JP2001505540A

JP2001505540A - シグナル変換蛋白とｇｌｇｆ（ｐｄｈ／ｄｈｒ）ドメインの相互作用を阻害する化合物およびその使用

Info

Publication number: JP2001505540A
Application number: JP50793598A
Authority: JP
Inventors: 孝明佐藤; 純柳澤
Original assignee: Columbia University of New York
Current assignee: Columbia University of New York
Priority date: 1996-07-22
Filing date: 1997-07-18
Publication date: 2001-04-24
Also published as: EP0935467A1; CN1230120A; CA2260742A1; AU735287C; AU735287B2; US6911526B2; EP0935467A4; KR100565819B1; WO1998005347A1; KR20000029469A; US20020058607A1; CN1155402C; AU4042497A

Abstract

(57)【要約】本発明は、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害ができる組成物を提供する。また本発明は、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる化合物を同定する方法を提供する。本発明はまた、癌細胞の増殖を阻害する方法を提供する。本発明はまた、細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の組成物で癌を治療する方法を提供する。また本発明は、ウイルス感染細胞の増殖を阻害する方法を提供する。また本発明は、細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の組成物で、ウイルスに感染した被験者を治療する方法を提供する。本発明はまた、薬学的組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】シグナル変換蛋白とGLGF（PDH/DHR）ドメインの相互作用を阻害する化合物およびその使用ここに開示される発明は、アメリカ合衆国厚生省国立衛生研究所（National I nstitutes of Health of the United States Department of Health and Human Services）認可番号RO 1 GM55147-01の下で政府の援助によって行われた。従って合衆国政府は、本発明に対して一定の権利を有する。〔発明の背景〕本出願の全体を通して、著者名および日付により種々の出版物を引用する。これら出版物の完全な書誌的引用は、本明細書の末尾で且つ配列表および請求項のすぐ前に、アルファベット順に掲載されている。これらの出版物の開示は、本願に記載され権利請求されている本発明の出願時に当業者に公知であった従来技術をより完全に記載するために、本明細書の一部をなす参照として本願中に組み込まれる。 Fas(APO-1/CD95)およびそのリガンドは、アポトーシス（Itoh et al．1991）の重要なシグナル媒介者として特定されている。Fas（APO-1/CD95）の構造的構成によって、Fasが腫瘍性壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであることが示唆されている。このスーパーファミリーにはまた、p75神経成長因子受容体（NGFR）（Johnson et al．1986）、Ｔ細胞活性化マーカーCD27（Camerini et al．1991）,ホジキンリンパ腫関連抗体CD30(Smith et al．（1993），ヒトＢ細胞抗原CD40（Stamenkovic et al.，1989）およびＴ細胞抗原OX40（Mallett，e t al.，1990）が含まれる。Fasおよびそのリガンドの両者の遺伝学的突然変異体は、マウスにおいてはリンパ球増殖性および自己免疫疾患に関連するとされてきた（Watanabe-Fukunaga，et al．1992;Takahashi et al．1994）。更に、Fas発現のレベルが変化すると、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）が感染したＴ細胞においてアポトーシスが導かれると考えられている（Westendorp et al．1995）。数個のFas相互作用シグナル変換分子：例えばFas関連ホスファターゼー１（FA P−1）（図１）（Sato et al．１９９５）、FADD/MORTI/CAP-1/CAP-2(Chinnaiya n，et al．1995;Boldin et al.，1995;Kischkel et al.，1995)およびRIP(Stang er et al.，1995)が、酵母のツーハイブリッドシステムおよび生化学的アプローチを使用して特定されている。FAP−1以外の全ては、Fasの機能的細胞死ドメインに関連しており、FADD/MORT1またはRIPが過剰発現すると、これらの蛋白がトランスフェクトとしている細胞においてアポトーシスが誘導される。これとは対照的に、FAP−1は、Fasのネガテイブ調節ドメイン（C末端15アミノ酸）（Ito et al．1993）に関連し、Fasに誘導されたアポトーシスを阻害する唯一の蛋白である。 FAP−1（PTPN13）は、PTP−BAS/hPTP1E/PTPL1(Maekawa et al，1994;Banville et al.，1994;Saras et al.，1994)と同一の数個の選択的スプライス型を持ち、また細胞骨格に関連した蛋白であるエズリン(ezrin)(Gould et al.，1989)，ラデイキシン（radixin）(Funayama et al.，1991)，モエシン（moesin）(Lanke s et al.，1991),神経腺維腫タイプＩＩ遺伝子産物（NFII）(Rouleau et al.，1 993)および蛋白4.1(Conboy et al.，1991)のみならず、PTPases PTPH1（Yang et al.，1991），PTP-MEG(Gu et al.，1991)およびPTPD1(Vogel et al.，1993)においてみられる領域と類似の膜結合領域を含む。興味深い事に、FAP−1は、蛋白ドメイン間の内部および中間分子の相互作用を媒介すると考えられ６つのGLGF(P DZ／DHR)繰り返しを含む。FAP−1の第三GLGF繰り返しは、まずFas受容体(Sato e t al.，1995）のＣ末端との特異的相互作用を示すドメインとして特定された．これによって、GLGFドメインが蛋白を亜膜細胞骨格にターゲテイングする際および/または生化学活性を調整する際に重要な働きをするのではないかという事が示唆される。GLGF繰り返しは、グアニレート・キナーゼのみならず、ショウジョウバエの腫瘍抑制蛋白であるlethal-(1)-disc-large-1[dlg-1](Woods et al.，1991;Kitamu ra et al.，1994)の相同物であるラットのシナップス後部の密度蛋白(PSD−95)( Cho et al.，1992)でも、以前に発見されている。これらの繰り返しは、ホモおよびヘテロ・ダイマー化を媒介し、これは、PTPase活性、Fasへの結合、および／またはFAP−1と他のシグナル変換蛋白との相互作用に影響を与える可能性がある。近年、種々の蛋白PDZドメインが、イオンチャンネルおよび池の蛋白のＣ末端と相互作用する事もまた報告されている(図１)(表１)（Kornau et al.，1995; Kim et al.，1995;Matsumine et al.，1996）。〔発明の概要〕本発明は、シグナル変換蛋白と、アミノ酸配列(G/S/A/E)-L-G-(F-I/L)(配列番号1)を含む細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害する事ができる組成物を提供する。更に、該細胞質蛋白は、アミノ酸配列（K/R/Q）-X_n-(G/S/A/E)-L-G-(F/I/L) (配列番号第2)を含んでいてもよい。この配列中で、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群から選択されたアミノ酸を表し、ｎは少なくとも２以上で且つ４以下の数を表す。好ましい態様では、該アミノ酸配列はSLGI（配列番号３）である。更に、本発明は、シグナル変換蛋白がそのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X−(V/I/L)(配列番号4)を保持している時の組成物であって、該配列において、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は相互に代替可能なアミノ酸を囲んでおり、このような括弧内の各スラッシュは、代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す組成物を提供する。本発明はまた、シグナル変換蛋白と、アミノ酸配列(G/S/A/E)-L-G-(F/I/L)を含む細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる化合物を同定する方法を提供する。更に本発明は、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を担持しているシグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる化合物を同定する方法を提供する。