JP2000515891A - 抗微生物活性をもつモノグリセリドの水混和性エステル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は病原微生物の感染活性を阻害するために有効な水混和性脂質誘導体を提供する。好ましい水混和性脂質誘導体は、脂肪酸含量の９０％以上が単一脂肪酸により占められるモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルである。脂肪酸成分は好ましくは８〜２４個、より好ましくは約１０〜約２０個の炭素原子を含む。脂肪酸は飽和、不飽和又はヒドロキシル化されていてもよい。

Description

【発明の詳細な説明】 抗微生物活性をもつモノグリセリドの水混和性エステル 発明の技術分野 本発明は一般に、病原微生物の感染活性を阻害するための活性剤としての水混 和性脂質誘導体に関する。発明の背景 ある種の脂質が抗微生物（抗菌及び抗ウイルス）作用をもつことは従来報告さ れている（Ｋａｂａｒａ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｆｆｅ ｃｔｓ ｏｆ Ｌｉｐｉｄｓ，ｅｄ．１９８７及びＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．６，Ｊｕｌｙ，１９９５）。抗微生物活性を もつと報告されている脂質は高親油性であり、２〜４のＨＬＢ値をもち、恐らく 感染生物の脂質エンベロープ又は膜に作用し、生物の透過性を変化させて感染性 を低下させると思われる。 しかし、これらの脂質は高親油性であり、水溶液に溶けないため、予防及び治 療試験を実施するのは難しい。溶解度の問題は、エタノールやジメチルスルホキ シド（ＤＭＳＯ）等の非水 性溶剤を使用することによりある程度まで解決することができる（Ｉｓａａｃｓ ，ＬｉｔｏｖとＴｈｏｒｍａｒ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙ，１９９５）。しかし、このような溶剤はヒト又は動物に使用するのは不 適切な場合が多い。例えば、エタノールとＤＭＳＯは乳児には使用できない。 既存の抗微生物脂質の使用に伴う別の問題は、抗微生物作用がタンパク質の存 在下で阻害又は大幅に低減することである（Ｋａｂａｒａ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍ ａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｌｉｐｉｄｓ，ｅｄ．１９８７ ；及び米国特許第４，００２，７７５号，Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｄ ｅｒｉｖａｔａｉｖｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ， １９７７）。このため、このような脂質は経腸栄養剤中に存在するようなタンパ クと併用投与することができない。従って、水性製剤に可溶性であり、無傷のタ ンパクにより悪影響を受けない抗微生物脂質が当該技術分野で依然として必要と されている。発明の要約 本発明は、病原微生物の感染活性を阻害するために有効な水 混和性脂質誘導体を提供する。好ましい水混和性脂質誘導体は、脂肪酸含量の９ ０％以上が単一脂肪酸により占められるモノグリセリドのジアセチル酒石酸エス テルである。脂肪酸成分は好ましくは８〜２４個、より好ましくは約１０〜約２ ０個の炭素原子を含む。脂肪酸は飽和、不飽和又はヒドロキシル化されていても よい。発明の詳細な説明 本発明は、病原微生物の感染活性を阻害するために有効な医薬的水混和性脂質 誘導体を提供する。水混和性脂質誘導体はエステル又はエーテル結合を介して親 水性部分に結合した親油性部分を含む。親油性部分は脂肪酸、モノアシルグリセ ロール（モノグリセリド）、モノエーテルグリセロール誘導体又はジエーテルグ リセロール誘導体を含む。親水性部分は有機酸、有機アルコール又はその塩を含 む。 １態様において水混和性脂質誘導体は、グリセロール炭素原子の１個がアルキ ル又はアシル基に結合し、残りのグリセロール炭素原子の少なくとも１個がエス テル結合を介して有機酸に結合したモノ／ジグリセリドである。好適態様におい て、有機酸はアセチル基を付けた酒石酸である。この態様によると、水 混和性脂質誘導体はモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルである。 水混和性脂質誘導体は下式Ｉに対応する。 式Ｉ中、Ｒ^A及びＲ^Bの各々は独立して水素、炭素原子数６〜２６のアシル基（ Ｃ₆−Ｃ₂₆アシル）、炭素原子数６〜２６のアルキル基（Ｃ₆−Ｃ₂₆アルキル）又 は無機アニオンであり得る。このようなアニオンの例はハロゲン化物、硝酸、硫 酸及びリン酸である。アシル及びアルキル基は飽和、不飽和又はヒドロキシル化 されていてもよい。好ましくは、アシル及びアルキル基は炭素原子数８〜２４、 より好ましくは１０〜２０である。Ｒ^AとＲ^Bはグリセロール主鎖のＣ^A、Ｃ^B又は Ｃ^C炭素の任意のものと結合することができる。同様に、有機酸部分（式Ｉでは 酒石酸として示す）も、アシル又はアルキル基に結合していないＣ^A、Ｃ^B又はＣ^C 炭素の任意のものと結合することができる。当業者に自明の通り、酒石酸の代 わりに他の有機酸を 使用してもよい。Ｒ^C及びＲ^Dの各々は独立しては飽和、不飽和又はヒドロキシル 化されていてもよい炭素原子数２〜６のアシル又はアルキル基であり得る。Ｒ^C 及びＲ^D基の例はアセチル及びスクシニルエステルである。式Ｉの化合物におい て総脂肪酸含量の９０％以上は単一脂肪酸の形態である。 Ｒ^A又はＲ^Bの一方のみがアシル基である場合には、分子はモノアシルグリセロ ール（又はモノグリセリド）誘導体である。Ｒ^A又はＲ^Bの一方のみがアルキル基 である場合には、分子はモノエーテルグリセロール誘導体である。Ｒ^AとＲ^Bは１ 個のアシル基と１個のアルキル基でもよい。アシル基はエステル結合によりグリ セロール主鎖に結合しており、アルキル基はエーテル結合よりグリセロール主鎖 に結合している。 式Ｉの好ましい態様において、Ｒ^AはＣ₈−Ｃ₂₄アシルであり、Ｒ^Bは水素であ り、Ｒ^C及びＲ^Dはいずれもアセチルであり、脂質はモノグリセリドのジアセチル 酒石酸エステルである。 本明細書で使用する「ＤＡＴＥＭ」なる用語は、当該技術分野でＧＲＡＳ乳化 剤として知られており、ＦＤＡ及びＥＥＣにより乳化剤として認可されている脂 質を意味する。これらのＤＡＴＥＭは脂肪酸混合物を含むことを特徴とする。