JP2001187802A - 超低分子量ヘパリン組成物 - Google Patents
超低分子量ヘパリン組成物Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 高い抗Ｘａ活性および低い抗IIａ活性を有す
る低分子量オリゴ糖鎖が豊富である新規の低分子量ヘパ
リン組成物を提供する。 【解決手段】 以下の式Ｉで表される超低分子量ヘパリ
ン組成物： 【化４】 （ただし式中、ｎが１ないし１２の間で変化し、Ｒ1 ＝
ＨまたはＳＯ3 Ｎａ、Ｒ 2 ＝ＳＯ3 ＮａまたはＣＯＣＨ
3 である）は、オリゴ糖鎖またはヘパリンフラグメント
の混合物から形成されており、抗Ｘａ活性および抗第II
ａ因子活性を有し、抗血栓症剤として使用可能であるこ
とを特徴としている。
る低分子量オリゴ糖鎖が豊富である新規の低分子量ヘパ
リン組成物を提供する。 【解決手段】 以下の式Ｉで表される超低分子量ヘパリ
ン組成物： 【化４】 （ただし式中、ｎが１ないし１２の間で変化し、Ｒ1 ＝
ＨまたはＳＯ3 Ｎａ、Ｒ 2 ＝ＳＯ3 ＮａまたはＣＯＣＨ
3 である）は、オリゴ糖鎖またはヘパリンフラグメント
の混合物から形成されており、抗Ｘａ活性および抗第II
ａ因子活性を有し、抗血栓症剤として使用可能であるこ
とを特徴としている。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、４−エノピラノシ
ルウロネート（4-enopyranosyl uronate）基を非還元末
端に有する、限定された数のヘパリンフラグメントから
なる、新規の低分子量ヘパリン組成物（ＨＬＭＷ）に関
するものである。
ルウロネート（4-enopyranosyl uronate）基を非還元末
端に有する、限定された数のヘパリンフラグメントから
なる、新規の低分子量ヘパリン組成物（ＨＬＭＷ）に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】ヘパリナ（Heparina）は動物由来のムコ
多糖体硫酸塩であって、哺乳動物の腸あるいは肺（ウ
シ、子ヒツジ、ブタ）から抽出され、現在ではヒトの血
栓塞栓症の予防や治療に利用されることがある。
多糖体硫酸塩であって、哺乳動物の腸あるいは肺（ウ
シ、子ヒツジ、ブタ）から抽出され、現在ではヒトの血
栓塞栓症の予防や治療に利用されることがある。
【０００３】このヘパリンの使用は、非常に重症の大出
血（very upsetting haemorrhaging）作用を伴うととも
に、その毎日の投薬において、３回の皮下注射または静
脈注射を伴うことから、非常に重大な欠点を有すること
がよく知られている。
血（very upsetting haemorrhaging）作用を伴うととも
に、その毎日の投薬において、３回の皮下注射または静
脈注射を伴うことから、非常に重大な欠点を有すること
がよく知られている。
【０００４】ここ数年間の推移では、以下に示すよう
な、様々な化学的手法がヘパリンの解重合のために用い
られている。 −酸性溶媒中での亜硝酸ナトリウムを用いた処理 −エステルのアルカリ処理 −酸素処理水（oxygenated water）の存在下で発生する
フリーラジカルの利用 −β−脱離（a beta elimination）機構による、強塩基
を用いた非水性溶媒中でのヘパリンの四級アンモニウム
塩の処理。
な、様々な化学的手法がヘパリンの解重合のために用い
られている。 −酸性溶媒中での亜硝酸ナトリウムを用いた処理 −エステルのアルカリ処理 −酸素処理水（oxygenated water）の存在下で発生する
フリーラジカルの利用 −β−脱離（a beta elimination）機構による、強塩基
を用いた非水性溶媒中でのヘパリンの四級アンモニウム
塩の処理。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】これらの方法は、操作
の手順や状況によって、平均分子量や抗凝固活性（anti
-coagulant activity ）が変化するヘパリンフラグメン
トの混合物が得られるという、一定しない生産となって
しまう。上記従来の技術で述べられているか、または商
品化された低分子量ヘパリン（ＨＬＭＷ）は、様々な解
