JP2001010965A

JP2001010965A - α−グルコシダーゼ阻害剤

Info

Publication number: JP2001010965A
Application number: JP11187634A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Fujita; 裕之藤田; Nobuhiro Fukushima; 信浩福嶋
Original assignee: Nippon Synthetic Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Nippon Synthetic Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1999-07-01
Filing date: 1999-07-01
Publication date: 2001-01-16
Anticipated expiration: 2019-07-01
Also published as: JP3911366B2

Abstract

(57)【要約】【課題】摂取しやすく、強いα−グルコシダーゼ阻害
活性を示す阻害剤を提供すること。【解決手段】トウチの水及び／又はアルコール抽出物で
あり、かつ分子量３０００以上の成分の含有量を２０重
量％以下としてなる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品、食品、健
康食品、特定保健用食品などに使用することができるト
ウチを有効成分として含有してなるα−グルコシダーゼ
阻害剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】α−グルコシダーゼ阻害剤は、小腸の微
絨毛に局在するα−グルコシダーゼを阻害し、食後の血
糖値の急上昇及びそれに続くインスリン値の上昇を抑制
することが、Diabate Medicine, 10, 688(1993)に報告
され、人間及び人間以外の動物においても炭水化物（特
に、澱粉由来のオリゴ糖、シュクロース等）の代謝を抑
制するために、例えば血糖上昇抑制作用を示し、過血糖
症状及び過血糖に由来する肥満症、糖尿病などの種々の
疾患の改善に有用である。また、α−グルコシダーゼ阻
害剤を添加して製造した食品は、代謝異常の患者食に適
しており、さらに代謝異常予防食として健康な人にも適
している。

【０００３】食品に由来するα−グルコシダーゼ阻害剤
として、例えば、特開平９−６５８３６号公報には、動
物性蛋白質又は植物性蛋白質の酵素加水分解物が開示さ
れ、特開平５−１７３６４号公報には茶ポリフェノール
が開示されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記特
開平９−６５８３６号公報に記載のα−グルコシダ一ゼ
阻害剤は、活性を示すためには食品として大量に摂取し
なくてはならず、また、特開平５−１７３６４号公報開
示技術では、ポリフェノールの精製が煩雑であり、かつ
通常摂取する茶ではやはり多量に摂取する必要があっ
た。本出願人は、先に特願平１０−２３９３２６号で、
中華料理の食材としても用いられているトウチ（豆鼓）
が、強いα−グルコシダーゼ阻害活性を有するというこ
とを報告した。これは、従来公知のα−グルコシダーゼ
阻害剤よりも阻害活性の点で効果が大きく、原料も入手
しやすく、摂取も容易であったが、更なるα−グルコシ
ダーゼ阻害活性の向上が課題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記課題を鋭意研究して
いたところ、トウチの水及び／又はアルコール抽出物で
あり、かつ分子量３０００以上の成分を２０重量％以下
としたものが強い阻害活性を発現することを見いだし本
発明を完成した。

【０００６】

【発明の実施の形態】本発明で用いられるトウチは通常
蒸した大豆をこうじで発酵させたものであり、日本の大
徳寺納豆、浜納豆、寺納豆、塩から納豆、一休寺納豆等
の納豆も本発明のトウチに含まれる。また、一般的に発
酵させる際には塩漬けするが、塩漬けを省略して同様に
製造したもの、発酵終了時に脱塩したものも本発明に用
いることができる。

【０００７】本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は上記
の如きトウチから水及び／又はアルコールで抽出される
ものであり、かかる抽出に用いるアルコールとしてはメ
タノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等が
挙げられるがメタノール、エタノールが好ましい。抽出
方法としては、撹拌抽出、浸漬抽出、超臨界抽出などの
抽出方法が挙げられるが、通常は撹拌抽出あるいは浸漬
抽出が用いられる。水とアルコールを併用する時は、水
／アルコールの混合比（重量比）としては、１／１０〜
１０／１が好ましく、更には、１／５〜５／１である。

【０００８】水で抽出する場合は、トウチをそのまま、
あるいは粉砕し、これに１〜２０倍量の水を加え、４０
〜６０℃で１２〜２０時間撹拌抽出したり、１００〜１
４０℃で１〜３時間撹拌抽出する。アルコール抽出ある
いは水及びアルコール抽出する場合は、トウチをそのま
ま、あるいは粉砕し、これに１〜１５倍重量のアルコー
ル、あるいは水及びアルコールを加え４０〜６０℃で３
〜１０時間撹拌抽出したり、室温で１０時間〜７日浸漬
抽出して、更にアルコールを留去しておく。上記抽出方
法により得られた水及び／又はアルコール抽出物中に
は、通常後述する分子量３０００以上の成分が３０〜９
０重量％含有される。

