JP2001504097A

JP2001504097A - Ｐ２ｙレセプターアンタゴニスト

Info

Publication number: JP2001504097A
Application number: JP52080798A
Authority: JP
Inventors: ボイヤー，ホセ・エル; ハーデン，ティー・ケンドール; ジェイコブソン，ケネス・エイ; カマイオーニ，エミディオ
Original assignee: ザ・ユニヴァーシティ・オブ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル
Priority date: 1996-10-30
Filing date: 1997-10-23
Publication date: 2001-03-27
Also published as: CA2241687A1; WO1998018430A2; WO1998018430A3; EP0929218A2; EP0929218A4; AU5584698A

Abstract

(57)【要約】 ATPおよびUTPから誘導される新規P2Yレセプターアンタゴニストが記載されている。P2Yレセプターにおいて競合的アンタゴニスト活性を有するP2Yレセプターアンタゴニストは、特に、P2Y₁レセプターに選択的に結合するP2Yレセプターアンタゴニストと記載される。本明細書には、生物学的サンプル中のP2Yレセプターを検出する方法も記載されている。

Description

【発明の詳細な説明】 P2Yレセプターアンタゴニスト連邦支持の記述本発明は、国立予防衛生研究所のアメリカ公衆衛生局からの認可番号GU38213 、GM29536およびHL54889のもと、政府支持により行われた。政府は、本発明の一定の権利を有する。関連出願本発明は、1996年10月30日に出願された米国仮出願60/029,855号の優先権を主張する。発明の分野本発明は、P2Yプリンレセプターのアンタゴニストである化合物に関し、特に、P2Yプリンレセプターにおいて競合的アンタゴニスト活性を有するアンタゴニストに関する。発明の背景細胞外アデニンおよびウリジンヌクレオチドは、Gタンパク質結合性イオンチャネルレセプター及びリガンド作動性イオンチャネル(ligand-gated ion channe l)レセプターの種々の集合により広範囲の生理学的反応を制御する。G．Burnsto ck著，Prog．Biochem．Pharmacol．第16巻,141頁〜154頁(1980年);G．R．Dubyak ，G．R.，およびC．EI-Moatassim著，Am．J．Physiol．第265巻,C577頁〜C606頁 (1993年);T．K．Hardenら著.，Ann．Rev．Pharmacol．Toxicol．第35巻,541頁〜 579頁(1995年)参照。複数レセプターサブタイプの詳細な解析は、初めに、ヌクレオチド類似体への組織およびアゴニスト特異的な生理学的反応から生じた。しかしながら、アデニンおよびウリジンヌクレオチドに反応する分子種の複雑さが、近年、約12の異なるP2レセプター遺伝子のクローニングのレポートにおいて強調されている。T．K．Hardenら著.，Ann．Rev．Pharmacol．Toxicol．第35巻,541 頁〜579頁(1995年).;B．B．Fredholm著，Pharmacol．Rev．第46巻,143頁〜156頁 (1994年)を参照。P2レセプターの薬理学的および遺伝学的な特徴づけに続いて、 ATPが、神経および多くの他の組織から放出された細胞外シグナル分子として広く受け入れられている。B．B．Fredholmら著．，Pharmacol．Rev．第46巻,143頁〜156頁(1994年)。アデニンヌクレオチドが、P2Yスーパーファミリーのリガンド作動性イオンチャンネルおよびP2YスーパーファミリーのGタンパク質結合性レセプターの両方を活性化する。M．P．Abbracchioら著.，Pharmacol．Therap．第64 巻,445頁〜475頁(1994年)。さらに、ウリジンヌクレオチドは、P2Yレセプターの特定のサブタイプにおいてアゴニストとして作用する。S．E．O'Connorら著.,Tr ends．Pharmacol．Sci．第12巻,137頁〜141頁(1991年);J．M．Boeynaemsら著.， P2 Purinoreceptors:Iocalization，Function and transduction mechanisms，( John Wiley & Sons，Chichester，England)(Ciba Foundation Symposium 198)26 6頁〜277頁(1996年)。細胞外ATPは、多数の生理学的機能の制御の原因であると知られているので、ヌクレオチドにより活性化されるレセプターへの特異的な競合的レセプターは、価値のある治療用途の可能性を有している。P2レセプター中に選択性を示すアデニンヌクレオチド類似体の同定が進歩したが、これらのレセプターのアンタゴニストの有用性は制限されている。反応性ブルー２およびスラミンの二つの化合物が、一般的P2レセプターアンタゴニストとして利用されていた。近年、ピリドキサルリン酸類似体であるPPADSが、特定のP2レセプターの競合的アンタゴニストとしての選択性を示すことが報告された。G．Lambrechtら著，Eur．J．Pharmaco l．第217巻,217頁〜219頁(1992年));A．U．Ziganshinら著，Br．J．Pharmacol．第110巻,1491頁〜1495頁(1993年)。化合物2-プロピルチオ-β，γ-ジフルオロメチレン -D-ATPが、血小板上のADPレセプターの比較的親和性の高いアンタゴニストであることも報告された。R．G．Humphriesら著.，Trends Pharmacol．Sci．第16巻, 179頁〜181頁(1995年);R．G．Humphriesら著.，Br．J．Pharmacol．第113巻,105 7頁〜1063頁(1994年)。しかしながら、これらの分子の大部分が、アデニンヌクレオチド制御レセプターシグナルに関係しない広範囲のタンパク質と相互反応する点において不利なことに非選択的である。発明の要約本発明は、P2Yレセプターの部分的アゴニスト（および結果的に、競合的アンタゴニスト）であるとわかったATPおよびUTPの2'-ホスフェートおよび3'-ホスフェート誘導体の初期の発見に基づくものである。特に、アデノシン3',5'-ビスホスフェートおよび2',5'-ビスホスフェートは、P2Y₁レセプターにおいて競合的アンタゴニストとして作用することがわかった。この群の類似体の一部が、ヒトP2 Y₁レセプターにおける部分的アゴニスト活性無しに潜在的な競合的アンタゴニスト活性を有することが最近発見された。通常、これらの化合物は、例えば、ホスフェート基およびリボース基上のアデニン環の2-位、6-位および8-位において種々の構造的修飾を含む2'-デオキシアデノシンビスホスフェートおよび3'-デオキシアデノシンビスホスフェートおよび2'-デオキシウリジンビスホスフェートおよび3'-デオキシウリジンビスホスフェートの類似体であると記載することができる。重要なことに、本発明の化合物は、ATPよりも、P2Y₁レセプターとの相互作用の親和性が明らかに高く、他の4つのGタンパク質結合性P₂レセプターサブタイプを超えて、P2Y₁レセプターへの絶対的選択性を示す。すなわち、本発明の第1の態様は、下記式Ｉで示される新規化合物および薬学的に許容できるその塩である。式中、ｍは１、２または３であり、１が好ましく、ｎは１、２または３であり、１が好ましく、ｐは０または１であり、１が好ましく、ｑは０、１、２または３であるが、ｐが０の場合には、ｑは０でなく、 R₁はH、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシおよびアルキルチオからなる群より選択され、Hが好ましく、 R₂はヒドロキシ、ハロゲン、アルキルチオ、低級アルキル、置換低級アルキルおよび-NR'R''からなる群より選択され、ここでR'およびR''は、H、低級アルキル、アロイル、アルコキシ、置換低級アルキル、アルコキシおよびアルコキシアルキルからなる群より、それぞれ独立に選択され、 R₃はH、ハロゲンおよび低級アルキルからなる群より選択され、Hが好ましく、 R₄はHおよび低級アルキルからなる群より選択され、Hが好ましく、 X₁はO、S、NおよびCH₂からなる群より選択され、Oが好ましく、 X₂、X₃およびX₄は、H、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシ、ホスフェート、チオホスフェート、カルボキシレートおよびニトロからなる群より、それぞれ独立に選択されるか、またはX₂およびX₃が一緒になってシクロホスフェートを形成し、ホスフェートが好ましい。本発明の第２の態様は、下記式IIで示される新規化合物および薬学的に許容できるその塩である。式中、ｍは１、２または３であり、１が好ましく、ｎは１、２または３であり、１が好ましく、ｐは０または１であり、１が好ましくｑは０、１、２または３であるが、ｐが０の場合には、ｑは０でなく、 R₁はH、低級アルキルおよびハロゲンからなる群より選択され、Hが好ましく、 R₂はHおよび低級アルキルからなる群より選択され、Hが好ましく、 X₁はO、S、NおよびCH₂からなる群より選択され、Oが好ましく、 X₂、X₃およびX₄は、H、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシ、ホスフェート、チオホスフェート、カルボキシレートおよびニトロからなる群より、それぞれ独立に選択されるか、またはX₂およびX₃が一緒になってシクロホスフェートを形成し、ホスフェートが好ましい。本発明の第3の態様は、P2Yレセプターを含むと思われる生物学的サンプル中の P2Yレセプターを検出する方法であって、P2Yレセプターに選択的に結合する本発明の化合物に前記生物学的サンプルを接触させるステップと、つづいて、生物学的サンプル中のレセプターへP2Yレセプターに結合している化合物の結合の有無を検出するステップとを含んでなる方法である。ここで、結合の存在はP2Yレセプターが存在することを示す。本発明のさらなる態様は、細胞外アデニンまたはウリジンと相互作用するシグナルタンパク質を干渉する化合物による治療に反応する疾患（ATP誘発性血管収縮、膀胱疾患、前立腺疾患、甲状腺機能亢進、高インシュリン血症、および副腎皮質ホルモンの過剰生産に特徴付けられる疾患を含む）を治療する方法であって、そのような治療を必要としている患者に、前述のような本発明の化合物を、疾患の治療に充分な量で添加するステップを含んでなる方法である。本発明の最後の態様は、細胞外アデニンまたはウリジンヌクレオチドにより利用されるシグナルタンパク質を干渉する化合物による治療に反応性であることにより特徴付けられる疾患の治療において有用な薬剤組成物であって、薬学的に許容できるキャリアー中に本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩を疾患の治療に充分な量で含んでなる組成物である。