本発明はまた、特に癌細胞が、結腸、肝臓、胸部、卵巣、精巣、肺、胃、脾臓、腎臓、前立腺、子宮、皮膚、頭、胸腺、および首からなる器官に由来する場合または、癌細胞がＴ細胞またはＢ細胞のいずれかに由来する場合の、癌細胞の増殖を阻害する方法を提供する。本発明はまた、特に癌細胞が、胸腺、結腸、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、肺、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官からなる器官に由来する場合または、核細胞がＴ細胞またはＢ細胞のいずれかから由来する場合の、細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の組成物で、患者の癌を治療する方法を提供する。本発明はまた、特に、ウイルス感染細胞、特にＢ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶに感染したウイルス感染細胞の増殖を阻害する方法を提供する。本発明はまた、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害する事ができる組成物からなる薬学的組成物を提供する。本発明はまた、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との特異的結合を阻害する事ができると特定された化合物からなる薬学的組成物を提供する。〔図面の詳細な説明〕図１： Fas関連フォスファターゼ-1蛋白の図で、６つのGLGF（PDZ／DHR）ドメインの繰り返しを示す。他の蛋白およびGLGF（PDZ／DHR）繰り返しを含む蛋白との類似の膜結合部位と比較している。図2A、2B、2Cおよび2D： FAP-1との結合に必要とされるFasC末端最小領域のマップ。右の数字は各独立クローンを示す（図2Cおよび2D)。 2A 酵母の２つのハイブリッドシステムによるランダム・ペプチド・ライブラリーのスクリーニング戦略。 2B ヒト（配列番号５）、ラット（配列番号6）、マウス（配列番号7）のFasのC末端15アミノ酸の配列。 2C 半ランダム・ペプチド・ライブラリーのスクリーニング結果。最上部の列は、ヒトとラットの間の相同性をもとにして固定されたアミノ酸を示す。 2D ランダム・ペプチド・ライブラリーのスクリーニング結果（夫々、配列番号８、配列番号９、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17）、図3A、3Bおよび3C：インビトロでのFas／FAP−1結合の阻害分析 3A FasのＣ末端15アミノ酸を使用したFas／FAP-1の結合の阻害分析。G ST-Fasの融合蛋白（191-355）はインビトロ結合分析に使用された（レーン1、3−10）。GST-Fas融合蛋白（191-320）（レーン2）および１ｍＭヒトPAMP（プロアドレノモルデインＮ末端20アミノ酸、分子量2460.9）(レーン3)は、ネガテイブ・コントロールとして使用した。添加されたＣ末端15アミノ酸の濃度は１（レーン4）、３（レーン5）、10（レーン6）、30（レーン7）、100（レーン8）、3 00（レーン9）、および1000μM（レーン10）であった。 3B FasのＣ末端15アミノ酸に対応する先端切除ペプチドを使用したFas /FAP-1結合の阻害分析。全合成ペプチドは、この阻害分析のためアセチル化された（夫々、配列番号第４番、配列番号第18番、配列番号第19番、配列番号第20番、配列番号第21番、配列番号第22番、配列番号第23番）。 3C スキャンされた３ペプチドを使用したFas／FAP−1結合の阻害効果図4A，4B、4Cおよび4D： 4A 酵母中における、FasのＣ末端３アミノ酸とFAP−1との相互作用。 4B FasのＣ末端３アミノ酸とFAP−1のインビトロにおける相互作用。 4C 天然FasのGST−FAP−1による免疫沈殿 4D Fas／FAP−1結合のAc−SLVまたはAc−SLYによる阻害図5A，5B，5C，5D，5E，および5F： Ac−SLVのDLD−1細胞系へのマイクロインジェクション。三角形は、Ac−SLVでマイクインジェクトする事ができ、かつ特定された濃縮クロマチンをも示す細胞を特定している。一方、該領域のただ一つの細胞が、Ac−SLYでマイクロインジェクトされた時に、アポトーシスを見せた。 5A 500ng/ml CHllの存在下で、Ac−SLVでマイクロインジェクトされた細胞の代表例をフェーズ・コントラストで示している。 5B 500ng/ml CHllの存在下で、AC−SLYでマイクロインジェクトされた細胞の代表例をフェーズ・コントラストで示している。 5C 500ng/ml CHllの存在下で、Ac−SLVでマイクロインジェクトされた細胞の代表例がFITC染色で示される。 5D 500ng/ml CHllの存在下で、AC−SLYでマイクロインジェクトされた細胞の代表例がFITC染色で示される。 5E 500ng/ml CHll存在下で、Ac−SLVでマイクロインジェクトされた細胞の代表例がヘキスト（Hoechst）33342による蛍光DNA染色で示される。 5F 500ng/ml CHllの存在下で、AC−SLYでマイクロインジェクトされた細胞の代表例がヘキスト（Hoechst）33342による蛍光DNA染色で示される。図６：マイクロインジェクトされたDLD−1細胞におけるアポトーシスの定量化図7A，7B，7C，7D，7E，7F，7G，および7H： 7A ヒト神経成長因子受容体のアミノ酸配列（配列番号24） 7B ヒトCD4受容体のアミノ酸配列（配列番号25） 7C Fas関連フォスファターゼ-1の神経成長因子受容体（NGFR）（p75 ）のＣ末端に対する相互作用。 7D ヒト結腸直腸変異癌蛋白のアミノ酸配列（配列番号26） 7E プロテイン・キナーゼＣ、アルファー・タイプのアミノ酸配列 7F セロトニン2A受容体のアミノ酸配列（配列番号27） 7G セロトニン2B受容体のアミノ酸配列（配列番号28） 7H 腺腫症・結腸ポリポーシスアミノ酸配列（配列番号29）図８： p75NGFR（低親和性神経成長因子受容体）の構造的特徴の表示図９： Fasおよびp75NGFRのＣ末端終端部の比較図10： ³⁵Ｓで標識されたFAP−1とGST融合蛋白として発現される様々な受容体とのインビトロ相互作用。グルタチオン・セファロース・ビーズ上に固定された表示のGST融合蛋白は、インビトロで翻訳された³⁵Ｓで標識されたFAP−1蛋白と共にインキュベートされた。ビーズを洗浄した後、残留FAP−1蛋白はSDS−PAG Eで分析され、オートグラフィーにかけられた。図11Aおよび11B：³⁵Sで標識されたFAP−1とGST−p75欠損変異体とのインビトロ相互作用 11A p75およびp75欠損変異体の細胞質ドメインを含むGST融合蛋白の概略表示。種々のp75欠損変異体によるFAP−1のGST融合蛋白に対する結合が右に表示され、これは11Bからのデータをもとにしている。 11B インビトロで翻訳された³⁵Ｓで標識されたFAP−1蛋白とグルタチオン・セファロース・ビーズ上に固定化された種々のGST融合蛋白との相互作用。ビーズを洗浄した後、残留FAP−1蛋白はSDS−PAGEで分析され、オートグラフィーにかけられた。図12： p75NGFRおよびVP16-FAP-1のLexA-C末端細胞質領域の間の関係。表示された酵母菌株は、形質転換によって構築され、コロニーの成長がテストされた。+/-は、his^-プレート上でのコロニーの成長を示す。〔発明の詳細な記載〕ここに使用されたように、アミノ酸残基は下記のように略称される。即ち、A, Ala;C，Cys;D，Asp，E，Glu;F，Phe;G，Gly;H，His;I，Ille;K，Lys;L，Leu;M， Met;N，Asn;P Pro;Q，Gln;R，Arg;S，Ser;T，Thr;V，Val;W，Trp;およびY，Tyr ．下記の材料の理解を促すために、頻繁に出現する方法および／または用語は、 Sambrook et al.，1989中に最も良く記載されている。本発明は、シグナル変換蛋白とアミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F-I/L)を含む細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害することができる組成物を提供する。配列中、各‐はペプチド結合、各括弧は相互に代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは、代替可能なアミノ酸を分離している。更に、細胞質蛋白はアミノ酸配列（K/R/Q）-X_n-(G/S/A/E)-L-G-(F/I/L)を含んでいても良い。この配列中で、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群から選択されたアミノ酸を表し、ｎは少なくとも２以上４以下を表す。特に、好ましい態様では、細胞質蛋白は、アミノ酸配列SLGIを含む。アミノ酸配列（K/R/Q）-X_n-(G/S/A/E)-L-G-(F/I/L)は、「GLGF（PDZ／DHR）アミノ酸ドメイン」として従来技術でも既知である。ここで用いられている「GLGF （PDZ/DHR）アミノ酸ドメイン」は、アミノ酸配列（K/R/Q）-X_n-(G/S/A/E)-L-G- (F/I/L)を意味する。好ましい態様においえ、シグナル変換蛋白は、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を有する。ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は相互に代替可能なアミノ酸を囲んでおり、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す。