオグロビンまたはメソ-2,3-ジメルカプトコハク酸から選択される請求項７記載の方法。 9. 金属イオンは、鉄、銅、コバルト、亜鉛またはマンガンイオンから選択される請求項８記載の方法。 10．ジチオカルバメートは、構造： (Ｒ)₂Ｎ-Ｃ(Ｓ)-ＳＨ（式中、それぞれのＲは独立に、Ｃ₁からＣ₁₈までのアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アリールアルケニル、置換アリールアルケニル、アリールアルキニル、置換アリールアルキニル、アロイル、置換アロイル、アシルもしくは置換アシルから選択されるか、または２つのＲ基は両者でＮおよび２個のＲ基を包含する5-，6-もしくは7-員の環を形成する）を有する化合物から選択される請求項８記載の方法。 11．チオール化合物は、チオール含有アミノ酸、チオール含有ペプチド、チオール含有タンパク質、グルタチオン、チオール含有炭水化物またはチオール含有ヌクレオチドである請求項７記載の方法。 12．生理学的適合性を有する水性メジウムは、食塩溶液、滅菌水、リン酸緩衝食塩溶液、培養メジウムまたは平衡塩溶液から選択される請求項７記載の方法。 13．非極性酸素化溶媒は、フッ素化脂環式化合物、フッ素化芳香族化合物またはフッ素化カルボン酸である請求項７記載の方法。 14．一酸化窒素捕獲剤はスーパーオキシド陰イオンラジカル、ペルオキシニトリル、キサンチン（ヒポキサンチン）／キサンチンオキシダーゼ系、過酸化物またはグリース試薬から選択される請求項７記載の方法。 15．容器は、半透過性膜によって構築された可撓性のバッグ；または一酸化窒素捕獲剤を含有する剛性または半剛性の収容部（この場合、上記収容部は少なくとも１個の開口部を有し、一酸化窒素捕獲剤は半透過性膜によってその収容部内に保持される）；または一酸化窒素捕獲剤を含有するパウチ（この場合、少なくとも一部の一酸化窒素捕獲剤は液体メジウムと半透過性膜を介して液体連結状態にある）からなる請求項１記載の方法。 16．容器は患者の舌下への導入に適している請求項１記載の方法。 17．容器は患者の皮下への導入に適している請求項１記載の方法。 18．容器を患者に外科的に導入することを更に含む請求項１７記載の方法。 19．容器は細胞培養容器内の培養メジウム中に配置するのに適している請求項１記載の方法。 20．半透過性膜は中性気体分子に対しては透過性であるが、荷電した分子に対しては透過性を示さない請求項１記載の方法。 21．半透過性膜は、ポリジオルガノシロキサン、ポリオレフィン、ポリアルカジエン、ポリビニルベンゼン、ハロゲン化ポリオレフィン、ハロゲン化ポリアルカジエン、ポリカルボネート、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリアクリレート、ポリウレタンならびにそれらの任意の２種またはそれ以上の混合物から選択される請求項20記載の方法。 22．半透過性膜は、ポリジアルキルシロキサン、ポリジアリールシロキサン、ポリアルキルアリールシロキサン、ポリジアルケニルシロキサン、ポリアルケニルアルキルシロキサンまたはポリアルケニルアリールシロキサンから選択されるポリジオルガノシロキサンである請求項21記載の方法。 23．半透過性膜は、ポリプロピレン、ポリイソブチレン、ポリ（プロピレン- ＣＯ-エチレン）、ポリ（イソブチレン-ＣＯ-イソプレン）またはポリ（イソブチレン-ＣＯ-マレイン酸）から選択されるポリオレフィンである請求項21記載の方法。 24．半透過性膜は、ポリブタジエン、ポリ（ジメチルブタジエン）またはポリイソプレンから選択されるポリアルカジエンである請求項21記載の方法。 25．半透過性膜は、ポリスチレン、ポリ（α-メチルスチレン）、ポリ（ブタジエン-スチレン）、ポリ（アリルアルコール-スチレン）、ポリ（ジビニルベンゼン-スチレン）、ポリ（マレイン酸-スチレン）から選択されるポリビニルベンゼンである請求項21記載の方法。 26．半透過性膜は、ポリ（ビニルクロリド）、ポリクロロプレン、ポリトリフルオロクロロエチレンまたはポリテトラフルオロエチレンから選択されるハロゲン化ポリオレフィンまたはハロゲン化ポリアルカジエンである請求項21記載の方法。 