本発明の前記および他の目的および態様を、本明細書の図および、下記の明細書により詳細に説明する。図面の簡単な説明図面において、データは2回または3回検定の平均であり、その結果は、少なくとも3回繰り返された実験において得られたものを表す。図1は、シチメンチョウ赤血球膜によるイノシトール脂質加水分解への硫酸塩置換アデニンヌクレオチド類似体の効果を示すグラフである。示された濃度の2M eSATP(黒丸)、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェート(白丸)、ADP( 白ひし形)、およびアデノシン5'-ホスホスルフェート(黒ひし形)が、シチメンチョウ赤血球膜によるイノシトール脂質の加水分解を刺激する性能は、後で例３において説明するように決定した。図2は、シチメンチョウ赤血球におけるホスホリパーゼＣのＰ２Ｙレセプターを介した活性化に対するアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートの効果を示すグラフである。[³H]イノシトール標識化シチメンチョウ赤血球膜を、 1nM(白丸)、3nM(黒ひし形)、10nM(白ひし形)、30nM(黒三角)、100nM(白三角)、3 00nM(黒四角)および1000nM(白四角)の2MeSATPの存在下または非存在下(黒丸)に、指示された濃度のアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートと共にインキュベートした。図3は、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン 3',5'-ビスホスフェートによるP2Yレセプターの2MeSATPを介した活性化の競合的抑制を示すグラフである。[³H]イノシトール標識化シチメンチョウ赤血球膜を、 0.1μM(白丸)、0.3μM(黒三角)、1μM(白三角)、3μM(黒四角)、10μM(白四角) 、30μM(黒円)、100μM(白円)、300μM(黒ひし形)および1000μM(白ひし形)のアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェート(パネルA)またはアデノシン3' ,5'-ビスホスフェート(パネルC)の存在下または非存在下(黒円)に、指示された濃度の2MeSATPと共にインキュベートした。アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートまたはアデノシン3',5'-ビスホスフェートのみにより誘発されたイノシトールホスフェートの蓄積量を、指示濃度の2MeSATPの存在下の場合の蓄積量から引いた。パネルAおよびCに示すデータのシルド(Schild)回帰分析をパネルBおよびDにそれぞれ示す。図4は、シチメンチョウ赤血球膜におけるβ-アドレナリンレセプターによるホスホリパーゼＣの活性化に対するアデノシン3',5'-ビスホスフェートの効果を示すグラフである。イソプロテレノール10μMの存在下(黒ひし形)または非存在下( 白ひし形)においてイノシトールホスフェートの蓄積を刺激する、指示濃度のアデノシン3',5'-ビスホスフェートの性能を、後で例８に記載するように決定した。図5は、アデノシン3',5'-ビスホスフェートが、1321N1ヒト星状細胞腫細胞において安定して発現されるヒトP2Y₁レセプターにおけるアゴニスト活性のない競合的アンタゴニストであることを示すグラフである。パネルAにおいて、細胞を、10nM(黒ひし形)、30nM(黒三角)、100nM(白三角)、300nM(黒四角)および1000nM (白四角)の2MeSATPの存在下または非存在下(白丸)に、指示された濃度のアデノシン3',5'-ビスホスフェートと共にインキュベートした。パネルBにおいて、132 1N1細胞中におけるホスホリパーゼＣの活性化に対する2MeSATPの濃度依存性を、 0.3μM(白ひし形)、1μM(黒三角)、3μM(白三角)、10μM(黒四角)、30μM(白四角)、100(黒ひし形)および300μM(白円)のアデノシン3'，5'-ビスホスフェートの存在下または非存在下(黒丸)において決定した。パネルCは、パネルBに示すデータのシルド回帰分析を示す。傾きの値は、一定値からあまり変わらない。図6は、C6細胞のアデニリルシクラーゼ結合性P2Yレセプターに対する、アデノシン3',5'-ビスホスフェートのアゴニストまたはアンタゴニスト作用を示すグラフである。イソプロテノール刺激性の環状AMP蓄積を抑制する指示濃度の2MeSATP の性能(パネルA)、または10μMイソプロテレノール(白ひし形)または10μMイソプロテレノール＋1nMの2MeSATP(黒ひし形)が誘発する環状AMPの蓄積の反応に作用するアデノシン3',5'-ビスホスフェートの性能(パネルB)を例10に記載のように研究した。図7は、シチメンチョウ赤血球膜におけるホスホリパーゼＣに対するデオキシアデノシンビスホスフェート誘導体の効果を示すグラフである。イノシトールホスフェート形成の濃度依存刺激、および化合物2'-デオキシアデノシン-3'，5'- ビスホスフェート(化合物4)(三角)および3'-デオキシアデノシン2'，5'-ビスホスフェート(化合物17)(円)によるその刺激を観察した。[³H]イノシトール標識化赤血球の膜を、指示濃度の４および17の単独（白）または10nMの2-MeSATPとの組み合わせ（黒）の存在下において30℃で5分間インキュベートした。図８は、アデノシンおよび2'-デオキシアデノシンビスホスフェート誘導体のN⁶ -アルキル類似体の、シチメンチョウ赤血球膜におけるアゴニスト刺激性ホスホリパーゼＣに対する作用を示すグラフである。[³H]イノシトール標識化赤血球の膜を、10nMの2-MeSATP、および指示濃度の化合物2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン3'，5'-ビスホスフェート(化合物9,四角)、2'-デオキシ-N⁶-エチルアデノシン-3'，5'-ビスホスフェート(化合物10,三角)、２'-デオキシ-N⁶-プロピルアデノシン-3'，5'-ビスホスフェート(化合物11,ひし形)、2'-デオキシ-N⁶-ジメチルアデノシン3'，5'-ビスホスフェート(化合物13,アスタリスク)および2'-デオキシ-N⁶-アミノヘキシルアデノシン-3'，5'-ビスホスフェート(化合物23,円)の存在下において30℃で5分間インキュベートした。図９は、対照(円)、または0.1μM(ひし形)、0.3μM(三角)、1μM(四角)、3μM (アスタリスク)、10μM(十字)および30μM(X)の化合物2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン3',5'-ビスホスフェート(化合物9)の存在下における、P2Y₁アゴニスト2 MeSATPの対数投与量反応曲線を示すグラフである。アゴニスト対数投与量反応曲線を右側に平行移動させると、化合物９の競合的アンタゴニスト活性が指示される。データは、2MeSATPの対数モル濃度の関数としての[³H]イノシトールホスフェート（最大値に対する％）を示す。図10は、図９に示すデータのシルド回帰を示す。図10において、アンタゴニスト(化合物9)の増加濃度（投与量比として）での存在下または非存在下における等反応を示すアゴニスト(2MeSATP)濃度の比の計算値を、化合物９の対数濃度（モル）に対する対数（投与量比-1）の関係としてプロットした。シルド回帰により形成された直線の傾きが約１（傾き＝0.912）であることにおいて、化合物９は、P2Y₁レセプターの競合的アンタゴニストであると示される。図11は、化合物９のP2Y₁レセプターへの選択的な結合および特異性を示すグラフである。クローニングされたヒトP2Y₁（左端）、P2Y₂（左から２番目）、P2Y₄ （右から２番目）またはP2Y₆（右端）レセプターを発現する1321N1ヒト星状細胞腫細胞におけるイノシトールホスフェートの蓄積を、本明細書に開示された化合物９の存在下（斜線棒）または非存在下（白棒）に測定した。化合物９の存在は、P2Y₂およびP2Y₆を発現する細胞におけるイノシトールホスフェートの蓄積に作用を及ぼさず、P2Y₄レセプターを発現する細胞において検出されるイノシトールホスフェートの量の増加に僅かな作用を有していたが、化合物９の存在は、P2Y₁ を発現する細胞中におけるイノシトールホスフェートの発生を完全に阻害した。この結果は、化合物９がP2Y₁レセプターに選択的に結合し、さらに化合物がP2Y₁ レセプターの潜在的アンタゴニストであることを示す。発明の詳細な説明本発明を以下において、好ましい態様を示してより詳しく説明する。しかしながら、本発明は、異なる形式で実施してよく、本明細書に示す態様に限定されると解すべきでない。むしろ、これらの態様は、その開示により当業者が本発明の範囲を充分に理解するために提供される。プリン（purinergic）レセプターは、本明細書ではIUPHAR Nomenclature Comm itteeの指針に従って呼ばれ、Gタンパク質結合性ヌクレオチドレセプターはP2Y レセプターと表され、サブファミリーにおけるレセプターは、機能的レセプターの配列が公に利用できるようになった年代順を反映する数により表わされる。B ．B．Fredholmら著，Pharmacol．Rev．第46巻,143頁〜156頁(1994年)を参照。しかしながら、Changら著(J．Biol．Chem．第270巻,26152頁〜26158頁(1995年))によりクローニングされたレセプターは、配列が公開された3番目の機能的P2Yレセプターであっても、P2Y₆レセプターと呼ばれる。P2Y₆レセプターは、以前は文献においてP2Uプリンレセプターと呼ばれていた。本明細書でで用いられる用語である「低級アルキル」は、広義に解されるべきであり、C1〜C4の鎖状、分岐、飽和、不飽和、環状および非環状アルキルを含むが、これらに限定されない。ハロゲン化アルキル（例えば、フルオロアルキル、クロロアルキル）もこの定義に含まれる。「アルコキシ」という用語は、式-OR で表される残基と定義され、ここでRは、例えば、前述のような低級アルキルを表す。フルオロアルコキシドのようなハロゲン化アルコキシ基もこの定義に含まれる。本明細書で用いられる「アミノ」という用語は、NR'R"を表し、ここでR' およびR"は、２または前述の低級アルキルから独立に選択され、すなわち-NH₂、 -NHCH₃、-N(CH₃)₂等である。本明細書で用いられる「アルキルチオ」という用語は、式-SRで表される残基を意味し、ここでRは、例えば、前記低級アルキルを表す。「ハロゲン」という用語は、-Fl、-Cl、-Brおよび-Iからなる群より選択される残基を意味する。本明細書で具体的に定義していない用語は、当該分野で通常理解される意味を与えるものである。