JP2001136973A - Ｉｒｆ−１遺伝子異常の検出方法 - Google Patents
Ｉｒｆ−１遺伝子異常の検出方法Info
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- JP2001136973A JP2001136973A JP32497599A JP32497599A JP2001136973A JP 2001136973 A JP2001136973 A JP 2001136973A JP 32497599 A JP32497599 A JP 32497599A JP 32497599 A JP32497599 A JP 32497599A JP 2001136973 A JP2001136973 A JP 2001136973A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】ＩＦＮ療法の有効性を事前に予知できるホスト
側因子としての遺伝子異常（変異）に関する情報を提
供。 【解決手段】ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１
９６位におけるグアニンからアデニンへの塩基置換を測
定するＩＲＦ−１遺伝子異常の検出方法、特にＩＦＮ治
療効果の有効性判定のための該検出方法、及び上記塩基
置換からなる変異を有するＩＲＦ−１遺伝子又は該変異
を含む遺伝子の断片。
側因子としての遺伝子異常（変異）に関する情報を提
供。 【解決手段】ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１
９６位におけるグアニンからアデニンへの塩基置換を測
定するＩＲＦ−１遺伝子異常の検出方法、特にＩＦＮ治
療効果の有効性判定のための該検出方法、及び上記塩基
置換からなる変異を有するＩＲＦ−１遺伝子又は該変異
を含む遺伝子の断片。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト インターフ
ェロン レギュラトリー ファクター−１（human interf
eron regulatory factor-1, ＩＲＦ−１）遺伝子の異常
の検出方法、特にインターフェロン治療効果の有効性を
判定するための上記方法、及び該異常（変異）を有する
ＩＲＦ−１遺伝子又は該変異を含む遺伝子断片に関す
る。
ェロン レギュラトリー ファクター−１（human interf
eron regulatory factor-1, ＩＲＦ−１）遺伝子の異常
の検出方法、特にインターフェロン治療効果の有効性を
判定するための上記方法、及び該異常（変異）を有する
ＩＲＦ−１遺伝子又は該変異を含む遺伝子断片に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】Ｃ型肝炎のインターフェロン療法（ＩＦ
Ｎ療法）の有効性を事前に予知するためには、Ｃ型肝炎
ウイルス（ＨＣＶ）について、その(1)血中ウイルス
量、(2)ジェノタイプ、(3)ＨＣＶ ＮＳ５Ａ（Enomoto
N, et al., J.Clin.Invest., 1995;96:224-230）のアミ
ノ酸変異数、(4)ＨＣＶ Ｅ２／ＮＳ１（Okada S, et a
l., Hepatology, 1992; 16: 1992）の疑似種（quasispe
cies）等の測定乃至検出が有効であるとされてきたが、
之等はいずれもウイルス側因子であり、ヒト（ホスト）
側因子についての報告は、組織像の観察以外には、殆ど
報告はない。
Ｎ療法）の有効性を事前に予知するためには、Ｃ型肝炎
ウイルス（ＨＣＶ）について、その(1)血中ウイルス
量、(2)ジェノタイプ、(3)ＨＣＶ ＮＳ５Ａ（Enomoto
N, et al., J.Clin.Invest., 1995;96:224-230）のアミ
ノ酸変異数、(4)ＨＣＶ Ｅ２／ＮＳ１（Okada S, et a
l., Hepatology, 1992; 16: 1992）の疑似種（quasispe
cies）等の測定乃至検出が有効であるとされてきたが、
之等はいずれもウイルス側因子であり、ヒト（ホスト）
側因子についての報告は、組織像の観察以外には、殆ど
報告はない。
【０００３】しかるに、ＩＦＮ療法の有効性の判断基準
としてのヒト側因子が新たに発見されれば、ＩＦＮ投与
前にホストにおけるＩＦＮ投与効果を予測することがで
き、ＩＦＮ療法を実施する上で、非常に有効であると考
えられる。
としてのヒト側因子が新たに発見されれば、ＩＦＮ投与
前にホストにおけるＩＦＮ投与効果を予測することがで
き、ＩＦＮ療法を実施する上で、非常に有効であると考
えられる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、ＩＦＮ療法の有効性を事前に予知できる新たなホス
ト側因子としての遺伝子異常（変異）に関する情報を提
供することにある。
は、ＩＦＮ療法の有効性を事前に予知できる新たなホス
ト側因子としての遺伝子異常（変異）に関する情報を提
供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】発明者らは、以前にＩＦ
Ｎ高感受性ＨＣＶ感染肝癌細胞株ＨＣＣＴ及びＨＣＣＭ
並びにＩＦＮ低感受性ＨＣＶ感染肝癌細胞株ＰＬＣ／Ｐ
ＲＦ／５の３つの細胞株を樹立した。
Ｎ高感受性ＨＣＶ感染肝癌細胞株ＨＣＣＴ及びＨＣＣＭ
並びにＩＦＮ低感受性ＨＣＶ感染肝癌細胞株ＰＬＣ／Ｐ
ＲＦ／５の３つの細胞株を樹立した。
【０００６】之等細胞株のＩＦＮ感受性を規定している
因子の検索を行なう過程において、本発明者らは、上記
ＩＦＮ低感受性ＨＣＶ感染肝癌細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／
５の、ＩＦＮ発現を調節しているＩＲＦ−１領域の上流
に位置するプロモーター領域に特定の変異（germline m
utation）が認められるという事実を発見すると共に、
該変異が遺伝子多型（genetic polymorphism）を構成
し、しかもこの多型の検討によってＩＦＮ療法の有効性
が判断できるという事実、即ちＩＦＮ療法において著効
が認められると判断された患者は共通するジェノタイプ
に属するという事実を見出した。本発明は上記新知見に
基づいて完成されたものである。
因子の検索を行なう過程において、本発明者らは、上記
ＩＦＮ低感受性ＨＣＶ感染肝癌細胞株ＰＬＣ／ＰＲＦ／
５の、ＩＦＮ発現を調節しているＩＲＦ−１領域の上流
に位置するプロモーター領域に特定の変異（germline m
utation）が認められるという事実を発見すると共に、
該変異が遺伝子多型（genetic polymorphism）を構成