本 明細書で 使用する「モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル」なる用語はＤＡＴＥＭ と式Ｉにより上記に定義した新規脂質を意味する。 モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルは当該技術分野で周知の標準技術 を使用して製造される（例えばＳｃｈｕｓｔｅｒとＡｄａｍｓ,Ｒｅｖ.Ｆｒ.Ｃ ｏｒｐｓ Ｇｒａｓ,２９(９)：３５７−３６５，１９８１参照）。食用脂肪の グリセリド又は脂肪酸から製造されるモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステ ルは種々の異性体形態で存在し得る（例えばＦｏｏｄ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，第 ２版，増補改訂版，ＬａｒｓｓｏｎとＦｒｉｂｅｒｇ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋ ｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９０参照）。従って、式Ｉの脂質は 種々の異性体形態で存在し得る。 モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルは、１種以上の生理的に許容可能 な非毒性希釈剤、キャリヤー、アジュバント又は賦形剤（本文中ではこれらを総 称して希釈剤と呼ぶ）と共に組成物に配合し、対象に投与することができる。組 成物はヒト及び動物に経口、局所（散剤、軟膏又はドロップ）、鼻孔スプレー又 は座薬として投与することができる。 利用可能な医薬組成物としては、生理的に許容可能な水性又は非水性の滅菌溶 液、分散液、懸濁液又はエマルションや、注射用滅菌溶液又は分散液に再構成す るための滅菌粉末が挙げられる。利用可能な水性及び非水性キャリヤー、希釈剤 、溶剤又は賦形剤の例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリ コール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、その利用可能な混合物、 植物油（例えばオリーブ油）及び注射可能な有機エステル（例えばエチルオレエ ート）が挙げられる。例えば分散液の場合には必要粒度を維持したり、界面活性 剤を使用することにより適正な流動性を維持することができる。例えば糖類、塩 化ナトリウム等の等張剤を加えることが望ましい場合もある。このような不活性 希釈剤に加え、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、フレーバー剤及び香料等のア ジュバントも組成物に加えることができる。 懸濁液には、活性化合物以外に例えばエトキシル化イソステアリルアルコール 、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース 、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天−寒天及びトラガカント又はこ れらの物質の混合物等の懸濁剤も添加することができる。 特に好ましい医薬組成物は、水性媒体又は溶剤に溶解したモノグリセリドのジ アセチル酒石酸エステルを含む。モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルは 約９〜１２のＨＬＢ価をもち、２〜４のＨＬＢ価をもつ既存の抗微生物脂質より も著しく親水性である。既存の疎水性脂質は水性組成物に配合することができな い。本明細書に開示するように、これらの脂質をモノグリセリドのジアセチル酒 石酸エステルと併用すると水性媒体に可溶化することができる。この態様による と、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル（例えばＤＡＴＥＭ ＳＯＹ， Ｐａｎｏｄａｎ）を他の活性抗微生物脂質（例えば１８：２及び１２：０モノグ リセリド）と溶融混合し、均質混合物を得る。均質にすることにより活性が増加 する。混合物は完全に水に分散することができる。これは、モノグリセリドのジ アセチル酒石酸エステルを加え、水に導入する前に他のモノグリセリドと予備混 合する場合のみに可能である。その後、スプレー又は吸入剤を形成する必要に応 じて水性組成物を滅菌条件下で生理的に許容可能な希釈剤、防腐剤、緩衝液又は 噴射剤と混合することができる。 本発明の組成物中のモノグリセリドのジアセチル酒石酸エス テル成分の実際の用量レベルは、特定組成物及び投与方法に所望の治療応答を得 るために有効な量の活性成分が得られるように変えることができる。従って、選 択される用量レベルは所望の治療効果、投与経路、所望の治療期間及び他の因子 に依存する。 後記実施例に詳細に記載するように、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エス テルは広範なウイルスに起因する感染に対して有効な殺ウイルス剤である。この ようなウイルスの例はインフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、 Ｉ型単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス（ ＨＩＶ）及びＲＳウイルス（ＲＳＶ）である。ＲＳＶは乳幼児の急性気道感染の 単独最大原因である。６カ月未満の乳児の罹患率が最も高く、重篤である。大半 の免疫正常対象ではＲＳＶ感染は気道粘膜に限られ、細気管支炎、肺炎及び反応 性気道疾患の発症に結び付けられる。免疫機能低下対象におけるＲＳＶ感染は最 近まで乳児高死亡率と他の年齢群の高罹患率に結び付けられている。高齢者で急 性呼吸疾患の発生率が高く死亡数の多い期間を追跡調査すると、２〜３週間以内 に多数のＲＳＶ又はインフルエンザウイルスが分離されたと報告されて いる（Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｏｔｅｓ，Ｊａｎｕａｒｙ，１９９４）。分析に よると、ＲＳＶは高齢者の罹病及び死亡の原因となるインフルエンザウイルスと して重要である。 同様に後記実施例に詳細に記載するように、モノグリセリドのジアセチル酒石 酸エステルはグラム陽性菌及びグラム陰性菌を含む広範な細菌に起因する感染に 対して有効な殺菌剤である。