BR102021016670A2 - Formulação à base de complexo de benzofenona com cobre e seu uso no tratamento e prevenção de doença periodontal canina. - Google Patents

Abstract

A presente invenção trata-se de uma formulação produzida a partir de complexo metálico de cobre (II) contendo 7-epiclusianona como ligante, em composições com atividade antimicrobiana e antiplaca dental para cães, sendo uma alternativa à clorexidina no tratamento e profilaxia da doença periodontal nestes animais. Os novos produtos poderão ser apresentados na forma de colutórios, dentifrícios, tinturas, sprays e similares, aditivos para água, rações para cães e outros produtos alimentícios, podendo o objeto do pedido de patente ser utilizado pela indústria farmacêutica e comercializado pelo mercado veterinário.

Description

FORMULAÇÃO À BASE DE COMPLEXO DE BENZOFENONA COM COBRE E SEU USO NO TRATAMENTO E PREVENÇÃO DE DOENÇA PERIODONTAL CANINA. CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

1. A presente invenção trata-se do desenvolvimento de uma formulação contendo 7-epiclusianona-cobre, um composto químico sintético obtido através da adição de uma molécula de cobre complexando duas estruturas de 7-epiclusianona obtida de Rheedia brasiliensis. Os novos produtos poderão ser apresentados sob a forma de colutórios, dentifrícios, tinturas, spray e similares, aditivos para água, rações para cães e outros produtos alimentícios do mercado pet para tratamento e profilaxia da doença periodontal de cães, podendo o objeto do pedido de patente ser utilizado pela indústria farmacêutica através da produção e comercialização no mercado veterinário.

ESTADO DA TÉCNICA

2. A doença periodontal é a enfermidade que mais acomete os cães, chegando a 85 % de prevalência em indivíduos acima de quatro anos de idade. Ela acomete as estruturas de suporte e proteção dos dentes e tem como agente etiológico a placa bacteriana, que se desenvolve sobre a superfície dental, e a reação do sistema imunológico a este agente. A placa dental se inicia com a adesão de bactérias Gram-positivas, sendo o gênero Streptococcus o principal envolvido nesta formação.

3. Dentre as formas de combate à placa dental, e consequentemente à doença periodontal, está a administração de substâncias antibacterianas, que, ao impedirem a multiplicação ou adesão de bactérias na superfície dental, inibem consequentemente o desenvolvimento da doença periodontal.

4. Uma substância que é muito utilizada por veterinários em tratamentos odontológicos é a clorexidina, usualmente comercializada na concentração de 0,12 %. Entretanto, o uso desta apresenta efeitos indesejáveis aos animais, como escurecimento do esmalte dental, perda de paladar, ardência na cavidade oral e ulcerações na mucosa jugal, além de proporcionarem o surgimento de bactérias resistentes e possuir gosto amargo.

5. Sendo assim é frequente a busca por alternativas a este medicamento para tratamento e profilaxia da doença periodontal.

6. O composto 7-epiclusianona-cobre é um complexo metálico derivado de benzofenona obtida por meio da síntese de duas moléculas de sua análoga natural 7-epiclusianona complexadas entre si com uma molécula de cobre (Figura 1) (metal que possui diversos mecanismos de atividade antimicrobiana sobre bactérias), com a finalidade de potencializar a atividade do composto original. O uso de metais como o cobre e os seus compostos como agente antimicrobiano é secular, e seu uso em medicina veterinária ressurgiu como uma promissora fonte de compostos antimicrobianos para o combate ao surgimento crescente de micro-organismos multirresistentes.

7. Estudos apontam a baixa toxicidade tanto do composto natural quanto do complexo de cobre (II) contendo o composto natural, com boa aplicabilidade, sendo utilizado para algumas finalidades, como verificado a seguir.