本明細書で用いられる「アゴニスト」という用語は、生理学的レセプターに結合し、内因性制御化合物の作用を模倣する化合物を意味する。生理学的レセプターに結合し、（すなわち、アゴニスト結合部位について競合することにより）内因性アゴニストの結合の抑制または干渉をもする化合物を、通常、本明細書において「アンタゴニスト」と呼ぶ。アンタゴニストにより引き起こされる抑制を、アゴニストの濃度の増加により超えることができ、究極的に同じ最大効果を達成する場合、本明細書において、アンタゴニストは「競合的アンタゴニスト」と呼ぶ。本発明は、新規化合物、および、新規化合物および既知の化合物の両方を用いる方法に関する。本発明の化合物（以下、「活性化合物」と呼ぶ）を例示する化合物は、先に発明の開示において挙げられた式Ｉおよび式IIで示される化合物、およびその薬学的に許容できる塩を含む。本発明の新規化合物は、前記式Ｉで定義されるものであり、R₁、R₃およびR₄がそれぞれHであり、ｍとｎとｐとがそれぞれ１であり、ｑが１、２または３であり、X₁が0であり、X₄がホスフェートであり、X₂およびX₃がそれぞれヒドロキシ、Hまたはホスフェートであるか、または一緒になってシクロホスフェートである場合には、R₂は-NH₂でない。本発明の新規化合物は、前記式IIで示される化合物も含み、R₁およびR₂がHであり、ｐとｍとｎとがそれぞれ１であり、ｑが１、２または３であり、X₁が0である場合には、X₂およびX₃はHでなく、X₂およびX₃は-OHでなく、およびX₂およびX₃は一緒なってシクロホスフェートを形成しない。本発明の好ましい化合物は、化合物の2'位および3'位（式ＩおよびII中のR₂およびR₃）がデオキシである式Ｉおよび式IIの化合物である。本発明の他の好ましい化合物は、R₂が-R'R"、R'がHおよびR"が低級アルキルである式Ｉの置換N⁶類似化合物である。特に好ましい化合物は、下記表１中に示され、化合物番号により確認されるデオキシアデノシン系化合物である。表1中に示される一般構造式中において、Xは 0である。表１潜在的P2Y₁レセプターアンタゴニストとして合成された新規アデニンヌクレオチドの化学的構造本発明の活性化合物は、前記式Ｉおよび式IIの化合物のアデノシンおよびウリジン2'-スルホネート誘導体および3'-スルホネート誘導体、および前記式Ｉの化合物のアデノシンおよびウリジン2'-ボレート誘導体および3'-ボレート誘導体も含む。既知であるが、それにも拘わらず本発明の方法の実施において有用である化合物は、市販されているか、または、当業者に知られている技術により製造することができる。本発明の新規化合物は既知の手順または当業者に明らかなその変形例により製造することもできる。一般的に、J．L．Boyerら著，Br．J．Pharmaco l．第116巻,2611頁〜2616頁(1995年);J．L．Boyerら著,J．Biol．Chem．第264巻，884頁〜890頁(1989年);B．Fischerら著，J．Med．Chem．第36巻,3937頁〜3946 頁(1993年)が参照される。例えば、前記表1中の化合物(化合物4〜22)を合成するために、適当な出発ヌクレオチドをまず購入または合成し、次にリン酸化またはチオリン酸化する。2'-デオキシ-2-メチルチオアデノシン、8-ブロモ-2'-デオキシアデノシン、N⁶-エチル2'-デオキシアデノシンおよびN⁶-プロピル2'-デオキシアデノシンおよび3'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシンのような幾つかの中間体を、当業者は公開された手順により調製することができる。例えば、L．F．Christ ensenら著.,J．Med．Chem．第15巻,735頁〜739頁(1972年);M．Ikeharaら著.,in Nucleic Acid Chemistry;(L．B．Townsend and R．S．Tipson編，John Wiley an d Sons:New York,1978年)(U巻,837頁〜841頁);E．M．van der Wendenら著.，J． Med．Chem．第38巻,4000頁〜4006頁(1995年);V．Nair，Synthesis 670頁〜672頁 (1982年)を参照。 2'-および3'-デオキシアデノシンおよびその類似体のリン酸化は、オキシ塩化リン（または塩化チオホスホリル）、リン酸トリメチルおよびProton Sponge^Rを氷浴中で用いて、図式Ｉに示すように単一工程で達成することができる。反応は、典型的には、１時間後に完了し、緩衝液（例えば、重炭酸トリメチルアンモニウム）の添加により急冷することができる。得られる混合物は、当業者の希望および一般的知識により凍結乾燥することができる。本発明の化合物の精製は、例えば、水／重炭酸アンモニウムの直線的勾配（0.01〜0.5M）を使用する Sephadexイオン交換カラムを用いて実施することができる。本発明のリン酸化ヌクレオチドの化学的構造は、当業者に知られている¹H-NMRおよび³¹P-NMR技術、および高解像度質量分光分析を用いて確認することができる。¹H-NMRを用いて、 5'-位および2'-位(または3'-位)におけるリボースプロトンの化学的シフトをモニターし、リン酸化前後にそれらを識別することができる。ビスリン酸化の存在は、³¹P-NMRスペクトル中の二つのホスフェートシグナルにより示される。本発明の活性化合物は、そのものとしてまたは薬学的に許容できる塩として、調製、利用および／または投与することができる。そのような薬学的に許容できる塩は、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩のようなアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム、または式NX₄ ⁺(ここで、XはC₁〜C₄アルキル基を表す)で示されるテトラアルキルアンモニウム塩を含む。薬学的に許容できる塩は、本明細書では、親化合物の所望の生物学的活性を維持するが、所望の毒物学的作用は付与しない塩であると定義される。本発明の活性化合物は、標的組織中の細胞外アデニンおよびウリジンヌクレオチドおよびP2レセプターの生理学的役割を詳細に解析するのに有用である。従って、本発明の方法は、P2Yレセプターを含むことが予想される生物学的サンプル中のP2Yレセプターの有無を検出する方法である。そのような方法は、本発明の活性化合物にP2Yレセプターを結合させ得る条件下で、P2Yレセプターに特異的に結合することのできる本発明の活性化合物に、P2Yレセプターを含むことが予想される生物学的サンプルを接触させるステップと、および次に、結合の有無を検出するステップとを含む。この方法で用いるためのヒト患者または動物からの生物学的サンプルは、通常、血清、血液血漿または腹水液のような生物学的流体である。また、患者から採取されるサンプルは、組織サンプル（バイオプシー組織、掻取片等）でもよい。さらに、生物学的サンプルは、P2Yレセプターを発現することができる細胞または発現することができない細胞を含む細胞培地を含むことができる。当業者に知れている任意の適当なアッセイフォーマットを用いて、 P2Yレセプターへの活性化合物の結合を検出することができ、一つの例は、当該分野において知られており、後の例３に示すシチメンチョウ赤血球／ホスホリパーゼＣアッセイである。当業者は、明細書に記載された方法を実施するのに有用な多くの特異的アッセイフォーマットおよびその変形をよく知っている。本発明の方法で有用な活性化合物は、前記新規化合物を含むが、アデノシン3'，5'-ビスホスフェートおよびアデノシン2'，5'-ビスホスフェートのような前記式Ｉおよび式IIで示される既知の化合物も含む。これらの化合物は、公知であるが、今まで、例えばヒトP2Y₁レセプターに特異的に結合し得ることは認識されていなかった。式Ｉにより示されると共に本明細書に開示されている活性化合物は、これらの化合物によるP2Y₁レセプターへの特異的結合が以下の実施例部分に説明されているように、生物学的サンプル中のP2Y₁レセプターの有無を検出するのに特に有用であると考えられる。さらに、式IIにより示されると共にここに開示されている活性化合物は、細胞外ウリジンヌクレオチド、例えばP2Y₂レセプターおよび P2Y₄レセプターにより活性化されることが知られているP2Yレセプターの有無の検出に、特に有用である。本発明の活性化合物は、さらに、細胞外アデニンおよびウリジンヌクレオチドにより用いられるシグナルタンパク質を干渉する治療薬として使用することができる。従って、本発明の化合物は、細胞外アデニンおよびウリジンヌクレオチドとこれらのヌクレオチドにより利用されるシグナルタンパク質との間の相互反応を干渉する化合物による治療に反応性であることを特徴とする疾患の治療法において有用である。これらの疾患は、ATP誘発血管収縮、甲状腺機能亢進、高インシュリン血症、および副腎皮質ホルモンの過剰生産に特徴付けられる疾患を含むが、これらに限定されない。P2Yが膀胱および前立腺筋肉において大いに発現されることが示された点において、本発明は、膀胱の疾患（例えば、失禁）および前立腺の疾患（例えば、前立腺炎症、前立腺過形成）における治療にも有用である。本発明の治療法において、本明細書に記載された活性化合物は、細胞外アデニンおよびウリジンヌクレオチドとこれらのヌクレオチドにより利用されるシグナルタンパク質との間の相互反応を干渉する化合物による治療に反応性であることを特徴とする疾患を被っている患者に、治療有効量で投与される。ここで、治療有効量とは、P2Yレセプターと細胞外アデニンヌクレオチドまたは細胞外ウリジンヌクレオチドとの間の結合を抑制するのに充分な活性化合物の量と定義される。本発明は、主にヒト患者の治療に関する。しかしながら、本発明は、獣医学的目的からイヌやネコのような他の哺乳動物被検体の治療にも用いることができる。本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩の投与量は、治療される症状および患者の状態に依存して変化するが、通常は、患者の血液中またはレセプター部位において活性化合物の溶解濃度を10^-9〜10^-4モル／リットルとするのに充分な量とすることができる。投与される活性化合物の特別の組成の溶解性に依存して、１日の投与量は１単位または数単位の投与に分けてもよい。活性剤の投与量は、治療する症状、および薬理学的悪影響が生じる投与量により変化する。当業者は、投与量を決定する際に、そのような要素を考慮に入れる。本発明の薬剤組成物は、非経口（含む、皮下、皮内、筋肉内、静脈内および間接内を含む）、経口、吸引、局所（頬内、舌下、皮膚および眼内を含む）および経皮投与に適当な組成物を含む。組成物は単位投与状態で都合よく存在してよく、当該分野によく知られている任意の方法により調製することができる。任意の所定の場合に最も好適な投与経路は、治療する症状の性質および病状、および使用される特別の活性化合物に依存する。組成物は単位投与状態で都合よく存在することができ、当該分野で良く知られている任意の方法により調製することができる。