このような細菌の例は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ ｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ ｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒ ｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｓｉａ、Ｐｓｅｕｄ ｏｍｏｎａｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｍｙｃｏｂａｃ ｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｃａｒｄｉａ及びＥｓｃｈｅｒｉｃｉａ属の細菌である。細 菌の具体例は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｓ．ｂｏｖｉｓ、 Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ、Ｐ．ａ ｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｎ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｓ ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ及びＨ．ｐｙｌｏｒｉであ る。 Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ）は、通常は鼻咽頭侵入による感染開始後、エアゾール化して気道に伝播す るグラム陽性球菌である。臨床症状は局所及び全身感染であり、中耳炎、肺炎、 敗血症及び髄膜炎が挙げられる（Ｇｅｅｌｅｎ，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ及 びＴｕｏｍａｎｅｎ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９ ３；Ｃｕｎｄｅｌｌ，Ｗｅｉｓｅｒ，Ｓｈｅｎ，Ｙｏｕｎｇ及びＴｕｏｍａｎｅ ｎ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９５）。また、Ｓ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは小児科来診の３分の１以上を占める乳幼児の一般重要疾 患である中耳炎（ＯＭ）の単独最大原因である（ＴｈｏｅｎｅとＪｏｈｎｓｏｎ ，１９９１；Ｋａｌｅｉｄａ，Ｎａｔｉｖｉｏ，Ｃｈａｏ及びＣｏｗｄｅｎ，Ｊ ｒ．ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９３）。Ｈａｅ ｍｏｐｈｉｌｕｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）も乳児 と低年齢幼児の中耳炎の原因となることが知られている一般細菌物質である。Ｈ ｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）は米国の６０歳の 人口の５０％（Ｂｌａｓｔｅｒ，Ｃｌｉｎｉｃａ１ Ｉｎｆｅｃ ｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１９９２）と開発途上国の５歳以下の幼児の９ ０％（Ｔｈｏｍａｓら，Ｌａｎｃｅｔ，１９９２）に感染する微好気性グラム陰 性菌である。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉは胃炎の主原因であり、消化性潰瘍の病因に重要 な役割を果たし、胃癌の危険因子である。 病原微生物の感染活性の阻害に使用するには、感染部位にできるだけ直接送達 するような形態及び経路で水混和性脂質誘導体を対象に投与する。例えば細菌感 染が主に鼻、耳、口又は肺に局限される場合には、好ましい剤形は口腔又は鼻腔 に直接投与するエアゾール、マウスウォッシュ又はリンス、チューインガム又は ドロップ剤である。感染が主に胃に局限される場合には、液体又は粉末経口剤が 好ましい。感染が皮膚に局限される場合には、好ましい剤形は軟膏、ローション 又は他の局所剤形である。感染が下部腸に局限される場合には、好ましい剤形は 座薬である。このような全剤形は当該技術分野で周知である。 以下、実施例により本発明の好ましい態様を具体的に説明するが、これによっ て請求の範囲及び明細書を限定するものではない。 実施例１：Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対するモノ及びジグリセリドのジアセチ ル酒石酸エステルの殺菌効果 殺菌アッセイ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ）（６３０３系、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ ｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）をＴＳＡ ＩＩ（５％ヒツジ血液添 加）寒天プレートで一晩培養し、約１８時間後に滅菌ダルベッコリン酸緩衝液（ Ｄ−ＰＢＳ）１０ｍｌを使用して回収した。細菌懸濁液を室温で１５分間５９５ ×ｇで遠心分離した。上清を捨て、ペレットを滅菌Ｄ−ＰＢＳ２ｍｌに再懸濁し た。再懸濁した懸濁液を２本の滅菌微小遠心バイアルにピペットで分注し、エッ ペンドルフ微小遠心管（８８００×ｇ）を使用して４分間遠心分離した。上清を 捨て、細菌ペレットを滅菌ＰＢＳ２ｍｌに再懸濁した。 細菌数は一般に１０９コロニー形成単位（ＣＦＵ）／μＬであった。各試験物 質と対照１８０μＬを滅菌微小遠心バイアルに加えた後、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ懸濁液２０μＬ（９部乳児用製剤：１部細菌懸濁液）を加えた。各バイアル を混合し、 ３７℃で１時間インキュベートした。次に、各試験物質１００μＬをＴＳＡ Ｉ Ｉ寒天にプレーティングし、接種材料を寒天表面に広げた。 初期細菌懸濁液を１０^-4、１０^-5、１０^-6、１０^-7及び１０^-8の最終希釈率ま で連続希釈することにより接種材料を定量し、ＴＳＡ ＩＩ寒天にプレーティン グした。次にプレートを転倒し、３７℃／ＣＯ₂５％インキュベーターで１８〜 ２４時間インキュベートした。各プレートの細菌増殖を増殖対非増殖として記録 した。一部のアッセイでは製剤−細菌懸濁液比を６．６部乳児用製剤対３．