JP2000175689A - ヒトミトコンドリアｄｎａ異常の検出方法 - Google Patents
ヒトミトコンドリアｄｎａ異常の検出方法Info
- Publication number
- JP2000175689A JP2000175689A JP10359276A JP35927698A JP2000175689A JP 2000175689 A JP2000175689 A JP 2000175689A JP 10359276 A JP10359276 A JP 10359276A JP 35927698 A JP35927698 A JP 35927698A JP 2000175689 A JP2000175689 A JP 2000175689A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dna
- mutation
- mtdna
- present
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】家族性腎症関連ヒトmtＤＮＡ変異に関する新規
情報の提供、並びに該mtＤＮＡの変異検出法、該検出法
を利用した家族性腎症の診断法及び診断用試薬キットの
提供。 【解決手段】 被験者のヒトmtＤＮＡの１５９２３位、
２２４６位、１４１８０位及び１４９２７位から選択さ
れる少なくともひとつの特定変異を検出するヒトmtＤＮ
Ａ異常の検出方法。
情報の提供、並びに該mtＤＮＡの変異検出法、該検出法
を利用した家族性腎症の診断法及び診断用試薬キットの
提供。 【解決手段】 被験者のヒトmtＤＮＡの１５９２３位、
２２４６位、１４１８０位及び１４９２７位から選択さ
れる少なくともひとつの特定変異を検出するヒトmtＤＮ
Ａ異常の検出方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、家族性腎症に関わ
るヒトミトコンドリアＤＮＡ（ヒトmtＤＮＡ）異常とそ
の検出方法に関する。
るヒトミトコンドリアＤＮＡ（ヒトmtＤＮＡ）異常とそ
の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】mtＤＮＡは、高等動物が持つ唯一の核外
ゲノムである。その突然変異は種々の病変と関わること
が報告されている。該mtＤＮＡ変異による疾患には、Ｍ
ＥＬＡＳ（mitochondrial myopathy, encephalopathy,
lactic acidosis and stroke-like episodes）、ＭＥＲ
ＲＦ（myoclonus epilepsy associated with ragged-re
d fibers）、ＫＳＳとＣＥＯ（Kearns-Sayre症候群と進
行性外眼筋麻痺症候群）の３大病型が含まれる。この他
にも、mtＤＮＡ変異は、パーキンソン病、糖尿病、Pear
son marrow pancreas症候群、心筋症等の疾患の重要な
基礎病変となっていることが知られている（最新医学、
特集「ミトコンドリア病とは何か」、第50巻、第7号、1
995年）。
ゲノムである。その突然変異は種々の病変と関わること
が報告されている。該mtＤＮＡ変異による疾患には、Ｍ
ＥＬＡＳ（mitochondrial myopathy, encephalopathy,
lactic acidosis and stroke-like episodes）、ＭＥＲ
ＲＦ（myoclonus epilepsy associated with ragged-re
d fibers）、ＫＳＳとＣＥＯ（Kearns-Sayre症候群と進
行性外眼筋麻痺症候群）の３大病型が含まれる。この他
にも、mtＤＮＡ変異は、パーキンソン病、糖尿病、Pear
son marrow pancreas症候群、心筋症等の疾患の重要な
基礎病変となっていることが知られている（最新医学、
特集「ミトコンドリア病とは何か」、第50巻、第7号、1
995年）。
【０００３】一方、家族性（遺伝性）腎症とは、糸球体
障害を示す遺伝性疾患（hereditarynephritis）を指称
する。その遺伝形式及び病態乃至病因の探索が現在進め
られているが、未だそれらの解明はなされていない。勿
論、かかる家族性腎症と上記mtＤＮＡ変異との何らかの
関連性についての報告も皆無である。
障害を示す遺伝性疾患（hereditarynephritis）を指称
する。その遺伝形式及び病態乃至病因の探索が現在進め
られているが、未だそれらの解明はなされていない。勿
論、かかる家族性腎症と上記mtＤＮＡ変異との何らかの
関連性についての報告も皆無である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、家族性腎症
に関連するヒトmtＤＮＡの異常に関する新規情報を提供
することを目的とする。また、本発明はかかるヒトmtＤ
ＮＡ異常の検出方法、該検出による家族性腎症の診断法
及び予知・予防法を提供することを目的とする。更に、
本発明は、家族性腎症に関連するヒトmtＤＮＡ異常の検
出を簡便に実施するために有用な試薬及び試薬キットを
提供することを目的とする。
に関連するヒトmtＤＮＡの異常に関する新規情報を提供
することを目的とする。また、本発明はかかるヒトmtＤ
ＮＡ異常の検出方法、該検出による家族性腎症の診断法
及び予知・予防法を提供することを目的とする。更に、
本発明は、家族性腎症に関連するヒトmtＤＮＡ異常の検
出を簡便に実施するために有用な試薬及び試薬キットを
提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的よ
り鋭意研究を重ねた結果、家族性腎症の発症にヒトmtＤ
ＮＡの特定の変異が関わることを初めて明らかにし、こ
の変異の検出のための特定の塩基配列を有するプライマ
ー及びＤＮＡを合成し、これを用いた家族性腎症の診断
法を確立するに成功し、ここに本発明を完成するに至っ
た。
り鋭意研究を重ねた結果、家族性腎症の発症にヒトmtＤ
ＮＡの特定の変異が関わることを初めて明らかにし、こ
の変異の検出のための特定の塩基配列を有するプライマ
ー及びＤＮＡを合成し、これを用いた家族性腎症の診断
法を確立するに成功し、ここに本発明を完成するに至っ
た。
【０００６】本発明によれば、被験者のヒトmtＤＮＡの
塩基配列の、１５９２３位アデニンのグアニンへの変異
（以下この変異を「Ａ15923Ｇ」という）、２２４６位
アデニンのグアニンへの変異（以下この変異を「Ａ2246
Ｇ」という）、１４１８０位チミジンのシトシンへの変
異（以下この変異を「Ｔ14180Ｃ」という）及び１４９
２７位アデニンのグアニンへの変異（以下この変異を
「Ａ14927Ｇ」という）から選択される少なくともひと
つの変異を検出することを特徴とする、家族性腎症に関
連するヒトmtＤＮＡ異常の検出方法が提供される。
塩基配列の、１５９２３位アデニンのグアニンへの変異
（以下この変異を「Ａ15923Ｇ」という）、２２４６位
アデニンのグアニンへの変異（以下この変異を「Ａ2246
Ｇ」という）、１４１８０位チミジンのシトシンへの変
異（以下この変異を「Ｔ14180Ｃ」という）及び１４９
２７位アデニンのグアニンへの変異（以下この変異を
「Ａ14927Ｇ」という）から選択される少なくともひと
つの変異を検出することを特徴とする、家族性腎症に関
連するヒトmtＤＮＡ異常の検出方法が提供される。
【０００７】また本発明によれば、Ａ15923Ｇ、Ａ2246
Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される変異の少な
くともひとつを含むヒトmtＤＮＡであって、ヒトmtＤＮ
Ａの同定特異性を保持する塩基長からなるＤＮＡが提供
される。
Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される変異の少な
くともひとつを含むヒトmtＤＮＡであって、ヒトmtＤＮ
Ａの同定特異性を保持する塩基長からなるＤＮＡが提供
される。
【０００８】該ＤＮＡは、上記特定の変異以外に、ヒト
mtＤＮＡの突然変異乃至多型に起因する１若しくは複数
の塩基の欠失、置換若しくは付加からなる他の変異を更
に有することができる。
mtＤＮＡの突然変異乃至多型に起因する１若しくは複数
の塩基の欠失、置換若しくは付加からなる他の変異を更
に有することができる。
【０００９】更に本発明によれば、上記ＤＮＡを合成す
るために用いられるプライマーが提供される。
るために用いられるプライマーが提供される。
【００１０】更に本発明によれば、上記プライマーを含
む家族性腎症に関連するヒトmtＤＮＡ異常の検出用試薬
キット並びに該キットを有効成分とする家族性腎症診断
用剤が提供される。
む家族性腎症に関連するヒトmtＤＮＡ異常の検出用試薬
キット並びに該キットを有効成分とする家族性腎症診断
用剤が提供される。
【００１１】
【発明の実施の形態】本明細書において、アミノ酸、ペ
プチド、塩基配列、核酸、制限酵素、その他に関する略
号による表示は、ＩＵＰＡＣ及びＩＵＰＡＣ−ＩＵＢに
よる命名法又はその規定、及び「塩基配列又はアミノ酸
配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（平
成９年３月、特許庁調整課審査基準室）に従うものとす