し、しかもこの多型の検討によってＩＦＮ療法の有効性
が判断できるという事実、即ちＩＦＮ療法において著効
が認められると判断された患者は共通するジェノタイプ
に属するという事実を見出した。本発明は上記新知見に
基づいて完成されたものである。
【０００７】本発明によれば、ＩＲＦ−１遺伝子のプロ
モーター領域の１９６位におけるグアニンからアデニン
への塩基置換を測定することを特徴とするＩＲＦ−１遺
伝子異常の検出方法が提供される。
モーター領域の１９６位におけるグアニンからアデニン
への塩基置換を測定することを特徴とするＩＲＦ−１遺
伝子異常の検出方法が提供される。
【０００８】また、本発明によれば、被験者のＩＲＦ−
１遺伝子のプロモーター領域の１９６位を含むＤＮＡ断
片を調製する工程及び該ＤＮＡ断片の塩基配列を解析す
る工程を含む上記検出方法；塩基配列の解析が制限酵素
断片長多型分析法に従われる上記検出方法；前記塩基置
換からなる変異を有するＩＲＦ−１遺伝子又は該変異を
含む遺伝子の断片；前記塩基置換の測定に供される被検
ＤＮＡとしての機能的有効長を有するＤＮＡ断片又は前
記塩基置換を検出するためのプローブとしての機能的有
効長を有するＤＮＡ断片；及びＩＦＮ治療効果の有効性
判定のための前記検出方法が提供される。
１遺伝子のプロモーター領域の１９６位を含むＤＮＡ断
片を調製する工程及び該ＤＮＡ断片の塩基配列を解析す
る工程を含む上記検出方法；塩基配列の解析が制限酵素
断片長多型分析法に従われる上記検出方法；前記塩基置
換からなる変異を有するＩＲＦ−１遺伝子又は該変異を
含む遺伝子の断片；前記塩基置換の測定に供される被検
ＤＮＡとしての機能的有効長を有するＤＮＡ断片又は前
記塩基置換を検出するためのプローブとしての機能的有
効長を有するＤＮＡ断片；及びＩＦＮ治療効果の有効性
判定のための前記検出方法が提供される。
【０００９】
【発明の実施の形態】本明細書において、アミノ酸、ペ
プチド、塩基配列、核酸、制限酵素、その他に関する略
号による表示は、ＩＵＰＡＣ及びＩＵＰＡＣ−ＩＵＢに
よる命名法又はその規定、及び「塩基配列又はアミノ酸
配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（平
成９年３月、特許庁調整課審査基準室）に従うものとす
る。
プチド、塩基配列、核酸、制限酵素、その他に関する略
号による表示は、ＩＵＰＡＣ及びＩＵＰＡＣ−ＩＵＢに
よる命名法又はその規定、及び「塩基配列又はアミノ酸
配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（平
成９年３月、特許庁調整課審査基準室）に従うものとす
る。
【００１０】また、本発明におけるＩＲＦ−１遺伝子上
流の塩基配列は、ジーンバンクに登録されているＸ５３
０９５(Harada,H., Inst.Mol.Cell.Biol., Osaka Uni
v., Japan, Mol.Cell.Biol., 14(2), 1500-1509 (199
4))のそれ（１−６６９）に従うものとする。
流の塩基配列は、ジーンバンクに登録されているＸ５３
０９５(Harada,H., Inst.Mol.Cell.Biol., Osaka Uni
v., Japan, Mol.Cell.Biol., 14(2), 1500-1509 (199
4))のそれ（１−６６９）に従うものとする。
【００１１】本発明は、上記ＩＲＦ−１遺伝子のプロモ
ーター領域の特定位置（１９６位）における変異（塩基
置換）を測定することを特徴としている。これはまた、
ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１９６位におけ
る遺伝子多型の検出としても特徴付けられる。
ーター領域の特定位置（１９６位）における変異（塩基
置換）を測定することを特徴としている。これはまた、
ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１９６位におけ
る遺伝子多型の検出としても特徴付けられる。
【００１２】本発明にかかる遺伝子の変異に関する情報
は、特に、ＩＦＮ治療効果の有効性の判断に有用であ
り、本発明検出方法によって上記変異を検出すれば、該
ホストに対するＩＦＮ療法の有効性を事前に予知するこ
とができる。
は、特に、ＩＦＮ治療効果の有効性の判断に有用であ
り、本発明検出方法によって上記変異を検出すれば、該
ホストに対するＩＦＮ療法の有効性を事前に予知するこ
とができる。
【００１３】本発明のＩＲＦ−１遺伝子異常の検出は、
ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１９６位におけ
るグアニンからアデニンへの塩基置換（以下、これを
「Ｇ１９６Ａ変異」と表示する）を測定することにより
実施される。
ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１９６位におけ
るグアニンからアデニンへの塩基置換（以下、これを
「Ｇ１９６Ａ変異」と表示する）を測定することにより
実施される。
【００１４】当該遺伝子異常の検出操作及びそれによる
ＩＦＮ療法の有効性の検討は、本発明によって明らかに
され且つ特徴付けられた前記特定のＩＲＦ−１遺伝子異
常（Ｇ１９６Ａ変異）を検出できるものである限りにお
いて、その手法などに何ら限定はなく、公知もしくは将
来得られ得る各種の方法を広く採用することができる。
ＩＦＮ療法の有効性の検討は、本発明によって明らかに
され且つ特徴付けられた前記特定のＩＲＦ−１遺伝子異
常（Ｇ１９６Ａ変異）を検出できるものである限りにお
いて、その手法などに何ら限定はなく、公知もしくは将
来得られ得る各種の方法を広く採用することができる。
【００１５】本発明によって検出すべき遺伝子変異が明
らかにされ、これが特定されている以上、本発明の開示
に従えば、その検出のための方法を適宜採用しもしくは
該方法を適宜修飾して採用することは当業者であれば容
易である。例えば、被験者のＩＲＦ−１遺伝子を対象と
して、本発明の特定の変異（Ｇ１９６Ａ変異）を検出す
る方法としては、当該変異位置を含む塩基配列を解析す
る各種の方法に従うことができる。これには、例えばサ
ザンハイブリダイゼーション法、ドットハイブリダイゼ
ーション法（J. Mol. Biol., 98: 503-517, 1975等参
照）、ジデオキシ塩基配列決定法、ＤＮＡの増幅手法を
組合せた各種の検出法［例えばＰＣＲ−制限酵素断片長
多型分析法（RFLP: Restriction fragment length poly
morphism），ＰＣＲ−単鎖高次構造多型分析法（Proc.