３部 細菌懸濁液に変え、アッセイの最終タンパク濃度を１３．５ｍｇ／ｍＬから９． ９ｍｇ／ｍＬに変えた。 試験物質 モノグリセリドＣ１２：０は、Ｃ１２：０のモノエステルを最低９０％含むも のをＧｒｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｄａｎｉｓｃｏから入手した 。ＤＡＴＥＭ ＳＯＹ，Ｐａｎｏｄａｎ ＦＤＰ ＫｏｓｈｅｒはＤａｎｉｓｃ ｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｇｒｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎから入手し た。これは完全水素化大豆油から誘導される（Ｕ．Ｓ．ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩ ＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ ＳＵＮＦ,ＳＤＫはＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｇｒｉｎｓｔｅ ｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎから入手した。ＳＤＫは非水素化ヒマワリ油から誘導され る（Ｕ．Ｓ．ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ−Ｃ₁₂ はＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓから入手し、９０％Ｃ₁₂モノグリセ リドから誘導される。ＤＡＴＥＭ−Ｃ０８はＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅ ｎｔｓから入手し、Ｈｕｌｌｉｓ Ａｍｅｒｉｃａから入手した９０％Ｃ８モノ グリセリドから誘導される。 これらの試験の結果を下表１及び２に要約する。 ^a−対数減少はlog₁₀で表わされる細菌力価の低下である。 S.pneumoniae接種材料は4.9 log₁₀であった。S.pneumoniae接種材料は6.8log₁₀であった。 表１及び２のデータが示すように、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステ ルは水性経腸製剤中でＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ殺菌剤として有効である。デー タは更に、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルの殺菌作用がタンパク質 の存在下で維持されることも示す。低タンパク濃度（９．９ｍｇ／ｍｌ）で試験 したモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルの各々はＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅに対して有意殺菌活性を示した。Ｃ₁₂モノグリセリドから製造したＤＡＴＥ Ｍ−Ｃ１２のみは６．８ｌｏｇ₁₀の接種材料で乳児用製剤中に通常存在するタン パク濃度で殺菌活性を示した。動物試験 ２種のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株（夫々５．７２及び４．７２ｌｏｇ₁₀接種 材料用量のＳｐ ＤＢ３１とＳｐ ＤＢ４０）の一方を含む種々の試料を新生（ ２４時間齢）ラット（各群１０匹）に接種した。これらの混合物は鼻腔内接種前 に３７℃で１時間インキュベートした。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ接種から２４ 時間後にラットの鼻咽頭洗浄液を採取し、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ集団を分析 した。３種の異なる試料、即ち対照としてＳｉｍｉｌａｃ（登録商標）ＲＴＦ単 独、基本対照に３６５０ｍｇ／Ｌ ＤＡＴＥＭ−Ｃ１２を加えたもの、及びＤＡ ＴＥＭ−Ｃ１２（１８２５ｍｇ／Ｌ）とヒマワリモノグリセリド（５０００ｍｇ ／Ｌ）を加えたものを試験した。これらのｉｎ ｖｉｖｏ試験の結果を下表３に 要約する。 表３のデータが示すように、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルは単 独でＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染のｉｎ ｖｉｖｏ抑制に有効であり、ＤＡＴ ＥＭ−Ｃ１２とモノグリセリドを併用すると最大の殺菌活性が得られた。 実施例２：Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対するモノ及びジ グリセリドのジアセチル酒石酸エステルの殺菌効果 上記実施例１に記載した手順を使用して、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルの殺菌効果をｉｎ ｖｉｔｒｏ試験 した。これらの試験の結果を下表４に要約する。 表４のデータが示すように、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルはＨ ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対する有効な殺菌剤である。更に、９０％Ｓｉｍｉｌ ａｃ（登録商標）ＲＴＦ製剤を使用すると、モノグリセリドのジアセチル酒石酸 エステルはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対して不活性であることが判明した。 実施例３：Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉに対するモノ及びジグリセ リドのジアセチル酒石酸エステルの殺菌効果 下記手順を使用してＨ．ｐｙｌｏｒｉに対するモノグリセリドのジアセチル酒 石酸エステルの殺菌効果をｉｎ ｖｉｔｒｏ試験した。 一連の濃度の試験化合物をＨ．ｐｙｌｏｒｉ培地に加えることによりＭＩＣ（ 最小発育阻止濃度）を測定した。３７℃で５日間インキュベーション後、培地の 不透明度によりＨ．ｐｙｌｏｒｉ増殖を判定した。５０％Ｓｉｍｉｌａｃ（登録 商標）を使用した場合には、ＭＩＣは測定できなかった。試験化合物をＨ．ｐｙ ｌｏｒｉ培地に加え、３７℃で４時間インキュベートすることにより、ＭＢＣ（ 最小殺菌濃度）を測定した。