JP2000516475A - ヒトグリシン輸送体 - Google Patents
ヒトグリシン輸送体Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.配列番号:27の蛋白質配列である基準配列と、又は次の置換、即ち(1 )Gly102をSerへ、(2)Ser124をPheへ、(3)Ile279をAs nへ、(4)Arg393をGlyへ、(5)Lys457をAsnへ、(6)Asp463 をAsnへ、(7)Cys610をTyrへ、(8)Ile611をValへ、( 9)Phe733をSerへ、(10)Ile735をValへ、(11)Phe245 をLeuへ、(12)Val305をLeuへ、(13)Thr366をIleへ、若 しくは(14)Leu400をProへ置換することの1つ若しくはそれ以上が行 われていることを除いて、配列番号:27の蛋白質配列に相当する配列と、少な くとも約96%の配列同一性を有するグリシン輸送体をコードする組み換え核酸 。 2.基準配列が、配列番号:27の蛋白質配列、又は次の置換、即ち(1)G ly102をSerへ、(2)Ser124をPheへ、(3)Ile279をAsnへ 、(4)Arg393をGlyへ、(5)Lys457をAsnへ、(6)Asp463 をAsnへ、(7)Cys610をTyrへ、(8)Ile611をValへ、(9) Phe733をSerへ、若しくは(10)Ile735をVa1へ置換することの1 つ若しくはそれ以上が行われていることを除いて、配列番号:27の蛋白質配列 に相当する配列である請求範囲1の核酸。 3.該配列同一性が、少なくとも約97%である請求範囲1の核酸。 4.該配列同一性が、少なくとも約98%である請求範囲1の核酸。 5.核酸が、基準配列を有するグリシン輸送体をコードする請求範囲1の核酸 。 6.配列番号:26の核酸配列、又は次の置換、即ち(a)T6をCへ、(b )G304をAへ、(c)C371をTへ、(d)C571をTへ、(e)T836をAへ、 (f)A1116をGへ、(g)A1177をGへ、(h)G1371をCへ、(i)G1387 をAへ、(j)G1829をAへ、(k)A1831をGへ、(l)G2103をAへ、(m )T2198をCへ、(n)A2203をGへ、(o)C342をGへ、(p)C352をTへ 、(q)T733をCへ、(r)A777をGへ、(s)G913をCへ、(t)G951を Aへ、(u)C1097をTへ、若しくは(v)T1199をCへ置換することの1つ若 し くはそれ以上が行われていることで、配列番号:26の核酸配列と異なっている 配列を含む請求範囲1の核酸。 7.配列番号:26の核酸配列、又は次の置換、即ち(a)T6をCへ、(b )G304をAへ、(c)C371をTへ、(d)C571をTへ、(e)T836をAへ、 (f)A1116をGへ、(g)A1177をGへ、(h)G1371をCへ、(i)G1387 をAへ、(J)G1829をAへ、(k)A1831をGへ、(l)G2103をAへ、(m )T2198をCへ、若しくは(n)A2203をGへ置換することの1つ若しくはそれ 以上が行われていることで、配列番号:26の核酸配列と異なっている配列を含 む請求範囲1の核酸。 8.請求範囲1の核酸及び機能的にこれと結合する外因性プロモーターを含む ベクター。 9.基準アミノ酸配列の全て若しくは1〜2の近接部分と、少なくとも約99 .5%の配列同一性を有するグリシン輸送体蛋白質をコードする核酸において、 その基準配列が、配列番号:27のアミノ酸配列、又は次のアミノ酸置換、即ち (1)Gly102をSerへ、(2)Ser124をPheへ、(3)Ile279を Asnへ、(4)Arg393をGlyへ、(5)Lys457をAsnへ、(6)A sp463をAsnへ、(7)Cys610をTyrへ、(8)Ile611をValへ 、(9)Phe733をSerへ、(10)Ile735をValへ、(11)Phe245 をLeuへ、(12)Val305をLeuへ、(13)Thr366をIleへ 、若しくは(14)Leu400をProへ置換することの1つ若しくはそれ以上 が行われていることを除いて、配列番号:27のアミノ酸配列に相当するアミノ 酸配列である核酸。 10.1〜2の近接配列部分が、少なくとも約600のアミノ酸からなる請求 範囲9の核酸。 11.下記の細胞: (a)請求範囲8による第一のベクターで形質転換され、該核酸を含むか、又 は (b)第二のベクターで形質転換され、配列番号:27である基準蛋白質配列 、若しくは次の置換、即ち(1)Gly102をSerへ、(2)Ser124をPh e へ、(3)Ile279をAsnへ、(4)Arg393をGlyへ、(5)Lys45 7 をAsnへ、(6)Asp463をAsnへ、(7)Cys610をTyrへ、(8 )Ile611をValへ、(9)Phe733をSerへ、(10)Ile735をV alへ、(11)Phe245をLeuへ、(12)Val305をLeuへ、(13 )Thr366をIleへ、若しくは(14)Leu400をProへ置換することの 1つ若しくはそれ以上が行われていることを除いて、配列番号:27の蛋白質配 列に相当する配列、の1〜2の近接部分と、少なくとも約99.5%の配列同一 性を有する輸送体蛋白質をコードする第二の核酸を含み、ここで、コードされた 蛋白質は、グリシン輸送体活性を有している。 12.請求範囲11の細胞を増殖させることからなるグリシン輸送体の製造方 法。 13.