る。
プチド、塩基配列、核酸、制限酵素、その他に関する略
号による表示は、ＩＵＰＡＣ及びＩＵＰＡＣ−ＩＵＢに
よる命名法又はその規定、及び「塩基配列又はアミノ酸
配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（平
成９年３月、特許庁調整課審査基準室）に従うものとす
る。
【００１２】また、本発明に用いる変異の上記表記、例
えばＡ15923Ｇは、ヒトmtＤＮＡにおける塩基配列１５
９２３位のアデニン（Ａ）がグアニン（Ｇ）に点変異し
ていることを意味する。他の変異における表記法も同様
とする。
えばＡ15923Ｇは、ヒトmtＤＮＡにおける塩基配列１５
９２３位のアデニン（Ａ）がグアニン（Ｇ）に点変異し
ていることを意味する。他の変異における表記法も同様
とする。
【００１３】尚、mtＤＮＡには変異乃至多型が多数存在
することが知られており、本発明で用いるヒトmtＤＮＡ
の塩基番号や塩基の位置は、変異ＤＮＡ及びＤＮＡ断片
のいずれの場合も、「ＨＵＭＭＴＣＧ」（ＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号：Ｊ０１４１５）に示された配列を基準配列
として表記するものとする。また、本明細書において
は、この基準配列を「正常」といい、この基準配列を有
するヒトmtＤＮＡを「正常なヒトmtＤＮＡ」という。
することが知られており、本発明で用いるヒトmtＤＮＡ
の塩基番号や塩基の位置は、変異ＤＮＡ及びＤＮＡ断片
のいずれの場合も、「ＨＵＭＭＴＣＧ」（ＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号：Ｊ０１４１５）に示された配列を基準配列
として表記するものとする。また、本明細書において
は、この基準配列を「正常」といい、この基準配列を有
するヒトmtＤＮＡを「正常なヒトmtＤＮＡ」という。
【００１４】本発明ＤＮＡは、Ａ15923Ｇ、Ａ2246Ｇ、
Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される変異の少なくと
もひとつを含むヒトmtＤＮＡであって、ヒトmtＤＮＡの
同定特異性を保持する塩基長からなるＤＮＡである。
Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される変異の少なくと
もひとつを含むヒトmtＤＮＡであって、ヒトmtＤＮＡの
同定特異性を保持する塩基長からなるＤＮＡである。
【００１５】ここでＤＮＡとは、２本鎖ＤＮＡのみなら
ず、それを構成するセンス鎖及びアンチセンス鎖といっ
た各１本鎖ＤＮＡを包含する。また、本発明ＤＮＡに
は、ヒトmtＤＮＡに対応する全長のＤＮＡ（約１６.６
ｋｂｐ)のみならず、その一部からなる部分ＤＮＡ（Ｄ
ＮＡ断片）も包含される。即ち、本発明ＤＮＡには、上
記変異の少なくともひとつを有する変異ヒトmtＤＮＡ
（全長ＤＮＡ）の部分ＤＮＡであって、ヒトmtＤＮＡの
同定特異性を保持する塩基長からなるＤＮＡが包含され
る。
ず、それを構成するセンス鎖及びアンチセンス鎖といっ
た各１本鎖ＤＮＡを包含する。また、本発明ＤＮＡに
は、ヒトmtＤＮＡに対応する全長のＤＮＡ（約１６.６
ｋｂｐ)のみならず、その一部からなる部分ＤＮＡ（Ｄ
ＮＡ断片）も包含される。即ち、本発明ＤＮＡには、上
記変異の少なくともひとつを有する変異ヒトmtＤＮＡ
（全長ＤＮＡ）の部分ＤＮＡであって、ヒトmtＤＮＡの
同定特異性を保持する塩基長からなるＤＮＡが包含され
る。
【００１６】上記において「ヒトmtＤＮＡの同定特異性
を保持する塩基長」とは、他の遺伝子と区別できるだけ
の（即ち、ヒトmtＤＮＡに固有の）配列長さを意味す
る。この要件を充足する塩基長としては、通常１０塩基
長程度以上、好ましくは２０塩基長程度以上の長さを挙
げることができる。上記部分ＤＮＡの塩基長としては、
好適には１０〜５００程度の範囲のものを挙げることが
できる。
を保持する塩基長」とは、他の遺伝子と区別できるだけ
の（即ち、ヒトmtＤＮＡに固有の）配列長さを意味す
る。この要件を充足する塩基長としては、通常１０塩基
長程度以上、好ましくは２０塩基長程度以上の長さを挙
げることができる。上記部分ＤＮＡの塩基長としては、
好適には１０〜５００程度の範囲のものを挙げることが
できる。
【００１７】本発明ＤＮＡは、ヒトmtＤＮＡの塩基配列
において上記特定の変異の少なくともひとつを有してい
ることを必須として、更に、他の塩基配列部位において
１若しくは複数個、例えば数個の塩基が欠失、置換若し
くは付加された配列を有することができる。
において上記特定の変異の少なくともひとつを有してい
ることを必須として、更に、他の塩基配列部位において
１若しくは複数個、例えば数個の塩基が欠失、置換若し
くは付加された配列を有することができる。
【００１８】従来から、ヒトmtＤＮＡには多くの多型が
存在すること及び種々の疾患においてヒトmtＤＮＡの突
然変異による異常が報告されている。これら疾患に関わ
る変異の一例は、図５に示されるとおりである。従っ
て、本発明ＤＮＡは、本発明の必須の上記特定の変異に
加えて、これらの既知の変異や将来見出される突然変異
乃至は多型による変異の少なくとも一つを更に含んでい
てもよい。
存在すること及び種々の疾患においてヒトmtＤＮＡの突
然変異による異常が報告されている。これら疾患に関わ
る変異の一例は、図５に示されるとおりである。従っ
て、本発明ＤＮＡは、本発明の必須の上記特定の変異に
加えて、これらの既知の変異や将来見出される突然変異
乃至は多型による変異の少なくとも一つを更に含んでい
てもよい。
【００１９】本発明ＤＮＡは、本発明にかかるヒトmtＤ
ＮＡ異常の検出法並びに家族性腎症の診断に供される被
験ＤＮＡとして有用である。またこれは、例えばＰＣＲ
法等のＤＮＡ増幅法又はＤＮＡ伸長法を含むＤＮＡ合成
法を用いて被験ＤＮＡを調製するための鋳型としても有
用である。更に、本発明ＤＮＡは、本発明にかかる特定
変異を検出するためのプローブとしても有用である。
ＮＡ異常の検出法並びに家族性腎症の診断に供される被
験ＤＮＡとして有用である。またこれは、例えばＰＣＲ
法等のＤＮＡ増幅法又はＤＮＡ伸長法を含むＤＮＡ合成
法を用いて被験ＤＮＡを調製するための鋳型としても有
用である。更に、本発明ＤＮＡは、本発明にかかる特定
変異を検出するためのプローブとしても有用である。
【００２０】本発明ＤＮＡは、その用途に応じて、所望
により適宜に部分ＤＮＡとして使用することができる。
例えば診断用の被験ＤＮＡとして用いられる場合には、
通常、当該部分ＤＮＡは、所望の変異部位を含む約１０
０〜５００の、好ましくは約２００〜３００の塩基長を
含む塩基配列で構成されることが望ましい。また、本発
明にかかる点変異を検出するためのプローブとして用い
られる場合には、検出を所望する当該変異位置を含む約
１０〜１００の、好ましくは約１０〜５０の、より好ま
しくは約１０〜３０の塩基長を含む塩基配列で構成され
ることが望ましい。
により適宜に部分ＤＮＡとして使用することができる。
例えば診断用の被験ＤＮＡとして用いられる場合には、
通常、当該部分ＤＮＡは、所望の変異部位を含む約１０
０〜５００の、好ましくは約２００〜３００の塩基長を
含む塩基配列で構成されることが望ましい。また、本発
明にかかる点変異を検出するためのプローブとして用い
られる場合には、検出を所望する当該変異位置を含む約
１０〜１００の、好ましくは約１０〜５０の、より好ま
しくは約１０〜３０の塩基長を含む塩基配列で構成され
ることが望ましい。
【００２１】本発明にかかるヒトmtＤＮＡのＡ15923
Ｇ、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇの変異は、家族
性腎症の病因として特徴付けられ、従ってその存在の検
出は、家族性腎症の保因者診断及び発症の予知・予防等
の臨床診断分野において有用である。
Ｇ、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇの変異は、家族
性腎症の病因として特徴付けられ、従ってその存在の検
出は、家族性腎症の保因者診断及び発症の予知・予防等
の臨床診断分野において有用である。
【００２２】本発明ヒトmtＤＮＡ異常の検出乃至家族性
腎症の遺伝子診断は、基本的には、被験者のヒトmtＤＮ
ＡにＡ15923Ｇ、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇか
ら選択される少なくともひとつの変異（塩基置換）が存
在するか否かを検出することによって行われる。
腎症の遺伝子診断は、基本的には、被験者のヒトmtＤＮ
ＡにＡ15923Ｇ、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇか
ら選択される少なくともひとつの変異（塩基置換）が存
在するか否かを検出することによって行われる。
【００２３】当該検出は、本発明によって明らかにされ
且つ特徴付けられた前記特定のmtＤＮＡ変異を検出する
ものである限りにおいて、その手法などに何ら限定はな
く、公知若しくは将来得られ得る各種の方法を広く採用
することができる。検出すべき遺伝子の変異が明らかに
され、これが特定されている限り、その検出のための方