混合物のアリコートをＨ．ｐｙｌｏｒｉ培地にプレ ーティングした。 殺菌増殖を終点とした。 これらの試験の結果を下表５に要約する。 ND＝測定せず^a,b ＭＩＣ，最小発育阻止濃度；ＭＢＣ，最小殺菌濃度。 判定できない。混合液を培地にプレーティングして細菌増殖を終点とするのでＭ ＢＣは測定できる。 表５のデータが示すように、細菌培地及びＳｉｍｉｌａｃ（登録商標）におけ るＤＡＴＥＭ−Ｃ１２のＭＩＣ（最小発育阻止濃度）とＭＢＣ（最小殺菌濃度） は、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルがＨ．ｐｙｌｏｒｉの発育を阻 止するのに強力な化合物であることを示している。データは更に、Ｓｉｍｉｌａ ｃ（登録商標）がＨ．ｐｙｌｏｒｉに対するＤＡＴＥＭ−Ｃ１２の殺菌活性に影 響を与えないことも示す。 実施例４：ＨＥｐ−２細胞におけるＲＳウイルス感染の阻害 ＨＥｐ−２（ヒト咽頭上皮癌細胞）はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ ｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌ，ＭＤ）から入手した。ＨＥ ｐ−２細胞を９６穴プレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ． ）に細胞１０，０００個／ウェルの密度で播種し、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ ）を補充したダルベッコ改変イーグル（ＤＭＥ）培地で培養した。単層がコンフ ルエントになるまでＨＥｐ−２プレートを５％ＣＯ₂：９５％空気の大気中で加 湿インキュベーターで３７℃で２日間インキュベートした。所望の最終濃度の２ 倍に調製したＲＳＶストックと試料を等容量でプレミックスし、２〜８℃で１時 間インキュベートした。ウイルスストックは、ウイルス阻害剤を含まない対照ウ ェルで約９０％の細胞死を生じるように調製した。無血清最少必須培地で予め洗 浄したＨＥｐ−２単層を含むウェルに１００μＬのウイルス／試料混合物を加え た。プレインキュベーション混合物を細胞単層に２時間吸収させた後、捨て、無 血清最少必須培地に交換した。細胞／ウイルスプレートを３７℃で４日間インキ ュベートした後、ウイルスにより誘導された細胞変性効果を定量した。 ウイルス接種材料にＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染料の２０％溶液１００μＬを加 えることにより、細胞生存率を各ウェルでスペクトロフォトメトリーにより定量 した。Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染料は増殖培地の代謝還元を測定する酸化／還元 色指示薬を使用して生細胞の代謝活性を測定する。細胞代謝活性は青から赤への 変色により示される。５７０ｎｍから６００ｎｍ波長を差し引く二重終点フォー マットを使用するＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ ，ＣＡ）プレートリーダーで、３７℃で４時間インキュベートしたプレートを読 み取った。細胞生存百分率は試料のウイルス阻害百分率に直接相関する。各ウェ ルの細胞生存百分率はウイルス細胞を含まない対照を基準にして計算した。４個 のウェルの反復を使用して各試料を試験した。ウイルスの存在下及び不在下で試 験物質を含まない対照ウイルスは８個のウェルの反復で試験した。 試験物質 非水素化ヒマワリ油のモノグリセリドは、アッセイによるとヒマワリ油から誘 導されるモノエステル９０％を含有し、７．０％グリセロールモノパルミテート Ｃ１６：０、４．５％グリセロールモノステアレートＣ１８：０、１８．７％グ リセロールモ ノオレエートＣ１８：１、６７．５％グリセロールモノリノレエートＣ１８：２ の脂肪酸分布をもつＭｙｖｅｒｏｌ １８−９２蒸留グリセロールモノリノレエ ートとしてＥａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌから入手した。モノグリセリドＣ １２：０は最低９０％のＣ１２：０モノエステルを含むものをＧｒｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｄａｎｉｓｃｏから入手した。ＤＡＴＥＭ ＳＯＹ ，Ｐａｎｏｄａｎ ＦＤＰ ＫｏｓｈｅｒはＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅ ｎｔｓ Ｇｒｉｎｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎから入手した。これは完全水素化大 豆油から誘導される（Ｕ．Ｓ．ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。 ＤＡＴＥＭ ＰＡＬＭ，Ｍｙｖａｔｅｍ ３５はＥａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃ ａｌ Ｃｏ．から入手した。これは完全水素化ヤシ油から誘導される（Ｕ．Ｓ． ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ ＳＵＮＦ，ＳＤＫ はＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｇｒｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉ ｏｎから入手した。ＳＤＫは非水素化ヒマワリ油から誘導される(Ｕ．Ｓ．ＤＡ ＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ)。ＤＡＴＥＭ ＢＥＥＦはＨｅｎｋｅ ｌ Ｃｏｒｐ．から入手し、完全水素化牛脂から誘導される（ＥＵＲ ＯＰＥＡＮ ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ−Ｃ１ ２はＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓから入手し、９０％Ｃ₁₂モノグリ セリドから誘導される。ＤＡＴＥＭ−Ｃ０８はＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉ ｅｎｔｓから入手し、Ｈｕｌｌｉｓ Ａｍｅｒｉｃａから入手した９０％Ｃ₈モ ノグリセリドから誘導される。 種々の形態の乳児用栄養剤（Ｓｉｍｉｌａｃ（登録商標））に試験化合物を加 えることにより種々の試験物質を調製した。