8. O documento de patente BRPI0804397 apresenta a atividade da 7- epiclusianona como inibidores de serino e cisteino proteases, apresentando o composto como promissor para o tratamento de tumores e do vírus HIV;

9. O documento de patente chinês CN104274831 apresenta o composto natural como componente antioxidante de formulações farmacêuticas;

10. O enantiômero da 7-epiclusianona, ent-7-epiclusianona, foi apresentado por pesquisadores chineses como agente bacteriostático sobre Staphylococcus aureus resistente a múltiplos fármacos, no documento de patente CN101293821. A atividade antimicrobiana também foi relatada no documento de patente brasileiro BRPI0603419, pela 7-epiclusianona sobre a bactéria cariogênica de humanos, Streptococcus mutans, relacionando-a ao tratamento e prevenção da cárie dental e outras atividades para manutenção da saúde bucal de humanos. Levando em consideração a diferença entre os compostos destes documentos de patente acima citados e a 7-epiclusianona-cobre, além de inúmeros estudos que comprovam que alterações na estrutura e natureza química das substâncias interferem positiva ou negativamente em sua bioatividade, estas solicitações não podem ser extrapoladas para a presente invenção, pois tratam-se de substâncias químicas diferentes. Ainda há que se levar em consideração as espécies e a origem dos micro-organismos, uma vez que a resistência e sensibilidade a substâncias antimicrobianas é intrínseca às estirpes, e a semelhança de perfil de susceptibilidade entre as estirpes está frequentemente relacionada aos nichos ecológicos que os diferentes organismos podem colonizar.

11. Não existem relatos de documentos de patente do uso da molécula complexada 7-epiclusianona-cobre para nenhuma finalidade e praticamente não existem relatos de sua bioatividade. O único trabalho (Barros, M., 2016. Atividade de 7-eplicusianona e do complexo metálico 7-epiclusianona-cobre sobre Streptococcus spp. isoladas de mastite bovina. Dissertação - Mestrado em Medicina Veterinária, Universidade Federal de Viçosa) relacionado a suas atividades biológicas, o composto metálico apresentou potencial para uso no tratamento de mastite bovina, pois foi efetivo como agente antimicrobiano sobre Streptococcus spp. provenientes de animais com a inflamação. Deve-se destacar que o trabalho não apresenta redução das bactérias orais em cães e sim inibição de bactérias das glândulas mamárias de bovinos, o que automaticamente limita qualquer semelhança nos perfis de susceptibilidade aos antimicrobianos dos micro-organismos do trabalho e aqueles relacionados à doença periodontal canina.

12. Desta forma, o objeto da presente invenção é o uso da 7- epiclusianona-cobre pura, assim como presente em preparações diversas em formulações e composições que o compreendam, como antimicrobiano, na fabricação de medicamentos veterinários e alimentos para animais para a redução da placa bacteriana dental e consequente atuação no tratamento e profilaxia da doença periodontal em cães.

13. Como vantagem apresentamos a baixa toxicidade relatada para o composto e consequente redução dos efeitos colaterais quando comparado à clorexidina e a atividade inibitória sobre micro-organismos específicos da microbiota da placa dental de cães, especialmente contra Streptococcus.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

14. Os desenhos anexos exemplificam a formulação à base de complexo de benzofenona com cobre, de acordo com a presente invenção, e seu uso no tratamento e prevenção de doença periodontal canina.
- FIGURA 1 – Estrutura química das benzofenonas 7-epiclusianona (A) e 7-epiclusianona-cobre (B).
- FIGURA 2 – Distribuição percentual de 29 isolados bacterianos oriundos de placa dental de cães com relação às Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) de susceptibilidade à 7-epiclusianonacobre.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

15. A presente invenção trata-se de uma formulação compreendendo 7-epiclusianona-cobre, um composto químico sintético obtido através da adição de um átomo de cobre (II) complexando duas moléculas de 7- epiclusianona, para tratamento e prevenção de doença periodontal canina.