法を適宜に選択、採用し、若しくは該方法を適宜修飾し
て採用することは当業者であれば容易である。
且つ特徴付けられた前記特定のmtＤＮＡ変異を検出する
ものである限りにおいて、その手法などに何ら限定はな
く、公知若しくは将来得られ得る各種の方法を広く採用
することができる。検出すべき遺伝子の変異が明らかに
され、これが特定されている限り、その検出のための方
法を適宜に選択、採用し、若しくは該方法を適宜修飾し
て採用することは当業者であれば容易である。
【００２４】例えば、被験者のmtＤＮＡを対象として、
特定の変異を検出する方法としては、特に限定はされな
いが、サザンハイブリダイゼーション法やドットハイブ
リダイゼーション法（J. Mol. Biol., 98: 503-517, 19
75等参照）、ジデオキシ塩基配列決定法、ＤＮＡの増幅
手法を組み合わせた各種の検出法，例えばＰＣＲ−制限
酵素断片長多型分析法（RFLP: Restriction fragment l
ength polymorphism），ＰＣＲ−単鎖高次構造多型分析
法（Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 86: 2766-2770,
1989等参照）、ＰＣＲ−特異的配列オリゴヌクレオチ
ド法（SSO: Specific sequence oligonucleotide）、Ｐ
ＣＲ−ＳＳＯとドットハイブリダイゼーション法を用い
る対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド法（Nature, 32
4: 163-166, 1986等参照）等を例示することができる。
特定の変異を検出する方法としては、特に限定はされな
いが、サザンハイブリダイゼーション法やドットハイブ
リダイゼーション法（J. Mol. Biol., 98: 503-517, 19
75等参照）、ジデオキシ塩基配列決定法、ＤＮＡの増幅
手法を組み合わせた各種の検出法，例えばＰＣＲ−制限
酵素断片長多型分析法（RFLP: Restriction fragment l
ength polymorphism），ＰＣＲ−単鎖高次構造多型分析
法（Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 86: 2766-2770,
1989等参照）、ＰＣＲ−特異的配列オリゴヌクレオチ
ド法（SSO: Specific sequence oligonucleotide）、Ｐ
ＣＲ−ＳＳＯとドットハイブリダイゼーション法を用い
る対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド法（Nature, 32
4: 163-166, 1986等参照）等を例示することができる。
【００２５】尚、上記において、被験物としてのヒトmt
ＤＮＡは、ヒトmtＤＮＡの全長ＤＮＡであってもよい
が、必ずしもその必要はなく、ヒトmtＤＮＡの少なくと
も上記本発明にかかる変異位置を含む部分ＤＮＡである
ことができる。
ＤＮＡは、ヒトmtＤＮＡの全長ＤＮＡであってもよい
が、必ずしもその必要はなく、ヒトmtＤＮＡの少なくと
も上記本発明にかかる変異位置を含む部分ＤＮＡである
ことができる。
【００２６】本発明のヒトmtＤＮＡ異常の検出は、より
好適には、少量のＤＮＡ試料を用いて簡便且つ容易にし
かも感度及び精度の高い検出が可能である観点より、Ｐ
ＣＲ法若しくはそれに準じたＤＮＡ増幅法を組み合わせ
た方法により実施することができる。これは、より具体
的には、被験者のヒトmtＤＮＡの塩基番号１５９２３
位、２２４６位、１４１８０位及び／又は１４９２７位
を含む所望ＤＮＡ断片を増幅し、得られた増幅ＤＮＡの
当該変異部位を含む塩基配列を解析することにより実施
することができる。
好適には、少量のＤＮＡ試料を用いて簡便且つ容易にし
かも感度及び精度の高い検出が可能である観点より、Ｐ
ＣＲ法若しくはそれに準じたＤＮＡ増幅法を組み合わせ
た方法により実施することができる。これは、より具体
的には、被験者のヒトmtＤＮＡの塩基番号１５９２３
位、２２４６位、１４１８０位及び／又は１４９２７位
を含む所望ＤＮＡ断片を増幅し、得られた増幅ＤＮＡの
当該変異部位を含む塩基配列を解析することにより実施
することができる。
【００２７】ここで塩基配列の解析は、特に制限はなく
上記した各種の測定手法において採用されている方法、
例えば塩基配列の配列決定、ハイブリダイザーションや
制限酵素の利用によるもの等により好ましく行い得る。
特に当該解析は、その簡便さから、制限酵素断片長多型
分析法（ＲＦＬＰ法）によるのが好ましい。以下、この
方法を例にとり、より詳細に説明する。
上記した各種の測定手法において採用されている方法、
例えば塩基配列の配列決定、ハイブリダイザーションや
制限酵素の利用によるもの等により好ましく行い得る。
特に当該解析は、その簡便さから、制限酵素断片長多型
分析法（ＲＦＬＰ法）によるのが好ましい。以下、この
方法を例にとり、より詳細に説明する。
【００２８】ＲＦＬＰ法によれば、本発明の変異によっ
て生じる或は消失する制限酵素サイトを解析することが
できる。例えば、本発明のＡ15923Ｇ変異は、ヒトmtＤ
ＮＡの塩基配列１５９１９〜１５９２４位の領域に制限
酵素ＸｂａＩの特異的切断サイト（ＴＣＴＡＧＡ）を生
じさせるものであるため、ＲＦＬＰ法に従い簡便に当該
領域の塩基配列を解析することができる。
て生じる或は消失する制限酵素サイトを解析することが
できる。例えば、本発明のＡ15923Ｇ変異は、ヒトmtＤ
ＮＡの塩基配列１５９１９〜１５９２４位の領域に制限
酵素ＸｂａＩの特異的切断サイト（ＴＣＴＡＧＡ）を生
じさせるものであるため、ＲＦＬＰ法に従い簡便に当該
領域の塩基配列を解析することができる。
【００２９】当該検出方法は、まず、ヒト生体試料から
mtＤＮＡのＤＮＡを抽出し、該遺伝子の少なくとも塩基
番号１５９２３位を有する被験ＤＮＡを増幅し、多量に
且つ濃縮されたサンプルを得る。次いで、増幅ＤＮＡサ
ンプルを制限酵素ＸｂａＩを用いて消化し、ＤＮＡの切
断様式（切断の有無、切断フラグメントの塩基長など）
を常法に従って確認する。即ち、本発明の変異Ａ15923
Ｇを有する、例えば塩基番号１５８９４〜１６１３４位
からなる塩基長２４１の増幅ＤＮＡは、ＸｂａＩ消化に
より、２１５ｂｐと２６ｂｐの２つのフラグメントを生
じ、一方、当該変異を有しない増幅ＤＮＡではこの切断
様式を呈しないため、本発明にかかる遺伝子変異の存在
を検出することができる。
mtＤＮＡのＤＮＡを抽出し、該遺伝子の少なくとも塩基
番号１５９２３位を有する被験ＤＮＡを増幅し、多量に
且つ濃縮されたサンプルを得る。次いで、増幅ＤＮＡサ
ンプルを制限酵素ＸｂａＩを用いて消化し、ＤＮＡの切
断様式（切断の有無、切断フラグメントの塩基長など）
を常法に従って確認する。即ち、本発明の変異Ａ15923
Ｇを有する、例えば塩基番号１５８９４〜１６１３４位
からなる塩基長２４１の増幅ＤＮＡは、ＸｂａＩ消化に
より、２１５ｂｐと２６ｂｐの２つのフラグメントを生
じ、一方、当該変異を有しない増幅ＤＮＡではこの切断
様式を呈しないため、本発明にかかる遺伝子変異の存在
を検出することができる。
【００３０】本発明のＡ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927
Ｇ変異においても、これらの変異を確認し得る制限酵素
サイトを利用することにより、同様にその変異の存在を
検出することができる。
Ｇ変異においても、これらの変異を確認し得る制限酵素
サイトを利用することにより、同様にその変異の存在を
検出することができる。
【００３１】尚、本発明にかかる変異によっては制限酵
素の認識部位とはなり得ない（利用する適当な制限酵素
がない）場合には、常法に従い、プライマーにミスマッ
チを入れることにより所望の制限酵素サイトを人為的に
導入することができる。
素の認識部位とはなり得ない（利用する適当な制限酵素
がない）場合には、常法に従い、プライマーにミスマッ
チを入れることにより所望の制限酵素サイトを人為的に
導入することができる。
【００３２】上記方法において、測定対象であるmtＤＮ
Ａはヒトに由来するものである限り特に制限されること
なく、ヒトmtＤＮＡを含む例えば血液、毛髪、生体材料
組織、手術切除組織、細胞株等の生体試料から広く採取
され得る。
Ａはヒトに由来するものである限り特に制限されること
なく、ヒトmtＤＮＡを含む例えば血液、毛髪、生体材料
組織、手術切除組織、細胞株等の生体試料から広く採取
され得る。
【００３３】また、クローニング及び被験ＤＮＡを調製
するために用いられるＤＮＡの増幅は、例えばＰＣＲ法
又はその変法に従って実施することができる。これは検
出を所望する変異位置を有する所望のＤＮＡ断片を特異
的に増幅するように適宜設定したプライマーの採用によ
り行ない得る。
するために用いられるＤＮＡの増幅は、例えばＰＣＲ法
又はその変法に従って実施することができる。これは検
出を所望する変異位置を有する所望のＤＮＡ断片を特異
的に増幅するように適宜設定したプライマーの採用によ
り行ない得る。
【００３４】当該プライマーは、被験者のヒトmtＤＮＡ
に由来するＤＮＡを鋳型として、少なくとも当該所望の