Natl. Acad. Sci., U.S.A., 86: 2766-2770, 1989等参
照），ＰＣＲ−特異的配列オリゴヌクレオチド法（SSO:
Specific sequence oligonucleotide），ＰＣＲ−ＳＳ
Ｏとドットハイブリダイゼーション法を用いる対立遺伝
子特異的オリゴヌクレオチド法（Nature, 324: 163-16
6, 1986等参照）］等を例示することができる。
らかにされ、これが特定されている以上、本発明の開示
に従えば、その検出のための方法を適宜採用しもしくは
該方法を適宜修飾して採用することは当業者であれば容
易である。例えば、被験者のＩＲＦ−１遺伝子を対象と
して、本発明の特定の変異（Ｇ１９６Ａ変異）を検出す
る方法としては、当該変異位置を含む塩基配列を解析す
る各種の方法に従うことができる。これには、例えばサ
ザンハイブリダイゼーション法、ドットハイブリダイゼ
ーション法（J. Mol. Biol., 98: 503-517, 1975等参
照）、ジデオキシ塩基配列決定法、ＤＮＡの増幅手法を
組合せた各種の検出法［例えばＰＣＲ−制限酵素断片長
多型分析法（RFLP: Restriction fragment length poly
morphism），ＰＣＲ−単鎖高次構造多型分析法（Proc.
Natl. Acad. Sci., U.S.A., 86: 2766-2770, 1989等参
照），ＰＣＲ−特異的配列オリゴヌクレオチド法（SSO:
Specific sequence oligonucleotide），ＰＣＲ−ＳＳ
Ｏとドットハイブリダイゼーション法を用いる対立遺伝
子特異的オリゴヌクレオチド法（Nature, 324: 163-16
6, 1986等参照）］等を例示することができる。
【００１６】上記のうちでは、ＰＣＲ法もしくはそれに
準じたＤＮＡ増幅法の組合せ、特にＰＣＲ−制限酵素断
片長多型分析法（ＲＦＬＰ法）の組合せが好ましい。之
等によれば少量のＤＮＡ試料を用いて簡便かつ容易にし
かも感度および精度の高い検出が可能である。
準じたＤＮＡ増幅法の組合せ、特にＰＣＲ−制限酵素断
片長多型分析法（ＲＦＬＰ法）の組合せが好ましい。之
等によれば少量のＤＮＡ試料を用いて簡便かつ容易にし
かも感度および精度の高い検出が可能である。
【００１７】上記好ましい本発明検出法は、より詳しく
は、ＰＣＲ法又はその変法等によって被験ＤＮＡを増幅
・調製し、多量に調製されかつ濃縮された被験ＤＮＡを
上記ＲＦＬＰ法に供して特異的切断サイトの存在の有無
を検出する方法によることができる。この方法は、より
具体的には、例えば次のようにして行われる。
は、ＰＣＲ法又はその変法等によって被験ＤＮＡを増幅
・調製し、多量に調製されかつ濃縮された被験ＤＮＡを
上記ＲＦＬＰ法に供して特異的切断サイトの存在の有無
を検出する方法によることができる。この方法は、より
具体的には、例えば次のようにして行われる。
【００１８】まず、ヒト生体試料からＩＲＦ−１遺伝子
を抽出し、該遺伝子のプロモーター領域の少なくとも塩
基番号１９６部位を有する被検ＤＮＡを増幅し、多量に
かつ濃縮されたサンプルを得る。次いで、増幅ＤＮＡサ
ンプルを制限酵素ＢａｌＩを用いて消化し、ＤＮＡの切
断様式（切断の有無、切断フラグメントの塩基長など）
を常法に従って確認する。尚、本発明に係わるＩＲＦ−
１遺伝子のプロモーター領域は、５番染色体長腕に存在
しているため、父親由来染色体と母親由来染色体とが存
在しており、上記変異を伴う遺伝子多型には、Ｇ／Ｇ，
Ｇ／Ａ，Ａ／Ａの３種類の遺伝子型に分類される。
を抽出し、該遺伝子のプロモーター領域の少なくとも塩
基番号１９６部位を有する被検ＤＮＡを増幅し、多量に
かつ濃縮されたサンプルを得る。次いで、増幅ＤＮＡサ
ンプルを制限酵素ＢａｌＩを用いて消化し、ＤＮＡの切
断様式（切断の有無、切断フラグメントの塩基長など）
を常法に従って確認する。尚、本発明に係わるＩＲＦ−
１遺伝子のプロモーター領域は、５番染色体長腕に存在
しているため、父親由来染色体と母親由来染色体とが存
在しており、上記変異を伴う遺伝子多型には、Ｇ／Ｇ，
Ｇ／Ａ，Ａ／Ａの３種類の遺伝子型に分類される。
【００１９】上記本発明検出法において、クローニング
及び被験ＤＮＡを調製するために用いられるＤＮＡの増
幅は、例えばＰＣＲ法またはその変法に従って実施する
ことができ、これは上記塩基番号１９６部位を有する所
望のＤＮＡ断片を特異的に増幅するように適宜選択した
プライマーを利用することにより行われる。
及び被験ＤＮＡを調製するために用いられるＤＮＡの増
幅は、例えばＰＣＲ法またはその変法に従って実施する
ことができ、これは上記塩基番号１９６部位を有する所
望のＤＮＡ断片を特異的に増幅するように適宜選択した
プライマーを利用することにより行われる。
【００２０】ここで用いられるプライマーとしては、被
験者のＩＲＦ−１遺伝子に由来するＤＮＡを鋳型とし
て、少なくとも本発明の変異（Ｇ１９６Ａ変異）部位を
含む領域を有するＤＮＡ断片を増幅できるように適宜設
計されたものであれば、特に制限されない。ここで増幅
されるＤＮＡの領域は、特に限定されず、引き続く塩基
配列の解析に好適に利用できるように設定すればよく、
例えば制限酵素断片長多型分析法の利用によれば、これ
は制限酵素による切断の結果、切断断片が容易に確認で
きるような塩基長の差を与えるように設定するのがよ
い。
験者のＩＲＦ−１遺伝子に由来するＤＮＡを鋳型とし
て、少なくとも本発明の変異（Ｇ１９６Ａ変異）部位を
含む領域を有するＤＮＡ断片を増幅できるように適宜設
計されたものであれば、特に制限されない。ここで増幅
されるＤＮＡの領域は、特に限定されず、引き続く塩基
配列の解析に好適に利用できるように設定すればよく、
例えば制限酵素断片長多型分析法の利用によれば、これ
は制限酵素による切断の結果、切断断片が容易に確認で
きるような塩基長の差を与えるように設定するのがよ
い。
【００２１】また、プライマーの塩基長は、当該ＤＮＡ
特異的なプライマーとして機能する塩基長であれば特に
制限されない。通常１５〜３０程度、好ましくは２０〜
３０程度、より好ましくは２０〜２５程度の塩基長であ
ることができる。
特異的なプライマーとして機能する塩基長であれば特に