27．半透過性膜は、ポリアクリル酸、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸メチル-ＣＯ-アクリル酸エチル）またはポリ（メタクリル酸メチル- ＣＯ-メタクリル酸）から選択されるポリアクリレートである請求項21記載の方法。 28．用具によって捕獲された一酸化窒素は、電子常磁性共鳴スペクトル、核磁気共鳴、放射性同位元素トレーシング、ＵＶ-可視光線分光光度法、免疫組織学的方法、蛍光法、免疫学的方法、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、質量スペクトル、液体シンチレーションカウンティングまたは赤外スペクトルにより測定される請求項１記載の方法。 29．一酸化窒素の過剰産生によって誘導される疾患状態（単数または複数）または条件（単数または複数）の検出方法において、上述のような疾患に冒されている疑いのある患者からの流体メジウムを、容器内に実質的に含有される一酸化窒素捕獲剤からなる用具と接触させ、この場合、容器の内容は半透過性の膜を介して流体メジウムと連結し、上記接触は一酸化窒素を半透過性の膜を通過して流体メジウム中に拡散させるのに適当な条件下に行い、ついで一酸化窒素捕獲剤によって捕獲された一酸化窒素の量を測定することから構成される方法。 30．疾患状態または条件は、敗血症ショック、虚血、サイトカインの投与、サイトカインの過剰発現、潰瘍、炎症性腸疾患、糖尿病、関節炎、喘息、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、肝硬変、同種移植片拒絶反応、肝炎症、脳脊髄炎、髄膜炎、膵炎、腹膜炎、血管炎、リンパ球性脈絡炎、糸球体腎炎、ブドウ膜炎、回腸炎、腎臓炎症、出血性ショック、アナフィラキシー性ショック、火傷、感染症、血液透析、慢性疲労症候群、卒中、癌、心肺バイパス、虚血／再循環傷害、炎症、中毒性ショック症候群、胃炎、成人呼吸窮迫症候群、悪液質、心筋炎、自己免疫疾患、湿疹、乾癖、心不全、心臓疾患、動脈硬化症、皮膚炎、じんま疹、脳虚血、全身性エリテマトーデス、ＡＩＤＳ、ＡＩＤＳ痴呆、慢性神経変性疾患、慢性疼痛、プリアピズム、嚢胞性線維症、筋萎縮性側索項硬化症、精神分裂病、神経変性疾患、肥満、胃腸運動障害、過食症、固形腫瘍、マラリア、血液学的癌、骨髄線維症、肺損傷、移植片対宿主病、頭部損傷、ＣＮＳ外傷、肝炎、腎不全、肝疾患、薬物誘導性肺損傷、筋無力症（ＭＧ）または眼疾患である請求項29記載の方法。 31．一酸化窒素の過少産生が関与する疾患状態の検出方法において、上述のような疾患に冒されている疑いのある患者からの流体メジウムを、容器内に実質的に含有される一酸化窒素捕獲剤からなる用具と接触させ、この場合、容器の内容は半透過性の膜を介して流体メジウムと連結し、上記接触は一酸化窒素を半透過性の膜を通過して流体メジウム中に拡散させるのに適当な条件下に行い、ついで一酸化窒素捕獲剤によって捕獲された一酸化窒素の量を測定することから構成される方法。 32．疾患状態は、新生児持続性肺高血圧症、子癇前症、成人呼吸窮迫症候群、血管形成後再狭窄、インポテンツまたは動脈硬化症である請求項31記載の方法。 33．実質的に容器内に含有された一酸化窒素捕獲剤からなる用具において、容器の少なくとも一部分は半透過性の膜からなり、容器の内容物は半透過性の膜を介して容器と接触する流体メジウムと連結することができる用具。 34．容器は、半透過性膜によって構築された可撓性のバッグからなる請求項33 記載の用具。 35．容器は一酸化窒素捕獲剤を含有する剛性または半剛性の実質的に非孔性の収容部からなり、その収容部は少なくとも１個の開口部を有し、一酸化窒素捕獲剤は半透過性膜によって収容部内に保持される請求項33記載の用具。 36．容器は、一酸化窒素捕獲剤を含有するパウチからなり、この場合、少なくとも一部の一酸化窒素捕獲剤は容器に接触する流体メジウムと半透過性膜を介して液体連結状態にある請求項33記載の用具。 37．容器は円形、楕円、四角、長方形、管状または球状である請求項33記載の用具。