変異部位を含む領域を有する部分ＤＮＡを増幅できるよ
うに設計されたものであり、これは、ヒトmtＤＮＡに特
異的であって、他の遺伝子と相同でなければ（例えば、
繰り返し配列やパリンドローム配列でないこと等が重
要）特に制限されることなく、ＤＮＡの合成の態様、合
成するＤＮＡの領域及び塩基長等に応じて適宜選択する
ことができる。
に由来するＤＮＡを鋳型として、少なくとも当該所望の
変異部位を含む領域を有する部分ＤＮＡを増幅できるよ
うに設計されたものであり、これは、ヒトmtＤＮＡに特
異的であって、他の遺伝子と相同でなければ（例えば、
繰り返し配列やパリンドローム配列でないこと等が重
要）特に制限されることなく、ＤＮＡの合成の態様、合
成するＤＮＡの領域及び塩基長等に応じて適宜選択する
ことができる。
【００３５】プライマーの塩基長は、当該ＤＮＡに特異
的なプライマーとして機能し得る限り特に制限されず、
通常１５〜３０程度、好ましくは２０〜３０程度である
ことができる。
的なプライマーとして機能し得る限り特に制限されず、
通常１５〜３０程度、好ましくは２０〜３０程度である
ことができる。
【００３６】また、増幅されるＤＮＡ領域も、特に限定
されないが、引き続く塩基配列の解析に好適に利用でき
るように設定するのがよく、例えばＲＦＬＰ法を利用す
る場合は、制限酵素による切断の結果、切断断片が容易
に確認できるような塩基長の差を与えるように設定する
のがよい。
されないが、引き続く塩基配列の解析に好適に利用でき
るように設定するのがよく、例えばＲＦＬＰ法を利用す
る場合は、制限酵素による切断の結果、切断断片が容易
に確認できるような塩基長の差を与えるように設定する
のがよい。
【００３７】従って、本発明は、被験者のヒトmtＤＮＡ
に由来するＤＮＡを鋳型として、少なくとも本発明の特
定の変異部位を含む領域を有する所望の部分ＤＮＡを合
成できるように設計したプライマーをも提供する。
に由来するＤＮＡを鋳型として、少なくとも本発明の特
定の変異部位を含む領域を有する所望の部分ＤＮＡを合
成できるように設計したプライマーをも提供する。
【００３８】尚、ここでいうＤＮＡの合成とは、特定の
ＤＮＡ（センス鎖、アンチセンス鎖）を鋳型として、そ
の配列に相補的な配列を有するＤＮＡを伸長及び増幅す
ることを広く含む概念である。
ＤＮＡ（センス鎖、アンチセンス鎖）を鋳型として、そ
の配列に相補的な配列を有するＤＮＡを伸長及び増幅す
ることを広く含む概念である。
【００３９】上記したプライマーを含む本発明のＤＮＡ
は、所望により、ＤＮＡ自動合成機等を利用して本発明
で開示する塩基配列に従って合成することができる。
は、所望により、ＤＮＡ自動合成機等を利用して本発明
で開示する塩基配列に従って合成することができる。
【００４０】また、本発明のヒトmtＤＮＡ異常の検出法
において採用され得る各種の操作、例えば、ＤＮＡ又は
ＤＮＡ断片の合成、ＤＮＡの切断、削除、付加又は結合
を目的とする酵素処理、ＤＮＡの単離、精製、複製、選
択、ＤＮＡ断片の増幅などはいずれも常法に従うことが
でき（分子遺伝学実験法、共立出版（株）１９８３年発
行；ＰＣＲテクノロジー、宝酒造（株）１９９０年発行
等参照）、また必要に応じてこれらを適宜修飾して用い
ることができる。
において採用され得る各種の操作、例えば、ＤＮＡ又は
ＤＮＡ断片の合成、ＤＮＡの切断、削除、付加又は結合
を目的とする酵素処理、ＤＮＡの単離、精製、複製、選
択、ＤＮＡ断片の増幅などはいずれも常法に従うことが
でき（分子遺伝学実験法、共立出版（株）１９８３年発
行；ＰＣＲテクノロジー、宝酒造（株）１９９０年発行
等参照）、また必要に応じてこれらを適宜修飾して用い
ることができる。
【００４１】本発明によって明らかにされた家族性腎症
に関わるヒトmtＤＮＡ異常（変異）を検出し、またかか
る方法に基づいて家族性腎症の遺伝子診断を行うにあた
っては、本発明にかかるmtＤＮＡ異常の検出用試薬を有
効成分として含有する試薬キットを利用するのが好適で
ある。
に関わるヒトmtＤＮＡ異常（変異）を検出し、またかか
る方法に基づいて家族性腎症の遺伝子診断を行うにあた
っては、本発明にかかるmtＤＮＡ異常の検出用試薬を有
効成分として含有する試薬キットを利用するのが好適で
ある。
【００４２】かかる試薬キットは、被験者のヒトmtＤＮ
Ａに由来するＤＮＡを鋳型として、本発明特定の変異位
置を含むＤＮＡ領域を合成できるように設計された前記
のプライマーを必須成分として含有することを特徴とす
るものである。当該プライマーは、本発明の変異の検出
方法に応じて適宜選択することができる。
Ａに由来するＤＮＡを鋳型として、本発明特定の変異位
置を含むＤＮＡ領域を合成できるように設計された前記
のプライマーを必須成分として含有することを特徴とす
るものである。当該プライマーは、本発明の変異の検出
方法に応じて適宜選択することができる。
【００４３】本発明の試薬キットは、上記プライマー成
分に加えて、本発明にかかる変異の存在の検出に応じた
一乃至数個の試薬を組み合わせたものであってもよい。
かかる試薬は、採用される検出方法に応じて適宜選択採
用されるが、例えば、制限酵素類、ＤＮＡ合成基質類、
ＤＮＡ合成酵素類等を挙げることができる。更に、当該
試薬キットには、測定の実施の便益のために適当な緩衝
液、洗浄液等が含まれていてもよい。
分に加えて、本発明にかかる変異の存在の検出に応じた
一乃至数個の試薬を組み合わせたものであってもよい。
かかる試薬は、採用される検出方法に応じて適宜選択採
用されるが、例えば、制限酵素類、ＤＮＡ合成基質類、
ＤＮＡ合成酵素類等を挙げることができる。更に、当該
試薬キットには、測定の実施の便益のために適当な緩衝
液、洗浄液等が含まれていてもよい。
【００４４】本発明にかかるヒトmtＤＮＡのＡ15923
Ｇ、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ１４９２７Ｇの少なく
ともひとつの変異は、家族性腎症の病因として特徴付け
られ、従ってその存在検出は、家族性腎症の保因者診断
及び発症の予知・予防等の臨床診断分野において有用で
ある。
Ｇ、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ１４９２７Ｇの少なく
ともひとつの変異は、家族性腎症の病因として特徴付け
られ、従ってその存在検出は、家族性腎症の保因者診断
及び発症の予知・予防等の臨床診断分野において有用で
ある。
【００４５】当該遺伝子診断は、好適には、被験者のヒ
トｍｔＤＮＡにＡ15923Ｇ変異が存在するか否かを検出
することによって行われる。本発明者等の知見によれ
ば、当該変異の存在は、健常者には認められず、家族性
腎症の患者にヘテロプラスミーとして確認されている。
従って、被験者における当該Ａ15923Ｇ変異の存在検出
は、家族性腎症の保因者診断に、また、当該ヘテロプラ
スミーの浸透度より同腎症の発症診断に有用な指標を与
える。
トｍｔＤＮＡにＡ15923Ｇ変異が存在するか否かを検出
することによって行われる。本発明者等の知見によれ
ば、当該変異の存在は、健常者には認められず、家族性
腎症の患者にヘテロプラスミーとして確認されている。
従って、被験者における当該Ａ15923Ｇ変異の存在検出
は、家族性腎症の保因者診断に、また、当該ヘテロプラ
スミーの浸透度より同腎症の発症診断に有用な指標を与
える。
【００４６】更に、本発明者等は、上記Ａ15923Ｇ変異
とは独立した、家族性腎症患者に存在するヒトmtＤＮＡ
異常として、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇからな
る変異の存在を確認している。当該変異は、家族性腎症
の患者にホモプラスミーとして確認されており、その存
在検出は、同様に家族性腎症の保因者診断に有用な指標
を与える。
とは独立した、家族性腎症患者に存在するヒトmtＤＮＡ
異常として、Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇからな
る変異の存在を確認している。当該変異は、家族性腎症
の患者にホモプラスミーとして確認されており、その存
在検出は、同様に家族性腎症の保因者診断に有用な指標
を与える。
【００４７】尚、当該Ａ2246Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927
Ｇの３ヵ所の変異は、確認された限りにおいて全てリン
クしており（全てが同時に変異しており）、従って当該
変異の検出は、被験者のヒトmtＤＮＡに、Ａ2246Ｇ、Ｔ
14180Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される少なくとも一つの
変異が存在するか否かを検出することによって簡便に行
うことができる。
Ｇの３ヵ所の変異は、確認された限りにおいて全てリン
クしており（全てが同時に変異しており）、従って当該
変異の検出は、被験者のヒトmtＤＮＡに、Ａ2246Ｇ、Ｔ
14180Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される少なくとも一つの
変異が存在するか否かを検出することによって簡便に行
うことができる。
【００４８】しかして、本発明にかかるヒトmtＤＮＡ異