重合手順によって得られている。これらの平均分子量
（Ｍｗ）は、４，０００ないし６，０００ダルトンの範
囲にある。
の手順や状況によって、平均分子量や抗凝固活性（anti
-coagulant activity ）が変化するヘパリンフラグメン
トの混合物が得られるという、一定しない生産となって
しまう。上記従来の技術で述べられているか、または商
品化された低分子量ヘパリン（ＨＬＭＷ）は、様々な解
重合手順によって得られている。これらの平均分子量
（Ｍｗ）は、４，０００ないし６，０００ダルトンの範
囲にある。
【０００６】現在では、次のことが認められている。す
なわち、ＨＬＭＷの抗血栓活性（anti-thrombic activi
ty）は、主に、血漿タンパク質である抗トロンビンIII
(anti-thrombin III)活性化作用、および活性化第Ｘ因
子およびトロンビンの有力な阻害作用の能力によるもの
である。このようにして、ヘパリンの抗血栓活性は、上
記各因子の阻害を特異的に調べるテストにより測定する
ことができる。
なわち、ＨＬＭＷの抗血栓活性（anti-thrombic activi
ty）は、主に、血漿タンパク質である抗トロンビンIII
(anti-thrombin III)活性化作用、および活性化第Ｘ因
子およびトロンビンの有力な阻害作用の能力によるもの
である。このようにして、ヘパリンの抗血栓活性は、上
記各因子の阻害を特異的に調べるテストにより測定する
ことができる。
【０００７】近年、様々な著作者による研究結果から次
のことが分かっている。すなわち、４，８００ダルトン
未満（＜4,800 Daltons ）の中程度の分子量の短鎖から
なるヘパリンのオリゴ糖鎖のフラグメントは、活性化第
Ｘ因子への選択的な作用を有する一方、ファルマコペア
（farmacopea）の手法を用いて測定される全体的な凝固
にはほとんど影響を及ぼさないということである。
のことが分かっている。すなわち、４，８００ダルトン
未満（＜4,800 Daltons ）の中程度の分子量の短鎖から
なるヘパリンのオリゴ糖鎖のフラグメントは、活性化第
Ｘ因子への選択的な作用を有する一方、ファルマコペア
（farmacopea）の手法を用いて測定される全体的な凝固
にはほとんど影響を及ぼさないということである。
【０００８】さらに、以下のことも見い出されている。
すなわち、超低分子量のフラグメントが強い抗Ｘａ活性
を有することが要求される場合には、米国特許4,981,95
5 号に記載しているように、抗トロンビンIII に結合す
る部位を攻撃する危険を冒さない、非水性溶媒中での選
択的な解重合技術を用いることが好ましい。
すなわち、超低分子量のフラグメントが強い抗Ｘａ活性
を有することが要求される場合には、米国特許4,981,95
5 号に記載しているように、抗トロンビンIII に結合す
る部位を攻撃する危険を冒さない、非水性溶媒中での選
択的な解重合技術を用いることが好ましい。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、上述した背景
技術および従来技術に鑑みてなされたものであって、非
水性溶媒中での手順を用いた、制御されたヘパリンの解
重合を提供するものであり、このヘパリンの解重合は、
高い抗Ｘａ活性および低い抗IIａ活性を有する低分子量
オリゴ糖鎖が豊富なＨＬＭＷの新たな種類（family）を
得るものであって、該ＨＬＭＷは、以下の一般式にて示
される。
技術および従来技術に鑑みてなされたものであって、非
水性溶媒中での手順を用いた、制御されたヘパリンの解
重合を提供するものであり、このヘパリンの解重合は、
高い抗Ｘａ活性および低い抗IIａ活性を有する低分子量
オリゴ糖鎖が豊富なＨＬＭＷの新たな種類（family）を
得るものであって、該ＨＬＭＷは、以下の一般式にて示
される。
【００１０】
【化２】
【００１１】（ただし、式中、ｎが１ないし１２の間で
変化し、Ｒ1 ＝ＨまたはＳＯ3 Ｎａ、Ｒ2 ＝ＳＯ3 Ｎａ
またはＣＯＣＨ3 である）上記のような超低分子量ヘパ
リンは、β−脱離の手順によって、非水性溶媒中でヘパ
リンを選択的に解重合させることによって得られる。
変化し、Ｒ1 ＝ＨまたはＳＯ3 Ｎａ、Ｒ2 ＝ＳＯ3 Ｎａ
