JP2001206893A - 新規α−アミラーゼ阻害活性物質、その製造方法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】糖尿病或いは肥満を予防、治療或いは改善でき
る優れた飲食品、薬剤或いはそのために有効な成分を提
供する。 【解決手段】コレウスフォルスコリから、従来コレウス
フォルスコリの主たる生理活性物質とされていたフォル
スコリンとは、全く異なる成分であり、フォルスコリン
には認められないアルコール可溶性のα−アミラーゼ阻
害活性作用を示す化合物を含む物質を分離する。このα
−アミラーゼ阻害活性物質には血糖の上昇を抑制する作
用が有り、この物質は、好ましくはα−グルコシダーゼ
阻害活性作用及び／又はリパーゼ阻害活性作用も持ち合
わせており、糖尿病や肥満の予防、治療、改善等に有効
であり、そのための医薬品、飲食品に期待できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はコレウスフォルスコ
リから得られうる新規α−アミラーゼ阻害活性物質、新
規α−アミラーゼ阻害剤及びそれ等の製造方法に関し、
この新規物質又は新規αーアミラーゼ阻害剤が血糖の上
昇を抑制する効果を有し、好ましくはα−グルコシダー
ゼ阻害活性作用やリパーゼ阻害活性作用も有しており、
高血糖或いは肥満の予防、治療、改善等に有効であるこ
とから、健康食品や、各種医薬品等への使用が期待さ
れ、本発明はこれ等の用途にも関する。

【０００２】

【従来の技術】肥満は、虚血性心疾患、高血圧、糖尿病
等多くの疾患のリスクファクターであり、高血圧症３３
００万人、高脂血症２０００万人、糖尿病６９０万人の
患者のうち３〜６割については、肥満が原因と日本肥満
学会は推定した。更に、日本における肥満は、この３０
年で２〜４倍に増えており、国民の健康を脅かす大きな
要因となっている。今後、高齢化が進むにつれ、生活習
慣病は益々増加するものと考えられ、肥満防止は健康面
ばかりでなく社会的及び経済的側面からも克服すべき重
要な課題となりつつある。

【０００３】肥満の９割以上が単純性肥満と称する消費
エネルギーに対する摂取エネルギーの過多に起因するも
のである。これを防止するには、１）摂取エネルギーの
抑制及び２）エネルギー消費の促進がある。

【０００４】１）については食事制限、食欲抑制剤の投
与、消化管内での脂質等の吸着による吸収の抑制、難消
化性食物繊維による満腹感の形成、消化酵素阻害剤の投
与等の方法がある。

【０００５】２）については、運動療法、エネルギー代
謝促進剤の投与等がある。

【０００６】コレウスフォルスコリは、その根の部分が
従来インドにおいては強心剤、強精剤的効果を期待した
保健食品としてピクルス等の形態で食されてきた。ま
た、近年の医薬品開発の分野においては、1977年、Baht
により発見された、細胞内ｃＡＭＰ濃度を上昇させるジ
テルペン化合物、フォルスコリン（Forskolin）に関し
て、血圧降下薬（特開昭63-10783号公報参照。）や、白
髪防止薬（特開平4-124122号公報及び特開平4-360836号
公報参照。）としての検討がなされている。更に、この
物質に関してｃＡＭＰの上昇に伴い細胞内の脂質代謝が
亢進することから、肥満防止作用（脂質代謝改善）（Bi
ochemical and Biophysical Research Comm.,vol.107(1
982), p157-164参照。）についても研究が進められてい
る。

【０００７】現在、コレウスフォルスコリ根部よりフォ
ルスコリンを抽出精製して、肥満防止用健康食品、育毛
促進用医薬部外品の製造が行われ製品が上市されてい
る。フォルスコリンは、水に不溶性でアセトン、クロロ
ホルム、ベンゼン等に可溶性の化合物で、通常は、根の
粉末よりアセトンにて抽出し、上記疎水性溶媒を用い
て、精製される。