【０００９】本発明では上記の如く抽出されたトウチの
水及び／又はアルコール抽出物中に含まれる分子量３０
００以上の成分の含有量を２０重量％以下とすることを
最大の特徴とし、具体的には該抽出物から分子量３００
０以上の成分を取除いて、その成分の含有量を２０重量
％以下、好ましくは０．１〜１０重量％にすることによ
り、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤が得られるので
あって、該含有量が２０重量％を越えると、グルコシダ
ーゼ阻害活性の向上が見られず不適当である。

【００１０】なお、本発明での分子量は試料をゲル濾過
クロマトグラフィーにより測定する。具体的には分子量
既知のアミノ酸、ペプチド、蛋白質〔Ａｌａ（分子量８
９）、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（分子量３３０）、Ａｓｐ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（分子量５６３）、ニュー
ロテンシン（分子量１６３７）、リボヌクレアーゼ（分
子量１３７００）〕を標準物質として、以下の条件で抽
出物を溶出させて、溶出時間を測定し、対数グラフの縦
軸に分子量、横軸に溶出時間をプロットした検量線に基
づいて分子量を求める。なお本発明では、分子量３００
０以上の成分の重量％は得られた溶出チャートの分子量
３０００の位置でピークを分割し、３０００以上の成分
に相当するピーク面積の面積％で求めることとする。

【００１１】（分画条件）カラム：ＰｒｏｔｅｉｎＰａｋ６０（Ｗａｔｅｒ
ｓ社製）５×２５０ｍｍ移動相：０．１容量％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）
含有５０容量％アセトニトリル水溶液流速：１ｍＬ／ｍｉｎ検出：ＲＩサンプル量：１ｍｇ

【００１２】（標準物質の分子量と溶出時間の関係）標準物質分子量溶出時間（分）Ａｌａ８９３７Ｉｌｅ−Ｔｙｒ３３０３３Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ５６３３１ニューロテンシン１６３７２６リボヌクレアーゼ１３７００１９上記条件では分子量３０００の物質は２５分に溶出され
るので、本発明では２５分以前に溶出する物質を分子量
３０００以上の成分とする。

【００１３】分子量３０００以上の成分を取除く方法と
しては、ゲル濾過クロマトグラフィーにより、分子量
３０００以上の画分を取除く方法、膜処理により、分
子量３０００以上の画分を除く方法、該抽出物をメタ
ノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロ
ロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン
などの極性有機溶媒を用いた溶媒分画法で高分子画分を
取除く方法等を単独あるいは適宜組合わせて実施する。
かかる〜の方法について簡単に説明する。の方法
は前記分子量の分析法として述べた方法を工業的なスケ
ールで実施する。の方法は、抽出物を分画分子量が３
０００程度の膜（ＵＦ膜）、例えばミリポア社製ＵＦ膜
「ＰＬＢＣ（分画分子量３０００）」、旭化成製ＵＦ膜
「ＳＥＰ１０１３（分画分子量３０００）」等を通過さ
せて実施する。の方法は、水／及びアルコール抽出液
を析出物が出ない程度に濃縮して、そこに５〜１０倍程
度のアルコールを添加することにより、高分子物質を沈
殿させる方法である。

【００１４】かくして得られた本発明のα−グルコシダ
ーゼ阻害剤は、血糖上昇抑制作用を有しているので水、
エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコ
ールなどの液状担体や、でんぷん、セルロース、ポリア
ミド粉末などの固形担体などの無毒性担体で希釈して、
アンプル剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、シロッ
プ剤などの医薬品、健康食品として代謝異常の患者食又
は予防薬、糖尿病の予防薬、あるいは抗肥満食、ダイエ
ット食として用いることができる。さらに、本発明のα
−グルコシダーゼ阻害剤を含有する上記製剤を、食前、
食中、食後、食間などに服用することにより、喫食によ
る血糖濃度の増加を抑制することができる。

【００１５】本発明の阻害剤はトウチの水及び／又はア
ルコール抽出物の２〜１０００倍の阻害活性を持つの
で、摂取量としては、乾燥粉末として、０．００００１
〜５ｇ／日が好ましく、特に０．００５〜０．１ｇ／日
が好ましい。