本発明による薬剤（組成物）の製造において、活性剤または薬理学的に許容できるその塩（「活性化合物」）を、特に、許容できるキャリアーと混合するのが典型的である。キャリアーは、もちろん、組成物中の他の任意成分と相溶性であるという意味において許容できるものでなくてはならず、患者に有害であってはならない。キャリアーは固体または液体あるいは両方であってよく、好ましくは、単位投与形態、例えば、錠剤としての化合物と一緒に好ましく調製される。本発明の組成物に１またはそれ以上の活性化合物を組み込むことができ（例えば、組成物は前述のように１またはそれ以上の更なる抗結節剤を含むことができ）、その組成物は、必要ならば１またはそれ以上の補助治療成分を含む成分を混合することから本質的に成る任意の良く知られている製薬技術により調製することができる。非経口投与に適当な本発明の組成物は、活性化合物の滅菌水性および非水性注射溶液を含み、この製剤は好ましくは目的の被験者の血液と等張である。これらの製剤は、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、および組成物を目的の被験者の血液と等張にする溶質を含んでよい。水性および非水性滅菌懸濁液は、懸濁剤および増粘剤を含むことができる。組成物は、単位投与または複投与容器、例えば、密封アンプルおよびバイアル中に存在してよく、使用直前の注射のために滅菌液体キャリアー、例えば、塩水または水を添加するだけでよい凍結乾燥状態で貯蔵することができる。即座注射溶液および懸濁液は、先に記載した種類の滅菌粉末、粒子および錠剤から調製することができる。経口投与に適当な製剤は、それぞれ予定量の活性化合物を含むカプセル、カシェ剤、口内錠または錠剤のような別個の単位中に、粉末または粒子として、水性または非水性液中の溶液または懸濁液として、または水中油または油中水型乳濁液として存在してよい。そのような製剤は、活性化合物と適当なキャリアー（前述のように１またはそれ以上の補助成分を含んでよい）を接触させるステップを含む任意の適当な薬剤法により調製することができる。通常、本発明の製剤は、活性剤分を、液体または微粉砕固体キャリアーあるいはその両方である活性化合物と均一かつ入念に混合し、必要であれば、次に、得られる混合物を造形することより調製される。例えば、錠剤は、活性化合物を含む粉末または粒子を、要すれば１またはそれ以上の補助成分と共に圧縮または成形することにより調製することができる。圧縮錠剤は、適当な機械において、粉末または粒子のような流動状態の化合物を、必要に応じ、バインダー、滑剤、不活性希釈剤および／または界面活性／分散剤と共に圧縮することにより調製することができる。成形された錠剤は、適当な機械において、不活性液体バインダーで湿らせた粉末状化合物を成形することにより作ることができる。経口投与のための製剤は、要すれば、胃内で製剤の分解を防止し、小腸内で薬剤を放出させるために当該分野で知られている腸溶性皮膜を含んでよい。頬内（舌下）投与のために適当な組成物は、風味基材、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性化合物を含む口内剤、および、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアのような不活性基材中に化合物を含む香剤を含む。皮膚に局所的に投与するのに適当な組成物は、好ましくは、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油の状態である。使用してよいキャリアーは、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、経皮向上剤、およびそれらの２以上の組み合わせを含む。経皮投与のために適当な組成物は、被験者の表皮に長時間、緊密に接触させるように適合された別々のパッチとして存在することができる。経皮投与のために適当な組成物は、イオン導入（例えば、Pharmaceutical Research第３巻,318頁( 1986年)参照）により投与することもでき、典型的には、要すれば活性化合物の緩衝水溶液とされる。本発明をより充分に説明するために以下の実施例を提供するが、本発明を限定するものとみなすべきではない。以下の実施例において用いられているように、ATPは、アデノシン5'-トリホスフェートを意味し、PPADSはピリドキサルホスフェート6-アゾフェニル2',4'-ジスルホン酸を意味し、MeATPはアデノシン5'-メチレントリホスフェート,(α,β) または(β,γ)異性体を意味し、2MeSATPは2-メチルチオアデノシン5'-トリホスフェートを意味し、DEAEはジメチルアミノエチルを意味し、DMSOジメチルスルホキシドを意味し、FABは高速原子衝撃（質量分光分析）を意味し、HPLCは高圧液体クロマトグラフィーを意味し、HRMSは高解像度質量分光分析を意味し、PAPSはアデノシン-3'-ホスフェート-5'-ホスホスルフェートを意味し、TBAPテトラブチルアンモニウムホスフェートを意味し、TEAAはトリエチルアンモニウムアセテートを意味し、TEABはトリエチルアンモニウムバイカーボネートを意味し、および TLCは薄層クロマトグラフィーを意味する。以下の実施例において、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェート、アデノシン3',5'-ビスホスフェート、アデノシン2',5'-ビスホスフェートおよび(-)イソプロテレノール(+)-ビタルテート、ヌクレオシド、ヌクレオチド、23 〜26、（ビスホスフェート類似体）、および以下に記載する合成に用いる試薬は Sigma Chemical Company（ミズーリ州セントルイス）から得た。2MeSATPは、Res earch Biochemicals Inc.(マサチューセッツ州Natick)から得た。2-[³H]ミオ-イノシトール(20Ci/mmol)は、American Radiolabeled Chemicals,Inc.(ミズーリ州セントルイス)から得た。イノシトール非含有DMEMは、Gibco BRL(ニューヨーク州グランドアイランド)から得た。以下の実施例に記載のように合成された化合物の純度は、以下のように２つの溶媒系中において分析カラムとしてSMT OD-5-60 RP-C18(250×4.6mm;デラウェア州NewarkSeparation Methods Technologies，Inc．製)を用いるHewlett-Packard 1090 HPLC装置により、決定された。系A：直線的勾配溶媒系：0.1M TEAA/CH₃CN 20分で95/5〜40/60;流速１mL/分系B：直線的勾配溶媒系：5mM TBAP/CH₃CN 20分で80:20〜40:60;流速１mL/分ピークを、ダイオードアレイ検出器を用いてUV吸収により検出した。合成されたヌクレオチドの精製は、前述のDEAE-A25 Sephadexカラムにおいて行った。以下の実施例により合成された全ての化合物は、HPLC系において95％を超える純度を示した。以下の実施例において、溶媒としてD₂Oを用いるVarian Gemini-300分光計を用いて¹H-NMRスペクトルを得た。³¹P-NMRスペクトルは、Varian XL-300分光計(121 .42MHz)を用いて室温で記録し、外部標準としてオルトリン酸（85%）を用いた。グリセロールマトリックスからの脱離に続いて6-kV Xe原子を用いるJEOL SX102 分光計により高解像FAB（高速原子衝撃）質量分光測定を行った。例１：材料および方法細胞培養 C6ラット神経膠腫細胞を、95％の空気および5%のCO₂の加湿雰囲気中、5%のウシ胎児血清を加えたDulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM)中で増殖させた。細胞を、トリプシン処理した。J．L．Boyerら著.,Br．J．Pharmacol．第116巻，2611頁〜2616頁(1995年)に既述したように12ウェルクラスター中で平板培養した２〜4日後、集密的になった細胞培地物を用いて実験を行った。ヒトまたはシチメンチョウのP2Y₁レセプター、ヒトP2Y₂レセプター(P₂U-プリンレセプター)、ヒトP2Y₄レセプター、あるいは、ヒトまたはラットP2Y₆レセプターを安定に発現する1321N1ヒト星状細胞腫細胞を、5%のウシ胎児血清および600μg/mLのG-418を加えたDMEM中で成長させた。例２：材料および方法シチメンチョウ赤血球標識化新しい血液を雌シチメンチョウから静脈穿刺により得、ヘパリン処理注射器に収集した。赤血球を、遠心分離および滅菌DMEMでの再懸濁により2回洗い、続いてイノシトール非含有DMEM中で洗った。洗浄し、パッキングした赤血球1mLを、0 .5mCiの[³H]イノシトールの存在下に、最終体積が4.2mlとなるイノシトール非含有DMEM中に再懸濁させた。J．L．Boyerら著，J．Biol．Chem．第264巻，884頁〜 890頁(1989年)に既述されているように95%の空気と5%のCO₂の加湿雰囲気中、攪拌ガラスバイアル中に細胞を37℃で16〜20時間インキュベートした。例３シチメンチョウ赤血球／ホスホリパーゼＣアッセイ P2Y₁レセプターはホスホリパーゼＣを活性化し、活性化したホスホリパーゼＣは、ホスファチジルイノシトール(4,5)ビスホスフェートからイノシトールホスフェートおよびジアシルグリセロールを発生させた。このレセプターは、シチメンチョウ赤血球膜において鋭意研究され、この系は、P2Y₁レセプターに対してアンタゴニスト的な特性(B．Fischerら著，J．Med．Chem.(1993年)第36巻，3937頁〜 3946頁;J．L．Boyer著,Br．J．Pharmacol．.(1996年)第118巻,1959頁〜1964頁) 、または競合的アンタゴニスト的な特性(J．L．Boyerら著.，Br．J．Pharmacol ．．(1994年)第113巻,614頁〜620頁;J．L．Boyerら著.，Mol．Pharmacol．第50 巻,1323頁〜1329頁.(1996年))を有する分子を確認するために適用された。2-MeS ATPは、[³H]イノシトール標識化シチメンチョウ赤血球から単離された膜におけるイノシトールホスフェート蓄積を刺激する高い性能を有する。類似体α,β-Me ATPおよびβ,γ-MeATPは、P2Xレセプターアゴニストとして性能があり、シチメンチョウ赤血球P2Y₁レセプターにおいて効果を殆ど示さないか全く示さない。本明細書に記載されたアデニンヌクレオチド類似体によるイノシトールホスフェート形成のP2Y₁レセプター促進刺激を、先に記載したようにシチメンチョウ赤血球膜において測定した。T．K．Hardenら著，Biochem．J．第252巻,583頁〜593 頁.(1988年);J．L．Boyeretら著,J．Biol Chem第264巻,884頁〜90頁(1989年)。K_0.5 値は、各化合物について３〜８の独立して決定した濃度−効果曲線から平均した。