制限されない。通常１５〜３０程度、好ましくは２０〜
３０程度、より好ましくは２０〜２５程度の塩基長であ
ることができる。
【００２２】従って本発明は、被験者のＩＲＦ−１遺伝
子に由来するＤＮＡを鋳型として、少なくとも特定の変
異（Ｇ１９６Ａ変異）部位を含む領域を有する所望のＤ
ＮＡ断片を合成できるように設計したプライマーをも提
供する。
子に由来するＤＮＡを鋳型として、少なくとも特定の変
異（Ｇ１９６Ａ変異）部位を含む領域を有する所望のＤ
ＮＡ断片を合成できるように設計したプライマーをも提
供する。
【００２３】なお、ここでＤＮＡ断片の合成とは、特定
のＤＮＡ（センス鎖、アンチセンス鎖）を鋳型として、
その配列に相補的な配列を有するＤＮＡを伸長及び増幅
することを含む広い概念で用いられるものである。
のＤＮＡ（センス鎖、アンチセンス鎖）を鋳型として、
その配列に相補的な配列を有するＤＮＡを伸長及び増幅
することを含む広い概念で用いられるものである。
【００２４】本発明プライマーは、ＩＲＦ−１遺伝子に
特異的であって、他の遺伝子と相同でなければ（例え
ば、繰返し配列やパリンドローム配列でないこと等が重
要）特に制限されることなく、ＤＮＡの合成の態様、合
成するＤＮＡの領域及び塩基長等に応じて適宜選択する
ことができる。より具体的には、配列番号：１乃至：４
に示される塩基配列の、本発明においてそれぞれ“ＩＲ
Ｆ−１Ｆ”，“ＩＲＦ−１Ｒ”，“ＩＲＦ−１ ＲＦＬ
Ｐ Ｆ”及び“ＩＲＦ−１ ＲＦＬＰ Ｒ”と称されるプ
ライマーを例示することができる。
特異的であって、他の遺伝子と相同でなければ（例え
ば、繰返し配列やパリンドローム配列でないこと等が重
要）特に制限されることなく、ＤＮＡの合成の態様、合
成するＤＮＡの領域及び塩基長等に応じて適宜選択する
ことができる。より具体的には、配列番号：１乃至：４
に示される塩基配列の、本発明においてそれぞれ“ＩＲ
Ｆ−１Ｆ”，“ＩＲＦ−１Ｒ”，“ＩＲＦ−１ ＲＦＬ
Ｐ Ｆ”及び“ＩＲＦ−１ ＲＦＬＰ Ｒ”と称されるプ
ライマーを例示することができる。
【００２５】尚、本発明のプライマーは、ＤＮＡ自動合
成機等を利用して本発明で開示する塩基配列に従って合
成することができる。
成機等を利用して本発明で開示する塩基配列に従って合
成することができる。
【００２６】また、本発明の遺伝子異常の検出法におい
て採用され得る各種の操作、例えば、ＤＮＡ又はＤＮＡ
断片の合成、ＤＮＡの切断，削除，付加または結合を目
的とする酵素処理、ＤＮＡの単離，精製，複製，選択、
ＤＮＡ断片の増幅などはいずれも常法に従うことができ
る（分子遺伝学実験法、共立出版（株）１９８３年発
行；ＰＣＲテクノロジー、宝酒造（株）１９９０年発行
等参照）。またこれらは必要に応じて適宜常法に従い修
飾して用いることもできる。
て採用され得る各種の操作、例えば、ＤＮＡ又はＤＮＡ
断片の合成、ＤＮＡの切断，削除，付加または結合を目
的とする酵素処理、ＤＮＡの単離，精製，複製，選択、
ＤＮＡ断片の増幅などはいずれも常法に従うことができ
る（分子遺伝学実験法、共立出版（株）１９８３年発
行；ＰＣＲテクノロジー、宝酒造（株）１９９０年発行
等参照）。またこれらは必要に応じて適宜常法に従い修
飾して用いることもできる。
【００２７】本発明の検出法において、測定対象である
ＩＲＦ−１遺伝子は、ヒトに由来するものである限り特
に制限されることなく、ＩＲＦ−１遺伝子を含む、例え
ば血液、毛髪、生体材料組織、手術切除組織、細胞株等
の生体試料から広く採取することができる。
ＩＲＦ−１遺伝子は、ヒトに由来するものである限り特
に制限されることなく、ＩＲＦ−１遺伝子を含む、例え
ば血液、毛髪、生体材料組織、手術切除組織、細胞株等
の生体試料から広く採取することができる。
【００２８】ここで、被験物としてのＩＲＦ−１遺伝子
は、その全長ＤＮＡであってもよいが、必ずしもその必
要はなく、ＩＲＦ−１遺伝子の上流プロモーター領域の
少なくとも塩基番号１９６の変異位置を含むＤＮＡ断片
（部分ＤＮＡ）であることができる。当該ＤＮＡ断片
は、本発明にかかる遺伝子異常の検出に利用できるも
の、即ち、塩基置換の測定のために供される被験ＤＮＡ
としての機能的有効長を有するものであれば、特にその
塩基長について制限はなく、通常１０塩基長程度以上、
好ましくは２０塩基長程度以上のものを選択することが
でき、一般的には、１００〜１０００程度の、好ましく
は２００〜３００程度の塩基長からなるものが望まし
い。
は、その全長ＤＮＡであってもよいが、必ずしもその必
要はなく、ＩＲＦ−１遺伝子の上流プロモーター領域の
少なくとも塩基番号１９６の変異位置を含むＤＮＡ断片
（部分ＤＮＡ）であることができる。当該ＤＮＡ断片
は、本発明にかかる遺伝子異常の検出に利用できるも
の、即ち、塩基置換の測定のために供される被験ＤＮＡ
としての機能的有効長を有するものであれば、特にその
塩基長について制限はなく、通常１０塩基長程度以上、
好ましくは２０塩基長程度以上のものを選択することが
でき、一般的には、１００〜１０００程度の、好ましく
は２００〜３００程度の塩基長からなるものが望まし
い。
【００２９】本発明は、かかる本発明変異（Ｇ１９６Ａ
変異）を有することを特徴とする変異ＩＲＦ−１遺伝子
又は当該変異位置を含むその断片（ＤＮＡ）をも提供す
る。
変異）を有することを特徴とする変異ＩＲＦ−１遺伝子
又は当該変異位置を含むその断片（ＤＮＡ）をも提供す
る。
【００３０】本発明ＤＮＡは、上記するように、本発明
ＩＲＦ−１遺伝子異常の検出に供される被検ＤＮＡとし
て有用であり、また、これらＤＮＡは、ＰＣＲ法等のＤ
ＮＡ増幅法またはＤＮＡ伸長法を含むＤＮＡ合成法を用
いて被検ＤＮＡを調製するための鋳型としても有用であ
り、更に本発明に係る上記特定変異を検出するためのプ
ローブとしても有用である。
ＩＲＦ−１遺伝子異常の検出に供される被検ＤＮＡとし
て有用であり、また、これらＤＮＡは、ＰＣＲ法等のＤ
ＮＡ増幅法またはＤＮＡ伸長法を含むＤＮＡ合成法を用
いて被検ＤＮＡを調製するための鋳型としても有用であ
り、更に本発明に係る上記特定変異を検出するためのプ
ローブとしても有用である。
【００３１】ここで、本発明ＤＮＡを上記プローブとし
て用いる場合には、当該ＤＮＡは、塩基置換を検出する
ためのプローブとしての機能的有効長を有するものであ