16. A presente invenção foi formulada, com 7-epiclusianona-cobre, em concentrações entre 0,001 µg/mL e 200 mg/mL. Devido à característica apolar da molécula, sua solubilização em água destilada estéril, que foi o veículo escolhido (não se limitando a esse, podendo ser utilizado outros como a água deionizada, água desmineralizada, água milli-Q, álcool e amido), foi feita com o uso de DMSO (dimetilsulfóxido), a concentrações entre 0,001 µg/mL e 1 mg/mL (não se limitando a esse, podendo ser utilizado por exemplo dimetilsulfóxido, polissorbato, propilenoglicol e polietilonoglicol), e outros insumos farmacêuticos sintéticos ou naturais como antioxidantes (por exemplo, beta-caroteno, ácido lipóico e derivados, ácido ascórbico e derivados, alfa-tocoferol e seus derivados e oligoelementos como selênio, cobre, zinco e manganês), conservantes (por exemplo, ácido benzóico e derivados, ácido salicílico e derivados, ácido sórbico e seus derivados, álcool benzílico, ácido fórmico e seus derivados, ácido propiônico e seus derivados), flavorizantes (por exemplo, butanoato de etila, etanoato de butila, benzoato de metila, propanoato de isobutila, etanoato de benzila, extratos e óleos naturais de origem vegetal e animal de quaisquer sabores), edulcorantes (por exemplo, aspartame, sacarina, ciclamato, manitol, sorbitol e stevia), outros aditivos corantes naturais e artificiais, e outros insumos farmacologicamente aceitáveis que se façam necessários para a industrialização de formulações de diferentes naturezas

17. A formulação poderá ser apresentada sob a forma de colutórios, dentifrícios, tinturas, spray e similares, aditivos para água, rações para cães e outros produtos alimentícios do mercado pet para tratamento e profilaxia da doença periodontal de cães.

18. Para melhor entendimento da presente invenção, a seguir é apresentado um exemplo de forma que a invenção possa ser reproduzida por um técnico no assunto, utilizando uma das possibilidades de concretização da invenção, de forma não limitante.

EXPERIMENTO DE DEMONSTRAÇÃO

19. Para avaliação da atividade antimicrobiana do composto sobre bactérias orais de cães foi avaliada a concentração inibitória mínima (CIM) através da técnica de microdiluição em caldo, realizada em placas de microtitulação de 96 orifícios. Foram utilizados 29 isolados bacterianos oriundos da placa dental de 10 cães, compreendendo nove gêneros bacterianos diferentes. O número de isolados de cada gênero foi selecionado seguindo o percentual que o mesmo representava no total de isolados obtidos destes cães (sete Staphylococcus sp., seis Streptococcus sp., seis Enterococcus sp., três Lactobacillus sp., dois Leuconostoc sp., dois Actinomyces, um Bacillus sp., um Lactococcus sp., e um Haemophilus sp.).

20. O composto 7-epiclusianona-cobre foi pesado 1 mg e solubilizado com 1000 µL de DMSO 10 %. Para auxiliar na diluição esses compostos foram colocados no banho maria. O composto foi diluído de forma seriada em base de logaritmo 2, em PBS (phosphate-buffered saline), e as concentrações finais testadas foram 500 μg/mL, 250 μg/mL, 125 g/mL, 62,5 μg/mL, 31,25 μg/mL, 15,62 μg/mL, 7,81 μg/mL, 3,90 μg/mL, 1,95 μg/mL, 0,97 μg/mL e 0,48 μg/mL.

21. Para a experimentação, na primeira coluna da placa de microtitulação realizou-se o controle positivo (de crescimento) que constituído de 100 µL de cultura bacteriana adicionado de 100 µL de BHI estéril e na última coluna foi realizado o controle negativo (esterilidade) contendo 100 µL de BHI e 100 µL de PBS estéreis. Os demais orifícios da placa receberam 100 µL do composto (nas diferentes concentrações obtidas com a diluição seriada) adicionados de 100 µL do inóculo bacteriano (ajustado a 105 UFC/mL). Após a inoculação, a placa de microtitulação foi incubada em estufa bacteriológica a 37 °C por 48 horas. Ao final da incubação foi feita inspeção visual dos orifícios, com posterior adição de 50 µL de Solução de Resazurina 0,01 % para identificação de viabilidade celular em cada orifício, onde no caso de crescimento bacteriano a Resazurina teria alterada sua coloração de roxo para rosa. Foi considerada como concentração inibitória mínima a menor concentração capaz de inibir a multiplicação bacteriana, e consequente manutenção das propriedades colorimétricas originais da Resazurina. O experimento foi realizado em duplicada.