【０００８】このような情況下に、高血糖を改善し、或
いは肥満を防止できる更に優れた薬剤、特に経口可能な
薬剤、飲食品の開発が求められている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、高血
糖或いは肥満を予防、治療及び／又は改善できる優れた
飲食品特に健康食品、薬剤或いはそれらに使用可能な成
分の開発にある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者等は上記課題の
解決に向けて鋭意検討した結果、コレウスフォルスコリ
から、従来コレウスフォルスコリの主たる生理活性物質
とされていたフォルスコリンとは、全く異なる成分であ
り、フォルスコリンには認められないα−アミラーゼ阻
害活性作用を示す化合物を含む新規物質（以下、「本発
明の物質」或いは「α−アミラーゼ阻害活性物質」とも
称する。）を見出した。更に、このα−アミラーゼ阻害
活性物質には血糖の上昇を抑制する作用が有り、糖尿病
や肥満の予防、治療、改善等に有効であることも見出さ
れ、これらの知見に基づいて本発明が完成されるに到っ
た。

【００１１】この物質は、前記α−アミラーゼ阻害活性
作用を示す化合物を純品で又は高純度に含むこともでき
るし、高度に濃縮された形態で含むこともできる。好ま
しくは、α−グルコシダーゼ阻害活性作用や、リパーゼ
阻害活性作用を有することも見出されている。

【００１２】即ち、本発明は、その各種の形態として下
記の内容を含む。 １． コレウスフォルスコリから、水又はアルコールに
可溶で、α−アミラーゼ阻害活性作用を示す（有する）
化合物を含む物質を分離することに特徴を有するα−ア
ミラーゼ阻害活性物質又はα−アミラーゼ阻害剤の製造
方法。

【００１３】２． α−アミラーゼ阻害活性作用を示す
化合物を含む物質がα−グルコシダーゼ阻害活性作用及
び／又はリパーゼ阻害活性作用を有する上記製造方法。
特に好ましくは、α−アミラーゼ阻害活性作用を示す化
合物がα−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又はリパ
ーゼ阻害活性作用を有する上記製造方法。

【００１４】３． コレウスフォルスコリとしてコレウ
スフォルスコリ根部、好ましくはその粉末を使用する上
記製造方法。

【００１５】４． アルコールが、メタノール及びエタ
ノールの少なくとも１種である上記製造方法。

【００１６】５． α−アミラーゼ阻害活性作用を示す
化合物を含む物質がアセトンに不溶である上記製造方
法。本発明、特に本発明の物質（或いは本発明において
製造される物質又はα−アミラーゼ阻害剤）には、その
一形態としてコレウスフォルスコリからこのようにして
製造されたアセトンに不溶でアルコールに可溶な物質が
含まれる。従って、高純度α−アミラーゼ阻害活性物質
のみならず、それを含有する未精製のアルコール抽出物
（コレウスフォルスコリから）が本発明で製造される物
質或いはα−アミラーゼ阻害剤に含まれ、即ち当該活性
成分の化合物自体及び当該化合物を含む物質が本発明の
物質或いは本発明のα−アミラーゼ阻害剤に該当する。
当然、この化合物或いはこの物質は、特に好ましくは、
更にα−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又はリパー
ゼ阻害活性作用を有している。

【００１７】６． コレウスフォルスコリから分離する
ことができ、α−アミラーゼ阻害活性作用を示すことに
特徴を有する新規物質、又はα−アミラーゼ阻害剤。こ
のような阻害活性作用を有する化合物の形態でも、当該
化合物を高純度又は濃縮された状態で含む形態でもよ
い。

【００１８】７． 更に、α−グルコシダーゼ阻害活性
作用及び／又はリパーゼ阻害活性作用を有する前記物
質、又はα−アミラーゼ阻害剤。この場合、α−アミラ
ーゼ阻害活性作用を示す化合物を含み、この化合物がα
−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又はリパーゼ阻害
活性作用を有することがより好ましい。

【００１９】８． アセトンに不溶で、水又はアルコー
ル（メタノール、エタノール、イソプロパノール等）に
可溶である上記新規物質、又はα−アミラーゼ阻害剤。
前記アルコール抽出物の形態であっても、この新規物質
を含む限り、またα−アミラーゼ阻害活性作用を示す限
りこの発明の中に含まれる。