れば、特にその塩基長については制限はなく、通常約１
０〜１００の、好ましくは１０〜５０の、より好ましく
は１０〜３０程度の塩基長からなることができる。
て用いる場合には、当該ＤＮＡは、塩基置換を検出する
ためのプローブとしての機能的有効長を有するものであ
れば、特にその塩基長については制限はなく、通常約１
０〜１００の、好ましくは１０〜５０の、より好ましく
は１０〜３０程度の塩基長からなることができる。
【００３２】尚、かかる本発明ＤＮＡは、ＩＲＦ−１遺
伝子の塩基配列の少なくとも１９６位のＧがＡに変異し
たものであれば、他の塩基部位において１若しくは幾つ
かの塩基が欠失、置換若しくは付加されていてもよい。
従って、ＩＲＦ−１遺伝子において知られている多の多
型や前記した突然変異等の既知若しくは将来見出される
変異の少なくとも一つを更に含んだＤＮＡであることも
できる。
伝子の塩基配列の少なくとも１９６位のＧがＡに変異し
たものであれば、他の塩基部位において１若しくは幾つ
かの塩基が欠失、置換若しくは付加されていてもよい。
従って、ＩＲＦ−１遺伝子において知られている多の多
型や前記した突然変異等の既知若しくは将来見出される
変異の少なくとも一つを更に含んだＤＮＡであることも
できる。
【００３３】ＩＲＦ−１遺伝子について、本発明に係る
遺伝子異常を検出し、またこれに基づいてＩＦＮ療法の
有効性を判断するに当たっては、ＩＲＦ−１遺伝子変異
（Ｇ１９６Ａ変異）の検出用試薬を有効成分として含有
する試薬キットを利用するのが好適である。
遺伝子異常を検出し、またこれに基づいてＩＦＮ療法の
有効性を判断するに当たっては、ＩＲＦ−１遺伝子変異
（Ｇ１９６Ａ変異）の検出用試薬を有効成分として含有
する試薬キットを利用するのが好適である。
【００３４】かかる試薬キットは、好ましくは、被験者
のＩＲＦ−１遺伝子に由来するＤＮＡを鋳型として、そ
のプロモーター領域の塩基番号１９６位を含むＤＮＡ領
域を合成できるように設計されたプライマーを必須成分
として含有することを特徴とするものであることがで
き、当該プライマーは、本発明の変異の検出方法に応じ
て適宜に選択することができる。
のＩＲＦ−１遺伝子に由来するＤＮＡを鋳型として、そ
のプロモーター領域の塩基番号１９６位を含むＤＮＡ領
域を合成できるように設計されたプライマーを必須成分
として含有することを特徴とするものであることがで
き、当該プライマーは、本発明の変異の検出方法に応じ
て適宜に選択することができる。
【００３５】本発明の試薬キットは、上記プライマー成
分に加えて、本発明にかかる変異の存在の検出に応じた
一乃至数個の試薬を組合せたものであってもよい。尚、
かかる試薬は、採用される検出方法に応じて適宜選択採
用されるが、例えば、制限酵素類、ＤＮＡ合成基質類、
ＤＮＡ合成酵素類等を挙げることができる。更に、当該
試薬キットには、測定の実施の便益のために適当な緩衝
液、洗浄液等が含まれていてもよい。
分に加えて、本発明にかかる変異の存在の検出に応じた
一乃至数個の試薬を組合せたものであってもよい。尚、
かかる試薬は、採用される検出方法に応じて適宜選択採
用されるが、例えば、制限酵素類、ＤＮＡ合成基質類、
ＤＮＡ合成酵素類等を挙げることができる。更に、当該
試薬キットには、測定の実施の便益のために適当な緩衝
液、洗浄液等が含まれていてもよい。
【００３６】本発明のＩＲＦ−１遺伝子の異常（Ｇ１９
６Ａ変異）の検出用試薬キットは、ＩＦＮ療法の実施に
よる有効性を判断するための試薬として有用である。
６Ａ変異）の検出用試薬キットは、ＩＦＮ療法の実施に
よる有効性を判断するための試薬として有用である。
【００３７】
【実施例】以下、本発明の内容を実施例を用いて具体的
に説明する。但し、本発明はこれらに何ら限定されるも
のではない。 実施例１ ＩＲＦ−１遺伝子５’上流ＤＮＡ断片の調製 (1) ＩＦＮ高感受性肝癌細胞ＨＣＣ−Ｔ（Saito H, et
al: Cancer, 1989; 64:1054-1060）、ＨＣＣ−Ｍ（Wat
anabe T, et al: Int.J.Cancer, 1983; 32: 141-146）
及びＩＦＮ低感受性肝癌細胞ＰＬＣ／ＰＲＦ／５（Alex
ander JJ, et al:S Afr Med J 1976; 50: 2124-2128）
のそれぞれ１０7細胞を、１０ｍＭ ＥＤＴＡを含む１０
ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．４）４ｍｌ中で破砕し、得
られる液中にプロティナーゼＫ（Sigma社製）０．４ｍ
ｇ及びRnase（Sigma社製）０．２ｍｇを含む１０％ＳＤ
Ｓ溶液０．４ｍｌを添加し、穏やかに混合した。次い
で、該溶液を３７℃で１０〜１６時間インキュベーショ
ンし、得られた消化溶液を０．５Ｍトリス−塩酸（ｐＨ
８．０）で平衡化した等量のフェノールに加え、混合物
を反転されて１０分間穏やかに混合した。該溶液を５０
００ｇで１０分間遠心分離することによって２相に分
け、水層を新しいチューブに移し、同様にフェノール抽
出を２回行なった。次いで水層を新しいチューブに移
し、０．１容量の３Ｍ酢酸ナトリウムと２容量のエタノ
ールを加えて、混合物を２０分間−８０℃で保存した。
４℃で３０分間、５０００ｇで遠心分離することによ
り、ＤＮＡが沈殿物として得れた。該ＤＮＡを７０％エ
タノールで洗浄し、乾燥した後、ＴＥ緩衝液（１ｍＭ
ＥＤＴＡを含む１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．５））
を加えＤＮＡを完全に溶解した。 (2) ＰＣＲ 得られたＤＮＡ抽出液１μｌを鋳型とし、ＩＲＦ−１Ｆ
（配列番号：１）及びＩＲＦ−１Ｒ（配列番号：２）を
プライマーとして、Ｔａｑ Ｇｏｌｄ（商品名：Perkin
Elmer社製）を用いてＰＣＲを行なった（ＰＣＲ反応
は、９４℃１分、５６℃１分、７２℃２分のサイクルを
３５回実施した）。 実施例２ 塩基配列の決定 実施例１で得られたＰＣＲ産物を３％アガロースゲルで
電気泳動を行ない、得られたバンドを切り出した。次い
で、該バンドからキット（Sephaglas BandPrepKit, Pha
rmacia Biotech社）を用いてＤＮＡを抽出した。該ＤＮ