常の検出に基づく家族性腎症の遺伝子診断は、好適に
は、被験者のヒトmtＤＮＡにＡ15923Ｇ変異（ヘテロプ
ラスミー）が存在するか否かを検出することにより行う
ことができる。
常の検出に基づく家族性腎症の遺伝子診断は、好適に
は、被験者のヒトmtＤＮＡにＡ15923Ｇ変異（ヘテロプ
ラスミー）が存在するか否かを検出することにより行う
ことができる。
【００４９】更に当該診断は、より好適には、上記の検
出に加えて、被験者のヒトmtＤＮＡにＡ2246Ｇ、Ｔ1418
0Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される少なくともひとつの変
異（ホモプラスミー）が存在するか否かを更に検出する
ことにより行うことができる。
出に加えて、被験者のヒトmtＤＮＡにＡ2246Ｇ、Ｔ1418
0Ｃ及びＡ14927Ｇから選択される少なくともひとつの変
異（ホモプラスミー）が存在するか否かを更に検出する
ことにより行うことができる。
【００５０】本発明によれば、ヒトミトコンドリアの遺
伝子情報に基づいて家族性腎症の遺伝子診断を行うこと
ができ、これにより家族性腎症の適切な予防と治療に多
大な貢献をするものと考えられる。また必要に応じて従
来既知の遺伝子変異もしくは将来見出される遺伝子変異
の情報と組み合わせることによって、より一層確実な家
族性腎症の遺伝子診断を可能とするものである。
伝子情報に基づいて家族性腎症の遺伝子診断を行うこと
ができ、これにより家族性腎症の適切な予防と治療に多
大な貢献をするものと考えられる。また必要に応じて従
来既知の遺伝子変異もしくは将来見出される遺伝子変異
の情報と組み合わせることによって、より一層確実な家
族性腎症の遺伝子診断を可能とするものである。
【００５１】以上の通り、本発明で提供するヒトmtＤＮ
Ａ変異は、家族性腎症に関連する新規な遺伝子異常であ
り、当該遺伝子異常を検出する本発明の検出方法は及び
検出用試薬キットは、家族性腎症の遺伝子診断及び当該
腎症発症の予知・予防に極めて有用である。
Ａ変異は、家族性腎症に関連する新規な遺伝子異常であ
り、当該遺伝子異常を検出する本発明の検出方法は及び
検出用試薬キットは、家族性腎症の遺伝子診断及び当該
腎症発症の予知・予防に極めて有用である。
【００５２】
【実施例】以下、本発明を実施例を用いて具体的に説明
する。ただし、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
する。ただし、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００５３】実施例１ mtＤＮＡの調製 家族性腎症患者（慢性糸球体腎炎）の血液から抽出され
たmtＤＮＡが利用された。即ち、血液０．５ｍｌを２５
００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を除去し、得られ
たペレットに０．２％ＮａＣｌ ２ｍｌを加えて転倒混
和し、再度２５００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上清
を除去した。得られたペレットに１０ｍＭ Tris-１０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ８）を４５０μｌ、１０％ＳＤＳ５
０μｌ、２５ｍｇ／ｍｌ Proteinase K 及び１０ｍｇ／
ｍｌ Rnase ２μｌを加えて転倒混和し、３７℃で８時
間インキュベーションし、それからＤＮＡ抽出機ＮＡ-
１０００（商品名：ＫＵＲＡＢＯ社製）を用いてＤＮＡ
抽出した。
たmtＤＮＡが利用された。即ち、血液０．５ｍｌを２５
００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を除去し、得られ
たペレットに０．２％ＮａＣｌ ２ｍｌを加えて転倒混
和し、再度２５００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上清
を除去した。得られたペレットに１０ｍＭ Tris-１０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ８）を４５０μｌ、１０％ＳＤＳ５
０μｌ、２５ｍｇ／ｍｌ Proteinase K 及び１０ｍｇ／
ｍｌ Rnase ２μｌを加えて転倒混和し、３７℃で８時
間インキュベーションし、それからＤＮＡ抽出機ＮＡ-
１０００（商品名：ＫＵＲＡＢＯ社製）を用いてＤＮＡ
抽出した。
【００５４】一方、mtＤＮＡの全領域をカバーするよう
に、これを任意の２７領域（領域１：1−706、領域２：
583−1293、領域３：1228−1930、領域４：1880−259
3、領域５：2508−3230、領域６：3131−3841、領域
７：3790−4504、領域８：4446−5165、領域９：5110−
5739、領域10：5652−6368、領域11：6292−7115、領域
12：7041−7762、領域13：7687−8406、領域14：8342−
9030、領域15：8976−9657、領域16：9607−10300、領
域17：10173−10849、領域18：10718−11450、領域19：
11389−12080、領域20：11995−12640、領域21：12561
−13267、領域22：13180−13859、領域23：13806−1445
2、領域24：14400−15120、領域25：15022−15753、領
域26：15646−16346、領域27：16291−16570）に分けて
各領域を増幅するように設定したプライマーを調製し
た。
に、これを任意の２７領域（領域１：1−706、領域２：
583−1293、領域３：1228−1930、領域４：1880−259
3、領域５：2508−3230、領域６：3131−3841、領域
７：3790−4504、領域８：4446−5165、領域９：5110−
5739、領域10：5652−6368、領域11：6292−7115、領域
12：7041−7762、領域13：7687−8406、領域14：8342−
9030、領域15：8976−9657、領域16：9607−10300、領
域17：10173−10849、領域18：10718−11450、領域19：
11389−12080、領域20：11995−12640、領域21：12561
−13267、領域22：13180−13859、領域23：13806−1445
2、領域24：14400−15120、領域25：15022−15753、領
域26：15646−16346、領域27：16291−16570）に分けて
各領域を増幅するように設定したプライマーを調製し
た。
【００５５】前記で得られた患者からのmtＤＮＡ抽出液
５μｌを鋳型とし、これらの各設定したプライマーセッ
トを用いて各領域をＰＣＲで増幅した。
５μｌを鋳型とし、これらの各設定したプライマーセッ
トを用いて各領域をＰＣＲで増幅した。
【００５６】尚、１５９２３位を含む領域２６（15646
−16346）の増幅用に設定した本発明のプライマーは、
２６Ｆ（その塩基配列を配列番号１に示す）及び２６Ｒ
（その塩基配列を配列番号２に示す）であり、ＰＣＲ
は、ＡｍｐＴａｑ（Perkin Elmer社製）を用いて行った
（ＰＣＲ反応：９４℃で１分，５６℃で１分，７２℃で
１．５分のサイクルを３５回実施）。
−16346）の増幅用に設定した本発明のプライマーは、
２６Ｆ（その塩基配列を配列番号１に示す）及び２６Ｒ
（その塩基配列を配列番号２に示す）であり、ＰＣＲ
は、ＡｍｐＴａｑ（Perkin Elmer社製）を用いて行った
（ＰＣＲ反応：９４℃で１分，５６℃で１分，７２℃で
１．５分のサイクルを３５回実施）。
【００５７】実施例２ クローニング 実施例１で得られた各ＰＣＲ産物を３％アガロースゲル
で電気泳動を行い、得られたバンドからSephaglas Band
Prep Kit（商品名：Pharmacia Biotech社製）を用いて
ＤＮＡを抽出した。得られたＤＮＡ抽出液２μｌに、ｐ
ＣＲ2.1ベクター（商品名：Invitrogen社製）１μｌ及
びＤＮＡ Lidation Kit Ver IIのsolution I（商品名：
宝酒造社製）３μｌを混和し、１６℃で２時間ライゲー
ションを行った。
で電気泳動を行い、得られたバンドからSephaglas Band
Prep Kit（商品名：Pharmacia Biotech社製）を用いて
ＤＮＡを抽出した。得られたＤＮＡ抽出液２μｌに、ｐ
ＣＲ2.1ベクター（商品名：Invitrogen社製）１μｌ及
びＤＮＡ Lidation Kit Ver IIのsolution I（商品名：
宝酒造社製）３μｌを混和し、１６℃で２時間ライゲー
ションを行った。
【００５８】このライゲーション液全量を、氷上で溶か
しておいたコンピテント細胞ＪＭ１０９（宝酒造社製）
１００μｌに混ぜ、氷上で３０分間インキュベートし
た。次いで、４２℃のウォーターバスに４０秒間浸けて
ヒートショックを加えた後、直ちに氷中で２分間冷やし
た。これにＬＢ培地を９００μｌ加え、３７℃で１時間
振盪培養した。この培養液を、Ｘ−ＧＡＬ０.１ｍＭ，
ＩＰＴＧ０.１ｍＭ及びアンピシリン５０μｇ／ｍｌを
含むＬＢプレートにストリークし、３７℃、オーバーナ