【００２０】９． 上記新規物質、又はα−アミラーゼ
阻害剤を有効成分として含有することに特徴を有する糖
尿病或いは肥満の予防、治療及び／又は改善薬。

【００２１】10． 上記新規物質、又はα−アミラーゼ
阻害剤を含有することに特徴を有する飲食品（健康食品
等）。

【００２２】11．コレウスフォルスコリから、水又はア
ルコールに可溶で、α−アミラーゼ阻害活性、α−グル
コシダーゼ阻害活性及びリパーゼ阻害活性の少なくとも
一の阻害活性作用を示す化合物を含む物質を分離するこ
とに特徴を有するα−アミラーゼ阻害活性、α−グルコ
シダーゼ阻害活性及び／又はリパーゼ阻害活性物質、又
はα−アミラーゼ、α−グルコシダーゼ及び／又はリパ
ーゼ阻害剤の製造方法。この場合、複数の阻害活性を含
む物質、特に好ましくは複数の阻害活性を有する化合物
を含む物質を、高純度に分離することができる。

【００２３】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。本発明の新規物質は、従来コレウスフォル
スコリの主たる生理活性物質とされていたフォルスコリ
ン（Forskolin）とは、全く異なる成分であり、フォル
スコリンには認められないα−アミラーゼ阻害活性作用
を有する。即ち、フォルスコリンを抽出した残渣のコレ
ウスフォルスコリから本発明の物質を抽出することがで
きるので、インドや日本で利用されているフォルスコリ
ンの製造に際し、新たなる高付加価値物質が創成される
こととなり、産業上の利点は大きい。

【００２４】この新規物質は水、メタノール、エタノー
ルで、植物コレウスフォルスコリから抽出され、更に疎
水性吸着剤、例えば三菱化学（株）製ダイヤイオン「Ｈ
ｐ−２０」等で精製し、高速液体クロマトグラフィーに
て処理すると、α−アミラーゼ阻害活性が強く認められ
る分画を確認することができる。

【００２５】この物質は、前述の如く前記α−アミラー
ゼ阻害活性作用を示す化合物を純品で又は高純度に含む
こともできるし、高度に濃縮された形態で含むこともで
きる。好ましくは、このような物質においてα−グルコ
シダーゼ阻害活性作用や、リパーゼ阻害活性作用をも有
する物質であり、最も好ましくは、純品又は高純度のα
−アミラーゼ阻害活性作用を示す化合物の形態で、かつ
α−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又はリパーゼ阻
害活性作用をも有する化合物の形態で存在する物質であ
る。

【００２６】本発明には、その一つ形態或いは他の別の
形態として、このような物質を含有することに特徴を有
するα−アミラーゼ阻害剤、或いは当該物質を前記の如
く製造する方法に特徴を有するα−アミラーゼ阻害剤の
製造方法が含まれる。

【００２７】本発明の新規物質或いはα−アミラーゼ阻
害剤を製造するための原料としてコレウスフォルスコリ
を使用することができるが、これはネパール、インド地
方に自生するシソ科の植物 Coleus forskohlii であ
り、この植物から抽出するのが簡便である。同じ物質を
含む別の植物から製造することもできるし、また別途合
成する方法も考えられる。

【００２８】本発明の新規物質或いはα−アミラーゼ阻
害剤は、下記の性状を有している：ニンヒドリン反応陽
性（アミノ基及びカルボキシル基を末端に有する）；紫
外部吸収は２５０ｎｍを極大とする、フェーリング反応
陽性かつアンモニア性硝酸銀を還元して銀を析出する
（還元糖分子を有する）；６０℃で２０分の加熱処理で
α−アミラーゼ阻害活性は消失しない；蛋白分解酵素で
あるトリプシンによるカゼインの加水分解を阻害しな
い；及び分子量は１０，０００以下である。

【００２９】本発明の、α−アミラーゼ阻害活性物質
は、糖尿病或いは肥満の予防、治療、改善効果等好まし
い作用を有し、かつ後述の試験から明らかな如く、安全
性に優れているので、医薬品或いは飲食品として利用す
ることができる。

【００３０】ラットを用いたデンプン負荷試験の結果
（図５及び６参照。）では、本発明のα−アミラーゼ阻
害活性物質或いはα−アミラーゼ阻害剤により血糖の上
昇が抑制される傾向が明らかとなった。この結果、抗肥
満、抗糖尿病を目的とする医薬品又は健康食品への使用
が期待できる。

【００３１】本発明のα−アミラーゼ阻害活性物質或い
はα−アミラーゼ阻害剤を投与することにより、体重の
減少、体脂肪率の減少が明確に認められ、肥満の予防、
治療若しくは改善に対する有効性が確認された。