(a)グリシン輸送体を含む膜を該細胞から単離すること、又は(b) グリシン輸送体を含む蛋白質画分を該細胞から抽出すること、の少なくとも1つ を更に含む請求範囲12の方法。 14.請求範囲11による細胞から単離され、第一又は第二の外因的に誘導さ れた核酸により発現されたグリシン輸送体。 15.神経系障害若しくは状態の治療用生理活性剤を特徴づけ又は同定する方 法において、(a)(i)請求範囲10による細胞、又は(ii)該第一又は第 二の外因的に誘導された核酸によりコードされたアミノ酸配列からなる単離グリ シン輸送体蛋白質を含む第一の測定組成物を与え、(b)その第一の測定組成物 を生理活性剤又は予期される(prospective)生理活性剤と接触させ、その測定 組成物によって示されたグリシン輸送の量を測定することからなる方法。 16.第一の測定組成物によって示されたグリシン輸送の量を、生理活性剤又 は期待される生理活性剤と接触させないこと以外は、第一の測定組成物と同じに 処理された第二の測定組成物によって示されたグリシン輸送の量と比較すること を更に含む請求範囲15の方法。 17.神経系障害又は状態が、(a)痛み、(b)痙性、(c)ミオクロヌス 、(d)筋痙攣、(e)筋機能亢進又は(f)てんかんからなる群の1つである 請求範囲15の方法。 18.痙性が、卒中、頭部外傷、神経細胞死、多発性硬化症、脊髄損傷、失調 症、ハンチントン病又は筋萎縮性側索硬化症である請求範囲17の方法。 19.(a)ラット若しくはマウスGlyT―2輸送体のための配列又は(b )哺乳類GlyT―1輸送体のための配列とのハイブリダイゼーションを排除す るのに十分なストリンジェンシー(stringency)の条件下で、配列番号:26で ある基準核酸配列と、又は次の置換、即ち(a)T6をCへ、(b)G304をAへ 、(c)C371をTへ、(d)C571をTへ、(e)T836をAへ、(f)A1116 をGへ、(g)A1177をGへ、(h)G1371をCへ、(i)G1387をAへ、(j )G1829をAへ、(k)A1831をGへ、(l)G2103をAへ、(m)T2198をC へ、(n)A2203をGへ、(o)C342をGへ、(p)C352をTへ、(q)T73 3 をCへ、(r)A777をGへ、(s)G913をCへ、(t)G951をAへ、(u) C1097をTへ、若しくは(v)T1199をCへ置換することの1つ若しくはそれ以 上が行われていることで、配列番号:26の核酸配列と異なっている配列とハイ ブリダイズする核酸。 20.この核酸は、PCRプライマーであり、ストリンジェント(stringent )条件は、ヒトGlyT―2配列を増幅するのには有効であるが、(a)ラット 若しくはマウスGlyT―2輸送体のための配列又は(b)哺乳類GlyT―1 輸送体のための配列を増幅するには有効でないPCR条件である請求範囲19の 核酸配列。 21.ヒトGlyT―2遺伝子又はcDNAのコーディング又は非コーディン グストランドからの近接配列を含む、長さが少なくとも約18個のヌクレオチド の核酸であり、ここで、この近接配列は、この近接配列とラットGlyT―2遺 伝子配列とを並べて比較した場合、少なくとも1つの配列の相違を有しているも のである核酸。 22.細胞、組織、器官又は動物に投与した場合、その細胞又はその組織、器 官若しくは動物の細胞内でのGlyT―2の発現を低下させるのに有効なGly T―2のためのヒト遺伝子又はcDNAのコーディング又は非コーディングスト ランドからの近接配列を含むアンチャンス分子であり、ここで、この近接配列は 、該近接配列とラットGlyT―2遺伝子配列と並べて比較した場合、少なくと も 1つの配列相違を有しているアンチセンス分子。 23.配列番号:26の核酸配列、又は次の置換、即ち(a)T6をCへ、( b)G304をAへ、(c)C371をTへ、(d)C571をTへ、(e)T836をAへ 、(f)A1116をGへ、(g)A1177をGへ、(h)G1371をCへ、(i)G13 87 をAへ、(j)G1829をAへ、(k)A1831をGへ、(l)G2103をAへ、( m)T2198をCへ、(n)A2203をGへ、(o)C342をGへ、(p)C352をT へ、(q)T733をCへ、(r)A777をGへ、(s)G913をCへ、(t)G951 をAへ、(u)C1097をTへ、若しくは(v)T1199をCへ置換することの1つ 若しくはそれ以上が行われていることで、配列番号:26の核酸配列と異なって いる配列、のコーディング又は非コーディングストランド内に、近接伸長(cont iguous stretch)が含まれている請求範囲22のアンチセンス分子。 24.請求範囲22の核酸を含む発現ベクター。 25.(a)GlyT―2発現低減有効量の請求範囲22の核酸、又は(b) GlyT―2発現低減有効量の、該組織又は細胞内で該核酸を発現させる発現ベ クターを、組織又は細胞に適用することからなる、組織又は細胞内でのGlyT ―2発現を低減させる方法。 26.ヒト患者の組織又は細胞に、神経系障害若しくは状態治療有効量の請求 範囲22の核酸、又は神経系障害若しくは状態治療有効量の、該組織又は細胞内 で該核酸を発現させる発現ベクターを適用することからなる、神経系障害又は状 態を治療する方法。 27.動物がグリシン輸送体に対する自己免疫抗体を持っているかどうかを検 出する方法であり、動物からの抗体試料又は動物からの体液を、グリシン輸送体 を含むかあるいはグリシン輸送体から誘導されるポリペプチド抗原と接触させる ことからなる方法。
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