Ａをダイターミネーター法（Dye Terminator method）
を用い、シークエンサー（ABI PRISM 377 DNA Sequence
r, Perkin Elmer社）で塩基配列を決定した。詳細に
は、プレミックス８μｌ、ＩＲＦ−１Ｆプライマー１０
ｐｍｏｌ、ＤＮＡ５μｌ、ミリＱ水５μｌ及びキット
（ABI cycle sequencing kit, Perkin Elmer社）で全量
を２０μｌとし、最後にミネラルオイル１滴を加えて、
ロボサイクラー（Robocycler 40, STRATAGENE社）にて
シークエンス反応ＰＣＲを行なった（ＰＣＲ反応：９６
℃３０秒、５０℃１５秒、６０℃４分間の反応を３５サ
イクル）。得られたＰＣＲ産物をカラム（CentriSep Sp
in Columns, Perkin Elmer社）で精製して乾燥し、ホル
ムアミド／ブルーデキストラン（５：１）５μｌに溶解
した。このサンプルを９５℃２分間処理して、シークエ
ンサー（ABI PRISM 377 DNA Sequencer, Perkin Elmer
社）を用いて塩基配列決定を行なった。
に説明する。但し、本発明はこれらに何ら限定されるも
のではない。 実施例１ ＩＲＦ−１遺伝子５’上流ＤＮＡ断片の調製 (1) ＩＦＮ高感受性肝癌細胞ＨＣＣ−Ｔ（Saito H, et
al: Cancer, 1989; 64:1054-1060）、ＨＣＣ−Ｍ（Wat
anabe T, et al: Int.J.Cancer, 1983; 32: 141-146）
及びＩＦＮ低感受性肝癌細胞ＰＬＣ／ＰＲＦ／５（Alex
ander JJ, et al:S Afr Med J 1976; 50: 2124-2128）
のそれぞれ１０7細胞を、１０ｍＭ ＥＤＴＡを含む１０
ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．４）４ｍｌ中で破砕し、得
られる液中にプロティナーゼＫ（Sigma社製）０．４ｍ
ｇ及びRnase（Sigma社製）０．２ｍｇを含む１０％ＳＤ
Ｓ溶液０．４ｍｌを添加し、穏やかに混合した。次い
で、該溶液を３７℃で１０〜１６時間インキュベーショ
ンし、得られた消化溶液を０．５Ｍトリス−塩酸（ｐＨ
８．０）で平衡化した等量のフェノールに加え、混合物
を反転されて１０分間穏やかに混合した。該溶液を５０
００ｇで１０分間遠心分離することによって２相に分
け、水層を新しいチューブに移し、同様にフェノール抽
出を２回行なった。次いで水層を新しいチューブに移
し、０．１容量の３Ｍ酢酸ナトリウムと２容量のエタノ
ールを加えて、混合物を２０分間−８０℃で保存した。
４℃で３０分間、５０００ｇで遠心分離することによ
り、ＤＮＡが沈殿物として得れた。該ＤＮＡを７０％エ
タノールで洗浄し、乾燥した後、ＴＥ緩衝液（１ｍＭ
ＥＤＴＡを含む１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．５））
を加えＤＮＡを完全に溶解した。 (2) ＰＣＲ 得られたＤＮＡ抽出液１μｌを鋳型とし、ＩＲＦ−１Ｆ
（配列番号：１）及びＩＲＦ−１Ｒ（配列番号：２）を
プライマーとして、Ｔａｑ Ｇｏｌｄ（商品名：Perkin
Elmer社製）を用いてＰＣＲを行なった（ＰＣＲ反応
は、９４℃１分、５６℃１分、７２℃２分のサイクルを
３５回実施した）。 実施例２ 塩基配列の決定 実施例１で得られたＰＣＲ産物を３％アガロースゲルで
電気泳動を行ない、得られたバンドを切り出した。次い
で、該バンドからキット（Sephaglas BandPrepKit, Pha
rmacia Biotech社）を用いてＤＮＡを抽出した。該ＤＮ
Ａをダイターミネーター法（Dye Terminator method）
を用い、シークエンサー（ABI PRISM 377 DNA Sequence
r, Perkin Elmer社）で塩基配列を決定した。詳細に
は、プレミックス８μｌ、ＩＲＦ−１Ｆプライマー１０
ｐｍｏｌ、ＤＮＡ５μｌ、ミリＱ水５μｌ及びキット
（ABI cycle sequencing kit, Perkin Elmer社）で全量
を２０μｌとし、最後にミネラルオイル１滴を加えて、
ロボサイクラー（Robocycler 40, STRATAGENE社）にて
シークエンス反応ＰＣＲを行なった（ＰＣＲ反応：９６
℃３０秒、５０℃１５秒、６０℃４分間の反応を３５サ
イクル）。得られたＰＣＲ産物をカラム（CentriSep Sp
in Columns, Perkin Elmer社）で精製して乾燥し、ホル
ムアミド／ブルーデキストラン（５：１）５μｌに溶解
した。このサンプルを９５℃２分間処理して、シークエ
ンサー（ABI PRISM 377 DNA Sequencer, Perkin Elmer
社）を用いて塩基配列決定を行なった。
【００３８】得られた塩基配列をＩＲＦ−１遺伝子上流
配列（Accession No. X53095: GenBank）と比較した。
配列（Accession No. X53095: GenBank）と比較した。
【００３９】結果を図１及び図２に示す。
【００４０】各図において、最上段がX53095、第２段目
がHCC-T、第３段目がHCC-M、最下段がPLC/PRF/5の各塩
基配列を示しており、−印は最上段と同一であることを
示す。
がHCC-T、第３段目がHCC-M、最下段がPLC/PRF/5の各塩
基配列を示しており、−印は最上段と同一であることを
示す。
【００４１】図より、ＨＣＣ−Ｔ，ＨＣＣ−Ｍ及びＰＬ
Ｃ／ＰＲＦ／５のいずれにおいても１０８番目（X5309
5:GenBank）のＴからＣへの変異が認められることが判
る。また、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５においてのみ、１９６番
目のＧからＡへの変異が認めらることも判った。 実施例３ ＩＲＦ−１の５’上流ＤＮＡの多型の解析 実施例２で認められたＩＲＦ−１遺伝子上流配列（X530
95:GenBank）の１９６番目の多型性を以下の通り確認し
た。
Ｃ／ＰＲＦ／５のいずれにおいても１０８番目（X5309
5:GenBank）のＴからＣへの変異が認められることが判