5mMのリン酸ナトリウム，pH7.4、5mMのMgCl₂および1mMのEGTAを含む緩衝液（溶解緩衝液）の15体積中の低張性溶解により、[³H]イノシトール標識化細胞から赤血球ゴースト膜を調製した。膜を、遠心分離および溶解緩衝液での再懸濁により3回洗った。最終再懸濁は、20mM Hepes，pH7.0中で、濃度が6mgタンパク質／mLとなるようにした。この調製液を、直接、ホスホリパーゼＣのアッセイに用いた。標識化膜(約150μgタンパク質;200,000cpm)25μLを併せて、0.91mM MgS O₄、115mM KCl、５mMリン酸ナトリウム、0.424mM CaCl₂、２mM EGTA、10mM Hepe s，pH7.0（遊離Ca⁺⁺濃度約１μM）を含む溶媒200μLの最終体積とした。シチメンチョウ赤血球膜中のホスホリパーゼＣのレセプターおよびGタンパク質促進活性化は、グアニジンヌクレオチドの存在に強く依存するので、GTP、GTPγS(1μM )の非加水分解性類似体をアッセイに含んだ。膜を、指示濃度のアデニンヌクレオチド類似体と共に30℃で5分間インキュベートした。インキュベーションは、氷冷クロロホルム：メタノール（１：２体積）の1mLおよび続いてクロロホルム3 50μlおよび水350μlを添加することにより終了させた。サンプルを混合および遠心分離し、水性上層1mLを水8mLで希釈し、Dowex AG-X8カラム（蟻酸塩型）に移した。カラムを、200mM蟻酸アンモニウム8mL、100mM蟻酸で洗い、溶出液を廃棄した。イノシトールホスフェート(IP₂〜IP₄)の全てを1.2M蟻酸アンモニウム5m L、100mM蟻酸で溶出し、シンチレーションバイアル中に収集した。[³H]イノシトールホスフェートを、シンチレーション分光分析により定量した。クローニングしたヒトP2Y₁、P2Y₂、P2Y₄またはヒトもしくはラットP2Y₆レセプターを発現する1321N1ヒト星状細胞腫細胞中のイノシトールホスフェート蓄積を、E．R．Lazarowski，Br．J．Pharmacol．第116巻,1619頁〜1627頁.(1995年)に記載のように測定した。例４データ分析４パラメーター論理式およびGraphPadソフトウェアパッケージ(カリフォルニア州サンディエゴGraphPad製)を用いてアゴニスト性能を計算した。全ての濃度効果曲線を、二重または三重アッセイを用いて、少なくとも３つの別々の実験において繰り返した。例５シチメンチョウ赤血球P2Yレセプターにおけるアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートの活性アデニンヌクレオチドのスルフェート含有類似体が、エクトヌクレオチダーゼによる加水分解に対して高い抵抗性を示す潜在的P2Yレセプターアゴニストであるかどうかを決定するために、シチメンチョウ赤血球P2Yレセプターにおけるアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートの活性を試験した。イノシトールホスフェート形成に対するアデノシン-3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートの比較的小さな効果が生じた（図１）が、詳細な分析は、この刺激が濃度依存性であると共に、0.83±0.08μMのEC₅₀と明らかに飽和性であることを示した（図1および表２）。2MeSATP、ATPおよびADPの最大効果に対して、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートの最大効果はやや変化性があるが、典型的には最大アゴニスト効果の10％〜25%であった（表２）。表２シチメンチョウ赤血球のP2Yレセプターに対するアデニンヌクレオチドの効力および効果各値は異なる膜標品を用いて行った少なくとも４つの実験の平均±SEMを表す *アデノシンヌクレオチドの相対効果は、同じ実験における2MeSATPの最大有効濃度により得られたものとの比較により決定した。 2MeSATPの最大より低い濃度の効果を促進または抑制するアデノシン-3'-ホスフェート，5'-ホスホスルフェートの性能を決定した。アデノシン-3'-ホスフェート， 5'-ホスホスルフェート単独の刺激効果を観察するのに必要な同じ濃度範囲を超える10nM 2MeSATPの刺激効果をアデノシン-3'-ホスフェート-5'-ホスホスルフェートが拮抗した（図2）。この結果は、アデノシン-3'-ホスフェート-5'-ホスホスルフェートの効果が、レセプター制御されるホスホリパーゼＣ反応を含むもう一つの成分との相互反応の結果ではなく、P2Yレセプターへの結合の結果として生じたことを示す。例６アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートと P2Y レセプターとの相互作用アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートとP2Yレセプターとの潜在的相互作用をさらに検定するために、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートの効果の濃度依存性を、2MeSATPの広範囲の濃度(1〜1000nM)において試験した（図２）。アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートは、3nM を超える2MeSATPの全ての濃度において2MeSATPの効果の濃度依存な拮抗を生じさせた(図2)。さらに、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートは、2M eSATPの濃度−効果曲線の濃度依存的な平行右方向シフトを生じさせた（図３A）。シルド(Schild)分析（図３B）は、拮抗が明らかに競合的で、アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートのpK_Bが6.46±0.17であることを確認した。アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートのこの明らかな性能は、同じ膜におけるイノシトール脂質加水分解の刺激においてATP(4.23±1.52μM)よりも10倍大きい。例７アンタゴニスト活性に対するスルフェート置換効果 ATPの5'位におけるまたは3'位におけるスルフェート置換が、アンタゴニスト活性の付与に重要であるかどうか決定するために、アデノシン3'-ホスフェート, 5' -ホスホスルフェートに関連する構造を有する化合物の活性を試験した。アデノシン3',5'-ビスホスフェートが、2.23±0.84μMの活性化についてのEC₅₀を有し、かつ、2MeSATPについて観察された最大効果の４〜35％である最大効果を有する部分的アゴニストでもあるので、拮抗は5'-スルフェート置換に関係ないようである（表２）。アデノシン3',5'-ビスホスフェートは、2MeSATP濃度−効果曲線の平行右側移動も起こし（図３C）、pKB計算値5.66±0.21を一定値からあまり変化ない傾きのシルド回帰により決定した（図３D）。すなわち、アデノシン3', 5'-ビスホスフェートは、親ATP分子の性能と同じまたはそれ以上である性能を有するP2Yレセプターと相互作用するようでもある。アデノシン3',5'-ビスホスフェートの効果と同じ効果が、アデノシン2',5'-ビスホスフェートの異性体について観察された（表２）。アデノシン2'-ホスフェート5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン2'-ホスフェート5'-ホスホリボースのような他のアデノシン3'-および2'-ホスフェートについても部分的アゴニスト活性が観察された（データは示さず）。アデノシン 5'-ホスホスルフェート（図1）およびアデノシン5'-ジホスホリボースは完全アゴニスト（データは示さず）であり、そのことは、アデニンヌクレオチドの2'- 位または3'-位におけるホスフェート置換が、アゴニスト活性に要求されることを示している。他の2'または3'置換は、アデニンヌクレオチドにアゴニスト特性を付与しない。例えば、3'-アミノATPおよび3'-ベンゾイルベンゾイルATPは完全アゴニストであり、3'-N-ベンジルアミノATPは、アゴニスト活性が全く無い弱いアゴニストであった（データは示さず）。例８ホスホリパーゼＣ結合性P2Yレセプターにおけるアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートの選択性アデノシン3'-ホスフェート5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートの効果の選択性を、シチメンチョウ赤血球において天然に発現されるホスホリパーゼＣ結合性βアドレナリンレセプターにおけるそれらの効果を試験することにより確認した。2MeSATP刺激性イノシトール脂質加水分解に対するアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'- ビスホスフェートの効果と対照的に、これら3'-ホスフェート置換類似体のアゴニスト効果は、βアドレナリンアゴニストイソプロテレノールの最大有効濃度に付加的であった（図4）。これらの結果は、3'-ホスフェートアデニンヌクレオチド類似体が、シチメンチョウ赤血球膜のP2Yレセプターと特異的に相互作用するが、レセプター−ホスホリパーゼＣカスケードの他の成分とは相互作用しないことを示している。例9 ヒト星状細胞腫細胞に発現されたクローンP2Y₁レセプターに対するアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェーおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートの効果アデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'- ビスホスフェートの効果を、クローニングされたレセプターを安定に発現する13 21N1ヒト星状細胞腫細胞において決定された。シチメンチョウ赤血球膜について観察されたものに非常に類似しているアンタゴニスト活性が、発現されたシチメンチョウP2Y₁レセプターについて観察された（データを示さず）。シチメンチョウ赤血球P2Yレセプターについての結果と対照的に、アデノシン3'-ホスフェート ,5'-ホスホスルフェート（データを示さず）およびアデノシン3',5'-ビスホスフェート（図5）は部分的アゴニスト活性を示さず、ヒトP2Y₁レセプターにおいて単純な競合的アンタゴニストであった。アデノシン3',5'-ビスホスフェートについての計算値pKB(6.05±0.01)は、シチメンチョウ赤血球膜調製において観察されたものと本質的に同じであった（図5）。