試料を手で震盪した後、２５８°Ｆ の最低生成物温度と６以上のＦ０でＳｔｅｒｉｔｏｒｔ連続滅菌器シミュレータ ー（ＦＭＣ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）を使用して滅菌した 。Ｓｔｅｒｉｔｏｒｔシステムは勾配水予熱、飽和水蒸気加熱及び勾配水冷を順 次使用する。全サイクルは連続撹拌下に実施した。（抗ＲＳＶ活性を含むことが 従来認められている）カラゲナンを製剤から除去し、試験物質を試験できるよう にした。プレインキュベーション混合物を細胞単層に２時間吸収させた後、捨て 、無血清最少必須培地に交換した。これらの細胞培養試験の結果を下表６に要約 する。 ^*モノグリセリドＣ１８：０は溶解し易くするために等重量の大豆脂肪酸と混合 した。 表記濃度はモノグリセリドのみの濃度である。 表６のデータは希釈細胞培地中乳児用製剤とウイルスの１：１混合物を使用し て得た。これらのデータから明らかなように、モノグリセリドのジアセチル酒石 酸エステルはタンパクを含有する乳児用栄養剤中で有意な抗ＲＳＶ活性をもつ。 抗ＲＳＶ活性が無希釈乳児用製剤で消滅しないことを確かめるために、細胞培地 の代わりにウイルスを乳児用製剤で直接希釈し、上述のようにウイルス中和アッ セイを行う追加試験を実施した。Ｃ₈モノグリセリドから誘導されるものを除く 全てのモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルは乳児用製剤で活性を維持し た。 種々の形態のモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルの抗ＲＳＶ活性を比 較するために、種々の油を使用することにより脂肪酸鎖の長さと飽和度の異なる ４形態のモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルを製造するようにＤＡＴＥ Ｍ製造業者に依頼した。これらのモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル形 態は、ＤＡＴＥＭ−Ｃ１２：０、ＤＡＴＥＭ−ＰＡＬＭＯＩＬ、ＤＡＴＥＭ−Ｓ ＵＮＦＬＯＷＥＲ ＯＩＬ及びＤＡＴＥＭ−ＳＯＹであった。各形態のモノグリ セリドのジアセチル酒石酸エステルを各々Ｓｉｍｉ１ａｃ（登録商標）と混合し 、ＲＳＶ感染性に対する活性を上述のように測定した。これらの試験の結果を下 表７に要約する。 表７のデータが示すように、種々の脂肪から製造したモノグリセリドのジアセ チル酒石酸エステルはいずれも乳児用製剤中でＲＳＶ感染に対する阻害活性をも つ。 実施例５：コットンラットのＲＳＶ感決のｉｎ ｖｉｖｏ予防 コットンラットはＲＳＶ研究動物モデルとして約２０年来使用されている。コ ットンラットはＲＳＶに感染した乳児に観察されると同様の肺病変をもつ（Ｐｒ ｉｎｃｅら，１９７８）。また、ＲＳＶワクチン接種したコットンラットをＲＳ Ｖに暴露すると、乳児と同様の重度組織損傷を生じる（Ｐｒｉｎｃｅら，１９８ ６）。静脈内投与ＲＳＶ−ＩｇＧが予防効果を発現するためには≧１：１００濃 度の力価に達する必要があることもわかっている（Ｐｒｉｎｃｅら，１９８５） 。乳児で同一血清濃度のＲＳＶ−ＩｇＧは防御性である（Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓら ，１９９３，１９９５）。これらの類似により、ＦＤＡはコットンラットをＲＳ Ｖ研究に適切なモデルとして推奨している。 ＲＳＶを鼻及び肺に反復感染させるために、高いＲＳＶ用量（１０⁴ｐｆｕ／ 匹）を全動物に鼻腔内接種した。接種材料（１００μＬ）はＲＳＶストック溶液 ５０μＬと試験物質５０μＬから構成した。カラゲナン、大豆レシチン又はＭｙ ｖｅｒｏｌ （改質Ｓｉｍｉｌａｃ（登録商標）又はＭ．Ｓｉｍｉｌａｃ（登録商標））を含 まない乳児用製剤に、試験物質としてモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステ ル、モノグリセリド（ＭＧ）及びカラケナンを夫々懸濁した。更に、無傷のタン パクをカゼイン水解物（Ａｌｉｍｅｎｔｕｍ（登録商標））で置き換えた乳児用 製剤も試験した。全動物に全実験期間にわたって普通齧歯類飼料を与えた。ＲＳ Ｖ攻撃から４日後に全動物を殺した。肺及び鼻組織を取り出し、ＲＳＶ力価を測 定した。正の対照として５％ＲＳＶ−ＩｇＧを常に使用した。各実験で負の対照 群（ＲＳＶ攻撃前後に無処理）も使用した。負の対照群からの肺及び鼻組織にお けるＲＳＶ力価はデータを評価するために安定して高レベルでなければならない 。また、実験データを評価するために、正の対照群からの肺及び鼻組織での非常 に低いＲＳＶ力価も使用した。これらの試験の結果を下表８に要約する。 ^*この製剤対照は他の処理群との比較の基準として使用した。 異なる上添文字を付けた欄の数値は有意差Ｐ＜0.05である。 表８のデータが示すように、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルはＲ ＳＶ感染をｉｎ ｖｉｖｏ阻害する。データは更に、モノグリセリドのジアセチ ル酒石酸エステルとＭＧが相乗作用してＲＳＶ活性を阻害することも示す。水中 又は油中でモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルとＭＧをプレミックスし ても抗ＲＳＶ活性は変化しない。モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルは 無傷のタンパクの存在下（Ｓｉｍｉｌａｃ（登録商標））及び不在下（Ａｌｉｍ ｅｎｔｕｍ（登録商標））のいずれでも乳児栄養剤における有効な殺ウイルス剤 である。 実施例６：水性溶剤中の水混和性脂質誘導体によるＨＥｐ−２細胞のＲＳＶ感染 の阻害 ヒト咽頭上皮癌細胞ＨＥｐ−２はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒ ｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手した。９６穴 プレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）に細胞１０，００ ０個／ウェルの密度でＨＥｐ−２を播種し、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補 充したダルベッコ改変イーグル（ＤＭＥ）培地で培養した。