る。また、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５においてのみ、１９６番
目のＧからＡへの変異が認めらることも判った。 実施例３ ＩＲＦ−１の５’上流ＤＮＡの多型の解析 実施例２で認められたＩＲＦ−１遺伝子上流配列（X530
95:GenBank）の１９６番目の多型性を以下の通り確認し
た。
【００４２】即ち、健常人４９名の単核球から抽出した
ＤＮＡ溶液１μｌを鋳型として、ＩＲＦ−１ ＲＦＬＰ
Ｆ（配列番号：３）及びＩＲＦ−１ ＲＦＬＰ Ｒ（配列
番号：４）をプライマーとして、ＴａｑＧｏｌｄ（Perk
in Elmer社）を用いてＰＣＲを行なった（ＰＣＲ反応：
９４℃１分、５６℃１分、７２℃２分間のサイクルを３
５回実施）。得られたＰＣＲ産物５μｌに１０×Ｈバッ
ファー１μｌ及び制限酵素ＢａｌＩを加えて３７℃で３
時間消化を行ない、その後３％アガロースゲル電気泳動
して、エチジウムブロマイド染色を行ない、ＵＶにより
バンドを検出した。
ＤＮＡ溶液１μｌを鋳型として、ＩＲＦ−１ ＲＦＬＰ
Ｆ（配列番号：３）及びＩＲＦ−１ ＲＦＬＰ Ｒ（配列
番号：４）をプライマーとして、ＴａｑＧｏｌｄ（Perk
in Elmer社）を用いてＰＣＲを行なった（ＰＣＲ反応：
９４℃１分、５６℃１分、７２℃２分間のサイクルを３
５回実施）。得られたＰＣＲ産物５μｌに１０×Ｈバッ
ファー１μｌ及び制限酵素ＢａｌＩを加えて３７℃で３
時間消化を行ない、その後３％アガロースゲル電気泳動
して、エチジウムブロマイド染色を行ない、ＵＶにより
バンドを検出した。
【００４３】その結果は、下記表１に示すとおりであ
り、バンドサイズが１７５ｂｐのＧ／Ｇ型、１５７ｂｐ
のＡ／Ａ型及び１７５ｂｐと１５７ｂｐとが混在するＧ
／Ａ型が認められた。その割合は、Ｇ／Ｇ型１６名（３
２．６％）、Ａ／Ａ型６名（１２．３％）及びＧ／Ａ型
２７名（５５．１％）であった。
り、バンドサイズが１７５ｂｐのＧ／Ｇ型、１５７ｂｐ
のＡ／Ａ型及び１７５ｂｐと１５７ｂｐとが混在するＧ
／Ａ型が認められた。その割合は、Ｇ／Ｇ型１６名（３
２．６％）、Ａ／Ａ型６名（１２．３％）及びＧ／Ａ型
２７名（５５．１％）であった。
【００４４】次いで、Ｃ型肝炎患者１７名（ＩＦＮ著効
６名、不完全著効３名及び無効８名）について、同様の
解析を行なった。
６名、不完全著効３名及び無効８名）について、同様の
解析を行なった。
【００４５】その結果は表１に示すとおり、ＩＦＮ著効
例（ＣＲ）でＧ／Ｇ型２名（２５．０％）、Ｇ／Ａ型４
名（７５．０％）、Ａ／Ａ型０名（０．０％）、ＩＦＮ
不完全著効例（ＩＲ）でＧ／Ｇ型１名（３３．３％）、
Ｇ／Ａ型１名（３３．３％）、Ａ／Ａ型１名（３３．３
％）、ＩＦＮ無効例（ＮＲ）でＧ／Ｇ型４名（５０．０
％）、Ｇ／Ａ型２名（２５．０％）、Ａ／Ａ型２名（２
５．０％）であった。
例（ＣＲ）でＧ／Ｇ型２名（２５．０％）、Ｇ／Ａ型４
名（７５．０％）、Ａ／Ａ型０名（０．０％）、ＩＦＮ
不完全著効例（ＩＲ）でＧ／Ｇ型１名（３３．３％）、
Ｇ／Ａ型１名（３３．３％）、Ａ／Ａ型１名（３３．３
％）、ＩＦＮ無効例（ＮＲ）でＧ／Ｇ型４名（５０．０
％）、Ｇ／Ａ型２名（２５．０％）、Ａ／Ａ型２名（２
５．０％）であった。
【００４６】
【表１】
【００４７】表１の結果から、Ａ／Ａ型ではＣＲが１例
もないのに対して、（Ｇ／Ｇ＋Ｇ／Ａ）型ではＣＲが１
４症例中６例（４２．９％）認められ、これはＣ型肝炎
患者に対するＩＦＮ治療の著効率２０〜３０％に比べて
遥かに高いものであった。このことより、Ａ／Ａ型の症
例ではＩＦＮ治療が有効でなく、Ｇ／Ｇ型又はＧ／Ａ型
の症例では有効であると考えられ、ＩＲＦ−１の５’上
流ＤＮＡの多型解析がＩＦＮ投与前の効果の予測に有効
であることが判った。
もないのに対して、（Ｇ／Ｇ＋Ｇ／Ａ）型ではＣＲが１
４症例中６例（４２．９％）認められ、これはＣ型肝炎
患者に対するＩＦＮ治療の著効率２０〜３０％に比べて
遥かに高いものであった。このことより、Ａ／Ａ型の症
例ではＩＦＮ治療が有効でなく、Ｇ／Ｇ型又はＧ／Ａ型
の症例では有効であると考えられ、ＩＲＦ−１の５’上
流ＤＮＡの多型解析がＩＦＮ投与前の効果の予測に有効
であることが判った。
【００４８】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Otsuka Pharmaceutical Co., ltd. <120> A method for detection of abnormal IRF-1 gene <130> 2689JP <160> 4 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> IRF-1F primer <400> 1 cgatcacctc gcctgcgttc 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> IRF-1R primer <400> 2 ccaccgagca atccaaacac 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> IRF-1 RFLP F primer <400> 3 tgagaggaca ggctgtggcc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> IRF-1 RFLP R primer <400> 4 cggcgaaggg gaagtacagg 20
【図１】ＩＲＦ−１遺伝子の塩基配列を比較した図であ
る。
る。
【図２】ＩＲＦ−１遺伝子の塩基配列を比較した図であ
る。
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 斎藤 英胤 東京都新宿区信濃町35 慶應義塾大学医学 部内 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA35 DA12 DA13 DA14 FB01 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 CA09 FA02 HA12 HA19 4B063 QA13 QA17 QA19 QQ42 QQ58 QR32 QR55 QR62 QS25