イトで培養してコロニーを形成させた。
しておいたコンピテント細胞ＪＭ１０９（宝酒造社製）
１００μｌに混ぜ、氷上で３０分間インキュベートし
た。次いで、４２℃のウォーターバスに４０秒間浸けて
ヒートショックを加えた後、直ちに氷中で２分間冷やし
た。これにＬＢ培地を９００μｌ加え、３７℃で１時間
振盪培養した。この培養液を、Ｘ−ＧＡＬ０.１ｍＭ，
ＩＰＴＧ０.１ｍＭ及びアンピシリン５０μｇ／ｍｌを
含むＬＢプレートにストリークし、３７℃、オーバーナ
イトで培養してコロニーを形成させた。
【００５９】シングルコロニーを１０個ピックアップ
し、アンピシリン５０μｇ／ｍｌを含むＬＢ培地２ｍｌ
に植え継ぎ、３７℃、オーバーナイトで培養し、その培
養液をプラスミド抽出機ＰＩ−１００Σ（商品名：ＫＵ
ＲＡＢＯ社製）を用いてプラスミド抽出を行った。
し、アンピシリン５０μｇ／ｍｌを含むＬＢ培地２ｍｌ
に植え継ぎ、３７℃、オーバーナイトで培養し、その培
養液をプラスミド抽出機ＰＩ−１００Σ（商品名：ＫＵ
ＲＡＢＯ社製）を用いてプラスミド抽出を行った。
【００６０】実施例３ 塩基配列の決定 Dye Terminator法を用い、ABI PRISM377 DNA Sequenser
（商品名：Perkin Elmer社製）で、前記家族性腎症患者
由来のmtＤＮＡの全塩基配列を以下のとおり決定した。
（商品名：Perkin Elmer社製）で、前記家族性腎症患者
由来のmtＤＮＡの全塩基配列を以下のとおり決定した。
【００６１】即ち、Pre Mix８μｌ、Ｍ１３ forwardプ
ライマー３.２pmol（Promega社製）、実施例２で抽出し
たプラスミド５μｌ、ミリＱ水５μｌ及びＡＢＩ cycle
sequencing kit（商品名：Perkin Elmer社製）で全量２
０μｌとし、最後にミネラルオイルを１滴加えて、Robo
cycler40（商品名：STRATAGENE社製）を用いて、シーク
エンス反応ＰＣＲを行った（ＰＣＲ反応：９６℃で３０
秒，５０℃で１５秒，６０℃で４分間の反応を３５サイ
クル）。
ライマー３.２pmol（Promega社製）、実施例２で抽出し
たプラスミド５μｌ、ミリＱ水５μｌ及びＡＢＩ cycle
sequencing kit（商品名：Perkin Elmer社製）で全量２
０μｌとし、最後にミネラルオイルを１滴加えて、Robo
cycler40（商品名：STRATAGENE社製）を用いて、シーク
エンス反応ＰＣＲを行った（ＰＣＲ反応：９６℃で３０
秒，５０℃で１５秒，６０℃で４分間の反応を３５サイ
クル）。
【００６２】得られたＰＣＲ産物を Centri-Sep Spin C
olumns（商品名：Perkin Elmer社製）で精製して乾燥
し、ホルムアミド／ブルーデキストラン（５：１）５μ
ｌで溶解した。このサンプルを９５℃２分間加熱処理し
て、ABI PRISM377 DNA Sequenserを用いて塩基配列決定
を行った。
olumns（商品名：Perkin Elmer社製）で精製して乾燥
し、ホルムアミド／ブルーデキストラン（５：１）５μ
ｌで溶解した。このサンプルを９５℃２分間加熱処理し
て、ABI PRISM377 DNA Sequenserを用いて塩基配列決定
を行った。
【００６３】当該塩基配列決定は、実施例２で調製した
各領域における任意の６クローンについてそれぞれ行
い、得られた塩基配列を健常人由来の正常mtＤＮＡ（HU
MMTCG）と比較した。
各領域における任意の６クローンについてそれぞれ行
い、得られた塩基配列を健常人由来の正常mtＤＮＡ（HU
MMTCG）と比較した。
【００６４】家族性腎症患者に由来するmtＤＮＡ全領域
の解析結果より、既知の多型を含む合計４６ヵ所の変異
が検出された。このなかで塩基番号１５９２３位におけ
るＡからＧへの変異は新規なものであり、この変異が家
族性腎症に関連した変異であるものと考察された。
の解析結果より、既知の多型を含む合計４６ヵ所の変異
が検出された。このなかで塩基番号１５９２３位におけ
るＡからＧへの変異は新規なものであり、この変異が家
族性腎症に関連した変異であるものと考察された。
【００６５】塩基番号１５９２３位を含む領域２６にお
ける結果を図１〜図４に示す。
ける結果を図１〜図４に示す。
【００６６】各図において、第１段目は、正常ヒトmtＤ
ＮＡ（HUMMTCG）の塩基番号１５６４６〜１６３４６の
領域の塩基配列であり、同第２〜７段目は、上記家族性
腎症患者が有するmtＤＮＡの同領域の塩基配列（各クロ
ーン、No.26-8-1, 26-9, 26-9-1, 26-10-1, 26-11及び2
6-15）である。
ＮＡ（HUMMTCG）の塩基番号１５６４６〜１６３４６の
領域の塩基配列であり、同第２〜７段目は、上記家族性
腎症患者が有するmtＤＮＡの同領域の塩基配列（各クロ
ーン、No.26-8-1, 26-9, 26-9-1, 26-10-1, 26-11及び2
6-15）である。
【００６７】上記各図より、家族性腎症患者に由来する
mtＤＮＡの６クローンのうち、４クローン（No.26-9-1,
26-10-1, 26-11及び26-15）に塩基番号１５９２３位
（図中、２７７番目の塩基）におけるＡからＧへの変異
（Ａ１５９２３Ｇ）が認められることが判る。
mtＤＮＡの６クローンのうち、４クローン（No.26-9-1,
26-10-1, 26-11及び26-15）に塩基番号１５９２３位
（図中、２７７番目の塩基）におけるＡからＧへの変異
（Ａ１５９２３Ｇ）が認められることが判る。
【００６８】実施例４ 変異mtＤＮＡの検出及び解析 家族性腎症患者及びその家族から前記と同様にして調製
された３２検体（家族性腎症検体）及び健常者からの８
２検体のサンプルにおける変異を以下のとおり検出、解
析した。
された３２検体（家族性腎症検体）及び健常者からの８
２検体のサンプルにおける変異を以下のとおり検出、解
析した。
【００６９】Ａ15923Ｇ変異の検出は、以下のＲＦＬＰ
法に従い実施した。即ち、被検体ＤＮＡ断片５μｌを鋳
型とし、１５９２３ＸｂａＩＦ（その塩基配列を配列番
号３に示す）及び１５９２３Ｒ（その塩基配列を配列番
号４に示す）をプライマーとして、ＡｍｐＴａｑ（Perk
in Elmer社製）を用いてＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ反応は
９４℃で１分間，５８℃で１分間及び７２℃で２分間の
サイクルを３５回行った。
法に従い実施した。即ち、被検体ＤＮＡ断片５μｌを鋳
型とし、１５９２３ＸｂａＩＦ（その塩基配列を配列番
号３に示す）及び１５９２３Ｒ（その塩基配列を配列番
号４に示す）をプライマーとして、ＡｍｐＴａｑ（Perk
in Elmer社製）を用いてＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ反応は
９４℃で１分間，５８℃で１分間及び７２℃で２分間の
サイクルを３５回行った。
【００７０】得られたＰＣＲ産物８μｌに１０×Ｍ Buf
fer１μｌ及び制限酵素ＸｂａＩ ５Ｕ加えて３７℃で３
時間消化を行い、その後３％アガロースゲル電気泳動し
て、エチジウムブロマイド染色を行い、ＵＶによりバン
ドを検出した。２４１ｂｐのバンドの少なくとも一部が
２１５ｂｐと２６ｂｐに分かれることを観察することに
より、ヒトmtＤＮＡの１５９２３位の変異を検出した。
fer１μｌ及び制限酵素ＸｂａＩ ５Ｕ加えて３７℃で３
時間消化を行い、その後３％アガロースゲル電気泳動し
て、エチジウムブロマイド染色を行い、ＵＶによりバン
ドを検出した。２４１ｂｐのバンドの少なくとも一部が
２１５ｂｐと２６ｂｐに分かれることを観察することに
より、ヒトmtＤＮＡの１５９２３位の変異を検出した。
【００７１】Ａ2246Ｇ変異は、配列番号５及び６に示す
各プライマー及び制限酵素ＨｐａＩの利用により、同様
にしてＲＦＬＰ法により、またＴ14180Ｃ及びＡ14927Ｇ
の各変異は、順次、配列番号７及び８に示す各プライマ
ーと配列番号９及び１０に示す各プライマーによりそれ
ぞれ増幅したＤＮＡを直接塩基配列決定することによ
り、それぞれ検出した。
各プライマー及び制限酵素ＨｐａＩの利用により、同様
にしてＲＦＬＰ法により、またＴ14180Ｃ及びＡ14927Ｇ
の各変異は、順次、配列番号７及び８に示す各プライマ
ーと配列番号９及び１０に示す各プライマーによりそれ
ぞれ増幅したＤＮＡを直接塩基配列決定することによ
り、それぞれ検出した。
【００７２】家族性腎症検体についての解析結果を下記
表１に示す。
表１に示す。
【００７３】
【表１】
【００７４】表１における表示は、該当部位における塩
基の百分率（％）を示している。即ち例えばヒトmtＤＮ
Ａの２２４６番目の塩基における「１００％Ｇ」は、Ａ
２２４６Ｇ変異が１００％認められることを意味し、同
「１００％Ａ」は、同変異が認められないことを意味す
る。尚、ＲＦＬＰ法による解析においては、電気泳動さ
れたバンドをデンシトメーターにて数値化して百分率を
求めた。また、表１において、検体番号３２は、実施例
１における患者検体である。
基の百分率（％）を示している。即ち例えばヒトmtＤＮ
Ａの２２４６番目の塩基における「１００％Ｇ」は、Ａ
２２４６Ｇ変異が１００％認められることを意味し、同
「１００％Ａ」は、同変異が認められないことを意味す