またはＣＯＣＨ3 である）上記のような超低分子量ヘパ
リンは、β−脱離の手順によって、非水性溶媒中でヘパ
リンを選択的に解重合させることによって得られる。
【００１２】本発明にかかる超低分子量ヘパリン組成物
は、分子量が２，０００ないし４，０００ダルトンの範
囲にあり、抗第Ｘａ因子活性が少なくとも１００I.U.／
ｍｇに等しく、６量体糖鎖（hexasaccharide, ｎ＝１）
から１２量体糖鎖（dodecasaccharide，ｎ＝４）までに
及ぶ低重合度のオリゴ糖鎖の割合が大きく、７５％にも
達しているということを特徴としている。
は、分子量が２，０００ないし４，０００ダルトンの範
囲にあり、抗第Ｘａ因子活性が少なくとも１００I.U.／
ｍｇに等しく、６量体糖鎖（hexasaccharide, ｎ＝１）
から１２量体糖鎖（dodecasaccharide，ｎ＝４）までに
及ぶ低重合度のオリゴ糖鎖の割合が大きく、７５％にも
達しているということを特徴としている。
【００１３】このような組成物は、静脈及び動脈の血栓
症の予防や治療において有用であって、抗血栓症剤とし
て用いることができる。
症の予防や治療において有用であって、抗血栓症剤とし
て用いることができる。
【００１４】従来知られている、または市販で利用され
ているＨＬＭＷは、低分子量（lowmolecular mass）オ
リゴ糖鎖、特に、６量体糖鎖から１２量体糖鎖までに及
ぶ重合度のオリゴ糖鎖の割合が小さいものであった。
ているＨＬＭＷは、低分子量（lowmolecular mass）オ
リゴ糖鎖、特に、６量体糖鎖から１２量体糖鎖までに及
ぶ重合度のオリゴ糖鎖の割合が小さいものであった。
【００１５】本発明の成果であるヘパリン組成物の主な
特徴は、そのようなオリゴ糖鎖の割合が大きく、７５％
にも達しているということである。さらに、このような
オリゴ糖鎖は、高い抗Ｘａ活性（≧１００I.U.／ｍｇ）
を有し、長い持続性と、高い抗血栓活性が得られる。
特徴は、そのようなオリゴ糖鎖の割合が大きく、７５％
にも達しているということである。さらに、このような
オリゴ糖鎖は、高い抗Ｘａ活性（≧１００I.U.／ｍｇ）
を有し、長い持続性と、高い抗血栓活性が得られる。
【００１６】上記のヘパリン組成物は、抗Ｘａ活性が１
００ないし１５０I.U.／ｍｇの範囲にあり、抗第IIａ因
子活性が１０I.U.／ｍｇ以下である。
００ないし１５０I.U.／ｍｇの範囲にあり、抗第IIａ因
子活性が１０I.U.／ｍｇ以下である。
【００１７】本発明のヘパリン組成物の平均分子量は
２，０００ないし４，０００ダルトンの範囲にあり、そ
の組成は以下の通りである。 −分子量が２，０００ダルトン未満のオリゴ糖鎖を２５
〜６０％含んでおり； −分子量が２，０００ないし６，０００ダルトンのオリ
ゴ糖鎖を４０〜７５％含んでおり； −分子量が６，０００ダルトンを超えるオリゴ糖鎖を１
５％未満含んでいる。
２，０００ないし４，０００ダルトンの範囲にあり、そ
の組成は以下の通りである。 −分子量が２，０００ダルトン未満のオリゴ糖鎖を２５
〜６０％含んでおり； −分子量が２，０００ないし６，０００ダルトンのオリ
ゴ糖鎖を４０〜７５％含んでおり； −分子量が６，０００ダルトンを超えるオリゴ糖鎖を１
５％未満含んでいる。
【００１８】本発明のヘパリン組成物は、オリゴ糖鎖、
すなわちヘパリンフラグメントの混合物からなってい
る。本発明の一部を形成するフラグメントのパーセンテ
ージは以下の通りである。 −ｎが１０ないし１２の範囲にあるフラグメントを１０
％未満含んでおり； −ｎが１ないし６の範囲にあるフラグメントを８０〜９
０％含んでおり； −ｎが７ないし９の範囲にあるフラグメントを１５％未
満含んでいる。
すなわちヘパリンフラグメントの混合物からなってい
る。本発明の一部を形成するフラグメントのパーセンテ
ージは以下の通りである。 −ｎが１０ないし１２の範囲にあるフラグメントを１０
％未満含んでおり； −ｎが１ないし６の範囲にあるフラグメントを８０〜９
０％含んでおり； −ｎが７ないし９の範囲にあるフラグメントを１５％未
満含んでいる。
【００１９】
【実施例】本発明を、以下の各実施例によって説明する
が、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものでは
ない。
が、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものでは
ない。
【００２０】分子量（Ｍｗ）、分子分布（molecular di
stribution）、同じく抗第Ｘａ因子活性は、モノグラフ
第８２８号、『低分子量ヘパリン（“Heparin of low m
olecular weight ”）』第３版 ファルマコペア・エウ
ロペア（Farmacopea Europea）に記載の手法によって決
定した。
stribution）、同じく抗第Ｘａ因子活性は、モノグラフ
第８２８号、『低分子量ヘパリン（“Heparin of low m
olecular weight ”）』第３版 ファルマコペア・エウ
ロペア（Farmacopea Europea）に記載の手法によって決
定した。
【００２１】〔実施例１〕１ｋｇの未分別ヘパリンナト
リウムを７Ｌ（リットル：litres) の精製水に溶解した
後、５０重量（質量）／体積％（％ w/v）の塩化ベンザ
ルコニウム水溶液４．４Ｌを該ヘパリン溶液へ攪拌しな
がら添加した。水を加えて体積を３０Ｌにして、デカン
テーション（傾瀉）した。
リウムを７Ｌ（リットル：litres) の精製水に溶解した
後、５０重量（質量）／体積％（％ w/v）の塩化ベンザ
ルコニウム水溶液４．４Ｌを該ヘパリン溶液へ攪拌しな
がら添加した。水を加えて体積を３０Ｌにして、デカン
テーション（傾瀉）した。
【００２２】次に、上澄液を取り除き、水を加えて体積
を３０Ｌにして、デカンテーション状態とした。デカン
テーション終了後、上澄液を取り除き、沈澱物を凍結乾
燥（liophilised)した。約２．７ｋｇのヘパリンのベン
ザルコニウム塩（生成物Ａ）が得られた。
を３０Ｌにして、デカンテーション状態とした。デカン
テーション終了後、上澄液を取り除き、沈澱物を凍結乾
燥（liophilised)した。約２．７ｋｇのヘパリンのベン
ザルコニウム塩（生成物Ａ）が得られた。
【００２３】１００ｇの生成物Ａを３００ｍｌのジクロ
ロメタンに溶解した後、トリトンＢを以下の３ロットに
分けて添加した。 −２５ｍｌのトリトンＢを添加し、混合物を２５℃で８
時間放置した。 −２５ｍｌのトリトンＢを添加し、混合物を２５℃で１
６時間放置した。 −２５ｍｌのトリトンＢを添加し、混合物を２５℃で８
時間放置した。
ロメタンに溶解した後、トリトンＢを以下の３ロットに
分けて添加した。 −２５ｍｌのトリトンＢを添加し、混合物を２５℃で８
時間放置した。 −２５ｍｌのトリトンＢを添加し、混合物を２５℃で１
６時間放置した。 −２５ｍｌのトリトンＢを添加し、混合物を２５℃で８
時間放置した。
【００２４】上記溶液を、１０重量／体積％の酢酸ナト
リウムのメタノール溶液６００ｍｌで沈澱させ、沈殿物
をメタノールで洗浄しながらの遠心分離によって回収し
た。
リウムのメタノール溶液６００ｍｌで沈澱させ、沈殿物
をメタノールで洗浄しながらの遠心分離によって回収し
た。
【００２５】該生成物を５００ｍｌの水に溶解し、０．
１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌで中和し、塩化ナトリ
ウムを１０重量／体積％の濃度に到達するまで添加し
た。沈殿は１．２５Ｌのメタノールの添加によりもたら
された。
１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌで中和し、塩化ナトリ
ウムを１０重量／体積％の濃度に到達するまで添加し
た。沈殿は１．２５Ｌのメタノールの添加によりもたら
された。
【００２６】次に、メタノールで洗浄しながらの濾過、
および３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収したとこ
ろ、３３ｇの生成物Ｂが得られ、該生成物Ｂを１０重量
／体積％で水に溶解した。
および３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収したとこ
ろ、３３ｇの生成物Ｂが得られ、該生成物Ｂを１０重量
／体積％で水に溶解した。
【００２７】温度を２５℃に設定し、塩化ナトリウムを