Claims (6)
- 【請求項１】ＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター領域の１
９６位におけるグアニンからアデニンへの塩基置換を測
定することを特徴とするＩＲＦ−１遺伝子異常の検出方
法。 - 【請求項２】被験者のＩＲＦ−１遺伝子のプロモーター
領域の１９６位を含むＤＮＡ断片を調製する工程及び該
ＤＮＡ断片の塩基配列を解析する工程を含む請求項１に
記載の検出方法。 - 【請求項３】塩基配列の解析が制限酵素断片長多型分析
法に従われる請求項２に記載の検出方法。 - 【請求項４】請求項１に記載の塩基置換からなる変異を
有するＩＲＦ−１遺伝子又は該変異を含む遺伝子の断
片。 - 【請求項５】請求項１に記載の塩基置換の測定に供され
る被検ＤＮＡとしての機能的有効長を有する請求項４に
記載のＤＮＡ断片又は請求項１に記載の塩基置換を検出
するためのプローブとしての機能的有効長を有する請求
項４に記載のＤＮＡ断片。 - 【請求項６】 インターフェロン治療効果の有効性判定
のための請求項１に記載の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32497599A JP2001136973A (ja) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | Ｉｒｆ−１遺伝子異常の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32497599A JP2001136973A (ja) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | Ｉｒｆ−１遺伝子異常の検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001136973A true JP2001136973A (ja) | 2001-05-22 |
Family
ID=18171732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32497599A Pending JP2001136973A (ja) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | Ｉｒｆ−１遺伝子異常の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001136973A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002077281A1 (fr) * | 2001-03-27 | 2002-10-03 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Procede de detection d'acide nucleique relatif a une maladie |
| WO2006046505A1 (ja) | 2004-10-28 | 2006-05-04 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | 腎細胞癌に対するインターフェロン治療反応性識別マーカー |
| JP2012527482A (ja) * | 2009-05-21 | 2012-11-08 | シェーリング コーポレイション | インターフェロンアルファ応答に関連する遺伝子マーカー |
-
1999
- 1999-11-16 JP JP32497599A patent/JP2001136973A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002077281A1 (fr) * | 2001-03-27 | 2002-10-03 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Procede de detection d'acide nucleique relatif a une maladie |
| WO2006046505A1 (ja) | 2004-10-28 | 2006-05-04 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | 腎細胞癌に対するインターフェロン治療反応性識別マーカー |
| US7838229B2 (en) | 2004-10-28 | 2010-11-23 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Identification marker responsive to interferon therapy for renal cell cancer |
| EP2354228A2 (en) | 2004-10-28 | 2011-08-10 | Otsuka Pharmaceutical Company, Limited | Identification marker responsive to interferon therapy for renal cell cancer |
| EP2453015A1 (en) | 2004-10-28 | 2012-05-16 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Identification marker responsive to interferon therapy for renal cell cancer |
| JP2012527482A (ja) * | 2009-05-21 | 2012-11-08 | シェーリング コーポレイション | インターフェロンアルファ応答に関連する遺伝子マーカー |
| JP2014076051A (ja) * | 2009-05-21 | 2014-05-01 | Merck Sharp & Dohme Corp | インターフェロンアルファ応答に関連する遺伝子マーカー |
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