本発明の組成物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類似化合物、ポリペプチド、または蛋白、幾つかの性質またはすべての性質を共有する断片または誘導体（例えば融合蛋白）でもよいが、これらに限定されるものではない。該組成物は天然に存在するものを精製して得てもよく、または天然に存在するものではなく合成によって得たものでもよい。特に、該組成物は、配列（S/T）-X-(V/I/L)-COOHを含むペプチドであってもよい。ここで、各‐は、ペプチド結合を表し、各括弧は相互に代替可能なアミノ酸を囲んでおり、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す。好ましい態様においては、下記の配列：DSENSNFRNEIQSLV，RNEIQ SLV， NEIQSLV,EIQSLV,IQSLV， QSLV， SLV， IPPDSEDGNEEQSLV，DSEMYNFRS QLASVV， IDLASEFLFLSNSFL， PPTCSQANSGRISTL，SDSNMNMNELSE V， QNFRTYIVSFV， RETIESTV， RGFISSLV， TIQSVI， ESLVの一つを含む。更に好ましい態様は、配列Ac-SLV-COOHを有する有機化合物である。ここでAcはアセチルを表し、各‐はペプチド結合を表す。本発明の例を以下に提示する。先に公表されたものと類似の手法を使用することにより、Advanced Chem Tech ACT357上で、アセチル化されたペプチドを自動的に合成することができる。各ランについてワング(Wang)樹脂を使用し、、すべてのアミノ酸についてＮ゜-Fmoc保護を使用し、次に20％ピペリジン/DMFを使用し、DIC/HOBt、続いてHBTU/DIEAを使用してカップリングを完了した。最後のアミノ酸がカップリングされた後に、樹脂上で成長しているペプチドを、Ac₂O/DMF でアセチル化した。アセチル化されたペプチドをHPLCで精製し、FAB-MSおよび¹H -NMRで特徴付けられた。更に、アミン等の非アセチル基にカップリングされた上記記の合成ペプチド誘導体を如何にして構築するかについては、当業者に既知であろう。本発明はまた、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を保持するシグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる組成物を提供する。配列中、各‐は、ペプチド結合、各括弧は、互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは、代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸を表す。本発明の組成物には、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類似化合物、ポリペプチド、または蛋白、幾つかの性質またはすべての性質を共有する断片または誘導体、例えば融合蛋白を含み得る。本発明はまた、シグナル変換蛋白とアミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F-I/L) を含む細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる化合物を同定する方法を提供する。上記の配列において、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離している。この方法は、（a）シグナル変換蛋白と結合した細胞質蛋白を、細胞質蛋白に結合したシグナル変換蛋白を置換できる事が予め分かっている既知の化合物と結合した細胞質蛋白との間の結合を可能にする条件下において、複数の化合物と接触させて錯体を形成することと、（b）置換されたシグナル変換蛋白または工程（a）で形成された錯体を検出することとを具備し、前記置換によって、前記化合物がシグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる事が示される方法である。シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合の阻害は、レポーター遺伝子の転写活性に影響を与え得る。更に、工程（b）において、置換された細胞質蛋白または錯体は、工程（a）における化合物との接触の前後におけるレポーター遺伝子の転写活性を比較する事によって検出される。該活性の変化によって、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合が阻害され、シグナル変換蛋白が置換された事が示される。ここで用いる「レポーター遺伝子の転写活性」は、該レポーター遺伝子の発現レベルが、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白とが結合された時に観測されるレベルから変化するであろう事を意味する。シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の結合に依存した他の生物学的機能を検出する事によって、化合物を同定する事も可能である。レポーター遺伝子の例は多数あり、従来技術で公知である。これにはヒスチジン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子が含まれるが、これらに限定されなるものではない。更に、前記細胞質蛋白は固体支持物に結合されてもよい。また、前記化合物が固体支持物に結合されてもよく、該化合物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類事化合物、ポリペプチドまたは蛋白からなる。本発明の方法の一例を下記に提示する。シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる化合物を、例えば、細胞質蛋白および検出可能なマーカーに結合した化合物の免疫沈殿法のような直接的な検出法を使用して特定できる。更に、遺伝子発現レベルの増加または減少を検出するといった間接的方法を使用する事も可能である。下記で述べるように、LexA DNA結合ドメインに対して融合された合成ペプチドを構築する事も可能である。これらの構築物は、適切なレポーター遺伝子を持つ適切な細胞系と共にL40菌株中に形質転換され得る。そして、該レポーター遺伝子の発現レベルを検出する事によって、阻害が生じたかどうかを検出する事ができ得る。レポーター遺伝子の発現レベルを検出するために、当業者は種々の公知の方法、例えば、酵母菌、哺乳類または他の細胞におけるツーハイブリッドシステムを採用してもよい。更に、工程（a）の接触は、インビトロ、インビボ、また特に適切な細胞、例えば酵母細胞または哺乳類細胞中で行われる。哺乳類細胞の例には、マウス繊維芽細胞NIH 3T3、CHO細胞、HeLa細胞、Ltk-細胞、Cos細胞等があるが、これらに限定されるものではない。他の適切な細胞には、原核細胞または真核細胞、例えば、細菌細胞（グラム陽性細胞を含む）、菌類細胞、昆虫細胞および他の動物細胞が含まれるが、これらに限定されるものではない。更に、シグナル変換蛋白は、細胞表面受容体、シグナル・トランスデューサー蛋白または腫瘍抑制蛋白であってもよい。特に、細胞表面蛋白はFas受容体であり、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、肺、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する細胞内で発現し得るが、これらに限定されることはない。或いは、Ｔ細胞およびＢ細胞を含む細胞中で発現し得る。好ましい態様では、該Ｔ細胞は、ジャーカット（Jurkat）Ｔ細胞である。更に、細胞表面受容体は、DC4受容体、p75受容体、セロトニン2A受容体またはセロトニン2B受容体である。更に、シグナル・トランスデューサー蛋白は、プロテイン・キナーゼ-Ｃ-αタイプであり得る。更に、腫瘍抑制蛋白は、腺腫症・結腸ポリポーシス腫瘍抑制蛋白または結腸直腸変異癌蛋白であり得る。更に、細胞質蛋白には、アミノ酸配列SLGI、特にFas関連フォスファターゼ１が含まれる。本発明はまた、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を担持しているシグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる化合物を同定する方法を提供する。上記配列において、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す。該方法は、（a）細胞質蛋白に結合したシグナル変換蛋白を、シグナル変換蛋白に結合した細胞質蛋白を置換できる事が予め分かっている既知の化合物と、結合しているシグナル変換蛋白との間での結合を可能にする条件下において、複数の化合物と接触させて錯体を形成することと（b）置換された細胞質蛋白または工程（a）の錯体を検出することとを具備し、前記置換よって、前記化合物が前記シグナル変換蛋白と前記細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる事が示される方法である。シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害する事は、レポーター遺伝子の転写活性に影響する。更に、工程（b）では、置換されたシグナル変換蛋白または錯体が、工程（ａ）での化合物との接触の前後におけるレポーター遺伝子の転写活性を比較する事によって検出され、該活性の変化は、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合が阻害され、細胞質蛋白が置換された事を示す。