【００３２】本発明のα−アミラーゼ阻害活性物質或い
はα−アミラーゼ阻害剤は、植物コレウスフォルスコリ
から容易に分離することができ、α−アミラーゼ阻害活
性作用を有する物質であり、その製造は特に困難は無く
例えば、従来フォルスコリンを抽出した残渣（アセトン
に不溶）から、水或いはアルコールで容易に抽出、分離
することができる。コレウスフォルスコリ根部粉末から
本発明の目的物質を抽出するのが簡便である。

【００３３】また、アセトン抽出残渣からではなく、コ
レウスフォルスコリから直接アルコール抽出物をそのま
ま本発明品（本発明の物質若しくはα−アミラーゼ阻害
活性物質、又はα−アミラーゼ阻害剤）として使用する
こともできる。

【００３４】このようにして得られるアルコール抽出物
（本発明の新規物質を含有する）を、更に精製すること
なくそのまま、α−アミラーゼ阻害剤として、またそれ
を含み、又は使用して健康食品等の飲食品に使用するこ
ともできるし、他の飲食品に配合して使用することもで
きる。

【００３５】本発明のα−アミラーゼ阻害活性作用を示
す化合物を含む物質は、好ましくはα−グルコシダーゼ
阻害活性作用及び／又はリパーゼ阻害活性作用を有して
おり、前記各種の用途としてより好ましく利用される。

【００３６】

【実施例】以下、実施例により本発明をより詳細に説明
する。

【００３７】（実施例１）フォルスコリンとα−アミラ
ーゼ阻害活性物質の分別採取 コレウスフォルスコリ根部（粉末）からアセトン抽出を
行った。コレウスフォルスコリ根部（粉末）３００ｇに
アセトン９００ｍｌを加えて、室温で７時間攪拌を行っ
た。得られたアセトン溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮後
乾燥してアセトン抽出乾燥末６．５ｇ（アセトン抽出
物）を得た。一方、濾過残渣を減圧乾燥し、乾燥粉末２
５５ｇ（アセトン抽出残渣）を得た。

【００３８】上記に得られたアセトン抽出残渣２５５ｇ
にエタノール６００ｍｌを加えて、室温で７時間攪拌を
行った。濾過後、濾液について減圧濃縮後、減圧乾燥を
行い、エタノール抽出末２０ｇ（エタノール抽出物）を
得た。

【００３９】前記エタノール抽出物５ｇを１０ｍｌの水
に溶解し、（三菱化学（株）製、疎水性吸着樹脂、ダイ
ヤイオン「Ｈｐ−２０」により５０ｍｌのカラムに通液
し７５ｍｌの水で水洗した後、８０％メタノール１００
ｍｌを用いてカラムより溶出せしめた。溶出液を濃縮
後、減圧乾固したところ、３００ｍｇの褐色粉末（「コ
レウスＡＩ分画物」と称する。）を得た。この粉末は、
α−アミラーゼ活性を阻害した。

【００４０】尚、α−アミラーゼ阻害活性の有無はアミ
ラーゼのデンプン分解反応の阻害による検出法により確
認された。

【００４１】アセトン抽出物とエタノール抽出物をシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーにて展開し比較したとこ
ろ、アセトン抽出物には、フォルスコリンが存在するの
に対してエタノール抽出物には、フォルスコリンは存在
しなかった。更に、α−アミラーゼ阻害活性を調べたと
ころ、アセトン抽出物にはα−アミラーゼ阻害活性作用
が認められなかったが、エタノール抽出物には強いα−
アミラーゼ阻害活性作用が認められた。

【００４２】前記コレウスＡＩ分画物について高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて精製し、下記
のように成分の分画と活性部分の同定を行った。

【００４３】条件：ＨＰＬＣポンプ；ｓｈｉｍａｚｕ
ＬＣ−１０ＡＴｖｐ 紫外線検出器；ｓｈｉｍａｚｕ ＳＰＤ−１０Ａｖｐ クロマトパック；ｓｈｉｍａｚｕ Ｃ−Ｒ６Ａ 溶媒、試薬；アセトニトリル（和光純薬工業、特級）、
水（和光純薬工業、蒸留水）、トリフルオロ酢酸（和光
純薬工業、特級） サンプル調製；コレウスＡＩ分画物３０ｍｇを水１ｍｌ
に溶解し、２０μｌをチャージした。

【００４４】展開条件；０．１％トリフルオロ酢酸水溶
液と０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液の１
００／０，９５／５，９０／１０，８０／２０，６０／
４０，２０／８０，０／１００の混合比におけるステッ
プワイズ溶出を行った。その結果を図１に示す。