例10 P2Y₁ レセプターについてのアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェーおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートの選択性：他のP₂レセプターにおける効果 P2Y₁レセプターについてのアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートの選択性を、他のP₂レセプターにおけるそれらの効果を試験することにより試験した。C6ラット神経膠腫細胞のP2Y レセプターにおいて、アゴニストまたはアンタゴニストとしてのいずれの効果も観察されなかった（図6）。このアデニリルシクラーゼ結合性P₂レセプターが、第２メッセンジャーシグナルおよび薬理学的選択性の特異性においてホスホリパーゼＣ結合性P2Y₁レセプターと異なることが既に示されている(J．L．Boyerら著，Br．J．Pharmacol．.第116巻,2611頁〜2616頁(1995年))。アデノシン3'-ホスフェート，5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートは、いずれも、1321N1細胞において安定に発現されるヒトP2Y₂(表３)、ヒトP2Y₄（データを示さず）、またはラットP2Y₆（データを示さず）レセプターにおいてアンタゴニストでもアゴニストでもなかった。表３ 1321N1細胞中に安定に発現されたヒトP2Y₂レセプターに対するアデノシン3'-ホスフェート,5'-ホスホスルフェートおよびアデノシン3',5'-ビスホスフェートの効果示したデータは、少なくとも３つの異なる実験の値の平均±SEMである。例11 デオキシアデノシン化合物４〜22の調製ヌクレオシドのリン酸化の一般的手順を以下に示す。ヌクレオシド（0.1mmol ）およびProton Sponge^R(107mg,0.5mmol)を、高真空下、室温で数時間乾燥し、次に、リン酸トリメチル2mL中に懸濁させた。オキシ塩化リン(37μL,0.4mmol)を添加し、混合物を０℃で1時間攪拌した。反応を、HPLC分析(緩衝液の勾配で溶出：CH₃CN=95:5〜40:60、緩衝液：0.1Mトリエチルアンモニウムアセテート（TEAA ）、溶出時間：20分、流速：1mL／分、カラム：SMT OD-5-60 RP-C18、検出器：U V，Emax≒260〜300nm)によりモニターした。反応液を、トリエチルアンモニウムバイカーボネート2mLおよび水3mLの添加により急冷した。次に、混合液を凍結し、凍結乾燥した。Sephadex DEAE A-25樹脂を充填したイオン交換カラムにおいて、移動相として0.5M重炭酸アンモニウムの直線的勾配(0.01〜0.5M)を適用し、溶出をモニターするためにUVおよびHPLCを用いて精製を行った。全てのヌクレオチド（４〜2 2）を収集し、凍結し、アンモニウム塩として凍結乾燥した。化合物４〜22についての¹HNMRおよび³¹P-MNRの結果を含む合成データを、以下の表４に要約する。個々の化合物の合成法を以下に示す。 2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物4) 2'-デオキシアデノシン25mg(0.099mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物4の21mg(0.044mmol,収率44％)を得た。 2'-デオキシ-(N'-メチル)アデノシン-3',5'-ビス（アンモニウムホスフェート）（化合物5） 2'-デオキシ-N¹-メチルアデノシン10mg(0.025mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物5の8.2mg(0.017mmol,収率69％)を得た。 2-クロロ-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス（アンモニウムホスフェート）(化合物6) 2-クロロ-2'-デオキシアデノシン25mg(0.088mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物6の26mg(0.051mmol,収率58％)を得た。 2'-デオキシ-2-メチルチオアデノシン-3',5'-ビス（アンモニウムホスフェート）（化合物7) 2'-デオキシ-2-メチルチオアデノシン20mg(0.067mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物7の17mg(0.032mmol,収率48％)を得た。8-ブロモ-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）（化合物8） 8-ブロモ-2'-デオキシアデノシン25mg(0.076mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物8の14mg(0.025mmol,収率33％)を得た。 2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-3',5'-ビス（アンモニウムホスフェート）( 化合物９) 2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン25mg(0.094mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物9の19mg(0.039mmol,収率41％)を得た。 2'-デオキシ-N⁶-エチルアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）（化合物１０） 2'-デオキシ-N⁶−エチルアデノシン12mg(0.043mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物10の8.8mg(0.017mmol,収率40％)を得た。2'-デオキシ-N⁶-プロピルアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物11) 2'-デオキシ-N⁶-プロピルアデノシン13mg(0.044mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物11の9.4mg(0.018mmol,収率41％)を得た。 N⁶-ベンゾイル−2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物１２) N⁶-ベンゾイル−2'-デオキシアデノシン25mg(0.070mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物12の22mg(0.038mmol,収率54％)を得た。 2'-デオキシ-N⁶-ジメチルアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物13) 2'-デオキシ-N⁶-ジメチルアデノシン18mg(0.064mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物13の15mg(0.029mmol,収率46％)を得た。６-クロロ-2'-デオキシプリンリボシド-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物14) ６-クロロ-2'-デオキシプリンリボシド10mg(0.037mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物14の12mg(0.024mmol,収率65％)を得た。 2'-デオキシイノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物15) 2'-デオキシイノシン25mg(0.079mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物15の8.4mg(0.017mmol,収率22％)を得た。 2'-デオキシ-6-メチルチオプリンリボシド-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物１６) 2'-デオキシ-6-メチルチオプリンリボシド18mg(0.064mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物16の13mg(0.025mmol,収率39％)を得た。 3'-デオキシアデノシン-2',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物17) および5'-クロロ-3'-デオキシアデノシン-2'-（ジアンモニウムホスフェート）（化合物19） 3'-デオキシアデノシン25mg(0.099mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物17の16mg(0.033mmol,収率34％)を得、副産物として、5'-クロロ誘導体1 9の7.2mg(0.02mmol,収率21％)を得た。 3'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-2',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）（化合物18） 3'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン25mg(0.094mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物18の10.4mg(0.021mmol,収率22％)を得た。 2'-デオキシ-2'-O-メチルアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物20) 2'-デオキシ-2'-O-メチルアデノシン10mg(0.036mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物20の3mg(0.006mmol,収率17％)を得た。2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムチオホスフェート）(化合物21) 2'-デオキシアデノシン50mg(0.2mmol)から出発して、チオホスホリルクロライド（81μL,0.8mmol）を用いる以外は一般的手順に従い所望の化合物21の18mg(0. 036mmol,収率18％)を得た。 2'-デオキシ-N¹,N⁶-エテノアデノシン-3',5'-ビス（ジアンモニウムホスフェート）(化合物22) 2'-デオキシ-N¹,N⁶-エテノアデノシン25mg(0.091mmol)から出発して、一般的手順に従い所望の化合物22の19.3mg(0.038mmol,収率42％)を得た。表４：高解像度質量分光分析を用いる構造検証およびHPLCを用いる純度検証を含むヌクレオチド誘導体の合成データａ：２つの異なる移動相を用いるHPLCにより各誘導体の純度が95％より高いと決定された。