更に、工程（ｂ）では、置換された細胞質蛋白または錯体が、工程（ａ）での化合物との接触の前後におけるレポーター遺伝子の転写活性を比較する事によって検出される。該活性の変化は、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合が阻害され、シグナル変換蛋白が置換された事を示す。ここで用いられる「レポーター遺伝子の転写活性」は、該レポーター遺伝子の発現レベルが、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白が結合しているときに観測されるレベルから変化するであろう事を意味する。シグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の結合に依存した他の生物学的作用を検出する事によって、化合物を同定する事も可能である。レポーター遺伝子の例は多数あり、また従来技術で公知である。これには、ヒスチジン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子が含まれるが、これらに限定されるものではない。更に、前記細胞質蛋白は固体支持物に結合されてもよい。また、前記化合物が固体支持物に結合されてもよく、該化合物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類事化合物、ポリペプチドまたは蛋白からなる。本発明の該方法の一例を下記に提示する。シグナル変換蛋白と細胞質蛋白間の特異的結合を阻害できる化合物は、例えば、細胞質蛋白および検出マーカーに結合した化合物の免疫沈殿法のような直接的な検出法を使用して同定することができる。更に、遺伝子発現レベルの増加または減少を検出するといった、間接的方法を使用する事も可能でめる。下記で述べるように、LexA DNA結合ドメインに対して融合された合成ペプチドを構築する事も可能である。これらの構築物は、適切なレポーター遺伝子を持つ適切な細胞系と共に、L40株中に形質転換され得る。次いで、該レポーター遺伝子の発現レベルを検出する事によって、阻害が生じたかどうかを検出する事ができる。レポーター遺伝子の発現レベルを検出するための酵母菌のツーハイブリッドシステム等の別の技術も、該技術分野において公知である。更に、工程（a）の接触は、インビトロ、インビボ、および特に、例えば酵母細胞または哺乳類細胞のような適切な細胞内で行われる。哺乳類細胞の例として、マウス繊維芽細胞NIH 3T3、CHO細胞、HeLa細胞、Ltk^-細胞、Cos細胞等が挙げられるが、これらには限定されるものではない。他の適切な細胞には、原核細胞、真核細胞、例えば、細菌細胞（グラム陽性細胞を含む）、菌類細胞、昆虫細胞および他の動物細胞があるが、これらに限定されることはない。更に、シグナル変換蛋白は、細胞表面受容体、シグナル・トランスデューサー蛋白または腫瘍抑制蛋白である。特に、細胞表面蛋白は、Fas受容体であり、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官（これらに限定するものではない）に由来する細胞内で発現され、或いは、Ｔ細胞およびＢ細胞を含む細胞中で発現される。好ましい態様でにおいて、該Ｔ細胞は、ジャーカット（Jurkat）Ｔ細胞である。更に、細胞表面受容体はDC4受容体、p75受容体、セロトニン2A受容体またはセロトニン28受容体である。更に、シグナル変換蛋白はプロテイン・キナーゼ-Ｃ-αタイプであってもよい。更に、腫瘍抑制蛋白は、腺腫症・結腸ポリポーシス腫瘍抑制蛋白または結腸直腸変異癌蛋白であってもよい。更に、細胞質蛋白には、アミノ酸配列SLGI、特にFas関連フォスファターゼ１が含まれる。本発明はまた、上記記載の組成物を含む、癌細胞の増殖を阻害する方法を提供する。ここで、特に、癌細胞は胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官（これらに限定されない）に由来するものであり、或いは、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来するものである。本発明は、上記記載の方法によって特定される化合物を含む癌細胞の増殖を阻害する方法を提供する。ここで、癌細胞は胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等（これらに限定されない）の器官に由来するするか、または該癌細胞はＴ細胞およびＢ細胞に由来する細胞に由来するものである。本発明はまた、被験者中で癌を治療する方法を提供する。該方法は、細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の上記組成物を、被験者の癌性細胞に導入することを具備する。ここで、癌細胞は胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官（これらに限定されるものではない）に由来するか、あるいは、Ｔ細胞またはＢ細胞からなる細胞に由来する。ここで用いる「アポトーシス」の用語は、細胞のプログラムされた細胞死を意味する。プログラムされた細胞死のメカニズムおよび効果は、細胞溶解とは異なる。幾つかアポトーシスの影響として観測されるのは、ＤＮＡが断片化や崩壊で、その結果アポトーシス体と呼ばれる小さな膜結合断片となることである。アポトーシスを生じるために該組成物が効果的かどうかを検出する手段は、従来技術において公知である。一つの手段には、位相差顕微鏡または蛍光顕微鏡を使用して、クロマチンの形態的変化を評価する手段があげられる。本発明はまた、上記の組成物または上記で特定された化合物を含む、ウイルス感染細胞の増殖を阻害する方法を提供する。ここでウイルス感染性細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、１型ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルスまたはＨＩＶを含む。本発明はまた、ウイルスに感染した被験者を治療する方法を提供する。該方法は、被験者のウイルスに感染した細胞に対して、該細胞のアポトーシスを生じるのに効果的な上記組成物または該細胞の自殺を生じるのに効果的な請求項27の上記方法によって特定される化合物を導入する事を具備する。ここで、ウイルス性感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、１型ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルスまたはＨＩＶからなる。該組成物が細胞の自殺を生じるために効果的かどうかを検出する手段は、従来技術において公知である。一つの手段には、位相差顕微鏡または蛍光顕微鏡のいずれかを使用して、クロマチンの形態的変化を評価する事である。本発明はまた、有効量の上記組成物および薬学的に許容可能な担体を含有する薬学的組成物を提供する。本発明はまた、有効量の上記記載の方法で特定された化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含有する薬学的組成物を提供する。本発明は更に、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を保持したシグナル変換蛋白に対して特異的に結合できる組成物を提供する。ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは 20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す。該組成物はアミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F/I/L)を含み、ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離している。好ましい態様において、該組成物は、アミノ酸配列(K/R/Q)-Ｘ_n-(G/S/A/E)-L-G-(F/I/L)を含んでいる。この配列において、Ｘは20の天然に存在するに存在するアミノ酸からなる群から選択されたアミノ酸を表し、ｎは少なくとも２以上で且つ４以下の数を表す。他の好ましい態様において、該組成物はアミノ酸配列SLGIを含む。本発明は更に、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)をもったシグナル変換蛋白に対して結合できる化合物を同定するための方法を提供する。この配列において、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸を表す。該方法は、（a）前記シグナル変換蛋白と複数の化合物とを、シグナル変換蛋白に結合できる事が予め分かっている公知の化合物との間の結合を可能にする条件下で接触させて、錯体を形成することと、（b）工程（a）で形成された錯体を検出して、シグナル変換蛋白と結合できる化合物を同定することとを具備する。特に、この特定された化合物はアミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F/I /L)を含む。更に好ましい態様では、特定された化合物はアミノ酸配列SLGIを含む。更に、上記記載の方法では、シグナル変換蛋白は固体支持物に結合されてもよい。また、前記化合物が固体支持物に結合されてもよく、該化合物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類縁化合物、ポリペプチドまたは蛋白からなる。更に、前記シグナル変換蛋白は、細胞表面受容体またはシグナル・トランスデユーサーであってもよい。