【００１６】本発明のα−グルコシターゼ阻害剤は、食
品に添加することも可能で、例えば、以下のような食品
に添加可能である。（１）農水産加工品はるさめ、こしあん、こんにゃく、パン、麺類（即席め
ん、パスタ、生めん、乾めん）、餅、シリアル食品、大
豆加工品（豆腐、豆乳、納豆、凍豆腐）、水産加工品
〔練り製品、（かに風味）蒲鉾、（魚肉）ハム、（魚
肉）ソーセージ、（魚肉）ウィンナー、ふりかけ、お茶
づけのり〕、卵含有食品（スープ、丼等）、缶詰（シー
チキン、オイルサーディン、焼鳥）、レトルト食品（カ
レー、シチュー、スパゲティー）（２）乳製品牛乳、加工乳、乳酸菌飲料、バター、チーズ、練乳、粉
乳（３）調味料味噌、醤油、うま味（風味）調味料、（粉末）天然調味
料、ソース、ドレッシング、焼き肉のたれ、みりん、カ
レー、シチュー、香辛料、スパイス、ヨーグルト（４）健康食品（栄養補助食品）サポニン含有食品（オタネニンジン根含有食品、エゾ
ウコギ含有食品）糖含有食品〔オリゴ糖（フラクトオリゴ糖含有食品、
イソマルトオリゴ糖含有食品、ガラクトオリゴ糖含有食
品）、多糖類（シイタケ含有食品、ムコ多糖、蛋白含有
食品、コンドロイチン硫酸含有食品、マンネンタケ（霊
芝）含有食品、キチン、キトサン含有食品ミネラル含有食品（カルシウム含有食品、アルファル
ファ含有食品、プルーンエキス食品、β−カロチン含有
食品油脂含有食品ビタミンＥ含有油脂〔麦（小麦、鳩麦）胚芽油、大豆胚
芽油、米胚芽油〕エイコサペンタエン酸含有食品、大豆
レシチン含有食品、γ−リノレン酸含有食品（月見草
油、ボラージ油）、ドコサヘキサエン酸含有食品蛋白質含有食品大豆蛋白含有食品、カゼイン、ホエー蛋白、鯉加工食品タウリン牡加工食品、シジミ加工食品、緑イ貝加工食品（５）その他スッポン加工食品、アミノ酸代謝異常用食品、流動食
（病食）また、下記のような、糖を多量に含有する食品にも添加
可能であるが、本発明の効果が明確に発現しない場合も
あり、下記のような食品に添加する場合は、糖含有量を
できるだけ低くしてから添加するのが好ましい。（６）菓子ケーキ、ムース、（粉末）デザート、アイスクリーム、
飴、チョコレート、グミ、キャンディー、クッキー、ウ
エハース、ゼリー（７）飲料清涼飲料（炭酸飲料、果実飲料、スポーツドリンク、栄
養飲料）、嗜好飲料（コーヒー、ココア、麦汁）

【００１７】上記（１）〜（７）における添加量として
は、上記食品に対して、乾燥粉末として、０．００００
１〜２０重量％が好ましく、特に０．００１〜１０重量
％が好ましい。更に本発明の効果を阻害しない範囲で、
甘味剤、保存剤、分散剤、着色剤、酸化防止剤等も併用
することができる。更に、その他の公知のα−グルコシ
ダーゼ阻害剤であるバリエナミンやアミノシクリトール
などのα−グルコシダ一ゼ阻害剤と併用してもよい。

【００１８】

【実施例】以下本発明について具体的に説明する。尚、
以下の記述で「％」とあるのは重量％である。実施例１乾燥したトウチ１ｋｇを１０ｌの５０％メタノール水溶
液に室温で１日浸漬抽出し、得られた浸漬液をロータリ
ーエバポレーターで濃縮し、これを水に溶解した後、ろ
過した。得られたろ液を減圧濃縮し、抽出液（Ｅ−１）
を得た。該抽出液をロータリーエバポレーターで乾固し
たところ１９３ｇの固形物を得た。該固形物の３０ｇを
下記の条件で膜処理して、膜濃縮画分（Ｅ−３）を取除
いて、膜通過画分（Ｅ−２）を得て濃縮乾固して５．８
ｇの乾固物を得た。膜通過画分（Ｅ−２）は本発明の方
法で分子量を測定したところ、分子量３０００以上の成
分の含有量は１５％であった。（膜処理条件）装置：レモリーノ（ミリポア社製）膜：ＰＬＢＣ（分画分子量３０００、ミリポア社
製）加圧条件：窒素ガスにより５ｋｇに加圧それぞれの画分（Ｅ−１、Ｅ−２、Ｅ−３）のα−グル
コシダーゼ阻害活性を以下のように測定した。