単層がコンフルエン トになるまでＨＥｐ−２プレートを５％ ＣＯ₂：９５％空気の大気中で加湿インキュベーターで３７℃で２日間インキュ ベートした。所望の最終濃度の２倍に調製したＲＳＶストックと試料を等容量で プレミックスし、２〜８℃で１時間インキュベートした。ウイルスストックは、 ウイルス阻害剤を含まない対照ウェルで約９０％の細胞死を生じるように調製し た。無血清最少必須培地で子め洗浄したＨＥｐ−２単層を含むウェルに１００μ Ｌのウイルス／試料混合物を加えた。細胞／ウイルスプレートを３７℃で４日間 インキュベートした後、ウイルスにより誘導された細胞変性効果を定量した。 ウイルス接種材料にＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染料の２０％溶液１００μＬを加 えることにより、細胞生存率を各ウェルでスペクトロフォトメトリーにより定量 した。Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ染料は増殖培地の代謝還元を測定する酸化／還元 色指示薬を使用して生細胞の代謝活性を測定する。細胞代謝活性は青から赤への 変色により示される。５７０ｎｍから６００ｎｍ波長を差し引く二重終点フォー マットを使用するＭｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ ，ＣＡ）プレートリーダーで、３７℃で４時間インキュベートしたプレートを読 み取った。細胞生存百分率は試料のウイルス阻害百分率に直接相関 する。各ウェルの細胞生存百分率はウイルス細胞を含まない対照を基準にして計 算した。４個のウェルの反復を使用して各試料を試験した。ウイルスの存在下及 び不在下で試験物質を含まない対照ウイルスは８個のウェルの反復で試験した。 試験物質 非水素化ヒマワリ油のモノグリセリドは、アッセイによるとヒマワリ油から誘 導されるモノエステル９０％を含有し、７．０％グリセロールモノパルミテート Ｃ１６：０、４．５％グリセロールモノステアレートＣ１８：０、１８．７％グ リセロールモノオレエートＣ１８：１、６７．５％グリセロールモノリノレエー トＣ１８：２の脂肪酸分布をもつＭｙｖｅｒｏｌ １８−９２蒸留グリセロール モノリノレエートとしてＥａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌから入手した。モノ グリセリドＣ１２：０は最低９０％のＣ１２：０モノエステルを含むものをＧｒ ｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｄａｎｉｓｃｏから入手した。ＤＡＴ ＥＭ ＳＯＹ，Ｐａｎｏｄａｎ ＦＤＰ ＫｏｓｈｅｒはＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎ ｇｒｅｄｉｅｎｔｓ Ｇｒｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎから入手した。これ は完全水素化大豆油から誘導される（Ｕ．Ｓ．ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣ ＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ ＰＡＬＭ，Ｍｙｖａｔｅｍ ３５はＥａｓｔｍａ ｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手した。これは完全水素化ヤシ油から誘導 される（Ｕ．Ｓ．ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ ＳＵＮＦ，ＳＤＫはＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｇｒｉｎｓｔｅ ｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎから入手した。ＳＤＫは非水素化ヒマワリ油から誘導され る（Ｕ．Ｓ．ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ ＢＥ ＥＦはＨｅｎｋｅｌ Ｃｏｒｐ．から入手し、完全水素化牛脂から誘導される（ ＥＵＲＯＰＥＡＮ ＤＡＴＥＭ ＳＰＥＣＩＦＩＣＡＴＩＯＮＳ）。ＤＡＴＥＭ −Ｃ１２及びＤＡＴＥＭ−Ｃ０８は夫々９０％Ｃ１２モノグリセリド及び９０％ Ｃ８モノグリセリドから誘導される。これらの２種のモノグリセリドのジアセチ ル酒石酸エステルはＲｏｓｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ａ ｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの特注によりＤａｎｉｓｃｏ Ｉｎ ｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｇｒｉｎｓｔｅｄ Ｄｉｖｉｓｉｏｎに製造依頼した。 試験化合物をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に加えることにより種々の試験物質を調 製した。試料を手で震盪した後、２５８°Ｆの最 低生成物温度と６以上のＦ₀でＳｔｅｒｉｔｏｒｔ連続滅菌器シミュレーター（ ＦＭＣ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）を使用して滅菌した。Ｓ ｔｅｒｉｔｏｒｔシステムは勾配水予熱、飽和水蒸気加熱及び勾配水冷を順次使 用する。全サイクルは連続撹拌下に実施した。ＰＢＳ中モノグリセリドのジアセ チル酒石酸エステルを使用した細胞培養試験の結果を表９に要約する。 表９のデータが示すように、非水素化ヒマワリ油から誘導したモノグリセリド Ｃ₁₈、モノグリセリドＣ₁₂及び数種の起源から誘導したモノグリセリドのジアセ チル酒石酸エステルはいずれも哺乳動物細胞のＲＳＶ感染を用量依存的に阻害す る。 モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルと親油性モノグリセリド（ＭＧ） とカラゲナンの相乗抗ウイルス効果を測定する追加試験も行った。これらの試験 はＬＬＣ−ＭＫＣ細胞と希釈剤としてＰＢＳを使用して実施した。これらの試験 の結果を下表１０に要約する。ＲＳＶ阻害アッセイでは、試験材料（抗体又は他 の生物活性化合物）かサル腎細胞（ＬＬＣ−ＭＫ２）のヒトＲＳウイルス（ＲＳ Ｖ）感染を阻害する能力を半定量的に測定する。感染した細胞をイムノペルオキ シダーゼ法により同定し、計数する。方法はマイクロタイターフォーマットで実 施し、以下に要約する。 