特に、シグナル変換蛋白は、Fas受容体、CD4受容体、 p75受容体、セロトニン2A受容体、セロトニン2B受容体またはプロテイン・キナーゼ-C-αタイプであってよい。本発明はまた、上記組成物または上記方法によって特定された化合物を含む、細胞におけるアポトーシスのネガテイブ調節を回復させる方法を提供する。ここで用いる「アポトーシスのネガテイブ調節を復原する」の語句は、細胞をプログラムされた細胞死へと進め得る事を意味する。例えば、機能的Fas受容体およびFas関連フォスファターゼ１を有する細胞は、フォスファターゼによるFasのネガテイブ調節に起因して、プログラムされた細胞死またはアポトーシスへと進行することはない。しかしながら、もし、Fas関連のフォスファターゼ１がFas受容体（（S/T）-X-(V/I/L)領域）のカルボキシル末端に結合できないときは、例えばアミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F/I/L)の少なくとも一つのアミノ酸の突然変異体または欠損体であるときは、細胞はアポトーシスに進む事になる。Fas受容体のカルボキシル末端に結合できる化合物を導入する事によって、機能的フォスファターゼの影響を模倣する事ができ、これによってアポトーシスのネガデイブ調節を復原する事ができる。本発明はまた、上記組成物または上記方法によって特定された化合物を含む、細胞におけるアポトーシスを防ぐ方法を提供する。本発明はまた、上記組成物または上記方法によって特定された化合物を含む、関連細胞のアポトーシスによって引き起こされる病的状態を治療する手段を提供する。以下の実験の詳細のセクションにおいて、本発明を例証する。これらのセクションは、本発明の理解を助けるために記載するものであり、如何なる意味でも後述の請求の範囲に記載されている発明を限定するものではなく、また、限定すると解釈されるべきではない。〔実験の詳細〕第一実験シリーズ＜方法および材料＞１．セミランダムおよびランダム・ペプチド・ライブラリーのスクリーニング制限DNA配列における数多くの突然変異を創造するために、他で記載されているプロトコール（Hill et al.，1987）に従って、縮退オリゴヌクレオチドによるPCRの突然変異が採用された。ヒトおよびラット間の相同性に基づいて、二つの自己相補的配列が、セミランダム・ライブラリーの構築のためにデザインされた。使用された二つのプライマーは、 CCTCA-3'(配列番号30)および CCTCA-3'（配列番号31）であった。簡単に説明すると、HPLCで精製された二つのプライマー（各々200pmol）が、70℃で５分間アニールされ、２３℃で60分間冷却された。クレノーフラグメント（５Ｕ）を使用して、２３℃で60分間、ｄＮＴＰ混合物（各ｃＮＴＰにつき最終濃度１mM）によって埋め込みが行われた。0.5M EDTA１μlによって反応を停止し、該DNAはエタノール沈殿によって精製した。得られた二重鎖DNAをEcoRIおよびBamHIで消化し、非変性ポリアクリルアミド・ゲル上で電気泳動により再精製した。次に、この二重鎖オリゴヌクレオチドを、 pBTM116プラスミドのEcoRI−BamHI部位に連結した。該連結混合物は、プラスミドライブラリー用として、電気穿孔で大腸菌XL1−Blue MRF’（stratagene）中に導入した。大規模形質転換を、先に報告したようにして実施した。プラスミドライブラリーを、FAP−1cDNA（Sato et al .，1995）を含むプラスミドｐＶＰ16−31を担持するＬ40株細胞(MATa，trp1，le u2，his3，ade2，LYS2：（lexAop）²-HIS3，URA3::(lexAop)³-lacZ)中に形質転換した。ヒスチジン欠損培地（His⁺）上に形成されたクローンが、40μg/ｍｌの X-galを含むプレートに移され、プレートおよびフィルター分析を用いて、青色反応産物（β-gal^-）についてのテストが行われた。His⁺およびβ-gal⁺分析によって選択されたクローンを、更なる分析のために試験した。自己相補的オリゴヌクレオチド５’CGGAATTC-(NNN)_4-15-TGAGGATCCTCA-3’（配列番号第32番）を使用して、ランダムペプチドライブラリーが構築された。２．ペプチドの合成ペプチドは、公表された手段（Schnorrenberg and Gerhardt，1989）と同様にして、Advanced ChemTech ACT357上で自動的に合成された。各ランについて、ワング樹脂（0.2-0.3mmolスケール）を使用し、すべてのアミノ酸にＮ^α−Fmoc 保護が採用された。20％ピペリジン/DMFで処置する事により脱保護を行い、DIC/ HOBtに続いてHBTU/DIEAを使用してカップリングを完了させた。最後のアミノ酸をカップリングした後、樹脂上で成長しているペプチドはをAC₂O/DMFでアセチル化した。TEAで処理して全ての保護基を同時に除去する事により、該ペプチドを樹脂から切離した。アセチル化されたペプチドはHPLCで精製され、FAS-MSおよび¹ H―NMRで特徴づけされた。３．FasのＣ末端15アミノ酸を使用したFas/FAP-1結合の阻害分析 BluescriptベクターpSK-II（Stratagene）中にサブクローンされあHEAP-10 cDNA（Sato et al.，1995）は、カップリングされたインビトロ転写/翻訳システム（Promega，TNT溶融物）およびＴ７RNAポリメラーゼを使用して、³⁵Ｓ− Ｌメチオニンの存在下で、内部メチオニン・コドンからインビトロで翻訳された。その結果得られた³⁵Ｓ標識蛋白を、GSTセファロース４Ｂ親和性ビーズ（Pharm acia）上に固定されたGST−Fas融合蛋白と共に、150mM NaCl,50mM Tris[pH8.0]，5mM DTT，2mM EDTA，0.1%NP-40，1mM PMSF，50μg/ml ロイペプチン、１mMベンサミデイン、および７μg/mlペプスタチンを含む緩衝液中において、４℃で16時間インキュベートした。同緩衝液中で４回激しく洗浄した後、会合蛋白は、グルタチオン・セファロース・ビーズと共に遠心分離により回収され、沸騰ラエミリ緩衝液中に抽出され、SDS-PAGEと蛍光写真で分析された。４． Fas末端15アミノ酸の阻害分析および様々なトリペプチドを使用したFas /FAP-1結合の阻害効果インビボで翻訳された[³⁵S]HFAP-1は、NAP-5カラム（Pharmacia）で精製され、GST融合蛋白３μMで、16時間４℃でインキュベートされた。結合緩衝液中で４回洗浄した後、放射能活性の取り込みをｂカウンターで測定した。結合阻害のパーセンテージが次のようにして計算された。阻害％=［ペプチドによるGST-Fas（191―335)を使用した放射能活性取り込み−ペプチドによるGST−Fas（191-320）を使用した放射能取り込み］／[無ペプチドでのGST-Fas（191―335）を使用した放射能取り込み‐無ペプチドでのGST−Fas（191-320）を使用した放射能取り込み]。n=3。５．酵母およびインビトロでのFasのＣ末端トリアミノ酸とFAP−1との相互作用囮プラスミド、pBTM116（lexA）-SLV，-PLV，-SLVおよび-SLAが構築し、pVP 16-FAP-1または-rasを担持するL40株中に形質転換した。ヒスチジン欠損培地上での成長分析のために、各形質転換物から６つの独立クローンがピックアップされた。GST−Fas、-SLV，およびPLVは、GSTセファロース４Ｂ親和性ビーズ（pham acia）で精製した。インビトロ結合のための方法は上記に記載されている。６．天然FasのGST-FAP-1による免疫沈殿およびAc−SLVによるFAS／ FAP−1の結合阻害 FAP−1を伴っ、または伴わないGST融合蛋白を、Fasを発現するジャーカットＴ細胞からの細胞抽出物と共にインキュベートした。結合したFasは、抗Fasモノクローナル抗体（F22120、Transductuion Laboratories）を使用したウエスタン分析によって検出された。トリペプチド、Ac−SLV、およびAc−SLYを、Fas／F AP−1結合の阻害分析のために使用した。７．Ac−SLVのDLD−1細胞系へのマイクロインジェクション DLD-1ヒト結腸癌細胞を、10％FCSを含むRPMI 1640培地で培養した。マイクロインジェクション用として、35ｍｍプラスチック培養皿中の播種濃度１Ｘ１０⁵ 細胞／２mlで、セロケート（CELLocate）（エペンドルフ）上に細胞を播種し、一日生育させた。マイクロインジェクションの直前に、Fasモノクローナル抗体C Hll（MBL international）を500ng/mlの濃度で添加した。すべてのマイクロインジェクション実験は、自動マイクロインジェクションシステム（Eppendorf tran sjector 5246，micro-manipulator 5171およびFemtotips）（Pantel et al.，19 95）を使用して行われた。合成トリペプチドは、0．1％（w/v）FITCデキストラン（Sigma）/K-PBS中に、100mMの濃度で懸濁された。サンプルを、DLD-1細胞の細胞質領域中にマイクロ注入した。インジェクション後16から20時間して、細胞をPBSで洗浄し、PBS中10μg/mlのヘキスト33342で染色した。３７℃で30分インキュベートした後、細胞の写真をとり、濃縮されたクロマチンを示す細胞をアポトーシスとして計測した。８．マイクロインジェクトされたDLD-1細胞中でのアポトーシスの定量化各実験について、25-100の細胞にマイクロインジェクションを行った。マイクロインジェクションされた細胞のアポトーシスは、位相差および蛍光顕微鏡（ Wang et al.，1995、McGahon et al.，1995）を使用し、クロマチンの形態学的変異を評価する事によって測定された。データは、２または３の独立した測定についての平均+/-S.D.