【００４５】図１に得られたピークのうち分画Ｅのみα
−アミラーゼ阻害活性作用を示した。

【００４６】（α−アミラーゼ阻害活性物質の性状）α
−アミラーゼ阻害活性物質についてその性状を調べたと
ころ以下の結果となった。

【００４７】1)ニンヒドリン反応：陽性（アミノ基及び
カルボキシル基を末端に有する）；紫外部吸収：２５０
ｎｍに極大； 2)フェーリング反応：陽性かつアンモニア性硝酸銀を還
元して銀を析出する（還元糖分子を有する）； 3)６０℃で２０分の加熱処理でα−アミラーゼ阻害活性
は消失しない；及び 4)蛋白分解酵素であるトリプシンによるカゼインの加水
分解を阻害しない。

【００４８】フォルスコリン（和光純薬工業（株）製）
とα−アミラーゼ阻害活性物質（前記精製品）について
の高速液体クロマトグラフィーを行った。

【００４９】条件：ＨＰＬＣポンプ；ｓｈｉｍａｚｕ
ＬＣ−１０ＡＴｖｐ 紫外線検出器；ｓｈｉｍａｚｕ ＳＰＤ−１０Ａｖｐ クロマトパック；ＤＡＩＳＯ-ＰＡＫ、SP-120-5-ODSA
P、250×4.6mm 溶媒；トリフルオロ酢酸（和光純薬工業、特級）、水
（和光純薬工業、蒸留水）、 アセトニトリ
ル（和光純薬工業、特級）。

【００５０】サンプル調製；コレウスＡＩ分画物は３０
ｍｇを、フォルスコリンは１０ｍｇを、１ｍｌの０．１
％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル＝４０／６
０に溶解し、各々３μｌをチャージした。

【００５１】展開条件；０．１％トリフルオロ酢酸水溶
液／アセトニトリル＝４０／６０、流速；１ｍｌ／分、
検出；紫外部吸収：２２０ｍｍ。

【００５２】図２（α−アミラーゼ阻害活性物質）及び
図３（フォルスコリン）に見られるようにフォルスコリ
ンの液体クロマトグラフィーのピークは、本発明で見出
されたα−アミラーゼ阻害活性物質のピークとリテンシ
ョンタイムが全く異なり、しかもα−アミラーゼ阻害活
性物質の抽出精製分画には、フォルスコリンのピークは
全く存在せず、展開溶媒を替えても、同様の傾向が認め
られた。この結果より、α−アミラーゼ阻害活性に焦点
を合わせた、コレウスフォルスコリからのエタノール抽
出物中にはフォルスコリンは存在せず、前記図１におい
て特定した分画中に存在するα−アミラーゼ阻害活性物
質が主たる生理活性を発現していることが分かる。

【００５３】目的とするピークの画分を、この分野で各
種の精製手段として知られている方法（常法、慣用法
等）を利用し又は組み合わせて分離することにより目的
とする阻害活性作用を有する化合物、或いはこの化合物
がより精製された形態で含まれる物質を得ることができ
る。

【００５４】（フォルスコリンとコレウス由来α−アミ
ラーゼ阻害活性物質[α−ＡＩ]の性状の比較）

【００５５】 ＊１ 疎水性吸着樹脂、三菱化学（株）製ダイヤイオン ＊２ 疎水性吸着樹脂、ロームアンドハース社製アンバ
ーライト ＊３ 強酸性イオン交換樹脂、三菱化学（株）製ダイヤ
イオン ＊４ 強塩基性イオン交換樹脂、三菱化学（株）製ダイ
ヤイオン ＊５ 弱酸性イオン交換樹脂、三菱化学（株）製ダイヤ
イオン ＊６ 弱塩基性イオン交換樹脂、三菱化学（株）製ダイ
ヤイオン

【００５６】検出方法：フォルスコリンは薄層クロマト
クラマトグラフィー、α−ＡＩはアミラーゼのデンプン
分解反応の阻害で検出した。

【００５７】（分子量の測定）コレウスＡＩ分画物につ
いて分子量分布を求めた。東ソー（株）製シリカ系ゲル
濾過剤 TSKgel G3000SW_XLカラムを用いたサイズ排除ク
ロマトグラフィー（SEC）により分子量分布を測定し
た。結果を下記の表に示す。