22. Todos os isolados se apresentaram sensíveis à 7-epiclusianonacobre em concentrações que variaram entre 0,48 μg/mL e 15,6 μg/mL. Os resultados de inibição sobre os isolados do gênero Streptococcus devem ser destacados, pois este é descrito na literatura como o mais importante na formação da placa dental em cães e humanos, e todos os isolados foram inibidos pela 7-epiclusianona-cobre em concentrações baixas entre 1,95 μg/mL e 7,8 μg/mL. A CIM para 66,6 % destes isolados de Streptococcus sp. foi 1,95 μg/mL. A Figura 2 apresenta o perfil geral de sensibilidade de 29 isolados bacterianos, por faixa de concentração de MIC.

23. Os resultados obtidos apontaram alta atividade do composto 7- epiclusianona-cobre na inibição de 100 % dos isolados bacterianos oriundos da placa dental de cães e o que se reverte positivamente na redução doença periodontal destes, e assim a formulação contendo 7- epiclusianona-cobre se apresenta como alternativa à clorexidina como antimicrobiano e redutor da placa bacteriana dental em cães para tratamento e profilaxia da doença periodontal destes animais.

Claims (6)

1. FORMULAÇÃO À BASE DE COMPLEXO DE BENZOFENONA COM COBRE, caracterizada por compreender composto químico sintético obtido da associação de duas moléculas da benzofenonas 7- epiclusianona complexadas por um átomo de cobre (II), associado a um ou mais solubilizantes, antioxidantes, conservantes, aditivos flavorizantes e corantes.
2. FORMULAÇÃO À BASE DE COMPLEXO DE BENZOFENONA COM COBRE, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender composto químico sintético obtido da associação de duas moléculas da benzofenonas 7-epiclusianona complexadas por um átomo de cobre (II) associado a um ou mais solubilizantes, selecionados de um grupo que compreenda dimetilsulfóxido, polissorbato, propilenoglicol e polietilonoglicol; um ou mais antioxidantes, selecionados de um grupo que compreenda beta-caroteno, ácido lipóico e derivados, ácido ascórbico e derivados, alfa-tocoferol e seus derivados e oligoelementos como selênio, cobre, zinco e manganês; conservantes, selecionados de um grupo que compreenda, ácido benzóico e derivados, ácido salicílico e derivados, ácido sórbico e seus derivados, álcool benzílico, ácido fórmico e seus derivados, ácido propiônico e seus derivados; flavorizantes, selecionados de um grupo que compreenda butanoato de etila, etanoato de butila, benzoato de metila, propanoato de isobutila, etanoato de benzila, extratos e óleos naturais de origem vegetal e animal de quaisquer sabores; edulcorantes, selecionados de um grupo que compreenda aspartame, sacarina, ciclamato, manitol, sorbitol e stevia; quaisquer corantes naturais e artificiais, e outros insumos farmacologicamente aceitáveis que se façam necessários para a industrialização de formulações de diferentes naturezas.
3. FORMULAÇÃO À BASE DE COMPLEXO DE BENZOFENONA COM COBRE de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizada por compreender 0,001 µg/mL a 200 mg/mL de 7-epiclusianona-cobre solubilizado em água destilada, ou outro veículo retirando de um grupo que compreenda água deionizada, água desmineralizada, água milli-Q, álcool e amido, com o auxílio de DMSO (dimetilsulfóxido), entre 0,001 µg/mL a 1 mg/mL, ou outro solubilizante como dimetilsulfóxido, polissorbato, propilenoglicol e polietilonoglicol, e outros insumos farmaceuticamente aceitáveis, sintéticos ou naturais, como solubilizantes, antioxidantes, conservantes, aditivos flavorizantes e corantes.
4. FORMULAÇÃO À BASE DE COMPLEXO DE BENZOFENONA COM COBRE de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por ser apresentada sob a forma de colutórios, dentifrícios, tinturas, spray e similares, aditivos para água, rações e outros produtos alimentícios.
5. USO DA FORMULAÇÃO definida nas reivindicações 1, 2 e 3, caracterizado por ser para produção de agentes para tratamento e profilaxia da doença periodontal de cães.
6. USO DA 7-EPICLUSIANONA-COBRE descrita nas reivindicações 1, 2 e 3, caracterizado por ser para produção de agentes para tratamento e profilaxia da doença periodontal de cães.

Images