添加して濃度を１０重量／体積％にした。沈殿は２．５
倍のメタノールの添加によってもたらされた。それか
ら、メタノールで洗浄しながらの濾過、および３５℃で
の真空乾燥により沈澱物を回収したところ、２６ｇの精
製された生成物が得られた。該生成物を５重量／体積％
で水に溶解した。
添加して濃度を１０重量／体積％にした。沈殿は２．５
倍のメタノールの添加によってもたらされた。それか
ら、メタノールで洗浄しながらの濾過、および３５℃で
の真空乾燥により沈澱物を回収したところ、２６ｇの精
製された生成物が得られた。該生成物を５重量／体積％
で水に溶解した。
【００２８】０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌによ
りｐＨを６．６に調整し、塩化ナトリウムを添加して濃
度を５重量／体積％とした。沈殿は０．８倍のメタノー
ルの添加によりもたらされた。沈澱物を、メタノールで
洗浄しながらの濾過により回収し、生成物を３５℃で真
空乾燥させた。
りｐＨを６．６に調整し、塩化ナトリウムを添加して濃
度を５重量／体積％とした。沈殿は０．８倍のメタノー
ルの添加によりもたらされた。沈澱物を、メタノールで
洗浄しながらの濾過により回収し、生成物を３５℃で真
空乾燥させた。
【００２９】上澄液を１．６倍のメタノールで沈澱させ
た。メタノールで洗浄しながらの濾過、および３５℃で
真空乾燥により沈澱物を回収した。上記プロセスの終了
で、２２ｇの生成物が得られた。
た。メタノールで洗浄しながらの濾過、および３５℃で
真空乾燥により沈澱物を回収した。上記プロセスの終了
で、２２ｇの生成物が得られた。
【００３０】〔実施例２〕実施例１における生成物Ｂを
得る方法を繰り返した。２０ｇの生成物Ｂを１５０ｍｌ
の水に溶解し、５０重量／体積％の塩化ベンザルコニウ
ム水溶液１００ｍｌを添加した。
得る方法を繰り返した。２０ｇの生成物Ｂを１５０ｍｌ
の水に溶解し、５０重量／体積％の塩化ベンザルコニウ
ム水溶液１００ｍｌを添加した。
【００３１】次に、水を加えて該混合物の体積を５００
ｍｌにした。該混合物をデカンテーション状態とした。
デカンテーション終了後、上澄液を取り除き、水を加え
て体積を５００ｍｌにして、該混合物をデカンテーショ
ン状態とした。
ｍｌにした。該混合物をデカンテーション状態とした。
デカンテーション終了後、上澄液を取り除き、水を加え
て体積を５００ｍｌにして、該混合物をデカンテーショ
ン状態とした。
【００３２】上澄液を取り除いた後、沈澱物を凍結乾燥
させたところ、５０ｇのベンザルコニウム塩が得られ
た。得られた上記塩２０ｇを６０ｍｌのジクロロメタン
に溶解した。５ｍｌのトリトンＢを添加し、該混合物を
３５℃で８時間放置した。
させたところ、５０ｇのベンザルコニウム塩が得られ
た。得られた上記塩２０ｇを６０ｍｌのジクロロメタン
に溶解した。５ｍｌのトリトンＢを添加し、該混合物を
３５℃で８時間放置した。
【００３３】次に、上記溶液を、１０重量／体積％の酢
酸ナトリウムのメタノール溶液１２０ｍｌで沈澱させ、
沈澱物をメタノールで洗浄しながらの遠心分離により回
収した。
酸ナトリウムのメタノール溶液１２０ｍｌで沈澱させ、
沈澱物をメタノールで洗浄しながらの遠心分離により回
収した。
【００３４】得られた上記生成物を１００ｍｌの水に溶
解し、０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌで中和し
て、塩化ナトリウムを１０重量／体積％の濃度に到達す
るまで添加した。沈殿は２５０ｍｌのメタノールの添加
によりもたらされた。
解し、０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌで中和し
て、塩化ナトリウムを１０重量／体積％の濃度に到達す
るまで添加した。沈殿は２５０ｍｌのメタノールの添加
によりもたらされた。
【００３５】メタノールで洗浄しながらの濾過、および
３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。上記プロ
セスの終了で、６．３ｇの生成物が得られた。
３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。上記プロ