システムA：95/5〜40/60のTEAA/CH₃CNが0.1Mの濃度勾配、およびシステムB：80/ 20〜40/60のTBAP/CH₃CNが5nMの濃度勾配ｂ：収率％はリン酸化反応のものである例12 デオキシアデノシン系化合物の生物学的活性前記例11により調製したデオキシアデノシンヌクレオチド類似体を、シチメンチョウ赤血球膜のP2Y₁レセプターにおけるホスホリパーゼC(PLC)アッセイのアゴニスト活性およびアンタゴニスト活性について試験した。各化合物単独、および所定濃度の2-MeSATP(10nM)との組み合わせについて濃度-反応曲線を得た。全ての試験した化合物において、イノシトールホスフェート活性は本質的に観察されず、１μMのGTPγSの存在下で非常に小さい刺激が生じた（データを示さず）。1 0nMの2-MeSATPを添加することにより、シチメンチョウ赤血球ホスホリパーゼＣの顕著な濃度依存活性化が得られた。アデノシン3',5'-ビスホスフェートおよびアデノシン2',3'-ビスホスフェートから非リン酸化ヒドロキシル基を除去することにより、化合物４および１７がそれぞれ得られた。これらの化合物は、生物学的活性において、それらの親ヒドロキシル化化合物に類似している、すなわち、それらはいずれもP2Y₁レセプターにおけるアゴニストとしての性能が僅かに小さい（５〜6倍）部分的アゴニストであるが（図７）、アンタゴニストとして性能が等しかった。3',5'-ビスホスフェート類似体４は、2'，5'異性体17と比べて、アンタゴニストとして2倍性能が高かった。すなわち、2'-デオキシ修飾体および3'-デオキシ修飾体は、P2Y₁レセプターアンタゴニストにおいて許容でき、それぞれの性能は対応するヒドロキシ類似体に略等しい。次にこれらの二つのリード構造の修飾を研究した。リボース部分(化合物19,20 )およびホスフェート基(化合物21)上の1-(化合物5)、2-(化合物6および化合物7) 、8-(化合物8)および6-(化合物9〜16および18)位におけるアデニン環において構造修飾を付与した。エテノ(化合物22)およびN¹-メチル(化合物5)のようなプリン部分の更なる修飾も行った。表４シチメンチョウ白血球P2Y₁レセプターにおけるPLCの刺激（アゴニスト効果）および10nMの2-MeSATPにより誘発されるPLC刺激の抑制（アンタゴニスト効果）について少なくとも別々の３回の試験におけるin vitro薬理学的データａ：アゴニスト効果は、４パラメーター論理式およびGraphPadソフトウエアパッケージ（カリフォルニア州サンジエゴ在GraphPad製）を用いて計算した。EC₅₀値（平均±標準誤差）は、最大効果の50％が達成される濃度を表す。相対効果（％）は、同じ実験における2-MeSATPの最大有効濃度により得られる値との比較により決定された。ｂ：アンタゴニストIC₅₀値（平均±標準誤差）は、10nMの2-MeSATPにより誘発される効果の50％を抑制するのに必要な濃度を表す。最大抑制％は、最大アンタゴニスト濃度における刺激の残留端数を100から引いたものに等しい。 NE 効果無し NC 計算せず化合物４の2-クロロ-(化合物6)および2-メチルチオ(化合物7)修飾体は、P2Y₁ アンタゴニストとしてほぼ3倍以上性能が高かった。両方の場合において、P2Y₁ レセプターにおいて化合物１〜４について観察されるPLCの残留アゴニスト刺激がなお存在した。P2Y₁レセプターを活性化する化合物６および化合物７の性能も、約2倍向上した。8-ブロモ修飾類似体である化合物８は、P2Y₁レセプターにおけるアンタゴニストとして化合物４よりも6.4倍性能が低く、アゴニスト活性が失われた。Ｎ₁-メチル類似体である化合物５は、アゴニスト活性を有さない弱いアンタゴニスト（化合物４と比べて9.5倍活性が低い）であった。環外アミンのアルキル化は、生物学的活性に重大な効果を有していた。Ｎ⁶-Me -2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビスホスフェートである化合物９は、デオキシアデノシン-3',5'-ビスホスフェートである化合物４(17倍)またはアデノシン-3' ,5'-ビスホスフェートである化合物１(13倍)よりもアンタゴニストとしてかなり高い性能(IC50値330nM)を示した(図8A)。この類似体は、2-MeSATPの非存在下に1 00μMの高い濃度でPLCを活性化しなかったので、アンタゴニスト特性しか示さなかった。N⁶-置換体のサイズに対するアンタゴニスト性能の強い依存性が観察された(図8)。メチル類似体である化合物９は、エチル類似体である化合物10よりもアンタゴニストとして3倍性能が高かった。化合物11において、N⁶-プロピル基は、アゴニスト特性およびアンタゴニスト特性の両方を完全に失った。同様に、化合物23（3'-ヒドロキシルも含む、すなわち化合物３の類似体）中のアミノ基において終わっている長鎖は、P2Y₁レセプターとの相互作用を完全に失った。化合物９の3'-デオキシ異性体である化合物18も、シチメンチョウP2Y₁レセプターにおいてアンタゴニストとして作用し、化合物９と性能が略等しかった。化合物18は、高濃度においてレセプターのわずかな活性を示した。N⁶-ベンゾイル修飾体である化合物12は、アゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとしてP2Y₁レセプターと化合物が相互作用する性能を完全に失った。化合物13におけるN⁶アミノ基の二重アルキル化により、化合物９と比べてアンタゴニストとしての活性を300倍以上失い、アゴニスト活性は観察されなかった。6-クロロおよび6-ヒドロキシ類似体である化合物14および化合物15は、それぞれ、P2Y₁レセプターにおいて本質的に不活性であった。6-メチルチオ類似体である化合物16は、P2Y₁レセプターにおいて非常に弱いアンタゴニストでしかなかった。化合物19におけるように５'-リン酸エステルをクロロと置換することにより、 P2Y₁レセプターにおけるアンタゴニストおよびアゴニスト活性を失った。リボース部分において2'-メトキシ基の存在する化合物20は、化合物４と比べて性能を2 .2倍低下させたが、アゴニスト効果の回復は非常に実質的な値（最大値の33%）であった。両ホスフェート基をチオホスフェートで置換した化合物21は、P2Y₁レセプターアンタゴニストとしての性能が15倍低下した。エテノ誘導体である化合物22はP2Y₁レセプターにおいて不活性であった。例１３化合物2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-3',5'-ビスホスフェート(化合物９) は性能を有しP2Y₁レセプターの競合的アンタゴニストであることが決定された。図9において、P2Y₁アゴニストである2MeSATPの対数投与量反応曲線を、対照(円) 、または0.1μM(ひし形)、0.3μM(三角)、１μM(四角)、3μM(アスタリスク)、1 0μ M(十字)および30μM(X)の化合物９の存在下で決定された。アゴニストの対数投与量反応曲線の右側への平行移動は、化合物９の競合的アンタゴニスト活性を示している。図9のデータは、[³H]イノシトールホスフェートの量（最大に対する％）で、2MeSATPの対数モル濃度の関数として示される。図10は、図９に示すデータのシルド回帰を示す。アンタゴニスト(化合物9)の増加濃度（投与量比として）における存在下又は非存在下における等しい反応を示すアゴニスト(2MeSATP )濃度の比率の計算値を、化合物９の対数（投与量比-1）に対する対数濃度（モル濃度）の関係によりプロットした。シルド回帰により得られた直線の傾きが約１（傾き＝0.912）であることから、化合物９はP2Y₁レセプターの競合的アンタゴニストであることが示される。図11は、P2Y₁レセプターへの化合物の選択的結合性および特異性を示す。クローニングされたヒトP2Y₁（左端）、P2Y₂（左から２番目）、P2Y₄（右から２番目）またはP2Y₆(右端)レセプターを発現する1321N1 ヒト星状細胞腫細胞におけるイノシトールホスフェートの蓄積を、化合物９の存在下（斜線棒）または不存在下（白棒）で測定した。化合物の存在は、P2Y₂およびP2Y₆を発現する細胞中においてイノシトールホスフェートの蓄積に影響を与えないが、P2Y₄レセプターを発現する細胞中に検出されるイノシトールホスフェートの量の増加に僅かの影響を与え、化合物９の存在は、P2Y₁を発現する細胞中のイノシトールホスフェートの発生を完全に抑制した。この結果は、化合物９がP2 Y₁レセプターに選択的に結合し、さらに化合物がP2Y₁レセプターの潜在的アンタゴニストであることを示している。この発明の例について説明したが、この説明によって限定することを意図するものではない。また、この発明は、以下の請求の範囲で定義され、この請求の範囲の均等物はその範囲に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 13/10 Ａ６１Ｐ 13/10 43/00 １１１ 43/00 １１１Ｃ０７Ｈ 19/10 Ｃ０７Ｈ 19/10 Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/566 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ハーデン，ティー・ケンドールアメリカ合衆国、27514 ノース・キャロライナ、チャペル・ヒル、レア・コート 191 (72)発明者ジェイコブソン，ケネス・エイアメリカ合衆国、メリーランド、シルヴァー・スプリング、ユニヴァーシティ・ブールヴァード・ウェスト 1111、アパートメント 504 (72)発明者カマイオーニ，エミディオアメリカ合衆国、20895 メリーランド、ケンジントン、パリセイズ・コート 11317