である。＜考察＞ FAP-1結合に必要とされるFas受容体のＣ末端領域における最小ペプチド長さを特定するために、一連の合成ペプチド並びに酵母のツーハイブリッドシステム・ペプチド・ライブラリー（図2A）を使用して、Fas/FAP-1結合のインビトロの阻害分析が用いられた。第一に、LexA DNA結合ドメインと融合させた15アミノ酸のセミランダムライブラリー（ヒトおよびラットのFasの間の相同性基づくもの）（図2Bおよび2c）が構築され、元々はFAP-1として単離されたpVP16−31（Sato et al.，1995）と共に酵母菌株L4０中に共形質転換された。5.0x10⁶形質転換体（Johnson et al.，1986）の初期スクリーン物から200のHis⁺コロニーを選択した後、βガラクトシダーゼ陽性である100コロニーを更なる分析のためにピックアップした。Ｃ末端15アミノ酸をコードするライブラリープラスミドの配列分析によって、全てのＣ末端はバリン、ロイシンまたはイソロイシン残基の何れかである事が解明された。第二に、LexADNA結合ドメインに融合された4-15アミノ酸のランダム・ライブラリーが構築され、本手法に従ってスクリーンされた（図 2D）。驚くべき事に、末端から三番目のアミノ酸残基は全てセリンであり、Ｃ末端アミノ酸分析の結果は、セミランダムcDNAライブラリーのスクリーニングと同等であった。これらのライブラリースクリーニングにおいて、他に重要なアミノ酸配列は見つからなかった。この事は、最後の３つのアミノ酸（t s-X-V/L/I）のモチーフが、FAP-1の第三のPDZドメインに対する会合に極めて重要であり、蛋白・蛋白相互作用、並びにFasに誘導されるアポトーシスの調節に決定的な役割を果たすことを示唆している。最後の３つのアミノ酸がFas/FAP-1の結合に必要かつ十分であるかどうかを更に確定するために、LexA-SLV，-PLV，-PLY，-SLY， -SLA融合蛋白のプラスミドを構築され、pVP16-FAP-1と共に酵母中に共トランスフェクトされた。その結果、LexA-SLVだけがFAP-1に会合し、LexA-PLV，-PLY、- SLY,および-SLAは会合しないことが分かった（図４Ａ）。種々のGSTトリペプチド融合およびインビトロで翻訳されたFAP-1を使用したインビトロ結合研究において、これらの結果は一致していた（図４Ｂ）。また、酵母のツーハイブリッドアプローチに加えて、Fas/FAP-1結合のインビトロ阻害分析も用いられた。第一に、Ｃ末端15アミノ酸の合成ペプチドが、Fas およびFAP-1の結合をインビトロで阻害し得るかどうかがテストされた(図3A)。インビトロで翻訳されたFAP-1とGST-Fasとの結合は劇的に低下し、またFasの合成15アミノ酸の濃度に依存していた。これらの結果とは対照的に、ネガテイブ・コントロールであるヒトPAMPペプチド（Kitamura et al.，1994）は、同じ生化学条件下でFas/FAP-1結合活性に対して何の影響ももたらさなかった。第二に、F as/FAP-1インビトロ結合に対する、先端切除されたFas Ｃ末端合成ペプチドの影響を調べた。図３に示すように、FAP-1のFasにとの結合に対して、4−15の合成ペプチドで行なわれたと同レベルの阻害効果を得るために、３つのＣ末端アミノ酸（Ac-SLV）のみで十分であった。更に、スキャンされたトリペプチドを使用してFas/FAP-1結合を広範に調査し、阻害に必要とされる重要なアミノ酸を決定した（図３Ｃ）。その結果、Ｃ末端からの三番目のアミノ酸残基および最も強い阻害効果を持つＣ末端アミノ酸は、夫々セリンまたはスレオニンのいずれかと；バリン、ロイシン、イソロイシンのいずれかである事がわかった。しかしながら、Ｃ末端からの二番目のアミノ酸残基間には、Fas/FAP-1結合に与える阻害効果についての差異は何もなかった。これらの結果は、酵母のツーハイブリッドシステム（図２Ｃおよび２Ｄ）の結果と一致していた。よって、Ｃ末端の３つのアミノ酸（SLV）が、FasとFAP-1蛋白の第三PDZドメインとの結合にとって著しく重要な決定因子である事が結論づけられた。更に、PDZドメインが更に自然な条件下でts/T-X-V/L/Iと相互作用する事を立証するために、GST融合FAP-1蛋白が、ジャーカットＴ細胞中で発現されるFasと相互作用する能力について試験した。その結果、Ac-SLYではなくトリペプチドAc -SLVが、その投与量に依存した形で、ジャーカットＴ細胞から抽出されたFas蛋白に対するFAP-1の結合活性を破壊する事が明らかになった（図4Cおよび4D）。このことによって、Ｃ末端アミノ酸tSLVが、FAP-1の最小結合部位であること、および、アミノ酸セリンおよびバリンがこの物理的会合に重要であることが示唆される。次に、FAP-1のFas媒介性シグナル変換のネガテイブ・レギュレータとしてのインビボ機能には、FasのＣ末端の３つのアミノ酸とFAP-1の第三PDZドメインとの間の生理学的会合が不可欠であるという仮説を調べるために、FasおよびFAP-1の両者を発現し且つFas誘導アポトーシスに対して抵抗性である結腸癌細胞系DLD-1 において、合成トリペプチドのマイクロインジェクション実験が行なわれた。この実験では、単−細胞の細胞質頭域への合成トリペプチドの直接マイクロインジェクション、およびFasに誘導されたアポトーシスに対する生理学的反応のインビボでのモニタリングが行われた。その結果、Ac-SLVをDLD-1細胞へマイクロインジェクションすると、Fasモノクローナル抗体(CHll、500ng/ｍｌ)（図5A，5E および図6）の存在下においてアポトーシスが劇的に誘導されるが、Ac-SLYおよびPBS/Kのマイクロインジェクション（図5B，5F、および図6）では誘導されない事が分かった。これらの結果は、FAP-1とFasのＣ末端との物理的会合が、Fasに誘導されるアポトーシスから細胞を防御するために必要不可欠であるという仮説が強力に支持している。要するに、FasのＣ末端SLVのみが、FAP-1の第三PDZドメインに対して結合するために必要かつ十分である事が分かった。第二に、PDZドメインに対するこのような結合について、ts/T-X-Vに代わる、ts/T-X-V/L/Iという新たなコンセンサス・モチーフが提示された。従って、FAP-1は、Fasと物理的に相互作用することに加えて、シグナル変換経路のモジュレーションにも重要な役割を果たす可能性がある。第三に、トリペプチドAc-SLVを直接マイクロインジェクションする事により、結腸癌細胞におけるFas媒介性誘導がターゲッティングされることが実証された。更に、FAP-1の基質の特定および構造・機能分析を含めた調査によって、F as/FAP-1癌における相互作用を治療に応用する可能性に関する洞察がもたらされたのみならず、FAP-1のFasに媒介されるシグナル変換の阻害効果のより良い理解が与えられるであろう。第二実験シリーズ FAP-1はもともと、FasのＣ末端に結合し且つ６つのPDZドメイン(DHRドメインまたはGLGF繰り返しとしても知られる)を有する、膜関連蛋白チロシン・ホスファターゼとして同定された。PDZドメインは、最近、特異的な蛋白／蛋白の相互作用に対する新規モジュールとして知られており、膜蛋白の組み立てまたは多蛋白複合体におけるシグナル分子の連結に重要であると思われる。近年の包括的研究において、FAP-1の第三PDZドメインは配列モチーフt(S/T)-X-Vを特異的に認識し、FasのＣ末端における３つのアミノ酸SLVと相互作用することが分かった（図９）。FAP-1もまたp75NGFRのＣ末端（図８）と相互作用するという可能性を調査するために、インビトロ結合分析を行うと共に、一連のp75NGFRの欠損変異体を使用したツーハイブリッド分析を行った。その結果、全て腫間で高い保存性を有するp75NGFRのＣ末端細胞質領域が、FAP-1と相互作用する事が明らかになった（図10）。更に、p75NGFRのＣ末端における３つのアミノ酸SPVは、FAP-1の第三PDZ ドメインとの相互作用に必要かつ十分であった（図11Aおよび11B）。FAP-1発現が胎児脳で最高であることがわかったので、これらの知見は、FAP-1とp75NGFRとの相互作用が、神経細胞におけるp75NGFR経由のシグナル変換経路にとって、並びにp75NGFRについての初期シグナル変換複合体の形成において重要な役割を果たすことを示唆している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 5/10 ＺＮＡＣ０７Ｋ 7/06 7/06 7/08 7/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者柳澤純東京都文京区弥生１―１―１、東京大学分子細胞生物学研究所内

Claims