セスの終了で、６．３ｇの生成物が得られた。
【００３６】〔実施例３〕まず、実施例２で得られた生
成物５ｇを、５重量／体積％の濃度となるように水に溶
解した。
成物５ｇを、５重量／体積％の濃度となるように水に溶
解した。
【００３７】０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌでｐ
Ｈを６．６に調整し、塩化ナトリウムを５重量／体積％
の濃度に到達するまで添加した。沈殿は１．５倍のメタ
ノールの添加によりもたらされた。
Ｈを６．６に調整し、塩化ナトリウムを５重量／体積％
の濃度に到達するまで添加した。沈殿は１．５倍のメタ
ノールの添加によりもたらされた。
【００３８】次に、メタノールで洗浄しながらの濾過、
および３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。上
記プロセスの終了で、３ｇの生成物が得られた。
および３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。上
記プロセスの終了で、３ｇの生成物が得られた。
【００３９】〔実施例４〕実施例１における生成物Ｂを
得る方法を繰り返した。
得る方法を繰り返した。
【００４０】２０ｇの生成物Ｂを１５０ｍｌの水に溶解
し、５０重量／体積％の塩化ベンザルコニウム水溶液１
００ｍｌを添加した。それから、水を加えて該混合物の
体積を約５００ｍｌにした。
し、５０重量／体積％の塩化ベンザルコニウム水溶液１
００ｍｌを添加した。それから、水を加えて該混合物の
体積を約５００ｍｌにした。
【００４１】その後、上澄液を取り除いて、水を加えて
体積を５００ｍｌにして、該混合物をデカンテーション
状態とした。上澄液を取り除いて、水を加えて容量を５
００ｍｌにして、該混合物をデカンテーション状態とし
た。
体積を５００ｍｌにして、該混合物をデカンテーション
状態とした。上澄液を取り除いて、水を加えて容量を５
００ｍｌにして、該混合物をデカンテーション状態とし
た。
【００４２】その後、上記により得られた上記塩２０ｇ
を６０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、トリトンＢを以
下の２ロットに分けて添加した。 −５ｍｌのトリトンＢを添加し、３５℃で８時間放置。 −５ｍｌのトリトンＢを添加し、３５℃で１６時間放
置。
を６０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、トリトンＢを以
下の２ロットに分けて添加した。 −５ｍｌのトリトンＢを添加し、３５℃で８時間放置。 −５ｍｌのトリトンＢを添加し、３５℃で１６時間放
置。
【００４３】上記の溶液を、１０重量／体積％の酢酸ナ
トリウムのメタノール溶液１２０ｍｌで沈澱させ、沈澱
物をメタノールで洗浄しながらの遠心分離により回収し
た。
トリウムのメタノール溶液１２０ｍｌで沈澱させ、沈澱
物をメタノールで洗浄しながらの遠心分離により回収し
た。
【００４４】得られた上記生成物を１００ｍｌの水に溶
解し、０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌで中和し、
塩化ナトリウムを１０重量／体積％の濃度に到達するま
で添加した。２５０ｍｌのメタノールを添加して沈澱さ
せた。
解し、０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌで中和し、
塩化ナトリウムを１０重量／体積％の濃度に到達するま
で添加した。２５０ｍｌのメタノールを添加して沈澱さ
せた。
【００４５】メタノールで洗浄しながらの濾過、および
３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。上記プロ
セスの終了で、８．７ｇの生成物が得られた。
３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。上記プロ
セスの終了で、８．７ｇの生成物が得られた。
【００４６】〔実施例５〕まず、実施例４で得られた生
成物５ｇを５重量／体積％となるように水に溶解した。
成物５ｇを５重量／体積％となるように水に溶解した。