【００５８】

【００５９】以上の結果から、本発明の新規物質の分子
量は10,000以下であることが分かった。

【００６０】（安全性試験）本発明の新規物質を含有す
る、コレウスフォルスコリのコレウスＡＩ分画物を、ｄ
ｄｙ系マウス雄（体重２２−２４ｇ）に経口投与し、７
２時間飼育観察した結果、６００〜２０００ｍｇ／ｋｇ
の投与において全例が生存し、一般行動観察及び腹腔内
の解剖所見も正常であった。従って、安全性に優れた物
質でることが確かめられた。

【００６１】（アミラーゼ阻害活性試験）本発明の物質
について試験管内のアミラーゼ活性に及ぼす作用を調べ
た。基質緩衝液０．５ｍｌにアミラーゼ（和光純薬工業
（株）製１ｍｇ／ｍｌ濃度；枯草菌製）０．０１ｍｌ及
び試料（コレウスＡＩ分画物を２００ｍＭ燐酸緩衝液ｐ
Ｈ７．０に溶解、最終濃度０．２５、２．５、５ｍｇ／
ｍｌになるように調整。）０．５ｍｌを添加して、３７
℃で７．５分間反応をさせた後、発色試液（アミラーゼ
測定キット（アミラーゼ−テストワコー）の発色液を使
用。）０．５ｍｌと水２．０ｍｌを加え、よく混合して
波長６６０ｎｍで吸光度を測定する。結果を図４に示し
た。

【００６２】（デンプン負荷試験）ラットを用いたデン
プン負荷試験を実施し、デンプン負荷後の血中グルコー
ス及びインスリンの変化を測定した。デンプン投与後の
ラット血液中のグルコース及びインスリン含量に及ぼす
本発明の物質（コレウスＡＩ分画物）の影響を図５及び
６に示した。

【００６３】以上の結果から、本発明の物質を投与した
群では、６０分及び１２０分後の血中グルコース濃度は
非投与群に比べて低値を示し、本発明のα−アミラーゼ
阻害活性物質によりデンプンの消化吸収を阻害すること
による、炭水化物の体内取り込みが抑制され血糖の上昇
が抑制される傾向が明らかとなった。この結果、抗肥
満、抗糖尿病を目的とする医薬品又は健康食品への使用
が期待できる。

【００６４】（α−グルコシダーゼ阻害活性試験）次
に、α−グルコシダーゼ阻害活性試験を行った結果を示
す。試料の調製及び試験法については下記の通り行っ
た。

【００６５】酵素にはα−グルコシダーゼ（酵母製、和
光純薬工業）を使用し、その１００Ｕを０．０５Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ＝５．５）にて５０ｍｌに溶解した（酵素
液）。基質にはｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−グルコピ
ラノシド、３８ｍｇを上記酢酸緩衝液１００ｍｌ（１．
２ｍＭ）に調整した（基質溶液）。被試験物の阻害物に
は、試料としてコレウスエキス末（前記コレウスＡＩ分
画物使用）、桑の葉エキス末及び大麦抽出物を用い、上
記酢酸緩衝液に各試料を溶解し、それぞれ１ｍｇ／ｍ
ｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ及び０．２５ｍｇ／ｍｌの溶液を
調製した（試料溶液）。

【００６６】酵素反応を下記の通り行い、各試料につい
ての阻害活性度を測定した。 （第１段階）酵素液１ｍｌに試料（阻害物）溶液１ｍｌ
を加えて、３５℃で１０分間反応を行う。 （第２段階）第１段階で得られた溶液に２ｍｌの基質溶
液を加え、３５℃で１５分間反応を行う。 （第３段階）α−グルコシダーゼの作用による反応性生
物であるニトロフェノールの量を、４０５ｎｍの吸光度
の測定により計算した。

【００６７】（測定結果）以上のα−グルコシダーゼ阻
害活性試験の結果、試料（阻害物）１ｍｇ／ｍｌの濃度
でコレウスＡＩ分画物９３％、桑の葉エキス末９５％及
び大麦抽出物１３％であった。更に、コレウスＡＩ分画
物は、α−グルコシダーゼの活性を容量依存的に阻害す
ることが確認された。即ち、１ｍｇ／ｍｌ：９３％；
０．５ｍｇ／ｍｌ：２８％；及び０．２５ｍｇ／ｍｌ：
７％であった。