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式Ｉ（式中、ｍは１、２または３であり、ｎは１、２または３であり、ｐは０または１であり、ｑは０、１、２または３であるが、ｐが０の場合には、ｑは０でなく、 R₁はＨ、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシおよびアルキルチオからなる群より選択され、 R₂はヒドロキシ、ハロゲン、アルキルチオ、低級アルキル、置換低級アルキルおよび-NR'R''からなる群より選択され、ここでR'およびR''はＨ、低級アルキル、アロイル、アルコキシ、アルコキシおよびアルコキシアルキルからなる群よりそれぞれ独立に選択され、 R₃はＨ、ハロゲンおよび低級アルキルからなる群より選択され、 R₄はＨおよび低級アルキルからなる群より選択され、 X₁は０、Ｓ、ＮおよびＣＨ₂からなる群より選択され、 X₂、X₃およびX₄は、Ｈ、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシ、ホスフェート、チオホスフェート、カルボキシレートおよびニトロからなる群より、それぞれ独立に選択されるか、またはX₂およびX₃が一緒になってシクロホスフェートを形成し、但し、R₁、R₃およびR₄がそれぞれＨであり、ｍとｎとｐとがそれぞれ１であり、ｑが１、２または３であり、X₁が０であり、X₄がホスフェートであり、X₂およびX₃がそれぞれヒドロキシ、Ｈまたはホスフェート、または一緒になってシクロホスフェートである場合には、R₂は-ＮＨ₂ではない）で示される化合物および薬学的に許容できるその塩２．ｐおよびｑがそれぞれ１である請求項１に記載の化合物。３．ｎが１であり、X₃がＨである請求項１に記載の化合物。４．ｍが１であり、X₂がＨである請求項１に記載の化合物。５．R₂が-NR'R''であり、ここでR'およびR''がそれぞれ低級アルキルである請求項１に記載の化合物。６．R₂が-NR'R''であり、ここでR'がＨであり、R''が低級アルキルである請求項１に記載の化合物。７．R''がメチルである請求項６に記載の化合物。８．R₃がハロゲンである請求項１に記載の化合物。９．ｐが０であり、ｑが１であり、X₄がClである請求項１に記載の化合物。１０．R₂がアロイル、ハロゲン、ヒドロキシおよびアルキルチオからなる群より選択される請求項１に記載の化合物。１１．R₁がハロゲンおよびアルキルチオからなる群より選択される請求項１に記載の化合物。１２．X₂がアルコキシである請求項１に記載の化合物。１３．X₃およびX₄が、チオホスフェートおよびホスフェートからなる群よりそれぞれ選択される請求項１に記載の化合物。１４．２'-デオキシ-(N¹-メチル)アデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2-クロロ-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-2-メチルチオアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、8-ブロモ-2'-デオキシアデノシン-3' ,5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-N⁶-エチルアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-N⁶-プロピルアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、N⁶-ベンゾイル-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-N⁶-ジメチルアデノシン-3 ',5'-ビスホスフェート、6-クロロ-2'-デオキシプリンリボシド-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-6-メチルチオプリンリボシド-3',5'-ビスホスフェート、5'-クロロ-3'-デオキシアデノシン-2'-ホスフェート、3'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-2',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシ-2'-0-メチルアデノシン-3',5'-ビスホスフェート、2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス(チオホスフェート),2'-デオキシ-N¹,N⁶-エテノアデノシン-3',5'-ビスホスフェートからなる群より選択される請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。１５．2'-デオキシ-(N'-メチル)アデノシン-3',5'-ビス(アンモニウムホスフェート)、2-クロロ-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-2-メチルチオアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、8-ブロモ-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-N⁶-エチルアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-N⁶-プロピルアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、N⁶-ベンゾイル-2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-N⁶-ジメチルアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、6-クロロ-2'-デオキシプリンリボシド-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシイノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-6-メチルチオプリンリボシド-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェード)、5'-クロロ-3'-デオキシアデノシン-2'-(ジアンモニウムホスフェート)、3'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-2',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシ-2'-0-メチルアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)、2'-デオキシアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムチオホスフェート),および2'-デオキシ-N¹,N⁶-エテノアデノシン-3',5'-ビス(ジアンモニウムホスフェート)からなる群より選択される請求項１に記載の化合物。１６．P2Y₁レセプターにおいてアンタゴニスト活性を有する請求項１に記載の化合物。１７．P2Y₁レセプターにおいて競合的アンタゴニスト活性を有する請求項１に記載の化合物。１８．P2Y₁レセプターに選択的に結合する請求項１に記載の化合物。１９．P2Y₁レセプターを含んでいると思われる生物学的サンプル中のP2Y₁レセプターを検出する方法であって、前記生物学的サンプルを下記式Ｉで示される化合物および薬学的に許容できるその塩に接触させるステップと、（式中、ｍは１、２または３であり、ｎは１、２または３であり、ｐは０または１であり、ｑは０、１、２または３であるが、ｐが０の場合には、ｑは０でなく、 R₁はＨ、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシおよびアルキルチオからなる群より選択され、 R₂はヒドロキシ、ハロゲン、アルキルチオ、低級アルキル、置換低級アルキルおよび-NR'R''からなる群より選択され、ここでR'およびR''は、Ｈ、低級アルキル、アロイル、アルコキシ、アルコキシおよびアルコキシアルキルからなる群より、それぞれ独立に選択され、 R₃はＨ、ハロゲンおよび低級アルキルからなる群より選択され、 R₄はＨおよび低級アルキルからなる群より選択され、 X₁はＯ、Ｓ、ＮおよびＣＨ₂からなる群より選択され、 X₂、X₃およびX₄は、Ｈ、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル、ハロゲン、アルコキシ、ホスフェート、チオホスフェート、カルボキシレートおよびニトロからなる群より、それぞれ独立に選択されるか、またはX₂およびX₃が一緒になってシクロホスフェートを形成する）、ここで、当該式Ｉで示される化合物はP2Y₁レセプターに選択的に結合し、つづいて、前記生物学的サンプル中のレセプターに対する前記P2Y₁レセプターアンタゴニストの結合の有無を検出し、結合が存在する場合は、P2Y₁レセプターが存在することを示すステップとを含んでなる方法。２０．式Ｉで示される化合物が、アデノシン3',5'-ビスホスフェートおよびアデノシン2',5'-ビスホスフェートからなる群より選択される請求項１９に記載の方法。２１．前記化合物が2'-デオキシ-N⁶-メチルアデノシン-3',5'-ビスホスフェートである請求項１９に記載の方法。２２．下記式II （式中、ｍは１、２または３であり、ｎは１、２または３であり、ｐは０または１であり、ｑは０、１、２または３であるが、ｐが０の場合には、ｑは０でなく R₁はＨ、低級アルキルおよびハロゲンからなる群より選択され、 R₂はＨおよび低級アルキルからなる群より選択され、 X₁はＯ、Ｓ、ＮおよびＣＨ₂からなる群より選択され、 X₂、X₃およびX₄は、Ｈ、ヒドロキシ、低級アルキル、アミノ、ハロゲン、アルコキシ、ホスフェート、チオホスフェート、カルボキシレートおよびニトロからなる群より、それぞれ独立に選択されるか、またはX₂およびX₃が一緒になってシクロホスフェートを形成し、ここで、R₁およびR₂がＨであり、ｐとｍとｎとがそれぞれ１であり、ｑが１、２または３であり、X₁がＯである場合、X₂およびX₃はＨでなく、X₂およびX₃は- ＯＨでなく、およびX₂およびX₃は一緒になってシクロホスフェートを形成しない）で示される化合物および薬学的に許容できるその塩。２３．ｐが０であり、ｑが１であり、およびX₄がＣｌである請求項２２に記載の化合物。２４．P2Yレセプターにおいてアンタゴニスト活性を有する請求項２２に記載の化合物。２５．P2Yレセプターにおいて競合的アンタゴニスト活性を有する請求項２２に記載の化合物。２６．P2Yレセプターに選択的に結合する請求項２２に記載の化合物。２７．P2Yレセプターを含んでいると思われる生物学的サンプル中のP2Yレセプターを検出する方法であって、前記生物学的サンプルを下記式IIで示される新規化合物および薬学的に許容できるその塩に接触させるステップと、（式中、ｍは１、２または３であり、ｎは１、２または３であり、ｐは０または１であり、ｑは０、１、２または３であるが、ｐが０の場合には、ｑは０でなく、 R₁はＨ、低級アルキルおよびハロゲンからなる群より選択され、 R₂はＨおよび低級アルキルからなる群より選択され、 X₁はＯ、Ｓ、ＮおよびＣＨ₂からなる群より選択され、 X₂、X₃およびX₄は、Ｈ、ヒドロキシ、低級アルキル、アミノ、ハロゲン、アルコキシ、ホスフェート、チオホスフェート、カルボキシレートおよびニトロからなる群より、それぞれ独立に選択されるか、またはX₂およびX₃が一緒になってシクロホスフェートを形成する）、ここで、この式IIで示される化合物はP2Yレセプターに選択的に結合し、つづいて、前記生物学的サンプル中のレセプターに対する前記P2Yレセプターアンタゴニストの結合の有無を検出し、結合の存在はP2Yレセプターが存在することを示すステップとを含んでなる方法。２８．前記P2YレセプターがP2Y₂レセプターである請求項２７に記載の方法。２９．前記P2YレセプターがP2Y₄レセプターである請求項２７に記載の方法。