る。尚、ＲＦＬＰ法による解析においては、電気泳動さ
れたバンドをデンシトメーターにて数値化して百分率を
求めた。また、表１において、検体番号３２は、実施例
１における患者検体である。
【００７５】該表からも、実施例３で確認された変異と
家族性腎症との関連が確認される。
家族性腎症との関連が確認される。
【００７６】腎症を発症している検体番号３２において
のみ、Ａ15923Ｇ変異がヘテロプラスミーに確認（Ａ１
５９２３Ｇ＝５６．５％）され、８２例の健常人検体を
含む他のいずれの検体においてもこの変異は認められな
かった。
のみ、Ａ15923Ｇ変異がヘテロプラスミーに確認（Ａ１
５９２３Ｇ＝５６．５％）され、８２例の健常人検体を
含む他のいずれの検体においてもこの変異は認められな
かった。
【００７７】従って、同変異が家族性腎症に関わる変異
であると考えられ、また、このヘテロプラスミーの浸透
度により腎症発症の危険率が評価できるものと考えられ
た。
であると考えられ、また、このヘテロプラスミーの浸透
度により腎症発症の危険率が評価できるものと考えられ
た。
【００７８】また、表１に示されるとおり、Ａ2246Ｇ、
Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇ変異が、家族性腎症検体の９検
体に認められ、いずれもホモプラスミーとして確認され
た。これらの変異は、Ａ15923Ｇ変異とは独立してお
り、この３ヵ所の変異はお互いにリンクしていた。健常
人における同変異は、３検体において検出されたが、家
族性腎症検体と比べ有意に差があり、また、家族性腎症
検体ではホモプラスミーであるのに対して健常人ではい
ずれもヘテロプラスミーであった。更に、これらの変異
位置は、上記１５９２３位に近似しており、ミトコンド
リアの病気特異的な変異は、近辺に存在することが多い
ことを考え併せると、この３ヵ所の変異は同様に家族性
腎症に関わる変異として特徴付けられるものと考えられ
る。
Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇ変異が、家族性腎症検体の９検
体に認められ、いずれもホモプラスミーとして確認され
た。これらの変異は、Ａ15923Ｇ変異とは独立してお
り、この３ヵ所の変異はお互いにリンクしていた。健常
人における同変異は、３検体において検出されたが、家
族性腎症検体と比べ有意に差があり、また、家族性腎症
検体ではホモプラスミーであるのに対して健常人ではい
ずれもヘテロプラスミーであった。更に、これらの変異
位置は、上記１５９２３位に近似しており、ミトコンド
リアの病気特異的な変異は、近辺に存在することが多い
ことを考え併せると、この３ヵ所の変異は同様に家族性
腎症に関わる変異として特徴付けられるものと考えられ
る。
【００７９】以上より、Ａ15923Ｇ変異の検出及びＡ224
6Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇからなる変異の検出の組
合わせは、家族性腎症の遺伝子診断に極めて有用である
と考えられる。
6Ｇ、Ｔ14180Ｃ及びＡ14927Ｇからなる変異の検出の組
合わせは、家族性腎症の遺伝子診断に極めて有用である
と考えられる。
【００８０】
【配列表】 ＳＥＱＵＥ
ＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ ＜１１０＞ Ｏｔｓｕｋａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔ
ｄ．
＜１２０＞ Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏ
ｎｄｒｉａ ＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ ＜１３０＞ ２ＣＢ８ＪＰ
＜１４０＞
＜１４１＞
＜１６０＞ １０
＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｖｅｒ． ２．０
＜２１０＞ １
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ １
ｃｃｔａｇｃａａｔａ ａｔｃｃｃｃａｔｃｃ
２０ ＜２１０＞ ２
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ２
ｃｔｇｔａａｔｇｔｇ ｃｔａｔｇｔａｃｇｇ
２０ ＜２１０＞ ３
＜２１１＞ ２９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ３
ｇｔａｇｔａｔａａａ ｃｔａａｔａｃａｃｃ ａｇｔｃｔｔｃｔａ
２９ ＜２１０＞ ４
＜２１１＞ ２９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ４
ｇｇｔａｃｃｇｔａｃ ａａｔａｔｔｃａｔｇ ｇｔｇｇｃｔｇｇｃ
２９ ＜２１０＞ ５
＜２１１＞ ２８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ５
ｃｃａｃｔａｃｃｔａ ａａａａａｔｃｃｃａ ａａｃａｇｔｔａ
２８ ＜２１０＞ ６
＜２１１＞ ２７
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ６
ｃｔｔｇｔｔｇｇｔｔ ｇａｔｔｇｔａｇａｔ ａｔｔｇｇｇｃ
２７ ＜２１０＞ ７
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ７
ｃｃｔｃｇｃｔｇｔｃ ａｃｔｔｔｃｃｔａｇ
２０ ＜２１０＞ ８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ８
ｃｔａｔｔｇａｇｇａ ｇｔａｔｃｃｔｇａｇ
２０ ＜２１０＞ ９
＜２１１＞ １９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ９
ａｃｃｃａｃａｃｔｃ ａａｃａｇａａａｃ
１９ ＜２１０＞ １０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ １０
ｇｃｔａｔａｇｔｔｇ ｃａａｇｃａｇｇａｇ
２０
ＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ ＜１１０＞ Ｏｔｓｕｋａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔ
ｄ．
＜１２０＞ Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏ
ｎｄｒｉａ ＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ ＜１３０＞ ２ＣＢ８ＪＰ
＜１４０＞
＜１４１＞
＜１６０＞ １０
＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｖｅｒ． ２．０
＜２１０＞ １
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ １
ｃｃｔａｇｃａａｔａ ａｔｃｃｃｃａｔｃｃ
２０ ＜２１０＞ ２
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ２
ｃｔｇｔａａｔｇｔｇ ｃｔａｔｇｔａｃｇｇ
２０ ＜２１０＞ ３
＜２１１＞ ２９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ３
ｇｔａｇｔａｔａａａ ｃｔａａｔａｃａｃｃ ａｇｔｃｔｔｃｔａ
２９ ＜２１０＞ ４
＜２１１＞ ２９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ４
ｇｇｔａｃｃｇｔａｃ ａａｔａｔｔｃａｔｇ ｇｔｇｇｃｔｇｇｃ
２９ ＜２１０＞ ５
＜２１１＞ ２８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ５
ｃｃａｃｔａｃｃｔａ ａａａａａｔｃｃｃａ ａａｃａｇｔｔａ
２８ ＜２１０＞ ６
＜２１１＞ ２７
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ６
ｃｔｔｇｔｔｇｇｔｔ ｇａｔｔｇｔａｇａｔ ａｔｔｇｇｇｃ
２７ ＜２１０＞ ７
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ７
ｃｃｔｃｇｃｔｇｔｃ ａｃｔｔｔｃｃｔａｇ
２０ ＜２１０＞ ８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ８
ｃｔａｔｔｇａｇｇａ ｇｔａｔｃｃｔｇａｇ
２０ ＜２１０＞ ９
＜２１１＞ １９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ ９
ａｃｃｃａｃａｃｔｃ ａａｃａｇａａａｃ
１９ ＜２１０＞ １０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
＜２２０＞
＜２２３＞ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ：ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｖａｒｉａｎｔ
＜４００＞ １０
ｇｃｔａｔａｇｔｔｇ ｃａａｇｃａｇｇａｇ
２０
【図１】ヒトｍｔＤＮＡの塩基配列（塩基番号１５６４
６〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来の
mtＤＮＡの塩基配列を示す図である。
６〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来の
mtＤＮＡの塩基配列を示す図である。
【図２】ヒトmtＤＮＡの塩基配列（塩基番号１５６４６
〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来のmt
ＤＮＡの塩基配列を示す図である。
〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来のmt
ＤＮＡの塩基配列を示す図である。
【図３】ヒトmtＤＮＡの塩基配列（塩基番号１５６４６
〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来のmt
ＤＮＡの塩基配列を示す図である。
〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来のmt
ＤＮＡの塩基配列を示す図である。
【図４】ヒトmtＤＮＡの塩基配列（塩基番号１５６４６
〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来のmt
ＤＮＡの塩基配列を示す図である。
〜１６３４６）の領域における家族性腎症患者由来のmt
ＤＮＡの塩基配列を示す図である。
【図５】各種疾患に関連するヒトmtＤＮＡ異常の変異位
置と疾患との関係を示す図である。
置と疾患との関係を示す図である。
フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA11 CA01 CA20 DA06 EA04 GA25 HA11 HA19 4B063 QA12 QA13 QA17 QA19 QQ02 QQ42 QQ59 QR08 QR14 QR40 QR42 QR62 QR66 QS16 QS25 QX01 QX10
Claims (1)
- 【請求項１】被験者のヒトミトコンドリアＤＮＡの塩基
配列の、１５９２３位アデニンのグアニンへの変異、２
２４６位アデニンのグアニンへの変異、１４１８０位チ
ミジンのシトシンへの変異及び１４９２７位アデニンの
グアニンへの変異から選択される少なくともひとつの変
異を検出することを特徴とする、家族性腎症に関連する
ヒトミトコンドリアＤＮＡ異常の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10359276A JP2000175689A (ja) | 1998-12-17 | 1998-12-17 | ヒトミトコンドリアｄｎａ異常の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10359276A JP2000175689A (ja) | 1998-12-17 | 1998-12-17 | ヒトミトコンドリアｄｎａ異常の検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000175689A true JP2000175689A (ja) | 2000-06-27 |
Family
ID=18463675
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10359276A Pending JP2000175689A (ja) | 1998-12-17 | 1998-12-17 | ヒトミトコンドリアｄｎａ異常の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000175689A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003033737A1 (fr) * | 2001-10-17 | 2003-04-24 | Gifu International Institute Of Biotechnology | Procede de detection de genes au moyen d'adn mitochondrial humain |
-
1998
- 1998-12-17 JP JP10359276A patent/JP2000175689A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003033737A1 (fr) * | 2001-10-17 | 2003-04-24 | Gifu International Institute Of Biotechnology | Procede de detection de genes au moyen d'adn mitochondrial humain |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Preferential repair and strand-specific repair of benzo [a] pyrene diol epoxide adducts in the HPRT gene of diploid human fibroblasts. | |
| AU2006301578B2 (en) | Method for diagnosing thromboembolic disorders and coronary heart diseases | |
| EP1819834B1 (en) | Tools and methods for the quantification of dna repeats | |
| US20070248970A1 (en) | Compositions and methods for detecting keratoconus | |
| US20240002937A1 (en) | Method | |
| JP2000175689A (ja) | ヒトミトコンドリアｄｎａ異常の検出方法 | |
| US6524791B1 (en) | Spinocerebellar ataxia type 8 and methods of detection | |
| KR101742261B1 (ko) | 다중 증폭 이중 신호 증폭에 의한 brca 유전자 변이 검출 방법 | |
| JP5169306B2 (ja) | プロスタサイクリン受容体遺伝子のｓｎｐを利用した緑内障の発症リスクの判定方法 | |
| JP4111481B2 (ja) | 心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド | |
| WO2008050870A1 (fr) | Gène spécifique d'un organe, procédé d'identification de celui-ci et son utilisation | |
| EP1491627B1 (en) | Gene examination method for judging the onset risk of glaucoma | |
| KR102349630B1 (ko) | 알츠하이머 질환의 진단을 위한 Ｅｅｆ１ａ１의 용도 | |
| JP3682688B2 (ja) | 骨粗鬆症薬剤感受性予測方法およびそのための試薬キット | |
| JP3222850B2 (ja) | ウシのＣｈｅｄｉａｋ−Ｈｉｇａｓｈｉ症候群の遺伝子診断法 | |
| JP2001136973A (ja) | Ｉｒｆ−１遺伝子異常の検出方法 | |
| JP2003245087A (ja) | 遺伝子診断方法 | |
| JP4845486B2 (ja) | 糖尿病性腎症感受性遺伝子、および糖尿病性腎症の予防または治療剤の有効成分のスクリーニング方法 | |
| JP2002112799A (ja) | 癌疾患の予後判定法 | |
| JP4111482B2 (ja) | 循環器疾患の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド | |
| JP3222867B2 (ja) | ウシのＣｈｅｄｉａｋ−Ｈｉｇａｓｈｉ症候群の遺伝子診断法 | |
| US7514211B2 (en) | Genomic DNAs participating in rheumatoid arthritis, method of diagnosing the same, method of judging onset risk and diagnostic kit for detecting the same | |
| CN115667548A (zh) | 含有Kelch结构域的7B(KLHDC7B)变体及其用途 | |
| JP3684921B2 (ja) | 骨粗鬆症薬剤感受性予測方法 | |
| JPH11221077A (ja) | 変異ヒトミトコンドリア遺伝子及び糖尿病遺伝子診断への応用 |