【００６８】この結果から、本発明の物質はα−グルコ
シダーゼ阻害活性作用を有していることが理解される。
桑の葉からの抽出物に関し、その有効成分（α−グルコ
シダーゼ阻害活性成分）は、グルコースの類似構造物質
である１−デオキシノジリマイシンであり、その構造か
ら推定してその阻害様式は拮抗阻害であると考えられ
る。

【００６９】一方、コレウスからのα−グルコシダーゼ
阻害活性物質は、その分子量（高速液体クロマトグラフ
ィーのピークからの推定で、分子量：１万以下、１００
０以上）から推定して、その阻害様式は非拮抗阻害であ
ると考えられる。従って、上記桑の葉からの抽出物はシ
ョ糖、オリゴ糖等の基質が多量に存在すると十分な阻害
効果を発揮しない可能性があるのに対し、コレウスから
の抽出物は存在する基質の量に関係なく、一定の阻害効
果を発揮するものと期待される。

【００７０】（リパーゼ阻害活性について）脂質の消化
阻害力の測定（日本農芸化学会誌、６７巻、Ｎｏ．１１
参照。）に従って、リパーゼ阻害活性試験を行った。被
試験試料調製のための酵素については、ブタ膵液リパー
ゼＴｙｐｅ−II（シグマ社製）を、基質にはトリオレイ
ンを、阻害の程度を試験する阻害物には試料として前記
コレウスＡＩ分画物を、それぞれ使用した。

【００７１】試料溶液１）〜３）を下記の通り調製し
た。酵素は１６８Ｕ／ｍｌ（０．１Ｍ燐酸緩衝液、ｐＨ
＝８．０）の溶液（酵素液）で、基質はエーテル：エタ
ノール＝１：１の混合溶液中１０ｍｇ／ｍｌに調整した
溶液（基質溶液）で、被試験物の阻害物には、試料の１
％溶液（０．１Ｍ燐酸緩衝液、ｐＨ＝８．０）（試料溶
液）で、それぞれ用いた。

【００７２】１）前記燐酸緩衝液２ｍｌ； ２）酵素液１ｍｌ＋前記燐酸緩衝液１ｍｌ：及び ３）酵素液１ｍｌ＋試料溶液１ｍｌ。

【００７３】（試験法）前記１）〜３）を、それぞれ３
７℃で１０分間プレインキュベイトする。その後、基質
溶液５ｍｌを加えて３７℃で６０分間インキュベイトす
る。煮沸失活の後、１０ｍｌのエーテル：エタノール＝
１：１の混合溶媒で未反応基質を抽出し、反応物を１／
１００Ｎ−ＫＯＨでｐＨ＝９．０を終点として滴定す
る。

【００７４】（阻害活性の測定と測定値）使用した酵素
の５０％を阻害する阻害物（試料）の重量（ｍｇ）を、
阻害活性値として求めた。コレウスＡＩ分画物のリパー
ゼ阻害活性は、６７１Ｕ／ｍｇであった。以上の結果か
ら、本発明の物質が著しくリパーゼ阻害活性作用を有す
ることが分かる。

【００７５】（肥満予防、治療、改善効果）健常ボラン
ティア６名にコレウスＡＩ分画物８０ｍｇを含む２５０
ｍｇ三角粒を１日六粒、１４日間にわたり投与したとこ
ろ２名に体重の減少、４名に体脂肪率の減少が認めら
れ、肥満の予防、治療若しくは改善に対する有効性が認
められた。本発明のα−アミラーゼ阻害活性物質には肥
満の予防、治療、改善効果が認められた。

【００７６】（実施例２）コレウスフォルスコリα−ア
ミラーゼ阻害活性物質の製造 コレウスフォルスコリ根部（粉末）３０ｋｇにエタノー
ルを４５Ｌ添加して室温で６時間攪拌し抽出を行った。
抽出液について吸引濾過を行い、濾液（エタノール抽出
液）３４Ｌを得た。これを減圧濃縮して、減圧乾固する
ことにより乾燥粉末（エタノール抽出物）２５８０ｇを
得た。このようにして得られるエタノール抽出物を健康
食品、或いは健康食品に添加して使用することができ
る。