アカゲザル腎細胞ＬＬＣ−ＭＫ２はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕ ｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手し、１０％ウシ胎児血清を補充したイーグ ル改変必須培地（ＥＤＭＥ）で培養した。ＲＳＶ感染アッセイでは、フィブロネ クチンで処理したマイクロタイタープレートにＬＬＣ−ＭＫ２細胞を５０００ 個／ウェルの密度で播種し、３〜４日間インキュベートした後、感染性低下アッ セイで使用した。アッセイ日にストックＲＳＶを細胞培地（ＭＥＭ）で１０〜２ ０，０００感染細胞単位（ＩＣＵ）／ｍＬまで希釈し、等容量（２００μＬ）の 適当な濃度の連続希釈試料調製物に加えた。次いで、希釈した試料とウイルスの 混合物を４℃で２時間インキュベートした後、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞に加えた。ウ イルス−試料接種材料をマイクロタイタープレートに加える前に培地を取り出し 、単層をＥＭＥＭで１回濯いだ。全試料−ウイルス希釈液を３個のウェルで試験 した。ウイルス−試料接種材料混合物を加湿ＣＯ₂インキュベーターで３７℃で ２時間ＬＬＣ−ＭＫ２単層に吸着させた。インキュベーション後、ＥＭＥＭ１５ ０μＬを全ウェルに加え、プレートをＣＯ₂インキュベーターで３７℃で１６時 間インキュベートした。インキュベーション後、培地を取り出し、単層を冷エタ ノール（７０％、次いで１００％）で固定した。固定後、マイクロタイタープレ ートを２００μＬ／ウェルのダルベッコＰＢＳで１回濯ぎ、希釈ウシ抗ＲＳＶ抗 体（２００μＬ）を全ウェルに加えた。室温で３０分間インキュベートし、ＰＢ Ｓ／０．５％鶏卵アルブミン（ＰＢＳ／ＣＥＡ）で３回濯いだ後、 ペルオキシダーゼ標識ウサギ抗ウシＩｇＧを全ウェルに加え、室温で３０分間イ ンキュベートした。次いでマイクロタイタープレートをＰＢＳ／ＣＥＡで３回濯 ぎ、ジアミノベンザジン基質を加え、２０分間インキュベートした。その後、プ レートを上述のようにＰＢＳ／ＣＥＡで濯ぎ、倒立顕微鏡を使用してウェル当た りの染色ＲＳＶ感染細胞（ＩＣ）数を調べた。３個のウェルのＩＣ数をウイルス 対照ウェルのＩＣ数（平均９）と比較し、阻害百分率（ＰＩ）を計算した［ＰＩ ＝１．０−［試料ウェル当たりの平均ＩＣ／ウイルス対照ウェル当たりの平均Ｉ Ｃ］］。各マイクロタイタープレートで正の対照調製物（ウシ及びＲＳＶ血清） を試験した。表１０に示すように、ＲＳＶ感染細胞数の５０％減少（ＩＣ₅₀）を 生じる試験材料の濃度（μｇ／ｍｌ）としてＲＳＶ阻害試験の結果を報告する。 表１０のデータが示すように、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルと ＭＧ又はモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルとカラゲナンを併用すると 、抗ＲＳＶ活性が増した。モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルはＰＢＳ 系中のＭＧの均質分布を増進し、その結果として相乗作用が得られると予想され る。 種々の形態のモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルの抗ＲＳＶ活性を比 較するために、種々の油を使用することにより脂肪酸鎖の長さと飽和度の異なる ５形態のモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルを製造するようにＤＡＴＥ Ｍ製造業者に依頼した。これらのモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル形 態は、ＤＡＴＥＭ−Ｃ１２：０、ＤＡＴＥＭ−ＰＡＬＭＯＩＬ、ＤＡＴＥＭ−Ｂ ＥＥＦ ＴＡＬＬＯＷ、ＤＡＴＥＭ−ＳＵＮＦＬＯＷＥＲ ＯＩＬ及びＤＡＴＥ Ｍ−ＳＯＹであった。各形態のモノグリセリドのジアセチル酒石酸エステルを各 々ＰＢＳに混合し、ＲＳＶ感染性に対する活性を上述のように測定した。これら の試験の結果を下表１１に要約する。 表１１のデータが示すように、種々の脂肪から製造したモノグリセリドのジア セチル酒石酸エステルはいずれもＲＳＶ感染に対する阻害活性をもつ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 アンダーソン，ステイーブン・エヌ アメリカ合衆国、イリノイ・60506、オウ ロラ、サウス・ウエストローン・アベニユ ー・11 (72)発明者 グズマン―ハーテイー，メリンダ アメリカ合衆国、オハイオ・43230、ガハ ンナ、ローレル・リツジ・ドライブ・659 (72)発明者 ヒルテイー，ミロ・デユアン アメリカ合衆国、オハイオ・43081、ウエ スタービル、オールド・ステイト・ロー ド・9984 (72)発明者 リー，テレサ・シユー―リン・ワイ アメリカ合衆国、オハイオ・43220、コロ ンバス、リタマリー・ドライブ・3959 (72)発明者 シヤラー，ジヨージフ アメリカ合衆国、オハイオ・43232、コロ ンバス、ノエ・ビクスバイ・ロード・1547 (72)発明者 リユ，チン―チヨウ アメリカ合衆国、オハイオ・43082、ウエ スタービル、バーンズ・ドライブ・ノー ス・462

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．構造式（Ｉ）： （式中、Ｒ^A及びＲ^Bは各々独立して水素、炭素原子数６〜２６のアシル基、炭素 原子数６〜２６のアルキル基又は無機アニオンであり、Ｒ^C及びＲ^Dは各々独立し ては炭素原子数２〜６のアシル又はアルキル基であり、化合物の総脂肪酸含量の ９０％以上は単一脂肪酸の形態である）をもつ化合物。 ２．無機アニオンがハロゲン化物、硝酸、硫酸又はリン酸である請求項１に記載 の化合物。 ３．アルキル又はアシル基が８〜２４個の炭素原子を含む請求項１に記載の化合 物。 ４．アルキル又はアシル基が１０〜２２個の炭素原子を含む請求項１に記載の化 合物。 ５．アルキル又はアシル基が１２〜２０個の炭素原子を含む請 求項１に記載の化合物。 ６．アルキル又はアシル基が１２〜１８個の炭素原子を含む請求項１に記載の化 合物。 ７．Ｒ^C及びＲ^Dが各々独立してアセチル又はスクシニルである請求項１に記載の 化合物。 ８．Ｒ^C及びＲ^Dの両方がアセチルである請求項７に記載の化合物。 ９．Ｒ^A及びＲ^Bの一方が水素である請求項１に記載の化合物。