【特許請求の範囲】１．シグナル変換蛋白とアミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F-I/L)を含む細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる組成物［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離している］。２．請求項１の組成物であって、前記細胞質蛋白はアミノ酸配列（K/R/Q）- X_n-(G/S/A/E)-L-G-(F/I/L)を含んでいる組成物［ここで、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群から選択されたアミノ酸を表し、ｎは少なくとも２以上かつ４以下の数を表す］。３．請求項１の組成物であって、前記細胞質蛋白がアミノ酸配列SLGIを含む組成物。４．請求項１の組成物であって、前記シグナル変換蛋白は、そのカルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を有する組成物［ここで、各 ‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括ってり、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す］。５．請求項１の組成物であって、該組成物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類似化合物、ポリペプチド、または蛋白を含有する組成物。６．請求項５の組成物であって、前記ペプチドは配列（S/T）-X-(V/I/L)-CO OHからなる組成物［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す］。７．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列 DSENSNFRNEIQSLVを有する組成物。８．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列RNEIQSLVを有する組成物。９．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列NEIQSLVを有する組成物。 10．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列EIQSLVを有する組成物。 11．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列IQSLVを有する組成物。 12．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列QSLVを有する組成物。 13．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列SLVを有する組成物。 14．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列IPPDSEDGNEEQ SLVを有する組成物。 15．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列DSEMYNFRSQLA SVVを有する組成物。 16．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列IDLASEFLFLSN SFLを有する組成物。 17．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列PPTCSQANSGRI STLを有する組成物。 18．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列SDSNMNMNELSE Vを有する組成物。 19．請求項６の組成物であって、前記該ペプチドはアミノ酸配列QNFRTYIVSF Vを有する組成物。 20．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列RETIESTVを有する組成物。 21．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列RGFISSLVを有する組成物。 22．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列TIQSVIを有する組成物。 23．請求項６の組成物であって、前記ペプチドはアミノ酸配列ESLVを有する組成物。 24．請求項６の組成物であって、該有機化合物は、配列Ac-SLV-COOHを有する組成物［ここで、Acはアセチルを表し、各‐はペプチド結合を表す］。 25．カルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を有するシグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる組成物［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す］。 26．請求項25の組成物であって、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類似化合物、ポリペプチド、または蛋白を含有する組成物。 27．シグナル変換蛋白と、アミノ酸配列（G/S/A/E）-L-G-(F-I/L)を含む細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害する事ができる化合物を同定するする方法［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離している］であって：（a）シグナル変換蛋白と結合した細胞質蛋白と複数の化合物とを、細胞質蛋白に結合しているシグナル変換蛋白を置換できる事が予め分かっている公知の化合物および結合された細胞質蛋白の間の結合を可能にする条件下で接触させて、錯体を形成することと；（b）置換されたシグナル変換蛋白または工程（a）で形成された錯体を検出することとを具備し、前記置換によって、前記化合物が前記シグナル変換蛋白と前記細胞質蛋白間の特異的結合を阻害できる事が示される方法。 28．請求項27の方法であって、前記シグナル変換蛋白と前記細胞質蛋白の間の特異的結合の阻害がレポーター遺伝子の転写活性に影響する方法。 29．請求項28の方法であって、前記工程（ｂ）では、置換された前記シグナル変換蛋白または前記錯体が、工程（ａ）における化合物との接触の前後における前記レポーター遺伝子の転写活性を比較する事によって検出され、該活性の変化によって、シグナル変換蛋白と細胞質蛋白間の特異的結合が阻害され、シグナル変換蛋白が置換された事が示される方法。 30．請求項27の方法であって、前記細胞質蛋白が固体支持体に結合される方法。 31．請求項27の方法であって、前記化合物が固体支持体に結合される方法。 32．請求項27の方法であって、該化合物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類似化合物、ポリペプチド、または蛋白からなる方法。 33．請求項27の方法であって、前記工程（a）での接触はインビトロで行われる方法。 34．請求項27の方法であって、前記工程（a）での接触はインビボで行われる方法。 35．請求項34の方法であって、前記工程（a）での接触は酵母細胞中で行われる方法。 36．請求項34の方法であって、工程（a）の接触は、哺乳類細胞中で行われる方法。 37．請求項27の方法であって、前記シグナル変換蛋白は細胞表面受容体である方法。 38．請求項27の方法であって、前記シグナル変換蛋白はシグナル・トランスデユーサー蛋白である方法。 39．請求項27の方法であって、前記該シグナル変換蛋白は腫瘍抑制蛋白である方法。 40．請求項37の方法であって、前記細胞表面蛋白はFas受容体である方法。 41．請求項40の方法であって、前記Fas受容体は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する細胞内で発現される方法。 42．請求項40の方法であって、前記Fas受容体はＴ細胞およびＢ細胞からなる細胞中で発現する方法。 43．請求項37の方法であって、前記細胞表面受容体はCD4受容体である方法。 44．請求項37の方法であって、前記細胞表面受容体はp75受容体である方法。 45．請求項37の方法であって、前記細胞表面受容体はセロトニン2A受容体である方法。 46．請求項37の方法であって、前記細胞表面受容体はセロトニン2B受容体である方法。 47．請求項38の方法であって、前記シグナル・トランスデユーサー蛋白はプロテイン・キナーゼ-C-α型である方法。 48．請求項39の方法であって、前記腫瘍抑制蛋白は、腺腫症・結腸ポリポーシス腫瘍抑制蛋白である方法。 49．請求項39の方法であって、前記腫瘍抑制蛋白は、結腸直腸変異癌蛋白である方法。 50．請求項27の方法であって、前記細胞質蛋白はアミノ酸配列SLGIを含む方法［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離している］。 51．請求項40の方法であって、前記細胞質蛋白は、Fas関連フォスファターゼ１型である方法。 52．カルボキシル末端にアミノ酸配列（S/T）-X-(V/I/L)を有するシグナル変換蛋白と、細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害することができる化合物を同定する方法［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離しており、Ｘは20の天然に存在するアミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸を表す］であって：（a）細胞質蛋白に結合したシグナル変換蛋白と複数の化合物とを、シグナル変換蛋白に結合した細胞質蛋白を置換できる事が予め分かっている公知の化合物および結合したシグナル変換蛋白との間の結合を可能にする条件下において接触させ、錯体を形成することと；（b）置換された細胞質蛋白または工程（a）で形成された錯体を検出することとを具備し、前記置換によって、前記化合物がシグナル変換蛋白と細胞質蛋白との間の特異的結合を阻害できる事がを示される方法。 53．請求項52の方法であって、前記シグナル変換蛋白と前記細胞質蛋白との間の特異的結合の阻害が、レポーター遺伝子の転写活性に影響する方法。 54．請求項53の方法であって、前記工程（ｂ）では、置換された細胞質蛋白または錯体が、前記工程（ａ）での化合物との接触の前後における前記レポーター遺伝子の転写活性を比較する事によって検出され、該活性の変化によって、前記シグナル変換蛋白と前記細胞質蛋白との間の特異的結合が阻害され、前記細胞質蛋白が置換された事が示される方法。 