【００７７】

【発明の効果】本発明により、糖尿病或いは肥満の予
防、治療及び／又は改善に有用な新規α−アミラーゼ阻
害活性物質或いはαーアミラーゼ阻害剤を提供すること
ができる。この物質（或いはα−アミラーゼ阻害剤）
は、好ましくはα−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／
又はリパーゼ阻害活性作用をも有し、この物質（或いは
α−アミラーゼ阻害剤）を有効成分として含有し又は使
用することで、糖尿病或いは肥満の予防、治療及び／又
は改善薬並びにそれ等の効果を有する飲食品（健康食品
等）、又はそのための成分を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ＨＰＬＣによるα−アミラーゼ阻害活
性物質の精製結果を示す図である。ピークNo.、時間及
び面積比率の関係は下記の通りである。

【図２】図２は、液体クロマトグラフィーによるα−ア
ミラーゼ阻害活性物質のピークを示す図である。ピーク
No.、時間及び面積比率の関係は下記の通りである。

【図３】図３は、液体クロマトグラフィーによるフォル
スコリンのピークを示す図である。ピークNo.、時間及
び面積比率の関係は下記の通りである。

【図４】図４は、α−アミラーゼ阻害活性物質によるア
ミラーゼ活性に及ぼす影響を示す図である。

【図５】図５は、α−アミラーゼ阻害活性物質によるグ
ルコース含量に及ぼす影響を示す図である。

【図６】図６は、α−アミラーゼ阻害活性物質によるイ
ンスリン含量に対する影響を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】コレウスフォルスコリから、水又はアルコ
   ールに可溶で、α−アミラーゼ阻害活性作用を示す化合
   物を含む物質を分離することを特徴とするα−アミラー
   ゼ阻害活性物質の製造方法。
2. 【請求項２】コレウスフォルスコリから、水又はアルコ
   ールに可溶で、α−アミラーゼ阻害活性作用を示す化合
   物を含む物質を分離することを特徴とするα−アミラー
   ゼ阻害剤の製造方法。
3. 【請求項３】α−アミラーゼ阻害活性作用を示す化合物
   を含む物質がα−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又
   はリパーゼ阻害活性作用を有する請求項１又は２記載の
   方法。
4. 【請求項４】α−アミラーゼ阻害活性作用を示す化合物
   がα−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又はリパーゼ
   阻害活性作用を有する請求項１〜３何れか記載の方法。
5. 【請求項５】コレウスフォルスコリがコレウスフォルス
   コリ根部である請求項１又は２記載の方法。
6. 【請求項６】アルコールが、メタノール及びエタノール
   の少なくとも１種である請求項１又は２記載の方法。
7. 【請求項７】α−アミラーゼ阻害活性作用を示す化合物
   を含む物質がアセトンに不溶である請求項１又は２記載
   の方法。
8. 【請求項８】コレウスフォルスコリから分離することが
   でき、α−アミラーゼ阻害活性作用を示すことを特徴と
   する物質又はα−アミラーゼ阻害剤。
9. 【請求項９】α−グルコシダーゼ阻害活性作用及び／又
   はリパーゼ阻害活性作用を有する請求項８記載の物質又
   はα−アミラーゼ阻害剤。
10. 【請求項１０】アセトンに不溶で、水又はアルコールに
    可溶である請求項８又は９記載の物質又はα−アミラー
    ゼ阻害剤。
11. 【請求項１１】請求項８〜１０何れか記載の物質又はα
    −アミラーゼ阻害剤を有効成分として含有することを特
    徴とする肥満の予防、治療及び／又は改善薬。
12. 【請求項１２】請求項８〜１０何れか記載の物質又はα
    −アミラーゼ阻害剤を有効成分として含有することを特
    徴とする糖尿病の予防、治療及び／又は改善薬。
13. 【請求項１３】請求項８〜１０何れか記載の物質又はα
    −アミラーゼ阻害剤を含有することを特徴とする飲食
    品。
14. 【請求項１４】健康食品である請求項１３記載の飲食
    品。
15. 【請求項１５】コレウスフォルスコリから、水又はアル
    コールに可溶で、α−アミラーゼ阻害活性、α−グルコ
    シダーゼ阻害活性及びリパーゼ阻害活性の少なくとも一
    の阻害活性作用を示す化合物を含む物質を分離すること
    を特徴とするα−アミラーゼ阻害活性、α−グルコシダ
    ーゼ阻害活性及び／又はリパーゼ阻害活性物質、又はα
    −アミラーゼ、α−グルコシダーゼ及び／又はリパーゼ
    阻害剤の製造方法。