【００１９】（１）ラット小腸からの二（三）糖加水分
解酵素（α−グルコシダーゼ）の調製冷凍保存しておいたラット小腸（空腸）を解凍し、粘膜
をピンセットで押出すように採取した。該粘膜に５倍重
量の５ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含む０．１Ｍリン
酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、冷却しながら
ホモゲナイズした。その後遠心分離（４℃、２１０００
×ｇ、６０分）し、得られた沈殿物に５倍重量になるよ
うに１％トリトンＸ−１００を含む０．１Ｍリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、可溶化処理（４℃、
６０分）を行った。これを超遠心分離（４℃、１１００
００×ｇ、９０分）し、この上清を０．０１Ｍリン酸カ
リウム緩衝液（ｐＨ７．０）で透析（４℃、２４時間）
し、酵素液とした。

【００２０】（２）酵素（α−グルコシダーゼ）活性の
測定酵素活性は市販のキットを用い、基質としてはシュクロ
ースを用いた。標準反応液組成は、６０ｍＭ基質溶液
（シュクロースを０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液ｐＨ
６．３に溶解してたもの）０．７ｍｌ、被験物質溶液
（それぞれの分画成分の水、有機溶剤を完全に除去した
後、５０％ジメチルスルホキシド水溶液に溶解）０．２
ｍｌ、上記酵素液０．１ｍｌ（計１．０ｍｌ）とした。
これを３７℃、１５分間反応させ、２Ｍトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ７．０）１．５ｍｌを用いて反応を停止させ試
験液とした。次に９６穴マイクロプレートに１穴あたり
発色試薬〔グルコースＢテストワコー（和光純薬製）〕
２００μｌに試験液５０μｌ（酢酸エチル等は留去した
もの）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした
後、マイクロプレートリーダ（ＢＩＯＲＡＤ社製、Ｍ
ＯＤＥＬ５５０）で４９０ｎｍの吸光度を測定した。基
質溶液の代りに０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
６．３）を加えた時の吸光度をブランク値とし、この値
を差し引いた値をＡ_490sとした。被験液の代りに５０重
量％ジメチルスルホキシド水溶液を加えた時の吸光度を
コントロール値（Ａ _490c）とし、下式によりα−グルコ
シダーゼ阻害活性を求めた。測定は２回行い、平均値を
測定値とした。

【００２１】α−グルコシダーゼ阻害活性（％）＝[(Ａ
_490c−Ａ_490s)/Ａ_490c]×１００それぞれの画分（Ｅ−１、Ｅ−２、Ｅ−３）のα−グル
コシダーゼ阻害活性を表１に示した。

【００２２】

【表１】分画成分収量＊被験物の濃度 α−グルコシダーゼ（％）（ｍｇ／ｍｌ）阻害活性（％）Ｅ−１１９．３２０９２．２Ｅ−２３．７０．２９０．４Ｅ−３１５．６２０１２．７＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料の重量に対する値とした。尚Ｅ−１中の分子量３０００以上の成分の含有量は８０％であった。

【００２３】実施例２実施例１で得られた（Ｅ−１）の濃縮乾固物３０ｇを１
００ｍｌの水に溶解後、エタノールを９５容量％となる
ように添加して室温で一晩放置して、析出した画分（Ｅ
−４）を濾過して取除き、溶解液からエタノールを減圧
留去して、画分（Ｅ−５）４．２ｇを得た。該画分（Ｅ
−５）は本発明の方法で分子量を測定したところ、分子
量３０００以上の成分の含有量は５％であった。実施例
１と同様にα−グルコシダーゼ阻害活性を測定し、表２
に示した。

【００２４】

【表２】分画成分収量＊被験物の濃度 α−グルコシダーゼ（％）（ｍｇ／ｍｌ）阻害活性（％）Ｅ−１１９．３２０９２．２Ｅ−４１６．６２０９．４Ｅ−５２．７０．１９０．８＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料の重量に対する値とした。

【００２５】

【発明の効果】本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、
トウチの水及び／又はアルコール抽出物の分子量３００
０以上の成分の含有量を２０重量％以下としたもので、
摂取し易く、強い阻害活性を示す。

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Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】トウチの水及び／又はアルコール抽出物
であり、かつ分子量３０００以上の成分の含有量が２０
重量％以下であることを特徴とするα−グルコシダーゼ
阻害剤。