55．請求項52に記載の方法であって、前記細胞質蛋白が固体支持体に結合される方法。 56．請求項52に記載の方法であって、前記化合物が固体支持体に結合される方法。 57．請求項52の方法であって、前記化合物は、抗体、無機化合物、有機化合物、ペプチド、ペプチド類似化合物、ポリペプチド、または蛋白からなる方法。 58．請求項52の方法であって、前記工程（a）における接触がインビトロで行われる方法。 59．請求項52の方法であって、前記工程（a）における接触がインビボで行われる方法。 60．請求項59の方法であって、前記工程（a）における接触が、酵母細胞中で行われる方法。 61．請求項59の方法であって、前記工程（a）における接触が、哺乳類細胞中で行われる方法。 62．請求項52の方法であって、前記シグナル変換蛋白が細胞表面受容体である方法。 63．請求項52の方法であって、該シグナル変換蛋白がシグナル・トランスデユーサー蛋白である方法。 64．請求項52の方法であって、ぜっｍぉシグナル変換蛋白が腫瘍抑制蛋白である方法。 65．請求項62の方法であって、該細胞表面蛋白がFas受容体である方法。 66．請求項65の方法であって、前記Fas受容体は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する細胞内で発現される方法。 67．請求項65の方法であって、前記Fas受容体は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞中で発現される方法。 68．請求項62の方法であって、前記細胞表面受容体がCD4受容体である方法。 69．請求項62の方法であって、前記細胞表面受容体がp75受容体である方法。 70．請求項62の方法であって、前記細胞表面受容体がセロトニン2A受容体である方法。 71．請求項62の方法であって、前記細胞表面受容体がセロトニン2B受容体である方法。 72．請求項63の方法であって、前記シグナル・トランスデユーサー蛋白がプロティン．キナーゼ-C-α型である方法。 73．請求項64の方法であって、前記腫瘍抑制蛋白は、腺腫症・結腸ポリポーシス腫瘍抑制蛋白である方法。 74．請求項64の方法であって、前記腫瘍抑制蛋白は、結腸直腸変異癌蛋白である方法。 75．請求項52の方法であって、前記細胞質蛋白がアミノ酸配列SLGIを含む方法［ここで、各‐はペプチド結合を表し、各括弧は互いに代替可能なアミノ酸を括っており、このような括弧内の各スラッシュは代替可能なアミノ酸を分離している］。 76．請求項52の方法であって、前記細胞質蛋白は、Fas関連フォスファターゼ１型である方法。 77．請求項１の組成物を含む、癌細胞の増殖を阻害する方法。 78．請求項77の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 79．請求項77の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 80．請求項25の組成物を含む、癌細胞の増殖を阻害する方法。 81．請求項80の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 82．請求項80の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 83．請求項27の方法によって同定された化合物を含む、癌細胞の増殖を阻害する方法。 84．請求項83の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 85．請求項83の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 86．請求項52の方法によって同定された化合物を含む、癌細胞の増殖を阻害する方法。 87．請求項86の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器器官に由来する方法。 88．請求項86の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 89．被験者において癌を治療する方法であって、被験者の癌性細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の請求項１の組成物を導入する事を具備した方法。 90．請求項89の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 91．請求項89の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 92．被験者において癌を治療する方法であって、被験者の癌性細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の請求項25の組成物を導入する事を具備した方法。 93．請求項92の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 94．請求項92の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 95．披験者において癌を治療する方法であって、被験者の癌性細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の請求項27の方法により同定された化合物を導入する事ヲ具備する方法。 96．請求項95の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 97．請求項95の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 98．被験者において癌を治療する方法であって、被験者の癌性細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な量の請求項52の方法により同定された化合物を導入する事を具備した方法。 99．請求項98の方法であって、前記癌細胞は、胸腺、肝臓、腎臓、結腸、卵巣、胸部、精巣、脾臓、胃、前立腺、子宮、皮膚、頭、および首等の器官に由来する方法。 100．請求項98の方法であって、前記癌細胞は、Ｔ細胞およびＢ細胞からなる細胞に由来する方法。 101．請求項１の組成物を含有する、ウイルス感染した細胞の増殖を阻害する方法。 102．請求項25の組成物を含有する、ウイルス感染した細胞の増殖を阻害するる方法。 103．請求項27の方法によって同定された化合物を含む、ウイルス感染した細胞の増殖を阻害する方法。 104．請求項52の方法によって同定された化合物を含む、ウイルス感染した細胞の増殖を阻害する方法。 105 請求項101の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 106 請求項102の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 107 請求項103の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 108 請求項104の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 109 ウイルスに感染した被験者を治療する方法であって、該被験者のウイルスに感染した細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な請求項１の組成物を導入することを具備した方法。 110 ウイルスに感染した被験者を治療する方法であって、該被験者のウイルスに感染した細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な請求項 25の組成物を導入することを具備した方法。 111 ウイルスに感染した被験者を治療する方法であって、該被験者のウイルスに感染した細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な請求項 27の方法により同定された化合物を導入することを具備した方法。 112 ウイルスに感染した被験者を治療する方法であって、該被験者のウイルスに感染した細胞に、該細胞のアポトーシスを生じるのに有効な請求項 52の方法により同定された化合物を導入することを具備した方法。 113 請求項109の方法であって、前記ウィルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 114 請求項110の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 115 請求項111の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 116 請求項112の方法であって、前記ウイルス感染細胞は、Ｂ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザ・ウイルス、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス１型またはＨＩＶからなる方法。 117．有効量の請求項１の組成物と、薬学的に許容可能な担体とを含有する薬学的組成物。 118．有効量の請求項25の組成物と、薬学的に許容可能な担体とを含有する薬学的組成物。 119 有効量の請求項27の方法にり同定された化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含有する薬学的組成物。 120 有効量の請求項52の方法により同定された化合物と、薬学的に許容可能な担体とを含有する薬学的組成物。