【００４７】０．１mol ／Ｌ（０．１Ｎ）のＨＣｌでｐ
Ｈを６．６に調整し、塩化ナトリウムを５重量／体積％
の濃度に到達するまで添加した。次に、沈殿は０．９３
倍のメタノールの添加によりもたらされた。
Ｈを６．６に調整し、塩化ナトリウムを５重量／体積％
の濃度に到達するまで添加した。次に、沈殿は０．９３
倍のメタノールの添加によりもたらされた。
【００４８】その後、メタノールで洗浄しながらの濾過
により沈澱物を回収し、３５℃で真空乾燥させた。上澄
液を２倍のメタノールで沈澱させた。
により沈澱物を回収し、３５℃で真空乾燥させた。上澄
液を２倍のメタノールで沈澱させた。
【００４９】メタノールで洗浄しながらの濾過、および
３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。その結
果、４ｇの生成物が得られた。
３５℃での真空乾燥により沈澱物を回収した。その結
果、４ｇの生成物が得られた。
【００５０】
【表１】
【００５１】
【表２】
【００５２】
【発明の効果】以上のように、本発明にかかるヘパリン
組成物は、以下の一般式で表され、
組成物は、以下の一般式で表され、
【００５３】
【化３】
【００５４】（ただし、式中、ｎが１ないし１２の間で
変化し、Ｒ1 がＨまたはＳＯ3 Ｎａであり、Ｒ2 がＳＯ
3 ＮａまたはＣＯＣＨ3 である）非常に分子量の低いも
のである。
変化し、Ｒ1 がＨまたはＳＯ3 Ｎａであり、Ｒ2 がＳＯ
3 ＮａまたはＣＯＣＨ3 である）非常に分子量の低いも
のである。
【００５５】それゆえ、このような組成物は、静脈及び
動脈の血栓症の予防や治療において有用であって、抗血
栓症剤として用いることができる。
動脈の血栓症の予防や治療において有用であって、抗血
栓症剤として用いることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA03 EA02 EA27 NA14 ZA54 4C090 AA01 AA02 AA09 BA68 BB02 BB19 BB55 BB62 BB84 BC27 BD03 BD35 BD37 CA31 DA09 DA23
Claims (6)
- 【請求項１】以下の一般式で表され、 【化１】 （ただし、式中、ｎが１ないし１２の間で変化し、Ｒ1
＝ＨまたはＳＯ3 Ｎａ、Ｒ2 ＝ＳＯ3 ＮａまたはＣＯＣ
Ｈ3 である）非常に分子量の低いことを特徴とするヘパ
リン組成物。 - 【請求項２】オリゴ糖鎖またはヘパリンフラグメントの
混合物からなることを特徴とする請求項１記載のヘパリ
ン組成物。 - 【請求項３】ｎが１０ないし１２の範囲にあるフラグメ
ントを１０％未満、 ｎが１ないし６の範囲にあるフラグメントを８０〜９０
％、 および、ｎが７ないし９の範囲にあるフラグメントを１
５％未満含有していることを特徴とする請求項１または
２記載のヘパリン組成物。 - 【請求項４】平均分子量（Ｍｗ）が２，０００ないし
４，０００ダルトンの範囲にあり、分子量が２，０００
ダルトン未満のオリゴ糖鎖を２５ないし６０％含んでい
ることから、４０ないし７５％のオリゴ糖鎖の分子量が
２，０００ないし６，０００ダルトンの範囲にあり、１
５％未満のオリゴ糖鎖の分子量が６，０００ダルトンよ
り大きいことを特徴とする請求項１または２記載のヘパ
リン組成物。 - 【請求項５】抗Ｘａ活性が１００ないし１５０I.U.／ｍ
ｇの範囲にあり、抗第IIａ因子活性が１０I.U.／ｍｇ以
下であることを特徴とする請求項１または２記載のヘパ
リン組成物。 - 【請求項６】抗血栓症剤として使用可能であることを特
徴とする請求項１ないし５の何れか１項に記載のヘパリ
ン組成物。
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| JP9901671 | 1999-10-19 | ||
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|---|---|
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ID=27240581
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